JP2012232948A - 抗モルヒネ抗体、抗モルヒネ抗体を用いたモルヒネの測定方法、および抗モルヒネ抗体を含むモルヒネ測定キット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ抗体分子であって、一本鎖抗体(scFv)、Fab断片、F(ab')2断片、Fv断片、および完全型抗体からなる群より選択され、重鎖可変領域において、該重鎖可変領域において、a)CDR-H1として配列表の配列番号1の31位から35位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-H2として配列番号1の50位から65位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-H3として配列番号1の98位から110位に記載のアミノ酸配列を有し、かつ/または該軽鎖可変領域において、a)CDR-L1として配列表の配列番号1の160位から174位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-L2として配列番号1の190位から196位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-L3として配列番号1の229位から237位に記載のアミノ酸配列を有する、抗モルヒネ抗体を調製する。
【選択図】なし
Description
すなわち本発明は、モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ抗体分子であって、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、一本鎖抗体(scFv)、2量体化可変領域(V領域)断片(Diabody)、ジスルフィド安定化V領域断片(dsFv)および相補性決定領域(CDR)を含むペプチドから選ばれる抗体断片、および完全型抗体からなる群より選択され、該重鎖可変領域において、a)CDR-H1として配列表の配列番号1の31位から35位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-H2として配列番号1の50位から65位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-H3として配列番号1の98位から110位に記載のアミノ酸配列を有する、抗モルヒネ抗体、に関する。
(a)動物をモルヒネと特定のタンパク質との複合体で免疫する工程;
(b)該免疫動物の脾臓細胞から、該特定のタンパク質とは別のタンパク質とモルヒネとの複合体を用いて、該複合体との結合により目的の細胞を選別し、ファージ抗体ライブラリを作成する工程;および
(c)工程(a)の特定のタンパク質とは別のタンパク質とモルヒネとの複合体を用いて、該複合体との結合により、該ファージ抗体ライブラリから目的の抗体を有するファージを選別する工程、を含む、調製方法、に関する。ここで、工程(b)と(c)とで用いるタンパク質は同じ種類であっても異なる種類であってもよい。
前記軽鎖可変領域は、配列表の配列番号1の137位〜248位で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドであり得る。
本発明の重鎖可変領域−リンカー配列−軽鎖可変領域は、限定はされないが、特に好ましくは、配列表の配列番号2で表わされる核酸配列でコードされるポリペプチドである。
前記本発明の検出方法においては、検出対象物に応じた前処理をして試料とした後、直接競合阻害ELISAの工程または間接競合阻害ELISAに供することができる。ほとんどの試料の場合、モルヒネが抽出できる全ての方法を用いることができる。モルヒネを含む試料は、そのままあるいは緩衝液で希釈後、調製できる。
薬物(モルヒネ・ヘロイン・コデイン・コカイン・ケタミン)のBSA複合体体及びサイログロブリン(Tg)複合体体は以下の3つの方法を用いて作製した。
実施例1で得られたすべてのハプテン−タンパク質複合体体を別々にBALB/cCrlCrlj、メス、7週令に免疫を行った。初回免疫にはAdjuvant, Complete(Freund)(DIFCO)とハプテン−タンパク質複合体体との混合物を腹腔に投与、2回目以降の免疫にはAdjuvant, Incomplete(Freund)(DIFCO)とハプテン−タンパク質複合体体との混合物を腹腔に投与した。おおよそ2週間から3週間の間隔で抗体価が十分に上昇するまで免疫を行った。抗体価はELISAにより測定した。
次に、マウスscFv libraryの構築(scFv :single chain variable fragment)を行った。
scFvを提示しているファージをレスキューするため、おおよそ109-1010 cfuのグリセロールライブラリストックを10mlの2TYAGに感染させ37℃で培養した。OD600=0.4-0.5になるまで培養し、1011 cfuのM13 KO7 helper phageを感染させた。感染後、2TYAK(kanamycin 0.005%)培地に交換し一晩培養した。
次に、パンニングを行った。1μgのモルヒネ−Tg/0.1M NaHCO3をイムノチューブに4℃で一晩反応させて固定化した。次いで、1.0%ブロックエースで2時間ブロッキングした後、0.1%Tween20-PBS(以下PBSTと省略する)で3回洗浄した。これに、マウス由来の抗体ファージライブラリー(1本鎖可変領域断片(scFv)提示ファージ液)を0.55mL(1.2×1012cfu/1%Tg, 1%BSA溶液)加え、反応させた。
