JP2012240960A - Deodorant - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a deodorant capable of showing superior deodorant effects by decomposing causative substances of body odors (in particular, aging odors).SOLUTION: Alcohol dehydrogenase derived from yeast and Pyrobaculum archaebacteria has effects on decomposition of nonenal, which is a causative substance of the aging odors, for deodorization, and is effective as a deodorant removing body odors.

Description

本発明は、消臭剤に関し、特に体臭の除去に好適に使用される消臭剤に関する。   The present invention relates to a deodorant, and more particularly, to a deodorant preferably used for removing body odor.

近年、ビジネスマンや中高年の人にエチケット意識が浸透し、体臭予防に多くの関心がよせられている。とりわけ、加齢臭は、いつまでもさわやかで若々しくありたいと願う中高年の人にとって深刻な悩みの種になっている。   In recent years, awareness of etiquette has spread to businessmen and middle-aged and elderly people, and much attention has been paid to body odor prevention. In particular, the aging odor has become a serious problem for middle-aged and older people who want to be refreshing and youthful forever.

加齢臭は、皮脂中に増加する低級脂肪酸が酸化されることにより生成したノネナール等が主な原因成分であることが知られており、加齢とともに増加し、特に40歳以降の中高年に生じやすい体臭である。   Age-related odor is known to be the main causative component, such as nonenal produced by oxidation of lower fatty acids that increase in sebum, and increases with aging, especially in middle-aged and older people after the age of 40 Easy body odor.

加齢臭の除去には、(i)原因物質を香料によりマスキングする、(ii)皮脂中の低級脂肪酸の酸化を抗酸化剤により防止し、原因物質の生成を抑制する、(iii)抗菌剤により皮膚常在菌の増殖を抑制する、(iv)原因物質の臭気を捕獲して消失させる、(v)原因物質を分解させる、のいずれか機序の利用が不可欠と考えられている。これまでに加齢臭を除去し得る消臭成分として、例えば、エタノールアミン(特許文献1)、コメ発酵液を含む酒粕エキス(特許文献2)、褐藻エキス(特許文献2)等が報告されている。   For removal of aging odor, (i) masking the causative substance with a fragrance, (ii) preventing oxidation of lower fatty acids in sebum with an antioxidant, and suppressing the generation of the causative substance, (iii) antibacterial agent It is considered indispensable to use any of the following mechanisms: suppressing the growth of resident skin bacteria, (iv) capturing and eliminating the odor of the causative substance, and (v) decomposing the causative substance. Examples of deodorant components that can remove aging odors so far include ethanolamine (Patent Document 1), sake lees extract containing rice fermentation liquor (Patent Document 2), brown algae extract (Patent Document 2), and the like. Yes.

しかしながら、従来報告されている消臭成分では、有効性、安全性及び使用性といった面で十分満足できないという問題点がある。特に、従来報告されている消臭成分の大部分は、上記(i)〜(iv)の機序を利用したものであり、加齢臭の原因物質を分解することにより加齢臭を効果的に除去できるものについては、殆ど報告されていないのが現状である。   However, the conventionally reported deodorant components have a problem that they are not satisfactory in terms of effectiveness, safety and usability. In particular, most of the deodorant components reported so far utilize the mechanisms (i) to (iv) described above, and the aging odor is effectively eliminated by decomposing the causative substances of the aging odor. However, there are few reports on what can be removed.

このような従来技術の現状と、近年のエチケット意識の高まりから、従来にない新たな消臭剤、特に加齢臭の原因物質を分解することにより消臭できる消臭剤の開発が切望されている。   Due to the current state of the prior art and the recent increase in etiquette awareness, the development of a new deodorant that has never existed in the past, especially a deodorant that can be deodorized by decomposing the causative substance of an aging odor, is eagerly desired. Yes.

特開2001−97838号公報JP 2001-97838 A 特開2008−184395号公報JP 2008-184395 A

本発明は、体臭(とりわけ加齢臭)の原因物質を分解することにより優れた消臭作用を発揮できる消臭剤を提供することを目的とする。   An object of this invention is to provide the deodorizer which can exhibit the outstanding deodorizing effect | action by decomposing | disassembling the causative substance of body odor (especially age-related odor).

本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、酵母及びピュロバクルム属古細菌に由来するアルコールデヒドロゲナーゼには、加齢臭の原因物質であるノネナールを分解して消臭する作用があり、体臭を除去する消臭剤として有効であることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて更に検討を重ねることにより完成したものである。   As a result of diligent studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have found that alcohol dehydrogenase derived from yeast and Pseudobacurum archaea has a deodorizing action by degrading nonenal, which is a causative substance of aging odor. And has been found to be effective as a deodorant for removing body odor. The present invention has been completed by further studies based on such knowledge.

