JP2012529643A - 単一細胞または他の粒子の分析用ピコウェル捕捉装置 - Google Patents
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Abstract
Description
a)捕捉支持体の鋳型に固化可能な物質を添加する工程;
b)物質の固化が可能な条件下で鋳型をインキュベートする工程;
c)鋳型と固化物質とを分離する工程
を含む前記方法も提供する。
捕捉支持体は、溶媒および低分子量種は支持体を通って移動できるが、目的のバイオポリマーは浸透できない物質が用いられ、支持体の表面上に1つ以上のウェルを含む。
捕捉支持体は、1つ以上のウェルを含む。ウェルは、単一細胞のみを捕捉するように配置されていることが好ましい。これは、通常は、ウェルが常に目的の単一細胞のみを収容することができるような寸法とすることによって達成される。支持体の表面上のウェルは、捕捉支持体の表面上のピット、穴、または窪みである。ウェルは、使用の際、捕捉支持体において、外界との接触がなされる窪みである。前記接触は、粒子がそれを得ることができるウェルに導入することを可能とする。ウェルは密封してもよく、(例えば蓋を追加して)密封した場合、粒子がそのままではチャンバーから出ないようにするためのチャンバーが形成される。一般的に、ウェルとしたい部位から部材が除かれるように設計された型を用いて製造される。或いは、ウェルは、表面物質の切削、例えばレーザー切削によってできる。更なる方法としては、ウェットケミカルエッチング(等方性および異方性)、エレクトロケミカルエッチング、ウェットフォトエッチング、ドライケミカルエッチング、スパッタエッチング、イオンミリング、反応性イオン・エッチングおよび深掘り反応性イオン・エッチング(DRIE)、x−線深掘りエッチリソグラフィーおよびエレクトロフォーミング(別称LIGA)、気相エッチング(XeF2を用いる)、集束イオンビーム加工、レーザー加工、超音波ドリル、放電加工、機械掘削、加工、破砕、ホーニング、ラッピング、切断;熱エンボス加工、射出成形、マイクロ熱成形、および鋳造(概説については非特許文献6を参考)が挙げられる。
捕捉支持体の製造に適切な材料は周知である。捕捉支持体を製造するために使用される材料は、分析時に粒子(例えば細胞)に不浸透性透過性でなければならない。材料は、粒子から取り出されるか、細胞溶解によって取り出されるバイオポリマーに実質的に不浸透性でなければならない。これらのバイオポリマーとしては、RNA(mRNA、rRNAおよびmiRNA)、DNA、ポリペプチドおよび/または多糖類が挙げられる。細胞成分は、長時間に亘って、例えば1日以上に亘って、捕捉支持体材料を通って徐々に透過することができるが、細胞および分析成分が作用しているとき、この透過は制限される。材料は、試薬が支持体を経て移動することができるように、溶液中の捕捉支持体の表面に適用される低分子量試薬のあらゆる溶液と親和性を有するべきである。多様な透過率は、バイオポリマーが、細胞溶解に応じて材料を通過して移動することができず、ウェル間のコンタミネーション(即ちウェル間の漏れ)が生じ得ないことを確実にする。
捕捉支持体は、1つ以上の蓋を受ける必要がある。装置を大きくするは、利点および欠点の両方を有する。例えばアクリルアミドのようなポリマーから製造される場合、薄い捕捉支持体は、もろく、裂けるおそれがある。ウェルが配置されている第1表面および支持体を通って移動する液体が適用される第2表面の間の距離を大きくすることで、支持体を大きくすることができる。距離の増大は、支持体を通って移動する液体の移動時間の延長に相当する。理想的には、捕捉支持体は、深さ500−1000μmである。液体が移動する深さ、およびそれに応じる時間は、しばしば、実験的に重要な結果をもたらす。例えば、使用時において、細胞が、代謝的活性を保持している場合、溶解前のウェル中の細胞のより長い保持時間により、関連する細胞成分の分解に使用する、例えばRNaseまたはプロテアーゼのような細胞酵素のウィンドウをより大きくする。従って、捕捉支持体の厚さは、溶解試薬を用いる実施形態において、捕捉してから溶解までの間にかかる時間を決定する。この場合、薄い支持体は、あらゆる溶解試薬が、支持体を通って移動するためにかかる時間が短いため、好ましい。捕捉支持体をより薄くすることで、その支持体を通過する試薬の移動をより速くするができ、一方、薄い捕捉支持体は強度が低く、使用時に壊れやすいため、バランスが保たれなければならない。
