JP2013535951A - Mrsaの検出のための方法、キット及び組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2010年3月19日に出願された「MRSAの検出において有用である方法、キット及び組成物(METHODS, KITS, AND COMPOSITIONS USEFUL IN THE DETECTION OF MRSA)」と題された米国仮特許出願第61/315,664号;及び2011年1月13日に出願された「MRSAの検出のための方法、キット及び組成物(METHODS, KITS AND COMPOSITIONS FOR DETECTION OF MRSA)」と題された米国仮特許出願第61/432,511号に基づく優先権を主張し、それらの両方は、参照することによりそれらの全体が本明細書中に援用される。
本発明は、概して、所定の試料中に、メチシリン耐性Staphylococcus aureus(MRSA)が存在するかどうかを決定するための組成物及び方法を提供する。より詳細には、本発明は、MRSAの存在を検出するための、同定された遺伝子配列、それに応じて設計されたプライマー及びプローブに基づくアッセイを提供する。本発明はさらに、試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するために有用であるアッセイを含む。
メチシリン耐性Staphylococcus aureus(MRSA)は、米国及び他国において、最も危険な感染因子の一つとなっており、HIV−AIDSよりも高い死亡率を有する。MRSAは、Staphylococcus aureus(S. aureus)細菌のある菌株であり、これは健康な人々の皮膚上及び鼻腔中に生息し得る一般的な種類の細菌である。MRSAは、ブドウ球菌及び他の細菌感染を処置するために一般的に使用される抗生物質のいくつかには反応しない。
したがって、簡潔には、本発明の一態様は、試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するためのマルチプレックスアッセイを提供する。マルチプレックスアッセイはnuc−SAアッセイ、femA−SAアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれる一つより多いアッセイを含む。
本発明は、その適用によって、可変の単独のアッセイの組合せを含むマルチプレックスアッセイを使用して、又は単独のアッセイを使用して、混合検体中の、CNS菌種のMRSE及びMSSEを含む、MSSA、MRSA、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するために設計されたアッセイ、方法及びキットを開示する。
(a)MRSA及び他の菌種又は菌株を同定及び鑑別する分子
メチシリン感受性S. aureus(MSSA)及びメチシリン耐性S. aureus(MRSA)に加えて、ヒトにおいて一般的に見られ、Staphylococcus aureusの近縁種である、CNS又はCoNS(コアグラーゼ陰性ブドウ球菌(coagulase−negative staphylococci))がある。多くのCNSはまた、メチシリンに耐性であり(MRCNS)、MRSAと類似したSCCmec遺伝子カセット機構を保有する。CNS菌種における例証的な例としては:S. capitis、S. epidermidis、S. haemolyticus、S. hominis、S. lugdunensis、S. saprophyticus、S. simulans及びS. warneriが挙げられる。具体的には、メチシリン耐性S. epidermidis(MRSE)が、MRCNS保菌者において最も一般的に見られるCNS菌種である。免疫無防備状態の患者において、MRCNS、特にMRSEは、感染症をもたらし得、創傷感染、血液感染、医療機器感染及び呼吸器感染の共通の原因である。
菌種又は菌株特異的配列は、菌種又は菌株に特有の配列であり、つまり、他の以前に特徴付けられている菌種又は菌株によって共有されないものである。S. aureus菌種、S. epidermidis、CNS又はこれらの菌株に特異的な配列に相補的な配列を含有するプローブ又はプライマーは典型的には、他の菌種又は菌株のゲノムの対応する部分には、ストリンジェントな条件下ではハイブリダイズしないだろう。特定の菌種又は菌株配列が同定された場合、プローブ又はプライマーは、配列の任意の部分に基づいて設計され得る。プローブ又はプライマーはまた、配列の全体であってもよい。特定の菌種若しくは菌株配列に従って設計されたプライマー若しくはプローブはまた、縮重型で表わされ得、又は菌株若しくは菌種の同定配列の同定を容易にする化学修飾核酸、又は任意の他の成分を含み得る。菌種又は菌株に特異的であると同定された配列の概念はさらに、その特異的な配列に対して100%未満同一であるにもかかわらず、菌種又は菌株を特異的に検出する能力のある核酸配列を包含する。核酸配列において、T又はUは、核酸がDNA又はRNAであるかに依存して、互換的に使用され得ることに留意すべきである。同定配列と60%、70%、80%、90%、95%、99%又は100%未満の同一性を有する配列もやはり、その相補的配列と結合でき、かつ/又は所望の標的配列の核酸増幅を容易にすることができるのであれば、発明に包含され得る。特定の菌種若しくは菌株配列に従って設計されたプライマー若しくはプローブはまた、縮重型で表わされ得、又は菌株若しくは菌種の同定配列の同定を容易にする化学修飾核酸、又は任意の他の成分を含み得る。
