JP2012510820A - 血管新生促進vegfイソ型を選択的に抑制する組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 図14
Description
従って、この配列を標的とするsiRNAであり、3’uu突出末端をそれぞれの鎖に有するsiRNA(突出末端は太字で示される)は、以下の通りである。
3’−uuaguagugcuucaccacuuc−5’(配列ID番号10)
同じ配列を標的とするが、3’TT突出末端をそれぞれの鎖に有するsiRNA(突出末端は太字で示される)は以下の通りである。
3’−TTaguagugcuucaccacuuc−5’(配列ID番号12)
siRNAを得ることのできる他のVEGF121標的配列は、表1に示してある。表1に列挙された全てのVEGF121標的配列は、VEGF121選択的スプライシング型の部分で、全てのヒトVEGF選択的スプライシング型と共通の部分の中にあると理解される。従って、表1中の前記VEGF121標的配列は、VEGF165、VEGF189、及びVEGF206のmRNAも標的にすることができる。特定のVEGFイソ型を標的にする標的配列も、容易に同定することが可能である。例えば、VEGF165のmRNAを標的にするが、VEGF121のmRNAは標的にしない標的配列は、AACGTACTTGCAGATGTGACA(配列ID番号13)である。逆に、VEGF121、VEGF165、及びVEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、及びVEGF145、及びこれらの組み合わせなどの、血管新生促進性VEGFのmRNAイソ型を標的にするが、血管新生抑制性のVEGF165bのmRNAを標的にしない標的配列は、当該VEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、表2に見られる配列を含む。特定の実施形態においては、前記ヒトVEGFのmRNAは、配列ID番号86、配列ID番号87、配列ID番号88、配列ID番号89、配列ID番号90、配列ID番号91、配列ID番号92、配列ID番号93、配列ID番号94、配列ID番号95、配列ID番号96、配列ID番号97、配列ID番号98、配列ID番号99、配列ID番号100、配列ID番号101、配列ID番号102、配列ID番号103、配列ID番号104、配列ID番号105、配列ID番号106、配列ID番号107、配列ID番号108、配列ID番号109、配列ID番号110、配列ID番号111、配列ID番号112、配列ID番号113、配列ID番号114、配列ID番号115、配列ID番号116、配列ID番号117、及び配列ID番号118から成る群から選択される。特定の実施形態においては、前記ヒトVEGFのmRNAは、配列ID番号88及び配列ID番号94から選択される。
蓄積されることは既知である。したがって、例えば固形腫瘍のような微小血管系欠損によって特徴付けられる標的組織は、これらのリポソームを効率的に蓄積する。Gabizon, et al. (1988),P.N.A.S.,USA,18:6949〜53を参照。加えて、RESにより減らされた取り込みは、肝臓及び脾臓において重要な蓄積を防止することにより、ステルスリポソームの毒性を低下させる。したがって、オプソニン化阻害部分によって修飾された本発明のリポソームは、本発明のsiRNAを腫瘍細胞に導入できる。
siRNA設計−ヒトVEGF mRNAの5’末端から329ntで位置する19nt配列は、標的配列:AAACCTCACCAAGGCCAGCAC(配列ID番号:51)として選択された。それが、他のいかなる遺伝子からもmRNAに含まれなかったことを確実にするために、この標的配列は、NCBIによって提供されるBLAST検索エンジンに入れられる。BLASTアルゴリズムの使用は、Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215: 403−410及びAltschul et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25: 3389−3402に記載され、これらの全体の開示は参照により組み込まれている。標的配列を含んだ他のいかなるmRNAも見つからないため、二重siRNAは、この標的配列に合成される(harmacon Research, Inc., Lafayette,コロラド州)。
センス:
5’−accucaccaaggccagcacTT−3’(配列ID番号:77)
アンチセンス:
5’−gugcuggccuuggugagguTT−3’(配列ID番号:78)
