JP2012116756A - 新規フェノール性２量体化合物 - Google Patents

Abstract

【課題】新規フェノール性２量体化合物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤及び毛髪黒化剤、食品、医薬品、医薬部外品及び化粧品の提供。
【解決手段】式（１）

で表される新規フェノール性２量体化合物。カフェ酸とフェルラ酸を金属塩存在下で加熱処理することにより生成することができる。
【選択図】なし

Description

本発明は、リパーゼ阻害活性を有し、さらにチロシナーゼの基質となる新規フェノール性２量体化合物及びその製造方法、前記新規フェノール性２量体化合物を含むリパーゼ阻害剤、抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤、毛髪黒化剤、食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品に関するものである。

カフェ酸とフェルラ酸は共に植物の二次代謝産物の一つであり、例えば樹木の主成分であるリグニンやリグナンの前駆体となり、天然界に比較的多く存在する成分である。カフェ酸は多くの果物の果実や果皮に含まれており、またクロロゲン酸としてコーヒー豆等に、ロズマリン酸としてシソ科の植物に前駆体の形で多く含まれている。一方、フェルラ酸は米糠やジャガイモの皮層部に多く含まれている。これらは全て食経験があり人に対する安全性も高い成分である。

カフェ酸の生理機能に関連した先行技術としては、例えば、カフェ酸を有効成分とする自律神経機能向上剤（特許文献１）、カフェ酸を有効成分とする血管内皮機能改善剤（特許文献２）、カフェ酸を有効成分とする血液流動性改善剤（特許文献３）、カフェ酸を有効成分とする大脳疲労回復剤（特許文献４）、カフェ酸を有効成分とする二次胆汁酸低下剤（特許文献５）が知られている。また、フェルラ酸の生理機能に関連した先行技術としては、例えば、フェルラ酸を有効成分とする細胞分化促進剤（特許文献６）、フェルラ酸を有効成分とする美白用皮膚外用薬（特許文献７）、フェルラ酸を有効成分とする酸化防止剤（特許文献８）、フェルラ酸とニコチン酸アミドからなる魚卵の発色助剤（特許文献９）、フェルラ酸を有効成分とする抗菌剤（特許文献１０）、フェルラ酸のアルツハイマー病予防効果（非特許文献１）が知られている。さらに、カフェ酸とフェルラ酸とを併用した先行技術としては、例えば、カフェ酸とフェルラ酸からなる高血圧予防・治療剤（特許文献１１）が知られている。

また、カフェ酸誘導体に関連した先行技術としては、例えば、カフェ酸アミド誘導体を有効成分とする化粧料用又は皮膚外用剤用組成物（特許文献１２）、カフェ酸の糖転移物を有効成分とする抗微生物剤（特許文献１３）、カフェ酸誘導体を有効成分とする神経突起伸長剤（特許文献１４）、カフェ酸のセロトニンアミドやその配糖体を有効成分とする血行動態改善剤（特許文献１５）、カフェオイルキナ酸を有効成分とするアルツハイマー病予防又は治療剤（特許文献１６）、プロポリス中の微量成分であるカフェ酸フェネチルエステルを効率的に製造する方法（特許文献１７）、桂皮酸誘導体の酵素合成法（特許文献１８）、２−カフェ酸シクロヘキサエステル等のカフェ酸誘導体を有効成分とする抗がん剤（特許文献１９）、カフェ酸等を原料の一つとして酵素合成により得た新規ポリフェノール化合物（特許文献２０）が知られている。また、フェルラ酸誘導体に関連した先行技術としては、例えば、フェルラ酸エステル誘導体を有効成分とする紫外線吸収剤（特許文献２１）、フィトステロール類のフェルラ酸エステルを有効成分とする皮膚外用薬（特許文献２２）が知られている。

また、カフェ酸、フェルラ酸、それらの誘導体は、優れた有用性を示すものが多いことから、原料やリード化合物としてのこれらを効率的に製造する技術開示もなされている。カフェ酸の製造方法の例としては、コーヒー粕から製造する方法（特許文献２３）、ゴボウ葉からの製造方法（特許文献２４）、甘しょ焼酎蒸留粕からの製造方法（特許文献２５）等が知られている。フェルラ酸の製造方法の例としては、バニリンとマロン酸の縮合反応による製造（非特許文献２）、米糠からの製造方法（特許文献２６）、オイゲノールを原料とした菌体での製造法（特許文献２７）、コニフェリルアルデヒドからの酵素での製造法（特許文献２８）等が知られている。

