JP2013527444A - 抗体を検出するための方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、抗薬物抗体を検出する方法に関する。本発明はまた、治療抗体処置を受けている患者をモニターする方法に関する。本発明は、さらに上記方法の実施のために適当なキットに関する。

Description

本発明は、抗薬物抗体を検出する方法に関する。本発明はまた、治療抗体処置を受けている患者をモニターする方法に関する。本発明は、さらに上記方法の実施のために適当なキットに関する。
背景
治療抗体は、種々の障害、例えば、免疫学的疾患、炎症性疾患、癌または感染症の処置のためにますます使用されている。これらの治療抗体は、一般的に、様々な種由来のモノクローナル抗体またはキメラもしくはヒト化抗体である（例えば、Leveneら, 2005, J. Royal Soc. Med. 98, pp 145-152、参照）。疾患に依存して、異なる標的抗原に対する治療抗体、例えば、ＴＮＦα、ＶＥＧＦ、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥＧＦＲまたはＩＬ−６受容体が使用されている。
抗−ＴＮＦα治療抗体は、種々の炎症性または自己免疫疾患、例えば、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、クローン病または強直性脊椎炎を有する患者を処置するために広く使用される。このような抗−ＴＮＦα剤の例は、エタネルセプト、ゴリムマブ、セルトリズマブペゴール、アダリムマブまたはインフリキシマブを含む。エタネルセプトは、１型ヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ１）のＦｃフラグメントに連結したヒトｐ７５ＴＮＦα受容体の２つの細胞外ドメインからなる二量体融合タンパク質である。ゴリムマブは、ヒト抗−ＴＮＦαモノクローナル抗体である。セルトリズマブペゴールは、モノクローナル抗体、さらに正確にはヒト化抗−ＴＮＦαモノクローナル抗体のペグ化Ｆａｂ’フラグメントである。アダリムマブは、ヒト化抗−ＴＮＦαモノクローナル抗体であり、インフリキシマブは、キメラ抗−ＴＮＦαモノクローナル抗体である（Perdriger A, Infliximab in the treatment of rheumatoid arthritis. Biologics: Targets & Therapy 2009:3 183-191）。これらの抗体はＴＮＦαに結合し、その炎症性作用をブロックする。
治療抗体のさらなる例は、限定はしないが、ＷＯ２００４／０９６２７４に記載されている抗−ＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体および例えばＷＯ２００５／００５６３５に記載されている抗−ＩＧＦ−ＩＲ抗体を含む。
しかしながら、治療抗体での処置中、治療抗体それ自体に対する免疫応答が生じ、患者は、しばしば、処置の過程にわたって、薬物それ自体に対する抗体（「抗薬物抗体」）を創出させる。結果として、治療抗体の血漿割合は減少し、同時にもしくは次に、疾患症状が再発するか、または増加する。したがって、これらの抗薬物抗体（「ＡＤＡ」）は、治療抗体の効果を減少させるか、または全体として中和する（例えば、Wolbink GJら Development of anti-Inflximab antibodies and relationship to clinical response in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis & Rheumatism, 2006 54(3): 711-715; G.M. Barteldsら High levels of human antibodies to adalimumab in a patient not responding to adalimumab treatment. Anna Rheum Dis 2006;65:1249-1250、参照）。したがって、対象由来のサンプル中のこれらのＡＤＡの検出は、処置の過程にわたって、患者をモニタリングする方法を示し得る。
ＡＤＡを検出するための方法は、当分野で、例えば、ＷＯ２００８／１３７８８５、ＷＯ２００７／１０１６６１またはＷＯ２００９／０９１２４０において報告されている。これらの出願で言及される方法は、捕獲および標識抗体を使用する免疫学的方法である。ＡＤＡ検出に関してさらなる方法および提案は、Anthony R. Mire-Sluisら Journal of Immunological Methods, 333 (2008) 1-9; Eugen Korenら Journal of Immunological Methods, 289 (2004) 1-16において報告されている。Ｗｏｌｂｉｎｋら（Arthritis & Rheumatism 54 (2006) 711-715）はまた、リウマチ性関節炎を有する患者における抗−インフリキシマブ抗体の臨床的関連を議論する。これらの方法は、ＡＤＡおよび関連抗原を同時に評価することを提案していない。これらの方法は、種々のパラメーターの組合せ検出の関連を認識していない。
Ｐａｔｔｏｎら（J. Immunol. Methods 304 (2005) 189-195）は、タンパク質に対する抗体を検出するためのＥＬＩＳＡ方法に関する。
本発明は、ＡＤＡを検出し、治療抗体処置を受けている患者をモニタリングする改善された方法に関する。
発明の概要
本発明は、抗薬物抗体を検出する改善された免疫学的方法を提供する。本発明はまた、治療抗体処置を受けている患者をモニターする方法を提供する。本発明は、さらに上記方法の実施のために適当なキットに関する。
さらに具体的には、本発明の目的は、サンプル中の（インビトロ）抗薬物抗体（ＡＤＡ）（の存在または量）を免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、
ａ）サンプル中の抗原の存在を確認すること；
ｂ）存在するとき、該サンプル中の該抗原を中和すること；および
ｃ）該サンプル中の該ＡＤＡ（の存在または量）を免疫検出すること
を含む、方法に関する。
本発明者らは、サンプル中の抗原の存在が対応するＡＤＡを検出する能力を実質的に妨害することを見出した。したがって、このような事前の中和工程がない限り、サンプル中のＡＤＡの信頼性のある検出を得ることはできない。
本発明のさらなる目的は、サンプル中の（インビトロ）抗薬物抗体（ＡＤＡ）を免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、
ａ）存在し得る該抗原を中和するために、サンプルを処理すること；および
ｂ）該サンプル中の該ＡＤＡの存在または量を免疫検出すること
を含む、方法である。
本発明は、また、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体は標的抗原に対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、
−該治療抗体、
−該抗原、および
−該治療抗体に対する抗薬物抗体；
の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法に関する。
好ましくは、上記方法において、抗原がサンプル中に存在するとき、該ＡＤＡの存在を決定するさらなる工程を、該抗原を中和するためのサンプルの処理後に行う。したがって、好ましい態様において、本発明は、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体は標的抗原に対するものであり、該方法は、
（ａ）該患者由来のサンプル中で、
−該治療抗体、
−該抗原、および
−該治療抗体に対する抗薬物抗体；
の存在または量を決定すること、
（ｂ）該抗原が工程（ａ）においてサンプル中に検出されるとき、抗原を中和するために、該対象のさらなるサンプルを処理し、該処理されたサンプル中の該ＡＤＡの存在を再び決定すること、
それにより患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法に関する。
該方法は、好ましくは、患者の処置の過程にわたって異なる時点で行われ、その結果、患者の応答性または処置の有効性をモニタリングでき、適宜、該処置は調整され得る。
さらなる態様において、本発明はまた、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体はＴＮＦアルファに対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、不活性なＴＮＦアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性が低いまたは低下していることを示すことを含む、方法に関する。好ましい態様において、該方法はまた、患者プロフィールを得るために治療抗体および該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量の決定を含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す。
