JP2012192206A - 創傷治療組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】1つの観点において、本発明は、支持マトリックス、例えばフィブリン内部に生きた細胞、例えば線維芽細胞を含む創傷治療組成物であって、該創傷治療組成物内で、該細胞は創傷治療表現型を有し、そして該組成物は単層状であり、該創傷治療表現型の発生を可能にするために最大約8日間にわたってインキュベートされている、創傷治療組成物を提供する。本発明の組成物及び方法は、特に創傷治癒、具体的には、治癒が遅い又は治癒に対して耐性がある慢性開放性損傷の治癒のプロセスを助けるのに有用である。
【選択図】なし
Description
細胞は好ましくは、哺乳動物、例えばヒトのものである。
重合剤及び/又は該重合剤による重合によってマトリックスになることが可能なモノマーを含む溶液中に生きた細胞を懸濁し;
重合剤でモノマーを重合することにより、細胞を含む単層状支持マトリックスを形成し;そして、
細胞内の創傷治療表現型の発生を可能にする条件(例えば温度条件及び時間条件のような、本明細書中に記載された条件)下でマトリックスをインキュベートし、これにより、創傷治療組成物を形成する
工程を含む、創傷治療組成物を製造する方法が提供される。
創傷治療製品の迅速な製造、並びに、細胞及びタンパク質成分を比較的高い濃度で含有することによる迅速な創傷治療の両方を最適化するように、本発明の第1実施態様を構成する。
第1実施態様において、マトリックス・タンパク質は、商業的フィブリノゲン製品Tisseel(登録商標)(Baxter)に由来するフィブリンである。Tisseelは戻すと、好都合な2種の成分系を提供する。これらの成分系に細胞を添加することができる。マトリックスの成分を表1に要約する。なお、Tisseel(登録商標)はまた因子XIII、並びに血漿フィブロネクチン及びプラスミノゲンを含有する。
新生児包皮組織に由来する細胞の培養により、ヒト真皮線維芽細胞を得た。GMP{優良製造規則(Good Manufacturing Practice)}下で、コラゲナーゼ消化によって線維芽細胞を分離し、日常的な試験室の仕事に従って培養及び連続継代を行うことにより、これらの細胞を増殖させて、マスター細胞バンク(MCB)を確立した。ヒト及び動物に由来するウィルス、細菌、マイコプラズマ及び菌類のパネルに対して、そして発癌性に関して、GLP(Good Manufacturing Practice)によって認可された設備により、MCBをスクリーニングし、そして汚染がないことを見極めた。次いでいくつかの作業細胞バンク(WCB)を、製品の製造に関して立証し、再スクリーニングし、そして標準的な手順に従って細胞のストックを冷凍した。
図1に概略を示し、下記に要約するように、製造者の指示に従って、Tisseel(登録商標)トロンビン粉末を塩化カルシウム溶液中に戻した。
トロンビン:50 IU/ml (又は全部で337.5 IU)
塩化カルシウム:8 μモル/ml(又は全部で54 μモル)
を含有する(「全部で」は6.75 ml中の量を意味する)。
作業フィブリノゲン・細胞懸濁液混合物(総容積6.75 ml)は、補足済L-15中:
Tisseel:19 mg/ml(又は全部で128.25 mg)
Aprotinin:600 KIU/ml(又は全部で4050 KIU)
細胞:1.2 x 106個の細胞/ml(P-1500の場合、全部で8.1 x 106個の細胞);又は
0.4 x 106個の細胞/ml(P-500の場合、全部で2.7 x 106個の細胞)
を含有する(「全部で」は6.75 ml中の量を意味する)。
作業トロンビン溶液(6.75 ml)及びTisseel(登録商標)フィブリノゲン/細胞懸濁液混合物(6.75 ml)を、Duplojet ミキサー・ユニットによって合体し、そして好適な前コートされた注型用容器(好都合には無菌ペトリ皿など)内に、16Gニードル又は同等物によってローディングした。注型用皿には血清含有培地又はアルブミンを前コートすることにより、ゲルの付着を防止することが有用である。ゲルは数分以内に硬化した。次いでゲルを20 mlの培地(表2)内で浴処理し、そして注型用皿に蓋を被せた。硬化されたゲルを16〜24時間にわたって37℃でインキュベートすることにより、細胞の発育(又は成熟)を可能にした。
発育(又は成熟)後、硬化されたゲルをこれらの注型用容器から取り出し、そして前照射された無菌フォイル・パウチ内に入れ、無菌回転シール・バッグ内部に貯蔵した。10 mlの無血清培地(表2の通り、ウシ胎仔血清を含まない)を、シール前に各パウチに添加した。シールされたユニットの貯蔵寿命は4℃で最大28日間である。
或る特定の用途の場合、より低いタンパク質濃度を用いることが可能である。その主な利点は、製造コストの軽減である。それというのも血清由来のタンパク質及び多くのプロテアーゼ・インヒビター、例えばアプロチニンが高価であるからである。好ましい実施態様の場合、硬化された生成物中のフィブリンの濃度は、7 mg/ml未満に低減される。実際には、3.〜4.0 mg/mlが効果的であることが見いだされる。
