JP2013516165A - ヒト化抗体 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
本発明は、ラクダ科ファミリー(family Camelidae)の種の通常型(conventional)抗体レパートリーに由来する新規ヒト化抗体に関する。
モノクローナル抗体は、研究ツールとしての、及び次第に治療剤又は診断剤としての多くの用途を有する。現在20種を超える様々なモノクローナル抗体が、癌、炎症、自己免疫障害、感染性疾患、喘息、心血管疾患、及び移植拒絶反応を含む、種々の異なる疾患を治療するために規制当局の認可を受けており、また、開発ライン上にあるモノクローナル抗体医薬の数が、対前年比で増加している。
本発明は、従来技術のヒト化又は完全ヒト抗体プラットフォームに関して認められる短所の一部又は全てを避け、かつヒト宿主における免疫原性を最小限に抑える一方で、治療上重要な広範な標的抗原に対する特異性及び親和性が高い抗体の産生を可能にする、「ヒト化」モノクローナル抗体(抗原結合ポリペプチド)プラットフォームを提供する。
(a)該ラクダ科動物VHドメイン中のアミノ酸置換(複数可)、ここで、Kabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H5、H7、H11、H12、H13、H14、H29、H30、H37、H40、H48、H67、H68、H69、H71、H74、H77、H78、H80、H81、H82b、H83、H84、H85、H86、H89、H93、H94、及びH108からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVHドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される;並びに
(b)該ラクダ科動物VLドメイン中のアミノ酸置換、ここで、該ラムダ軽鎖クラス(Vλ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L1、L2、L3、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L17、L18、L19、L20、L38、L39、L40、L42、L44、L46、L47、L49、L58、L59、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L74、L76、L78、L80、L84、及びL103からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVλドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換され;かつ該カッパ軽鎖クラス(Vκ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K1、K3、K4、K7、K9、K11、K12、K13、K14、K15、K18、K19、K36、K42、K43、K45、K46、K58、K63、K70、K77、K78、K79、K80、K83、K100、K103、K104、及びK106からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVκドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される。
一実施態様では、H7のアミノ酸が交換される。非限定的な実施態様では、H7のアミノ酸がSと交換される。
一実施態様では、H11のアミノ酸が交換される。非限定的な実施態様では、H11のアミノ酸がVと交換される。
一実施態様では、H12のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、H13のアミノ酸がK、又はあまり好ましくないが、RもしくはQと交換される。
一実施態様では、H14のアミノ酸がPと交換される。
一実施態様では、H29のアミノ酸がV、又はあまり好ましくないが、Fと交換される。
一実施態様では、H37のアミノ酸がVもしくはI、又はあまり好ましくないが、Fと交換される。
一実施態様では、H40のアミノ酸がAと交換される。
一実施態様では、H48のアミノ酸がIと交換される。
一実施態様では、H67のアミノ酸がVと交換される。
一実施態様では、H68のアミノ酸がTと交換される。
一実施態様では、H69のアミノ酸がM、又はあまり好ましくないが、IもしくはSと交換される。
一実施態様では、H71のアミノ酸がRもしくはV、又はあまり好ましくないが、A、E、もしくはTと交換される。
一実施態様では、H74のアミノ酸が交換される。非限定的な実施態様では、H74のアミノ酸がS、又はあまり好ましくないが、Aと交換されてもよい。
一実施態様では、H78のアミノ酸がVもしくはL、又はあまり好ましくないが、Aに交換される。
一実施態様では、H80のアミノ酸がMと交換される。
一実施態様では、H81のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、H83のアミノ酸がR、又はあまり好ましくないが、Kと交換される。
一実施態様では、H84のアミノ酸がA、又はあまり好ましくないが、Tと交換される。
一実施態様では、H85のアミノ酸がAと交換される。
一実施態様では、H86のアミノ酸がDと交換される。
一実施態様では、H94のアミノ酸がR、又はあまり好ましくないが、KもしくはTと交換される。
一実施態様では、H108のアミノ酸がM、又はあまり好ましくないが、LもしくはTと交換される。
一実施態様では、H5のアミノ酸がL、又はあまり好ましくないが、Vと交換される。
一実施態様では、H82bのアミノ酸がSと交換される。
一実施態様では、H89のアミノ酸がV、又はあまり好ましくないが、Lと交換される。
一実施態様では、H93のアミノ酸がA、又はあまり好ましくないが、Tと交換される。
一実施態様では、L1のアミノ酸がSと交換される。
一実施態様では、L2のアミノ酸がYと交換される。
一実施態様では、L3のアミノ酸がEと交換される。
一実施態様では、L7のアミノ酸がD、又はあまり好ましくないが、PもしくはLと交換される。
一実施態様では、L8のアミノ酸がRもしくはP、又はあまり好ましくないが、A、S、L、もしくはHと交換される。
一実施態様では、L9のアミノ酸がP、又はあまり好ましくないが、Aと交換される。
一実施態様では、L11のアミノ酸がA、V、S、もしくはF、又はあまり好ましくないが、LもしくはHと交換される。
一実施態様では、L15のアミノ酸がP、又はあまり好ましくないが、LもしくはTと交換される。
一実施態様では、L17のアミノ酸がQもしくはE、又はあまり好ましくないが、Aと交換される。
一実施態様では、L18のアミノ酸がRもしくはS、又はあまり好ましくないが、Kと交換される。
一実施態様では、L19のアミノ酸がV又はP又はAと交換される。
一実施態様では、L20のアミノ酸がR、又はあまり好ましくないが、Sと交換される。
一実施態様では、L39のアミノ酸がH、又はあまり好ましくないが、Pと交換される。
一実施態様では、L40のアミノ酸がPと交換される。
一実施態様では、L42のアミノ酸がK、又はあまり好ましくないが、Tと交換される。
一実施態様では、L47のアミノ酸がMと交換される。
一実施態様では、L59のアミノ酸がP、又はあまり好ましくないが、Sと交換される。
一実施態様では、L60のアミノ酸がD、又はあまり好ましくないが、Eと交換される。
一実施態様では、L66のアミノ酸がS、又はあまり好ましくないが、N、Tと交換される。
一実施態様では、L67のアミノ酸がSもしくはL、又はあまり好ましくないが、Pと交換される。
一実施態様では、L69のアミノ酸がT又はNと交換される。
一実施態様では、L70のアミノ酸がT、又はあまり好ましくないが、M、I、もしくはAと交換される。
一実施態様では、L71のアミノ酸がV、又はあまり好ましくないが、AもしくはTと交換される。
一実施態様では、L72のアミノ酸がSもしくはI、又はあまり好ましくないが、TもしくはLと交換される。
一実施態様では、L74のアミノ酸がA、又はあまり好ましくないが、Gと交換される。
一実施態様では、L76のアミノ酸がS又はTと交換される。
一実施態様では、L78のアミノ酸がV、又はあまり好ましくないが、A、T、もしくはIと交換される。
一実施態様では、L80のアミノ酸がSもしくはA、又はあまり好ましくないが、TもしくはPと交換される。
一実施態様では、L84のアミノ酸がA又はSと交換される。
一実施態様では、L103のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、L38のアミノ酸がQと交換される。
一実施態様では、L44のアミノ酸がPと交換される。
一実施態様では、L46のアミノ酸がLと交換される。
一実施態様では、L49のアミノ酸がYと交換される。
一実施態様では、K1のアミノ酸がA、又はあまり好ましくないが、DもしくはNと交換される。
一実施態様では、K4のアミノ酸がL、又はあまり好ましくないが、Mと交換される。
一実施態様では、K7のアミノ酸がS、又はあまり好ましくないが、Tと交換される。
一実施態様では、K9のアミノ酸がL又はDと交換される。
一実施態様では、K11のアミノ酸がV又はLと交換される。
一実施態様では、K12のアミノ酸がK、P、もしくはA、又はあまり好ましくないが、Sと交換される。
一実施態様では、K14のアミノ酸がTと交換される。
一実施態様では、K15のアミノ酸がVもしくはL、又はあまり好ましくないが、Tと交換される。
一実施態様では、K18のアミノ酸がPもしくはR、又はあまり好ましくないが、Qと交換される。
一実施態様では、K19のアミノ酸がAと交換される。
一実施態様では、K36のアミノ酸がY、又はあまり好ましくないが、FもしくはLと交換される。
一実施態様では、K39のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、K42のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、K43のアミノ酸がAもしくはP、又はあまり好ましくないが、Vと交換される。
一実施態様では、K45のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、K58のアミノ酸がVと交換される。
一実施態様では、K63のアミノ酸がSと交換される。
一実施態様では、K68のアミノ酸がGと交換される。
一実施態様では、K70のアミノ酸がD、又はあまり好ましくないが、Eと交換される。
一実施態様では、K77のアミノ酸がS、又はあまり好ましくないが、Cと交換される。
一実施態様では、K78のアミノ酸がLと交換される。
一実施態様では、K79のアミノ酸がQ又はEと交換される。
一実施態様では、K80のアミノ酸がPもしくはA、又はあまり好ましくないが、Sと交換される。
一実施態様では、K83のアミノ酸がFもしくはV、又はあまり好ましくないが、Iと交換される。
一実施態様では、K103のアミノ酸がKと交換される。
一実施態様では、K104のアミノ酸がVと交換される。
一実施態様では、K106のアミノ酸がIと交換される。
ヒト生殖系列ドメインから逸脱する体細胞突然変異残基を変換するが、ラクダ科動物生殖系列ドメイン中のこれらの残基は、最も良く一致するヒト生殖系列中に存在する残基と同一である、Vκクラスの軽鎖中のあまり好ましくない突然変異を以下に記載する。
一実施態様では、K3のアミノ酸がQ、又はあまり好ましくないが、Rと交換される。
さらなる態様では、本発明は、宿主細胞での抗体の発現、又は無細胞発現系での転写及び翻訳を可能にする調節配列に機能的に連結されたポリヌクレオチド分子を含む発現ベクター、並びにさらには、該発現ベクターを含む宿主細胞又は無細胞発現系を提供する。
またさらなる態様では、本発明は、抗体の発現を可能にする条件下で宿主細胞又は無細胞発現系を培養し、かつ発現された抗体を回収することを含む、組換え抗体の産生方法を提供する。
本発明は、ラクダ科ファミリーの種の通常型抗体レパートリーに由来する、所望の標的抗原に対する特異性を有する、ヒト化抗体に関する。
