CN113677358A - 在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂 - Google Patents

在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN113677358A
CN113677358A CN202080009862.4A CN202080009862A CN113677358A CN 113677358 A CN113677358 A CN 113677358A CN 202080009862 A CN202080009862 A CN 202080009862A CN 113677358 A CN113677358 A CN 113677358A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
cells
decapeptide
seq
clause
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080009862.4A
Other languages
English (en)
Inventor
B·M·汉塔什
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Isgap Therapy
ESCAPE THERAPEUTICS Inc
Original Assignee
Isgap Therapy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Isgap Therapy filed Critical Isgap Therapy
Publication of CN113677358A publication Critical patent/CN113677358A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

实施方案涉及在人新生儿角质形成细胞祖细胞中表现出免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂。具体实施方案的特征在于十肽和/或氧化白藜芦醇的免疫抑制作用，如通过两种不同方法测量的：刺激细胞生长的阻断和细胞毒性杀伤的抑制。

Description

在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨 酸抑制剂
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2019年1月19日提交的美国专利申请62/794,582的权益，该申请与本申请中引用的所有其他参考文献一起通过引用并入。
序列表
本申请通过引用并入了名称为“20200120_ELIXP005_ST25.TXT”(3KB)的序列表，该序列表创建于2020年1月20日并与本申请一起以电子方式提交。
背景技术
本发明涉及新型生物制剂领域。
发明内容
实施方案涉及在人新生儿角质形成细胞祖细胞中表现出免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂。具体实施方案的特征在于十肽和/或氧化白藜芦醇的免疫抑制作用，如通过两种不同方法测量的：刺激细胞生长的阻断和细胞毒性杀伤的抑制。
一些实施方案包括治疗对细胞进行免疫抑制的受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽、氧化白藜芦醇或两者的组合物，其中所述一种或多种肽包括SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQID NO:12。细胞可以是哺乳动物细胞。细胞可以是皮肤细胞。施用可以包括口服施用。在该专利中描述了各种实施方案。
在一个实施方案中，一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽的组合物，其中所述一种或多种肽包括SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQID NO:12。
在各种实施方案中，肽由SEQ ID NO:9组成。细胞是哺乳动物细胞。哺乳动物细胞是皮肤细胞。哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。施用是通过口服施用。细胞是终末分化的。细胞是角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。肽以约1毫摩尔或更小的浓度存在。组合物还包含氧化白藜芦醇。
在一个实施方案中，一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的氧化白藜芦醇的组合物。
在各种实施方案中，氧化白藜芦醇以约0.1毫摩尔至约1.0毫摩尔之间的浓度存在。该组合物进一步包含有效量的一种或多种肽，其中该一种或多种肽包含SEQ ID NO:9。细胞是哺乳动物细胞。哺乳动物细胞是皮肤细胞。哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。施用是通过口服施用。细胞是终末分化的角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
本发明的其他目的、特征和优点在考虑以下详细描述和附图后将变得显而易见，其中相同的附图标记在所有附图中表示相同的特征。
附图说明
图1A显示了SIRT1(a)的剂量依赖性转录上调。数据表示为相对于内部对照基因18S的倍数增加，并代表3个独立实验的平均值±SEM。
图1B显示了SIRT3(b)的剂量依赖性转录上调。数据表示为相对于内部对照基因18S的倍数增加，并代表3个独立实验的平均值±SEM。
图1C显示了SIRT6(c)的剂量依赖性转录上调。数据表示为相对于内部对照基因18S的倍数增加，并代表3个独立实验的平均值±SEM。
图1D显示了SIRT7(d)的剂量依赖性转录上调。数据表示为相对于内部对照基因18S的倍数增加，并代表3个独立实验的平均值±SEM。
图2A显示了十肽-12和氧化白藜芦醇对表皮角质形成细胞的细胞毒性作用。数据表示为对照百分比，并代表3个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。
图2B显示了十肽-12和氧化白藜芦醇对表皮角质形成细胞增殖的作用。数据表示为对照百分比，并代表3个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。
图3显示了SEQ ID NO：9的十肽P4的化学结构。
图4显示了氧化白藜芦醇的化学结构。
图5是SEQ ID NO：9的十肽P4的免疫抑制作用图。
图6是氧化白藜芦醇的免疫抑制作用图。
图7是SEQ ID NO：9的十肽P4的免疫抑制作用图。
图8是氧化白藜芦醇的免疫抑制作用图。
具体实施方式
皮肤表现出时间和光老化的后果，使我们不断意识到衰老过程并寻求补救措施以减缓或逆转其影响。皮肤老化历来被归类为外在的或内在的。最近的证据表明，这两种类型都有重要的分子特征，包括促进基质金属蛋白酶表达的信号转导通路的改变、原胶原合成的减少和结缔组织损伤。
在人皮肤中，衰老与衰老细胞数量的增加以及细胞增殖和分化能力的降低有关。大量证据支持衰老主要是各种内源性活性氧种类(ROS)自由基损伤的结果的理论。Velarde等人报告了线粒体氧化损伤、细胞衰老和皮肤老化表型之间因果关系的体内证据。此外，紫外线(UV)辐射刺激ROS合成，这与诱变和光老化有关。与这些发现一致，数据表明UV照射相比于防晒皮肤中沉默信息调节蛋白(sirtuin)活性的表达发生了改变，并且这些差异可能是皮肤老化的某些方面的原因。
细胞衰老描述了一个细胞停止分裂并经历独特的表型改变的过程，包括显著的染色质和分泌组变化，以及肿瘤抑制因子的激活。许多报告帮助确立了沉默信息调节蛋白作为有效抗衰老蛋白的概念，详细说明了它们在延缓细胞衰老和过早衰老方面的多效作用。沉默信息调节蛋白是DNA损伤修复、端粒缩短、细胞对氧化应激的反应和改善ROS诱导的病理等途径中的关键效应物。
