JP2013522216A - 非水性高濃度減粘懸濁製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、非水性高濃度減粘懸濁製剤、並びにその製造及び使用方法に関する。

Description

（関連出願の相互参照）
本願は、２０１０年３月９日出願の米国仮出願第６１／３１１，８９６号に対する優先権を主張し、これを参照することにより本明細書に組み込む。

（発明の分野）
本発明は、非水性高濃度減粘懸濁製剤、並びにその製造及び使用方法に関する。

モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、癌、感染性疾患、炎症、及び自己免疫疾患等の様々なヒトの疾患を治療するための重要なタンパク質に基づく治療法になってきている。現在、２０を超えるモノクローナル抗体製品が、米国食品医薬品局によって承認されており、現在臨床試験で評価されている全ての製剤のうちの約２０％がｍＡｂである（Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８：６８６〜７０６，２００６）。

抗体は、例えば、静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、又は筋肉内（ＩＭ）注射等の非経口経路を介して投与することができる。ＳＣ又はＩＭ経路は、治療コストを低減し、且つ投与中の患者及び医療提供者の利便性を向上させる。有効且つ薬学的に許容可能であるために、非経口製剤は、好ましくは、無菌、安定、注射可能、注入可能、且つ非刺激性であるべきである。これら特徴により、製造、保存、及び使用の要件が生じ、これらが注射可能な製剤、特に高濃度のタンパク質を有する製剤の剤形を開発するのを困難にしている。

任意のタンパク質治療と同様に、抗体は、凝集、変性、架橋、脱アミド化、異性化、酸化、及び切断等の物理的及び化学的不安定性に曝される（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９６：１〜２６，２００７）。したがって、抗体の安定性にとって重要な要因を同定するための製剤の開発は、商業的に実現可能な抗体医薬の開発において最も重要である。

高濃度の抗体製剤の投与は、患者において治療的濃度に達するために１用量当たり典型的に１００ｍｇ〜１ｇのタンパク質を必要とするので、ＳＣ又はＩＭ注射が少量（典型的に０．５〜２ｍＬ）を必要とすることは、更なる製剤の課題を提起する。高濃度のタンパク質製剤は、多くの場合、タンパク質の凝集を増加させ、安定性を低下させ、粘度を上昇させ、射出性を損なわせ、且つ加工、製造、及び保存中に悪影響を生じさせる（Ｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３：１３９０〜１４０２，２００４）。

ＳＣ又はＩＭ経路により投与される現在市販されているモノクローナル抗体製品は、通常、凝集を防ぎ、安定性を改善するためにマンニトール、スクロース、又はポリソルベート８０等の賦形剤又は界面活性剤と共に、リン酸バッファ又はＬ−ヒスチジンバッファ等の水性バッファ中で製剤化される。報告されている抗体濃度は、水性製剤中最高１００ｍｇ／ｍＬである（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９６：１〜２６，２００７）。水性製剤の粘度は、塩（米国特許第７，６６６，４１３号）又は有機酸若しくは無機酸（米国特許第７，７４０，８４２号）の添加により低下する。

非水性抗体又はタンパク質製剤が記載されている。国際公開第２００６／０７１６９３号は、増粘剤（ポリビニルピロリドン、ＰＶＰ）及び溶媒（安息香酸ベンジル（ＢＢ）又はＰＥＧ４００）を有する製剤中における最高１００ｍｇ／ｍＬのモノクローナル抗体の非水性懸濁剤について記載している。国際公開第２００４／０８９３３５号は、ＰＶＰ、グリコフロール（ＧＦ）、ＢＢ、ベンジルアルコール（ＢＡ）、又はＰＥＧ４００を含有する約１００ｍｇ／ｍＬの非水性リゾチーム懸濁製剤について記載している。米国特許出願公開第２００８／０２２６６８９Ａ１号は、１００ｍｇ／ｍＬのヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）単相、３ビヒクル成分（ポリマー、界面活性剤、及び溶媒）の非水性粘性製剤について記載している。米国特許第６，７３０，３２８号は、タンパク質製剤用の低反応性の非水性、疎水性、非極性ビヒクル（ペルフルオロデカリン等）について記載している。これら製剤は、例えば、加工、製造、及び射出を妨げる高粘度、製剤中における複数のビヒクル成分の存在、並びに未だ承認されていないポリマーを使用することに関連する潜在的な規制上の課題のために最適ではない。

したがって、改善された高濃度の非水性製剤を開発する必要がある。

本発明の１つの実施形態は、疎水性剤及び減粘剤を含むビヒクルと、生物活性分子とを含む非水性高濃度懸濁製剤である。

本発明の別の実施形態は、ゴマ油及びオレイン酸エチルを含むビヒクルと、生物活性分子とを含む非水性高濃度懸濁製剤である。

本発明の別の実施形態は、疎水性剤を含むビヒクル中に５０ｍｇ／ｍＬ以上のタンパク質を含有する製剤の射出力を約４５ニュートン（Ｎ）以下に低下させる方法であって、少なくとも２８体積％の減粘剤を、疎水性剤を含むビヒクルに添加すること；又は約２μｍ〜１３μｍの粒度を有するタンパク質粒子を利用して製剤を調製することを含み、前記射出力が、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を用いて測定される方法である。

本発明の別の実施形態は、生物活性分子の非水性高濃度懸濁製剤を製造する方法であって、生物活性分子を提供する工程と、疎水性剤を提供する工程と、減粘剤を提供する工程と、該疎水性剤と該減粘剤とを混合してビヒクルを形成する工程と、形成されたビヒクルに該生物活性分子を添加する工程とを含む。

＋４０℃で１週間及び４週間保存した抗−ＴＮＦα ｍＡｂ懸濁製剤の安定性。抗体濃度は、各製剤中の重量％（％ｗ／ｗ）として示す。 製剤の射出力（Ｎ）は、製剤中の減粘剤の量が増加するとともに低下する。ＢＳＡ製剤。 製剤の射出力（Ｎ）は、製剤中の減粘剤の量が増加するとともに低下する。抗−ＴＮＦα ｍＡｂ製剤。 射出力及び粘度は、製剤中の抗ＴＮＦα ｍＡｂ濃度が上昇するとともに上昇する。 射出力及び粘度は、製剤中の抗ＴＮＦα ｍＡｂ濃度が上昇するとともに上昇する。 射出力及び粘度は、製剤中のＢＳＡ濃度が上昇するとともに上昇する。 抗ＴＮＦα ｍＡｂ製剤の射出力と粘度との相関。２０％抗ＴＮＦα ｍＡｂを含む製剤。 抗ＴＮＦα ｍＡｂ製剤の射出力と粘度との相関。試験した全ての抗ＴＮＦα ｍＡｂ製剤。 製剤中のタンパク質濃度及び粒度に対する射出力の依存性ビヒクル：オレイン酸エチル（ＥＯ）／ゴマ油（ＳＯ）／５０／５０ 剪断速度の上昇は、高濃度タンパク質製剤の粘度を低下させることができる。ビヒクルの選択が剪断力に対する粘度の依存性に影響を与える。抗ＴＮＦα ｍＡｂ ＥＯ／ＳＯ／５０／５０製剤。 剪断速度の上昇は、高濃度タンパク質製剤の粘度を低下させることができる。タンパク質濃度が剪断速度に対する粘度の依存性に影響を与える。抗ＴＮＦα ｍＡｂ ＥＯ／ＳＯ／５０／５０製剤。 射出力に対する射出速度の効果。製剤中の様々な濃度のＢＳＡ粒子。 射出力に対する射出速度の効果。ＥＯビヒクルにおける様々なサイズのＢＳＡ粒子。 射出力に対する射出速度の効果。ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中の様々な濃度の抗ＴＮＦα ｍＡｂ。