実施例1で概説される実験は、siRNA濃度が10nMから50nMの範囲で使用されるヒト293、HeLa及びARPE19によって反復される。VEGF生成物を下方制御するCand5の能力は約13nM siRNAまで適度に上昇したが、平たん効果が、この濃度以上においてみられた。平たん効果がsiRNAによってトランスフェクションしないわずかな細胞からのVEGF生成を反映するように示されるこれらの結果は、mRNAのsiRNAによって媒介されるRNAi分解の触媒性質を強調する。siRNAによってトランスフェクションした大多数の細胞において、低酸素症によって誘導されたVEGF mRNA生成の増加は、約13nMよりも高いsiRNA濃度での標的mRNAのsiRNAによる分解によって追い越される。
NIH 3T3 マウス線維芽細胞は、トランスフェクションの一日前に細胞が〜50%融合性であるように、標準条件下において24ウェルプレート内で培養される。ヒトVEGF siRNA Cand5は、実施例1において、NIH 3T3 マウス線維芽細胞内でトランスフェクションされる。低酸素症はその後、トランスフェクションされた細胞内で誘導され、及び、マウスVEGF濃度は実施例1におけるELISAによって測定される。
VEGFは、加齢黄斑変性症(ARMD)のヒト患者の網膜色素上皮細胞(RPE)において上方制御される。機能的siRNAが生体内のRPE細胞に導入されることを示すために、GFPは、組換え型アデノウイルスを有するマウス網膜内で発現され、及び、GFP発現は、siRNAによって発現抑制される。実験は、以下のとおりに行われた。5匹の成熟したC57/Black6マウス(Jackson Labs、 Bar Harbor、メイン州)の各々からの1つの眼は、Bennett et al. (1996), supra.において記載されているように、下位網膜に、CMVプロモーターによって運ばれたeGFPを含むアデノウイルスの〜1×108粒子及び輸送TKO試薬(Mirus)によって結合されるeGFPを標的とするsiRNAの20ピコモルを含む混合物を注射される。
VEGFに標的とされるsiRNAが生体内で機能することを証明するために、実施例4のように、下位網膜注射によるアデノウイルスを介してマウスRPE細胞に外因性ヒトVEGF発現カセットが導入される。一つの眼はCand5 siRNAを受容し、及び反対の眼はGFP mRNAに標的にされるsiRNAを受容した。この動物は、注射の60時間後に殺され、及び、注射された眼は除去され、摘出後に液体窒素内で即座に冷凍される。その後、眼は、溶解緩衝液内で均一にされ、及び、標準Bradfordタンパク質アッセイ(Roche、ドイツ)を使用して全タンパク質が測定される。試料1は、実施例1で記載したように、ELISAによりヒトVEGFのための分析の前に全タンパク質を規格化される。
ARMDにおける脈絡膜新血管形成はRPE細胞でのVEGFの上方制御によるものであるという証拠がある。このヒト病原性条件は、網膜上のスポットを焼くために、レーザーを使用することにより(「レーザー光凝固」または「レーザー誘導」)、マウスでモデル化することができる。治療過程の間、VEGFは、燃焼領域のRPE細胞において上方制御され、脈絡膜の血管再生に至っていると考えられる。このモデルは、マウス脈絡膜新血管形成(「CNV」)モデルと呼ばれている。
siRNAを導入するための組換え型AAVベクターを生成する「シス活性型」プラスミドは、基本的にはSamulski R et al. (1987),supra.に記載された、PCRベースのサブクローニングによって生成される。シス活性型プラスミドは、「pAAVsiRNA」と呼ばれた。
マウスにおいて実験的にレーザーにより誘導された脈絡膜新血管形成(CNV)を阻害するマウスVEGFに誘導されたsiRNAの能力は、以下のようにテストされた。
これらの実験結果は、加齢黄斑変性症がアンチVEGF siRNAにより治療できることを示す。
生体内においてVEGFのRNAiを誘導するCand5siRNAの能力は以下のように評価される。
この研究の目的は、CNVの誘導後、オスのカニクイザルに単一硝子体内注射によって投与する際に、Cand5の安全性および有効性を決定することにある。Cand5は、投薬を受けていないオスのカニクイザルに以下の投与量レベルで与えられる:0mg/眼(対照)、0.07mg/眼、0.18mg/眼、0.35mg/眼、及び0.7mg/眼。
ヒト胎児腎臓293細胞(ATCC,Manassas、バージニア州から得られる)
は、Dulbecco’s Modified Eagle培地(DMEM、Cellgro, Herndon、バージニア州から得られる)において、10%ウシ胎児血清(FBS、JRH Biosciences,Lenexa、カンザス州から得られる)及び細胞培養成長の汚染を防止するために使用される抗生−抗真菌試薬(Gibco,Carlsbad、カリフォルニア州から得られる)と培養される。
VEGF165bは抗新血管形成VEGFイソ型として同定された。siRNAは、スペアVEGF165bを含まないVEGF165のような特定のVEGFイソ型を選択的に阻害するように設計される。
工程2:94℃で15秒
工程3:55℃で30秒
工程4:72℃で30秒
工程5:工程2〜4をGAPDH、VEGF165、VEGF121、及びVEGF189においては30分、VEGF165bにおいては35分繰り返す。