S. aureus菌種、S. epidermidis、CNS又はこれらの菌株に特異的な配列の対立遺伝子を同定することは、この発明の別の態様である。対立遺伝子は、その位置、配列、又はそれを特定の遺伝子のある形態であると同定し得るその任意の他の特徴を理由に、それが特定の核酸のある形態であると認識され得る、その特定の核酸の任意の形態を含む。対立遺伝子は、点突然変異、サイレント突然変異、欠失、フレームシフト突然変異、一塩基遺伝子多形(SNP)、反転、転座、異質染色体挿入(heterochromatic insertion)、及び参照配列と比較してメチル化状態が異なる配列を、単独で又は組合せでのいずれかに関わらず含む遺伝子の形態を含むが、それらに限定されない。ある遺伝子の対立遺伝子は、機能性タンパク質を生成しても生成しなくてもよく;変化した機能、局在性、安定性、二量体形成、又はタンパク質−タンパク質相互作用を持つタンパク質を生成し得;過剰発現を有しているか、過小発現を有しているか又は発現を有していなくてもよく;変化した時間的又は空間的発現特異性を有し得る。対立遺伝子の存在又は非存在は、PCRに合うように設計されたプライマー及びプローブの使用、シークエンシング、ハイブリダイゼーション解析を含む、当技術分野において公知の任意のプロセスの使用を通して検出され得る。対立遺伝子はまた、突然変異又は突然変異体と呼ばれ得る。対立遺伝子は、対立遺伝子の野生型形態と呼ばれ得る別の対立遺伝子と比較され得る。場合によっては、野生型対立遺伝子は、突然変異体よりも一般的である。
MRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS、MSCNS又は他の菌種若しくは菌株特異的核酸配列及びそれらの対立遺伝子の転写又は翻訳プロセスに由来する、小型RNA、ぺプチド及びタンパク質を含むがそれらに限定されない分子が、特定の菌種又は菌株の存在を示すバイオマーカーとなり得る。MRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS、又はMSCNSから防御するために、免疫系によって生成される、例えば、 等のいくつかの分子もまた、バイオマーカーとなり得る。対立遺伝子を検出する方法は一般的に、RNA又はタンパク質分子等のゲノムDNA鋳型から作成される物質の発現を評価することを含む。そのような発現は、当技術分野において現在使用されている、及びまだ開発されていない、数々の方法の任意のものによって評価され得る。
試料にはしばしば、細菌菌種の混合物が付いてくる。MSSA及びMRSAに加えて、CNS、又はCoNSがある。CNS菌種の中では、MRSEが最も一般的にMRCNS保菌者において見られる菌株である。本発明は、その適用によって可変の単独のアッセイの組合せを含むマルチプレックスアッセイを使用して、試料中の、CNS菌種のMRSE及びMSSEを含む、MSSA、MRSA、MRCNS及びMSCNSを鑑別するために設計されたプライマーセット及び/又はプローブを利用するマルチプレックスアッセイ、方法及びキットを開示する。
表Aに示されるように、本発明の一つの好ましい実施態様において、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1は、S. aureus、CNS及び他の菌種が鑑別され得るように、nuc遺伝子を保有するS. aureus特異的核酸配列に選択的である。
菌株特異的核酸、菌株特異的核酸の対立遺伝子及び菌株特異的核酸並びにそれらの対立遺伝子の転写及び翻訳産物由来のバイオマーカーを同定するのに使用される方法としては、PCR、RT−PCR、ハイブリダイゼーション法、シークエンシング及び上記方法の任意の組合せが挙げられる。
核酸は、試料中に含有される鋳型核酸から選択的かつ特異的に増幅され得る。いくつかの核酸増幅方法において、コピーは、指数関数的に作出される。当技術分野において公知の非限定的な核酸増幅方法としては:ポリメラーゼ連鎖反応法(PCR)、リガーゼ連鎖反応(LCR)、自家持続配列複製法(3SR)、核酸配列ベース増幅(NASBA)、鎖置換増幅(SDA)、Qβレプリカーゼでの増幅、φ29等の酵素での全ゲノム増幅、全ゲノムPCR、クレノー若しくは任意の他のRNAポリメラーゼでのインビトロ転写、又は所望される配列のコピーが作出される任意の他の方法、が挙げられる。
PCRに加えて、遺伝子型判定解析はまた、興味の対象である核酸配列にハイブリダイズする能力のあるプローブを使用して実施され得る。プローブは、核酸、オリゴヌクレオチド(DNA又はRNA)、タンパク質、タンパク質複合体、接合体、天然のリガンド、小分子、ナノ粒子、又は上記の一つ以上を含む分子の任意の組合せ、又は任意の対立遺伝子に特異的に結合する能力のある任意の他の分子実体(そのような分子実体が現在実在するか、まだ開示されていないかにかかわらず)、を含み得る。発明の一態様において、プローブはオリゴヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドの記載は、第I(ii)節中にある。
