JP2012510618A5

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Publication number: JP2012510618A5
Application number: JP2011538701A
Authority: JP
Filing date: 2009-11-25
Publication date: 2013-01-17
Anticipated expiration: 2029-11-25

Claims

対象からの生体試料中の、目的抗原に特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定するための方法であって、
（ａ）目的抗原（ＡｇＩ）を固定化させた固体基質を、対象からの生体試料および補体因子Ｃ１ｑと接触させる工程であって、前記接触は、前記試料中の抗ＡｇＩ補体固定抗体を前記ＡｇＩに結合させ、補体因子Ｃ１ｑを前記抗ＡｇＩ補体固定抗体に結合させるのに十分な時間行われる工程、
前記固体基質を、前記ＡｇＩに結合した抗ＡｇＩ補体固定抗体に結合した前記補体因子Ｃ１ｑに特異的に結合する能力がある少なくとも１つの検出可能に標識されたリガンドとインキュベートする工程、及び、
前記補体因子Ｃ１ｑに結合した前記検出可能に標識されたリガンドの存在または不在を検出することにより、前記生体試料中のＡｇＩに特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定する工程、あるいは、
（ｂ）目的抗原（ＡｇＩ）を固定化させた固体基質を、対象からの生体試料および直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑと接触させる工程であって、前記接触は、前記試料内の抗ＡｇＩ補体固定抗体を前記ＡｇＩに結合させ、前記直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑを前記抗ＡｇＩ補体固定抗体に結合させるのに十分な時間行われる工程、及び、
前記抗ＡｇＩ補体固定抗体に結合した前記直接標識された外因性Ｃ１ｑの存在または不在を検出することにより、前記生体試料中のＡｇＩに特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定する工程、
を含む、方法。
対象からの生体試料中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）に特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定するための方法であって、
（ａ）対象からの生体試料を、異なるサブタイプの一群の微粒子および直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑとインキュベートする工程であって、各微粒子は、精製された異なるＨＬＡサブタイプでコーティングされ、同じＨＬＡを提示する細胞集団に由来し、前記インキュベートは、前記生体試料中の抗ＨＬＡ補体固定抗体を前記ＨＬＡに結合させ、前記補体因子Ｃ１ｑを前記生体試料中の前記抗ＨＬＡ補体固定抗体に結合させるのに十分な時間行われる工程、
前記微粒子を、前記ＨＬＡに結合した抗ＨＬＡ補体固定抗体に結合した前記補体因子Ｃ１ｑに特異的に結合する能力がある少なくとも１つの検出可能に標識されたリガンドとインキュベートする工程、及び、
前記抗ＨＬＡ補体固定抗体に結合した前記直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑの存在または不在を検出することにより、前記生体試料中のＨＬＡに特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定する工程、あるいは、
（ｂ）対象からの生体試料を、異なるサブタイプの一群の微粒子および直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑとインキュベートする工程であって、各微粒子は、精製された異なるＨＬＡサブタイプでコーティングされ、同じＨＬＡを提示する細胞集団に由来し、前記インキュベートは、前記生体試料中の抗ＨＬＡ補体固定抗体を前記ＨＬＡに結合させ、前記補体因子Ｃ１ｑを前記生体試料中の前記抗ＨＬＡ補体固定抗体に結合させるのに十分な時間行われる工程、及び、
前記抗ＨＬＡ補体固定抗体に結合した前記直接標識された外因性補体因子Ｃ１ｑの存在または不在を検出することにより、前記生体試料中のＨＬＡに特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定する工程、
を含む、方法。
対象からの生体試料中の、目的抗原に特異的に結合する補体固定抗体の存在または不在を決定するためのキットであって、
目的抗原（ＡｇＩ）を固定化させた固体基質、
補体因子Ｃ１ｑに特異的に結合する能力がある検出可能に標識されたリガンド、又は、補体固定抗体に結合する能力がある直接標識された外因性Ｃ１ｑ、及び、
前記対象からの生体試料中の前記目的抗原に対する補体固定抗体の存在または不在を決定するための説明書、
を含むキット。
前記目的抗原（ＡｇＩ）がヒト白血球抗原（ＨＬＡ）であり、
前記固体基質が一群の微粒子サブタイプであって、各微粒子サブタイプは、前記群が正常ヒト集団におけるＨＬＡの分布をシミュレートするように、単一細胞株または複数の細胞株の前記ＨＬＡ抗原集団を表すために、異なる精製されたＨＬＡでコーティングされる、請求項３に記載のキット。
前記方法が工程（ａ）を含み、前記補体因子Ｃ１ｑは自己補体因子Ｃ１ｑである、請求項１又は２に記載の方法。
前記方法が工程（ａ）を含み、前記補体因子Ｃ１ｑは外因性補体因子Ｃ１ｑである、請求項１又は２に記載の方法。
前記方法が工程（ａ）を含み、前記補体因子Ｃ１ｑは、自己補体因子Ｃ１ｑおよび外因性補体因子Ｃ１ｑの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
前記固体基質はマルチウェルプレートである、請求項１に記載の方法又は請求項３に記載のキット。
前記固体基質は膜である、請求項１に記載の方法又は請求項３に記載のキット。
前記固体基質は微粒子である、請求項１に記載の方法又は請求項３に記載のキット。
前記微粒子はポリスチレンビーズである、請求項２に記載の方法又は請求項４又は１０に記載のキット。
前記微粒子はラテックスビーズである、請求項２に記載の方法又は請求項４又は１０に記載のキット。
前記微粒子は磁気ビーズである、請求項２に記載の方法又は請求項４又は１０に記載のキット。
前記固体基質は細胞である、請求項１に記載の方法又は請求項３に記載のキット。
前記固体基質は細胞膜である、請求項１に記載の方法。
前記生体試料は、血清、血液、唾液、血漿、または尿である、請求項１又は２に記載の方法又は請求項３又は４に記載のキット。
前記検出可能に標識されたリガンドは、検出可能に標識された抗体またはその結合断片である、請求項１又は２に記載の方法又は請求項３又は４に記載のキット。
前記検出可能な標識は、蛍光色素、発色団、酵素、リンカー分子、ビオチン分子、電子供与体、電子受容体、色素、金属、または放射性核種である、請求項１又は２に記載の方法又は請求項３又は４に記載のキット。
前記微粒子はアガロースビーズである、請求項２に記載の方法又は請求項４又は１０に記載のキット。
前記検出はフローサイトメトリーによる、請求項２に記載の方法。