特許及び特許出願を含み、それらには限定されない全ての刊行文献は、本明細書への参照により、完全に説明されているごとくに、本願に包含される。

本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことが理解される。別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。

本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の試験を実施するために使用できるが、例示となる材料及び方法を本明細書に記載する。本発明の記載及び請求には、以下の用語が使用される。

「疎水性剤」は、本明細書で使用するとき、０〜１３の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する物質を指す。例示的な疎水性剤は、植物油、８〜２４個の炭素を有する脂肪酸、ワックス、生分解性ポリマー、及び両親媒性物質である。例示的な植物油は、アーモンド油、アニス油、杏仁油、ラッカセイ油、アルガン（argan）油、アボカド油、ルリヂサ油、カヤプト油、キャノーラ油、カラウェー油、カッシア油、ヒマシ油、桂皮油、シトロネラ油、丁子油、ココナッツ油、コリアンダー油、コーン油、綿実油、ユーカリ油、月見草油、ウイキョウ油、ゼラニウム油、グレープシード油、ヘーゼルナッツ油、大麻油、ホホバ油、杜松油、ラベンダーオイル、レモン油、マカダミア油、メース油、ラルーカ油、ニーム油、橙花油、ニアウリ油、ニクズク油、オリーブ油、オレンジ油、パーム油、パーム核油、松根油、ケシ油、プレジューム油、パンプキンシード油、菜種油、米糠油、ローズヒップ油、ローズマリーオイル、ヘンルーダ油、ベニバナ油、ゴマ油（ＳＯ）、スペアミント油、大豆油、ヒマワリ油、タイム油、クルミ油、又は麦芽油である。例示的な脂肪酸は、様々な鎖長を有するカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、リノール酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、及びグリセリド（モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド）である。例示的な生分解性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリε−カプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシブチレート（ＰＨＢ）、ポリジオキサノン、ポリ酸無水物、ポリトリメチレンカーボネート、及びポリホスファゼンである。例示的な両親媒性物質は、ポリエトキシレート化ヒマシ油又はその誘導体（総じて「ポリエトキシレート化ヒマシ油」と称される）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ポリエチレンオキシド（「ＰＥＯ」）−ポリプロピレンオキシド（「ＰＰＯ」）−ＰＥＯのブロックコポリマー、ＰＰＯ−ＰＥＯ−ＰＰＯのブロックコポリマー、（ＰＥＯ−ＰＰＯ）₂−（ＰＰＯ−ＰＥＯ）₂等のＰＥＯ−ＰＰＯの四官能性ブロックコポリマー、又は（ＰＰＯ−ＰＥＯ）₂−（ＰＥＯ−ＰＰＯ）₂等のＰＰＯ−ＰＥＯの四官能性ブロックコポリマーである。例示的な疎水性剤及びその特徴を表１に示す。粘度は、括弧内に記載しない限り２５℃で測定する。

用語「粘度」は、本明細書で使用するとき、流動に対する流体抵抗の測定値である。粘度は、「運動粘度」であっても「絶対粘度」であってもよい。「運動粘度」は、重力の影響下における流体の抵抗流の測定値である。等体積の２つの流体を同一の毛細管粘度計に入れ、重力により流動させたとき、粘稠な流体は、より粘性の低い流体よりも長い時間をかけて毛細管を流れる。運動粘度の大きさは、Ｌ²／Ｔ（式中、Ｌは長さであり、Ｔは時間である）。一般的に、運動粘度は、センチストークス（ｃＳｔ）で表される。運動粘度の国際単位系（ＳＩ）単位は、ｍｍ²／ｓであり、これが１ｃＳｔである。「絶対粘度」は、時に「動的」又は「単純粘度」とも呼ばれ、運動粘度と流体密度との積である。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル−秒（ｍＰａ−ｓ）であり、１ｃＰ＝１ｍＰａ−ｓである。粘度は、例えば、所与の剪断速度において粘度計を用いて測定することができる。また、粘度は、図４に示す通り、粘度と正の相関を示す射出力によっても評価することができる。

「剪断速度」は、本明細書で使用するとき、物質が変形する速度を意味する。従来のニュートン流体では、粘度は、剪断速度に依存しない。非ニュートン流体では、剪断速度の上昇とともに粘度が低下又は上昇する、例えば、流体は、それぞれ「ずり減粘」又は「ずり増粘」である。

「射出力」は、本明細書で使用するとき、Ｚｗｉｃｋ／Ｒｏｅｌｌ（モデル２００５）試験機（Ｚｗｉｃｋ Ｒｏｅｌｌ，Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）を用いて、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を通してビヒクル又は製剤を押し出すのに必要なニュートン（Ｎ）で測定される力を意味する。例示的な注射器は、ＢＤ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＪ）注射器０．５インチの２６ １／２ゲージの針を備える１ｍＬの剛性針シールドガラス予充填可能注射器であるＢＤ Ｈｙｐａｋ ＳＣＦ（商標）（製品名ＰＩＲ６−００１ ＳＣＦＦＩＭＬＬ ２６ＧＡ １／２ ＲＮＳＦＭ２７ ＥＢ ＬＴＰ．８２６８５８９）である。

「射出性」は、本明細書で使用するとき、注射中にゲージ針を備える注射器を通る非水性高濃度懸濁製剤の射出性能を指す。射出性は、射出に必要な圧力又は力、流動の均一性、吸引品質、及び目詰まりしないこと等の要因を含む。本発明の製剤の射出性は、減粘剤を含有する製剤の射出力を、減粘剤を含まない同じ製剤と比較することにより評価される。減粘剤を含有する製剤の射出力の低下は、その製剤の射出性の改善を反映している。減粘剤を含有する製剤は、減粘剤を含まない同じ製剤と比較して射出力が少なくとも１０％、例えば、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％低下する場合、改善された射出性を有する。