前述のモルヒネ−Tg固定化プレートを用いてパンニングを計3回行った。2回目、3回目のパンニング後に、2TYAGプレートから任意にクローンを抽出し、scFvの発現の確認及びモルヒネ−Tgに対するELISAによる特異性の確認(スクリーニング)と塩基配列の解析とを行った。パンニングの回数とともにモルヒネ−Tgに反応するscFv提示ファージが濃縮されていることが示された。
分離したクローンをスクリーニングするためのELISAは、モルヒネ−TgをELISAプレートに固定化して行った。具体的には、50ng/50μlのモルヒネ−Tg、もしくはTgをELISAプレート(Nunc)に入れ、室温で一晩静置し、固定化した。固定化プレートは、1.0%ブロックエース溶液200μL/wellをELISAプレートに入れ、室温で2時間静置し、ブロッキングを行った。次に、このELISAプレートに、scFv提示ファージを含む試料液50μL/wellを入れて反応させた後、試料液を捨て洗浄液で5回洗った。続いて、この固定化されたscFvファージに、50μlの1:1000希釈した抗M13モノクローナル抗体を加え1時間反応させ、50μlの1:1000希釈したアルカリフォスファターゼ(AP)標識した抗マウスIgG抗体(CALTAG lab)を二次抗体として30分反応させた。この反応液を洗浄液で5回洗った後、発色基質液(1g/mL p-nitrophenyl phosphate(Wako)、10%ジエタノールアミン(Wako)を含む溶液)を50μL/well入れ、遮光し、室温で発色させた。EnSpire 2300 Multilabel Readerト(PerkinElmer)で405nmの吸光度を測定した結果、6個のモルヒネ−Tgに特異的なクローンが得られた。
モルヒネ−Tgに反応するscFvクローンのファージを大腸菌HB1251に感染させた。SOBAG-Nプレート(Bacto Tryptone 2%、Bacto Yeast Extract 0.5%、NaCl 0.05%、KCl 終濃度2.5mM、MgCl2 終濃度10mM、Glucose 2.0%、Ampicillin 0.01%、NaI 終濃度125μg/ml、Agar 1.5% )に播きこれらの大腸菌を30℃で一晩培養後、シングルコロニーを2TYAG培地で30℃、一晩前培養した。この前培養の一部を2TYAGに移植し、37℃でOD600=0.4-0.5になるまで培養した。これを遠心後2TYAI培地(終濃度1mM IPTG、0.01%のアンピシリン)に交換して更に12時間培養してscFvの発現誘導を行った。培養終了後、遠心を行い培養上清画分と菌体画分とをそれぞれ回収した。菌体画分は1mM EDTAを含むPBSに懸濁して氷中に30分菌体を放置した。次いで15000×rpmで10分間遠心し、上清を回収して0.45μmフィルターろ過後、ペリプラズム画分からscFvを精製するための出発材料とした。さらに沈殿物に対してはPBSで懸濁後5分間ボイルし15000Xrpm, 5分遠心した後の上清を細胞質画分とした。それぞれの画分の発現量をドットブロットにて解析した。ドットブロットは培養上清画分、ペリプラズム画分、細胞質画分をImmobilon-P(Millipore Corporation)にブロッティングし、1%ブロックエースでブロッキング後、5μg/mlの抗E-tag モノクローナル抗体(ABNOVA)、二次抗体として1:2000希釈のペルオキシダーゼ(HRP)標識ヒツジポリクローナル抗マウスIgG(H+L)抗体を反応させた。検出試薬はECL(NACALAI TESQUE.INC)を使用し、LAS1000(FUJIFILM)で検出した。その結果解析した全てのクローンにおいてscFvはペリプラズム画分に多く発現していたことを確認した。
次に、単離したクローンのscFv遺伝子のVH鎖及びVL鎖遺伝子のDNA塩基配列をBigDye Terminator v3.1/1.1 Cycle Sequencing kit (Applied Biosystems)を用いて決定した。ELISA及び配列分析の結果、単離したクローンは全て同一のクローンであった。遺伝子配列とアミノ酸配列を示す(配列表の配列番号2および1)。
scFvの精製
このようにして調製した精製のためのクローンを、Ni−column(GE Healthcare)を用いて、常法に従って精製した。溶出は20mM Na-phosphate, 500mM NaCl, 500mM imidazole, pH7.4で行った。PBSで透析後、SDS-PAGEで確認を行った。ペリプラズム画分・培養上清画分・培養上清画分のうち透析中に析出した画分のサンプルを用いた。SDS-PAGEは15%ゲル、20mM、1時間、非還元条件のもとで行った。染色はSimplyBlue SafeStain(Invitrogen)を使用した。
精製scFvのモルヒネ−Tgに対する結合性
次に、精製scFvのモルヒネ−Tgに対する結合性をELISA法で測定した。50ng/50μlのモルヒネ−Tg、コントロールとしてケタミン−Tg、コカイン−Tg、ヘロイン−Tg、コデイン−Tg、Tgを固相化した96穴プレート(NUNC. MAXISORP)に、1%ブロックエースで室温で2時間ブロッキング後、精製scFvを50μL加えて室温で2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、50μlの1:1000希釈した抗E-tagポリクローナル抗体を室温で1時間反応させ、二次抗体として50μlの1:1000希釈したアルカリフォスファターゼ(AP)標識ヒツジポリクローナル抗ラビットIgGを室温で30分反応させた。