即ち、本発明は、下記に掲げる消臭剤及び化粧料を提供する。
項1. 酵母又はピュロバクルム属古細菌に由来するアルコールデヒドロゲナーゼを含有することを特徴とする、消臭剤。
項2. 更に、NADH及びNADPHよりなる群から選択される少なくとも1種の還元型補酵素を含有する、項1に記載の消臭剤。
項3. アルコールデヒドロゲナーゼが、サッカロマイセス・セレビシエ由来である、項1又は2に記載の消臭剤。
項4. アルコールデヒドロゲナーゼとして酵母抽出物を含む、項1〜3のいずれかに記載の消臭剤。
項5. 体臭防止用である、項1〜4のいずれかに記載の消臭剤。
項6. 体臭が加齢臭である、項5に記載の消臭剤。
項7. 項1〜6のいずれかに記載の消臭剤を含む、化粧料。
項8. 体臭防止用化粧料である、項7に記載の化粧料。
項9. 体臭が加齢臭である、項8に記載の化粧料。
That is, this invention provides the deodorant and cosmetics which are hung up below.
Item 1. A deodorizer characterized by comprising an alcohol dehydrogenase derived from yeast or Pseudobacum archaebacterium.
Item 2. Item 2. The deodorizer according to Item 1, further comprising at least one reduced coenzyme selected from the group consisting of NADH and NADPH.
Item 3. Item 3. The deodorant according to Item 1 or 2, wherein the alcohol dehydrogenase is derived from Saccharomyces cerevisiae.
Item 4. Item 4. The deodorizer according to any one of Items 1 to 3, comprising a yeast extract as the alcohol dehydrogenase.
Item 5. Item 5. The deodorant according to any one of Items 1 to 4, which is for body odor prevention.
Item 6. Item 6. The deodorant according to Item 5, wherein the body odor is an aging odor.
Item 7. Cosmetics containing the deodorizer in any one of claim | item 1 -6.
Item 8. Item 8. A cosmetic according to Item 7, which is a cosmetic for preventing body odor.
Item 9. Item 9. The cosmetic according to Item 8, wherein the body odor is an aging odor.

本発明の消臭剤は、加齢臭等の体臭の原因物質を分解でき、優れた体臭防止効果を奏し、体臭に悩む人に福音をもたらすことができる。   The deodorant of the present invention can decompose body odor-causing substances such as an aging odor, has an excellent body odor prevention effect, and can bring the gospel to those who suffer from body odor.

試験例1において、ノネナールを分解できる酵素を探索した結果を示す。なお、図1における縦軸の単位(unit/mg)は、酵素1mg当たりのノネナール分解活性(U)を示す。The result of searching for an enzyme capable of degrading nonenal in Test Example 1 is shown. In addition, the unit (unit / mg) of the vertical axis | shaft in FIG. 1 shows nonenal decomposition | disassembly activity (U) per mg of enzyme. 試験例2において、酵母抽出物によるノネナール分解性を評価した結果を示す。なお、図2における縦軸の単位(unit/ml)は、各反応溶液1ml当たりのノネナール分解活性(U)を示す。In Test example 2, the result of having evaluated the nonenal degradability by a yeast extract is shown. In addition, the unit (unit / ml) of the vertical axis | shaft in FIG. 2 shows nonenal decomposition | disassembly activity (U) per 1 ml of each reaction solution.

1.消臭剤
本発明の消臭剤は、酵母又はピュロバクルム属古細菌に由来するアルコールデヒドロゲナーゼを含有することを特徴とする。以下、本発明について詳細に説明する。
1. Deodorant The deodorizer of the present invention is characterized by containing an alcohol dehydrogenase derived from yeast or Pseudobacum archaebacterium. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

本発明に使用されるアルコールデヒドロゲナーゼは、酵母又はピュロバクルム属古細菌に由来するものが使用される。このように特定のアルコールデヒドロゲナーゼを選択して使用することによって、体臭の消臭、とりわけ加齢臭の消臭が可能になる。本発明の消臭剤の消臭メカニズムについて、限定的な解釈を望むものではないが、酵母又はピュロバクルム属古細菌に由来するアルコールデヒドロゲナーゼが、体臭の原因物質である2−ノネナールを、無臭物質である2−ノネン−1−オールに還元分解することによって、消臭作用を発揮していると考えられる。   As the alcohol dehydrogenase used in the present invention, those derived from yeasts or archaea of the genus Purobacurum are used. By selecting and using a specific alcohol dehydrogenase in this way, it is possible to deodorize body odors, especially deodorizing aging odors. The deodorant mechanism of the deodorant of the present invention is not intended to be limited, but the alcohol dehydrogenase derived from yeast or purobacurum archaea is 2-nonenal, which is a causative substance of body odor, as an odorless substance. It is considered that a deodorizing effect is exhibited by reductive decomposition to certain 2-nonen-1-ol.

本発明において、アルコールデヒドロゲナーゼの由来微生物である酵母の属種については、特に制限されず、サッカロマイセス属(Saccharomyces)、ピキア属(Pichia)、シゾサッカロマイセス属(Schizosaccharomyces)等が挙げられ、より具体的には、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、シゾサッカロマイセス・ポンべ (Schizosaccharomyces pombe)等が挙げられる。これらの中でも、サッカロマイセス属の酵母、とりわけサッカロマイセス・セレビシエは、体臭除去能が格別優れたアルコールデヒドロゲナーゼを保有しており、本発明で使用されるアルコールデヒドロゲナーゼの由来酵母として好適である。   In the present invention, the genus of yeast that is a microorganism derived from alcohol dehydrogenase is not particularly limited, and examples include Saccharomyces, Pichia, Schizosaccharomyces, and the like. Examples include Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, and Schizosaccharomyces pombe. Among these, yeasts belonging to the genus Saccharomyces, particularly Saccharomyces cerevisiae, possess alcohol dehydrogenase with particularly excellent body odor removing ability, and are suitable as the yeast derived from the alcohol dehydrogenase used in the present invention.