捕捉支持体および蓋を取り付けることによって形成されるチャンバーは、様々な形を有することができる。チャンバーの形は、主に捕捉支持体内のウェルの成形の形による。チャンバーは、ウェルおよび蓋の表面から形成される。チャンバーに組み込まれた蓋の表面積は、ウェルの開口末端を包囲した場合、陥凹を含むウェルの開口末端の大きさ(断面積)によって決定することができる。
複数のバイオポリマーの分析に関する他の実施形態において、捕捉支持体および蓋を取り付けることによって形成されるチャンバーは、チャネル(配管)としてもよい(図9および10)。この実施形態において、捕捉支持体の第1表面は、少なくとも1の蓋に組み込んだときに密封される開口チャネルに交わっているか、接続されているウェルを含む。捕捉する際、粒子がチャネル内で捕捉されないよう、チャネルは、その幅および/または深さが分析される粒子の直径未満であるように設計するべきである。この実施形態において、ウェルは、チャネルと交わっているか、接続されており、捕捉支持体および蓋を取り付けて一旦チャンバーが形成されると、個別の粒子は、ウェル内に捕捉される。ウェルは、チャネルの一部を含んでいてもよく、チャネルに沿った任意の位置、例えばチャネルのいずれかの末端、好ましくはチャネル両末端の間の任意の位置に設置することができる。或いは、ウェルはチャネルの側面に設置してもよい。好ましくは、ウェルは、チャネル末端の間に設置される。蓋で形成されるチャネルの側面は、所望の分析に適した分析成分を含むことができる。バイオポリマー、例えば細胞溶解後に放出されるものは、チャネルに沿って移動させることができる。
液体、例えば溶媒は、様々な方法によって支持体を通って移動することができる。移動は受動的、例えば拡散、浸透、毛細管作用または重力の効果によるものがあり得る。容器から支持体を通して水をくみとるために、ウィッキングを使用してもよい。或いは、例えばポンプまたは動電学的方法のような、能動的な移動としてもよい。
蓋は、本発明の装置において数々の機能を果たすことができる。それは、単純に捕捉支持体上の1つ以上のウェルを密封することができ、また、それは下流の工程でバイオポリマーを受けることができるか、バイオポリマーの分析を供給することができる。通常、蓋の少なくとも一部は、分析用試薬で包埋することができる。
装置内のチャンバーは、バイオポリマーの分離のためのものであり、バイオポリマーと作用して分析結果が得られるような分析成分を含むことができる。ある装置における分析成分は、一般的に、目的の分析データを得るための目的の粒子の知識に基づいて選択される。
本発明による装置は、捕捉支持体および蓋から形成される。蓋は、ウェルを密封して形成されるチャンバーとして、ウェルを含む捕捉支持体の表面に接している。
−容器。容器は、装置で試薬溶液を保持するために使用される。容器は、捕捉支持体から分離していてもよく、組み込まれていてもよい。容器が組み込まれている場合、それは便利に成型によって調製することができる。捕捉支持体内の容器を図2に示す。
−1つ以上の電極。電極は、装置と交差する電位、特に分析チャネル沿いの電位を生み出し、例えば界面動電現象、電気泳動、エレクトロポーレーション等を可能として、細胞の移動に使用される。或いは、装置は外部電極と接続するための接触部分を有していてもよい。
−レーザー等の光源。これは、様々な目的、例えば細胞溶解において使用することができ、この場合、チャネル中のメニスカスの進行を観測して、蛍光色素等を励起させるために使用することができる。
−カメラ等の画像を得る要素。これは、静止および/または動画を撮影することができる。それは、通常、デジタルカメラである。代わりの形状において、カメラは、ステージ上の1点の撮影をするものか、ラインカメラである。カメラは、細胞捕捉部位の占有率を確認する手段を提供し、また、多重の細胞によるウェル占有(例えば、混合集団の小細胞による)を確認して、実験設計によっては、下流の分析からこのウェルを除外する手段を提供する。
−質量分析計等の検出器
が挙げられる。