PBSTで5回洗浄後、発色基質液(1g/mL p-nitrophenyl phosphate(Wako)、10%ジエタノールアミン(Wako)を含む溶液)を50μL/well入れ、遮光し、室温で発色させた。EnSpire 2300 Multilabel Readerト(PerkinElmer)で405nmの吸光度を測定した結果、ペリプラズム画分の透析前・透析後(EDTA除去のため)のサンプル、精製済みのサンプル、または培養上清から精製した画分、いずれにおいてもモルヒネ−Tgに対して高い反応性を持っていた。またその他のケタミン、コカイン、ヘロイン、コデイン、サイログロブリンに対しては低い活性であった(図1)。図1において、pur/peri_5μlは、ペリプラズム画分から精製したサンプル5μlを表わし、sup/pur_5μlは、培養上清画分から精製したサンプル5μlを表わし、(-)dialysis_50μlは、ペリプラズム画分透析前のサンプル50μlを表わし、(+)dialysis_50μlは、ペリプラズム画分透析後のサンプル50μlを表わし、MMTは、モルヒネ−Tgのことであり、K-Tは、ケタミン−Tgであり、Cc-Tは、コカイン−Tgであり、Cd-Tは、コデイン−Tgであり、Tgは、サイログロブリンである。図中の数字は実験上のサンプル通し番号を表わし、抗原−M−Tgは、モルヒネを出発原料として芳香環の炭素原子にリンカ−を結合させたものを示す。
50ng/50μlのモルヒネ−Tg、コントロールとしてTgを固相化した96穴プレート(NUNC. MAXISORP)に、1%ブロックエースで室温で2時間ブロッキング後、様々な濃度の精製scFvを50μL加えて室温で2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、scFvの場合は50μlの1:1000希釈した抗E-tagポリクローナル抗体を室温で1時間反応させ、二次抗体として50μlの1:1000希釈したペルオキシダーゼ(HRP)標識ヒツジポリクローナル抗ラビットIgGを室温で30分反応させた。PBSTで5回洗浄、100μlのo-phenylenediamine dihydrochloride(Sigma FAST)50set (sigma)を30分反応させ、50μlの2M (10%) H2SO4により反応を停止し、490nmで測定した。その結果、精製scFvは濃度依存的にモルヒネ−Tgに反応することが示された(図2)。
50ng/50μlのモルヒネ−Tg、コントロールとしてケタミン−Tg、コカイン−Tg、ヘロイン−Tg、コデイン−Tg、Tgを固相化した96穴プレート(NUNC. MA
XISORP)に、1%ブロックエースで室温で2時間ブロッキング後、様々な濃度の精製scFvを50μL加えて室温で2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、50μlの1:1000希釈した抗E-tagポリクローナル抗体を室温で1時間反応させ、二次抗体として50μlの1:1000希釈したペルオキシダーゼ(HRP)標識ヒツジポリクローナル抗ラビットIgGを室温で30分反応させた。PBSTで5回洗浄、100μlのo-phenylenediamine dihydrochloride(Sigma FAST)50set (sigma)を30分反応させ、50μlの2M (10%) H2SO4により反応を停止し、490nmで測定した。その結果、モルヒネ−Tg対してのみ精製scFvの濃度依存的は結合性が示された。コントロール薬物に対してはほとんど結合性を示さなかった(図3)。
様々な濃度のモルヒネ−Tgを固相化した96穴プレート(NUNC. MAXISORP)に、1%ブロックエースで室温で2時間ブロッキング後、3つの異なる一定濃度の精製scFvを50μL加えて室温で2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、50μlの1:1000希釈した抗E-tagポリクローナル抗体を室温で1時間反応させ、二次抗体として50μlの1:1000希釈したペルオキシダーゼ(HRP)標識ヒツジポリクローナル抗ラビットIgGを室温で30分反応させた。PBSTで5回洗浄、100μlのo-phenylenediamine dihydrochloride(Sigma FAST)50set (sigma)を30分反応させ、50μlの2M (10%) H2SO4により反応を停止し、490nmで測定した。その結果、精製scFvはモルヒネ−Tgの濃度依存的な結合性を示した(図4)。
50ng/50μlのモルヒネ−Tg、コントロールとしてケタミン−Tg、コカイン−Tg、ヘロイン−Tg、コデイン−Tg、BSA、Tgを固相化した96穴プレート(NUNC. MA
XISORP)に、1%ブロックエースで室温で2時間ブロッキング後、精製scFv、ハイブリドーマ法により作製した抗体、他社製品を50μL加えて室温で2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、50μlの1:1000希釈した抗E-tagポリクローナル抗体を室温で1時間反応させ、二次抗体として50μlの1:1000希釈したペルオキシダーゼ(HRP)標識ヒツジポリクローナル抗ラビットIgGを室温で30分反応させた。anti-Morphine Ab・product Bの場合は50μlのHRP-anti mouse IgG(Santa Cruz)を室温で30分反応させた。PBSTで5回洗浄、100μlのo-phenylenediamine dihydrochloride(Sigma FAST)50set (sigma)を30分反応させ、50μlの2M (10%) H2SO4により反応を停止し、490nmで測定した。その結果、scFvのみがモルヒネ−Tgに特異的に反応することが示された(図5)。図5において、略語は、図1と同じである。Newは、追加合成した抗原を指し、性能は、newと付していない物質と同じである。
