JP2013517460A - 複数の焦点面を用いた細胞特性決定 - Google Patents
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Abstract
Description
1)局在傾向を含む、強度の範囲および分布を特定する。これにより、画像を閾値処理する範囲が決定され、画像における強度シフトが補正される。
3)暗ピクセルと明ピクセルが接している所をたどることにより、オブジェクトを形成する。
分類における第1のステップでは、ベストフォーカスで撮影した画像で識別された各細胞を解析することで、それを生細胞と分類することができるかどうかが確認される。生細胞であると確認された場合には、細胞は生細胞と分類され、その細胞に関してさらなる解析を行う必要はない。一方、細胞を生細胞と分類することができない場合には、スタック内の他のデジタル画像を使用して、さらなる解析が行われる。デジタル画像のうちの別のものにおいて、その細胞を見出し、再び解析することで、それを生細胞と分類することができるかどうか、その第2のデジタル画像に基づいて確認する。(ここで、“第2の”とは、解析される2番目の画像を意味し、撮影された2番目の画像でなくてもよい。)生細胞であると確認された場合には、分類が行われ、その細胞に関するさらなる解析は必要ない。細胞が生細胞であることが未だ判明しない場合は、その細胞をスタック内のさらに別の画像において見出してもよく、このプロセスは、細胞が生細胞として識別されるまで繰り返されるか、または解析する画像の所定の最大数に達するまで繰り返されるか、いずれかである。例えば、システムは、ベストフォーカス面で撮影された画像と、それに続きカメラからより遠い位置で撮影された多くて3つの画像とに限って、調べてもよい。システムは、スタックの画像をすべて調べてもよいが、焦点移動行程の最端で撮影した画像における細胞は、焦点から大きく外れている場合があり、これによって、個々の細胞の特定が信頼性に欠けたものになることがある。
この例示的な式によると、細胞Aと同じサイズのオブジェクトには、100点のサイズ・スコアが付けられ、細胞Aより大きいか、または小さいオブジェクトには、それより低いスコアが付けられることになる。サイズの比較を反映する他の式を用いてもよい。第2の画像の領域にオブジェクトが1つのみしか写っていない場合であっても、非常に低いサイズ・スコアを用いて、そのオブジェクトは目的の細胞ではないと判断することができる。
この例示的な式によると、細胞Aの元の位置に近いオブジェクトには、細胞Aの元の位置から遠いオブジェクトよりも高い位置スコアが割り当てられることになる。同様に、他の式を考案してもよい。
近傍浮動スコア=(100−abs(B中心X−1’中心X))+(100−abs(B中心Y−1’中心Y))
この式を用いると、ベストフォーカスの画像において予想される位置に正確にオブジェクトが見つかる場合には、200点の近傍浮動スコアとなる。浮動スコアについて、他の式を考案することもできる。第2の画像に2つよりも多くのオブジェクトが写っている場合には、複数の近隣オブジェクトの挙動を反映する累積的近傍浮動スコアを計算することができる。例えば、上記の例のように領域内にオブジェクトが2つのみ写っている場合には、3つのスコア成分の式の例に従って得られる最大可能累積スコアは500点となる。一方、領域内に3つのオブジェクトが写っている場合には、サイズ検証による100点と、位置検証による200点と、近傍浮動検証による各近隣オブジェクトの200点とで、最大可能累積スコアは700点となり得る。領域内に多数のオブジェクトが写っている場合には、複合スコアの累積的近傍浮動スコア成分を、他の成分より優位としてもよい。あるいは、近傍浮動スコアを平均して、平均近傍浮動スコアを計算することができる。スコア成分について、他の様々な重み付けおよび組み合わせが可能であり、また、他のスコアリング手法の使用が可能であることが想定される。
Claims (22)
- 細胞を特性決定する方法であって、
細胞を含む試料の一連のデジタル画像をカメラを使用して形成することであって、前記一連のデジタル画像は、前記試料に関して異なる焦点面でそれぞれ取得される、前記形成すること、
特別にプログラムされたコンピュータを用いて、前記デジタル画像のうちの少なくとも2つにおいて細胞を自動的に識別すること、
前記特別にプログラムされたコンピュータを用いて、前記2つのデジタル画像を自動的に解析して、前記試料の中の細胞を生細胞または死細胞のいずれかとして分類することを備える、方法。 - 前記デジタル画像のうちのどれがベストフォーカス面で撮影されたものであるかを、前記特別にプログラムされたコンピュータを用いて自動的に識別することをさらに備える、請求項1に記載の方法。
- 前記ベストフォーカス面で撮影されたものと識別されたデジタル画像において、前記特別にプログラムされたコンピュータを用いて、細胞を自動的に計数することをさらに備える、請求項2に記載の方法。
- 前記デジタル画像のうちのどれがベストフォーカス面で撮影されたものであるか識別することは、前記デジタル画像の各々についてコントラスト指標を評価することを備える、請求項2に記載の方法。
- 前記2つのデジタル画像を解析して、前記試料の中の細胞を生細胞または死細胞のいずれかとして分類することは、
前記2つのデジタル画像のうち第1の画像の解析に基づいて前記細胞を生細胞として分類することは不可能であると判定すること、