工程7:4℃
PCR生成物はその後、1X TAEバッファー内に調製された2%アガロースゲル上で視覚化される。
ポリイノシン−ポリシチジン酸ナトリウム塩[Poly(I :C)]による処理後のARPE19細胞のサイトカイニン分泌プロファイルは、dsRNA分析を決定した。siRNAがPoly(I:C)のように挙動するか否か測定するための、及び、同じサイトカイニンを生成する細胞を生じるかどうかのテストが行われる。
図28、29、30、31及び32において示されたように、様々な条件下で保存されたsiRNAにより、ARPE19細胞はトランスフェクションされる。細胞は、実施例12及び13で記載したようにトランスフェクションされる。それは、siRNA分子が図28、29、30、31及び32において示されたように、様々な条件下で安定的であることを示している。例えば、7.5μM siRNAは3つの管に分割され、それぞれの管は異なった温度(37℃、室温、4℃)で最大8週間保存される。それぞれの管の分割量は、予定された時点(24時間、48時間、及び一週間)で収集される。分割量の収集に応じて−80℃で保存される。それぞれの分割量は、ARPE19細胞における有効性において、異なる環境条件下でsiRNAが安定性を維持したかどうかをみるためにテストされた。siRNAは、ウェルごとに40,000細胞が播種された実施例12に記載された方法を使用してARPE19細胞の中にトランスフェクションされた。
C6細胞は24ウェルプレートに播種される(P12、ウェルごとに40,000細胞)。播種後18から24時間で、細胞は50〜70%灌流され、トランスフェクションのために使用される。細胞は、製造業者のプロトコル後に、Ribojuice(登録商標)siRNAトランスフェクション試薬(Novagen)を使用するOPK−HVB−004、OPK−HVB−009、OPK−HVB−010及びOPK−HVB−012によってトランスフェクションされる。一時的に、単一ウェルにおいて、無血清OPTI−MEM(40.5μL〜47μL)はエッペンドルフ管にピペットで移され、その後、Ribojuiceの2μLがOPTI−MEM(Gibco)に加えられる。溶液は穏やかにボルテックスで混合され、管の下部に内容物を集めるために短時間遠心分離にかけられ、室温で5分保温培養される。siRNA(100nMまたは1μM保存されたものの0.3μL〜7.5μL)がRibojuice/培地混合物に加えられ、穏やかに混合され、管の下部に内容物を集めるために短時間遠心分離にかけられる。混合物は室温で15分間保温培養される。保温培養の間、培地は細胞から除去され、新しいC6増殖培地(F−12 Kaighn’s、2.5%ウシ胎児血清、15%ウマ血清、1%ペニシリン/ストレプトマイシン)の250μLに交換される。15分の保温培養後、siRNA/Ribojuice/培地混合物(50μL)が細胞に液滴で加えられる。プレートは、複合体がウェル内で確実に均一となるよう穏やかに振動される。300μLの体積において、siRNAの最終濃度は、250pM、500PM、1nM、5nMまたは25nMである。細胞は、37℃、5%二酸化炭素で24時間維持される。全体積は、各siRNAが3倍の濃度でテストされるように拡大された。トランスフェクション後24時間で、トランスフェクション混合物は除去され、及び、細胞は、新しいC6増殖培地または10ng/mLヒト組換え型TGFβIIが添加された新しいC6増殖培地の500μLによって処理される。さらに24時間、細胞は、37℃、5%二酸化炭素に戻された。その後、培地は細胞から除去され、ELISA(Quantikine rat VEGF ELISA kit, R&D Systems)によってタンパク質発現のために分析された。
突出末端からなる21mer siRNAは、一方の19mer平滑末端と比較される。ARPE19細胞は、実施例12、13及び14に記載されたように、異なるsiRNAによりトランスフェクションされ、VEGF生成は測定される。一方の平滑末端は、図36に示された21merのように、ARPE19細胞におけるノックダウンVEGF生成が等しく有効的であると見出される。
平滑末端または突出末端の19mer(17bp+dTdT以上)からなる19mersは、図38に示したように様々な用量においてARPE19細胞内でトランスフェクションされる。用量反応曲線は、実施例12、13及び16で記載されたように、VEGF分泌を測定することにより生成する。用量反応は、siRNAへの反応がsiRNAに特異的であり、非特異的siRNA反応によってでは起きなかったことを示す。結果は図38で見ることができる。NIH3T3細胞においてテストされた平滑末端siRNAは、特異的用量反応を示す(図39を参照)。
Claims (60)