本発明はまた、患者を処置するための方法であって、有効量の標的抗原に対する治療抗体を該患者に投与し、該治療抗体処置に対する該患者の応答性を上記のとおり評価することを含む方法に関する。
本発明のさらなる目的は、サンプル中で、
−標的抗原に対する治療抗体、
−該抗原、および
−該治療抗体に対する抗薬物抗体
の存在または量を検出するための試薬を含むキットに関する。
該方法は、好ましくはＥＬＩＳＡまたは免疫捕獲により行われ、該抗原は、好ましくはＴＮＦαである。
ＡＤＡ定量化。ＨＲＰ：セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ＳＡ：ストレプトアビジン；Ｂ：ビオチン ＡＤＡ決定における抗原の影響 図３：ＴＮＦα定量化 図４：抗−ＴＮＦα定量化 図５：患者モニタリング 図６：典型的なモニタリングスコア値
発明の詳細な説明
本発明は、ＡＤＡを検出するための、および治療抗体処置を受けている患者をモニターするための組成物、キットおよび方法に関する。本発明は、信頼性のあるデータおよび情報を提供する改善されたＡＤＡ検出方法を開示する。本発明者らは、サンプル中に存在する任意の抗原を中和するサンプルの前処理が、信頼性のあるＡＤＡ評価のために必須であることを示した。本発明者らはまた、対象由来のサンプル中での３つのパラメーター（ＡＤＡ、抗原、薬物）の同時決定が、処置に対する患者の発展および応答の予測プロフィールを提供することを証明した。したがって、本発明は、治療抗体処置を受けている患者をモニタリングする効率的な方法を提供し、処置レジメンの適当な、および効率的な調整を可能にする。
本発明は、以下の定義を参照することにより、よく理解される：
定義
本発明において「治療抗体」なる用語は、活性剤として対象に投与することができるあらゆる抗体を示す。このような治療抗体の特定の例は、炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎または骨関節症の処置において使用される抗体である。これらは、具体的には、抗−ＴＮＦα抗体を含む。「治療抗体」なる用語はまた、標的抗原に選択的に結合する抗体誘導体または抗原特異的リガンド分子、例えば、抗体Ｆａｂフラグメントまたは抗体Ｆｃフラグメント、合成受容体、可溶性受容体などを含む。
「ＡＤＡ」または「抗薬物抗体」なる用語は、対象において治療抗体に結合する抗体を示す。ＡＤＡは、可変領域または定常領域を含む治療抗体における種々のエピトープに結合し得る。
本明細書において使用されるとき、「対象」または「患者」なる用語は、あらゆる哺乳動物対象または患者、好ましくはヒト対象または患者を示す。
本明細書において使用されるとき、「組合せ」決定なる用語は、特定のマーカーを、同時に、または連続してのいずれかでサンプル中で評価することを示す。同時評価は必要ではないが、好ましく、より便利である。
「サンプル」なる用語は、抗体を含み得るあらゆるサンプルを示す。該用語は、好ましくは、生物学的液体、例えば、血清、血漿もしくは全血液、またはそれらの誘導体（例えば、生物学的液体の希釈、前処理、濃縮、溶解などから得られるもの）を示す。サンプルは、好ましくは、血漿、血液もしくは血清サンプルまたはそれらの希釈物である。
ＡＤＡ決定
本発明は、サンプル中でＡＤＡを決定するための改善された方法に関する。この本発明の局面は、とりわけ、抗原それ自体がサンプル中でＡＤＡの定量決定に影響するということを見出したことから生じる。実験のセクションに示されるとおり、試験サンプル中で抗原の存在下で、ＡＤＡの測定される量は、実質的に過大評価され、該試験を役に立たない、信頼性のないものにする。本発明は、最初に、サンプル中で抗原を中和することにより、信頼性のある測定を得ることができることを示す。本発明は、したがって、サンプル中の（インビトロ）抗薬物抗体（ＡＤＡ）を免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、
ａ）サンプル中の抗原の存在を確認すること；
ｂ）存在するとき、該サンプル中の該抗原を中和すること；および
ｃ）該サンプル中の該ＡＤＡの存在または量を免疫検出すること
を含む、方法に関する。
本発明はまた、サンプル中の抗薬物抗体（ＡＤＡ）を免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、
ａ）存在し得る該抗原を中和するために、サンプルを処理すること；および
ｂ）該サンプル中の該ＡＤＡの存在または量を免疫検出すること
を含む、方法に関する。
抗原を中和する工程は、異なる技術により行うことができる。好ましくは、抗原は、サンプルの酸処理（一般的に、後に酸の中和）により、サンプル中の抗原を枯渇または捕獲することにより、または免疫中和により中和される。
酸処理について、サンプルは、好ましくは、ｐＨを４以下、さらに好ましくは約２．５から３．５に含まれる範囲に低下するように処理される。これは、反応前に、ｐＨを上記好ましい範囲に低下するために適当な条件下（例えば、濃度および強度）で、酸溶液をサンプルに加えることにより成し遂げられ得る。適当な酸の例は、カルボン酸、例えば、酢酸、塩酸または硫酸を含む。好ましくは、酸処理後、サンプルのｐＨは、ＡＤＡを検出する前に、少なくとも部分的に中和される。該中和は、塩基性溶液をサンプルに加えることにより得ることができる。したがって、酸処理は、一般的に、
−反応前に、酸溶液をサンプルに加え、ｐＨを約４より下に低下させること；
−室温で酸性サンプルをインキュベートすること；および
−反応前に、塩基性溶液、例えば、ＴＲＩＳバッファーまたはリン酸バッファーまたは炭酸バッファーまたはホウ酸バッファーを酸性サンプルに加え、酸を中和し、ｐＨを４より上、一般的に５から９、さらに一般的に６から８に回復させること
を含む。
抗原はまた、任意の適当な親和性試薬を使用する捕獲または枯渇により中和され得る。一般的に、サンプルを、抗原に対して特異的な結合試薬でコーティングされた支持体または該試薬を含む支持体と接触させる。通過または接触時に、抗原は、支持体により固定または保持され、回収されたか、または得られたサンプルには、実質的に遊離抗原が全くない。サンプルは、抗原に対して特異的な抗体でコーティングされたカラムを介して処理され得る。あるいは、例えば、抗体でコーティングされたビーズをサンプルに加え、所望により次に媒体から分離されるか、または取り出され得る。
免疫中和は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体により行われ得る。
好ましい態様において、抗原は、酸処理により中和される。
ＡＤＡの免疫検出は、限定はしないが、ＥＬＩＳＡ、免疫捕獲、マイクロアレイ（タンパク質チップ）、フローサイトメトリー（例えば、Ｆｉｄｉｓ）またはマルチプレックスドット(multiplex dot)を含む免疫アッセイの種々の型またはプラットフォームにより行うことができる。
好ましい態様において、ＡＤＡは、ＥＬＩＳＡまたは免疫捕獲により免疫検出される。このような方法において、捕獲試薬は支持体上に固定され、試験サンプルは支持体上に置かれ、サンプルの支持体およびＡＤＡ間の免疫複合体の形成は、存在するとき、トレース試薬を使用して測定される。一般的に、ＡＤＡを決定するために、コーティングされた、または固定された捕獲試薬は、薬物それ自体（すなわち、治療抗体）である。トレース試薬は、任意の抗−ＡＤＡまたはＡＤＡ特異的試薬、例えば、抗体（例えば、ヤギまたはウサギ抗−ヒトＩｇ抗体）、または薬物の再開であり得る。トレース試薬は、それ自体標識されているか、または検出可能な暴露薬剤(revealing agent)（ストレプトアビジン／ビオチン；ペルオキシダーゼ；酵素標識、発光標識など）を介してのいずれかであり得る。
特定の態様において、捕獲試薬は薬物それ自体であり、トレース試薬は、標識化ストレプトアビジンのインキュベーション時に検出することができるビオチン化薬物である（図１参照）。
捕獲試薬は、当分野でそれ自体既知の種々の技術、例えば、限定はしないが、吸着、物理的結合または化学結合により支持体上に固定され得る。化学結合は、例えば、Ｎ−末端および／もしくは外側のアミノ基を介して、および／または固定される試薬（例えば、薬物または抗体）のフェノール官能基または糖アルコール基を介して、成し遂げられ得る。
支持体は、任意の適当なデバイス、例えば、プレート（例えば、マルチウェル滴定プレート）、スライド、皿、チューブ、カラムなどであり得る。支持体はまた、ビーズで作られていてもよい。
別の態様において、反応は溶液中で行われる。この態様において、試薬は支持体上に固定されず、溶液中に直接混合される。
実験のセクションにおいて説明されるとおり、本発明により処理されるサンプル中で測定されるＡＤＡのレベルは、信頼性があり、安定であるが、抗原を中和する前処理なしで得られる値は不正確であり、信頼性がない（図２参照）。
本発明は、特に、対象において抗−ＴＮＦ薬物に対するＡＤＡの存在を評価するために適している。よりさらに具体的には、本発明は、特に、限定はしないが、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブおよびセルトリズマブペゴールを含む、抗−ＴＮＦα治療抗体に対するＡＤＡを検出するために適している。
患者モニタリング
