JP2013529642A - 体臭を軽減するための方法及び組成物 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
アポクリン−ほとんどは脇の下(腋窩)及び肛門・生殖器部分に限定される。それらは典型的には孔ではなくむしろ毛包中に末端がある。
約3mmを超える主要な悪臭を引き起こす細菌に対する阻害ゾーン(ZOI)を生成する桿菌は、本発明による有効な生物防除剤であり得、約6mmを超えるZOIを生成するものが好ましい。したがって、本発明は、コリネバクテリウム、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)、及びスタフィロコッカス株の阻害について桿菌を試験することを含む。さらに、揮発性物質の産生、前駆体のそのような揮発性物質への変換の予防若しくは低減、又は揮発性物質の消費に対するこれらの株の効果は、本発明の組成物及び方法において有用性を示す可能性がある。
**PTAは、American Type Culture Collectionの寄託を意味する。
序論
本発明は、デオドラント又は他のパーソナルケア組成物において、ヒト腋窩でコリネバクテリウムの成長を有効に阻害する生成物を製造するための研究から生まれた。Taylor, D., et al., “Characterization of the microflora of the human axilla,” International Journal of Cosmetic Science, 25:137-145(2003)において、集団数が悪臭強度と相関する場合、好気性コリネ型菌は<0.0001のp値を有することが示された。別の論文、James, A.G., et al., “Fatty acid metabolism by cutaneous bacteria and its role in axillary malodor,” World Journal of Microbiology and Biotechnology, 20:787-793(2004)は、悪臭を生じる好気性コリネ型菌によって用いられる代謝経路を提案した。
培地及び株
ヒト腋窩悪臭の原因に対して証明された関連性に基づいて、ATCCに連絡し、3つの株を注文した:コリネバクテリウム・ムシファシエンス(ATCC700355)及びコリネバクテリウム・ジフテリア(ATCC11913)。シー・ムシファシエンス及びシー・ジフテリアは、1リットルあたり7mLのTryptic Soy Broth(TSB)と1mLのTween80中で問題なく培養された。株を一晩35℃にてインキュベートさせ、次いで牛肉エキスベースの寒天及びTryptic Soy Agar(TSA)と0.1%のTween80の両方の上に打ち出された。成分を以下に記載する:
この実施例の全体的な実験計画は次のとおりである。バチルス及びコリネバクテリウム株の一晩培養物を35℃で一晩、7mLの培地中で成長させ、この場合、バチルス株をPCB中で培養し、そしてコリネバクテリウム株をTSBと0.1%のTween80中で培養し、参照プレートからの1つのコロニーが培養試験管のシード接種物であった。
コロニーの端からゾーンまでの距離を記録し;
ゾーンの直径を記録し;そして
コロニーの直径を記録した。
以下に示す表は、前述の方法を実施せずに獲得したデータのみであった。4mLの軟寒天培地オーバーレイの代わりに、1mLだけを使用し、スプレッダーを使用してオーバーレイをプレートの周りに広げた。平板培地が阻害に影響を及ぼすかどうかを見るために、実験はさらに、牛肉エキスベースのプレート及びTSBと0.1%Tween80プレートの両方を使用した。
今回、4mLの軟寒天培地をプレート上に注ぎ、次いで、スプレッダーによって広げる以外は、牛肉エキスベースのプレートのみを使用して実験を繰り返した。結果を以下に示し、実験を2連で実施した。プレートID列で、接頭辞mucは菌叢がシー・ムシファシエンスであることを示し、接頭辞dipはシー・ジフテリアの菌叢を示す。
この実験を、方法で記載したようにして実施し、良好な結果を得た。これらのデータは、シー・ジフテリアを使用する実験を表す。
臭いを引き起こす細菌による悪臭分子の生成
先行研究は、短鎖〜中鎖(C2〜C11)揮発性脂肪酸(VFA)が腋窩悪臭及び足悪臭の原因分子に含まれることを示唆した。この実験では、本発明者らは、提案された臭いを引き起こす細菌スタフィロコッカス・エピデルミディス(ATCC14990)によって産生される臭い代謝物を調査した。
50/30μmのジビニルベンゼン/Carboxen/ポリジメチルシロキサン(DVB/CAR/PDMS)固相微量抽出(SPME)繊維(Supelco)を、Combi Pal AOC 5000オートサンプラー(CTC Analytics)を用いてバイアルのヘッドスペース(50℃で5分間あらかじめ平衡化)に導入する。抽出を10分間80℃で実施する。抽出後、繊維を、Siltekスプリット/スプリットレスインレットライナー(Restek)及び電子衝撃四重極質量分析計(MS)システムに連結されたNukol融合シリカキャピラリーカラム(30m×0.25mm×0.25μmフィルム厚;Sigma-Aldrich)を備えたShimadzu 2010-Sガスクロマトグラフ(GC)に直ちに導入する。注入ポート温度を200℃に設定する。カラムは以下のプログラムで用いられる:80℃で1分間、15℃/分で200℃まで、200℃で6分間保持。合計運転時間は15分である。第1試料の前に2回のブランク脱離を実施して、繊維から検体を除去する。100ml/分のスプリット及び0.5ml/分のパージでGCを操作する。グレード5ヘリウムをキャリアガス(1ml/分カラムフロー)として使用する。MSイオンソース温度を180℃に設定する。界面を200℃に設定する。スキャンモードを使用する(m/z40−400)。ピーク面積をGC/MS解析ソフトウェア(Shimadzu)で計算する。化合物は、それらのスペクトルを標準的ライブラリと比較することによって、同定する(NIST Mass Spectral Search Program)。