(a)該ラクダ科動物VHドメイン中のアミノ酸置換(複数可)、ここで、Kabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H5、H7、H11、H12、H13、H14、H29、H30、H37、H40、H48、H67、H68、H69、H71、H74、H77、H78、H80、H81、H82b、H83、H84、H85、H86、H89、H93、H94、及びH108からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVHドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される;並びに
(b)該ラクダ科動物VLドメイン中のアミノ酸置換、ここで、該ラムダ軽鎖クラス(Vλ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L1、L2、L3、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L17、L18、L19、L20、L38、L39、L40、L42、L44、L46、L47、L49、L58、L59、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L74、L76、L78、L80、L84、及びL103からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVλドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換され;かつ該カッパ軽鎖クラス(Vκ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K1、K3、K4、K7、K9、K11、K12、K13、K14、K15、K18、K19、K36、K42、K43、K45、K46、K58、K63、K70、K77、K78、K79、K80、K83、K100、K103、K104、及びK106からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVκドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される。
「抗体」という用語は、標的抗原を特異的に認識する、モノクローナル抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、抗体断片、イムノアドヘシン、及び抗体-イムノアドヘシンキメラを含むように最も広い意味で用いられる。抗体断片の非限定的な例としては、単一の可変ドメイン(VH、VL、もしくはVκ)(Skerra A.及びPluckthun, A.の文献(1988) Science 240:1038-41)、単鎖抗体(例えば、scFv)(Bird, R.E.らの文献(1988) Science 242:423-26;Huston, J.S.らの文献(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83)、Fab、(Fab')2、又は当業者に周知の他の断片が挙げられる。
残基24-34(ヒトVラムダ生殖系列中の11、12、13、又は14アミノ酸残基からなる、L1(λ))、50-56(ヒトVラムダ生殖系列中の7、11、又は12残基からなる、L2(λ))、及び89-97(大部分の体細胞突然変異したヒト抗体中の9〜11残基からなる、L3(λ)(Knappikらの文献、J. Mol. Biol. 296:57-86(1999)));付番はKabatによる。
ラクダ科動物の通常型抗体レパートリーは、引用により本明細書中に組み込まれている、US12/497,239号で論じられた、以下の要因のために、ヒト治療剤としての有用性を有する抗体の調製に有利な出発点を提供することが認識されている:
1)ラクダ科動物VH及びVLドメインとそれらのヒト対応物の間の高い配列相同性%;
2)ラクダ科動物VH及びVLドメインのCDRとそれらのヒト対応物(すなわち、ヒト様カノニカルフォールド構造及びヒト様カノニカルフォールド組合せ)の間の高度な構造相同性
工程1.ヒト化すべき成熟ラクダ科動物配列との最も高い相同性/同一性を示すヒト(生殖系列)ファミリー及びこのファミリーのメンバーを選択する。任意の所与のラクダ科動物VH(又はVL)ドメインに対して最も良く一致するヒト生殖系列を同定するための一般手順を以下に概説する。
a.生殖系列化するために用いられる選択されたヒト生殖系列から逸脱している位置が好ましく、そのため、ラクダ科動物配列に見られるアミノ酸は、選択された生殖系列と一致せず、また、(VにコードされたFRアミノ酸とJにコードされたFRアミノ酸の両方について)同じサブクラスの他の生殖系列に見られない。
b.選択されたヒト生殖系列ファミリーメンバーから逸脱しているが、同じファミリーの他の生殖系列で用いられている位置についても生殖系列化プロセスで対処することができる。
c.(例えば、さらなる体細胞突然変異による)選択されたヒト生殖系列とのさらなるミスマッチについても対処することができる。
成熟ラクダ科動物VH及びVLドメインとコンセンサスヒト生殖系列VH/VL配列との配列アラインメント、及びさらに、最も良く整列するヒト生殖系列配列とのアラインメントに基づいて、ラクダ科動物VHドメイン及びVLドメイン中の以下の残基が置換の候補として同定された:
Kabatによって付番された、ラクダ科動物VHドメインのH1、H5、H7、H11、H12、H13、H14、H29、H30、H37、H40、H48、H67、H68、H69、H71、H74、H77、H78、H80、H81、H82b、H83、H84、H85、H86、H89、H93、H94、又はH108;
Kabatによって付番された、ラクダ科動物VラムダドメインのL1、L2、L3、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L17、L18、L19、L20、L38、L39、L40、L42、L44、L46、L47、L49、L58、L59、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L74、L76、L78、L80、L84、又はL103。
Kabatによって付番された、ラクダ科動物VカッパドメインのK1、K3、K4、K7、K9、K11、K12、K13、K14、K15、K18、K19、K36、K42、K43、K45、K46、K58、K63、K70、K77、K78、K79、K80、K83、K100、K103、K104、又はK106。
ラクダ科動物VH又はVLドメインを特定のヒト生殖系列クラス又はサブクラスへと生殖系列化するのに特に適切なさらなるアミノ酸残基のセットが同定されている。したがって、特定の実施態様では、本発明は、以下のものを提供する。
交換用に選択されるアミノ酸位置でラクダ科動物VH(又はVλもしくはVκ)ドメインに対して代入されるべき適切な交換用アミノ酸を選択するために、該ラクダ科動物VH(又はVλもしくはVκ)ドメインアミノ酸配列と、ヒトVH(又はVλもしくはVκ)ドメインのアミノ酸配列、典型的にはヒト生殖系列VH(又はVλもしくはVκ)配列、及び生殖系列JH(又はJλもしくはJκ)配列、或いは特定のVH(又はVλもしくはVκ)ファミリーもしくはそのファミリーメンバーについてのコンセンサス配列とのアラインメントを再び参照することができる。
上に示した基準を考慮して、表4に記載のアミノ酸置換は、ラクダ科動物VHドメインのヒト化に好適であることが確認されている。したがって、本発明の対象には、表4に記載のアミノ酸置換の1つもしくは複数、又は任意の組合せを含むラクダ科動物VHドメインを含む抗体が含まれるが、これらに限定されない。各々の場合において、左側の列に特定されている位置にあるラクダ科動物VH配列によってコードされるアミノ酸は、右側の列に記載されている、その位置についての好ましいヒト残基のうちの1つに交換することができる。表4は、特定のヒトVHファミリー又はファミリーメンバーにとって、どの変化が最も重要と考えられるかを示すものでもあるが、これは、限定と解釈されるべきではない。ラクダ科動物生殖系列において、(逸脱する残基が高い頻度で出現することから結論される)ヒト生殖系列から逸脱する残基が表4に記載されており、好ましい変化は、ラクダ科動物残基を、CDR1及びCDR2についての同一のカノニカルフォールド組合せを有する最良のヒト生殖系列中に存在する残基に変換する変化である。これらの結論は、図36、37、及び38から得られた。これらの図は、最も良く一致するヒト生殖系列ファミリーメンバーから逸脱する体細胞突然変異したラマ・グラマVH中の残基、及び全ヒト生殖系列ファミリーに存在する残基を示している。また、言及した図は、ヒト生殖系列残基が体細胞突然変異したVH領域にかなり多く見られるものの、頻度が低いことを示しており、そのため、ヒト生殖系列中に存在する残基への復帰突然変異が実現可能であるはずであるという確信が得られる。さらに、図40、41、及び42は、タイプは同じであるが、ラマ・パコスの生殖系列VHについての解析を示している。
成熟した(機能的抗原結合性)ラクダ科動物VH(及びVL又はVκ)ドメイン配列と、その最も良く整列するヒト生殖系列とのアラインメントに基づいて、所与のラクダ科動物VH(及びVL又はVκ)ドメインを特定のヒト生殖系列配列へと生殖系列化するときに特に有用なアミノ酸置換のセットが得られた。このヒト配列は、ヒト化のために選択された特定のラクダ科動物配列に対して最も良く一致するヒト生殖系列であり得る(しかし、必ずしもそうではない)。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-21配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-48配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-23配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ヒト化ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-66配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ヒト化ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-11配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ヒト化ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-66配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH3-48配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマまたはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH1-46配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH1-46配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH4-30-4配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVH4-30-4配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・パコスに由来する)ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供する。