抗薬物抗体（「ＡＤＡ」）は、治療抗体の効果を減少、低下または中和する。したがって、対象由来のサンプル中のこれらのＡＤＡの検出は、処置の過程にわたって患者をモニタリングする方法ならびに治療を改善する方法を示す。ＡＤＡ力価が増加するとき、薬物の治療効果が減少または中和されることを予期することができる。このような状況において、次に、処置プロトコールを、例えば、異なる薬物を使用するように変化させることが推奨される。
特定の局面において、したがって、本発明は、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、上記方法を使用して、該患者由来のサンプル中で、該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を決定することを含み；サンプル中のＡＤＡの存在または増加が対象の応答性の喪失を示す、方法に関する。
別の局面において、本発明は、治療抗体処置を受けている患者をモニターするための方法であって、上記方法を使用して、該患者由来のサンプル中で、該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を決定することを含み；参照値または処置の初期段階で決定される値と比較してサンプル中のＡＤＡの存在または増加が処置に対する対象の応答性の喪失を示す、方法に関する。
対象をモニターするため、または対象の応答性を評価するために、本発明において、ＡＤＡだけでなく、サンプル中の薬物および抗原もまた測定することがさらにより好ましい。実際に、本出願は、このような組合せ決定が、対象の状態の予測指標を提供することを示す。
したがって、本発明はまた、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体が標的抗原に対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、
−該治療抗体、
−該抗原、および
−該治療抗体に対する抗薬物抗体；
の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法に関する。
好ましくは、本発明において記載されているとおり、ＡＤＡ決定は、抗原を中和するサンプルの処理後に行うべきである。したがって、上記方法において、抗原がサンプル中で検出されたとき、該ＡＤＡの存在を決定するさらなる工程を、抗原を中和するためのサンプルの処理後に、行う。
ＡＤＡレベルおよび／または抗原のレベルが、参照値を越えて、または処置の初期段階で対象における決定される値と比較して増加しているとき；ならびに、治療抗体レベルが、参照値を越えて、または処置の初期段階で対象における決定される値と比較して減少しているとき、患者がもはや該処置に対してよく応答しておらず、該処置を適応させるべきであることを推測することができる。モニタリングスコアはまた、以下のとおりに、処置がまだ患者に適応しているか否かを該測定値から直接的に推測するために使用され得る。
該方法は、好ましくは患者の処置の過程にわたって異なる時点で行わ、その結果、患者の応答性または処置の有効性をモニタリングでき、適宜、該処置は調整され得る。特定の態様において、検出は、治療抗体のそれぞれの投与の前に行うことができる。あるいは、検出は、１月間隔で３回行われ得る。長期間（例えば、９ヶ月またはそれ以上）治療抗体処置を受けている対象において、本発明の単一検出は、患者を応答者または非応答者として見なすために十分である。
図５は、プロフィールがどのように患者の応答性を示すか、どの処置が非有効性とみなされ、変更されるべきであるかを示す。図５から決定することができるとおり、３つの主な状況は、区別され得る：
Ｔ０：対象は病気であり、処置されていない。
Ｔ１−Ｔ２：対象は処置され、処置に対して応答する。本発明者らにより試験されたサンプルは、ほとんどの処置された患者がこのカテゴリー範囲内に入ることを示す。
Ｔ３について：対象は処置されるが、応答しない。治療抗体は、ＡＤＡにより中和される。処置は効率的ではなく、変更されるべきである。
治療抗体、抗原およびＡＤＡは、あらゆる免疫検出方法を含む異なる技術、、例えば、ＡＤＡ決定について上記されている、ＥＬＩＳＡ、免疫捕獲、マイクロアレイ（タンパク質チップ）、フローサイトメトリー（例えば、Ｆｉｄｉｓ）またはマルチプレックスドットにより測定することができる。一般的に、全３つのマーカーは、同時に（例えば、同じデバイスで）試験される。しかしながら、決定は、別々に、または連続して行ってもよい。
本発明は、特に、抗−ＴＮＦα処置を受けている患者をモニターするために適している。このような患者は、一般的に、自己免疫性または炎症性疾患、例えば、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬などに罹患している。モニタリングは、処置有効性の定期的な評価を可能にし、処置を続行してもよいか、または適応させるべきであるか医師が決定することを可能にする。
この点において、評価は、好ましくは、対象中のＴＮＦα、ＡＤＡおよび抗−ＴＮＦα治療抗体のレベルを評価することにより行われる。得られる値は、定性または定量のいずれかであり得る。それらは、参照値または処置の初期段階で同じ患者に対して記録されたレベルと比較され得る。特定の態様において、該値は、患者の直接的モニタリングを可能にする「スコア−表」を使用して評価される。
第１の工程において、患者由来のサンプルを上記のとおり試験して、３つのマーカー：ＴＮＦα、抗−ＴＮＦαおよびＡＤＡのレベルを定量する。第２の工程において、「スコア−表」を使用して、それぞれのパラメーターの比率をスコアと関連させる。次に、それぞれのパラメーターからのスコアの合計：モニタリングスコア＝ＴＮＦスコア＋抗−ＴＮＦスコア＋ＡＤＡスコアからなる全体的なモニタリングスコアを得る。
次に、モニタリングスコアは、モニタリング基準と比較され（または読み取られ）、それにより、対象の状態を提供し得る。この点において、本発明者らは、上記マーカー値を評価するために適当なモニタリング基準を確立した。これらの基準を以下に、抗−ＴＮＦ治療に関して、提供する。さらなるスコア基準は、実施例に記載されている：
それぞれのパラメーターに対するスコア−表
Figure 2013527444
モニタリング基準：
Figure 2013527444
例として、インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者由来の血清サンプルを、本発明によって試験する。ＴＮＦα、抗−ＴＮＦαおよびＡＤＡの比率は、それぞれ５０ｐｇ／ｍｌ、＜０，１μｇ／ｍｌおよび６６００ｎｇ／ｍｌである。
ＴＮＦαの比率は、２のスコアと関連する。抗−ＴＮＦの比率は、５のスコアと関連する。ＡＤＡの比率は、２２のスコアと関連する。
したがって、モニタリングスコアは２９であり、患者に対する提案は、別の処置への変更である。
実験のセクションは、抗−ＴＮＦアルファ治療を受けている患者由来の３００以上のヒト血清サンプルにおいて、本発明者らにより行われた試験の結果を報告する。それらは、上記方法にしたがって、患者の状態を確実に決定することができ、非応答者状態に向かうそれらの進行を検出および予期することができることを示す。したがって、本発明は、初めて、患者モニターし、それらの処置を調整するための信頼性のある方法を提供する。
さらなる応答マーカー
さらなる好ましい態様において、本発明の方法は、上記の値またはスコアを測定または（例えば、臨床記録から）集められ得るさらなる患者データと組み合わせて、試験をさらに精密化することを含む。特定の態様において、したがって、本発明の方法は、サイトカイン、ホルモンおよび成長因子、リウマチ因子および特定の抗体から選択され得る１つまたはいくつかのさらなる抗原の存在または量を決定することをさらに含む。このようなさらなる因子の特定の好ましい例は、以下のものを含む：
−サイトカインおよびケモカイン：ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬＫ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮガンマ、ＰｒｏＭＰＰ１および／またはＰｒｏＭＰＰ３；
−自己免疫性抗体：抗核抗体（二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）に対するＡＮＡ抗体）
−生物学的パラメーターおよび血液学的パラメーター：Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＲＦリウマチ因子、血清アミロイドＡ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ヘモグロビン、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、白血球および血小板数、ＣＤ１９−Ｂ細胞の数、ＣＤ３＿、ＣＤ４＿、ＣＤ８＿、ＣＤ４＿，ＣＤ２５＿、および／またはＣＤ８＿、ＨＬＡ−ＤＲ＿Ｔ細胞の数
−患者パラメーター：例えば、性別、ＶＳ、年齢またはＤＡＳ２８。体重、
−処置パラメーター：薬量学
バイオマーカー濃度（ＴＮＦ、抗−ＴＮＦおよびＡＤＡ）は、定量免疫測定法を使用して測定され、臨床データセットからのさらなるパラメーターと組み合わせてモニタリングスコアを作成する。アルゴリズムは、異なる重み（Ｗｎ）を使用して、処置有効性（モニタリングスコア）を評価する。得られるモニタリングスコアは、それぞれの試験結果が１から１０の１０進数であるように尺度付けられる。例として、モニタリングスコアのアルゴリズムは、以下のとおりである：