生分解研究を実施して、NZB株NRRL B−50014、NRRL B−50018、NRRL B−50255、NRRL B−50136、NRRL B−50015、NRRL−B59636、NRRL B−1001、PTA−7790、NRRL B−14308、PTA−3142、PTA−7549、PTA−7543、NRRL B−59658及びNRRL−B59642が、脇の下の悪臭の要因であることが知られている臭いのある化合物上で成長することができ、その化合物を減少させることができるかどうかを判定した。最少培地(MM)を以下のように作製した:Na2HPO4(2.84g/L)、KH2PO4(2.72g/L)、(NH4)2SO4(1g/L)、及びHunterの濃塩基(10ml/L)。Hunterの濃塩基を次のようにして作製した:EDTA(2.5g/L)、ZnSO4・H2O(1.095g/L)、FeSO4・7H2O(698mg/L)、MnSO4・H2O(154mg/L)、CuSO4・5H2O(39.2mg/L)、Co(NO3)2・6H2O(25mg/L)、Na2B4O7・10H2O(2.4mg/L)、ニトリロトリ酢酸(20g/L)、KOH(14g/L)、MgSO4(28g/L)、CaCl2・2H2O(6.67g/L)、及び(NH4)6Mo7O24・2H2O(18.5mg/L)。10mLの10%グリセロール、60mLの10mM VFA混合物(Sigma 46975-U)、及び930mLのMM培地を混合することによって、揮発性脂肪酸(VFA)培地(1リットルあたり)を調製した。バチルス株を18〜24時間、10mMグルコースを含むMM中で成長させた。100μLの各細菌培養物を5mLのVFA培地に移した。細菌培養物を添加していないVFA培地の管を対照として使用した。全ての培養物を振とうしながら35℃でインキュベートした。
各培養物中のVFAの量を、0時、24時、48時、及び72時のインキュベーション時間で分析した。各時点で、1mLの培養物をGCヘッドスペースバイアルに移し、20μLの3N HClを各バイアルに添加した。試料を次いで短時間混合し、前述の方法を用いてGC−MSで分析した。0.05mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.667mM、0.8mM、及び1.0mMの標準VFA混合物を注入することによって、標準曲線を作製した。ピーク面積を標準曲線と比較することによって、各試料中のVFAの量を計算した。
**有意な減少なし。
デオドラントを得る。
合計6つのデオドラント(制汗剤なし)をこの安定性研究で使用する。6つのデオドラントは小売店から購入し、これらには:Tom’s Natural Care of Maine、Old Spice Pure Sport、Axe、Speed Stick、及びRight Guard Total Defense Power Deoが含まれる。6番目は、以下に示すようにして社内で製剤する:
NRRL B−50016及びNRRL B−50304をSchaeffer培地の1リットルフラスコ中で1週間30℃にてロータリーシェーカー上で培養する(Schaeffer’s Sporulation Mediumについては、Schaeffer, P. et al., “Catabolic Repression of Bacterial Sporulation,” Microbiology, 54:704-711(1965)を参照のこと)。培養物を1リットルの遠心瓶に移し、試料を20分間10,000xgで遠心分離する。ペレットを乱さないように注意して、上清を捨て、ペレットを100mLの脱イオン水中に再懸濁させる。
市販のデオドラントのそれぞれをそのパッケージから取り出し、75gの市販のデオドラントをビーカー中に入れる。次に、デオドラント製剤Aを含む全てのデオドラントをホットプレート上に置き、それらが80℃に達するまで加熱し、その結果、デオドラントを融解させる。一旦融解したら、デオドラントを約60℃まで冷却させ;胞子をゆっくりと溶液に添加し、均一になるまで混合する。
試料をそれらの各状態から取り出し、1.0gの試料を、9mLの浸透圧中性リン酸塩緩衝液を含有する15mLの円錐管に移す。管を次いで80℃の水浴中に10分間入れ、Standard Method Plate(Smith River Biologicals, Ferrum, VA)上に、段階希釈法を用いて蒔く。プレートを次いで35℃で一晩インキュベートし、翌朝、計数を実施する。プレート計数を12週間の間、1週間につき1回実施する。
Claims (20)
- 体臭を引き起こすことができる微生物によって引き起こされる体臭の産生を阻害する方法であって、当該微生物と少なくとも1つの細菌種又は当該細菌種由来の物質とを接触させることにより体臭の産生を阻害する方法。
- 前記少なくとも1つの細菌種がバチルス属の種である、請求項1に記載の方法。
- 前記バチルス属の種がバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・アトロファエウス(Bacillus atrophaeus)及びバチルス・モジャベンシス(Bacillus mojavensis)から成る群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記バチルス属の種がバチルス・プミルスである、請求項2に記載の方法。
- 前記の悪臭を引き起こす微生物が、コリネバクテリウム・ムシファシエンス(Corynebacterium mucifaciens);コリネバクテリウム・ジフテリア(Corynebacterium diphtheriae);コリネバクテリウム・ゼローシス(Corynebacterium xerosis);スタフィロコッカス・エピデルミス(Staphylococcus epidermidis)及びブレビバクテリウム・エピデルミディス(Brevibacterium epidermidis)から成る群から選択される少なくとも1つの細菌種である、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのバチルス株がバチルス・プミルス株NRRL B-50016;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50017;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50018;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7541;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7792;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7542;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7543;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7544;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7545;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7546;バチルス・サブチリス株PTA-7547;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7549;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7793;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7790;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7791;バチルス・サブチリス株NRRL