表5に記載のアミノ酸置換は、ラクダ科動物VLドメインのヒト化に好適であることが確認されている。したがって、本発明の対象には、表5に記載のアミノ酸置換の1つもしくは複数、又は任意の組合せを含むラクダ科動物VLドメインを含む抗体が含まれるが、これらに限定されない。各々の場合において、左側の列に特定されている位置にあるラクダ科動物VL配列によってコードされるアミノ酸は、表5の右側の列に記載されている、その位置についての好ましいヒト残基のうちの1つに交換することができる。ラクダ科動物生殖系列において、(逸脱する残基が高い頻度で出現することから結論される)ヒト生殖系列から逸脱する残基が表5に記載されており、好ましい変化は、ラクダ科動物残基を、CDR1及びCDR2についての同一のカノニカルフォールド組合せを有する最良のヒト生殖系列中に存在する残基に変換する変化である。これらの結論は、Vカッパについては図30から、及びVラムダについては図31〜35から得られた。これらの図は、最も良く一致するヒト生殖系列ファミリーメンバーから逸脱する体細胞突然変異したリャマVκ/Vλ中の残基、及び全ヒト生殖系列ファミリーに存在する残基を示している。また、言及した表は、ヒト生殖系列残基が体細胞突然変異したVカッパ/Vラムダ領域にかなり多く見られるものの、頻度が低いことを示しており、そのため、ヒト生殖系列中に存在する残基への復帰突然変異が許容されることを示している。
成熟した(機能的抗原結合性)ラクダ科動物Vκ又はVλドメイン配列と、その最も良く整列するヒト生殖系列とのアラインメントに基づいて、所与のラクダ科動物VLドメインを特定のヒト生殖系列配列へと生殖系列化するときに特に有用なアミノ酸置換のセットが得られた。このヒト配列は、ヒト化のために選択された特定のラクダ科動物配列に対して最も良く一致するヒト生殖系列であり得る(しかし、必ずしもそうではない)。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ1-44配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ2-11配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ2-18配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ3-19配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ3-25配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ5-37配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVλ8-61配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vラムダドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVκ1-13配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vカッパドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVκ2-28配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vカッパドメインを含む抗体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、ヒトVκ4-1配列に対して整列し、かつ記述された位置(複数可)に上記のアミノ酸の1つ又は複数又は全てを含む、(好ましくはラマ・グラマに由来する)ラクダ科動物Vカッパドメインを含む抗体を提供する。
さらなる実施態様では、本発明は、ラクダ科動物VHドメインを含む抗体を提供し、ここで、Kabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H108の、FR4にコードされたアミノ酸は、ヒトVHドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される。
「ヒト化」をもたらすアミノ酸置換に加えて、出発ラクダ科VH、Vλ、又はVκドメイン中のミスマッチのあるアミノ酸残基を、ヒトVH、Vλ、又はVκドメインに見られる等価な残基と交換することにより、ヒト化目的のためにも、該ラクダ科動物由来のVH、Vλ、及びVκドメインの超可変ループ(CDR)に、特にCDR1及び/又はCDR2に、さらにCDR3にも、アミノ酸置換を独立に行なうことも可能である。FRとの境界に位置する残基が関心対象となるが、それは、これらが、FR及びCDRにコードされた残基からなるT細胞エピトープを決定し得るからである。
成熟ラクダ科動物VH(及びVλ/Vκ)配列(並びにそれに由来するコンセンサス配列)と、該ラクダ科動物VH(Vλ/Vκ)ドメインが最も良く整列するヒトVH(又はVλ/Vκ)ドメイン配列と同じファミリー(又はファミリーメンバー)ではないヒトVH(及びVλ/Vκ)ドメインのコンセンサス配列とのアラインメントにより、ラクダ科動物VH(又はVλ/Vκ)ドメインの、異なる生殖系列ファミリー又はファミリーメンバーのヒトVH(又はVλ/Vκ)ドメイン配列へのヒト化を可能にし得るアミノ酸置換のセットを得ることが可能になった。これらのアミノ酸置換のセットは、添付の図に記載されている。
表4に記載のVH置換と類似したアミノ酸置換を含むヒト化VHHドメインは、本発明の範囲内に包含されないことが好ましい。
非限定的な実施態様では、本発明によるヒト化抗体は、そのアミノ酸配列が完全に又は実質的にヒトのものであるCH1ドメイン及び/又はCLドメインを含むことができる。本発明の抗体が、ヒト治療用途を対象とした抗体である場合、該抗体の定常領域全体、又は少なくともその一部が完全に又は実質的にヒトアミノ酸配列を有することが典型的である。したがって、本発明の抗体のCH1ドメイン、ヒンジ領域、CH2ドメイン、CH3ドメイン、及びCLドメイン(並びに存在するならばCH4ドメイン)の1つ又は複数又は任意の組合せは、そのアミノ酸配列に関して完全に又は実質的にヒトのものであることができる。
本発明はまた、本発明のヒト化抗体をコードするポリヌクレオチド分子、宿主細胞又は無細胞発現系で該抗体の発現を可能にする調節配列に機能的に連結された本発明のヒト化抗体をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター、及びこの発現ベクターを含む宿主細胞又は無細胞発現系を提供する。
本発明によるヒト化抗体の産生のためのプロセスは、まず、所望の抗原結合特性を有する通常型ラクダ科動物抗体を単離し、次に、本明細書に記載したように、VHドメイン又はVLドメインのいずれかにおいて1つ又は複数のアミノ酸置換を人為操作することによって、該抗体をヒト化に供することを含むことができる。
ラクダ科動物の通常型抗体のVH及び/又はVLドメインをコードする発現ベクターのライブラリーを作製する方法は、以下の工程を含むことができる:
a)ラクダ科動物の通常型抗体のVH及び/又はVLドメインをコードする核酸分子の領域を増幅して、各遺伝子セグメントがラクダ科動物の通常型抗体のVHドメインをコードするヌクレオチド配列又はVLドメインをコードするヌクレオチド配列を含む、増幅された遺伝子セグメントを得る工程、並びに
b)各発現ベクターが、VHドメインをコードする遺伝子セグメント及び/又はVLドメインをコードする遺伝子セグメントを少なくとも含むように、工程a)で得られた遺伝子セグメントを発現ベクターにクローニングし、それにより、発現ベクターのライブラリーを得る工程。
スクリーニング/選択は、通常、ライブラリー中のクローンによってコードされる発現産物(すなわち、抗原結合ポリペプチドの形態のVH/VL対合物、例えば、Fab、scFV、又は抗体)を標的抗原と接触させ、かつ所望の抗原結合特性を示すVH/VL対合物をコードする1つ又は複数のクローンを選択することを含む。
望ましい場合、所望の標的抗原に対する親和性を有するVH/VL組合せをコードことがスクリーニング/選択によって同定されたクローンを、親和性及び/又は中和効力を最適化する下流の工程に供することができる。
望ましい抗原結合特性を示すVH/VL対合物をコードする選択された発現クローン(例えば、scFV又はFabをコードするファージクローン)のVH及びVLをコードする遺伝子セグメントを下流のプロセッシング工程に供し、ヒト治療用途に好適な抗原結合ポリペプチドフォーマット(例えば、完全ヒト定常ドメインを有する完全長抗体)をコードするベクターなどの、別の発現プラットフォームに再クローニングすることができる。
(実施例1)
リャマの免疫
リャマ(ラマ・グラマ)の免疫及び末梢血リンパ球の採取、並びにその後のRNA抽出及び抗体遺伝子断片の増幅を、De Haardと同僚によって記載されているように実施した(De Haardらの文献、J. Bact. 187:4531-4541(2005))。1頭のリャマを、フロイント完全アジュバント又は動物に優しい適切なアジュバントStimune(商標)(Cedi Diagnostics BV社、オランダ)用いて、組換えヒトサイトカインxで筋肉内に免疫した。サイトカインx(人為操作したヒト細胞株で組換えにより発現されたもの)は購入した。免疫の前に、凍結乾燥されたサイトカインxを、PBS(Dulbecco社)中、250μg/mlの濃度で再構成した。リャマは、隔週で6回の注射を受け、最初の2回の注射は、注射1回当たりサイトカイン100μg、最後の4回の注射は、各追加免疫1回につき50μgとした。最後の免疫から4日後、150mlの血液試料(PBL1)を該動物から回収し、血清を調製した。最後の免疫から10日後、150mlの第二の血液試料(PBL2)を回収し、血清を調製した。この血液試料から、Ficoll-Paque(商標)勾配(Amersham Biosciences社)を用いて、リャマ免疫グロブリンの遺伝子供給源としての末梢血リンパ球(PBL)を単離し、1〜5×108個のPBLを得た。抗体の最大多様性は、試料採取されたBリンパ球の数と等しいと予想され、その数は、PBLの数(1〜5×107)の約10%(9.2〜23.2%(De Genstらの文献、Dev. Comp. Immunol. 30:187-98(2006))である。リャマ血清中の通常型抗体の画分は、全免疫グロブリンの量の最大80%であり、これを、通常型抗体を産生するBリンパ球の同様の画分に対して外挿することができる。したがって、150mlの血液試料中の通常型抗体の最大多様性は、0.8〜4×107個の異なる分子と計算される。トータルRNAは、Chomczynskiらの方法(Anal. Biochem.162:156-159(1987))に従って、PBLから単離した。
パニング又はFACS選別による抗原反応性B細胞の濃縮(任意)
試料採取されたB細胞レパートリーの複雑性を低下させて、組換えFabファージディスプレイライブラリーの効率的なクローニングを可能にするために、抗原反応性B細胞を、蛍光標識抗原と(B細胞マーカーとしての)ラクダ科動物の通常型抗体を特異的に認識するmAbとを用いるFACS選別(Weitkampらの文献、J. Immunol. Meth., 275:223-237(2003))によるか、又は固定化した抗原に対するパニング手順(Lightwoodらの文献、J. Immunol. Meth. 316:133-143(2006))によって濃縮した。
可変領域遺伝子の増幅及びクローニング
ランダムプライムcDNAは、RT-PCR用のSuperscript III(商標)ファーストストランド合成システム(Invitrogen社)を用いて、80μgのPBL RNAから調製した。RNAを、20μlの反応液の8つの独立した反応において、2.5μMのランダムヘキサヌクレオチドプライマー及び500μMのdNTPの存在下にて65℃で5分間熱変性させた。その後、供給業者の指示に従って、8×40μlの総最終容量中に、緩衝液及びジチオスレイトール、並びに640ユニットのRNaseOUT(40ユニット/μl、Invitrogen社)、及び3200ユニットのSuperscriptIII逆転写酵素(200ユニット/μl;Invitrogen社)を添加した。50℃で50分間、85℃で5分間、及び1℃で1分間の後、RNAse Hを添加し(約4ユニット)、37℃で20分間インキュベートした。プールしたcDNAを、供給業者の推奨に従ってQIAquick(商標)PCR精製キットを用いて浄化し、PCRに用いた。
一次及び二次ラクダ科動物Fabレパートリーの構築