以上のように、原料としての、カフェ酸、フェルラ酸及びそれらの誘導体や、これらの化合物の製造方法は多数提案されているが、カフェ酸、フェルラ酸及びそれらの誘導体を用いた更なる新規素材の開発や素材の更なる用途拡大が望まれている。

特許第４０７７１４９号公報 特開２００３−２６１４４４号公報 特開２００４−１６８７４９号公報 特開２００７−２９７３０４号公報 特開２００９−２２７６０９号公報 特開平５−３１０５２６号公報 特開平６−２５６１３７号公報 特開平９−２２１６６７号公報 特開２０００−３２５０４９号公報 特開２０００−２４７９００号公報 特許第３５４８１０２号公報 特許第３９３４９３７号公報 特開２００４−３１５３８６号公報 特開２００７−２３０９４６号公報 国際公開第２００７／０３２５５１号 国際公開第２００７／０９１６１３号 特開２０１０−１５８２２３号公報 特開２００９−２０７４９２号公報 特開２０１０−１８０１６７号公報 国際公開第２０１０／０３８８４２号 特開２００３−１２８６３２号公報 特開平８−８１３５２号公報 特開２００９−２０１４７３号公報 特許第４３５５７９７号公報 特許第４３３６７４６号公報 特公平７−７８０３２号公報 特許平９−１５４５９１号公報 特許平１０−１５５４９６号公報

Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、 １３３、 ８９−９６（２００１） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、 ７４、 ５３４６―５３４８（１９５２）

本発明者らは、前記の状況を鑑みて、新規な生理活性を有するカフェ酸、フェルラ酸の関連化合物の探索と、その製造方法を確立すべく鋭意検討した結果、驚くべきことにカフェ酸とフェルラ酸とを金属塩存在下で加熱処理することのみで、原料であるカフェ酸及びフェルラ酸には認められない優れたリパーゼ阻害活性を有し、さらにチロシナーゼの基質となりメラニン様物質に変換される新規化合物を生成させることを初めて見出し、本発明を完成するに至った。

したがって、本発明は、極めて優れたリパーゼ阻害活性を有し、さらにチロシナーゼの基質となりメラニン様物質に変換される新規フェノール性２量体化合物を提供し、さらにこれを効率よく、安全に生成する方法を提供することを目的とする。
また、本発明は、前記新規フェノール性２量体化合物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤、毛髪黒化剤、さらには前記式（１）で示した新規フェノール性２量体化合物を含有する食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品を提供することを目的とする。

本発明の要旨は、
〔１〕下記式（１）：

で表される新規フェノール性２量体化合物又はその薬学的に許容可能な塩、
〔２〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有するリパーゼ阻害剤、
〔３〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗肥満剤、
〔４〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する皮膚疾患治療剤、
〔５〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする体臭防止剤、
〔６〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群を含有することを特徴とするチロシナーゼ基質、
〔７〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするメラニン様物質生成促進剤、
〔８〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする毛髪黒化剤、
〔９〕前記〔１〕記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品、
〔１０〕カフェ酸とフェルラ酸とを金属塩存在下で加熱処理することにより目的の化合物を生成させることを特徴とする、式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物の製造方法
に関する。

本発明により、前記のように生理活性に優れた新規フェノール性２量体化合物及びその製造方法を提供することができる。また、本発明により原料のカフェ酸及びフェルラ酸が持たないリパーゼ阻害活性を有する化合物を製造することができることから優れた抗肥満剤、皮膚疾患治療剤及び体臭防止剤を提供することができる。さらに、原料のカフェ酸及びフェルラ酸よりも最適なチロシナーゼの基質となることから優れたメラニン様物質生成促進剤や毛髪黒化剤を提供することができる。
本発明の新規フェノール性２量体化合物は、前記のような生理活性に優れることに加えて、安全性にも優れることから、食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品に配合することができる。