また、本発明において、アルコールデヒドロゲナーゼの由来微生物であるピュロバクルム属(Pyrobaculum)古細菌の種については、特に制限されず、例えば、ピュロバクルム・アエロフィラム(Pyrobaculum aerophilum)、ピュロバクルム・イスランディカム(Pyrobaculum islandicum)、ピュロバクルム・カリディホンティス(Pyrobaculum calidifontis)、ピュロバクルム・アルセナティカム(Pyrobaculum arsenaticum)等が挙げられる。これらの中でも、ピュロバクルム・アエロフィラムは、体臭除去能が格別優れたアルコールデヒドロゲナーゼを保有しており、本発明で使用されるアルコールデヒドロゲナーゼの由来古細菌として好適である。   In the present invention, the species of Pyrobaculum archaea, which is a microorganism from which alcohol dehydrogenase is derived, is not particularly limited. Pyrobaculum calidihontis, Pyrobaculum arsenaticum, etc. are mentioned. Among these, purobacrum aerophilum possesses alcohol dehydrogenase with particularly excellent body odor removing ability and is suitable as an archaebacteria derived from the alcohol dehydrogenase used in the present invention.

本発明で使用されるアルコールデヒドロゲナーゼの好適な例として、酵素番号がEC.1.1.1.1又はEC.1.1.1.2に該当するアルコールデヒドロゲナーゼが例示される。   Preferable examples of the alcohol dehydrogenase used in the present invention include alcohol dehydrogenase whose enzyme number corresponds to EC.1.1.1.1 or EC.1.1.1.2.

本発明に使用されるアルコールデヒドロゲナーゼとして、より一層優れた体臭防止効果を奏させるという観点から、好ましくは酵母由来、更に好ましくはサッカロマイセス・セレビシエ由来のものが挙げられる。   The alcohol dehydrogenase used in the present invention is preferably derived from yeast, and more preferably derived from Saccharomyces cerevisiae, from the viewpoint of achieving a further excellent body odor prevention effect.

なお、本発明において、上記アルコールデヒドロゲナーゼは、精製されたものでなくてもよい。具体的には、上記アルコールデヒドロゲナーゼとして、上記アルコールデヒドロゲナーゼの粗精製物を使用してもよく、また、上記アルコールデヒドロゲナーゼが活性を保持している状態で含まれることを限度として酵母又はピュロバクルム属古細菌の抽出物であってもよい。   In the present invention, the alcohol dehydrogenase may not be purified. Specifically, a crude product of the alcohol dehydrogenase may be used as the alcohol dehydrogenase, and yeast or purobacurum archaea as long as the alcohol dehydrogenase is contained in a state of retaining activity. An extract of

また、本発明に使用されるアルコールデヒドロゲナーゼは、酵母又はピュロバクルム属古細菌から単離したもの、その変異体、遺伝子組換技術により製造したもの等であってもよい。   In addition, the alcohol dehydrogenase used in the present invention may be one isolated from yeast or archaea of the genus Purobacurum, its mutant, one produced by gene recombination technology, and the like.

本発明において、アルコールデヒドロゲナーゼは、酵母由来及びピュロバクルム属古細菌由来の中から1種を選択して単独で使用してもよく、また2種以上を組み合わせて使用してもよい。   In the present invention, the alcohol dehydrogenase may be selected from one of yeast-derived and Purobacurum archaebacteria and used alone or in combination of two or more.

本発明の消臭剤は、上記アルコールデヒドロゲナーゼと共に、NADH(還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド)及びNADPH(還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸)よりなる群から選択される少なくとも1種の還元型補酵素を含有することが望ましい。これらの還元型補酵素を使用することにより、効果的な体臭(特に加齢臭)の消臭が可能になる。特に、酵母由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用する場合には還元型補酵素としてNADHを使用することが望ましく、ピュロバクルム属古細菌由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用する場合には還元型補酵素としてNADPHを使用することが望ましい。   The deodorizer of the present invention, together with the alcohol dehydrogenase, contains at least one reduced complement selected from the group consisting of NADH (reduced nicotinamide adenine dinucleotide) and NADPH (reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate). It is desirable to contain an enzyme. By using these reduced coenzymes, effective body odor (especially aging odor) can be eliminated. In particular, it is desirable to use NADH as a reduced coenzyme when using an alcohol dehydrogenase derived from yeast, and NADPH as a reduced coenzyme when using an alcohol dehydrogenase derived from Pseudobacterium archaebacterium. Is desirable.