一次重鎖レパートリー及び2つの一次軽鎖レパートリーの構築のために、制限部位が付加されたPCR産物をゲル精製し、その後、消化し、様々なVH、Vκ、及びVλファミリーを組み合わせて3つのグループにした。VHCH1断片をSfiI及びNotIで消化し、VκCκ及びVλCλ断片をApaLI及びAscIで消化し、ファージミドベクターpCB3(適合したマルチクローニングサイトを有するベクターpCES1に類似している)にクローニングした。消化した断片(1〜2μg)を、消化及び精製したpCB3(2〜4μg)に、T4-DNAリガーゼ(Fermentas社)を用いて、室温で数時間、その後、37℃で1〜2時間連結させた。軽鎖又は重鎖プールの脱塩したライゲーション混合液を、大腸菌株TG1のエレクトロポレーションに用いて、1つの鎖のライブラリーを作製した。
ライブラリーの選択
出発接種菌中に各クローン由来の少なくとも10個の細菌が確実に存在するように、ライブラリー由来の代表的な数の細菌を接種に用いて、ヘルパーファージM13-KO7又はVCSM-13によるファージミド粒子のレスキューを2Lスケールで実施した。選択のために、1013個のコロニー形成単位を、イムノチューブ(Maxisorp(商標)チューブ、Nunc社)もしくは96ウェルマイクロタイタープレート(Maxisorp(商標)、Nunc社)中に固定化した抗原とともに、又は可溶性ビオチン化抗原とともに用いた。固定化した抗原の量は、第1ラウンド1の10μg/mlから始めて、その後の選択ラウンドの間に10〜100倍減少させた。抗原を、供給業者の推奨に従って、抗原1分子当たりNHS-ビオチン(Pierce社)3〜10分子の比でビオチン化し、その生体活性についてバイオアッセイで試験した。特に明記しない限り、該抗原を、第1ラウンドの間は1〜10nMの濃度で、その後のラウンドの間は10pM〜1nMの濃度で選択に用いた。
拮抗性サイトカインx特異的Fabのスクリーニング
可溶性Fabは、Marksらの文献(Marksらの文献、J. Mol. Biol. 222:581-597(1991))に記載されているように個々のクローンから、しかし、好ましくは感度を高めるためにモノクローナルファージ(Leeらの文献、Blood、108:3103-3111(2006))として産生した。可溶性Fab又はFab提示ファージを含む培養上清を、直接コーティングされた抗原を用いるELISAで試験したか、又は固定化したストレプトアビジンを介して捕捉した。組換えヒトサイトカインx及びストレプトアビジンを、0.1M NaHCO3(pH9.6)中10μg/mlで、4℃で16時間コーティングした。PBS、0.1%(v/v)Tween 20で3回洗浄した後、ビオチン化抗原を、0.5μg/mlの濃度で、室温で30〜60分間添加した。プレートを、PBS中の2%(w/v)半脱脂粉乳(Marvel)又は(PBS中の)1%カゼイン溶液を用いて、室温で30分間ブロッキングした。培養上清を、2%(w/v)Marvel/PBS中で1倍又は5倍希釈し、2時間インキュベートし;結合したFabを、重Fd鎖のカルボキシル末端にあるmyc-ペプチドタグを認識する抗myc抗体9E10(5μg/ml)、及びウサギ抗マウスHRPコンジュゲート(Dako社)で検出した。最後のインキュベーションの後、染色を、テトラメチルベンジジン及びH2O2を基質として用いて行ない、0.5容量の1M H2SO4を添加して停止させ;光学密度を450nmで測定した。ELISAで陽性シグナル(バックグラウンドの2倍を上回るもの)を生じるクローンを、オリゴヌクレオチドプライマーのM13-リバース及びgeneIII-フォワード(4)を用いる増幅で得られたPCR産物の、又は個別のFd及びVκCκ又はVλCλアンプリコンのBstNI又はHinfIフィンガープリントによって解析した。
リードFabの大規模産生及び精製
3〜6個の異なるリード由来のFabインサートを、Fdのカルボキシ末端に融合したヘキサヒスチジンタグ及びC-MYCタグを含むが、バクテリオファージM13 gene3を欠くpCB3と同一の発現ベクター(pCB5と符号化)にApaLI-NotIを介して再クローニングした。同時に、V領域を、適切な組合せの制限酵素を用いて再クローニングし、その後、ヒトCH1及びCκ又はCλを含む、キメラFab発現用のgene3欠失ベクターにクローニングした。フィンガープリント解析後、再クローニング後に得られた個々のクローンを、50ml又は250mlスケールで増殖させ、ペリプラズム画分を上記のように調製した。Fab断片をIMACで精製し、正しく形成されたFabを、Superdex(商標)75HRカラム(Amersham Pharmacia Biotech社)を用いるサイズ排除クロマトグラフィーでさらに精製した。細胞ベースのアッセイによっては、1M NaOH中で一晩増感させ、その後、D-PBS中で平衡化する陰イオン交換カラム(Source30Q、GE Healthcare社)に通すことによって、エンドトキシンを除去した。Fabのモル吸光係数13を用いて280nmで光学密度を測定することにより、収量を決定した。
本実施例では、親和性ベースの選択(引用により本明細書中に組み込まれている、US2003/0190317 A1号)によって高親和性フレームワーク配列を同定するために、わずかなフレームワーク残基のセットを標的とするソフトランダム化手順を用いて、及び得られたFabライブラリーの繊維状ファージ表面での一価ディスプレイによって、サイトカインxに対するリャマ由来のリードFabをヒト化した。例えば、ヒトコブラクダ由来の生殖系列VH(IGHV1S20)の場合、野生型残基の70%を維持して、位置5(Val、Leu)、55(Gly、Ala)、83(Ala、Ser)、95(Lys、Arg)、96(Ser、Ala)、及び101(Met、Val)について、小さいライブラリーを作製した(IMGT付番)。超可変ループ中のアミノ酸について同様に対処することができた。
ヒトFab断片及びヒトモノクローナル抗体の発現
ヒト化VH及びVL領域から出発して、ヒト化Fabの発現を、Rauchenbergerらの文献(J. Biol. Chem. 278:38194-204(2003))に記載されているように実施した。ヒトモノクローナル抗体の発現のために、1つは軽鎖コンストラクト用、1つは重鎖コンストラクト用の2つの個別の発現ベクターを、pcDNA3.1ベクターを基にして構築した。軽鎖用の発現ベクターは、CMVプロモーターの下流にあるヒトCカッパ又はヒトCラムダのいずれかの配列、及び該CMVプロモーターの下流にあり、かつ軽鎖定常ドメインとインフレームになったKPN1 BsmB1断片としての軽鎖コンストラクトのクローニングを可能にする制限部位を含んでいた。次に、重鎖用の発現ベクターは、CMVプロモーターの下流にあるヒトCH1-ヒンジ-CH2-CH3配列、及び該CMVプロモーターの下流にあり、かつ重鎖定常ドメインとインフレームになったKPN1 BsmB1断片としてのVHコンストラクトのクローニングを可能にする制限部位を含んでいた。
特に指示しない限り、以下の試験で用いる材料及びプロトコルは、実施例1〜9で用いたものと類似していた。
2頭のリャマ(ラマ・グラマ)を(実施例1に記載したような)標準的なプロトコルに従って、ヒトIL-1βで免疫した。
両方の免疫リャマから単離されたPBLを、Haardらの文献(JBC 1999)に記載されている戦略を用いて、RNA抽出、RT-PCR、及びファージミドへのFabのPCR-クローニングに用いて、良好な多様性を有する多様なライブラリー(2〜5×108)を得た。
ファージディスプレイを用いて、ビオチン化IL-1βに結合する非常に多様なリャマFabを同定した。タンパク質の活性のある立体構造を保存するために、ビオチン化IL-1βを捕捉用に用いた。2ラウンドの選択の後、対照と比べて良好な濃縮が認められた。ファージELISAにより、サイトカイン特異的Fabを発現するクローンの存在が明らかになった(データは示さない)。
標的特異的VH及びVλドメインを、同一のCDR1及びCDR2長、並びに対応するカノニカルフォールドを示すよく見られるヒト生殖系列と一致させた。その後、最も近いヒト生殖系列を、そのフレームワーク領域における配列相同性に基づいて選択した。一致しないアミノ酸残基を、関連する他のヒト生殖系列におけるその存在についてチェックした。一致するものが存在しない場合、これらの残基を外来のもの(foreign)とカウントした。
・合計14種の標的特異的VHファミリー、9種の標的特異的Vλファミリー、及び3種のVκファミリーを、このまさに最初の選択に基づいて同定した。
・14種の抗IL-1βWT VHと12種の抗IL-1βWT VLのこの最初のパネルは、ヒト生殖系列との顕著に高い配列相同性を示している。
・これらのVHドメインの33%はヒト状況との95%以上の出発相同性を有し、かつVLドメインの約44%はヒト状況との95%以上の出発相同性を有しており、さらなるヒト化の必要がなくなっている。
・VHドメイン2D8はVH 1C2のヒト化バージョンであるが、その理由は、これが最も近いヒト生殖系列と比べて逸脱するアミノ酸残基が1つ少ないことによる。その対応するVLドメイン(VL 2D8)は、最も近いヒト生殖系列との95%の出発相同性を有しており、これはさらに、1つの復帰突然変異(VL 2G7)によって96%に増大した。
・上記の方法を用いて評価したとき、VH及びVLドメインは全て、1つの例外もなく、ヒト3-D結合部位構造(すなわち、一致するヒト生殖系列セグメントに生じるのと同一のCDR1及びCDR2についてのカノニカルフォールド組合せ)を示した(データは示さない)。
1E2及び1F2と符号化した2つのIL-1β特異的Fabに対してヒト化を行なった。最も近いヒト生殖系列に対するアラインメントに基づいて、そのVH及びVλフレームワーク領域における突然変異が提案された(図2)。ヒトVH3ファミリーと一致するVHの生殖系列化は、多くの場合、公知のラマ・グラマ、ラマ・パコス、又はカメルス・ドロメダリウス由来の生殖系列配列において既に逸脱している、いくつかの残基を含む。例えば、位置71のアラニン(付番はKabatによる)及び83のリジン及び84のプロリンは、それぞれ、セリン(しかし、特定のヒト生殖系列VH3メンバーでは、アラニンが存在する)、アルギニン(しかし、いくつかのヒトVH3生殖系列によってリジンが用いられている)、及びアラニンに変化させることができる。軽鎖可変配列については、ラクダ科動物に利用可能な生殖系列配列はないが、大部分のリード抗体で変化させられることになる、FRにおけるヒト生殖系列からのいくつかの逸脱が存在する可能性は極めて高い。完全ヒト化(hum)及び野生型(wt)V領域の他に、3つの野生型残基しか残存していない「安全変異体」(safe)も提案された。
・1E2のVHドメインの部分ヒト化(wt Vλ/safe VH)及び完全ヒト化(wt Vλ/hum VH)によって、機能的Fabが生成された。
・wt 1F2及びwt 1E2(リャマVλ及びVHをヒトCλ及びCH1に融合したもの)
・safe変異体1F2及びsafe変異体1E2(部分ヒト化VλをヒトCλ及びCH1に融合したもの)
・hum 1F2及びhum 1E2(完全ヒト化Vλ及びVHをヒトCλ及びCH1に融合したもの)
・1F2 VL及びVHドメインのフレームワーク領域中での最も近いヒト生殖系列への復帰突然変異によって、抗原特異性を維持する、部分ヒト化(safe)及び完全ヒト化(hum)変異体を得ることに成功した。
IL-1β特異的クローン1E2のVL及びVH可変ドメインをヒトCλ及びCH1定常ドメインに融合させることに成功し、産生及び精製される「キメラ」Fabを生じさせた。
下記の表は、以下のELISA実験から得られたOD値を示している。ウェルを、IL1-βとその受容体との結合を阻害することが知られているマウスモノクローナル抗体(Diaclone SAS社により提供されたもの)でコーティングした。
以下の実施例は、確立されたマウスモノクローナル抗体アプローチと比較して、ラクダ科動物の免疫により達成し得る機能的多様性を示している。
以下の表は、アルパカ(ラマ・パコス)の生殖系列VHドメインと、最も良く一致するヒト生殖系列VHドメインの間のアミノ酸配列相同性比較の結果をまとめたものである。相同性%は、ラマ・グラマについて本明細書で記載したのと同じアルゴリズムを用いて算出した。ラマ・パコスについての生のVH配列データは示していない:
成熟ラクダ科動物VHドメインをコードする複数のcDNA配列をクローニングし、完全に配列決定した。さらに、ラクダ科動物Vλ/Vκドメインをコードする複数のラクダ科動物生殖系列断片の配列を得た。