在哺乳动物中，有七个沉默信息调节蛋白基因(SIRT1-7)，其位于不同的细胞区室中，能够发挥不同的作用。生化上，沉默信息调节蛋白是一类主要具有NAD+依赖性赖氨酸脱乙酰酶活性的蛋白质。沉默信息调节蛋白被广泛认为是多种代谢途径的关键调节剂、细胞中能量和氧化还原状态的传感器以及氧化应激的调节剂。
这些发现引发了对开发小分子活化剂或药物的兴趣，以帮助减缓衰老及其广泛的与年龄相关的疾病的进程。在七种哺乳动物沉默信息调节蛋白中，SIRT1是在衰老和长寿方面得到最广泛研究的。例如，白藜芦醇的抗衰老作用主要归因于SIRT1激活。事实上，Ido等人报道，白藜芦醇通过增加AMP活化蛋白激酶和沉默信息调节蛋白的活性，减轻细胞衰老和增殖功能障碍。
我们之前曾报道过十肽-12在人皮肤中的有效色素减退功效。进一步的临床研究显示，每天两次使用含有0.01％十肽-12的外用乳膏治疗8周后的色斑患者的面部皮肤外观总体改善。这些发现使我们假设十肽-12可调节沉默信息调节蛋白活性以改善整体皮肤外观。为了阐明这种可能性，我们评估了十肽-12对人表皮祖细胞中沉默信息调节蛋白转录的影响。
报告详细介绍了沉默信息调节蛋白在抑制过早衰老、延缓细胞衰老、延长寿命和减轻各种衰老疾病方面的多效作用。在此，我们报告了我们对强效沉默信息调节蛋白激活剂十肽-12的发现，并将其性能与有据可查的氧化白藜芦醇进行了比较。相对于对照细胞，用100微摩尔十肽-12处理人表皮角质形成细胞祖细胞增加了SIRT1的转录141±11％，而SIRT3、SIRT6和SIRT7的水平分别增加了121±13％、147±8％和95±14％。十肽-12将沉默信息调节蛋白转录上调至与氧化白藜芦醇相似的水平，但细胞毒性降低。
材料和方法
试剂
十肽-12(YRSRKYSSWY)SEQ ID NO:9由Bio Basic,Inc.(加拿大安大略省)使用固相FMOC化学合成。氧化白藜芦醇购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。
细胞培养
将人新生儿表皮祖细胞(Thermo Fisher Scientific，NY)以每孔2x 105个细胞的密度接种在6孔板中。每个孔接受2毫升含有60微摩尔氯化钙的Epilife培养基(ThermoFisher Scientific，NY)。将板在37摄氏度和5％CO2的加湿室中温育。二十四小时后，用溶解在含有5％DMSO的PBS中的不同浓度的氧化白藜芦醇或十肽-12处理细胞。对照孔仅接受载体(5％DMSO和PBS)。每孔中DMSO的最终浓度为0.05％。
总RNA提取、定量和cDNA合成
72小时温育期后，根据制造商的方案，使用RNeasy试剂盒(Qiagen,Valencia,CA)对细胞进行胰蛋白酶消化并提取总RNA。
使用nanodrop(Thermo Fisher Scientific,NY)确定RNA浓度。使用oligo dT引物和TaqMan逆转录试剂(Thermo Fisher Scientific，NY)，使用2μg的总RNA合成cDNA。反应在DNA Engine Peltier Thermal Cycler(Bio-Rad,Hercules,CA)中进行。退火温度为25摄氏度10分钟，然后在48摄氏度下1小时合成第一链，并在95摄氏度下加热灭活5分钟。
半定量分析
SIRT1-7引物(表A)是使用Primer3设计的。半定量PCR反应在DNA Engine PeltierThermo Cycler(Bio-Rad,Hercules,CA)上进行。PCR在以下条件下进行：对于SIRT 1-7和管家基因18S，在34个循环中在94摄氏度变性2分钟和在54摄氏度下引物延伸30秒。
表A：SIRT1-7和18S的引物序列
Figure BDA0003168849620000061
将样品在含有0.5微克/毫升溴化乙锭的1.5％琼脂糖凝胶上运行并分离，并使用FluorChem HD2成像系统(Protein simple,San Jose,CA)成像。使用AlphaEase FC软件(Protein simple,San Jose,CA)进行光密度分析。强度比计算为每个基因的强度值除以内部对照基因18S的强度值。
活力/增殖和细胞毒性测定
使用
Figure BDA0003168849620000062
MTT细胞增殖试剂盒(R&D systems,Minneapolis,MN)测定增殖率。在37摄氏度、5％CO2的加湿气氛中，将细胞以每孔2.5x 104接种在96孔板中。二十四小时后，将十肽-12或氧化白藜芦醇以不同浓度(0、3、10、30、100、300和1000微摩尔)加入相应的孔中，然后将培养物温育72小时。该程序的其余部分按照制造商的协议进行。
使用台盼蓝染料排斥试验测量细胞毒性。将细胞在6孔板中以每孔4×105个细胞的密度培养。每个孔接受不同浓度的十肽-12或氧化白藜芦醇(0、3、10、30、100、300和1000微摩尔)。将板在37摄氏度下在加湿的5％CO2室中温育。72小时后，取出等分试样并使用血细胞计数器计数细胞。根据以下公式测量细胞毒性：[1-(对照中细胞#-测试样品中活细胞#)/对照中细胞#]×100％。
统计分析
使用Microsoft Excel从3次独立运行计算平均值及其标准误差，并使用配对方差分析确定统计显著性。P值被认为在P<0.05具有统计学显著性。
结果
十肽对增殖率和细胞毒性的影响：
我们首先评估了十肽-12和氧化白藜芦醇对人表皮祖细胞的细胞毒性作用。图2A显示，用100微摩尔十肽-12或氧化白藜芦醇处理分别导致3±1％或6±1％的细胞死亡。在1毫摩尔时，十肽-12或氧化白藜芦醇分别导致7±2％或16±2％的细胞死亡。
我们还评估了十肽-12和氧化白藜芦醇对人表皮祖细胞活力和增殖的影响。图2B显示，用300微摩尔十肽-12或氧化白藜芦醇处理分别导致细胞增殖降低2±1％或5±1％。然而，与1毫摩尔十肽-12将增殖降低3±2％不同，与氧化白藜芦醇的3天温育将增殖降低了12±2％。
十肽-12上调SIRT1-7的转录：
我们接下来评估了氧化白藜芦醇和十肽-12对人表皮祖细胞中沉默信息调节蛋白表达的影响。图1A-1D和表B显示了十肽-12和氧化白藜芦醇以剂量依赖性方式调节SIRT1-7的转录。在30微摩尔氧化白藜芦醇时，SIRT1转录水平相对于对照细胞上调125±9％，而SIRT3、SIRT6和SIRT7分别上调133±5％、73±8％和95±7％。
表B和表C.SIRT 1-7响应十肽-12(表B)和氧化白藜芦醇(表C)处理的基因表达谱。结果是三个独立运行的平均值。
表B
十肽[μM] SIRT1 SIRT2 SIRT3 SIRT4 SIRT5 SIRT6 SIRT7
3 3±1％ 1±1％ 4±1％ 3±1％ 3±1％ 3±1％ 5±1％
10 12.2±3.1％ 4.1±3％ 9.2±2.8％ 8.1±4％ 5.2±3％ 21.3±8.1％ 15±4.2％
30 34±6.7％ 11.2±3.7％ 32.2±6.1％ 12.1±7％ 21±6.7％ 52±5.1％ 34.4±9.2％
50 79.2±12％ 21.5±4.9％ 65±12.1％ 41.2±13.1％ 33.1±6.1％ 95.4±13.4％ 61.3±10.2％
100 141.2±11％ 35.4±5.5％ 121±13.2％ 71.4±14.1％ 46±7.3％ 147±8.4％ 95.4±14.2％
300 188±12％ 61.1±6.8％ 165.2±12.4％ 115±11.7％ 67±9.3％ 189±9.5％ 148±9.6％
500 205±13.3％ 76±6.1％ 177±9.2％ 145±12.7％ 87.4±15.1％ 194±14％ 171.4±8.4％
1000 213±13.4％ 76±7.1％ 171±9％ 151±13.4％ 92.1±16.8％ 167±12.2％ 181.1±8.4％
表C
Figure BDA0003168849620000081
数据显示，相对于未经处理的细胞，100微摩尔十肽-12使SIRT1的转录增加了141±11％，而SIRT3、SIRT6和SIRT7分别增加了121±13％、147±8％和95±14％(图1A-1D)。