細胞を捕捉する場合、その内容物は、例えば細胞溶解物によって取り出すことができる。内容物は、様々な方法で放出することができる。例えば、装置に溶解溶液を適用してもよく、細胞は、チャンバー内でその場で(in situ)溶解される。いくつかの実施形態において、該溶解溶液は、洗浄剤水溶液、例えばSDSを含むことができる。この場合、洗浄剤は、水溶液中でミセルを形成するより薄い濃度とすべきであり、その理由としては、ミセルが捕捉支持体を通って移動することができないからである。或いは、チャンバーは、捕捉された細胞を物理的に破砕してもよく、例えば非特許文献13に記載される「ナノスケールの突起(nanoscale barb)」を使用することができる。溶解を確実にするため、細胞膜が「ナノスケールの突起」に押し当てられるように装置を撹拌してもよいが、この場合の撹拌は、装置の成分が分離しないようになされなければならない。さらなる選択肢として、細胞内容物を、エレクトロポーレーションによって取り除くこともでき、使用されるエレクトロポーレーションの電界の大きさによって、膜を単純に開口して細胞含有物の取り出しを可能とするか、膜を破砕して、細胞溶解へと誘導することができる(非特許文献14)。溶解を生じるのに十分に強い電界を用いることが好ましい。AC、DC電界がいずれも使用できる。或いは、電界は、ウェルが導入される部位の支持体の局所領域のpHを変えるために適用することができる(非特許文献15)。レーザー光と同様に、非特許文献16のように単一細胞を溶解するため、超音波振動も装置に適用することができる。浸透圧衝撃によるマイクロ流体装置における単一細胞の溶解は、非特許文献17に報告される。また、ウェルが密封されるとき、既にウェル内に存在する合成リポソーム中に配置することができる。これは、多岐に渡る方法、例えば密封前、リポソームをウェルに固定することによって、または、ウェルに適用するバッファー中にリポソームを含むことによって達成することができる。リポソームは、必要に応じて、その内容物を取り出すために溶解可能とするべきである。そのための一機構は、非特許文献18に報告するように、UV光で照射することよって、リポソームに溶解が生じるよう、リポソームに、染料を組み込むことである。同様の方法を全細胞に用いることができ、その場合、細胞を光活性化された溶解試薬中に浸漬し、これにより、試薬が細胞に吸収され、または吸着し、UV光を照射で活性化された試薬により、細胞壁の溶解が生じる。電気化学的溶解法も適用可能である。
処理用試薬は、最初の溶解溶液と同じ部位に適用される。溶解試薬とともに、この装置に導入される処理用試薬は、捕捉支持体に浸透して移動することが可能な物理的性質を有するべきである。
結果を分析するために使用する検出方法は、分子標的の性質およびそれを使用することができるあらゆる標識によって異なる。それらは、以下により詳細に説明するように、所定の分析部位でのシグナル強度にも依存する。定量的検出法が好ましい。
装置内、例えばチャネル沿いに、バイオポリマーを、例えばポンプ、吸引、界面動電現象等によって移動させるための様々な技術が使用されている。好ましい技術は、移動方向に影響を及ぼす極性で、界面動電現象的にバイオポリマーを移動させ(例えば電気浸透または電気泳動によって)、チャネルを介して適用する電位を必要とする。微細加工された装置における界面動電現象の移動については、非特許文献21に概説されている。電気泳動が、本発明の範囲内で使用される場合、通常、それらの可動性に基づいて互いに分子を分離するよりはむしろ、装置を透過させて物質を移動させる。
本発明は、真核細胞および原核細胞を含む様々な細胞の分析に適している。本発明は、特に複数の細胞を分析するのに適しているが、同じ種類のものでは同期していなく、即ち細胞周期の異なる段階のものである。本発明は、集団におけるそれぞれの細胞が生体異物等の刺激物またはケモカインに、どのように反応するかの分析にも適用可能である。
装置内の細胞等の粒子を観測することが望ましい場合、通常、顕微鏡が使用される。バッファーおよび通常のマイクロ流体構造の関係でわずかな光学コントラストしか有しない場合は、コントラストを増強したもの、例えば位相差顕微鏡、微分干渉顕微鏡、蛍光顕微鏡等を使用することが望ましい。しかし、多くの場合、従来の光学顕微鏡が使用される。
