JP2013209348A - Apj活性化剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ヤマモモ、フトモモ及びコナラの植物体又はその抽出物から成る群から選択される1又は複数の成分を含むAPJ活性化剤。該APJ活性化剤は、経口投与されることが好ましい。該APJ活性化剤は、APJの活性に関与する多様な疾患や症状の予防又は治療に有効な医薬品、あるいは美容学的状態の改善に有効な化粧品として利用することができ、例えば、紫外線の照射によりもたらされる皮膚の炎症、アトピー性皮膚炎、赤ら顔、酒さ、乾癬等の皮膚炎、リンパ浮腫、皮下脂肪蓄積が伴う疾患、例えば、肥満、セルライト、たるみ(皮膚老化、弾力低下)、または皮下脂肪蓄積に付随する疾患・症候群、などが挙げられる。
【選択図】なし
Description
[1] ヤマモモ、フトモモ及びコナラの植物体又はその抽出物から成る群から選択される1又は複数の成分を含んで成るAPJ活性化剤。
[2] 経口投与されることを特徴とする[1]に記載のAPJ活性化剤。
APJ発現細胞の培養
NIH3T3細胞にアペリン受容体APJを高発現させ、ハイグロマイシンで選択した安定株(大阪大学微生物病研究所高倉伸幸教授より供与)をcAMPルシフェラーゼレポーターベクターでトランスフェクトし、これを以下のcAMPルシフェラーゼアッセイに用いた。培養は200 μg/mlのハイグロマイシンを含む10% FBS含有DMEM培地(Invirtogen)で行った。アッセイ前日に、96穴プレートに1ウェルあたり2.0×105個の細胞を播種し、10% FBSと200 μg/mlハイグロマイシンを含むDMEM培地で培養した。
一晩培養した後、培地をアスピレーターで除き、1ウェルあたり100 μlの添加剤を含まないDMEM培地に交換した。3時間後、GloSensorTM cAMP 試薬(Promega)を1ウェルあたり4 μlずつ添加し、遮光し2時間室温で平衡化した。その後、アペリン13(ペプチド研究所)を0.4 μg/mlとなるように添加剤を含まないDMEM培地で希釈し、これを1ウェルあたり50 μlずつ添加し(最終濃度は0.1 μg/ml)、室温で5 分間プレインキュベートした。更に、40 μMに調整したフォルスコリン(Sigma)を50 μlずつ添加し(最終濃度は10 μM)、15 分間処理した。その後、GloMaxTM 96 Microplate Luminometer(Promega)を用いて発光を測定した。また、上記と同様のルシフェラーゼアッセイを、アペリンと共にアペリン中和抗体である4G5(大阪大学より供与)を添加して行なった。この場合、5 μg/mlとなるように中和抗体を含まないDMEM培地で希釈し、1ウェルあたり50 μlずつ添加した(最終濃度0.5 μg/ml)。同様に、最終濃度が1.5、5、15及び50 μg/mlとなるような中和抗体を調製し、それぞれウェルに添加した。コントロールとして、アペリンを添加せずに、20 μMのフォルスコリンを1ウェルあたり100 μl添加した。
候補薬剤として、約110種の食品素材(株式会社資生堂)を用いて、実験1において確立したスクリーニング系によりアペリン様薬剤の選定を行った。
具体的には、候補薬剤を400 μg/mlに調製し、実験1のcAMPルシフェラーゼアッセイで使用したアペリンの代わりに、1ウェルあたり50 μlずつ添加し(最終濃度100 μg/ml)、実験1と同様のアッセイを行った。
Claims (2)
- ヤマモモ、フトモモ及びコナラの植物体又はその抽出物から成る群から選択される1又は複数の成分を含んで成るAPJ活性化剤。
- 経口投与されることを特徴とする請求項1に記載のAPJ活性化剤。
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