- 第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖の二本鎖を有する単離siRNAであって、前記第1のRNA鎖は血管内皮増殖因子(VEGF)イソ型の約17〜約25の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有し、前記VEGFイソ型はヒトのVEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、VEGF145、及びその組み合わせから成る群から選択されるものであり、さらに前記siRNAは、当該ヒトVEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、VEGF165bに対して少なくとも部分的に非相補的であることを特徴とする、単離siRNA。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、前記ヒトVEGFのmRNAは、配列ID番号86、配列ID番号87、配列ID番号88、配列ID番号89、配列ID番号90、配列ID番号91、配列ID番号92、配列ID番号93、配列ID番号94、配列ID番号95、配列ID番号96、配列ID番号97、配列ID番号98、配列ID番号99、配列ID番号100、配列ID番号101、配列ID番号102、配列ID番号103、配列ID番号104、配列ID番号105、配列ID番号106、配列ID番号107、配列ID番号108、配列ID番号109、配列ID番号110、配列ID番号111、配列ID番号112、配列ID番号113、配列ID番号114、配列ID番号115、配列ID番号116、配列ID番号117、及び配列ID番号118から成る群から選択されるものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、前記RNA二本鎖を形成する前記第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖は、一本鎖のヘアピンによって共有結合しているものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、このsiRNAは、さらに、非ヌクレオチド物質を有するものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、前記第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖はヌクレアーゼによる分解に対して安定化されているものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、このsiRNAは、さらに、3’突出末端を有するものである。
- 請求項6記載のsiRNAにおいて、前記3’突出末端は1〜約6のヌクレオチドを有するものである。
- 請求項6記載のsiRNAにおいて、前記3’突出末端は約2ヌクレオチドを有するものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、前記センスRNA鎖は第1の3’突出末端を有し、前記アンチセンスRNA鎖は第2の3’突出末端を有するものである。
- 請求項9記載のsiRNAにおいて、前記第1及び第2の3’突出末端はそれぞれ1〜約6のヌクレオチドを有するものである。
- 請求項9記載のsiRNAにおいて、前記第1の3’突出末端はジヌクレオチドを有し、前記第2の3’突出末端はジヌクレオチドを有するものである。
- 請求項11記載のsiRNAにおいて、前記第1及び第2の3’突出末端を有する前記ジヌクレオチドはジチミジル酸(TT)又はジウリジル酸(uu)である。
- 請求項6記載のsiRNAにおいて、前記3’突出末端はヌクレアーゼによる分解に対し安定化されているものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、このsiRNAは少なくとも1つの平滑末端を有するものである。
- 請求項14記載のsiRNAにおいて、このsiRNAは19ヌクレオチドである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、このsiRNAはヒト細胞及びラット細胞からのVEGFの生産又は分泌を抑制することができるものである。
- 請求項1記載のsiRNAにおいて、このsiRNAはヒト細胞、マウス細胞、及びラット細胞からのVEGFの生産又は分泌を抑制することができるものである。
- 第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖の二本鎖を有する単離siRNAであって、前記第1のRNA鎖はVEGFイソ型の約17〜約25の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有し、前記VEGFイソ型はヒトのVEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、VEGF145、及びその組み合わせから成る群から選択されるものであり、さらに前記siRNAは、当該ヒトVEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、VEGF165bに対して非相補的であることを特徴とする、単離siRNA。