讨论
沉默信息调节蛋白在延缓细胞衰老和阻止过早衰老发展方面发挥的多效作用有助于证实它们是有效的抗衰老蛋白。白藜芦醇作为SIRT1激活剂和潜在的抗衰老剂的治疗用途已被广泛研究和记录。白藜芦醇通过SIRT1激活保护人内皮免受H2O2诱导的氧化应激和衰老。同样，氧化白藜芦醇也是一种有效的抗氧化剂和自由基清除剂。然而，与白藜芦醇不同的是，它具有较低的细胞毒性和较好的水溶性。因此，我们选择将其用作阳性对照，我们将其比较了十肽-12的在人表皮角质形成细胞中调节沉默信息调节蛋白转录的性能和能力。
尽管在用十肽-12治疗后所有7种沉默信息调节蛋白都被上调，但我们的讨论将集中在那些直接与皮肤老化有关的沉默信息调节蛋白上。
在100微摩尔或1毫摩尔时，十肽-12分别使SIRT1转录增加了141％或213％，令人印象深刻。SIRT1主要是一种核脱乙酰酶。它控制着各种细胞过程，如细胞增殖、分化、凋亡、代谢、应激反应、基因组稳定性和细胞存活。Cao等人报告，SIRT1通过调节培养的皮肤角质形成细胞中的p53和c-Jun N端激酶，提供针对UVB和H2O2诱导的细胞死亡的保护，表明SIRT1激活剂可以作为新的抗皮肤老化剂。其他研究人员报告，SIRT1可以抑制NF-κB信号，从而延缓衰老过程并延长寿命。SIRT1激活通过去乙酰化NF-κB复合物的p65亚基直接抑制NF-KB信号并增强氧化代谢和炎症的消退。因此，SIRT1可被视为一种重要的抗衰老蛋白，它通过调节多个分子途径介导其在防止过早衰老和加速衰老方面的广泛作用。
用100微摩尔十肽处理后，SIRT3转录增加了121％。SIRT3主要与多种线粒体过程的调节有关，例如β-氧化、ATP生成和ROS的管理。SIRT3还与造血干细胞再生能力的维持有关。SIRT3随着衰老而受到抑制，而衰老造血干细胞中的SIRT3上调可提高其再生能力。这一发现确立了SIRT3在维持严酷性方面的重要作用，更重要的是，有助于为未来基于干细胞的干预治疗导致过早衰老的代谢紊乱铺平了道路。
SIRT6可被视为一种重要的抗衰老蛋白，在DNA损伤修复、代谢调节、炎症和肿瘤抑制中具有多方面的作用。当SIRT6基因敲除小鼠模型出现严重的过早衰老表型并在一个月内死亡时，SIRT6获得了突出地位。此外，SIRT6是唯一一种在小鼠全身过度表达时显示寿命明显延长的哺乳动物沉默信息调节蛋白。此外，Kawahara等人报告，通过在NF-κB靶基因的启动子上在K9处使组蛋白H3脱乙酰化，SIRT6减弱过分活跃的NF-KB信号，这增强了SIRT6作为关键抗炎蛋白的作用。
Baohua等人表明SIRT6通过调节胶原代谢和NF-KB信号在皮肤衰老过程中发挥重要作用。他们报告，通过抑制1型胶原蛋白的转录、促进基质金属蛋白酶1的分泌和增加NF-κB信号，阻断SIRT6显著降低了羟脯氨酸含量。总之，SIRT6通过调节多种途径来延缓细胞衰老和加速衰老，成为抗衰老过程的关键调节剂。因此，在100μM时将SIRT6转录增强147％的十肽-12作为一种治疗性抗衰老候选药物，可能十分有望，以解决皮肤过早老化和光损伤皮肤的常见同时发生表型问题。
总之，本报告显示十肽-12显著上调SIRT1、SIRT3和SIRT6的转录水平，所有这3种都在对抗皮肤老化和其他与年龄相关的病理方面发挥重要作用。目前正在设计使用含有十肽-12的各种外用制剂的临床研究，以帮助验证体外发现结果并测试这种强效沉默信息调节蛋白激活剂的体内功效。
实施例
在此实施例中，对P4十肽进行了某些修饰，如下表D中详细说明。
表D
Figure BDA0003168849620000101
对十肽P4的这些修饰可用于提高针对蛋白酶的稳定性和增强经皮或跨细胞渗透，或两者。本发明的肽可包含来自任何天然存在的氨基酸或来自非天然存在的氨基酸的残基。这些天然存在的和非天然存在的氨基酸可以是D或L构型，或者可以包括两种右旋形式。在本申请中使用术语D和L，因为它们在本领域中是已知的。本发明的肽包括单个氨基酸和短跨度(例如，1-20个)氨基酸。此外，本发明的修饰肽还可包括单体或二聚体。
本申请中使用了氨基酸的标准单字母和三字母代码，见下表E。
表E
Figure BDA0003168849620000111
如上所述，指定的残基可以是天然存在的L氨基酸，或这些的修饰，即化学修饰、光学异构体或与修饰基团的连接。考虑可在肽内进行特定修饰以保持本发明肽特异性调节沉默信息调节蛋白基因表达的能力。
评估了十肽P4、P4A、P4B和P4C对沉默信息调节蛋白1-7转录水平的影响。表F总结了具有相应基因的所有四种十肽的转录水平，测试浓度为：10、30、50、100和300(均以微摩尔计)。
表F
Figure BDA0003168849620000121
Figure BDA0003168849620000131
在低浓度下，相对于修饰的十肽，天然十肽P4表现出增强的转录水平。然而，三种修饰的十肽(P4A、P4B和P4C)中的每一种都相对于对照上调了沉默信息调节蛋白基因的转录水平。在100微摩尔浓度下，所有四种十肽对转录水平的影响相当。
使用
Figure BDA0003168849620000132
MTT细胞增殖试剂盒测定了三种人细胞系(表皮祖细胞、成黑素细胞和成纤维细胞)的增殖率。在37摄氏度、5％CO2的加湿气氛中，将细胞以每孔2.5x 104接种在96孔板中。二十四小时后，将十肽以不同的浓度加入相应的孔中并温育72小时。该程序的其余部分按照制造商的协议进行。
表G显示72小时后表皮祖细胞增殖率。
表G
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 99±1％ 99±1％ 99±1％
10 99±1％ 99±1％ 99±1％ 99±1％
30 98±1％ 98±1％ 98±1％ 98±1％
50 97±1％ 97±1％ 98±1％ 98±1％
100 97±1％ 97±2％ 97±1％ 97±1％
300 96±1％ 96±2％ 97±1％ 97±1％
500 96±2％ 96±2％ 95±2％ 96±2％
1000 94±2％ 94±2％ 94±2％ 96±2％
表H显示了72小时后的成黑素细胞增殖率。
表H
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 100％ 100％ 100％
10 100％ 100％ 100％ 100％
30 99±1％ 99±1％ 99±1％ 99±1％
50 98±1％ 98±1％ 98±1％ 98±1％
100 97±1％ 97±2％ 97±2％ 97±2％
300 97±1％ 97±2％ 96±2％ 96±3％
500 95±2％ 96±2％ 95±2％ 95±2％
1000 95±2％ 95±2％ 94±2％ 95±2％
表I显示了72小时后的成纤维细胞增殖率。
表I
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 100％ 100％ 100％
10 99±1％ 99±1％ 99±1％ 99±1％
30 99±1％ 98±1％ 99±1％ 99±1％
50 98±1％ 98±1％ 99±1％ 99±1％
100 97±1％ 97±2％ 98±2％ 98±2％
300 97±1％ 97±2％ 97±2％ 97±2％
500 97±2％ 96±2％ 96±2％ 96±2％
1000 96±2％ 95±2％ 96±2％ 96±2％
将表皮祖细胞、成黑素细胞和成纤维细胞与100微摩尔十肽P4A温育72小时后，结果是所有三种细胞系的增殖率都降低了3％。
在1000微摩尔时，表皮祖细胞的增殖率降低了6％，而成黑色素细胞和成纤维细胞的增殖率分别降低了5％和4％。
还测试了每种十肽对细胞活力的影响。具体而言，将细胞与不同浓度的十肽一起温育，然后使用台盼蓝计数相对于对照(未处理的细胞)的活力。根据以下公式测量细胞毒性：
[1-(对照中细胞#-测试样品中活细胞#)/对照中细胞#]×100％。
表J显示了7天后的表皮祖细胞活力。
表J
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 100％ 100％ 100％
10 99±1％ 99±1％ 99±1％ 99±1％