図１は、実施例１で行ったＨＰＬＣの分析結果を示す。上図が反応前、下図が反応後の結果であり、「Ａ」が新規フェノール性２量体化合物のピークを示す。

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明の新規フェノール性２量体化合物は、式（１）：

で表される構造式を有する。

また、本発明では、前記式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物は、薬学的に許容可能な塩でもよい。薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。

本発明の新規フェノール性２量体化合物は、カフェ酸とフェルラ酸とを金属塩存在下で加熱処理することで生成させることができる。

前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。

また、前記金属塩の混合物としては、例えば、ミネラルプレミックス（田辺製薬株式会社、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）のように金属塩を数種類含む物質が挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。

本発明の新規フェノール性２量体化合物は、カフェ酸とフェルラ酸以外の原料を用いて化学合成することも可能ではあるが、その場合には反応工程が複雑であり有害な試薬や工程を必要とする。また、不純物を除去するという安全性の観点から精製を徹底する必要もあり、工業的には不向きな方法である。これに対して、前記の本発明の新規フェノール性２量体化合物の製造方法は、安価で入手できるカフェ酸とフェルラ酸の混合液を金属塩存在下で加熱処理する工程を有するものであり、有害な試薬や、危険な工程を必要としない効率的で安全な製造方法である。

本発明の新規フェノール性２量体化合物の前駆体としてカフェ酸及びフェルラ酸が必要である。これらは、天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のものを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、その後の所望の反応が進み最終的に新規フェノール性２量体化合物が得られるなら、カフェ酸、フェルラ酸に加えて他の成分を含む混合物であってもよい。ただし、回収量の観点からは、カフェ酸及びフェルラ酸がそれぞれ５重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。このような原料としては、カフェ酸では、様々な果実やジュース、濃縮果汁又は破棄されることの多い果皮の抽出物、フェルラ酸では、米糠又は食品添加物としてのフェルラ酸、あるいは先行技術に示されるような微生物発酵によるカフェ酸又はフェルラ酸含有培養液や酵素反応後のカフェ酸又はフェルラ酸含有溶液等が挙げられる。

カフェ酸及びフェルラ酸の純品、あるいはカフェ酸とフェルラ酸とを含有する混合物を、適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであればカフェ酸及びフェルラ酸の溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混合液や、有機溶媒のみに溶解させればよい。水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類に特に制限はなく、カフェ酸及びフェルラ酸が十分に溶解すれば良い。望ましくは、メタノールやエタノールのみか、水とメタノール、水とエタノールの混合液を使用することが、安全性やコスト面から望ましい。前記溶媒としては、最終的な精製を十分に適用せずに食品に使用する場合には、安全性や法規面からエタノールや含水エタノールが望ましい。

本発明において、金属塩を含有したカフェ酸とフェルラ酸とを混合した溶液（以下、混合溶液という）を加熱する。所望の生成反応を効率的に進ませるために、加熱温度は９０℃以上が必要である。溶媒の沸点から考え、加圧加温が望ましい。開放容器に前記混合溶液を入れ高温で容器を加温する、密閉容器に前記混合溶液を入れ加温する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加温する等、少なくとも部分的に溶液温度が９０℃以上に達することが必要である。回収効率面から、溶液温度が均一に９０〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜３００分の加熱時間が望ましい。また、加熱反応は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。効率面から判断すればよい。

また、本発明では、前記混合溶液のｐＨは、９未満の範囲に調整することが好ましい。中でも、本発明では、前記混合溶液のｐＨが３．０〜６．５付近の範囲に調整することで安定して新規フェノール性２量体化合物又は薬学的に許容可能な塩を製造することができる。

前記混合溶液を加熱することにより、詳細な反応機構は明確ではないが、カフェ酸とフェルラ酸とが反応し、前記式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物を含有した混合物が得られる。安全な原料のみを用いた場合には、新規フェノール性２量体化合物を含有した混合物の状態でも使用することが可能である。例えば、天然由来のカフェ酸とフェルラ酸を含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルミックスやミネラルウォーターを加え、加熱反応させた場合には、新規フェノール性２量体化合物を含有した反応後の混合物を食品原料の一つとして使用することが可能である。

なお、前記加熱処理による前記式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物の生成反応の終了は、例えば、ＨＰＬＣによる成分分析により前記式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物の生成量を確認して判断すればよい。