上記アルコールデヒドロゲナーゼと上記還元型補酵素の比率としては、特に制限されないが、例えば、上記アルコールデヒドロゲナーゼ1Uに対して、上記還元型補酵素が、通常0.1nmol〜10μmol、好ましくは0.5nmol〜1μmol、更に好ましくは1nmol〜100nmolとなる比率が挙げられる。なお、本明細書において、アルコールデヒドロゲナーゼ活性(以下、ノネナール分解活性と表記することもある)単位は、50mMの酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)において1mMのトランス−2−ノネナールと0.3mMのNADH又はNADPHと20重量%のDMSO(ジメチルスルホキシド)とを共存させた状態で、37℃で1分間に1μmolのNADH又はNADPHを酸化させるのに要する酵素量を1Uとする。   The ratio of the alcohol dehydrogenase and the reduced coenzyme is not particularly limited. For example, the reduced coenzyme is usually 0.1 nmol to 10 μmol, preferably 0.5 nmol to 1 μmol with respect to 1 U of the alcohol dehydrogenase. More preferably, the ratio is 1 nmol to 100 nmol. In the present specification, the unit of alcohol dehydrogenase activity (hereinafter also referred to as nonenal degradation activity) is 1 mM trans-2-nonenal and 0.3 mM in 50 mM sodium acetate buffer (pH 6.0). The amount of enzyme required to oxidize 1 μmol of NADH or NADPH per minute at 37 ° C. in the presence of NADH or NADPH and 20 wt% DMSO (dimethyl sulfoxide) is defined as 1 U.

なお、上記アルコールデヒドロゲナーゼとして、酵母又はピュロバクルム属古細菌の抽出物を使用する場合、これらの抽出物中に上記還元型補酵素が含まれているので、上記還元型補酵素を別途添加してなくてもよく、或いは上記還元型補酵素を適量補充するだけでもよい。   As the alcohol dehydrogenase, when using an extract of yeast or purobacurum archaea, the reduced coenzyme is contained in these extracts, so the reduced coenzyme is not added separately. Alternatively, it may be sufficient to supplement the reduced coenzyme with an appropriate amount.

本発明の消臭剤は、体臭防止用、特に加齢臭防止用の用途に好適であり、体臭を発している皮膚部位に経皮適用して使用される。即ち、本発明の消臭剤は、好適には、皮膚や頭皮に適用される化粧料に配合される添加剤として使用される。以下に、本発明の消臭剤が配合された化粧料について説明する。   The deodorant of the present invention is suitable for use for body odor prevention, particularly for aging odor prevention, and is used by being applied percutaneously to a skin site emitting body odor. That is, the deodorant of the present invention is preferably used as an additive blended in cosmetics applied to the skin and scalp. Below, the cosmetics with which the deodorant of this invention was mix | blended are demonstrated.

2.化粧料
本発明の化粧料は、上記消臭剤を含むことを特徴とする。
2. Cosmetics The cosmetics of the present invention are characterized by containing the above deodorant.

本発明の化粧料において、上記消臭剤の含有割合については、その製剤形態等に応じて適宜設定されるが、例えば、化粧料の総量に対して、上記アルコールデヒドロゲナーゼが0.01〜100U/ml、好ましくは0.05〜50U/ml、更に好ましくは0.1〜10U/mlを充足するように設定すればよい。   In the cosmetic of the present invention, the content ratio of the deodorant is appropriately set according to the formulation form and the like. For example, the alcohol dehydrogenase is 0.01 to 100 U /% of the total amount of the cosmetic. ml, preferably 0.05 to 50 U / ml, more preferably 0.1 to 10 U / ml.

本発明の化粧料は、上記消臭剤の他に、薬学的又は香粧的に許容される基剤や担体を組み合わせて各種の形態に調製される。薬学的又は香粧的に許容される基剤や担体については、化粧料に使用されている公知のものを用いることができる。   The cosmetic of the present invention is prepared in various forms by combining a pharmaceutically or cosmetically acceptable base or carrier in addition to the above deodorant. As the pharmaceutically or cosmetically acceptable base and carrier, known ones used in cosmetics can be used.

また、本発明の化粧料には、必要に応じて化粧料に配合される各種の添加剤を配合することができる。このような添加剤として、例えば、保湿剤、美白剤、抗炎症剤、清涼化剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、ビタミン類、植物エキス、皮膚収斂剤、細胞賦活剤、血管拡張剤、血行促進剤、皮膚機能亢進剤、殺菌剤(抗菌剤)、pH調整剤、増粘剤、酸化防止剤、金属封鎖剤、界面活性剤、乳化剤、色素(染料、顔料)、香料、防腐剤等が挙げられる。   Moreover, various additives mixed with cosmetics can be blended with the cosmetics of the present invention as needed. Examples of such additives include humectants, whitening agents, anti-inflammatory agents, cooling agents, UV absorbers, UV scattering agents, vitamins, plant extracts, skin astringents, cell activators, vasodilators, blood circulation Accelerators, skin function enhancers, bactericides (antibacterial agents), pH adjusters, thickeners, antioxidants, sequestering agents, surfactants, emulsifiers, dyes (dyes, pigments), fragrances, preservatives, etc. Can be mentioned.