B-50304;バチルス・サブチリス株NRRL B-50399;バチルス・プミルス株NRRL B-50398;バチルス・プミルス株NRRL B-59643;バチルス・プミルス株NRRL B-59644;バチルス・プミルス株NRRL B-50396;バチルス・プミルス株NRRL B-50397;バチルス・プミルス株NRRL B-50014;バチルス・プミルス株NRRL B-50255;バチルス・リケニフォルミスNRRL B-1001;バチルス・メガテリウム株NRRL B-14308;バチルス・メガテリウム株PTA-3142;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59658;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59636;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59656;バチルス・プミルス株NRRL B-50514;バチルス・プミルス株NRRL B-50515;バチルス・プミルス株NRRL B-59651;バチルス・プミルス株NRRL B-59652;バチルス・プミルス株NRRL B-59655;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59657;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59647;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59649;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59650;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59653;バチルス・サブチリス株NRRL B-59651;バチルス・サブチリス株NRRL B-59648;バチルス・サブチリス株NRRL B-59654;及びバチルス・サブチリス株NRRL B-59642から成る群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 1又は複数の臭気化合物を産生することができる微生物によって引き起こされる体臭の産生を阻害又は予防する方法であって、当該1又は複数の臭気化合物を、当該臭気化合物を食料源として用いることができる少なくとも1つの細菌に適用することを含んで成る、方法。
- 少なくとも1つの細菌種がバチルス属の種である、請求項7に記載の方法。
- 前記バチルス属の種がバチルス・サブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンス、バチルス・プミルス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・メガテリウム、バチルス・アトロファエウス及びバチルス・モジャベンシスから成る群から選択される、請求項8に記載の方法。
- 前記バチルス属の種がバチルス・プミルスである、請求項8に記載の方法。
- 前記の悪臭を引き起こす微生物が、コリネバクテリウム・ムシファシエンス;コリネバクテリウム・ジフテリア;コリネバクテリウム・ゼローシス;スタフィロコッカス・エピデルミス及びブレビバクテリウム・エピデルミディスから成る群から選択される少なくとも1つの細菌種である、請求項7に記載の方法。
- 少なくとも1つのバチルス属の種がバチルス・プミルス株NRRL B-50016;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50017;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50018;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7541;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7792;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7542;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7543;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7544;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7545;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7546;バチルス・サブチリス株PTA-7547;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7549;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7793;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7790;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7791;バチルス・サブチリス株NRRL B-50304;バチルス・サブチリス株NRRL B-50399;バチルス・プミルス株NRRL B-50398;バチルス・プミルス株NRRL B-59643;バチルス・プミルス株NRRL B-59644;バチルス・プミルス株NRRL B-50396;バチルス・プミルス株NRRL B-50397;バチルス・プミルス株NRRL B-50014;バチルス・プミルス株NRRL B-50255;バチルス・リケニフォルミスNRRL B-1001;バチルス・メガテリウム株NRRL