遺伝子又は対立遺伝子の存在を検出する方法はさらに、サンガー、次世代シークエンシング、ピロシークエンシング、SOLIDシークエンシング、大量並列シークエンシング(massively parallel sequencing)、プール化DNAシークエンシング及びバーコードDNAシークエンシング、又は現在公知若しくはまだ開示されていない任意の他のシークエンシング方法を含む、DNAシークエンシングの任意の形態;又は試料中の特定の核酸配列の検出をすることができる、若しくはある核酸と一つ以上のヌクレオチドにおいて異なる別の核酸からの最初の核酸の鑑別を可能にする任意の他の方法、又はこれらの任意の組合せ、を含むが、それらに限定されない。
例証的な実施態様の群が、表Aに示される。本発明は、一実施態様において、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1並びに/又は配列番号3によって表わされるプローブ1を適用するアッセイ1−nuc−Saアッセイが、S. aureus、CNS及び他の菌種を同定及び鑑別するために実行され得ることを規定する。
発明のまた別の態様は、試料中のMRSA、MSSA、MRCNS又はMSCNSを同定及び鑑別するためのキットを包含する。好ましい実施態様において、キットは、nuc−Saアッセイ、femA−Saアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれるアッセイ用の、一つ以上のプライマーセット及びプローブを含む。前記の節及び表Aにおいて詳しく記載されているとおり:配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1、並びに/又は配列番号3によって表わされるプローブ1を適用することによって、S. aureus及び他の菌種を同定及び鑑別するnuc−Saアッセイ;配列番号4及び5によって表わされるプライマーセット2、並びに/又は配列番号6によって表わされるプローブ2を適用することによって、S. aureus及び他の菌種を同定及び鑑別するfemA−Saアッセイ;配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3、並びに/又は配列番号9によって表わされるプローブ3を適用することによって、他のStaphylococcus属菌種からS.epidermisを同定及び鑑別するfemA−Seアッセイ;配列番号10及び11によって表わされるプライマーセット4、並びに/又は配列番号12によって表わされるプローブ4を適用することによって、S. aureusを同定するtuf−Saアッセイ;配列番号13及び14によって表わされるプライマーセット5、並びに/又は配列番号15によって表わされるプローブ5を適用することによって、CNSを同定するtuf−CNSアッセイ;並びに配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6、並びに/又は配列番号18によって表わされるプローブ6を適用することによって、メチシリン及びペニシリン耐性表現型を同定及び鑑別するmecAアッセイ。
以下の実施例は、発明の一定の態様を説明する。
本発明は、適用によって、4つまでのアッセイの特異的な組合せ使用して、混合検体中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを鑑別するように設計されたリアルタイムPCRアッセイを開示する。細菌の単離物のパネルを使用した、個々のアッセイの成績を、表2〜6に示す。全てのアッセイは、高感度かつ高特異的であることが示されている。MSSA及びMRSAを同定するためのアッセイがスクリーニングアッセイに含まれている。MSSA感染は一般的に、処置が簡単である一方、それらは院内感染における重要な要因のままである。また、MRSA又はMSSAのいずれかの定着は、感染症のリスクを増大させることが示されている。MSSA、MRSA及びCoNSアッセイが診断アッセイに含まれており、それは、それら全てが外科感染症、菌血症及び埋込装置感染症における主因であり、またMRCNS及びMSCNSの両方が深刻化する問題となっているためである。
類似した効率を持つ複数のアッセイを用いると、相対Ct値の使用を通してmecA遺伝子はSA又はCoNSのいずれかと関連付けられ得る。図1〜6中に図示される増幅プロットは、結果をもたらすためにアッセイの増幅がどのように結び付けられるかを示す。これらのプロット例を作成するために使用した検体は;咽頭スワブ、鼻腔スワブ又は痰;の50の呼吸器検体の残物のコホートであった。結果は、培養結果とPCR結果との間で、強い相関を示す(表8を参照のこと)。
この実施例は、本明細書中に開示されるアッセイの相対Cq値を使用して、臨床単離物又は検体から抽出されたメチシリン耐性及び/又は感受性Staphylococcus aureus並びにコアグラーゼ陰性ブドウ球菌(CNS)のゲノムDNAの存在又は非存在を決定するために、Lightcycler 480機器上でマルチプレックスリアルタイムPCRを実施するために必要な手順、設備及び試薬を説明する。
i.色補正:機器上で初めてアッセイを実行する場合、色補正ファイルを作成する必要がある。tuf−Sa、tuf−CNS及びmecA並びに各シングルプレックスアッセイの陽性コントロールDNA、の少なくとも5つの複写物並びに鋳型のないコントロールの合計5つの複写物、の反応が実行されなくてはならない。このマルチプレックスアッセイ用の色補正ファイルは、一度だけ作成すればよい。詳細については、LC480ユーザーマニュアルを参照のこと。以下の通り、色補正反応を準備する。