CM5 sensor chip(Amersham Biosciences)にモルヒネ−Tgを固定化した。62.5ng/ml、125ng/ml、250ng/ml、500ng/ml、1000ng/mlの精製scFvを反応させ、解析を行った。その結果、ka値=3.72X105(1/Ms)、kd値=5.84X10-4(1/s)、Kd値=1.47X10-9(M)となった。
PyMolにより分子モデリングを行った結果、抗モルヒネscFvは長いCDR H3領域により、低分子化合物に対する抗体の構造的な特徴であるキャビティを形成することが予測された。(CDR H1: cyan, CDR H2: magenta, CDR H3: yellow, CDR L1: blue, CDR L2: Red, CDR L3: orange )
Claims (14)
- モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ抗体分子であって、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、一本鎖抗体(scFv)、2量体化可変領域(V領域)断片(Diabody)、ジスルフィド安定化V領域断片(dsFv)および相補性決定領域(CDR)を含むペプチドから選ばれる抗体断片、および完全型抗体からなる群より選択され、
該重鎖可変領域において、a)CDR-H1として配列表の配列番号1の31位から35位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-H2として配列番号1の50位から65位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-H3として配列番号1の98位から110位に記載のアミノ酸配列を有する、抗モルヒネ抗体。 - モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ抗体分子であって、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、一本鎖抗体(scFv)、2量体化可変領域(V領域)断片(Diabody)、ジスルフィド安定化V領域断片(dsFv)および相補性決定領域(CDR)を含むペプチドから選ばれる抗体断片、および完全型抗体からなる群より選択され、
該軽鎖可変領域において、a)CDR-L1として配列表の配列番号1の160位から174位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-L2として配列番号1の190位から196位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-L3として配列番号1の229位から237位に記載のアミノ酸配列を有する、抗モルヒネ抗体。 - モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ抗体分子であって、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、一本鎖抗体(scFv)、2量体化可変領域(V領域)断片(Diabody)、ジスルフィド安定化V領域断片(dsFv)および相補性決定領域(CDR)を含むペプチドから選ばれる抗体断片、および完全型抗体からなる群より選択され、
該重鎖可変領域において、a)CDR-H1として配列表の配列番号1の31位から35位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-H2として配列番号1の50位から65位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-H3として配列番号1の98位から110位に記載のアミノ酸配列を有し、
該軽鎖可変領域において、a)CDR-L1として配列表の配列番号1の160位から174位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-L2として配列番号1の190位から196位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-L3として配列番号1の229位から237位に記載のアミノ酸配列を有する、請求項1または2記載の抗モルヒネ抗体。 - 前記重鎖可変領域が、配列表の配列番号の1位〜121位で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドであり、
前記軽鎖可変領域が、配列表の配列番号1の137位〜248位で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドである、
請求項1から3までのいずれか1項記載の抗モルヒネ抗体。 - 重鎖可変領域−リンカー配列−軽鎖可変領域を含む一本鎖抗体である、請求項1から4までのいずれか1項記載の抗モルヒネ一本鎖抗体。
- 配列表の配列番号1で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドを含む請求項5項記載の抗モルヒネ一本鎖抗体。
- 請求項5または6記載の抗モルヒネ一本鎖抗体を提示することができるバクテリオファージを保持し、受領番号FERM ABP-11378である大腸菌。
- 請求項7の大腸菌が保持するバクテリオファージにより産生される抗モルヒネ一本鎖抗体。
- モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い抗体様分子であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域において、a)CDR-H1として配列表の配列番号1の31位から35位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-H2として配列番号1の50位から65位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-H3として配列番号1の98位から110位に記載のアミノ酸配列を有し、該軽鎖可変領域において、a)CDR-L1として配列表の配列番号1の160位から174位に記載のアミノ酸配列、b)CDR-L2として配列番号1の190位から196位に記載のアミノ酸配列、およびc)CDR-L3として配列番号1の229位から237位に記載のアミノ酸配列を有し、
さらに、別の機能性ペプチドに連結している、抗体様分子。 - 前記重鎖可変領域が、配列表の配列番号1の1位〜121位で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドであり、
前記軽鎖可変領域が、配列表の配列番号1の137位〜248位で表わされるポリペプチド及びこの配列中の1ないし数個のアミノ酸が、置換、欠失、付加、挿入されたポリペプチド、からなる群から選択されるポリペプチドである、
請求項9記載の抗体様分子。 - モルヒネを特異的に認識し、かつヘロイン、コデイン、コカイン、ケタミンへの認識能が低い、重鎖可変領域−リンカー配列−軽鎖可変領域を含む、抗モルヒネ一本鎖抗体。
- 請求項1〜6および8〜11のいずれか1項記載の抗モルヒネ抗体または抗体様分子を含んでなるモルヒネ測定キット。
- 請求項1〜6および8〜11のいずれか1項記載の抗モルヒネ抗体または抗体様分子を試料に接触させる工程を含むモルヒネの測定方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の抗モルヒネ抗体を調製する方法であって、
(a)動物をモルヒネと特定のタンパク質との複合体で免疫する工程;
(b)該免疫動物の脾臓細胞から、該特定のタンパク質とは別のタンパク質とモルヒネとの複合体を用いて、該複合体との結合により目的の細胞を選別し、ファージ抗体ライブラリを作成する工程;および
(c)工程(a)の特定のタンパク質とは別のタンパク質とモルヒネとの複合体を用いて、該複合体との結合により、該ファージ抗体ライブラリから目的の抗体を有するファージを選別する工程、を含む、調製方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2702002C1 (ru) * | 2018-07-23 | 2019-10-03 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства | Моноклональное антитело 3к11 к производным морфина |
CN117659201A (zh) * | 2022-08-23 | 2024-03-08 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗可卡因抗体或其功能性片段、检测可卡因的试剂和试剂盒 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0286794A (ja) * | 1988-09-21 | 1990-03-27 | Ube Ind Ltd | モルヒネに対するモノクローナル抗体およびそのモノクローナル抗体の製法 |
-
2011
- 2011-05-06 JP JP2011103593A patent/JP2012232948A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0286794A (ja) * | 1988-09-21 | 1990-03-27 | Ube Ind Ltd | モルヒネに対するモノクローナル抗体およびそのモノクローナル抗体の製法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6015016682; Hybridoma (2000) Vol.19, No.5, p.413-417 * |
JPN6015016683; J. Immunol. Methods (2003) Vol.276, pp.151-161 * |
JPN6015016684; Molecular Immunology (1988) Vol.25, No.9, pp.937-943 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2702002C1 (ru) * | 2018-07-23 | 2019-10-03 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства | Моноклональное антитело 3к11 к производным морфина |
CN117659201A (zh) * | 2022-08-23 | 2024-03-08 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗可卡因抗体或其功能性片段、检测可卡因的试剂和试剂盒 |
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