「減粘剤」は、本明細書で使用するとき、ビヒクル又は製剤中に存在するとき、減粘剤を含まないビヒクル又は製剤の粘度又は射出力と比較して、ビヒクル又は製剤の粘度又は射出力を低下させる剤を指す。本発明の減粘ビヒクル又は製剤中に存在する減粘剤の量は、疎水性剤中の約０．２体積％〜９９．９体積％、例えば、１体積％、５体積％、１０体積％、１５体積％、２０体積％、２５体積％、３０体積％、３５体積％、４０体積％、４５体積％、５０体積％、５５体積％、６０体積％、６５体積％、７０体積％、７５体積％、８０体積％、８５体積％、９０体積％、９５体積％、９６体積％、９７体積％、９８体積％、又は９９体積％の減粘剤であり得る。減粘剤は、ビヒクル又は製剤の粘度又は射出力を少なくとも１０％、例えば、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％低下させることができる。例示的な減粘剤は、ジエチルセバケート、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エチルアルコール、オレイン酸エチル（ＥＯ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、ミリスチン酸イソプロピル、リノール酸、プロピオン酸、クエン酸トリエチル、プロピレングリコール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ポリエチレングリコール、ポリペルフルオロエーテル、フルオロカーボン（ハロタンメトキシフルラン、エンフルラン、イソフルラン、セボフルラン、及びデスフルラン等）、フッ化ケトン、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロアクリレート、ペルフルオロメタアクリレート、ベンジルアルコール、ラウリルアルコール、ペルフルオロデカリン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、グリコフロールポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アルキルケトン、クエン酸の低級アルキルエステル、ベンジルベンゾエート、メチルベンゾエート、エチルベンゾエート、ｎ−プロピルベンゾエート、イソプロピルベンゾエート、ブチルベンゾエート、イソブチルベンゾエート、ｓｅｃ−ブチルベンゾエート、ｔｅｒｔ−ブチルベンゾエート、及びイソアミルベンゾエートである。例示的な減粘剤の特徴を表２に示す。

減粘剤の添加により、減粘剤を含有しない対応するビヒクルと比較してビヒクルの粘度又は射出力が低下する場合、減粘剤を含有するビヒクルは「減粘ビヒクル」である。減粘ビヒクルを含む製剤は、「減粘製剤」である。粘度又は射出力を決定及び測定するために用いる方法にかかわらず、減粘ビヒクル又は製剤における粘度又は射出力の低下率は、減粘剤を含まない同じビヒクル又は製剤と比較したとき、所与の剪断速度においてほぼ同じままである。

用語「化学的安定性」とは、酸化、脱アミド化、又は加水分解等の化学的経路により生成される分解産物の割合が許容可能であることを意味する。製剤は、４℃で１８ヶ月後に５％以下しか分解産物が形成されない場合、化学的に安定であるとみなされる。

用語「物理的安定性」とは、生物活性剤により形成される凝集体（例えば、ダイマー、トリマー、又は他のマルチマー凝集体）の割合が許容可能であることを意味する。製剤は、４℃で１８ヶ月後に約５％以下しか凝集体が形成されない場合、物理的に安定であるとみなされる。

用語「安定的製剤」又は「安定である」とは、本明細書で使用するとき、＋４℃で１８ヶ月間、又は高温における等価条件で保存した後、例えば、＋４０℃で１ヶ月間保存した後、製剤中に少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％物理的に安定である生物活性分子が残っていることを意味する。例示的な安定である製剤は、＋４０℃で１ヶ月間保存した後、抗体の少なくとも９８％がモノマー形態で保持される３０％抗ＴＮＦα ｍＡｂ ＥＯ／ＳＯ／５０／５０製剤である。

用語「生物活性分子」は、タンパク質、抗体、ペプチド、ヌクレオチド等を含む。合成的に生成される、天然に由来する、又は組換えにより生成される部分も、この用語に含まれる。生物活性分子は、生物活性分子のアナログ、誘導体、アゴニスト、アンタゴニスト、又は薬学的に許容可能な塩であってもよい。

用語「タンパク質」は、ポリペプチドを形成するためにペプチド結合によって結合された少なくとも２つのアミノ酸残基を含む分子を意味する。アミノ酸が５０未満の小タンパク質は「ペプチド」と呼ばれる場合がある。タンパク質はまた、「ポリペプチド」とも呼ばれる場合がある。

用語「抗体」は、抗体全体及びその任意の断片を含む。抗体断片は、抗体の重鎖又は軽鎖のいずれかに由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域（Ｖ）、定常領域（Ｃ）、又はフレームワーク領域（ＦＲ）等の免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む。免疫グロブリンは、重鎖Ｃドメインのアミノ酸配列によって、５つの主なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、ＩｇＡ₁、ＩｇＡ₂、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ₂、ＩｇＧ₃、ＩｇＧ₄というアイソタイプに更に細かく分類される。

抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）₂、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、又はダイアボディであってもよい。抗体は、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）、キメラ抗体、ヒト化抗体、若しくはヒト抗体、二量体、四量体、又は多量体であってもよい。上述の抗体断片の構造、並びに抗体及びその断片の調製及び使用技術は、当該技術分野において周知である（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ １９８７〜２００１；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２^nd Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９；Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９；Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ １９９４〜２００１；Ｃｏｌｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９７〜２００１；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５〜７，１９７５；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８６：１００２９〜３３，１９８９；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８１６，５６７）。

「高濃度」とは、本明細書で使用するとき、製剤中の生物活性分子の最終濃度が５０ｍｇ／ｍＬ以上であることを意味する。生物活性分子の濃度は、５０〜１０００ｍｇ／ｍＬ、５０〜５００ｍｇ／ｍＬ、又は５０〜２５０ｍｇ／ｍＬであり得る。

「非水性」は、本明細書で使用するとき、ビヒクルが、生理学的ｐＨ（約７．４）及び約２５℃で０．１ｍｇ／ｇ未満という低い水溶解性を有することを意味する。

「懸濁製剤」は、本明細書で使用するとき、生物活性分子がビヒクルに対して不溶性であることを意味する。

「粒度」は、本明細書で使用するとき、周知の粒度測定器、例えば、レーザー回折粒度分析器を用いることにより求められる、製剤中の生物活性分子の微粒子の平均直径（Ｄ５０）を意味する。

本発明は、非経口経路により抗体等の生物活性分子を投与するために用いることができる非水性高濃度減粘懸濁製剤について記載する。高タンパク質濃度製剤に特徴的な高粘度により、注射器から患者に必要な用量を注射するのが困難になる場合がある。本発明の製剤は、許容可能な治療的有効性を達成するために必要な用量を提供する高濃度の生物活性分子を維持しながら、製剤の射出力により測定される、改善された射出性を有する。本発明の製剤は、４５ニュートン（Ｎ）以下の射出力を有し、これは、手を傷つけることなく、大部分の医療従事者及び患者が手動注射を用いて注射器に及ぼすことができる最大力である。許容可能な射出力のレベルは、特定の薬物用途及び製品で用いられる送達装置に依存する。幾つかの装置は、他のものよりも大きな射出力を生じさせることができる。