30 98.4±1％ 98.2±1％ 98.2±1％ 98±1％
50 97.8±1％ 97.5±1％ 98±1％ 97.4±1％
100 97.1±1％ 96.9±2％ 97±1％ 96.6±2％
300 95.6±2％ 95.6±2％ 96.5±2％ 95.7±3％
500 94.2±2％ 94.3±2％ 95.5±2％ 94.8±3％
1000 93.8±2％ 93.6±3％ 94.5±2％ 94±3％
表K显示了7天后的成黑素细胞活力。
表K
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 100％ 100％ 100％
10 99±1％ 99±1％ 98.5±1％ 99±1％
30 98.3±1％ 98.5±1％ 97.8±3％ 98.4±1％
50 98±1％ 98±1％ 97.2±2％ 97.9±1％
100 97.3±1％ 97±2％ 96.3±2％ 97±2％
300 95.2±2％ 96.2±2％ 95.6±2％ 96±3％
500 94.6±2％ 95.6±2％ 94.6±2％ 95.5±3％
1000 94±2％ 94.8±2％ 93.8±2％ 94.8±3％
表L显示了7天后的成纤维细胞活力。
表L
浓度(μM) P4 P4A P4B P4C
3 100％ 100％ 100％ 100％
10 98.6±1％ 98.9±1％ 98.8±1％ 98.9±1％
30 98.2±1％ 98.4±1％ 98.3±1％ 98.3±1％
50 97.8±1％ 98±1％ 97.6±1％ 97.8±1％
100 97.2±1％ 97.4±2％ 97.3±2％ 97.4±2％
300 95.6±2％ 96.6±2％ 96.5±2％ 96.5±2％
500 94.5±2％ 95.5±2％ 95.3±3％ 95.7±2％
1000 93.8±1％ 94.3±2％ 94.2±3％ 94.9±3％
在100微摩尔浓度下，所有三种细胞系的细胞活力保持在97％以上。在1000微摩尔时，细胞活力相对于对照下降了6％。
总之，最近的报告详细介绍了沉默信息调节蛋白在抑制过早衰老、延缓细胞衰老、延长寿命和减轻各种衰老疾病方面的多效作用。在此，我们报告了我们对强效沉默信息调节蛋白激活剂十肽-12的发现，并将其性能与有据可查的氧化白藜芦醇进行了比较。相对于对照细胞，用100微摩尔十肽-12处理人表皮祖细胞增加了SIRT1的转录141±11％，而SIRT3、SIRT6和SIRT7的水平分别增加了121±13％、147±8％和95.4±14％。十肽-12将沉默信息调节蛋白转录上调至与氧化白藜芦醇相似的水平，但细胞毒性降低。因此，十肽-12有望成为一种更安全的治疗方法，以对抗皮肤老化和其他与年龄相关的病变。
虽然上面的描述在指出效果明显的地方提到了100微摩尔或更高的典型十肽浓度，但结果也证明更低的浓度具有积极的效果。因此，一些实施方案可以使用1微摩尔或更高的十肽浓度，具体实施方案使用100微摩尔或更高的肽浓度范围。根据各种实施方案的肽浓度范围的实例是1微摩尔或更高、5微摩尔或更高、10微摩尔或更高、30微摩尔或更高、50微摩尔或更高、100微摩尔或更高、300微摩尔或更高、500微摩尔或更高和1000微摩尔或更高。
还应注意，特定的十肽可与其他成分组合使用以达到所需的效果。例如，特定的十肽可以与其他肽如十肽P4A、4B和/或4C和/或与其他成分如氧化白藜芦醇组合使用。根据这样的实施方案，通过包括其他组分实现的协同效应可以最终降低实现期望结果所需的任何单个组分(例如十肽、其他)的浓度。
虽然以上具体包括十肽和作为可能的附加成分的氧化白藜芦醇，但实施方案不限于此。其他可能的添加剂的例子可以包括但不限于，α-硫辛酸、生物素、咖啡因、神经酰胺、辅酶Q10、乙醇酸、绿茶、人干细胞、人干细胞提取物、透明质酸、氢醌、荷荷巴油、曲酸、乳酸、苹果酸、烟酰胺、寡肽、肽、植物干细胞、植物干细胞提取物、白藜芦醇、视黄醇、维生素C、维生素E和维生素K等。
应注意，实施方案可用于治疗多种皮肤细胞类型。终末分化的皮肤细胞的实例可包括但不限于角质形成细胞、纤维细胞、黑素细胞和免疫细胞，例如也随时间老化的朗格汉斯细胞(例如，组织细胞或树突细胞)。
实施方案也可用于处理皮肤祖细胞以减少皮肤老化并允许皮肤在其生命周期内更新。此类祖细胞的实例可包括但不限于表皮角质形成细胞祖细胞、成纤维细胞、成黑色素细胞、组织母细胞或成树突细胞，它们是寄居在表皮中的朗格汉斯细胞的祖细胞。
最后，虽然上面已经描述了人皮肤细胞的治疗，但具体实施方案不限于这样的方法。替代实施方案可以使用来自其他生物体的皮肤细胞的处理，包括但不限于哺乳动物，例如牛(例如，在皮革制造中)、猪和其他动物(例如，狗、猫和其他基于比赛目的的皮肤外观可能有价值的动物)。
条款1A.由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12组成的肽。条款2A.条款1A的肽，其中所述肽由被修饰基团修饰的SEQ ID NO:9组成，所述修饰基团是氨基末端的棕榈酰基或乙酰基，或羧基末端的酰胺化，或两者。
条款3A.条款1A-2A中任一项的肽，其由在第6位具有酪氨酸氨基酸作为D-同种型的SEQ ID NO：11组成，并且所有其他氨基酸为L-同种型。
条款4A.一种组合物，其包含由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQID NO:12组成的第一肽。
条款5A.条款4A的组合物，其中所述肽由被修饰基团修饰的SEQ ID NO:9组成，所述修饰基团是氨基末端的棕榈酰基或乙酰基，或羧基末端的酰胺化，或两者。
条款6A.条款4A-5A中任一项的组合物，其由在第6位具有酪氨酸氨基酸作为D-同种型的SEQ ID NO：11组成，并且所有其他氨基酸为L-同种型。
条款7A.条款4A-6A中任一项的组合物，其中所述肽以1μm或更高的浓度存在。
条款8A.一种通过调节皮肤细胞中沉默信息调节蛋白基因的表达来治疗受试者以减轻皮肤老化症状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽的组合物，其中所述一种或多种肽由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQID NO:12组成。
条款9A.根据条款8A的方法，其中所述肽由被修饰基团修饰的SEQ ID NO:9组成，所述修饰基团是氨基末端的棕榈酰基或乙酰基，或羧基末端的酰胺化，或两者。
条款10A.条款8A-9A中任一项的方法，其中所述肽由在第6位具有酪氨酸氨基酸作为D-同种型的SEQ ID NO：11组成，并且所有其他氨基酸为L-同种型。
条款11A.根据条款8A-10A中任一项的方法，其中皮肤细胞是祖细胞。
条款12A.根据条款11A的方法，其中所述祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。
条款13A.根据条款8A-10A中任一项的方法，其中皮肤细胞是终末分化的。
条款14A.根据条款13A的方法，其中所述皮肤细胞是角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
条款15A.根据条款8A-14A中任一项的方法，其中所述肽以1μm或更高的浓度存在。
条款16A.根据条款8A-15A中任一项的方法，其中所述沉默信息调节蛋白基因包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQID NO:7。
条款17A.根据条款8A-16A中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含氧化白藜芦醇。
条款18A.根据条款8A-17A中任一项的方法，其中皮肤细胞是哺乳动物细胞。
条款19A.根据条款18A的方法，其中皮肤细胞是人的。
条款20.一种调节皮肤细胞中沉默信息调节蛋白基因表达的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽的组合物，其中所述一种或多种肽由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12组成。