モニタリングスコア＝Ｗ１×｛ＴＮＦ｝＋Ｗ２×｛抗−ＴＮＦ｝＋Ｗ３×｛ＡＤＡ｝＋Ｗ４×｛ＣＲＰ｝＋Ｗ５×｛ＥＳＲ｝。
Ｗｎ：処置の影響に対するこれらのパラメーターの重要性による、それぞれのパラメーターに対する重みである。
｛ＴＮＦ｝：ＴＮＦのスコア因子。測定されるＴＮＦの濃度による、モニタリングスコアに対するＴＮＦ影響。
｛抗−ＴＮＦ｝：抗−ＴＮＦのスコア因子。測定される抗−ＴＮＦの濃度による、モニタリングスコアに対する抗−ＴＮＦ影響。抗−ＴＮＦのスコア因子のスコア因子は、「薬量学」依存である（臨床データセットにおいて利用できる情報）。
｛ＡＤＡ｝：ＡＤＡのスコア因子。測定されるＡＤＡの濃度による、モニタリングスコアに対するＡＤＡ影響。
｛ＣＲＰ｝：ＣＲＰのスコア因子。臨床データセットにより提供されるＣ反応性タンパク質の濃度による、モニタリングスコアに対するＣＲＰ影響。
｛ＥＳＲ｝：ＥＳＲのスコア因子。臨床データセットにより提供される赤血球沈降速度による、モニタリングスコアに対するＥＳＲ影響。沈降速度は「年齢および性別」依存である；臨床データセットにおける情報）。
モニタリングスコアは、全臨床データセットと共に使用され、処置の経過についてそれらの決定において医師を手助けすることを意図する。
モニタリングスコアは、１から１０で尺度付けられる数である。モニタリングスコアによって、処置有効性の解釈を、例えば、図６に示されるとおり、行うことができる。
処置変更のマーカーとしての不活性なＴＮＦアルファ
本発明者らは、検出されるＴＮＦアルファの生物学的活性が、処置に対して応答しない患者であることを決定した（図５のエリアＴ３およびＴ４、参照）、該活性は、ＴＮＦアルファサンプルへの暴露時に標的細胞溶解を評価することにより検出した。本発明者らの結果は、驚くべきことに、該ＴＮＦアルファが生物学的に不活性であることを示す。これらの結果は全く予期されておらず、抗−ＴＮＦアルファ処置を受けている患者が循環不活性なＴＮＦアルファを有していることは報告されていない。本発明者らの結果は、不活性なＴＮＦアルファレベルが抗−ＴＮＦ処置に対する患者の応答の喪失と相関することをさらに示す。このような不活性なＴＮＦアルファの存在は、興味深い。本発明者らは、ＴＮＦアルファが最初に抗−ＴＮＡアルファ治療抗体により捕捉され、次にＡＤＡが治療抗体分子に結合したとき放出されるという仮説を立てる。ＡＤＡから放出されるＴＮＦアルファは、ＡＤＡ結合により引き起こされる立体構造または構造変化の結果として、不活性である（または不活性化される）。
したがって、抗−ＴＮＦ治療を受けている患者における不活性なＴＮＦアルファの投与は、患者の応答性を決定する、および処置を調整する（例えば、処置を別の治療抗体または処置の別のクラスに変更する）ための新規かつ非常に信頼性のある手段を示す。
特定の態様において、したがって、本発明は、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体はＴＮＦアルファに対するものであり、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なＴＮＦアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性が低いまたは低下していることを示すことを含む、方法に関する。
特定の態様において、本発明はまた、抗−ＴＮＦアルファ処置を受けている患者をモニターするための方法であって、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なＴＮＦアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性を示すことを含む、方法に関する。不活性なＴＮＦアルファの出現は、対象が処置を逃れ始めている徴候である。このような不活性なＴＮＦアルファのレベルの増加は、患者が別の処置へ変更すべきであることを示す。
この文脈において、「不活性なＴＮＦアルファ」は、インビトロで標的細胞溶解を引き起こさないＴＮＦアルファを示す。不活性なＴＮＦアルファは、さらに具体的には、不活性化ＴＮＦアルファ、例えば、抗体不活性化ＴＮＦアルファを含む。上記態様において、該方法は、試験サンプル中でＴＮＦアルファの生物学的活性を検出する工程をさらに含み得る。あるいは、または加えて、該方法は、不活性なＴＮＦアルファ分子の構造を検出する工程を含み得る。
好ましい態様において、上記方法はまた、患者プロフィールを得るために抗−ＴＮＦアルファ治療抗体および抗薬物抗体の存在または量の決定を含み、該患者プロフィールは該処置に対する応答性を示す。さらなる好ましい態様において、該方法は、上記さらなるパラメーターを検出することをさらに含む。
本発明のさらなる目的は、
−サンプル中で、治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を検出するための１つまたはいくつかの試薬；
−サンプル中で、該治療抗体の標的抗原を中和する１つまたはいくつかの試薬
を含むキットである。
好ましい態様において、本発明は、ヒト血清サンプル中のヒトＴＮＦα、抗−ＴＮＦα薬物（好ましくは、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブまたはセルトリズマブペゴール）および対応するＡＤＡの組合せ定量決定のための酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットまたは方法に関する。該キットは、医師が患者血清中のこれらの３つのパラメーターの割合の漸進的変化をモニターすることを可能にする。
本発明のさらなる局面および利点は、以下の実験のセクションに記載されているが、これは、説明のためのみと考えられるべきである。
実施例
実験のセクションにおいて、全ての用量は、標準に関して較正された量である。ＴＮＦの用量（ｐｇ／ｍｌ）は、国際標準を用いて決定する。薬物の用量（μｇ／ｍｌ）は、製薬会社により与えられる濃度値を用いて決定する。ＡＤＡの用量（ｎｇ／ｍｌ）は、標準としてウサギポリクローナル抗体を用いて決定する。ウサギ（ｏｒｉｇｉｎ Ｈｙｌａ）を、抗−ＴＮＦ免疫グロブリンのＦａｂもしくはＦａｂ’２フラグメントまたはヒトＰ７５ＴＮＦ受容体で免疫化する。ＡＤＡヒト標準の定量化は、ビウレットの方法（比色分析によるタンパク質の用量）により得られる。
実施例Ａ−ＡＤＡを検出する方法
薬物をポリスチレンマイクロタイタープレート上に被覆する。
・最初に、酸溶液、例えば、酢酸溶液をサンプルに加える。酸性サンプルを、室温で約５分インキュベートする。
・次に、塩基性溶液、例えば、ＴＲＩＳ溶液を酸性サンプルに加え、酸溶液を中和する。
・次に、サンプル（希釈されているか、または希釈されていない）を抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化薬物を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化薬物と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−エタネルセプト抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗薬物抗体の量の定義を可能にする。
試験の原理を図１に示す。該結果を図２に示す。
該結果は、驚くべきことに、抗原がサンプル中に存在するとき、ＡＤＡの定量化が大幅に過大評価されることを示す。対照的に、酸処理による抗原の中和後、ＡＤＡの定量化は正確であり、信頼性がある。ＡＤＡの用量中の抗原の存在は、誤って陽性結果を引き起こし得るＡＤＡにおける誤った用量を含む。結果として、抗原におけるプラスの用量中で、Ａｄａの正確な結果を得るために、中和後に第２の試験ＡＤＡを行う必要がある。
実施例Ｂ−エタネルセプトで処置された患者をモニターするための方法およびキット
該試験は、血清または血漿上で行うべきである。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、血液採取直後のサンプルを使用することが好ましい。決定を即座に行わないとき、サンプルは冷凍すべきである。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過すべきである。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．エタネルセプトの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ヒトＩｇＧビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＩｇＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、エタネルセプトの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのエタネルセプトの量の定義を可能にする。
３．抗−エタネルセプトの用量
エタネルセプトをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化エタネルセプトを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化エタネルセプトと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−エタネルセプト抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−エタネルセプト抗体の量の定義を可能にする。
４．結果
処置の過程中、３つのパラメーター（ＴＮＦ、エタネルセプト、抗−エタネルセプト）の割合の漸進的変化を、ヒト対象において本発明にしたがってモニタリングした。Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ患者（患者１）由来の血清サンプルを、エタネルセプトの第１の注入前に試験した。該結果は以下に示される：
Figure 2013527444
 これらの結果は、ＴＮＦのレベルおよびエタネルセプトのレベルが処置の過程中に増加することを示す。
実施例Ｃ−アダリムマブで処置された患者をモニターするための方法およびキット
該試験は、血清または血漿上で行った。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．アダリムマブの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ヒトＩｇＧビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＩｇＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、アダリムマブの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのアダリムマブの量の定義を可能にする。
３．抗−アダリムマブの用量
アダリムマブをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化アダリムマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化アダリムマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−アダリムマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−アダリムマブ抗体の量の定義を可能にする。
４．結果
処置の過程中、３つのパラメーター（ＴＮＦ、アダリムマブ、抗−アダリムマブ）の割合の漸進的変化を、本発明を使用してモニタリングした。
リウマチ性関節炎患者（患者２）由来の血清サンプルを、アダリムマブ（Ｗ０）の第１の注入前、およびアダリムマブ（Ｗ６、Ｗ２１、Ｗ３０、Ｗ３９）の後の注入前に試験した。
Figure 2013527444
上記表は、アダリムマブのレベルが処置の過程中に該患者において増加し、約１７μｇ／ｍｌのレベルに達することを示す。ＴＮＦのレベルおよび抗−アダリムマブのレベルは増加しなかった。
実施例Ｄ−インフリキシマブで処置された患者をモニターするための方法およびキット
該試験は、血清または血漿上で行った。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．インフリキシマブの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ヒトＩｇＧビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＩｇＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのインフリキシマブの量の定義を可能にする。
３．抗−インフリキシマブの用量
インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化インフリキシマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化インフリキシマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−インフリキシマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−インフリキシマブ抗体の量の定義を可能にする。
４．結果
処置の過程中、３つのパラメーター（ＴＮＦ、インフリキシマブ、抗−インフリキシマブ）の割合の漸進的変化を、ヒト対象においてモニタリングした。
第１のリウマチ性関節炎患者（患者３）において、血清サンプルは、インフリキシマブ（Ｗ２）の第２の注入前およびインフリキシマブ（Ｗ６、Ｗ１４、Ｗ２８、Ｗ４２、Ｗ５６）の後の注入前に試験した。
Figure 2013527444
 該結果は、抗−インフリキシマブのレベルが、処置の過程中に増加し、高レベル（＞１００ｎｇ／ｍｌ）に達することを示す。ＴＮＦのレベルおよび抗−インフリキシマブのレベルは検出不可能であった。
別のＲｈｅｕｍａｔｏｉｄ患者（患者４）において、血清サンプルは、インフリキシマブ（Ｗ２）の第２の注入前およびインフリキシマブ（Ｗ５）の第３の注入前に試験した。
Figure 2013527444
 該結果は、抗−インフリキシマブのレベルが、処置の過程中に増加し、高レベル（＞１００ｎｇ／ｍｌ）に達することを示す。ＴＮＦのレベルは５０ｐｇ／ｍｌに増加し、インフリキシマブのレベルは０．１μｇ／ｍｌまで下がる。
実施例Ｅ−セルトリズマブペゴールで処置された患者をモニターするための方法およびキット
該試験は、血清または血漿上で行った。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．セルトリズマブペゴールの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化抗−ＰＥＧ抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＰＥＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのセルトリズマブペゴールの量を定義させる
３．抗−セルトリズマブペゴールの用量
セルトリズマブペゴールをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化セルトリズマブペゴールを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化セルトリズマブペゴールと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−インフリキシマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−セルトリズマブペゴール抗体の量の定義を可能にする。
４．抗−セルトリズマブペゴールの用量（別法）
セルトリズマブペゴールをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化抗−ヒトＩｇＧおよびビオチン化抗−ヒトＩｇＭを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ヒトＩｇＧおよび抗−ヒトＩｇＭと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−インフリキシマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−セルトリズマブペゴール抗体の量の定義を可能にする。
実施例Ｆ−ゴリムマブで処置される患者をモニターするための方法およびキット
該試験は、血清または血漿上で行った。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．ゴリムマブの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ヒトＩｇＧビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＩｇＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのゴリムマブの量の定義を可能にする。
３．抗−ゴリムマブの用量
インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化ゴリムマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化ゴリムマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−インフリキシマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−ゴリムマブ抗体の量の定義を可能にする。
実施例Ｇ：ＴＮＦアルファの生物学的活性
ＴＮＦ活性は、Ｌ９２９細胞毒性アッセイ（Bloquel Cら (2004) Hum Gene Ther. 15:189-201）を使用することにより評価した。ＴＮＦ血清サンプルの連続希釈物をＬ９２９細胞とインキュベートし、生存細胞数をＭＴＴダイイング(dying)アッセイにより決定した。