本発明は、細胞分析のみでなく、他の粒子を分析するためにも使用することができる。これらの粒子は、天然であっても人工であってもよい。従って、本発明は、真核細胞の単独の小器官、特に核(例えば転写制御因子)、ミトコンドリアおよび色素体(例えば葉緑体)を分析するために使用することができる。細胞小器官は、それらを本発明の装置に導入する前、細胞から調製することができる。細胞小器官は、その後、全細胞に関する上記の同様の方法で捕捉し、処理することができる。捕捉支持体のウェルは、これに合わせて、大きさを設定する。
本発明の装置は、非常に小規模であるため、埃などのコンタミネーションによって容易にブロックされる。従って、分析前に試料を濾過することが好ましい。フィルターは、本発明の装置に組み込まれていてもよく、別々であってもよい。
捕捉支持体は、鋳型を用いて成型することによって調製することができる。この工程は、図1に図式的に示される。この図において、材料は鋳型に注がれ、固化する。その後、鋳型は捕捉支持体を残して取り除かれる。鋳型は、捕捉支持体に所望の形状の逆または反転状態に作られる。
捕捉支持体を流し込むための鋳型を製造する一方法において、フォトレジストは、基材上に望ましいウェルの深さに等しい厚さになるまでスピンコートされる(深さは分析する細胞種によって異なり、それは当業者にとって明白である)。その後、パターンは、フォトリソグラフィ法によって選択的にエッチングされる。フォトリソグラフィ工程の最後で製造されるパターンは逆であり、即ち、装置のウェルまたはチャネルの部分の望ましいパターンの反転状態である。前記パターンの逆に製造されたウェルおよび/またはチャネルの寸法は、それらが実施される分析に適した寸法となるように選択されるべきである。スピンコート層の厚さと同様に、このような設計は、当業者にとって困難なものではない。ウェルがパターン化された捕捉支持体の全厚は、装置が破壊されることなく十分に頑丈でなければならないが、また溶解バッファーが素早くその厚さを通って浸透することができるように十分に薄い必要もある。通常、溶解バッファーの浸透は、5〜10分以内に生じる。一旦、調製してから、その後、実験の最適化の工程として、任意に一部異なる範囲の材料を使用した、一連の同形状の捕捉支持体を成型するため、鋳型を繰り返し使用する。
細胞懸濁液を捕捉支持体の表面上に適用して、細胞を捕捉支持体の第1表面上のウェル内に捕捉する。複数の個別細胞は、第1表面上に複数のウェルを含む捕捉支持体によって捕捉される。捕捉工程は、図2を参考として想定することができる。その後、細胞はウェルに定着する(工程b)。任意に、捕捉支持体は、ウェル内で細胞が移動するように撹拌してもよい。あらゆる撹拌は、xおよびy軸の横方向のみに行い、ウェル内に存在する細胞が飛び出ないようにしなくてはならない。撹拌の適したレベルは、分析する細胞種に基づいて経験的に決定することができる。さらに、撹拌は、細胞の溶解の要因となるべきではない。その後、捕捉されなかった細胞は、過剰量のバッファーを使用して洗浄することができ、バッファーは、任意に、細胞または細胞成分の処理用試薬をさらに含むことができる。また、洗浄工程が実施される際、ウェル内に常在する細胞が乱されないように配慮すべきである。ウェルが、特定の細胞を捕らえるのに有用な抗体等の試薬を含むように修飾された捕捉支持体において捕捉支持体において(さらなる詳細に関しては上記を参考)、抗体の細胞表面上への結合が、ウェルから細胞を除去するのに要する力が高くなるので、洗浄をより強くすることができ、実際には、誤った細胞表面マーカー表現型の細胞と、正しい大きさの細胞とを入れ替えることを要する。この時点で、ウェルの占領領域を、例えば顕微鏡、デジタルカメラおよび適切なイメージングソフトウェアを用いて観測することが好ましい。細胞溶液を適用する工程、任意の動作および洗浄は、必要に応じて、ウェルの望ましい部分が細胞で占領されるまで繰り返すことができる。
前記装置において、捕捉支持体は透過性であり、蓋は非透過性である。対象的に、本発明による装置は、非透過性の捕捉支持体および透過性の蓋からできていてもよい。非透過性の捕捉支持体は、ピコウェルプレートの形状を採用している(例えば特許文献6またはNunc Live Cell Arrayに詳細に記載されたものと同様)。通常は、透過性の蓋は、前記に詳細に記載された透過性の捕捉支持体用の物質が用いられている。