i.色補正:「新たな解析を作成する(Create New Analysis)」メニューから、「色補正(Color Compensation)」を選び、色補正反応のサブセットを選択し、次いで「計算(Calculate)」を選択する;次いで、このファイルを、このマルチプレックスアッセイの、後の解析に適用するために「保存(Save)」する。
MRSAの存在を検出するための、本明細書中に開示されるアッセイと類似のアッセイを開発するために使用され得る追加の配列はさらに、以下を含み:配列番号19−S.aureus nuc、配列番号20−S.aureus femA、配列番号21−S.epidermidis femA、配列番号22−S.aureus tuf、配列番号23 S.capitis tuf、配列番号24−S.epidermidis tuf、配列番号25−S.haemolyticus tuf、配列番号26 S.hominis tuf、配列番号27−S.lugdunensis tuf、配列番号28−S.simulans tuf、配列番号29−S.warneri tuf及び配列番号30−S.aureus mecA:これらは配列表に詳述されている。
Claims (23)
- nuc−Saアッセイ、femA−Saアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれる1つより多いアッセイを含み、試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別することができるマルチプレックスアッセイ。
- 前記アッセイが、PCR、RT−PCR、シークエンシング、ハイブリダイゼーション法及びそれらの任意の組合せから選ばれる解析の1種類であり、プライマーセットもしくはプローブまたはこれらの両方が、nuc−S.aureus遺伝子、femA−S.aureus遺伝子、femA−S.epidermis遺伝子、tuf−S.aureus遺伝子、tuf−CNS遺伝子及びmecA遺伝子から選ばれる少なくとも一つの標的配列の存在又は非存在を検出するために適用され;それぞれの標的遺伝子を検出する前記アッセイは、単独で、又は、1つの、組み合わされかつ混合された反応系において、実行され得、前記反応系は、PCR、RT−PCR、シークエンシング、ハイブリダイゼーション法又はそれらの任意の組合せ用である、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他の菌種からS. aureusを鑑別する前記nuc−Saアッセイが、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他の菌種からS. aureusを鑑別する前記nuc−Saアッセイが、配列番号3によって表わされるプローブ1をさらに含む、請求項3に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他の菌種からS. aureusを鑑別する前記femA−Saアッセイが、配列番号4及び5によって表わされるプライマーセット2を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他の菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Saアッセイが、配列番号6によって表わされるプローブ2をさらに含む、請求項5に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他のStaphylococcus属菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Seアッセイが、配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- 他のStaphylococcus属菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Seアッセイが、配列番号9によって表わされるプローブ3をさらに含む、請求項7に記載のマルチプレックスアッセイ。
- S. aureusを検出する前記tuf−Saアッセイが、配列番号10及び11によって表わされるプライマーセット4を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- S. aureusを検出する前記tuf−Saアッセイが、配列番号12によって表わされるプローブ4をさらに含む、請求項9に記載のマルチプレックスアッセイ。
- CNSを検出する前記tuf−CNSアッセイが、配列番号13及び14によって表わされるプライマーセット5を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- CNSを検出する前記tuf−CNSアッセイが、配列番号15によって表わされるプローブ5をさらに含む、請求項11に記載のマルチプレックスアッセイ。
- メチシリン耐性表現型及びペニシリン耐性表現型を鑑別する前記mecAアッセイが、配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6を含む、請求項1に記載のマルチプレックスアッセイ。
- メチシリン耐性表現型及びペニシリン耐性表現型を鑑別する前記mecAアッセイが、配列番号18によって表わされるプローブ6をさらに含む、請求項13に記載のマルチプレックスアッセイ。