該結果は、処置患者由来のＴＮＦアルファが不活性である、すなわち、Ｌ９２９細胞の実質的な溶解を引き起こさないことを示す。
実施例Ｈ−３００人を越えるヒト患者のコホートにおける方法の検証
該試験は、血清または血漿上で行った。ＴＮＦαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、６か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。それぞれの患者において、処置中の異なる時点で検出を行った。
１．ＴＮＦαの用量
モノクローナル抗−ＴＮＦα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ＴＮＦαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＴＮＦα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、ＴＮＦαの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｐｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのＴＮＦαの量の定義を可能にする。
２．インフリキシマブの用量
ＴＮＦαをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・抗−ヒトＩｇＧビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗−ＩｇＧ抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、μｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのインフリキシマブの量の定義を可能にする。
３．抗−インフリキシマブの用量
インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート（８ウェルの４片）上に被覆する。
・最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。
・ビオチン化インフリキシマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。
・次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化インフリキシマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。
・結合酵素は、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン）の添加により示される。色強度は、抗−インフリキシマブ抗体の量に比例する。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）を添加して、酵素反応を停止させる。
・Ｈ２ＳＯ４（０．２５Ｍ）による該反応停止後、光学濃度は、４５０ｎｍで分光光度計により読む。
較正範囲は、ｎｇ／ｍＬにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗−インフリキシマブ抗体の量の定義を可能にする。
４．さらなるパラメーター
−［ＣＲＰ］：ＣＲＰ濃度、ｍｇ／Ｌにて示される
−ＥＳＲ：赤血球沈降速度、ｍｍ／ｈにて示される
−薬量学：薬量学が正常であるか、薬量学が正常薬量学よりも高いかを知るため
−年齢、性別、体重。
５．スコア因子：
｛ＴＮＦ｝：測定されたＴＮＦの濃度によるＴＮＦのスコア因子。例として：
１０ｐｇ／ｍｌより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１である。
１０から１００ｐｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は４である。
１００ｐｇ／ｍｌより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
｛抗−ＴＮＦ｝：測定された抗−ＴＮＦの濃度による抗−ＴＮＦのスコア因子。
正常薬量学を有する患者において：
０．１μｇ／ｍｌより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
０．１から０．５μｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は６である。
０．５から１．８μｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は４である。
１．８μｇ／ｍｌより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１である。
増強させた薬量学を有する患者において：
０．１μｇ／ｍｌより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１２．５である。
０．１から０．５μｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
０．５から１．８μｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は７．５である。
１．８μｇ／ｍｌより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１．２５である。
｛ＡＤＡ｝：測定されたＡＤＡの濃度によるＡＤＡのスコア因子
１０ｎｇ／ｍｌより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１である。
１０から２００ｎｇ／ｍｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は５である。
２００ｎｇ／ｍｌより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
｛ＣＲＰ｝：臨床データセットにより提供されるＣ反応性タンパク質の濃度によるＣＲＰのスコア因子
６ｍｇ／Ｌより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１である。
６から５０ｍｇ／Ｌの測定されたサンプルに対するスコア因子は４である。
５０ｍｇ／Ｌより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
｛ＥＳＲ｝：臨床データセットにより提供される赤血球沈降速度によるＥＳＲのスコア因子。沈降速度は「年齢および性別」に依存する。
１５ｍｍ／ｈより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は１である。
１５から２０ｍｍ／ｈの測定されたサンプルに対するスコア因子は４である。
２０ｍｍ／ｈより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は１０である。
６．重み
それぞれのパラメーターからの全てのスコア因子は、処置に対するこれらのパラメーターの影響による重み因子（Ｗｎ）と関連する。
例として：
ＴＮＦの重み因子は１５％である。
抗−ＴＮＦの重み因子は３０％である。
ＡＤＡの重み因子は３５％である。
ＣＲＰの重み因子は１０％である。
ＥＳＲの重み因子は１０％である。
７．結果：
７．１．インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者の分析
本発明者らは、処置の過程中の異なる時点で、インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者由来の血清サンプルを試験した。以下の表Ａはそれぞれの患者について示す：
−ＴＮＦ、抗−ＴＮＦ（インフリキシマブ）およびＡＤＡ（抗−インフリキシマブ）の測定されるレベル
−臨床データセット：ＣＲＰ、ＥＳＲおよび薬量学からの情報
−それぞれのパラメーターに対するスコア因子
−それぞれのパラメーターに対する重み因子
−モニタリングスコアの結果
−全臨床データセットによる処置に対する患者応答：応答（Ｒ）、非応答または非完全応答（ＮＲ）、処置開始時（Ｔ０）
それぞれの患者に対する一連の結果は、処置中の異なる時点での測定値を示す。
表Ａ
Figure 2013527444
Figure 2013527444
上記表Ａに示される結果は、（ｉ）低い、または検出不可能なＴＮＦアルファ、（ｉｉ）検出可能な抗−ＴＮＦレベル、および（ｉｉｉ）本質的に低い、または存在しないＡＤＡレベルを組合せた患者は、処置に対して応答しないことを示す。上記スコアおよび重み因子を使用して、３より小さいスコアを有する患者は応答者に分類することができる。このような患者において、該処置を続けてもよい（用量は調整され得るが）。
５より大きいスコア値を有する全ての患者は、「逃れる人(escaper)」、すなわち、抗−ＴＮＦ処置が有効であったが、非応答者になっている患者に分類されるべきである。これらの患者において、処置は、関節の不可逆性分解を回避するために、迅速に変更されるべきである。