前述の記載を考慮して、本発明の多くの修正及び別の実施態様が当業者には明らかであろう。したがって、本記載は、単に例示的なものであるとみなされるべきであって、当業者に本発明を実施する最良の形態を教示する目的のためのものである。構造の詳細は、本発明の精神から逸脱することなく、大幅に変更することができ、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る全ての修正の排他的使用が留保される。本発明は、添付の特許請求の範囲及び適用可能な法規により必要とされる範囲にのみ限定されることが意図される。
Claims (73)
- ラクダ科動物VHドメイン、及びラムダ軽鎖クラス(Vλ)又はカッパ軽鎖クラス(Vκ)のいずれかのラクダ科動物VLドメインを含み、少なくとも1つのアミノ酸置換が、該VHドメイン及び/又は該VLドメイン中に存在し、該アミノ酸置換(複数可)が、以下からなる群から選択されることを特徴とする、抗体:
(a)該ラクダ科動物VHドメイン中のアミノ酸置換(複数可)、ここで、Kabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H5、H7、H11、H12、H13、H14、H29、H30、H37、H40、H48、H67、H68、H69、H71、H74、H77、H78、H80、H81、H82b、H83、H84、H85、H86、H89、H93、H94、及びH108からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVHドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される;並びに
(b)該ラクダ科動物VLドメイン中のアミノ酸置換、ここで、該ラムダ軽鎖クラス(Vλ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L1、L2、L3、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L17、L18、L19、L20、L38、L39、L40、L42、L44、L46、L47、L49、L58、L59、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L74、L76、L78、L80、L84、及びL103からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVλドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換され;かつ該カッパ軽鎖クラス(Vκ)のラクダ科動物VLドメインについて、Kabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K1、K3、K4、K7、K9、K11、K12、K13、K14、K15、K18、K19、K36、K42、K43、K45、K46、K58、K63、K70、K77、K78、K79、K80、K83、K100、K103、K104、及びK106からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸は、ヒトVκドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される。 - 前記ラクダ科動物VHドメインが、ヒトVH3ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H13、H14、H29、H30、H37、H40、H74、H77、H78、H82b、H83、H84、H86、H89、H93、又はH94のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVH3ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項1記載の抗体。
- 前記H74のアミノ酸が交換される、請求項1又は請求項2記載の抗体。
- 前記H74のアミノ酸がS又はA、好ましくはSと交換される、請求項3記載の抗体。
- 前記H83のアミノ酸が交換される、請求項1又は請求項2記載の抗体。
- 前記H83のアミノ酸がR又はK、好ましくはRと交換される、請求項5記載の抗体。
- 前記H84のアミノ酸が交換される、請求項1又は請求項2記載の抗体。
- 前記H84のアミノ酸がA又はT、好ましくはAと交換される、請求項7記載の抗体。
- 前記H94のアミノ酸が交換される、請求項1又は請求項2記載の抗体。
- 前記H94のアミノ酸がRと交換される、請求項9記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項2記載の抗体:
好ましくはQ又はEと交換されたH1;
好ましくはQ、R、又はKと交換されたH13;
好ましくはPと交換されたH14
好ましくはF又はVと交換されたH29;
好ましくはS、D、又はGと交換されたH30;
好ましくはV、F、又はI、最も好ましくはVと交換されたH37;
好ましくはAと交換されたH40;
好ましくはT又はSと交換されたH77;
好ましくはL又はA、最も好ましくはLと交換されたH78;
好ましくはSと交換されたH82b;
好ましくはDと交換されたH86;
好ましくはV又はL、最も好ましくはVと交換されたH89;
好ましくはA又はTと交換されたH93。 - 前記ラクダ科動物VHドメインがヒトVH1ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H7、H11、H12、H13、H69、H71、H78、H80、又はH86のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVH1ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項1記載の抗体。
- 前記H11のアミノ酸が、好ましくはVと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H12のアミノ酸が、好ましくはKと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H13のアミノ酸が、好ましくはKと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H69のアミノ酸が、好ましくはI、M、又はS、最も好ましくはMと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H71のアミノ酸が、好ましくはR、A、E、又はT、最も好ましくはRと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H80のアミノ酸が、好ましくはMと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H86のアミノ酸が、好ましくはDと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H78のアミノ酸が、好ましくはV又はAと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H1のアミノ酸が、好ましくはQ又はEと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記H7のアミノ酸が、好ましくはSと交換される、請求項1又は請求項12記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VHドメインがヒトVH4ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物VHドメインの位置H1、H16、H23、H30、H48、H49、H67、H68、H71、H81、H84、H85、H86のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVH4ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項1記載の抗体。
- 前記H16のアミノ酸が、好ましくはEと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H23のアミノ酸が、好ましくはA又はTと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H30のアミノ酸が、好ましくはSと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H48のアミノ酸が、好ましくはIと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H1のアミノ酸が、好ましくはQ又はEと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H67のアミノ酸が、好ましくはVと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H68のアミノ酸が、好ましくはTと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H71のアミノ酸が、好ましくはVと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H81のアミノ酸が、好ましくはKと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H84のアミノ酸が、好ましくはAと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H85のアミノ酸が、好ましくはAと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H86のアミノ酸が、好ましくはDと交換される、請求項1又は請求項23記載の抗体。
- 前記H108のアミノ酸が、好ましくはLと交換される、請求項1〜35のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VLドメインが前記ラムダ軽鎖クラス(Vλ)に属し、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L1、L2、L3、L5、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L17、L18、L19、L20、L38、L39、L40、L42、L44、L46、L47、L49、L58、L59、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L74、L76、L78、L80、L81、L84、L103、L104、L108のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVラムダドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項1記載の抗体。
- ラクダ科動物VλドメインがヒトVλ1ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L11、L14、L18、L19、L38、L69、L74、L76、又はL80のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVλ1ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項37記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項38記載の抗体:
前記L11のアミノ酸が、好ましくはA又はVと交換される;
前記L14のアミノ酸が、好ましくはA又はT、より好ましくはAと交換される;
前記L18のアミノ酸が、好ましくはR又はK、より好ましくはRと交換される;
前記L19のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
前記L38のアミノ酸が、好ましくはQと交換される;
前記L69のアミノ酸が、好ましくはTと交換される;