この実施態様において、マトリックス・タンパク質は、アプロチニンの代わりにトラネキサム酸を使用する、商業的なフィブリン・シーラントTisseel(登録商標)を起源とするフィブリンである。マトリックスの主成分を表3に要約する。なお、別の商業的に利用可能なフィブリン・シーラントQuixilを使用して、同じマトリックス組成物を得ることもできる。しかし、Quixilはすでに外生的トラネキサム酸を含有しているので、その添加量は低減されるべきである。
局所創傷治療組成物の成功に関与する主要なファクターは、無菌作業条件下で気泡又は皺なしに密な接触が確立されるような、創傷表面への組成物の正確な塗布が容易に行われることである。創傷治療組成物は脆弱である場合があり、取り扱いは最小限に保たれるべきである。本発明の組成物は好ましくは、塗布を有意に支援して容易にするようにパッケージングされる。加えて、組成物は冷凍されるのではなく、冷蔵状態で出荷・貯蔵されるので、使用前の綿密な解凍処置は必要とはならない。
Claims (36)
- 支持マトリックス内部に生きた細胞を含む創傷治療組成物であって、該創傷治療組成物内で、該細胞は創傷治療表現型を有し、そして該組成物は単層状であり、該創傷治療表現型の発生を可能にするために最大約8日間にわたってインキュベートされる、前記組成物。
- 最大約96時間、例えば最大72時間、48時間、25時間又は24時間、好ましくは16時間〜24時間にわたってインキュベートされる、請求項1に記載の創傷治療組成物。
- 約37℃の温度でインキュベートされる、請求項1又は2に記載の創傷治療組成物。
- インキュベーション後に、最大約40日間、好ましくは最大19日間、より好ましくは約7〜14日間、又は約7〜11日間にわたって、2℃〜8℃、例えば3℃〜5℃、好ましくは約4℃の温度で、該創傷治療表現型を保持しながら貯蔵される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞が哺乳動物、例えばヒトのものである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞は、実質的に線維芽細胞であり、例えば90〜100%、好ましくは95〜99.5%、より好ましくは97.5%〜99%が線維芽細胞である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記線維芽細胞が真皮線維芽細胞、好ましくはヒトの真皮線維芽細胞である、請求項6に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞がケラチノサイトを実質的に除外する、請求項1〜7のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞が活性合成型であるか又は急速に活性合成型になることができる、請求項1〜8のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞が増殖性ではなく、且つ/又は老化期にはない、請求項1〜9のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞がマトリックス内部に、好ましくは該マトリックス内部にほぼ均一に懸濁されている、請求項1〜10のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記マトリックスがタンパク質型であり、例えば約3〜12 mg/mlのタンパク質濃度を有する、請求項1〜11のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記マトリックスがフィブリン・マトリックスである、請求項1〜12のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記フィブリンの濃度が、3〜12 mg/ml、例えば7〜12 mg/ml又は3〜5 mg/mlである、請求項12に記載の創傷治療組成物。
- 前記フィブリン・マトリックスが、フィブリノゲンのトロンビン媒介型重合によって形成される、請求項13又は14に記載の創傷治療組成物。
- 前記マトリックスが非発熱性及び/又は無菌性である、請求項1〜15のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- プロテアーゼ・インヒビター、例えばアプロチニン及び/又はトラネキサム酸を含む、請求項1〜16のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 高タンパク質環境内でインキュベートされる、請求項1〜17のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 厚さが約8 mm以下、好ましくは約5 mm以下である、請求項1〜18のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 1 mm2当たり約450〜2500個の細胞、例えば1 mm2当たり約750〜2000個の細胞、好ましくは1 mm2当たり約900〜1700個の細胞、例えば1 mm2当たり約1500個の細胞、又は例えば1 mm2当たり約450〜550個の細胞、及び好ましくは1 mm2当たり約500個の細胞を含む、請求項1〜19のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記細胞が、フィブリノゲンのトロンビン媒介型重合によって形成される無菌の非発熱性支持マトリックス内部のヒト真皮線維芽細胞であり、創傷治療組成物が約37℃で16〜24時間にわたってインキュベートされる、請求項1に記載の創傷治療組成物。
- 前記マトリックスが固形又は半固形である、請求項1〜21のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 創傷治療組成物が、該組成物を輸送し(例えば該組成物の貯蔵中)、及び/又は皮膚表面に該組成物を局所的に塗布するのに適した容器内にパッケージングされている、請求項1〜22のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 前記容器は、創傷治療組成物のための格納手段を提供するために周囲をシールされた2枚の不透性フレキシブル材料シートから成るフレキシブルなパウチを含み、該パウチは第1の内面を含み、該第1の内面には、該組成物が、該組成物と該パウチの第2の内面との付着力よりも高いレベルの付着力で、しかし、該組成物と該皮膚表面との付着力よりは低いレベルの付着力で付着し、これにより使用中、該パウチは、該シートを互いに引き離すことにより開くことができ、そして、該組成物に塗布前に他の手段によって直接に触れる更なる必要なしに、該組成物を好都合に操作して該皮膚表面に直接に塗布することができる、請求項23に記載の創傷治療組成物。
- 前記容器が、Oliver (登録商標) Products Company “Solvent Resistant Peelable Pouching Material(耐溶剤性の剥離可能なパウチ材料)”(製品番号Q15/48BF1)である、請求項23又は24に記載の創傷治療組成物。
- 医薬として使用するための、請求項1〜25のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 皮膚損傷の治療における医薬として使用するための、請求項1〜25のいずれか1項に記載の創傷治療組成物。
- 皮膚損傷、例えば静脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、床擦れ、火傷、又は医原性擦過傷への局所塗布のための、請求項26又は27に記載の創傷治療組成物。
- 請求項1〜28のいずれか1項に記載の創傷治療組成物を製造する方法であって、以下:
重合剤及び/又は該重合剤による重合によってマトリックスになることが可能なモノマーを含む溶液中に生きた細胞を懸濁するステップ;
該重合剤で該モノマーを重合することにより、該細胞を含む単層状支持マトリックスを形成するステップ;及び
細胞内の創傷治療表現型の発生を可能にする条件下で該マトリックスをインキュベートし、これにより、該創傷治療組成物を形成するステップ
を含む、前記方法。 - モノマー及び重合剤の両方が重合を生じさせるのに十分な濃度で存在するように、該マトリックスは、モノマー又は重合剤を該溶液に添加することにより形成される、請求項29に記載の創傷治療組成物。
- 請求項1〜28のいずれか1項に記載の創傷治療組成物を製造する方法であって、重合剤で重合可能なモノマーを重合することにより単層状支持マトリックスを形成し、生きた細胞を該支持マトリックス中に投入し、そして、細胞内の創傷治療表現型の発生を可能にする条件下で該マトリックスをインキュベートし、これにより該創傷治療表現型を形成するステップを含む、前記方法。
- 前記モノマーがフィブリノゲンであり、かつ前記重合剤がトロンビンである、請求項29〜31のいずれか1項に記載の方法。
- 前記重合が型内で生じる、請求項29〜32のいずれか1項に記載の方法。
- 創傷治療組成物を貯蔵するため、及び/又は該組成物を輸送するため、及び/又は患者の皮膚表面に該組成物を局所的に塗布するための容器内に該成物をパッケージングするステップを更に含む、請求項29〜32のいずれか1項に記載の方法。
- 皮膚損傷の治療のための、請求項1〜28のいずれか1項に記載の創傷治療組成物の製造における、請求項1〜28のいずれか1項に記載の生きた細胞の使用。
- 皮膚損傷の患者を治療する方法であって、請求項1〜28のいずれか1項に記載の創傷治療組成物を、該皮膚損傷に局所的に塗布することを含む、前記方法。
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