風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記混合物から本発明の新規フェノール性２量体化合物を濃縮して濃度を高める、あるいは精製し純品を得ることができる。濃縮、精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等の溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出して濃縮できる。カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。最後に減圧乾燥や凍結乾燥により溶媒除去すると、粉末状の本発明の新規フェノール性２量体化合物の純品を得ることができる。

本発明の新規フェノール性２量体化合物は、後述のように、優れたリパーゼ阻害活性を有すると共に最適なチロシナーゼ基質となる。

従来から、体の脂肪組織及び種々の臓器に異常な脂肪沈着を来し、その結果起こる肥満、あるいは血清脂質が異常に高い症状を示す高脂血症は、高血圧、動脈硬化、糖尿病等の各種生活習慣病の発症に密接に関与していることがわかっている。例えば、ヒトが食べた食事中の脂肪は、膵臓のリパーゼで分解されて小腸から体内に吸収されるため、リパーゼ阻害剤を用いて、肥満を防止したり、高脂血症状を改善することが可能とされており、その相関性も確認されている（例えば、特許第３６８９０９９号公報）。

ニキビは、皮膚常在菌が産生するリパーゼによって皮脂から生成される遊離脂肪酸が原因となる皮膚疾患であり、ニキビの原因菌としてＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ（Ｐ．ａｃｎｅｓ）が知られている。現在市販されている洗顔料は、抗菌剤を含有することで皮膚常在菌の繁殖を抑え、ニキビを予防改善させるものが一般的である。しかし抗菌剤では、感染症等に対するバリア機能を有する皮膚常在菌も減少させてしまうことが問題となっている。リパーゼ阻害剤はこれらの問題を改善しつつ皮膚疾患を治療することが可能とされており、その相関性も確認されている（例えば、特許第３８２６６９８号公報）。

体臭は、皮脂や汗の成分を皮膚常在菌が産生するリパーゼが分解し、生じた低級脂肪酸が原因であることがわかっている。現在市販されている体臭防止剤は、抗菌剤を含有することで皮膚常在菌の繁殖を抑えるものが一般的である。しかし抗菌剤では、感染症に対するバリア機能を有する皮膚常在菌も減少させてしまうことが問題となっている。一方、リパーゼ阻害剤は低級脂肪酸の生成を抑えることで体臭を改善することが可能とされており、その相関性も確認されている（例えば、特開平９−１８７２９７号公報）。

白髪は老化、ストレス、遺伝によって起こる生理現象の一つであり、その原因としては、近年、色素幹細胞のＤＮＡ損傷が白髪の原因の一つになることが報告されている（Ｃｅｌｌ,１３７(６),１０８８−１０９９（２００９））が、その他にもチロシナーゼの減少、メラニン色素の毛髪への輸送障害等様々な説が考えられている。チロシナーゼ活性促進剤やメラニン産生促進剤等のメラニン合成形成促進剤は白髪を防止することが可能とされており、その相関性も確認されている（例えば、特開平９−１５１１３０号公報、特開２００５−６８１５９号公報）。

したがって、本発明の新規フェノール性２量体化合物又は薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤及び毛髪黒化剤として使用することができる。また、前記抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤及び毛髪黒化剤では、他の有効成分を含有しても良い。

また、本発明の新規フェノール性２量体化合物は、前記抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、体臭防止剤、チロシナーゼ基質、メラニン様物質生成促進剤及び毛髪黒化剤を目的として、液状、ペースト状、ゲル状、及び固形状の食品、医薬品、医薬部外品又は、化粧品等として使用することができる。

例えば、食品の場合には、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料又は素材と組み合わせて、また医薬品の場合には、担体、賦形剤、希釈剤、安定剤と組み合わせて、本発明の新規フェノール性２量体化合物を使用することができる。特に、本発明の新規フェノール性２量体化合物の有する生理活性分野を考慮すると、抗肥満効果によるメタボリックシンドローム等の生活習慣病の予防、さらにはチロシナーゼ基質となる性質によるメラニン様物質の生成促進や白髪予防及び改善において用いることが好ましい。また、加齢臭や腋臭症の予防や、ニキビ治療や予防、髪の黒化を目的とした美容分野における化粧品等で用いることが望ましい。