进一步注意到肽制剂和/或氧化白藜芦醇的免疫抑制作用。图3显示了SEQ ID NO：9的十肽P4的化学结构。图4显示了氧化白藜芦醇的化学结构。
特别地，SEQ ID NO:9的十肽-12(P4)和氧化白藜芦醇表现出抗炎作用，如通过两种不同的方法测量的：
1)阻断受刺激的外周血单核细胞(PBMC)，以及
2)抑制自然杀伤(NK)介导的细胞毒性杀伤。
现在在下面的实施例中详细讨论这些结果。
实施例
PBMC增殖和NK细胞毒性杀伤试验
冷冻保存的人PBMC购自Astarte Biologies(雷德蒙德，华盛顿，LISA)，用植物血凝素(PHA)激活，并评估增殖。使用CytoTox96非放射性细胞毒性测定试剂盒(Promega)评估了白细胞介素(IL)-2激活的人NK细胞对人K562细胞的细胞毒性杀伤。向培养基中加入蛋白酶抑制剂以防止十肽-12降解。
每个实验进行三个独立的试验。Microsoft Excel(华盛顿州西雅图)用于计算平均值和标准误差，并使用非配对方差分析或双尾学生T检验确定统计显著性。P值<0.05被认为具有统计学意义。
探索了在暴露于PHA 72小时后，十肽-12和氧化白藜芦醇对PBMC增殖率的影响。
图5绘制了十肽-12(P4)对PHA刺激的PBMC增殖的免疫抑制作用。数据表示为对照百分比(％)，并代表3个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。E:T表示效应细胞与靶细胞的比率。
图5显示，在0.05毫摩尔时十肽-12在统计学上显著地(p<0.02)减少增殖28.0±3.8％，在0.1毫摩尔时为54.3±1.1％。在0.3或1毫摩尔时没有实现显著的额外减少(p>0.05)。
图6描绘了氧化白藜芦醇对PHA刺激的PBMC增殖的免疫抑制作用。数据表示为对照百分比(％)，并代表三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。E:T表示效应细胞与靶细胞的比率。
图6显示，氧化白藜芦醇在0.1毫摩尔时也使增殖减少了35.3±1.8％(p<0.02)，在3毫摩尔时减少了14.7±3.4％(p<0.02)。
还评估了十肽-12对IL-2引发的NK介导的K562细胞的细胞毒性杀伤的影响。
图7描绘了十肽-12(P4)对NK92介导的K562细胞的细胞毒性杀伤的免疫抑制作用。数据表示为对照百分比(％)，并代表3个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。E:T表示效应细胞与靶细胞的比率。
图7说明，在0.1和0.3毫摩尔下，在效应细胞与靶细胞的比率(E:T)为10:1时，十肽-12分别将NK杀伤降低了81.4±1.3％和59.3±3.6％(p>0.05)。在30:1的比例下，十肽-12在0.1和0.3毫摩尔时分别将NK杀伤降低了64.8±5.3％和44.8±3.2％(p<0.04)。
图8描绘了氧化白藜芦醇对NK92介导的K562细胞的细胞毒性杀伤的免疫抑制作用。数据表示为对照百分比(％)，并代表三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05。E:T表示效应细胞与靶细胞的比率。
图8显示，当E:T比为10:1时，氧化白藜芦醇在0.1和0.3毫摩尔时分别将NK杀伤降低了88.7±1.8％和86.1±0.9％(p<0.03)。在30:1的比例下，氧化白藜芦醇在0.1和0.3毫摩尔时分别阻止了NK杀伤72.8±1.9％和64.0±3.4％(p<0.03)。
因此，研究表明，十肽-12和氧化白藜芦醇表现出抗炎作用，如通过两种方法测量：1)阻断PHA刺激的PBMC增殖，和2)抑制NK介导的细胞毒性杀伤。
对于增殖阻断试验，十肽12的作用呈剂量依赖性。氧化白藜芦醇的作用表现出有限的抑制浓度范围。
事实上，总体趋势表明，氧化白藜芦醇可能具有双相效应。这是因为0.3和1毫摩尔的浓度比0.1毫摩尔的浓度显示出逐渐减弱的抑制作用。
在测试的浓度范围内，十肽-12在0.1毫摩尔或更大时表现出平顶或最大抑制。这可以通过下游信号通路或反馈回路激活的剂量依赖性差异来解释。事实上，仔细检查沉默信息调节蛋白表达模式的剂量依赖性曲线揭示了双相效应，更高的浓度变成抑制。
相比之下，对于十肽-12和氧化白藜芦醇，NK杀伤的废除似乎都是剂量依赖性的。氧化白藜芦醇在所有测试浓度下显示出更明显的抑制作用。
对于十肽-12和氧化白藜芦醇，E:T比为10:1时的抑制作用都大于30:1时。这可能是由于NKG2D的阻断和穿孔素介导的细胞毒性。
注意到白藜芦醇(氧化白藜芦醇的类似物)在0.1毫摩尔时抑制PHA诱导的增殖。这种抑制作用可能是由于抑制了NF-κB，NF-κB也受沉默信息调节蛋白调节并与免疫和炎症反应以及细胞增殖和凋亡的调节等作用有关。
总之，这里观察到的免疫抑制作用表明独特和特定的调节途径参与免疫系统的不同分支。进一步的研究可阐明这些多效性效应。
例如，评估这两种药剂对促炎介质(如TNFα、IL-1β、IFNγ和IL-6)的影响可能是有见地的。此外，确定激活的PBMC相比于静息的PBMC的翻译和其他转录效应可能是有见地的。虽然上面的描述在指出效果明显的地方提到了典型的十肽浓度在大约0-1.0毫摩尔之间，但不同的浓度可能具有积极的效果。因此，一些实施方案可以利用1.0毫摩尔或更高的十肽浓度。根据各种实施方案的肽浓度范围的例子是0.025毫摩尔、0.05毫摩尔、0.1毫摩尔、0.2毫摩尔、0.3毫摩尔、0.4毫摩尔、0.5毫摩尔、0.6毫摩尔、0.7毫摩尔、0.8毫摩尔、0.9毫摩尔和1.0毫摩尔或更大。
并且虽然上面的描述在指出效果明显的地方提到了典型的氧化白藜芦醇浓度在大约0.1-1.0毫摩尔之间，但不同的浓度可能具有积极的效果。因此，一些实施方案可以利用1.0毫摩尔或更高的氧化白藜芦醇浓度。根据各种实施方案的氧化白藜芦醇浓度范围的例子是0.1毫摩尔、0.2毫摩尔、0.3毫摩尔、0.4毫摩尔、0.5毫摩尔、0.6毫摩尔、0.7毫摩尔、0.8毫摩尔、0.9毫摩尔和1.0毫摩尔或更大。
还应注意，特定组分(例如，十肽、氧化白藜芦醇)可与另一种组分组合使用以实现所需效果。例如，特定的十肽可以与其他肽如十肽P4A、4B和/或4C和/或与其他成分如氧化白藜芦醇组合使用。根据这样的实施方案，通过包括其他组分实现的协同效应可以最终降低实现期望结果所需的任何单个组分(例如十肽、氧化白藜芦醇、其他)的浓度。
虽然以上具体包括十肽和作为可能的附加成分的氧化白藜芦醇，但实施方案不限于此。其他可能的添加剂的例子可以包括但不限于，α-硫辛酸、生物素、咖啡因、神经酰胺、辅酶Q10、乙醇酸、绿茶、人干细胞、人干细胞提取物、透明质酸、氢醌、荷荷巴油、曲酸、乳酸、苹果酸、烟酰胺、寡肽、肽、植物干细胞、植物干细胞提取物、白藜芦醇、视黄醇、维生素C、维生素E和维生素K等。
注意，不同的实施方案可用于多种皮肤细胞类型的免疫抑制。终末分化的皮肤细胞的实例可包括但不限于角质形成细胞、纤维细胞、黑素细胞和免疫细胞，例如也随时间老化的朗格汉斯细胞(例如，组织细胞或树突细胞)。
某些实施方案还可用于治疗皮肤祖细胞以进行免疫抑制和减少皮肤老化，并允许皮肤在其一生中更新。此类祖细胞的实例可包括但不限于表皮角质形成细胞祖细胞、成纤维细胞、成黑色素细胞、组织母细胞或成树突细胞，它们是寄居在表皮中的朗格汉斯细胞的祖细胞。虽然以上描述集中于人皮肤细胞的治疗，但具体实施方案不限于此类方法。替代实施方案可以使用来自其他生物体的皮肤细胞的处理，包括但不限于哺乳动物，例如牛(例如，在由皮肤制造皮革中)、猪和其他动物(例如，狗、猫和其他基于比赛目的的皮肤外观可能有价值的动物)。
此外，虽然以上描述集中于皮肤细胞的治疗，但实施方案不限于这种或任何其他类型的细胞。一些实施方案可以处理各种类型的哺乳动物甚至非哺乳动物细胞。
并且，根据一些实施方案，治疗可以通过向哺乳动物受试者口服施用进行。或者，治疗可以涉及其他形式的递送，例如直接应用或靶向局部应用(例如，注射)。
条款1B.一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽的组合物，其中所述一种或多种肽包括SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。