特に指定しない限り、製剤中の生物活性分子の濃度は、重量％（％ｗ／ｗ）として示され、ビヒクル中の減粘剤の量は、体積％（％ｖ／ｖ）として示される。ビヒクル組成物は、減粘剤及び疎水性剤の体積比％（％ｖ／ｖ）として示される。例えば、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０は、５０体積％のオレイン酸エチル（ＥＯ）と５０体積％のゴマ油（ＳＯ）とを有するビヒクルである。

本発明の１つの実施形態は、
ａ．疎水性剤及び減粘剤を含むビヒクルと、
ｂ．生物活性分子と、を含む非水性高濃度懸濁製剤である。

ビヒクルは、液体形態の疎水性剤と減粘剤とを合わせた混合物を加熱して、単相材料を形成することにより作製することができる。示差走査熱量測定等の標準的な方法を用いて、単相材料が形成されるように混合されているビヒクル中に含まれる成分を検証することができる。例示的な疎水性剤及び減粘剤は、上記の通りである。ゴマ油に基づく例示的なビヒクルを表４に示す。減粘剤が、選択された疎水性剤と混和する限り、ゴマ油は、他の例示的な疎水性剤と置換してもよい。

任意の好適な粒子形成法を用いて、本発明の製剤中に含まれる微粒子状生物活性分子を提供することができる。例示的な周知の方法としては、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥、凍結乾燥、デシケーション、粉砕、ミリング、沈殿、超臨界流体技術、又は均質化プロセスが挙げられる。これら方法により調製される粒子は、Ｗａｒｉｎｇブレンダー中で更に粉砕してもよく、所定のメッシュサイズの一連の篩に通してもよい。得られる生物活性分子の粒子のサイズは、例えば、０．２〜２５０μｍ、０．２〜１００μｍ、０．２〜５０μｍ、０．２〜２０μｍ、又は２〜１３μｍであってよい。粒度は、周知の粒度測定器、例えば、レーザー回折粒度分析器（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ２０００，Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いることにより求められる製剤中の生物活性分子の微粒子の平均直径（Ｄ５０）として、又は粒子が通過しない篩のメッシュの直径として表すことができる。

生物活性分子は、純粋な形態で提供されてもよく、生物活性分子の治療的有効性に干渉しない賦形剤とともに製剤化されてもよい。例えば、非水性製剤中の生物活性分子の凝集及び酸化を軽減したり、非水性ビヒクルから使用環境への生物活性分子の移動を促進したり、生物活性分子の粒子への成形性を改善したりするために賦形剤を使用することが望ましい場合がある。このような賦形剤は、例えば、炭化水素、非イオン性界面活性剤、バッファ、塩、酸化防止剤、及び／又はアミノ酸、保存剤等である。生物活性分子は、例えば、賦形剤として炭化水素、非イオン性界面活性剤、及びバッファと共に製剤化してもよい。例示的な炭化水素は、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びデキストランである。例示的な非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＰＳ−２０）、ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｂｒｉｊ−３５、Ｂｒｉｊ−３０、及びプルロニックＦ１２７である。生物活性分子を望ましいｐＨを有するバッファ中で製剤化した後、酸化、脱アミド化、加水分解、変性、又は凝集を防ぎ、且つ製剤化プロセス及び保存中の生物活性分子の生物活性を維持するためにタンパク質粒子を作製してもよい。例示的なバッファは、酢酸、クエン酸、ギ酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、ＨＥＰＰＳＯ、ＨＥＰＥＳ、ホウ酸、及びグリシンバッファである。生物活性分子及び賦形剤は、溶液に溶解させてもよく、これを例えば凍結乾燥、噴霧乾燥、又は噴霧凍結乾燥させて、生物活性分子の粒子を作製する。

生物活性分子の懸濁製剤を作製するために、賦形剤を含む又は含まない固体状態（例えば、粉末、結晶質又は非晶質状態）の生物活性分子の乾燥微粒子材料をビヒクル内で撹拌することにより分散させる。製剤中に含まれる微粒子状生物活性分子の量は、例えば、生物活性分子の効力及び投与経路に依存して変動し得る。例えば、生物活性分子は、製剤の約０．１％〜７０％（％ｗ／ｗ）を占めることができ、ビヒクルは、約３０％〜９９．９％（％ｗ／ｗ）を占める。生物活性分子は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜１０００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ、又は５０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬの濃度でビヒクル中に懸濁し得る。例示的な製剤は、６５ｍｇ／ｍＬの抗ＴＮＦα ｍＡｂ、５５ｍｇ／ｍＬのスクロース、１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、０．０１％のＰＳ−８０、ｐＨ ５．５溶液を噴霧乾燥させることにより作製される抗ＴＮＦα ｍＡｂ粒子４０％（％ｗ／ｗ）と、ゴマ油及びオレイン酸エチル（体積比５０：５０）を有するビヒクル６０％（％ｗ／ｗ）とからなる。生物活性分子はこのような高濃度で存在するので、非水性懸濁製剤を用いて低効力の生物活性分子を送達することができる。生物活性分子は、固体形態で維持されるので、貯蔵寿命が長いと予測される。

本発明のビヒクル及び製剤の粘度は、レオメータ等の周知のレオロジー測定器を用いて測定することができる。ビヒクル又は製剤の粘度は、ＡＲ２０００レオメータ（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用い、測定された剪断速度間の平均粘度を計算することにより、例えば２５℃において２００〜５００ｓ^-1の剪断速度の関数として、又は例えば２５０ｓ^-1の規定の剪断速度の関数として測定することができる。また、本発明のビヒクル及び製剤の粘度は、粘度と正の相関を示す射出力を測定することにより評価することもできる（図４）。射出力は、例えば、調製した製剤を、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器にロードし、射出速度を例えば２５０ｍｍ／分に設定し、Ｚｗｉｃｋ／Ｒｏｅｌｌ（モデル２００５）試験機（Ｚｗｉｃｋ Ｒｏｅｌｌ，Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）を用いてピストン移動力を記録することにより測定することができる。例示的な注射器は、ＢＤ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＪ）注射器０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える１ｍＬの剛性針シールドガラス予充填可能注射器であるＢＤ Ｈｙｐａｋ ＳＣＦ（商標）（製品名ＰＩＲ６−００１ ＳＣＦ１ＭＬＬ ２６ＧＡ １／２ ＲＮＳＦＭ２７ ＥＢ ＬＴＰ．８２６８５８９）。粘度又は射出力の低下率（％）は、本発明の製剤の粘度及び射出性における減粘剤の効果を評価するために測定される。例えば、本発明の非水性高濃度タンパク質製剤は、減粘剤を含まない製剤と比較して、粘度を８１％又は射出力を７６％低下させることができる。