３−５の患者は、注意深くモニタリングされるべきである。これらの患者は、次第に非応答者になっていく。処置は調整されるべきであり（例えば、投与の用量またはタイミング）、可能な変更は、進行に依存して考慮されるべきである。
３より小さいスコアを有する１人の患者のみ（患者＃８９）が非応答者であった。事実、該患者は、一次非応答者、すなわち、抗−ＴＮＦ処置が有効でなかった患者である。このような患者は、本発明を使用して容易に同定することができる：該患者は応答者と同様のスコアを有するが、病気の患者の全臨床兆候を有する。これらの処置は変更されるべきである。
７．２．インフリキシマブで処置された炎症性疾患を有する患者の分析
本発明者らはまた、炎症性疾患（強直性脊椎炎、クローン病、乾癬など）の血清サンプルを試験した。患者をインフリキシマブで処置した。サンプルを処置の過程中の異なる時点で分析した。以下の表Ｂはそれぞれの患者について示す：
−ＴＮＦ、抗−ＴＮＦ（インフリキシマブ）およびＡＤＡ（抗−インフリキシマブ）の測定されるレベル
−臨床データセット：ＣＲＰ、ＥＳＲおよび薬量学からの情報
−それぞれのパラメーターに対するスコア因子
−それぞれのパラメーターに対する重み因子
−モニタリングスコアの結果
−全臨床データセットによる処置に対する患者応答：応答（Ｒ）、非応答または非完全応答（ＮＲ）、処置開始時（Ｔ０）
それぞれの患者に対する一連の結果は、処置中の異なる時点での測定値を示す。
表Ｂ
Figure 2013527444
Figure 2013527444
Figure 2013527444
Figure 2013527444
Figure 2013527444
表Ｂに示される結果は、（ｉ）低い、または検出不可能なＴＮＦアルファ、（ｉｉ）検出可能な抗−ＴＮＦレベル、および（ｉｉｉ）本質的に低い、または存在しないＡＤＡレベルを組合せた患者は、処置に対して応答しないことを示す。上記スコアおよび重み因子を使用して、３より小さいスコアを有する患者は応答者に分類することができる。該結果は、以下の表に要約される。
Figure 2013527444
 ＊ 患者２４、３２、４０および８０参照。このような一次非応答者において、ＴＮＦが疾患活性における小さな病因的役割を果たすことが推測される。
本発明者らの結果は、応答者および非応答者を区別することができることを示す。本発明者らの結果は、患者の応答者から非応答者状態への進行が予想でき、それにより、実質的に改善された処置レジメンの実施を可能にすることをさらに示す。

Claims (16)

  1. サンプル中の抗薬物抗体（ＡＤＡ）を免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、
    ａ）サンプル中の抗原の存在を確認すること；
    ｂ）存在するとき、該サンプル中の該抗原を中和すること；および
    ｃ）該サンプル中の該ＡＤＡの存在または量を免疫検出すること
    を含む、方法。
  2. 治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体は標的抗原に対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、
    −該治療抗体、
    −該抗原、および
    −該治療抗体に対する抗薬物抗体；
    の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法。
  3. 該決定が、免疫測定法、好ましくはＥＬＩＳＡまたは免疫捕獲により行われる、請求項２に記載の方法。
  4. 該抗原がＴＮＦαである、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
  5. 薬物が、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブおよびセルトリズマブペゴールから選択される抗−ＴＮＦα抗体である、請求項４に記載の方法。
  6. 患者が自己免疫性または炎症性疾患を有する、請求項２から５のいずれかに記載の方法。
  7. 該患者由来のサンプル中で、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）または赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の存在または量を決定することをさらに含む、請求項２から６のいずれかに記載の方法。
  8. 患者の処置をモニターまたは調整するための、請求項２から７のいずれかに記載の方法。
  9. サンプルが体液サンプル、好ましくは血清または血漿サンプルである、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
  10. 抗−ＴＮＡアルファ処置を受けている患者をモニターするための請求項８に記載の方法であって、該方法は、該患者由来のサンプル中で、
    −該治療抗体、
    −該抗原、および
    −該治療抗体に対する抗薬物抗体；
    の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは、該患者が該処置に対して応答するか否かを示し、それにより、処置の調整を可能にする方法。
  11. ＴＮＦアルファレベルが１０ｐｇ／ｍｌ未満であり、治療抗体レベルが１μｇ／ｍｌを越えており、ＡＤＡレベルが５０ｎｇ／ｍｌ未満であるとき、患者が応答性であり、該処置が持続または減少さえされるべきである、請求項１０に記載の方法。
  12. 不活性なＴＮＦアルファのレベルが検出されるときの、前記請求項のいずれかに記載の方法。
  13. 不活性なＴＮＦアルファのレベルが１０ｐｇ／ｍｌを越えるとき、患者は該処置に対して非応答性である、請求項１２に記載の方法。
  14. 治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体はＴＮＦアルファに対するものであり、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なＴＮＦアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性が低いまたは低下していることを示すことを含む、方法。
  15. 抗−ＴＮＦアルファ処置を受けている患者をモニターするための方法であって、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なＴＮＦアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性を示すことを含む、方法。
  16. サンプル中で、
    −標的抗原に対する治療抗体、
    −該抗原、および
    −該治療抗体に対する抗薬物抗体
    の存在または量を検出するための試薬を含むキット。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016536587A (ja) * 2013-10-31 2016-11-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 中和抗体を検出するための競合リガンド結合アッセイ
JP2017502285A (ja) * 2013-12-20 2017-01-19 フアデイア・アー・ベー 抗体の分析
JP2017532570A (ja) * 2014-11-05 2017-11-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ エフェクター機能抑制型ヒトまたはヒト化薬物抗体に対する抗薬物抗体の決定方法

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI2564202T1 (sl) * 2010-04-29 2015-12-31 Theradiag Sa Metode za odkrivanje protiteles proti zdravilu
BR112015012482A2 (pt) * 2012-11-30 2017-07-11 Nestec Sa ensaios para detecção de autoanticorpos neutralizantes à terapia com produtos biológicos
US9778817B2 (en) 2013-12-31 2017-10-03 Findo, Inc. Tagging of images based on social network tags or comments
WO2015166461A1 (en) * 2014-05-01 2015-11-05 Nestec S.A. Methods of selecting treatment regimen using tnf alpha and anti-tnf alpha drug levels
EP2982987A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-10 Proteomika, S.L. Lateral flow immunoassays for the detection of antibodies against biological drugs