条款2B.根据条款1B的方法，其中所述肽由SEQ ID NO:9组成。
条款3B.根据条款1B的方法，其中所述肽由被修饰基团修饰的SEQ ID NO:9组成，所述修饰基团是氨基末端的棕榈酰基或乙酰基，或羧基末端的酰胺化，或两者。
条款4B.根据条款1B的方法，其中所述肽由在第6位具有酪氨酸氨基酸作为D-同种型的SEQ ID NO：11组成，并且所有其他氨基酸为L-同种型。
条款5B.根据条款1B的方法其中细胞是哺乳动物细胞。
条款6B.根据条款5B的方法，其中哺乳动物细胞是皮肤细胞。
条款7B.根据条款6B的方法，其中哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。
条款8B.根据条款7B的方法，其中所述祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。
条款9B.根据条款1B、5B、6B、7B和8B中任一项的方法，其中所述施用是通过口服施用。
条款10B.根据条款1B的方法，其中所述细胞是终末分化的。
条款11B.根据条款10B的方法，其中所述细胞是角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
条款12B.根据条款1B的方法，其中所述肽以约1毫摩尔或更低的浓度存在。
条款13B.根据条款1B的方法，其中所述组合物进一步包含氧化白藜芦醇。
条款14B.一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的氧化白藜芦醇的组合物。
条款15B.根据条款14B的方法，其中氧化白藜芦醇以约0.1-1.0毫摩尔之间的浓度存在。
条款16B.根据条款14B所述的方法，其中所述组合物进一步包含有效量的一种或多种肽，其中所述一种或多种肽包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11或SEQ IDNO：12。
条款17B.根据条款16B的方法，其中所述肽由SEQ ID NO:9组成。
条款18B.根据条款16B的方法，其中所述肽以约1毫摩尔或更低的浓度存在。
条款19B.根据条款14B的方法其中细胞是哺乳动物细胞。
条款20B.根据条款19B的方法，其中哺乳动物细胞是皮肤细胞。
条款21B.根据条款20B的方法，其中哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。
条款22B.根据条款21B的方法，其中所述祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。
条款23B.根据条款14B、19B、20B、21B和22B中任一项的方法，其中所述施用是通过口服施用。
条款24B.根据条款14B的方法，其中所述细胞是终末分化的。
条款25B.根据条款24B的方法，其中所述细胞是角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
本发明的描述是为了说明和描述的目的而提出的。并不意在穷举或将本发明限制为所描述的精确形式，并且根据上述教导，许多修改和变化是可能的。选择和描述这些实施方案是为了最好地解释本发明的原理及其实际应用。该描述将使本领域的其他技术人员能够在各种实施方案中以及以适合于特定用途的各种修改来最佳地利用和实践本发明。本发明的范围由以下权利要求限定。
序列表
<110> 伊斯盖普治疗公司
<120> 在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂
<130> ELIXP005PC
<150> US 62/794,582
<151> 2019-01-19
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
gccaatcata agatgttgct gaac 24
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
aacctccctc atctctaact 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 3
gttggttaca agatccagac 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
agagctgtga gagaatgaag 20
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 5
tcttccatac actttactac ctt 23
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 6
cagcttaaac aggagtgaac 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 7
gacattttta gccatttgtc 20
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 8
cggaggttcg aagacgatca gata 24
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Ser Ser Trp Tyr
1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-末端棕榈酰基（N-terminal Palmitoyl）
<220>
<221>
<222> (10)..(10)
<223> 酰胺化（AMIDATION）
<400> 10
Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Ser Ser Trp Tyr
1 5 10
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-末端棕榈酰基（N-Terminal Palmitoyl）
<220>
<221> SITE
<222> (6)..(6)
<223> D-同种型（D-isoform）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> 酰胺化（AMIDATION）
<400> 11
Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Ser Ser Trp Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰化（ACETYLATION）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> 酰胺化（AMIDATION）
<400> 12
Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Ser Ser Trp Tyr
1 5 10

Claims (20)

1.一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的一种或多种肽的组合物，其中所述一种或多种肽包括SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述肽由SEQ ID NO：9组成。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是皮肤细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。
7.根据权利要求1、2、3、4、5或6中任一项所述的方法，其中所述施用是通过口服施用。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是终末分化的。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述细胞是角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述肽以约1毫摩尔或更小的浓度存在。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物进一步包含氧化白藜芦醇。