剪断速度を変化させることにより、本発明の非水性高濃度懸濁製剤の粘度を更に低下させ、それによって製剤の射出力を改善することができる。本発明の製剤は、剪断速度に対する粘度の依存性を分析することにより、そのニュートン又は非ニュートン的特徴について分析することができる。製剤の非ニュートン的特徴は、製剤中のタンパク質濃度及び減粘剤の量に依存し得る。本発明の製剤中のタンパク質濃度を上昇させることにより、製剤の特徴を非ニュートン的ずり減粘にシフトさせることができるので、製造中に剪断速度を上昇させると、これら製剤の粘度を低下させ、加工性を改善することができる。製剤中の減粘剤の量を増加させることにより、製剤の特徴をニュートン的にシフトさせることができ、この場合、剪断速度を変更させても、粘度に対して僅かな影響しか与えない又は全く影響を与えない。本発明の製剤の調製は、粘度に対する剪断速度の影響を評価し、剪断速度を例えば１０〜１０００ １／ｓ又は５０〜５００ １／ｓに調整して、適切な粘度値の製剤を得ることを含む。

本発明の生物活性分子の製剤化は、水性製剤よりも改善された安定性を示し、＋４０℃で１ヶ月間保存した後も生物活性分子の少なくとも９５％を安定である形態で保持する。製剤の安定性は、周知の方法を用いて測定することができる。例えば、タンパク質の凝集体の量は、濁度の目視観測により、特定の波長における吸光度を測定することにより、サイズ排除クロマトグラフィー（タンパク質の凝集体は、ネイティブな活性状態のタンパク質と比較して異なる画分に溶出する）、ＨＰＬＣ、又は他のクロマトグラフィー法により測定することができる。例えば、変性温度を測定するための示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、又はタンパク質のモル楕円率を測定する円偏光二色性測定（ＣＤ）を含む立体構造の変化を測定する他の方法を用いてもよい。

本発明の別の実施形態は、ゴマ油及びオレイン酸エチルを含むビヒクルと、生物活性分子とを含む非水性高濃度懸濁製剤である。

本発明の別の実施形態は、疎水性剤を含むビヒクル中に５０ｍｇ／ｍＬ以上のタンパク質を含有する製剤の射出力を約４５ニュートン（Ｎ）以下に低下させる方法であって、少なくとも２８体積％の減粘剤を、疎水性剤を含むビヒクルに添加する工程、又は約２μｍ〜１３μｍの粒度を有するタンパク質粒子を利用して製剤を調製する工程を含み、該射出力が、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を用いて測定される方法である。

本発明の非水性高濃度懸濁製剤の射出力を４５ニュートン（Ｎ）以下で維持するために、幾つかのパラメータを変化させてもよい。これらパラメータは、例えば、製剤中のタンパク質濃度、粒度、及び減粘剤の量、並びに特定のゲージの針を有する選択された注射器に用いられる射出速度である。４５Ｎ以下の射出力を有する製剤中の減粘剤の量は、例えば、０．２％〜９９．９％であってよく、タンパク質の量は、１〜４０％（％ｗ／ｗ）であってよく、粒度は、約２μｍ〜１３μｍであってよい。疎水性剤、減粘剤、及び生物活性分子を含有し、４５Ｎ未満の射出力を有する例示的な非水性製剤は、粒度が約２μｍ〜１３μｍであるタンパク質濃度が少なくとも２０％（％ｗ／ｗ）であり、ビヒクル中のＥＯが少なくとも２８％である製剤；ＥＯ／ＳＯ／２８／７２、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０又は１００％ ＥＯ中２０％（％ｗ／ｗ）の２μｍのＢＳＡ粒子懸濁液；ＥＯ／ＳＯ／５０／５０、ＥＯ／ＳＯ／７３／３０、ＥＯ／ＳＯ／８５／１５、又は１００％ ＥＯ中２０％（％ｗ／ｗ）の抗ＴＮＦα ｍＡｂ懸濁液；ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中３０％及び４０％（％ｗ／ｗ）の抗ＴＮＦα ｍＡｂ懸濁液；ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中４０％の１３μｍのＢＳＡ粒子懸濁液；射出速度５０ｍｍ／分の１００％ ＥＯ中２μｍのＢＳＡ粒子５０％（％ｗ／ｗ）；及び射出速度５０〜２５０ｍｍ／分の５０％（％ｗ／ｗ）の１３μｍのＢＳＡ粒子である。

本発明の別の実施形態は、生物活性分子の非水性高濃度懸濁製剤を製造する方法であって、生物活性分子を提供する工程と；疎水性剤を提供する工程と、減粘剤を提供する工程と、該疎水性剤と該減粘剤とを混合してビヒクルを形成する工程と、工程ｄ．で形成されたビヒクルに、５０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で該生物活性分子を添加する工程とを含む。

本発明の製剤は、周知の方法を用いて注射器又は任意の好適な少量容器に予めロードしておいてもよく、したがって、混合、再構成、又は任意の更なる調製を行うことなく射出の準備が整っている。予めロードされている注射器における本発明の製剤は、手で注射してもよく、あるいは、自動注射ペン、自動注射器、パッチポンプを含む様々な自動注射ポンプ、及び無針射出装置等の自動注射器を用いて注射してもよい。本発明の製剤は、皮下（ＳＣ）、又は筋肉内（ＩＭ）注射等の非経口経路によりホストに導入することができる。製剤は、長さ０．５〜５．１ｃｍ（２インチ）、２０〜３１ゲージ、内径１３３〜６０４マイクロメートルの針を通して投与することができる。注射の準備が整っている本発明の非水性高濃度懸濁製剤は、好ましい局所耐容性（又は生体適合性）、低い射出力、及び製剤の柔軟性を有する。注射の準備が整っている非水性懸濁製剤における生物活性分子の高濃度は、生物活性分子の分子構造及び分子量に関係なく得ることができる。

以下の具体的及び非限定的な実施例を参照して、本発明を説明する。

（実施例１）
非水性ビヒクルのための減粘剤のスクリーニング
減粘剤を０．２体積％〜５０体積％の濃度でゴマ油に添加する。全ての減粘剤は、ＧＲＡＳ（一般に安全であると認められている）材料であった。２０ｍＬの密閉シンチレーションバイアルに混合物を入れ、３０秒間ボルテックスし、任意の不混和性について目視検査した。減粘剤の幾つかは、ゴマ油と混和しないことが見出されたので、更なるスクリーニングは行わなかった。表３は、例示的な減粘剤とゴマ油との混和性を示す。Ｙ及びＮは、それぞれ、試験した減粘剤が試験した濃度でゴマ油と混和性であった又はなかったことを示す。

オレイン酸エチル、リノール酸、及びプロピオン酸等の幾つかの減粘剤は、濃度の試験をした範囲全体にわたってゴマ油と混和性であったが、プロピレングリコールは全て混和性ではなかった。幾つかの剤は、特定の比の減粘剤及びゴマ油でのみ、ゴマ油と混和性であった。

ビヒクルの粘度の測定については、一旦均質な溶液を形成し、２９０μＬの試験した各ビヒクルを４０ｍｍ、１°アクリル製円錐形状を備えたＡＲ２０００レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にピペットで入れた。剪断応力は、２５℃で５００ｓ^-1以下の剪断速度の関数として記録された。ソフトウェアによって粘度を自動的に計算し、２００〜５００ｓ^-1の粘度の平均を報告した。