CN105277682A (zh) * 2015-11-17 2016-01-27 苏州浩欧博生物医药有限公司 一种抗TNF-α单抗药物抗体检测试剂盒
CN106093413A (zh) * 2016-07-18 2016-11-09 本·沙朗 一种抗英夫利西抗体elisa检测试剂盒和检测方法
KR20180052277A (ko) * 2016-11-10 2018-05-18 가톨릭대학교 산학협력단 항-제9응고인자 항체의 검출 방법 및 검출 키트
CN108535490A (zh) * 2017-03-06 2018-09-14 苏州和锐生物科技有限公司 生物制剂血药浓度检测方法及试剂
EP3652539A4 (en) * 2017-07-10 2021-03-31 Rambam Med-Tech Ltd. ASSAYS FOR EVALUATING NEUTRALIZING ANTIBODIES IN ORGANIC MEDICINE TREATED PATIENTS AND USES THEREOF IN PERSONALIZED MEDICINE
EP3990922A1 (en) * 2019-06-25 2022-05-04 ProciseDx Inc. Detection of anti-tnf alpha drug biologics and anti-drug antibodies
WO2023204378A1 (ko) * 2022-04-19 2023-10-26 의료법인 성광의료재단 혈액 내 항-약물항체 농도 측정을 통한 생물학적 약물에 대한 치료 반응성 예측 방법

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005017529A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-24 Genentech, Inc. Assay for human anti cd20 antibodies and uses therefor
WO2007101661A1 (en) * 2006-03-09 2007-09-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-drug antibody assay
WO2010042031A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 Gyros Patent Ab Semi-sequential assay for detection of an analyte in a sample

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004096274A1 (ja) 2003-03-31 2004-11-11 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 気道内投与剤
AR046071A1 (es) 2003-07-10 2005-11-23 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos
CN101506659B (zh) * 2006-09-12 2012-12-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗药物抗体测定法
WO2008125903A2 (en) * 2006-12-12 2008-10-23 Chaim Sheba Medical Center Method of inhibiting an undesired immune response
JP2010527005A (ja) 2007-05-07 2010-08-05 ワイス・エルエルシー 抗炭水化物抗体によって生じるイムノアッセイにおける妨害の除去
BRPI0821267A2 (pt) * 2007-12-15 2015-06-16 Hoffmann La Roche Ensaio distintivo
AU2008348252A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Method and kits for detecting antibodies against therapeutic antibodies
WO2009117791A2 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Katholieke Universiteit Leuven Mucosal gene signatures
SI2564202T1 (sl) * 2010-04-29 2015-12-31 Theradiag Sa Metode za odkrivanje protiteles proti zdravilu

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005017529A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-24 Genentech, Inc. Assay for human anti cd20 antibodies and uses therefor
JP2007500844A (ja) * 2003-07-29 2007-01-18 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヒト抗ｃｄ２０抗体のアッセイとその用途
WO2007101661A1 (en) * 2006-03-09 2007-09-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-drug antibody assay
JP2009529662A (ja) * 2006-03-09 2009-08-20 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗薬物抗体アッセイ法
WO2010042031A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 Gyros Patent Ab Semi-sequential assay for detection of an analyte in a sample
JP2012505402A (ja) * 2008-10-07 2012-03-01 ユィロス・パテント・アクチボラグ 試料中のアナライトの検出のための半逐次アッセイ

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PATTON AARON: "AN ACID DISSOCIATION BRIDGING ELISA FOR DETECTION OF ANTIBODIES DIRECTED 以下備考", JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, vol. V304 N1-2, JPN5013006157, 1 September 2005 (2005-09-01), NL, pages 189 - 195, ISSN: 0002931858 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016536587A (ja) * 2013-10-31 2016-11-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 中和抗体を検出するための競合リガンド結合アッセイ
US10261094B2 (en) 2013-10-31 2019-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Competitive ligand binding assay for detecting neutralizing antibodies
JP2017502285A (ja) * 2013-12-20 2017-01-19 フアデイア・アー・ベー 抗体の分析
JP2017532570A (ja) * 2014-11-05 2017-11-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ エフェクター機能抑制型ヒトまたはヒト化薬物抗体に対する抗薬物抗体の決定方法
JP2020170001A (ja) * 2014-11-05 2020-10-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ エフェクター機能抑制型ヒトまたはヒト化薬物抗体に対する抗薬物抗体の決定方法
US11340234B2 (en) 2014-11-05 2022-05-24 Hoffmann-La Roche Inc. Method for the determination of anti-drug antibodies against an effector function suppressed human or humanized drug antibody

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