本発明の化粧料は、皮膚や頭皮に適用された際に上記アルコールデヒドロゲナーゼの活性を有効に発揮させるために、水が含まれていることが望ましい。本発明の化粧料に含まれる水の含有割合については、特に制限されないが、例えば、化粧料の総量に対して、通常1〜99重量%、好ましくは5〜95重量%、更に好ましくは10〜90重量%が挙げられる。   The cosmetic of the present invention preferably contains water in order to effectively exhibit the activity of the alcohol dehydrogenase when applied to the skin or scalp. The content of water contained in the cosmetic of the present invention is not particularly limited. For example, it is usually 1 to 99% by weight, preferably 5 to 95% by weight, more preferably 10 to 10% by weight based on the total amount of the cosmetic. 90% by weight.

本発明の化粧料の製剤形態については、経皮適用可能であることを限度として、特に制限されないが、例えば、ペースト状、ムース状、ジェル状、液状、乳液状、懸濁液状、クリーム状、軟膏状、エアゾール状、スプレー状、リニメント剤状等が例示される。また、本発明の化粧料の製剤形態が、液状、乳液状、又は懸濁液状である場合には、不織布等のシート基材に含浸させた状態であってもよい。   The form of the cosmetic preparation of the present invention is not particularly limited as long as it can be applied transdermally. For example, it is paste, mousse, gel, liquid, emulsion, suspension, cream, Examples include ointments, aerosols, sprays, liniments and the like. Moreover, when the cosmetic preparation of the present invention is in the form of liquid, emulsion, or suspension, it may be in a state of impregnating a sheet substrate such as a nonwoven fabric.

本発明の化粧料は、体臭防止用、特に加齢臭防止用として好適であり、体臭が気になる皮膚部位或いは頭皮に適用して使用される。   The cosmetic of the present invention is suitable for preventing body odor, particularly for preventing aging odor, and is applied to the skin site or scalp where the body odor is worrisome.

本発明の化粧料を皮膚に適用する量及び回数については、上記アルコールデヒドロゲナーゼの含有割合、体臭の強さ等に応じて適宜設定されるが、例えば、1日に1回若しくは2〜5回の頻度で、皮膚1cm2当たり、上記アルコールデヒドロゲナーゼの量に換算して0.001〜0.1U、好ましくは0.01〜0.05U程度となる量を皮膚に適用すればよい。 About the quantity and frequency | count which apply the cosmetics of this invention to skin, although it sets suitably according to the content rate of the said alcohol dehydrogenase, the intensity | strength of body odor, etc., for example once a day or 2-5 times What is necessary is just to apply to skin the quantity which is converted into the quantity of the said alcohol dehydrogenase per cm < 2 > of skin, and is 0.001-0.1U, Preferably about 0.01-0.05U.

以下、試験例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although a test example is given and this invention is demonstrated, this invention is not limited to these Examples.

試験例1:ノネナール分解酵素の探索
1)方法
1mMのトランス−2−ノネナール、50μg/mlのアルコールデヒドロゲナーゼ、0.3mM NADH又はNADPH、及び20重量%のDMSO(ジメチルスルホキシド)を含む50mMの酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)1mlを調製し、37℃で3分間インキュベートしながら340nmの吸光度を測定した。1分間当たりの吸光度の減少速度からノネナール分解活性を算出した。NADH又はNADPHのミリモル分子吸光係数は6.22mM−1cm−1とした。
なお、本試験では、アルコールデヒドロゲナーゼとして、表1に示す8種の微生物由来のものを使用した。
Test Example 1 : Search for Nonenal Degrading Enzyme 1) Method 50 mM sodium acetate containing 1 mM trans-2-nonenal, 50 μg / ml alcohol dehydrogenase, 0.3 mM NADH or NADPH, and 20 wt% DMSO (dimethyl sulfoxide) 1 ml of buffer solution (pH 6.0) was prepared, and absorbance at 340 nm was measured while incubating at 37 ° C. for 3 minutes. Nonenal degradation activity was calculated from the rate of decrease in absorbance per minute. The mmol molecular absorption coefficient of NADH or NADPH was 6.22 mM −1 cm −1 .
In this test, eight types of microorganism-derived substances shown in Table 1 were used as alcohol dehydrogenase.

Figure 2012240960
Figure 2012240960

2)結果
トランス−2−ノネナールは、加齢臭の原因物質であり、これがアルコールデヒドロゲナーゼによって還元分解されると、無臭物質であるトランス−2−ノネン−1−オールが生成する。この還元分解の際に、NADH又はNADPHはNAD又はNADPに変換される。本試験では、NADH又はNADPHの減少を測定することにより、トランス−2−ノネナールの分解の程度を評価した。
2) Results Trans-2-nonenal is a causative substance of an aging odor, and when it is reduced and decomposed by alcohol dehydrogenase, odorless substance trans-2-nonen-1-ol is produced. During this reductive decomposition, NADH or NADPH is converted to NAD + or NADP + . In this test, the degree of degradation of trans-2-nonenal was evaluated by measuring the decrease in NADH or NADPH.

得られた結果を図1に示す。図1の(A)には還元型補酵素としてNADHを使用した結果、図1の(B)には還元型補酵素としてNADPHを使用した結果を示す。   The obtained results are shown in FIG. FIG. 1A shows the result of using NADH as a reduced coenzyme, and FIG. 1B shows the result of using NADPH as a reduced coenzyme.