各サンプルは、トリプリケートで分析した。減粘剤を含まないゴマ油を対照として用いた。表４は、生成した例示的なビヒクルについての平均粘度値を示す。

得られたビヒクルの粘度の低下は、添加した減粘剤の体積又は重量の割合に比例していた。ゴマ油（ＳＯ）、オレイン酸エチル（ＥＯ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、及びイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）は、市販されている非経口製品であるので、更なる試験のために選択した。

（実施例２）
非水性高濃度低粘度製剤の調製
生物活性分子の粒子の調製
凍結乾燥：
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）及びヒト抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を６．５ｍＭのリン酸ナトリウムバッファ（ｐＨ ６．０）に６５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で溶解させた。任意で、スクロース等の薬学的に許容可能な賦形剤及びＴｗｅｅｎ ８０（又はポリソルベート８０、ＰＳ−８０）を、それぞれ最終溶液中のスクロース及びＴｗｅｅｎ ８０濃度が０〜９．０％及び０〜０．０１％（％ｗ／ｖ）になるようにタンパク質溶液に添加した。標準的なプロトコールを用いてタンパク質溶液を凍結乾燥させた。

凍結乾燥したタンパク質又はｍＡｂ粉末をＷａｒｉｎｇブレンダーで更に粉砕し、所定のメッシュサイズの一連の篩に通した。粉砕／篩プロセスにより、粒度０．２〜２５０μｍのタンパク質又はｍＡｂ粒子が生成された。

噴霧乾燥：
噴霧乾燥プロセスを用いてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）及びヒト抗ＴＮＦαモノクローナル抗体の粒子を調製した。以下のプロセスパラメータで、Ｙａｍａｔｏ Ｍｉｎｉ噴霧乾燥機を用いて製剤（表５）を噴霧乾燥させた：空気の噴霧：１３．８ｋＰａ（２ｐｓｉ）、入口温度：１２０℃、吸引器ダイアル：７．５、溶液ポンプ：２〜４、主空気弁：２７５．８〜３１０．３ｋＰａ（４０〜４５ｐｓｉ）。噴霧乾燥された生物活性分子微粒子の平均直径（Ｄ５０）を、レーザー回折粒度分析器（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ２０００，Ｍａｌｖｅｒｎ）により測定し、１〜２０μｍの粒度範囲の粒子を得た。例示的な調製品を表５に示す。

非水性ビヒクルの調製
ゴマ油を酸化アルミニウム粉末で洗浄して過酸化物濃度を低下させ、次いで、滅菌した０．２μｍのＰＴＦＥフィルタを通して濾過した。０．２〜８５体積％（％ｖ／ｖ）の濃度で減粘剤をゴマ油に添加した、又は場合によってはゴマ油を用いなかった。幾つかの製剤では、約０．２〜１０体積％でエタノールをビヒクルに添加した。混合物を密閉容器に入れ、室温で１時間混合して、均質な溶液を形成した。表４は、調製した非水性ビヒクルを示す。

製剤の調製
調製された非水性ビヒクルを、凍結乾燥又は噴霧乾燥により調製された生物活性分子の粒子と混合した。ステンレススチールのスパチュラブレードを備える撹拌機を用いて、５０〜１０００ｒｐｍで５〜３０分間室温にて、粒子をビヒクルにブレンドした。約１〜５０重量％の粒子をロードして、最終製剤中のタンパク質濃度を約１０〜５００ｍｇ／ｍＬにした。均質な懸濁液を形成した後、製剤をガラス注射器に充填した。注射前、冷蔵温度（４℃）で製剤を保存した。表６は、調製された製剤を示す。

（実施例３）
非水性ビヒクル中における凍結乾燥した生物活性分子の安定性
オレイン酸エチル（ＥＯ）又は中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ；ＬＡＢＲＡＦＡＣ（商標）Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ＷＬ １３４９，Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ）をゴマ油（ＳＯ）に２〜５０体積％の濃度で添加した。混合物を、密閉した２０ｍＬのシンチレーションバイアルに入れ、３０秒間ボルテックスした。混合が完了した後、凍結乾燥した抗ＴＮＦα抗体粉末を３ｍＬのバキュテイナーチューブに量り入れ、最終タンパク質含量が１０又は２０％（％ｗ／ｗ）になるように適切な量のビヒクルをチューブに添加したが、これは、それぞれ、５３．６又は１０７．２ｍｇ／ｍＬの抗ＴＮＦα抗体濃度に相当する。

短時間ボルテックスすることにより懸濁液を均質にし、次いで、チューブを密閉した。懸濁液を３７℃で保存した。１及び４週間保存した後、サンプルを抽出した。

簡潔に述べると、−２０℃に予め冷却されたアセトン／ジクロロメタンの１：１混合物１ｍＬをチューブに添加し、内容物を４℃で２０分間混合した。チューブを２９００ｇで４分間スピンさせ、上清を除去した。抽出プロセスを２回繰り返し、ＳｐｅｅｄＶａｃを用いてタンパク質のペレットを２時間乾燥させた。作用濃度が１０ｍｇ／ｍＬになるように、ペレットを移動相（０．２Ｍのリン酸バッファ、ｐＨ ６．８）に溶解させた。２０μＬの溶液を流速１ｍＬ／分の流速でＡｇｉｌｅｎｔ ＳＥＣ−ＨＰＬＣシステムに注入した。抗ＴＮＦα抗体のネイティブで、凝集し、断片化した形態をＢｉｏＳｉｌ ＳＥＣ２５０カラム（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）により分離し、サイズ排除クロマトグラフ（ＳＥＣ）において２１４及び２８０ｎｍの波長でモニタした。

抗ＴＮＦα抗体粒子を含有する試験した懸濁製剤の保存安定性を図１に示し、サンプル中に保持されているモノマー含量（例えば、ネイティブなｍＡｂ）の％として測定した。対照として、ＰＢＳ中に抗ＴＮＦαｍＡｂを含有する水性製剤（ｐＨ ７．４）を調製し、分析した。各非水性懸濁製剤は、水性製剤と比較してより高い安定性を示し、同じ応力条件におけるタンパク質モノマー含量の点で凍結乾燥させたタンパク質粉末と同等であった。減粘剤オレイン酸エチル（ＥＯ）のゴマ油への添加、又はＬａｂｒａｆａｃ（商標）Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ＷＬ １３４９（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）等の中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）へのゴマ油の置換は、４週間の保存時間内でタンパク質の安定性に影響を与えなかった。

（実施例４）
高濃度製剤の射出性は、ビヒクルの組成、タンパク質濃度、及び粒度によって影響を受ける。
ピストン移動力（例えば、射出力）の測定は、本発明の非水性高濃度懸濁製剤の射出性に対する様々なパラメータの効果を測定するためのアセスメントとして用いられた。