- femA−Seアッセイ;mecAアッセイ;並びにnuc−Saアッセイ及びfemA−Saアッセイから選ばれる少なくとも一つのアッセイ;を含むマルチプレックスアッセイであって、ここで前記マルチプレックスアッセイが、試料中のMRSA、MSSA、MRSE及びMSSEを同定及び鑑別するためであり;
a.ここで、他のStaphylococcus属菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Seアッセイが、配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3、並びに配列番号9によって表わされるプローブ3、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
b.ここで、メチシリン耐性表現型及びペニシリン耐性表現型を鑑別する前記mecAアッセイが、配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6、並びに配列番号18によって表わされるプローブ6、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
c.ここで、他の菌種からS. aureusを鑑別する前記nuc−Saアッセイが、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1、並びに配列番号3によって表わされるプローブ1、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
d.ここで、他の菌種からS. aureusを鑑別する前記femA−Saアッセイが、配列番号4及び5によって表わされるプライマーセット2、並びに配列番号6によって表わされるプローブ2、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行される;
マルチプレックスアッセイ。 - mecAアッセイ並びにfemA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ及びtuf−CNSアッセイから選ばれる二つのアッセイを含むマルチプレックスアッセイであって;ここで前記マルチプレックスアッセイが、試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するためであり;
a.ここで、メチシリン耐性表現型及びペニシリン耐性表現型を鑑別する前記mecAアッセイが、配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6、並びに配列番号18によって表わされるプローブ6、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
b.ここで、他のStaphylococcus属菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Seアッセイが、配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3、並びに配列番号9によって表わされるプローブ3、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
c.ここで、少なくとも、S. aureusを検出する前記tuf−Saアッセイが、配列番号10及び11によって表わされるプライマーセット4、並びに配列番号10によって表わされるプローブ4、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
d.ここで、CNSを検出する前記tuf−CNSアッセイが、配列番号13及び14によって表わされるプライマーセット5、並びに配列番号15によって表わされるプローブ5、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行される;
マルチプレックスアッセイ。 - femA−Saアッセイ、nuc−Saアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイを含むマルチプレックスアッセイであって、ここで前記マルチプレックスアッセイが、試料中のMRSA、MSSA、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するためである、マルチプレックスアッセイ。
- 試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するための方法であって、
a.試料を受け取る工程;