図1から明らかなように、アルコールデヒドロゲナーゼの中でも、サッカロマイセス・セレビシエ及びピュロバクルム・アエロフィラム由来のものを使用した場合に、ノネナールが分解されるのが確認され、他の微生物由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用した場合には、ノネナールが分解されなかった。即ち、アルコールデヒドロゲナーゼの中でも、サッカロマイセス・セレビシエ及びピュロバクルム・アエロフィラム由来のものを選択して使用することによって、初めて加齢臭の原因物質を分解して消臭できることが明らかになった。   As is apparent from FIG. 1, among alcohol dehydrogenases, when Saccharomyces cerevisiae and Purovacrum aerophilumum-derived ones were used, it was confirmed that nonenal was decomposed, and when other alcohol-derived alcohol dehydrogenases were used. In this case, nonenal was not decomposed. That is, it has been clarified that, by selecting and using alcoholic dehydrogenases derived from Saccharomyces cerevisiae and Pyrovacrum aerophilum, the causative agent of aging odor can be decomposed and deodorized for the first time.

また、本結果から、サッカロマイセス・セレビシエ由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用する場合には還元型補酵素としてNADHを使用することが望ましく、ピュロバクルム・アエロフィラム由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用する場合には還元型補酵素としてNADPHを使用することが望ましいことも確認された。   Further, from this result, it is desirable to use NADH as a reduced coenzyme when using an alcohol dehydrogenase derived from Saccharomyces cerevisiae, and as a reduced coenzyme when using an alcohol dehydrogenase derived from Purovacrum aerophilum. It has also been confirmed that it is desirable to use NADPH.

試験例2:酵母抽出物によるノネナール分解性の評価
1)方法
酵母抽出物の調製
ビール酵母(Saccharomyces cerevisiae)NBRC2018を、0.2重量%のグルコース、0.5重量%のペプトン(日本製薬)、0.2重量%の乾燥酵母エキス(ナカライテスク)を含む液体培地(pH7.0)10mlにて30℃で2日間静置培養した。培養後、6000rpm、4℃で10分間遠心分離し、酵母を沈降させた。上清を捨て、沈殿に100mMの塩化ナトリウムを含む20mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)1ml加え懸濁し、再度、6000rpm、4℃で10分間遠心分離し、酵母を沈降させた。沈殿に、100mMの塩化ナトリウムを含む20mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)0.9ml加え懸濁し、0.5mg/mlのLyticaseを0.1ml加えた。この溶液を30℃で1時間インキュベートし、酵母の細胞壁を溶解した。続いて、超音波破砕により細胞を破壊し、得られた破砕液を12,000rpm、4℃、10分間の条件で遠心分離し、上清を回収した。この破砕液上清を酵母抽出物として以降の操作に用いた。
Test Example 2 : Evaluation of Nonenal Degradability by Yeast Extract 1) Method
Preparation of yeast extract A liquid containing Saccharomyces cerevisiae NBRC2018, 0.2 wt% glucose, 0.5 wt% peptone (Nippon Pharmaceutical), 0.2 wt% dry yeast extract (Nacalai Tesque) The culture was allowed to stand for 2 days at 30 ° C. in 10 ml of a medium (pH 7.0). After incubation, the mixture was centrifuged at 6000 rpm and 4 ° C. for 10 minutes to precipitate the yeast. The supernatant was discarded, and 1 ml of 20 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) containing 100 mM sodium chloride was added to the precipitate for suspension, and the mixture was again centrifuged at 6000 rpm at 4 ° C. for 10 minutes to precipitate the yeast. To the precipitate, 0.9 ml of 20 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) containing 100 mM sodium chloride was added and suspended, and 0.1 ml of 0.5 mg / ml Lyticase was added. This solution was incubated at 30 ° C. for 1 hour to lyse the yeast cell walls. Subsequently, the cells were disrupted by ultrasonic disruption, and the resulting disrupted solution was centrifuged at 12,000 rpm, 4 ° C., 10 minutes, and the supernatant was recovered. This crushed supernatant was used as a yeast extract for subsequent operations.

得られた酵母抽出物のアルコールデヒドロゲナーゼ活性(ノネナール分解活性)について測定したところ、0.1U/mlであった。なお、アルコールデヒドロゲナーゼ活性(ノネナール分解活性)は、1mMのトランス−2−ノネナール、10重量%の酵母抽出物、0.3mM NADH、及び20重量%のDMSO(ジメチルスルホキシド)を含む50mMの酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)1mlを調製し、37℃で3分間インキュベートしながら340nmの吸光度を測定し、1分間に1μmolのNADHを酸化させるのに要する酵素量を1Uとして算出した。NADHのミリモル分子吸光係数は6.22mM−1cm−1とした。 It was 0.1 U / ml when it measured about the alcohol dehydrogenase activity (nonenal decomposition | disassembly activity) of the obtained yeast extract. Alcohol dehydrogenase activity (nonenal decomposition activity) is 50 mM sodium acetate buffer containing 1 mM trans-2-nonenal, 10 wt% yeast extract, 0.3 mM NADH, and 20 wt% DMSO (dimethyl sulfoxide). 1 ml of a solution (pH 6.0) was prepared, the absorbance at 340 nm was measured while incubating at 37 ° C. for 3 minutes, and the amount of enzyme required to oxidize 1 μmol of NADH per minute was calculated as 1 U. The NADH molecular extinction coefficient was 6.22 mM −1 cm −1 .