前記L74のアミノ酸が、好ましくはA又はGと交換される;
前記L76のアミノ酸が、好ましくはS又はTと交換される;
前記L80のアミノ酸が、好ましくはS、T、又はAと交換される。 - 前記ラクダ科動物VλドメインがヒトVλ2ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L3、L8、L14、L15、L17、L18、L39、L42、L47、L58、L59、又はL80のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVλ2ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項37記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項40記載の抗体:
前記L3のアミノ酸が、好ましくはAと交換される;
前記L8のアミノ酸が、好ましくはA、P、又はRと交換される;
前記L14のアミノ酸が、好ましくはSと交換される;
前記L15のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
前記L17のアミノ酸が、好ましくはQと交換される;
前記L18のアミノ酸が、好ましくはSと交換される;
前記L39のアミノ酸が、好ましくはH又はP、より好ましくはHと交換される;
前記L42のアミノ酸が、好ましくはK又はT、より好ましくはKと交換される;
前記L47のアミノ酸が、好ましくはMと交換される;
前記L58のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
前記L59のアミノ酸が、好ましくはP又はSと交換される;
前記L80のアミノ酸が、好ましくはAと交換される。 - 前記ラクダ科動物VλドメインがヒトVλ3ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L1、L2、L3、L5、L7、L8、L9、L11、L14、L15、L19、L20、L44、L46、L49、L60、L66、L67、L69、L70、L71、L72、L76、L78、又はL84のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVλ3ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項37記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項42記載の抗体:
前記L1のアミノ酸が、好ましくはSと交換される;
前記L2のアミノ酸が、好ましくはYと交換される;
前記L3のアミノ酸が、好ましくはEと交換される;
前記L5のアミノ酸が、好ましくはMと交換される;
前記L7のアミノ酸が、好ましくはD又はPと交換される;
前記L8のアミノ酸が、好ましくはP、S、L、又はH、好ましくはPと交換される;
前記L9のアミノ酸が、好ましくはS又はAと交換される;
前記L11のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
前記L14のアミノ酸が、好ましくはA又はSと交換される;
前記L15のアミノ酸が、好ましくはP、L、又はT、好ましくはPと交換される;
前記L19のアミノ酸が、好ましくはA又はV、好ましくはAと交換される;
前記L20のアミノ酸が、好ましくはR又はS、好ましくはRと交換される;
前記L44のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
前記L46のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
前記L49のアミノ酸が、好ましくはYと交換される;
前記L60のアミノ酸が、好ましくはE又はD、より好ましくはEと交換される;
前記L66のアミノ酸が、好ましくはS、N、又はTと交換される;
前記L67のアミノ酸が、好ましくはS又はPと交換される;
前記L69のアミノ酸が、好ましくはT又はNと交換される;
前記L70のアミノ酸が、好ましくはT、M、又はI、より好ましくはTと交換される;
前記L71のアミノ酸が、好ましくはA、V、又はTと交換される;
前記L72のアミノ酸が、好ましくはT又はS、より好ましくはTと交換される;
前記L76のアミノ酸が、好ましくはS又はT、より好ましくはSと交換される;
前記L78のアミノ酸が、好ましくはV、A、T、又はI、より好ましくはV又はAと交換される;
前記L84のアミノ酸が、好ましくはAと交換される。 - 前記ラクダ科動物VλドメインがヒトVλ5ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L2、L11、L17、L19、L40、L70、L72、又はL80のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVλ5ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項37記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項44記載の抗体:
前記L2のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
前記L11のアミノ酸が、好ましくはL、S、又はHと交換される;
前記L17のアミノ酸が、好ましくはA又はE、より好ましくはAと交換される;
前記L19のアミノ酸が、好ましくはA又はVと交換される;
前記L40のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
前記L70のアミノ酸が、好ましくはA又はT、より好ましくはAと交換される;
前記L72のアミノ酸が、好ましくはI又はL、より好ましくはIと交換される;
前記L80のアミノ酸が、好ましくはS又はP、より好ましくはSと交換される。 - 前記ラクダ科動物VλドメインがヒトVλ8ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vλドメインの位置L2、L11、L60、L67、L80、L81、又はL84のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVλ8ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項37記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項46記載の抗体:
前記L2のアミノ酸が、好ましくはTと交換される;
前記L11のアミノ酸が、好ましくはFと交換される;
前記L60のアミノ酸が、好ましくはDと交換される;
前記L67のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
前記L80のアミノ酸が、好ましくはAと交換される;
前記L81のアミノ酸が、好ましくはDと交換される;
前記L84のアミノ酸が、好ましくはSと交換される。 - 前記L103のアミノ酸が、好ましくはKと交換される、請求項37〜47のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VLドメインが前記カッパ軽鎖クラス(Vκ)に属し、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K1、K2、K3、K4、K11、K12、K13、K14、K15、K42、K43、K70、K77、K79、K80、K83、K7、K9、K14、K18、K36、K46、K63、K19、K39、K45、K58、K68、K78、K100、K103、K104、又はK106のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVカッパドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項1記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VκドメインがヒトVκ1ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K1、K2、K4、K11、K12、K13、K15、K42、K43、K70、K77、K79、K80、又はK83のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVκ1ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項49記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項50記載の抗体:
K2のアミノ酸が、好ましくはD、A、又はNと交換される;
K4のアミノ酸が、好ましくはM又はLと交換される;
K11のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
K12のアミノ酸が、好ましくはKと交換される;
K13のアミノ酸が、好ましくはKと交換される;
K15のアミノ酸が、好ましくはV又はT、最も好ましくはVと交換される;
K42のアミノ酸が、好ましくはKと交換される;
K43のアミノ酸が、好ましくはA又はV、最も好ましくはAと交換される;
K70のアミノ酸が、好ましくはD又はE、最も好ましくはDと交換される;
K77のアミノ酸が、好ましくはS又はC、より好ましくはSと交換される
K79のアミノ酸が、好ましくはQと交換される;
K80のアミノ酸が、好ましくはP又はS、最も好ましくはPと交換される;
K83のアミノ酸が、好ましくはF、I、又はV、最も好ましくはFと交換される。 - 前記ラクダ科動物VκドメインがヒトVκ2ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K7、K9、K12、K14、K18、K36、K46、K63、K77、K79、又はK83のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVκ2ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項50記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項52記載の抗体:
K7のアミノ酸が、好ましくはT又はSと交換されている
K9のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
K12のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
K14のアミノ酸が、好ましくはTと交換される;
K18のアミノ酸が、好ましくはP又はQ、最も好ましくはPと交換される;
K36のアミノ酸が、好ましくはY、F、又はL、最も好ましくはYと交換される;
K46のアミノ酸が、好ましくはL又はR、最も好ましくはLと交換される;
K63のアミノ酸が、好ましくはSと交換される;
K77のアミノ酸が、好ましくはRと交換される;
K79のアミノ酸が、好ましくはEと交換される;
K83のアミノ酸が、好ましくはV又はF、最も好ましくはVと交換される。 - 前記ラクダ科動物VκドメインがヒトVκ4ドメインと相同であり、かつKabatによる、該ラクダ科動物Vκドメインの位置K9、K11、K12、K13、K15、K18、K19、K39、K43、K45、K58、K68、K78、K80、又はK83のうちの1つ又は複数のアミノ酸が、ヒトVκ4ドメイン配列中の対応する位置に見られるアミノ酸と交換される、請求項50記載の抗体。
- 以下のアミノ酸交換のうちの1つ又は複数が行なわれる、請求項1又は請求項54記載の抗体:
K9のアミノ酸が、好ましくはDと交換される;
K11のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
K12のアミノ酸が、好ましくはAと交換される;
K13のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
K15のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