ビヒクル組成の効果
２０％（％ｗ／ｗ）ＢＳＡ及び２０％（％ｗ／ｗ）抗ＴＮＦα抗体製剤の射出性を、Ｚｗｉｃｋ／Ｒｏｅｌｌ（Ｍｏｄｅｌ ２００５）試験機を用いて、ゲージ針を通して懸濁液を押し出すのに必要な力を測定することにより評価した。水中１００ｍｇ／ｍＬのＢＳＡを噴霧乾燥させることによりＢＳＡ粒子を調製し、６５ｍｇ／ｍＬのタンパク質、５５ｍｇ／ｍＬのスクロース、１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、０．０１％のＰＳ−８０（ｐＨ ５．５）を噴霧乾燥させることにより、抗ＴＮＦα ｍＡｂ粒子を調製した。漸増量（体積による）の減粘剤オレイン酸エチル（０％、３％、９．５％、１７％、２０％、２５％、２８％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、又は１００％（％ｖ／ｖ））を含有するゴマ油と上述のタンパク質粒子とを混合することによりタンパク質製剤を調製した。次いで、調製した製剤を、ＢＤ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＪ）注射器０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える１ｍＬの剛性針シールドガラス予充填可能注射器であるＢＤ Ｈｙｐａｋ ＳＣＦ（商標）（製品名ＰＩＲ６−００１ ＳＣＦ１ＭＬＬ ２６ＧＡ １／２ ＲＮＳＦＭ２７ ＥＢ ＬＴＰ．８２６８５８９）にロードした。約０．５ｃｃの製剤を注射器に充填し、特に指定しない限り、射出速度を約２５０ｍｍ／分に設定し、ピストン移動力を記録した。射出試験は、室温で実施した。

ゴマ油（ＳＯ）中のオレイン酸エチル（ＥＯ）の量を増加させると、射出力が著しく低下し、それによって、２μｍ及び１３μｍの両方の粒度のタンパク質粒子の懸濁製剤の射出性が改善された。ＥＯ／ＳＯ／２８／７２中における２μｍのＢＳＡ粒子の２０％（ｗ／ｗ）（２００ｍｇ／ｍＬ）懸濁液の射出力は３５．３Ｎであり、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中では２１．５Ｎであった。後者は、減粘剤を含まないゴマ油対照（６４．６５Ｎ）と比較して６７％減少していた（図２Ａ）。１００％ＥＯビヒクルを用いると、射出力は１２．１Ｎに更に低下した。ゴマ油中のオレイン酸エチルの量を増加させた抗ＴＮＦα ｍＡｂ製剤でも、射出力の同様の低下が示された。例えば、ＳＯ中における２０％（ｗ／ｗ）抗ＴＮＦα ｍＡｂの射出力７１．３Ｎから、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中に３．１μｍの抗ＴＮＦα ｍＡｂ粒子を含む２０％（ｗ／ｗ）（１０８．６ｍｇ／ｍＬ）懸濁液の射出力は２９．５Ｎに低下し、ＥＯ／ＳＯ／７０／３０では２１．１Ｎに低下した（図２Ｂ）。結果は、ビヒクルに減粘剤を添加すると、射出力の低下により非水性高濃度懸濁製剤の射出性が著しく改善されることを示した。したがって、約４５Ｎ以下の射出力を有する非水性高濃度懸濁製剤は、ゴマ油ビヒクルを含有する製剤中のオレイン酸エチルの量を２８体積％以上に増加させることにより製造することができる。

タンパク質の濃度の効果
射出力は、非水性懸濁製剤中のタンパク質濃度によって影響を受けた。図３Ａは、製剤の射出力における、８．２μｍの抗ＴＮＦα粒子抗体濃度の増加（２０〜４０％（％ｗ／ｗ）；１０８．３〜２１６．７ｍｇ／ｍＬ）及び減粘剤の量の増加の複合効果を示す。Ｘ軸は、各実験で用いられた抗ＴＮＦα抗体の濃度を示す。ＥＯ／ＳＯ／５０／５０において最高３０％のｍＡｂ濃度を用いることにより、４２．８Ｎの射出力が得られた。この抗体濃度における射出力は、ビヒクルとして１００％ ＥＯを用いることにより２０．５Ｎまで低下させることができた。図３Ｂは、射出力及び粘度の両方における、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０製剤中の抗ＴＮＦα ｍＡｂ（０〜４０％（％ｗ／ｗ；０２１６．７ｍｇ／ｍＬ）の濃度上昇の効果を示す。図３Ｃは、１００％ ＳＯ、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０、及び１００％ ＥＯビヒクル中のＢＳＡ（粒度２μｍ、０〜４０％（％ｗ／ｗ）；０〜４００ｍｇ／ｍＬ）の濃度上昇の効果を示す。約４５Ｎ以下に射出力を低下させるために、製剤は、ビヒクル中に約２０％（％ｗ／ｗ）以下のタンパク質及び少なくとも２８％のＥＯ、ビヒクル中に３０％以下のタンパク質及び少なくとも５０％のＥＯ、又は１００％ ＥＯ中に約４０％以下のタンパク質のタンパク質濃度を含有し得る。また、実施した実験は、非水性高濃度懸濁製剤の射出力及び粘度が相関していることを示した。図４ａは、２０％（％ｗ／ｗ）抗ＴＮＦα ｍＡｂ懸濁製剤における相関を示す。図４ｂは、試験した全ての抗ＴＮＦα ｍＡｂ懸濁製剤における相関を示す。したがって、射出力は、粘度及び射出性の尺度として用いることができる。非水性高濃度懸濁製剤におけるタンパク質濃度及び減粘剤の量の両方を適切に変化させることにより、製剤の射出性に正の影響を与えられる。

粒度の効果
射出性に対する粒度の効果を、試験した製剤の射出力に対する様々な粒度の効果を測定することにより評価した。１〜５０％（％ｗ／ｗ）（１０〜５００ｍｇ／ｍＬ）の範囲にわたって２μｍ及び１３μｍのＢＳＡ粒子を含有する製剤をＥＯ／ＳＯ／５０／５０のビヒクル中で調製した。これら製剤では、射出力はタンパク質濃度の上昇とともに上昇し、粒度の増加とともに低下する（図５）。例えば、４５Ｎ以下の射出力を達成するために、ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中における４０％（％ｗ／ｗ）の粒度１３μｍのタンパク質製剤を用いることができる。固相の粒度を増加させながら懸濁液中の粒子の質量を一定に維持することにより、系における粒子数が減少する。したがって、粒度の高い懸濁液は、粒子−粒子相互作用が少なく、流動に対する抵抗が低下し、射出力が低下する。結果は、４０％（％ｗ／ｗ）等の高タンパク質濃度では、非水性懸濁製剤における粒度の選択が、射出力、ひいては製剤の射出性に著しい影響を与えることを示す。例えば、４０％（５ｗ／ｗ）の１３μｍのタンパク質粒子を含む製剤の射出力は４０．５Ｎであるが、２μｍタンパク質粒子を含む同製剤は、５７Ｎの射出力を有する。したがって、本発明の懸濁製剤の射出性は、タンパク質濃度及び粒度に加えて、製剤中の減粘剤の量を最適化することにより改善することができる。