ノネナールの分解反応
1mMのトランス−2−ノネナール、0.3mM NADH、及び20重量%のDMSO(ジメチルスルホキシド)を含む50mMの酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)0.9mlを調製し、これを反応溶液とした。反応溶液の調製後、37℃で1分間プレインキュベートした。次いで、酵母抽出物0.1mlを加えて、37℃で3分間インキュベートしながら、340nmの吸光度を測定した(サンプル9)。1分間当たりの吸光度の減少速度からノネナール分解活性を算出した。NADH又はNADPHのミリモル分子吸光係数は6.22mM−1cm−1とした。また、ブランクとして、トランス−2−ノネナールの代わりに超純水を用いた場合(ブランク1)、及び酵母抽出物の代わりに100mMの塩化ナトリウムを含む20mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)を用いた場合(ブランク2)についても、同様に測定した。
Decomposition reaction of nonenal 0.9 ml of 50 mM sodium acetate buffer (pH 6.0) containing 1 mM trans-2-nonenal, 0.3 mM NADH, and 20 wt% DMSO (dimethyl sulfoxide) was prepared and reacted. It was set as the solution. After the reaction solution was prepared, it was preincubated at 37 ° C. for 1 minute. Next, 0.1 ml of yeast extract was added, and the absorbance at 340 nm was measured while incubating at 37 ° C. for 3 minutes (Sample 9). Nonenal degradation activity was calculated from the rate of decrease in absorbance per minute. The mmol molecular absorption coefficient of NADH or NADPH was 6.22 mM −1 cm −1 . Moreover, as a blank, when using ultrapure water instead of trans-2-nonenal (blank 1), a 20 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) containing 100 mM sodium chloride is used instead of the yeast extract. When used (blank 2), the same measurement was performed.

2)結果
得られた結果を図2に示す。この結果から、トランス−2−ノネナール又は酵母抽出物を添加しなかった場合(ブランク1及び2)では、NADHの減少(340nmの吸光度の減少)は認められなかったが、酵母抽出物とトランス−2−ノネナールを添加したサンプルでは、NADHが顕著に減少しており、トランス−2−ノネナールが分解されていた。
2) Results The results obtained are shown in FIG. From this result, when no trans-2-nonenal or yeast extract was added (blanks 1 and 2), a decrease in NADH (decrease in absorbance at 340 nm) was not observed, but the yeast extract and trans- In the sample to which 2-nonenal was added, NADH was significantly reduced, and trans-2-nonenal was decomposed.

以上の結果から、酵母抽出物を使用しても、ノネナールを分解できることが示された。本試験で使用した酵母抽出物には、アルコールデヒドロゲナーゼが活性を保持した状態で含まれているため、ノネナールを消臭できたと考えられる。   From the above results, it was shown that nonenal can be decomposed even when yeast extract is used. The yeast extract used in this test contains alcohol dehydrogenase in a state of maintaining activity, so it is considered that nonenal was deodorized.

試験例3:消臭効果の確認試験
1)方法
表2に示す4種の臭気サンプル1mlをチューブに入れて、蓋をして密閉した。この状態で、37℃で5分間インキュベートした。その後、蓋を空けて、臭気サンプルの臭気を評価した。臭気の評価は、6名のパネラーにより下記の判定基準に従って評点化することにより行った。
Test Example 3 : Confirmation test of deodorizing effect 1) Method 1 ml of four kinds of odor samples shown in Table 2 were put in a tube, covered and sealed. In this state, it was incubated at 37 ° C. for 5 minutes. Then, the lid was opened and the odor of the odor sample was evaluated. Odor was evaluated by scoring according to the following criteria by six panelists.

Figure 2012240960
Figure 2012240960

<臭気の判定基準>
評点
0 : 加齢臭(トランス−2−ノネナールの臭い)を全く感じない。
1 : 加齢臭(トランス−2−ノネナールの臭い)を殆ど感じない。
2 : 加齢臭(トランス−2−ノネナールの臭い)をやや感じる。
3 : 加齢臭(トランス−2−ノネナールの臭い)を感じる。
4 : 加齢臭(トランス−2−ノネナールの臭い)を強く感じる。
<Criteria for odor>
Score 0: No aging odor (trans-2-nonenal odor) is felt.
1: Almost no aging odor (trans-2-nonenal odor).
2: Slightly feels aging odor (trans-2-nonenal odor).
3: Feels aging odor (trans-2-nonenal odor).
4: Aging odor (trans-2-nonenal odor) is strongly felt.