K18のアミノ酸が、好ましくはRと交換される;
K19のアミノ酸が、好ましくはAと交換される;
K39のアミノ酸が、好ましくはKと交換される;
K43のアミノ酸が、好ましくはPと交換される;
K45のアミノ酸が、好ましくはKと交換される;
K58のアミノ酸が、好ましくはVと交換される;
K68のアミノ酸が、好ましくはGと交換される;
K78のアミノ酸が、好ましくはLと交換される;
K80のアミノ酸が、好ましくはAと交換される;
K83のアミノ酸が、好ましくはVと交換される。 - 前記L103のアミノ酸が、好ましくはKと交換される、請求項50〜55のいずれか一項記載の抗体。
- 前記L104のアミノ酸が、好ましくはVと交換される、請求項50〜55のいずれか一項記載の抗体。
- 前記L106のアミノ酸が、好ましくはIと交換される、請求項50〜55のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VH及び/又はVLドメインが、少なくとも1つの異種CDR、フレームワーク領域、又はそれらの部分を含む、請求項1〜58のいずれか一項記載の抗体。
- 前記異種CDR又はフレームワーク領域が、齧歯類、ウサギ目動物、ラクダ科動物、霊長類、又は軟骨魚類から得られる、請求項59記載の抗体。
- 前記ヒトVH又はVL(VλもしくはVκ)ドメイン配列が、体細胞突然変異したヒト可変領域又はその部分である、請求項1〜60のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ヒトVH又はVL(VλもしくはVκ)ドメイン配列が、コンセンサス配列又はその部分を含む、請求項1〜61のいずれか一項記載の抗体。
- 抗体断片から形成されるFab、Fab'、F(ab')2、二重特異性Fab'、Fv断片、ダイアボディ、線状抗体、単鎖可変断片(scFv)、抗体、又は多重特異性抗体である、請求項1〜62のいずれか一項記載の抗体。
- 非ラクダ科動物抗体由来の少なくとも1つのCH1、CH2、又はCH3ドメインをさらに含む、請求項1〜63のいずれか一項記載の抗体。
- 前記非ラクダ科動物抗体がヒト抗体である、請求項64記載の抗体。
- IgG、IgM、IgD、IgE、及びIgAからなる群から選択されるヒト重鎖定常領域を含む、請求項1〜65のいずれか一項記載の抗体。
- ヒトカッパ又はラムダ軽鎖定常領域を含む、請求項1〜66のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VH及び/又はVLドメインが、ラクダ、リャマ、ヒトコブラクダ、ビクーナ、グアナコ、又はアルパカに由来する、請求項1〜67のいずれか一項記載の抗体。
- 前記ラクダ科動物VH及び/又はVLドメイン配列が、リャマ又はアルパカに由来する、請求項1〜68のいずれか一項記載の抗体。
- 請求項1〜69のいずれか一項記載の抗体をコードするポリヌクレオチド分子。
- 宿主細胞又は無細胞発現系での前記抗体の発現を可能にする調節配列に機能的に連結された請求項70記載のポリヌクレオチド分子を含む発現ベクター。
- 請求項71記載の発現ベクターを含む宿主細胞又は無細胞発現系。
- 前記抗体の発現を可能にする条件下で請求項71記載の宿主細胞又は無細胞発現系を培養し、かつ発現された抗体を回収することを含む、組換え抗体の産生方法。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016535093A (ja) * | 2013-11-04 | 2016-11-10 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 合成単一ドメイン抗体 |
Families Citing this family (58)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012123586A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | arGEN-X BV | Antibodies to cd70 |
CA2835094C (en) * | 2011-05-06 | 2020-12-22 | David Gearing | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
US20140213459A1 (en) * | 2011-05-27 | 2014-07-31 | Roland Beckmann | Antibodies with improved folding stability |
EP2773660A2 (en) * | 2011-11-03 | 2014-09-10 | Argen-X B.V. | Chimeric human-camel antigens and their use |
JP6283030B2 (ja) * | 2012-08-31 | 2018-02-21 | アルゲン−エックス ビーブイビーエー | 高度に多様なコンビナトリアル抗体ライブラリ |
EP2977386A1 (en) | 2012-08-31 | 2016-01-27 | Argen-X Nv | Method for producing antibody molecules having inter-species, intra-target cross-reactivity |
EP2719706A1 (en) | 2012-10-15 | 2014-04-16 | Universität Zürich | Bispecific HER2 ligands for cancer therapy |
AU2013331763B2 (en) | 2012-10-15 | 2018-02-15 | Universitat Zurich | Bispecific HER2 ligands for cancer therapy |
US9550825B2 (en) | 2013-01-28 | 2017-01-24 | Evec Inc. | Humanized anti-HMGB1 antibody or antigen-binding fragment thereof |
EP2883883A1 (en) | 2013-12-16 | 2015-06-17 | Cardio3 Biosciences S.A. | Therapeutic targets and agents useful in treating ischemia reperfusion injury |
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CA3030099A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Staten Biotechnology B.V. | Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof |
GB201612337D0 (en) | 2016-07-15 | 2016-08-31 | Argen-X N V | Ant-il-22r antibodies |
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US11673971B2 (en) | 2016-09-23 | 2023-06-13 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multispecific antibody molecules comprising lambda and kappa light chains |
KR20190087539A (ko) | 2016-11-23 | 2019-07-24 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | Psma 표적화 삼중특이성 단백질 및 사용 방법 |
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CA3058290A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Universite Libre De Bruxelles | Biomarkers and targets for proliferative diseases |
MA50958A (fr) | 2017-04-21 | 2020-10-14 | Staten Biotechnology B V | Anticorps anti-apoc3 et leurs méthodes d'utilisation |
KR20200026810A (ko) | 2017-05-12 | 2020-03-11 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | Msln 표적화 삼중 특이적 단백질 및 사용 방법 |
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EP3694529A4 (en) | 2017-10-13 | 2021-11-10 | Harpoon Therapeutics, Inc. | TRISPECIFIC PROTEINS AND METHOD OF USE |
KR102429747B1 (ko) | 2017-10-13 | 2022-08-05 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | B 세포 성숙화 항원 결합 단백질 |
US10538583B2 (en) | 2017-10-31 | 2020-01-21 | Staten Biotechnology B.V. | Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof |
WO2019087115A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Staten Biotechnology B.V. | Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof |
CN111448217A (zh) * | 2017-12-22 | 2020-07-24 | 阿根思公司 | 双特异性抗原结合构建体 |
IT201800000535A1 (it) | 2018-01-03 | 2019-07-03 | Procedimenti per la cura del cancro. | |
GB201800649D0 (en) | 2018-01-16 | 2018-02-28 | Argenx Bvba | CD70 Combination Therapy |
EP3749690A1 (en) | 2018-02-05 | 2020-12-16 | Stichting VU | Inverse agonistic anti-us28 antibodies |
WO2019161386A1 (en) * | 2018-02-19 | 2019-08-22 | New York University | Alpha-synuclein single domain antibodies |
US11655293B2 (en) | 2018-02-22 | 2023-05-23 | Universitat Zurich | Ligands to GM-CSF or GM-CSF-receptor for use in leukemia in a patient having undergone allo-HCT |
EP3623382A1 (en) | 2018-09-14 | 2020-03-18 | Universität Zürich | Ligands to gm-csf or gm-csf-receptor for use in leukemia in a patient having undergone allo-hct |
CN116942851A (zh) | 2018-03-23 | 2023-10-27 | 布鲁塞尔自由大学 | Wnt信号传递激动剂分子 |