本発明の新規フェノール性２量体化合物が持つさらなる効果効能は、得られた生理活性データより類推できる範囲で使用できる。

本発明の新規フェノール性２量体化合物を医薬用途で使用する場合、例えば、本発明の新規フェノール性２量体化合物の摂取量は、所望の改善効果、治療効果又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。

本発明の新規フェノール性２量体化合物は、機能性食品、健康食品、健康志向食品等の食品に使用することができる。食品の形態としては、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子等、どのような形態でもよく、例えば、菓子類の中でも、その容量等から保存や携帯に優れた、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット等が挙げられるが、特に限定はない。

また、本発明の新規フェノール性２量体化合物を医薬品、医薬部外品又は食品として経口から投与又は摂取する場合には、常法に基づいて、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等としてもよい。錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。又は胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。

前記医薬部外品及び化粧品としては、ローション、乳液、クリーム、パック剤、仕上げ化粧品、頭髪用化粧品、洗顔剤、浴剤、制汗剤等が挙げられる。これらの化粧品では、リパーゼ阻害効果からニキビ治癒又は体臭防止に効果が期待され、ニキビ予防・治癒等の目的や加齢臭や腋臭症等の予防・治療目的で利用することができる。さらに、チロシナーゼ基質となる性質からメラニン様の物質の生成を促進する目的や白髪防止・改善等の目的で使用できる。

前記の医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤、予防剤又は飼料に配合してもよい。

次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。

（実施例１：新規フェノール性２量体化合物の生成）
カフェ酸（和光純薬工業（株）製）、フェルラ酸（和光純薬工業（株）製）各１ｇをエタノール２０ｍＬに溶解し、ミネラルウォーター（商品名「ゲロルシュタイナー」サッポロ飲料（株）製）２０ｍＬを加えた混合液（ｐＨ＝４．３）をオートクレーブ（商品名「ＳＡＮＹＯ ＬＡＢＯ ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ」、三洋電機（株）製）にて１３０℃、９０分間加熱した。得られた反応後組成物１ｍＬをメタノールにて５０ｍＬにメスアップし、このうちの１０μLをＨＰＬＣにより分析した。
ＨＰＬＣ分析は以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ₂Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））， Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入：１０μＬ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）

得られたクロマトグラムを図１に示す。上図が生成反応前の溶液、下図が生成反応後の溶液のクロマトグラムを示している。生成反応によりカフェ酸、フェルラ酸が共に減少し、増大したピークがいくつか確認されたことから、複数の化合物が生成されていることが確認された。中でも、Ａのピークで示された化合物は、カフェ酸、フェルラ酸から、生成されていることが考えられる。

（実施例２：新規フェノール性２量体化合物の単離・構造決定）
実施例１で得られた反応物における図１のＡで示したピークに含まれる化合物を、分取ＨＰＬＣにより単離した。常法に従って、乾燥したところ、黄色粉末状の新規化合物（以下、ＵＨＡ９０２０）が１３３ｍｇ得られた。

次いで、前記ＵＨＡ９０２０の分子量を高分解能電子イオン化質量分析法（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）にて測定したところ、測定値は２８６．３２２０であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
ＵＨＡ９０２０
理論値Ｃ１７Ｈ１８Ｏ４（Ｍ⁺）： ２８６．３２２４
分子式Ｃ₁₇Ｈ₁₈Ｏ₄

次に、前記ＵＨＡ９０２０を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３C−ＮＭＲ及び各種２次元ＮＭＲデータの解析から、ＵＨＡ９０２０が前記式（１）で表される構造を有することを確認した。このことから、式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物は本発明の方法で効率的に生成できることが示された。

なお、ＮＭＲ測定値について、式（１）で表されるＵＨＡ９０２０の各部位を

とし、１Ｈ核磁気共鳴スペクトル、１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを表１で示す。
値はδ、ｐｐｍで、メタノール−ｄ３で測定した値である。

また、ＵＨＡ９０２０の物理化学的性状は、以下のようになった。
（性状）
黄色粉末
（溶解性）
水： 不溶
メタノール： 可溶
エタノール： 可溶
ＤＭＳＯ： 可溶
クロロホルム： 可溶
酢酸エチル： 可溶