用語「含む(comprising)」は、「含有する(including)」並びに「構成される(consisting)」を包含していて、例えばXを「含む」組成物は、Xのみから構成されていてもよく、付加的なもの、例えばX+Yを含有してもよい。
鋳型の製造を含む本発明による捕捉支持体の製造工程の概略図は、図1に示す。工程a)の図において、通常はSU−8のフォトレジストを、基板層にスピンコートした。フォトレジストの深さは、捕捉支持体に望ましいウェルまたはチャネルの厚さと等しくした。基層に残存する物質の幅は、捕捉支持体上のあらゆるウェルまたはチャネルの幅とした(b)。その後、必要な場合は、フォトリソグラフィ技術を用いて、ウェルのパターンをフォトレジストに選択的にエッチングするために使用した。次いで、鋳型を親成型板に配置した。その後、材料を成型板に導入し、固化した。さらに、任意の特性を、親鋳型を使用してポリマーに付与した。図1において、溶解試薬用の容器として働く任意のチャネルを、微小構造パターンのウェルに対して反対側の支持体の捕捉支持体内に設けた。製造された捕捉支持体は、図1のd)に示される。
通常、ポリアクリルアミドポリマーを、捕捉支持体を製造するために使用した。このようなアクリルアミドゲルには、以下の処方を適用した:
図2は、本発明による装置の作動に関する概略図を示す。捕捉支持体を、基板(この図においては、犠牲スライドガラス)上に、ウェルが支持体の上面にくるように設置した。その後、細胞懸濁液を、支持体上にピペットで分注した。細胞がウェル間で分散したことにより、ある細胞はウェルに導入され、また、ある細胞は捕捉支持体の表面上に残存した。過剰量の細胞を、生理的に許容可能な洗浄バッファーで洗い流した。通常、この時点では、さらなる試薬、例えばプロナーゼを細胞に添加した。1つ以上の分析用試薬を有する蓋は、その後、反転させた捕捉支持体上に、分析成分が細胞を含むチャンバー内に直ちに移行する配置した(c)。工程d)は、捕捉支持体が、蓋の上に配置された、装置を反転させた状態を示す。犠牲スライドガラスを取り除き、支持体の第2表面上の露出した容器に細胞溶解溶液をピペットで分注した。その後、透過性捕捉支持体を透過した溶解バッファーの潅流を可能とするため、装置をインキュベートした。溶解バッファーが、細胞および溶解された細胞(f)を含むチャンバーに達した後、細胞成分および分析成分のハイブリッドが直ちに形成された。支持体と蓋とが依然組み合された状態で、任意に、ある部分または全ての分析を、その場で(in situ)で実施した。或いは、捕捉支持体を、図2のg)に示すように、次の工程の前に蓋の上から取り除いた。ウェル内に捕捉された細胞を、図3および5に示す。図4は、ウェル内に捕捉された細胞を示し、図6は、陥凹に包囲されたウェルに捕捉された細胞を示す。
特定の細胞株による単一細胞の支持体上のウェル内での捕捉を最大限可能とするため、を、一連の実験を行った。使用した細胞株は、直径約15μmのMEL c88とした(非特許文献22)。本工程は、細胞種または細胞株に関わらず同様である。
細胞溶解のため、4つのバッファーを使用した。第1の溶解バッファーは、10%(v/v)SDS−脱イオン水溶液である。第2の溶解バッファーは、2%(v/v)SDS−リン酸緩衝生理食塩水溶液である。第3の溶解バッファーは、2.5%(v/v)SDS−PBS溶液である。第4の溶解バッファーは、5%(v/v)SDS-PBS溶液である。
200μLの2.5×106mL−1のMEL c88細胞アリコート(約500,000細胞)を、直径22μmおよび中心間距離50μmを有する8%ポリアクリルアミド支持体に適用した。過剰量の細胞を、200μLのPBSアリコートで洗浄除去した。約450,000ウェルのうち115,359を洗浄した後、ウェルは満たされていた。プロナーゼ30μLを細胞に適用した。ウェルは、オリゴ(dT)40に包埋された蓋で密封された。前記オリゴヌクレオチドは、ポリ(A)末端RNAとハイブリッド形成することができる。40℃で10分間インキュベートした後、細胞は、支持体に溶解バッファー(2%(v/v)SDS−PBS溶液)を添加して溶解させた。その後、溶解バッファー中、40℃で60分間、ハイブリッド形成を進行させた。次いで、装置を分解し、蓋材をその後の工程で使用した。スーパースクリプトIII(インビトロゲン)およびCy3標識されたdCTPを50℃で使用して、固定されたRNAから標識されたcDNAを合成した。組み込まれなかった標識を、10回、それぞれ10分連続で室温で洗浄して洗い流した。最初の洗浄は、アジレント遺伝子発現洗浄バッファー1で実施した。2−10回の洗浄は、アジレント遺伝子発現洗浄バッファー2で実施した。