B-14308;バチルス・メガテリウム株PTA-3142;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59658;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59636;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59656;バチルス・プミルス株NRRL B-50514;バチルス・プミルス株NRRL B-50515;バチルス・プミルス株NRRL B-59651;バチルス・プミルス株NRRL B-59652;バチルス・プミルス株NRRL B-59655;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59657;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59647;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59649;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59650;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59653;バチルス・サブチリス株NRRL B-59651;バチルス・サブチリス株NRRL B-59648;バチルス・サブチリス株NRRL B-59654;及びバチルス・サブチリス株NRRL B-59642から成る群から選択される、請求項8に記載の方法。
- 前記臭気化合物が短鎖脂肪酸;例えばC2-C6脂肪酸及び中鎖脂肪酸;例えばC7-C11脂肪酸から成る群から選択される少なくとも1つの化合物である、請求項7に記載の方法。
- 少なくとも1つの細菌種又は当該細菌種由来の物質を含んで成る、ヒトの皮膚に適用するのに適した組成物。
- 前記少なくとも1つの細菌種がバチルス属の種である、請求項14に記載の組成物。
- 前記バチルス属の種がバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・アトロファエウス(Bacillus atrophaeus)及びバチルス・モジャベンシス(Bacillus mojavensis)から成る群から選択される、請求項15に記載の組成物。
- 前記バチルス属の種がバチルス・プミルスである、請求項15に記載の組成物。
- スプレー又は粉末である、請求項14に記載の組成物。
- デオドラントとしての適用に適した固体組成物又はゲル組成物である、請求項14に記載の組成物。
- 少なくとも1つのバチルス属の種がバチルス・プミルス株NRRL B-50016;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50017;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-50018;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7541;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7792;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7542;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7543;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7544;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7545;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7546;バチルス・サブチリス株PTA-7547;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7549;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7793;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7790;バチルス・アミロリクエファシエンス株PTA-7791;バチルス・サブチリス株NRRL B-50304;バチルス・サブチリス株NRRL B-50399;バチルス・プミルス株NRRL B-50398;バチルス・プミルス株NRRL B-59643;バチルス・プミルス株NRRL B-59644;バチルス・プミルス株NRRL B-50396;バチルス・プミルス株NRRL B-50397;バチルス・プミルス株NRRL B-50014;バチルス・プミルス株NRRL B-50255;バチルス・リケニフォルミスNRRL B-1001;バチルス・メガテリウム株NRRL B-14308;バチルス・メガテリウム株PTA-3142;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59658;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59636;バチルス・モジャベンシス株NRRL B-59656;バチルス・プミルス株NRRL B-50514;バチルス・プミルス株NRRL B-50515;バチルス・プミルス株NRRL B-59651;バチルス・プミルス株NRRL B-59652;バチルス・プミルス株NRRL B-59655;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59657;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59647;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59649;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59650;バチルス・アミロリクエファシエンス株NRRL B-59653;バチルス・サブチリス株NRRL B-59651;バチルス・サブチリス株NRRL B-59648;バチルス・サブチリス株NRRL B-59654;及びバチルス・サブチリス株NRRL B-59642から成る群から選択されるバチルス株である、請求項15に記載の組成物。
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