12.一种通过对细胞进行免疫抑制来治疗受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含有效量的氧化白藜芦醇的组合物。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述氧化白藜芦醇以约0.1毫摩尔至约1.0毫摩尔之间的浓度存在。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物进一步包含有效量的一种或多种肽，其中所述一种或多种肽包含SEQ ID NO:9。
15.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是皮肤细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述哺乳动物皮肤细胞是祖细胞。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述祖细胞是表皮角质形成细胞祖细胞、成黑素细胞、成纤维细胞、成组织细胞或成树突细胞。
19.根据权利要求12、15、16、17或18中任一项所述的方法，其中所述施用是通过口服施用。
20.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞是终末分化的角质形成细胞、黑素细胞、纤维细胞、组织细胞或树突细胞。
CN202080009862.4A 2019-01-19 2020-01-20 在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂 Pending CN113677358A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962794582P 2019-01-19 2019-01-19
US62/794,582 2019-01-19
PCT/US2020/014298 WO2020150718A1 (en) 2019-01-19 2020-01-20 Tyrosine inhibitors with immunosuppressive activity in human neonatal keratinocyte progenitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113677358A true CN113677358A (zh) 2021-11-19

Family

ID=71613450

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080009862.4A Pending CN113677358A (zh) 2019-01-19 2020-01-20 在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20220088116A1 (zh)
EP (1) EP3911352A4 (zh)
JP (1) JP2022518128A (zh)
KR (1) KR20210116493A (zh)
CN (1) CN113677358A (zh)
AU (1) AU2020210030A1 (zh)
BR (1) BR112021013926A2 (zh)
CA (1) CA3125349A1 (zh)
CO (1) CO2021009992A2 (zh)
MX (1) MX2021008405A (zh)
WO (1) WO2020150718A1 (zh)
ZA (1) ZA202104401B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021365817A1 (en) * 2020-10-20 2023-06-22 Escape Therapeutics, Inc. Enhanced skin permeation of a novel peptide via structural modification, chemical enhancement, and microneedles

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070849A (zh) * 2013-01-29 2013-05-01 江苏省中国科学院植物研究所 氧化白藜芦醇在制备抗卵巢衰老药物中的应用
WO2018183882A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Escape Therapeutics, Inc. Decapeptide-12 modulation of sirtuin gene expression in epidermal keratinocyte progenitors

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9457064B2 (en) * 2005-07-29 2016-10-04 Abburi Ramaiah Method for treatment of vitiligo
EP2489363A3 (en) * 2005-09-13 2012-12-05 Abburi Ramaiah Agonist peptides of basic fibroblast growth factor (BFGF) and the method of reduction of wrinkle on skin, darkening of hair and acceleration of wound healing
WO2009003034A1 (en) * 2007-06-27 2008-12-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Oligopeptide tyrosinase inhibitors and uses thereof
WO2019142124A1 (en) * 2018-01-17 2019-07-25 Cadila Healthcare Limited Pharmaceutical compositions for treatment of vitiligo

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070849A (zh) * 2013-01-29 2013-05-01 江苏省中国科学院植物研究所 氧化白藜芦醇在制备抗卵巢衰老药物中的应用
WO2018183882A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Escape Therapeutics, Inc. Decapeptide-12 modulation of sirtuin gene expression in epidermal keratinocyte progenitors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANAN ABU UBEID等: "Tyrosinase Inhibitors with Potent Anti-Senescence Activity in Human Neonatal Keratinocyte Progenitors", JOURNAL OF DERMATOLOGIC SURGERY, vol. 2, no. 1 *
刘果;杜洁;刘飞;徐鸿;陈海;唐健;华洋林;刘光荣;曹庸;: "桑根氧化白藜芦醇的分离、稳态化包埋及其酪氨酸酶活性抑制作用研究", 现代食品科技, vol. 31, no. 04, pages 217 - 221 *

