JP2013172675A - ノンアルコール飲料の品質を保証するキット及び方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】アルコールデヒドロゲナーゼ、電子受容体、還元系色素及びpH7.8〜9.5の緩衝液を含むノンアルコール飲料の品質保証キット。該キットと試料とを反応させて得られる反応液を目視することで、試料中のアルコールを測定することが可能である。
【選択図】なし
Description
本実施形態にかかるキットは、アルコールデヒドロゲナーゼ、電子受容体、還元系色素及びpH7.8〜9.5の緩衝液を含む。
本実施形態にかかる方法は、試料とアルコールデヒドロゲナーゼ、電子受容体及び緩衝液とを混合してpH7.0〜9.0の反応液1を得る工程、反応液1と還元系色素とを混合して反応液2を得る工程及び反応液2の色を目視することで試料中のアルコールを測定する工程を含む。
ADH:アルコールデヒドロゲナーゼ
NAD+:酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
NADH:還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
NTB:ニトロテトラゾリウムブルー
PMS:フェナジンメトサルフェート
トリス:トリスヒドロキシメチルアミノメタン
試料とADHとの反応時のpHを変化させたときに、アルコールの検出感度にどのような影響を及ぼすかについて調べた。緩衝液100μl、試料100μl、0.4% NAD+水溶液20μl及び10U/ml ADH溶液(pH7.5のリン酸緩衝液)20μlを混合し反応液1を得た。反応液1を室温で0〜25分間放置して反応させた。その後、反応液1に0.01% PMS及び0.1% NTBの水溶液20μlを添加し反応液2を得た。反応液2を室温で2分間放置して反応させた。その後、反応液2に1N 塩酸20μlを添加して反応を停止した。反応液1のpHを測定した。また、反応停止後の反応液2の570nmの吸光度を測定した。また、反応液2の色を目視し、試料中のアルコールの有無による発色の相違を区別できるかどうかを調べた。
緩衝液として0.1mol/l グリシン水酸化ナトリウム緩衝液又は0.1mol/l ピロリン酸ナトリウム塩酸緩衝液を用いて、試験例1と同様の試験を行った。試料は、試験例1と同様に超純水及び市販のノンアルコールビールテイスト飲料並びにそれらに50ppmのエタノールを添加したものを用いた。緩衝液のpHは、反応液1のpHが8.6となるものを使用した。すなわち、試料が超純水の場合は、pH8.6のグリシン水酸化ナトリウム緩衝液又はpH8.6のピロリン酸ナトリウム塩酸緩衝液を用い、試料がノンアルコールビールテイスト飲料の場合は、pH9.5のグリシン水酸化ナトリウム緩衝液又はpH9.4のピロリン酸ナトリウム塩酸緩衝液を用いた。(各緩衝液は、全て1%Triton−X100含有。)
緩衝液のpHを変化させたときに、反応液1中のNADH量にどのような影響を及ぼすかを調べた。トリス塩酸緩衝液(7.4、8.4、8.9、9.6及び12.7;1% Triton−X100含有)100μl、試料100μl、0.4% NAD+水溶液20μl及び10U/ml ADH溶液(pH7.5のリン酸緩衝液)20μlを混合し反応液1を得た。反応液1を室温で0〜25分間放置して反応させた。反応液1の340nmの吸光度を測定した。試料は、超純水及び50ppmのエタノールを添加した超純水を用いた。エタノールを添加した試料の吸光度からエタノールを添加していない試料の吸光度を引いた数値(ΔAbs)を、NADH量として評価した。
0.1mol/l トリス塩酸緩衝液(pH8.9;1% Triton−X100含有)100μl、試料100μl、0.4% NAD+水溶液20μl及び10U/ml ADH溶液(pH7.5のリン酸緩衝液)20μlを混合し反応液1を得た。反応液1を室温で5分間放置して反応させた。その後、反応液1に0.01% PMS及び0.1% NTBの水溶液20μlを添加し反応液2を得た。反応液2を室温で2分間放置して反応させた。その後、反応液2に1N 塩酸20μlを添加して反応を停止した。試料として、ノンアルコールビールテイスト飲料及び30ppmのエタノールを添加したものを用いた。試料を各6つ用意して、併行精度を確認した。表6に示した結果から明らかなように、良好な併行精度を示した。
0.1mol/l トリス塩酸緩衝液(pH8.9;1% Triton−X100含有)100μl、試料100μl、0.4% NAD+水溶液20μl及び10U/ml ADH溶液(pH7.5のリン酸緩衝液)20μlを混合し反応液1を得た。反応液1を室温で5分間放置して反応させた。その後、反応液1に0.01% PMS及び0.1% NTBの水溶液20μlを添加し反応液2を得た。反応液2を室温で2分間放置して反応させた。その後、反応液2に1N 塩酸20μlを添加して反応を停止した。試料として、ノンアルコールビールテイスト飲料及び30ppmのエタノールを添加したものを用いた。測定日を異なる5日として、日間再現性を確認した。表7に示した結果から明らかなように、良好な日間再現性を示した。
0.1mol/l トリス塩酸緩衝液(pH8.9;1% Triton−X100含有)100μl、試料100μl、0.4% NAD+水溶液20μl及び10U/ml ADH溶液(pH7.5のリン酸緩衝液)20μlを混合し反応液1を得た。反応液1を室温で5分間放置して反応させた。その後、反応液1に0.01% PMS及び0.1% NTBの水溶液20μlを添加し反応液2を得た。反応液2を室温で2分間放置して反応させた。その後、反応液2に1N 塩酸20μlを添加して反応を停止した。試料として、ノンアルコールビールテイスト飲料及び30ppmのエタノールを添加したものを用いた。ADH溶液を調製後、4℃の冷蔵庫に保存し、ADH溶液の保存期間により吸光度がどのように変化するか調べた。結果を表8に示した。ADH溶液の保存に伴い、吸光度が低下する傾向が認められた。しかし、31日保存したADH溶液を使用した場合でも、30ppmのエタノール添加の有無により十分なΔAbsが認められ、目視による区別も可能であった。
Claims (16)
- ノンアルコール飲料の品質保証キットであって、
アルコールデヒドロゲナーゼ、
電子受容体、