- siRNA及び薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物であって、前記siRNAは第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖の二本鎖を有し、前記第1のRNA鎖はVEGFイソ型の約17〜約25の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有し、前記VEGFイソ型はヒトのVEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、VEGF145、及びその組み合わせから成る群から選択されるものであり、さらに前記siRNAは、当該ヒトVEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、VEGF165bに対して非相補的であることを特徴とする、医薬組成物。
- 請求項19記載の医薬組成物において、前記ヒトVEGFのmRNAは、配列ID番号86、配列ID番号87、配列ID番号88、配列ID番号89、配列ID番号90、配列ID番号91、配列ID番号92、配列ID番号93、配列ID番号94、配列ID番号95、配列ID番号96、配列ID番号97、配列ID番号98、配列ID番号99、配列ID番号100、配列ID番号101、配列ID番号102、配列ID番号103、配列ID番号104、配列ID番号105、配列ID番号106、配列ID番号107、配列ID番号108、配列ID番号109、配列ID番号110、配列ID番号111、配列ID番号112、配列ID番号113、配列ID番号114、配列ID番号115、配列ID番号116、配列ID番号117、及び配列ID番号118から成る群から選択されるものである。
- 請求項19記載の医薬組成物において、前記第1及び第2のRNA鎖はヌクレアーゼによる分解に対して安定化されているものである。
- 請求項19記載の医薬組成物において、この医薬組成物は、さらに、少なくとも1つの3’突出末端を有するものである。
- 請求項22記載の医薬組成物において、前記3’突出末端は約2ヌクレオチドを有するものである。
- 請求項22記載の医薬組成物において、前記少なくとも1つの3’突出末端はジチミジル酸(TT)又はジウリジル酸(uu)を有するものである。
- 請求項19記載の医薬組成物において、前記センスRNA鎖は第1の3’突出末端を有し、前記アンチセンスRNA鎖は第2の3’突出末端を有するものである。
- 請求項19記載の医薬組成物において、siRNAは少なくとも1つの平滑末端を有するものである。
- 請求項26記載のsiRNAにおいて、このsiRNAは19ヌクレオチドである。
- 請求項19記載のsiRNAにおいて、このsiRNAはヒト細胞及びラット細胞からのVEGFの生産又は分泌を抑制することができるものである。
- 請求項19記載のsiRNAにおいて、このsiRNAはヒト細胞、マウス細胞、及びラット細胞からのVEGFの生産又は分泌を抑制することができるものである。
- 被験者の血管新生疾患を治療する方法であって、
siRNA及び薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物の有効量を被験者に投与する工程を有し、前記siRNAは第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖の二本鎖を有し、前記第1のRNA鎖はVEGFイソ型の約17〜約25の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有し、前記VEGFイソ型はヒトのVEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、VEGF145、及びその組み合わせから成る群から選択されるものであり、さらに前記siRNAは、当該ヒトVEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、VEGF165bに対して非相補的であることを特徴とする、方法。 - 請求項30記載の方法において、前記血管新生疾患は癌に関連した腫瘍を有するものである。
- 請求項31記載の方法において、前記癌は、乳癌、肺癌、頭頸部癌、脳癌、腹部癌、大腸癌、結腸直腸癌、食道癌、消化器癌、神経膠腫、肝臓癌、舌癌、神経芽腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、ウィルム腫、多発性骨髄腫、皮膚癌、リンパ腫、及び血液癌から成る群から選択されるものである。
- 請求項30記載の方法において、前記血管新生疾患は、糖尿病性網膜症、加齢黄班変性、及び炎症性疾患から成る群から選択されるものである。
- 請求項33記載の方法において、前記炎症性疾患は乾癬又は関節性リウマチである。