b.nuc−Saアッセイ、femA−Saアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれる少なくとも一つのアッセイを実行することによって、試料をスクリーニングする工程であって、ここでこれらのアッセイがそれぞれ、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1若しくは配列番号3によって表わされるプローブ1によって検出可能なnuc−S.aureus遺伝子の存在又は非存在;配列番号4及び5によって表わされるプライマーセット2若しくは配列番号6によって表わされるプローブ2によって検出可能なfemA−S.aureus遺伝子の存在又は非存在;配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3若しくは配列番号9によって表わされるプローブ3によって検出可能なfemA−S.epidermis遺伝子の存在又は非存在;配列番号10及び11によって表わされるプライマーセット4若しくは配列番号12によって表わされるプローブ4によって検出可能なtuf−S.aureus遺伝子の存在又は非存在;並びに配列番号13及び14によって表わされるプライマーセット5若しくは配列番号15によって表わされるプローブ5によって検出可能なtuf−CNS遺伝子の存在又は非存在;並びに配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6若しくは配列番号18によって表わされるプローブ6によって検出可能なmecA遺伝子の存在又は非存在、を解析する、工程;
c.nuc−Saアッセイ、femA−Saアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれる少なくとも一つのアッセイの解析に基づいて、試料中に含有される細菌を、MRSA、MSSA、MRCNS又はMSCNSと同定する工程;
を含む、方法。 - nuc−Saアッセイ、femA−Saアッセイ、femA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイから選ばれるアッセイ用の一つ以上のプライマーセット及びプローブを含むキットであって;ここで前記キットが、マルチプレックスアッセイを通して、試料中のMRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MRCNS及びMSCNSを同定及び鑑別するためであり;
a.ここで、他の菌種からS. aureusを鑑別する前記nuc−Saアッセイが、配列番号1及び2によって表わされるプライマーセット1、並びに配列番号3によって表わされるプローブ1、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
b.ここで、他の菌種からS. aureusを鑑別する前記femA−Saアッセイが、配列番号4及び5によって表わされるプライマーセット2、並びに配列番号6によって表わされるプローブ2、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
c.ここで、他のStaphylococcus属菌種からS. epidermisを鑑別する前記femA−Seアッセイが、配列番号7及び8によって表わされるプライマーセット3、並びに配列番号9によって表わされるプローブ3、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
d.ここで、S. aureusを検出する前記tuf−Saアッセイが、配列番号10及び11によって表わされるプライマーセット4、並びに配列番号12によって表わされるプローブ4、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
e.ここで、CNSを検出する前記tuf−CNSアッセイが、配列番号13及び14によって表わされるプライマーセット5、並びに配列番号15によって表わされるプローブ5、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行され;
f.ここで、メチシリン耐性表現型及びペニシリン耐性表現型を鑑別する前記mecAアッセイが、配列番号16及び17によって表わされるプライマーセット6、並びに配列番号18によって表わされるプローブ6、から選ばれる少なくとも一つのアプローチを通して実行される;
キット。 - 前記マルチプレックスアッセイが、PCR、RT−PCR、シークエンシング、ハイブリダイゼーション法及びそれらの任意の組合せから選ばれる解析の種類であり、ここで、プライマーセット又はプローブ又は両方が適用されてnuc−S.aureus遺伝子、femA−S.aureus遺伝子、femA−S.epidermis、tuf−S.aureus遺伝子、tuf−CNS遺伝子及びmecA遺伝子から選ばれる少なくとも一つの標的配列の存在又は非存在が検出され、ここでそれぞれの標的遺伝子を検出する前記アッセイが、単独で、複数の別々の反応系において、又はPCR、RT−PCR、シークエンシング、ハイブリダイゼーション法若しくはそれらの任意の組合せ用の、一つの、組合わされ、かつ混合された反応系において実行され得る、請求項19に記載のキット。
- femA−Seアッセイ用;mecAアッセイ用;並びにnuc−Saアッセイ及びfemA−Saアッセイから選ばれる少なくとも一つの他のアッセイ用のプライマーセット及びプローブを含む、請求項19に記載のキット。
- mecAアッセイ用並びにfemA−Seアッセイ、tuf−Saアッセイ及びtuf−CNSアッセイから選ばれる二つの他のアッセイ用のプライマーセット及びプローブを含む、請求項19に記載のキット。
- femA−Saアッセイ、nuc−Saアッセイ、tuf−Saアッセイ、tuf−CNSアッセイ及びmecAアッセイ用のプライマーセット及びプローブを含む、請求項19に記載のキット。
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