100μLの1×106mL−1のMEL c88細胞(コムギ胚芽凝集素(WGA)100μgまたは200μgのいずれかで染色した)を、直径20μmおよび中心間距離40μmの8%ポリアクリルアミド支持体に適用した。過剰量の細胞は、PBS200μLのアリコートで繰り返し洗い流された。プロナーゼを、支持体上の細胞に適用した。オリゴ(dT)40で包埋された蓋で、ウェルを密封した。溶解前、捕捉された細胞を、蛍光顕微鏡を使用して観測した。捕捉された細胞は、赤色に発光していることが観測され、レクチンが細胞外で発現していることを示した。かかる細胞表面マーカーの染色は、多様な細胞集団が捕捉支持体に添加された場合、異なる細胞種を検出するために使用することができる。
Claims (17)
- 対象の細胞を個別に捕捉する捕捉支持体であって、
個別の細胞に適合する大きさのウェルを少なくとも1つ有する第1表面を備え、
前記支持体には、多様な透過性を有する材料が使用され、低分子量種は、支持体の第2表面から支持体を通ってウェルに移動することが可能だが、実質的にバイオポリマーに対しては不透過性である、捕捉支持体。 - 対象の細胞を個別に捕捉する捕捉支持体であって、
直径200μm未満および深さ200μm未満のウェルを少なくとも1つ有する第1表面を備え、
前記支持体には、多様な透過性を有する材料が使用され、低分子量種は、支持体の第2表面から支持体を通ってウェル移動することが可能だが、実質的にバイオポリマーに対しては不透過性である、捕捉支持体。 - 少なくとも1つのウェルは、陥凹に包囲された、請求項1または2に記載の捕捉支持体。
- 前記陥凹は、0.1−5μMの深さである、請求項3に記載の捕捉支持体。
- 前記低分子量種は、MW1000Da未満の分子量を有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の捕捉支持体。
- 少なくとも1ウェルの表面の少なくとも一部は、細胞または粒子を捕捉する試薬で包埋された、請求項1〜5のいずれか1項に記載の捕捉支持体。
- 少なくとも1ウェルの表面の少なくとも一部は、バイオポリマーの分析を可能とする1つ以上の分析用試薬で包埋された、請求項1〜6のいずれか1項に記載の捕捉支持体。
- 前記捕捉支持体には、透過性ポリマーが用いられている、請求項1〜7のいずれか1項に捕捉支持体。
- 前記透過性ポリマーは、ポリアクリルアミドゲルである、請求項8に記載の捕捉支持体。
- 少なくとも1ウェルは、開口チャネルに交わっているか、接続されている、請求項1〜9のいずれか1項に記載の捕捉支持体。
- 捕捉支持体は、捕捉支持体を組み込んだ容器を有する、請求項1〜10のいずれか1項に記載の捕捉支持体。
- (i)請求項1〜11のいずれか1項に記載の捕捉支持体、および
(ii)ウェルの内容物を受けるための蓋
を含む、個別の細胞の内容物を分析するための装置。 - 前記蓋の少なくとも一部が、分析用試薬で包埋された、請求項12に記載の装置。
- 前記蓋は、分析用試薬が導入された陥凹を含む、請求項13に記載の装置。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の捕捉支持体のウェル内の細胞を捕らえる工程;
捕らえた細胞が放出しないような1つ以上のチャンバーを形成するために蓋でウェルを密封する工程;
細胞の内容物を1つ以上のチャンバーに存在するように取り出す工程;および
取り出した内容物と、1つ以上の分析用試料とを、1つ以上のチャンバー内で作用させ、内容物の分析を行う工程、
を備える、対象の細胞を分析する方法。 - 請求項1〜11のいずれか1項に記載の捕捉支持体を製造するための鋳型であって、
前記鋳型内で固化する材料を受けることができる、鋳型。 - 捕捉支持体を製造する方法であって、
a)請求項16に記載の鋳型に、固化可能な材料を導入する工程;
b)材料を固化可能な条件下で鋳型をインキュベートする工程;
c)鋳型と固化体とを分離する工程
を備える方法。
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