EP3807401A1 (en) | 2018-06-15 | 2021-04-21 | Universität Bern | LIGANDS TO LIGHT OR ITS RECEPTOR LTßR FOR USE IN HAEMATOLOGIC MALIGNANCIES |
US10815311B2 (en) | 2018-09-25 | 2020-10-27 | Harpoon Therapeutics, Inc. | DLL3 binding proteins and methods of use |
JP2022504472A (ja) | 2018-10-08 | 2022-01-13 | ウニベルシテート チューリッヒ | Her2結合四量体ポリペプチド |
WO2020080941A1 (en) | 2018-10-16 | 2020-04-23 | Umc Utrecht Holding B.V. | Anti- low-density lipoprotein receptor-related protein 5/6 antibodies |
US20220017433A1 (en) | 2018-11-21 | 2022-01-20 | Universität Zürich | Photochemically induced conjugation of radiometals to small molecules, peptides and nanoparticles in a simultaneous one-pot reaction |
CN115768463A (zh) | 2020-02-21 | 2023-03-07 | 哈普恩治疗公司 | Flt3结合蛋白及使用方法 |
US20230303680A1 (en) | 2020-08-18 | 2023-09-28 | Universität Zürich | A cd25-biased anti-il-2 antibody |
WO2022136344A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | Université Libre de Bruxelles | Modulation of prdm12 for use in treatment of pain conditions |
EP4277706A1 (en) | 2021-01-15 | 2023-11-22 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut- Antoni van Leeuwenhoek Ziekenhuis | Inducers of senescence, in combination with a selective death receptor 5 (dr5) agonist, for use in a method of treating cancer |
WO2023012348A1 (en) | 2021-08-05 | 2023-02-09 | Immunos Therapeutics Ag | A modified hla-b57 with increased expression levels |
CA3227617A1 (en) | 2021-08-05 | 2023-02-09 | Osiris MARROQUIN BELAUNZARAN | Combination medicaments comprising hla fusion proteins |
WO2023021006A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Universität Zürich | Il-1 targeting agents for treatment of pitiyriasis rubra pilaris |
WO2023036849A1 (en) | 2021-09-07 | 2023-03-16 | ETH Zürich | Identifying and predicting future coronavirus variants |
WO2023104933A1 (en) * | 2021-12-07 | 2023-06-15 | new/era/mabs GmbH | Camelid antibodies for use in therapy and diagnosis |
EP4260907A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-18 | Universität Zürich | Agents for treatment of endometriosis and other benign gynecological neoplasms |
WO2024006975A1 (en) * | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for antibody humanization |
WO2024096735A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Stichting Amsterdam UMC | Single domain anti-cd169 antibodies |
WO2024101989A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Stichting Amsterdam UMC | Activation inducible antigen receptors for adoptive immunotherapy |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008067464A2 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Abbott Laboratories | NEW Aβ CONFORMER SELECTIVE ANTI-Aβ GLOBULOMER MONOCLONAL ANTIBODIES |
WO2010001251A2 (en) * | 2008-07-02 | 2010-01-07 | Argen-X B.V. | Antigen binding polypeptides |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US648213A (en) | 1899-12-06 | 1900-04-24 | Frederick Meukert Jr | Vehicle-shaft. |
EP1715045A3 (en) | 1991-07-25 | 2006-12-13 | Biogen Idec Inc. | Recombinant antibodies for human therapy |
US20020032315A1 (en) | 1997-08-06 | 2002-03-14 | Manuel Baca | Anti-vegf antibodies |
EP1481010A2 (en) * | 2002-02-28 | 2004-12-01 | Eli Lilly And Company | Anti-interleukin-1 beta analogs |
WO2005123774A2 (en) * | 2004-06-15 | 2005-12-29 | Erol Fikrig | Antibodies to west nile virus polypeptides |
AU2007329759B2 (en) * | 2006-10-27 | 2013-05-30 | Lpath, Inc. | Compositions and methods for binding sphingosine-1-phosphate |
EP2160409A1 (en) * | 2007-05-24 | 2010-03-10 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against growth factor receptors and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with growth factors and their receptors |
CA2691940C (en) * | 2007-07-03 | 2018-03-06 | Joost Alexander Kolkman | Methods for providing improved immunoglobulin sequences |
WO2009135953A2 (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-12 | Ablynx Nv | Amino acid sequences directed against integrins and uses thereof |
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Patent Citations (3)
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---|---|---|---|---|
WO2008067464A2 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Abbott Laboratories | NEW Aβ CONFORMER SELECTIVE ANTI-Aβ GLOBULOMER MONOCLONAL ANTIBODIES |
WO2010001251A2 (en) * | 2008-07-02 | 2010-01-07 | Argen-X B.V. | Antigen binding polypeptides |
JP2011526493A (ja) * | 2008-07-02 | 2011-10-13 | アルゲン−エックス ビー.ブイ. | ラクダ科動物由来の抗原結合ポリペプチド |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ILHAM LEGSSYER: "THE CAMEL(CAMELUS DROMEDARIUS) IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAINS", THESIS VRIJE UNIVERSITEIT BRUSSEL, JPN5013010035, 1 June 2002 (2002-06-01), ISSN: 0003032055 * |
JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 350, no. 1, JPN6015010770, 1 July 2005 (2005-07-01), pages 112 - 125, ISSN: 0003032053 * |
MOLECULAR IMMUNOLOGY, vol. Vol.34, No.16-17, JPN6015010771, 1997, pages 1121 - 1131, ISSN: 0003032054 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016535093A (ja) * | 2013-11-04 | 2016-11-10 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 合成単一ドメイン抗体 |
JP2019194237A (ja) * | 2013-11-04 | 2019-11-07 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 合成単一ドメイン抗体 |
JP2021185137A (ja) * | 2013-11-04 | 2021-12-09 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 合成単一ドメイン抗体 |
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