第2のデジタル画像において前記細胞を見つけること、
前記2つのデジタル画像のうち第2の画像の解析に基づいて、前記細胞を生細胞として分類することをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記第2のデジタル画像において前記細胞を見つけることは、前記第2のデジタル画像内のオブジェクトのスコアを生成することを含み、
前記スコアは、前記オブジェクトが前記細胞である尤度を示す、請求項5に記載の方法。 - 前記スコアは、前記オブジェクトのサイズに関する成分を含む、請求項6に記載の方法。
- 前記スコアは、前記オブジェクトの位置に関する成分を含む、請求項6に記載の方法。
- 前記スコアは、第1と第2のデジタル画像の撮影の合間でのオブジェクトの浮動に関する成分を含む、請求項6に記載の方法。
- 前記第2のデジタル画像において前記細胞を見つけることは、
第1のデジタル画像で前記細胞を含んでいる領域に対応する、前記デジタル画像のうち第2の画像の領域内に見つかる各オブジェクトについて、それぞれのオブジェクトが前記細胞である尤度を示す個別のスコアを生成すること、
最高スコアを持つオブジェクトを、前記細胞として選択することを含む、請求項5に記載の方法。 - 前記2つのデジタル画像を解析して、前記試料の中の細胞を生細胞または死細胞のいずれかとして分類することは、
第1のデジタル画像の解析に基づいて前記細胞を生細胞として分類することは不可能であると判定すること、
前記画像のうちの1つの解析によって前記細胞が生細胞であることが示されるか、または、解析する画像の所定の最大数に達するまで、他の焦点位置で撮影された画像を次々と解析すること、
前記細胞が生細胞として識別された場合には、前記細胞を生細胞と分類し、一方、前記細胞が生細胞であると判断されることなく、解析する画像の前記所定の最大数に達した場合には、前記細胞を死細胞と分類することをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 細胞を解析するためのシステムであって、
電子イメージセンサと、
前記電子イメージセンサ上に細胞を含む試料の像を形成する光学系と、
前記光学系の焦点位置を調整する機構と、
前記電子イメージセンサに接続されたコンピュータとを備え、
前記コンピュータは、
前記試料内の異なる焦点面でそれぞれ取得された、前記試料の一連のデジタル画像を形成し、
前記デジタル画像のうちの少なくとも2つにおいて細胞を自動的に識別し、
前記2つのデジタル画像を自動的に解析して前記試料の中の細胞を生細胞または死細胞のいずれかとして分類するように、前記システムを制御する、システム。 - 前記コンピュータは、さらに、前記デジタル画像のうちのどれがベストフォーカス面で撮影されたものであるかを識別するように、前記システムを制御する、請求項12に記載のシステム。
- 前記コンピュータは、さらに、前記ベストフォーカス面で撮影されたものと識別されたデジタル画像に写っている細胞を計数するように、前記システムを制御する、請求項13に記載のシステム。
- 前記コンピュータは、前記デジタル画像のうちのどれがベストフォーカス面で撮影されたものであるか識別するために、コントラスト指標を計算する、請求項13に記載のシステム。
- 前記コンピュータは、さらに、
前記2つのデジタル画像のうち第1の画像の解析に基づいて前記細胞を生細胞として分類することは不可能であると判定し、
第2のデジタル画像において前記細胞を見つけて、
前記2つのデジタル画像のうち第2の画像の解析に基づいて、前記細胞を生細胞として分類するように、前記システムを制御する、請求項12に記載のシステム。 - 前記コンピュータは、さらに、
前記第2のデジタル画像内のオブジェクトのスコアであって、前記オブジェクトが前記細胞である尤度を示すスコアを生成し、
前記スコアに少なくとも部分的に基づいて、前記第2のデジタル画像において前記細胞を見つけるように、前記システムを制御する、請求項16に記載のシステム。 - 前記スコアは、前記オブジェクトのサイズに関する成分を含む、請求項17に記載のシステム。
- 前記スコアは、前記オブジェクトの位置に関する成分を含む、請求項17に記載のシステム。
- 前記スコアは、第1と第2のデジタル画像の撮影の合間でのオブジェクトの浮動に関する成分を含む、請求項17に記載のシステム。
- 前記コンピュータは、さらに、
第1のデジタル画像で前記細胞を含んでいる領域に対応する、前記デジタル画像のうち第2の画像の領域内に見つかる各オブジェクトについて、それぞれのオブジェクトが前記細胞である尤度を示す個別のスコアを生成し、
最高スコアを持つオブジェクトを、前記細胞として選択するように、前記システムを制御する、請求項16に記載のシステム。 - 前記コンピュータは、さらに、
第1のデジタル画像の解析に基づいて前記細胞を生細胞として分類することは不可能であると判定し、
前記画像のうちの1つの解析によって前記細胞が生細胞であることが示されるか、または、解析する画像の所定の最大数に達するまで、他の焦点位置で撮影された画像を次々と解析し、
前記細胞が生細胞として識別された場合には、前記細胞を生細胞と分類し、一方、前記細胞が生細胞であると判断されることなく、解析する画像の前記所定の最大数に達した場合には、前記細胞を死細胞と分類するように、前記システムを制御する、請求項12に記載のシステム。
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