還元系色素及び
pH7.8〜9.5の緩衝液
を含むキット。 - 電子受容体が、
ニコチンアミド骨格を有する酸化型電子伝達体、及び
ニコチンアミド骨格を有する還元型電子伝達体と電子の授受ができる電子伝達体、
の組み合わせである、請求項1記載のキット。 - ニコチンアミド骨格を有する酸化型電子伝達体が、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又は酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸である、請求項2記載のキット。
- ニコチンアミド骨格を有する還元型電子伝達体と電子の授受ができる電子伝達体が、フェナジンメトサルフェート、1−メトキシフェナジンメトサルフェート、メルドラブルー又はジアホラーゼである、請求項2又は3記載のキット。
- 還元系色素が、テトラゾリウム塩である、請求項1〜4のいずれか一項記載のキット。
- テトラゾリウム塩が、ニトロテトラゾリウムブルー、テトラゾリウムブルー、3−(4,5−ジメチル−2−チアゾリル)−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロミド、2,3−ビス−(2−メトシキ−4−ニトロ−5−スルホフェニル)−2H−テトラゾリウム−5−カルボキシアニリド、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−5−(3−カルボキシメトキシフェニル)−2−(4−スルホフェニル)−2H−テトラゾリウム、2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−フェニルテトラゾリウムクロリド、2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムモノソジウム、2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−ジニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムモノソジウム又は2−(2−メトキシ−4−ニトロフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムである、請求項5記載のキット。
- 緩衝液が、pH8.4〜9.5の緩衝液である、請求項1〜4のいずれか一項記載のキット。
- ノンアルコール飲料の品質を保証する方法であって、
試料とアルコールデヒドロゲナーゼ、電子受容体及び緩衝液とを混合してpH7.0〜9.0の反応液1を得る工程、
反応液1と還元系色素とを混合して反応液2を得る工程及び
反応液2の色を目視することで試料中のアルコールを測定する工程
を含む方法。 - ノンアルコール飲料の品質を保証する方法であって、
試料とアルコールデヒドロゲナーゼ、ニコチンアミド骨格を有する酸化型電子伝達体及び緩衝液とを混合してpH7.0〜9.0の反応液1を得る工程、
反応液1とニコチンアミド骨格を有する還元型電子伝達体と電子の授受ができる電子伝達体及び還元系色素とを混合して反応液2を得る工程及び
反応液2の色を目視することで試料中のアルコールを測定する工程
を含む方法。 - ニコチンアミド骨格を有する酸化型電子伝達体が、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又は酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸である、請求項9記載の方法。
- ニコチンアミド骨格を有する還元型電子伝達体と電子の授受ができる電子伝達体が、フェナジンメトサルフェート、1−メトキシフェナジンメトサルフェート、メルドラブルー又はジアホラーゼである、請求項9又は10記載の方法。
- 還元系色素が、テトラゾリウム塩である、請求項8〜11のいずれか一項記載の方法。
- テトラゾリウム塩が、ニトロテトラゾリウムブルー、テトラゾリウムブルー、3−(4,5−ジメチル−2−チアゾリル)−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロミド、2,3−ビス−(2−メトシキ−4−ニトロ−5−スルホフェニル)−2H−テトラゾリウム−5−カルボキシアニリド、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−5−(3−カルボキシメトキシフェニル)−2−(4−スルホフェニル)−2H−テトラゾリウム、2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−フェニルテトラゾリウムクロリド、2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムモノソジウム、2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−ジニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムモノソジウム又は2−(2−メトキシ−4−ニトロフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウムである、請求項12記載の方法。
- 反応液1がpH7.2〜8.7になるように調整する、請求項8〜13のいずれか一項記載の方法。
- 緩衝液が、pH7.8〜9.5の緩衝液である、請求項8〜14のいずれか一項記載の方法。
- 緩衝液が、pH8.4〜9.5の緩衝液である、請求項8〜14のいずれか一項記載の方法。
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JP2012039146A JP2013172675A (ja) | 2012-02-24 | 2012-02-24 | ノンアルコール飲料の品質を保証するキット及び方法 |
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2012
- 2012-02-24 JP JP2012039146A patent/JP2013172675A/ja active Pending
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