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021008405A (es) 2021-10-26
JP2022518128A (ja) 2022-03-14
CO2021009992A2 (es) 2021-08-09
BR112021013926A2 (pt) 2021-09-21
CA3125349A1 (en) 2020-07-23
WO2020150718A1 (en) 2020-07-23
KR20210116493A (ko) 2021-09-27
ZA202104401B (en) 2022-08-31
EP3911352A4 (en) 2023-01-25
AU2020210030A1 (en) 2021-07-22
EP3911352A1 (en) 2021-11-24
US20220088116A1 (en) 2022-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110770248A (zh) 表皮角质形成细胞祖细胞中去乙酰化酶基因表达的十肽-12调控
Jiang et al. Monotropein alleviates H2O2‑induced inflammation, oxidative stress and apoptosis via NF‑κB/AP‑1 signaling
Andrianjafiniony et al. Oxidative stress, apoptosis, and proteolysis in skeletal muscle repair after unloading
Martemucci et al. Oxidative stress, aging, antioxidant supplementation and their impact on human health: An overview
Sakuma et al. Molecular mechanisms in aging and current strategies to counteract sarcopenia
Oh et al. Ficus deltoidea (Mas cotek) extract exerted anti-melanogenic activity by preventing tyrosinase activity in vitro and by suppressing tyrosinase gene expression in B16F1 melanoma cells
Li et al. Baicalein inhibits melanogenesis through activation of the ERK signaling pathway
Zhang et al. Puerarin prevents LPS-induced osteoclast formation and bone loss via inhibition of Akt activation
US20210145764A1 (en) Compositions of cannabidiol (cbd), and/or polyphenols, and methods for the prevention and/or treatment of skin, muscle, nerve and inflammatory disorders, and biological factors and functions in mammals
Jeong et al. Melittin has a chondroprotective effect by inhibiting MMP-1 and MMP-8 expressions via blocking NF-κB and AP-1 signaling pathway in chondrocytes
Lee et al. Vitiligo road map
Song et al. Omega-7 inhibits inflammation and promotes collagen synthesis through SIRT1 activation
Liu et al. Contribution of DNA methyltransferases to spared nerve injury induced depression partially through epigenetically repressing Bdnf in hippocampus: Reversal by ketamine
CN113677358A (zh) 在人新生儿角质形成细胞祖细胞中具有免疫抑制活性的酪氨酸抑制剂
Park et al. Hemin, heme oxygenase-1 inducer, attenuates immobilization-induced skeletal muscle atrophy in mice
Illesca et al. Dietary soy protein improves adipose tissue dysfunction by modulating parameters related with oxidative stress in dyslipidemic insulin-resistant rats
Jayawardena et al. Ishige okamurae and diphloroethohydoxycarmalol inhibit palmitic acid-impaired skeletal myogenesis and improve muscle regenerative potential
Wen et al. Mini-review: functions and action mechanisms of PQQ in osteoporosis and neuro injury
Galeotti et al. Inhibition of the PKCγ-ε pathway relieves from meningeal nociception in an animal model: an innovative perspective for migraine therapy?
RU2809007C2 (ru) Тирозиновые ингибиторы, обладающие иммуносупрессивной активностью в клетках-предшественниках неонатальных кератиноцитов человека
Kim et al. A combinational effect of acetaminophen and oriental herbs on the regulation of inflammatory mediators in microglia cell line, BV2
RU2781194C2 (ru) Модуляция гена сиртуина в предшественниках эпидермальных кератиноцитов с помощью декапептида-12
Ahn et al. Promotion effects of steam-dried Betula platyphylla extract on hair regrowth
Firmansyah et al. Microphthalmia Transcription Factor almost Thirty Years after: Its Role in Melanogenesis and its Plant-Derived Inhibitors
Das et al. Rejuvenation of metabolic cascades for controlling aging through bioactive compounds: a review

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination