JP2013040108A - 抗肥満剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分を有効成分として含有する抗肥満剤。前記イネ科植物はコムギ属の植物であることが好ましく、前記アルコールはエタノールであることが好ましい。また、前記ピーク成分は、担体としてシリカゲル及び移動相としてヘキサン−酢酸エチル混合溶媒を用いた際のピーク成分であることが好ましい。
【選択図】なし
Description
小麦種子2gを、マルチビーズショッカー(多検体細胞破砕機/MB301(S):安井器械株式会社製)で粉砕した後、5倍量のエタノールを添加して、150rpm、室温の条件で、2時間振とう抽出した。次いで、3500rpm、室温の条件で、15分間遠心分離して、上清を遠心濃縮機で乾燥して、小麦エタノール抽出物を得た。
次いで、この小麦エタノール抽出物を中圧クロマトグラフィーによって精製した。中圧クロマトグラフィー条件は下記の通りである。溶出開始後12〜14分に出現するピーク成分を回収して、溶媒留去し、本発明の抗肥満剤3mgを得た。このときのクロマトグラムを図1に示す。なお、クロマトグラムの横軸は溶出開始からの時間(分)を表す。
カラム: シリカゲル(インジェクトカラムS、ハイフラッシュカラムM、60Å、40μm、山善株式会社)
移動相: ヘキサン/酢酸エチル(体積比)=90/10にて3分、80/20にて5分、60/40にて10分
検出波長:254nm
小麦種子200mgを、マルチビーズショッカー(多検体細胞破砕機/MB301(S):安井器械株式会社製)で粉砕した後、5倍量のエタノールを添加して、150rpm、室温の条件で、2時間振とう抽出した。次いで、3500rpm、室温の条件で、15分間遠心分離して、上清を遠心濃縮機で乾燥した。得られた濃縮物の重量を測定して、160mg/mLとなるようにエタノールに溶解して、比較例組成物4.8mgを得た。
小麦種子200mgを、マルチビーズショッカー(多検体細胞破砕機/MB301(S):安井器械株式会社製)で粉砕した後、5倍量のヘキサンを添加して、150rpm、室温の条件で、2時間振とうして脱脂後、ヘキサンを除去した。5倍量のエタノールを添加して、150rpm、室温の条件で、2時間振とう抽出した。次いで、3500rpm、室温の条件で、15分間遠心分離して、上清を遠心濃縮機で乾燥した。得られた濃縮物の重量を測定して、87mg/mLとなるようにエタノールに溶解して、比較例組成物2.6mgを得た。
マウス前駆脂肪細胞3T3−L1を、10% fetal bovine serum(FBS)、10U/mL penicillin、10μg/mL streptomycinを含むダルベッコ変法イーグル培地(グルコース4.5g/L、DMEM、Sigma−Aldrich社製)に、4×104cells/mLの密度で浮遊させ、24ウェルプレートに1mLずつ播種した。次いで、5%CO2存在下、37℃で、3日間の培養後、コンフルエントになったことを顕微鏡下で確認してから、脂肪細胞への分化を誘導するため、培地を10μg/mLインスリン(ヒト由来)、250nMデキサメタゾン、500μM 3−イソブチル−1−メチルキサンチンを含む10%FBS−DMEM(分化誘導培地)に置換し、分化誘導2日後、培地を10μg/mLインスリンを含む10%FBS−DMEM(維持培地)に置換して、さらに、6日間培養した。
また、細胞内の脂肪蓄積抑制性の評価のため、維持培地での培養終了後の培養細胞内のトリグリセライド(TG)量を下記測定方法に従って測定した。実施例1の抗肥満剤を用いた場合の結果を図2−1に、比較例1または2の組成物を用いた場合の結果を図2−2に示す。なお、図2−1および2−2において、結果は、無添加(コントロール)におけるトリグリセライド産生量を100%とした相対値で表す。
培養後の3T3−L1細胞をPBS(−)500μL/wellで2回洗浄した後、2−プロパノール300μLを加えて、80rpmで20分間振とうして、細胞内のトリグリセライドを抽出した。抽出したトリグリセライド量を、トリグリセライドE−テストワコー(和光純薬工業製)を用いて定量した。
また、分化誘導によって脂肪細胞となった図3(a)の顕微鏡写真、および比較例1の組成物を添加した図3(c)の顕微鏡写真では、細胞内に多数の脂肪滴の蓄積が認められるが、本発明の抗肥満剤を添加した図3(b)の顕微鏡写真では、前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化が抑制され、細胞内に蓄積される脂肪滴が少ないことが明らかである。
Claims (5)
- イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分を有効成分として含有する抗肥満剤。
- 前記イネ科植物がコムギ属の植物である請求項1記載の抗肥満剤。
- 前記アルコールがエタノールである請求項1又は2に記載の抗肥満剤。
- 前記ピーク成分が、担体としてシリカゲル及び移動相としてヘキサン−酢酸エチル混合溶媒を用いた際のピーク成分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗肥満剤。
- 脂肪蓄積抑制作用を有するものである請求項1〜4のいずれか一項に記載の抗肥満剤。
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