（実施例５）
非水性高濃度懸濁製剤の粘度は、剪断速度を増加させることにより低下し得る。
様々な剪断速度における粘度に対するビヒクルの選択及びタンパク質濃度の効果について調べた。ＥＯ／ＳＯ／５０／５０又はＳＯ中に１〜４０％（％ｗ／ｗ）の抗ＴＮＦα抗体を含有する製剤２９０μＬを、４０ｍｍ、１°アクリル製円錐形状を備えるＡＲ２０００レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にピペットで入れた。剪断速度を約８ｓ^-1から５０００ｓ^-1に増加させたときの各製剤についての粘度スキャンを２５℃で測定した。

用いたビヒクルによって、２０％（％ｗ／ｗ）抗ＴＮＦα ｍＡｂ製剤は、ニュートン（ＥＯ／ＳＯ／５０／５０中抗ＴＮＦα ｍＡｂ）又は非ニュートンずり減粘（ＳＯ中抗ＴＮＦα ｍＡｂ）挙動のいずれかを示した（図６ａ）。３０％（％ｗ／ｗ）以上のタンパク質濃度において、抗ＴＮＦα ｍＡｂ ＥＯ／ＳＯ／５０／５０製剤は、挙動がニュートンから非ニュートンずり減粘に変化した（図６ｂ）。

本発明の製剤のずり減粘挙動を評価することは、下流の加工及び製造にとって重要である。高度に濃縮されたタンパク質製剤は、多くの場合、加工、製造、及び保存中に重大な課題を提起する粘度増加を生じさせる。図６ａ及び６ｂに示す通り、本発明の製剤の加工及び製造中の粘度及び剪断速度上昇の効果を適切に評価することは、粘度を著しく低下させ、それによって、製剤の加工性を改善することができる。

（実施例６）
射出力を変化させるための射出速度の調整
ＥＯ中４０〜５０％（％ｗ／ｗ）（４００〜５００ｍｇ／ｍＬ）の２μｍ及び１３μｍのＢＳＡ粒子（図７Ａ、７Ｂ）、並びにＥＯ／ＳＯ／５０／５０中２０〜４０％（％ｗ／ｗ）（１０８．３３〜２１６．６７ｍｇ／ｍＬ）の抗ＴＮＦα抗体（図７Ｃ）の射出力を様々な射出速度を用いて評価した。射出速度は、タンパク質濃度依存的な方法で射出力に影響を与えた。４０％（％ｗ／ｗ）ＢＳＡでは、射出力は、射出速度にそれほど依存していなかった。しかし、５０％（％ｗ／ｗ）のＢＳＡ濃度では、２５０ｍｍ／分から５０ｍｍ／分に射出速度を低下させると、射出力は１１１．４Ｎから３２．４Ｎに著しく低下した（図７Ａ）。また、射出速度による射出力に対する効果は、粒度によっても影響を受けた。より大きな粒度を有する製剤の射出力は、射出速度によりそれほど影響を受けなかったが、より小さな粒度を有する製剤の射出力は、射出速度によって著しく影響を受けた（図７Ｂ）。射出速度５０〜２５０ｍｍ／分で１３μｍのＢＳＡ粒子を利用すると、４５Ｎ以下の射出速度が得られた。また、射出速度は、抗ＴＮＦα抗体製剤の射出力にも影響を与え、射出速度を低下させると射出力も低下した（図７Ｃ）。

以上、本発明の全容を述べたが、付属の特許請求の範囲の趣旨又は範囲を逸脱することなく本発明に多くの変更及び改変をなし得ることは、当業者にとって明白であろう。

Claims (18)

1. ａ．疎水性剤及び減粘剤を含むビヒクルと、
   ｂ．生物活性分子と、
   を含む非水性高濃度懸濁製剤。
2. 前記疎水性剤がゴマ油である、請求項１に記載の製剤。
3. 前記減粘剤が、オレイン酸エチル、リノール酸、プロピオン酸、クエン酸トリエチル、イソプロピルアルコール、エタノール、セバシン酸ジエチル、又はミリスチン酸イソプロピルである、請求項１に記載の製剤。
4. 前記ビヒクル中の前記減粘剤の量が、前記ビヒクルの０．２体積％〜８５体積％（％ｖ／ｖ）である、請求項１に記載の製剤。
5. 前記生物活性分子が、前記製剤の約０．５重量％〜約５０重量％（％ｗ／ｗ）で存在する、請求項１に記載の製剤。
6. 前記製剤の射出力が４５ニュートン（Ｎ）以下であり、前記射出力が、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を用いて測定される、請求項１に記載の製剤。
7. 前記生物活性分子の粒度が、２μｍ〜１３μｍである、請求項１に記載の製剤。
8. 前記生物活性分子が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の製剤。
9. 少なくとも１ヶ月間４０℃で安定である、請求項１に記載の製剤。
10. ａ．ゴマ油及びオレイン酸エチルを含むビヒクルと、
    ｂ．生物活性分子と、
    を含む非水性高濃度懸濁製剤。
11. 前記ビヒクル中の前記オレイン酸エチルの量が、ビヒクルの０．２体積％〜８５体積％（％ｖ／ｖ）である、請求項１０に記載の製剤。
12. 前記生物活性分子が、前記製剤の約０．５重量％〜約５０重量％（％ｗ／ｗ）で存在する、請求項１０に記載の製剤。
13. 前記製剤の射出力が４５ニュートン（Ｎ）以下であり、前記射出力が、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を用いて測定される、請求項１に記載の製剤。
14. 前記生物活性分子の粒度が、２μｍ〜１３μｍである、請求項１０に記載の製剤。
15. 前記タンパク質が、モノクローナル抗体である、請求項１０に記載の製剤。
16. 疎水性剤を含むビヒクル中に５０ｍｇ／ｍＬ以上のタンパク質を含有する製剤の射出力を約４５ニュートン（Ｎ）以下に低下させる方法であって、
    ａ．疎水性剤を含む前記ビヒクルに少なくとも２８体積％の減粘剤を添加する工程、又は
    ｂ．約２μｍ〜１３μｍの粒度を有するタンパク質粒子を利用して、製剤を調製する工程を含み、
    前記射出力が、射出速度２５０ｍｍ／分で、０．５インチ２６ １／２ゲージの針を備える、内径０．２５インチの１ｍＬの剛性針シールドガラス注射器を用いて測定される方法。
17. 前記疎水性ビヒクルが、ゴマ油であり、前記減粘剤が、オレイン酸エチルである、請求項１６に記載の方法。
18. 生物活性分子の非水性高濃度懸濁製剤を製造する方法であって、
    ａ．生物活性分子を提供する工程と、
    ｂ．疎水性剤を提供する工程と、
    ｃ．減粘剤を提供する工程と、
    ｄ．前記疎水性剤と前記減粘剤とを混合して、ビヒクルを形成する工程と、
    ｅ．工程ｄで形成されたビヒクルに５０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で前記生物活性分子を添加する工程と、
    を含む製造方法。

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