- 請求項33記載の方法において、前記血管新生疾患は加齢黄班変性である。
- 請求項30記載の方法において、前記医薬組成物は、前記血管新生疾患を治療するための薬剤と組み合わせて投与されるものであり、この薬剤は短鎖干渉RNA(siRNA)とは異なるものである。
- 請求項36記載の方法において、前記血管新生疾患は癌であり、前記薬剤は化学療法剤を有するものである。
- 請求項37記載の方法において、前記化学療法剤は、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、5−フルオロウラシル、アドリマイシン、ダウノルビシン、及びタモキシフェンから成る群から選択されるものである。
- 請求項30記載の方法において、前記医薬組成物は、前記血管新生疾患を治療するために設計されたその他の治療方法と組み合わせて、被験者に投与されるものである。
- 請求項39記載の方法において、前記血管新生疾患は癌であり、前記医薬組成物は放射線治療、化学療法、又は手術と組み合わせて投与されるものである。
- ヒト血管内皮増殖因子(VEGF)の発現を抑制する方法であって、siRNA及び薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物の有効量を被験者に投与する工程を有し、前記siRNAは第1のRNA鎖及び第2のRNA鎖の二本鎖を有し、前記第1のRNA鎖はVEGFイソ型の約17〜約25の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有し、前記VEGFイソ型はヒトのVEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF183、VEGF148、VEGF145、及びその組み合わせから成る群から選択されるものであり、さらに前記siRNAは、当該ヒトVEGFのmRNAが配列ID番号42ではないことを条件として、VEGF165bに対して少なくとも部分的に非相補的であることを特徴とする、方法。
- 請求項41記載の方法において、前記有効量は約1nM〜約100nMの前記短鎖干渉RNA(siRNA)を有するものである。
- 請求項41記載の方法において、前記医薬組成物は、さらに、送達試薬を有するものである。
- 請求項41記載の方法において、前記送達試薬は、リポフェクチン、リポフェクトアミン、セルフェクチン、ポリカチオン、及びリポソームから成る群から選択されるものである。
- 請求項44記載の方法において、前記送達試薬はリポソームである。
- 請求項45記載の方法において、前記リポソームは血管新生部位又はその周辺の細胞に対するリポソームを標的とするリガンドを有するものである。
- 請求項46記載の方法において、前記リガンドは腫瘍細胞又は血管内皮細胞の受容体に結合するものである。
- 請求項46記載の方法において、前記リガンドはモノクローナル抗体を有するものである。
- 請求項45記載の方法において、前記リポソームはオプソニン化抑制部分によって修飾されているものである。
- 請求項49記載の方法において、前記オプソニン化抑制部分はPEG、PPG、又はそれらの誘導体を有するものである。
- 請求項41記載の方法において、前記短鎖干渉RNA(RNAi)は組換えプラスミドから発現されるものである。
- 請求項41記載の方法において、前記短鎖干渉RNA(RNAi)は組換えウイルスベクターから発現されるものである。
- 請求項52記載の方法において、前記組換えウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、又はヘルペスウイルスベクターを有するものである。
- 請求項53記載の方法において、前記組換えウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス、エボラウイルス、又はモコラウイルス由来の表面タンパク質によってシュードタイプ化されているものである。
- 請求項52記載の方法において、前記組換えウイルスベクターはアデノ随伴ウイルスベクターを有するものである。
- 請求項41記載の方法において、前記医薬組成物は経腸投与経路によって投与されるものである。
- 請求項56記載の方法において、前記経腸投与経路は、経口投与、直腸投与、及び鼻腔内投与から成る群から選択されるものである。
- 請求項41記載の方法において、前記医薬組成物は非経口投与経路によって投与されるものである。
- 請求項58記載の方法において、前記非経口投与は、血管内投与、組織周囲及び組織内への注入、皮下への注入又は沈着、皮下点滴、及び新血管新生部位又はその周辺への直接的な適用から成る群から選択されるものである。
- 請求項59記載の方法において、前記血管内投与は、静脈内ボーラス注入、静脈内点滴、動脈内ボーラス注入、動脈内点滴、及び血管系へのカテーテル滴下注入から成る群から選択されるものである。
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