2)結果
得られた結果を表3に示す。この結果から、サッカロマイセス・セレビシエ及びピュロバクルム・アエロフィラム由来のアルコールデヒドロゲナーゼを含む臭気サンプル(臭気サンプル2及び4)では、明らかにトランス−2−ノネナールに起因する加齢臭が抑制されていた。この結果からも、サッカロマイセス・セレビシエ及びピュロバクルム・アエロフィラム由来のアルコールデヒドロゲナーゼを使用することにより、加齢臭を消臭できることが確認された。
2) Results Table 3 shows the results obtained. From this result, in the odor samples (odor samples 2 and 4) containing alcohol dehydrogenase derived from Saccharomyces cerevisiae and Purovacrum aerophilum, the aging odor caused by trans-2-nonenal was clearly suppressed. Also from this result, it was confirmed that the aging odor can be deodorized by using alcohol dehydrogenase derived from Saccharomyces cerevisiae and Purovacrum aerophilum.

Figure 2012240960
Figure 2012240960

製造例
以下に、本発明の消臭剤を使用した各種化粧料の製剤処方例を示す。
製造例1:消臭用皮膚清浄剤
酵母由来アルコールデヒドロゲナーゼ 5U/ml
NADH 250nmol/ml
塩化ベンザルコニウム 0.05重量%
L−メントール 0.01重量%
ポリオキシエチレン(20)ラウリルエーテル 1重量%
pH調整剤 適量
香料 適量
防腐剤 適量
精製水 残部
合計 100重量%
Production Examples The following are formulation examples of various cosmetic preparations using the deodorant of the present invention.
Production Example 1: Deodorizing skin cleanser yeast-derived alcohol dehydrogenase 5 U / ml
NADH 250 nmol / ml
Benzalkonium chloride 0.05% by weight
L-menthol 0.01% by weight
Polyoxyethylene (20) lauryl ether 1% by weight
pH adjuster appropriate amount perfume appropriate amount preservative appropriate amount
Purified water balance
Total 100% by weight

製造例2:消臭用化粧水
酵母由来アルコールデヒドロゲナーゼ 3U/ml
NADH 150nmol/ml
グリセリン 3重量%
エタノール 1.5重量%
ソルビン酸カリウム 0.2重量%
精製水 残部
合計 100重量%
Production Example 2: Deodorizing lotion yeast-derived alcohol dehydrogenase 3 U / ml
NADH 150 nmol / ml
Glycerin 3% by weight
Ethanol 1.5% by weight
Potassium sorbate 0.2% by weight
Purified water balance
Total 100% by weight

製造例3:消臭用シート
下記組成の液剤を、セルロース/レーヨン混紡不織布に含浸させて、ウェットティッシュタイプの消臭シートが得られる。
液剤の組成
酵母由来アルコールデヒドロゲナーゼ 6U/ml
NADH 300nmol/ml
塩化ベンザルコニウム 0.05重量%
モノラウリン酸ポリグリセリル 0.4重量%
エタノール 1重量%
プロピレングリコール 0.5重量%
L−メントール 0.01重量%
pH調整剤 適量
香料 適量
防腐剤 適量
精製水 残部
合計 100重量%
Production Example 3: Deodorizing Sheet A liquid tissue having the following composition is impregnated into a cellulose / rayon blended nonwoven fabric to obtain a wet tissue type deodorizing sheet.
Composition of solution Yeast-derived alcohol dehydrogenase 6U / ml
NADH 300 nmol / ml
Benzalkonium chloride 0.05% by weight
Polyglyceryl monolaurate 0.4% by weight
1% ethanol
Propylene glycol 0.5% by weight
L-menthol 0.01% by weight
pH adjuster appropriate amount perfume appropriate amount preservative appropriate amount
Purified water balance
Total 100% by weight

Claims (9)

酵母又はピュロバクルム属古細菌に由来するアルコールデヒドロゲナーゼを含有することを特徴とする、消臭剤。   A deodorizer characterized by comprising an alcohol dehydrogenase derived from yeast or Pseudobacum archaebacterium. 更に、NADH及びNADPHよりなる群から選択される少なくとも1種の還元型補酵素を含有する、請求項1に記載の消臭剤。   The deodorizer according to claim 1, further comprising at least one reduced coenzyme selected from the group consisting of NADH and NADPH. アルコールデヒドロゲナーゼが、サッカロマイセス・セレビシエ由来である、請求項1又は2に記載の消臭剤。   The deodorizer according to claim 1 or 2, wherein the alcohol dehydrogenase is derived from Saccharomyces cerevisiae. アルコールデヒドロゲナーゼとして酵母抽出物を含む、請求項1〜3のいずれかに記載の消臭剤。   The deodorant in any one of Claims 1-3 which contains a yeast extract as alcohol dehydrogenase. 体臭防止用である、請求項1〜4のいずれかに記載の消臭剤。   The deodorizer according to any one of claims 1 to 4, which is for body odor prevention. 体臭が加齢臭である、請求項5に記載の消臭剤。   The deodorizer according to claim 5, wherein the body odor is an aging odor. 請求項1〜6のいずれかに記載の消臭剤を含む、化粧料。   Cosmetics containing the deodorizer in any one of Claims 1-6. 体臭防止用化粧料である、請求項7に記載の化粧料。   The cosmetic according to claim 7, which is a cosmetic for preventing body odor. 体臭が加齢臭である、請求項8に記載の化粧料。

The cosmetic according to claim 8, wherein the body odor is an aging odor.

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