（実施例３：ＵＨＡ９０２０のリパーゼ阻害作用）
ＵＨＡ９０２０によるリパーゼ阻害作用を見るため、ラット腸由来リパーゼを用いての阻害作用試験を行った。
リパーゼは、ラット腸アセトンパウダー（シグマアルドリッチジャパン（株）製）１００ｍｇを１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１ｍＬに懸濁して４℃で１時間撹拌し、これを遠心分離（１５０００ｒｐｍ、４５分間、４℃）した上清を１２００倍希釈したものをリパーゼ溶液として使用した。
試料は、カフェ酸、フェルラ酸、本発明品であるＵＨＡ９０２０、リパーゼ阻害作用が高いとされる緑茶成分のエピガロカテキンガレート（和光純薬工業（株）製）の４種類を用いた。試料調製については、各々の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業（株）製）にて溶解し、０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、４ｍＭに調製したものを使用した。
活性測定には「リパーゼキットＳ」（商品名、大日本製薬（株）製）を使用した。まず、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い発色液を調製した。発色液を７０μＬ、エステラーゼ阻害剤を２μＬ、リパーゼ溶液を１０μＬ、試料を１０μＬ（終濃度１０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、４００μＭ）混合した反応液を調製し、３０℃で５分間プレインキュベートした後に基質溶液を８μＬ添加して反応を開始した。１０分間の反応後、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い調製した反応停止液を１５０μＬ添加して反応を停止した。これを測定波長４１５ｎｍの吸光度測定を行った。試料の溶媒であるＤＭＳＯのみを添加した反応液をポジティブコントロールとし、リパーゼ溶液の代わりに１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１０μＬを添加したものをネガティブコントロールとした。これらから得られたデータを基に算出したリパーゼ阻害率と各化合物濃度の関係から、リパーゼ活性を５０％阻害する濃度ＩＣ₅₀（５０％阻害濃度：ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を算出した（表２）。これらの結果からＵＨＡ９０２０には高いリパーゼ阻害活性が認められた。この効果はカフェ酸及びフェルラ酸では認められず、エピガロカテキンガレートと比べても２倍程度高い活性を有していることからカフェ酸とフェルラ酸より本発明品である新規フェノール性２量体化合物に変換する有意性が強く示唆された。

このように、ＵＨＡ９０２０は優れたリパーゼ阻害作用を奏することから、抗肥満剤として、さらにはメタボリックシンドローム予防剤として有用であると考えられる。また、皮膚におけるリパーゼ阻害はニキビ予防・治癒、体臭予防に有効であるから、ニキビ予防・治癒等の皮膚疾患治療剤としてや加齢臭予防や腋臭症予防等の体臭防止剤としても有用であると考えられる。

（実施例４：ＵＨＡ９０２０のチロシナーゼ基質としての検証）
次にＵＨＡ９０２０のチロシナーゼの基質としての検証を、マッシュルーム由来チロシナーゼ（シグマアルドリッチジャパン（株）製）を用いて行った。なお、実施例４及び実施例５に記載するメラニン様物質とは、これらの実施例の結果から、「メラニンを含む４７５ｎｍに吸収を示す黒色色素」と定義した。

試料は、カフェ酸、フェルラ酸、本発明品であるＵＨＡ９０２０、一般的なチロシナーゼの基質であるＬ−ＤＯＰＡ（和光純薬工業（株）製）の４種類を用いた。試料調製については、各々の化合物をＤＭＳＯにて溶解し、８ｍＭに調製したものを使用した。

測定は既存の活性検出法によって行なった．つまり、上記の濃度で調製した試料２００μＬと１００ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．５）３００μＬを混合した。反応液には１００ｍＭリン酸ナトリウムバッファー１３００μＬ，試料２００μＬ(終濃度４００μＭ)を混合した。これを３７℃で５分間加温し、同様に加温したチロシナーゼ（１００ｍＭリン酸ナトリウムバッファーで調製）を５００μＬ（１０Ｕ／ｍＬ）添加し反応を開始した。反応時間は１０分間とし、反応後にメラニンの吸収波長（４７５ｎｍ）の吸光度を測定した。コントロールとしてチロシナーゼ溶液の代わりに１００ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）１００μＬを添加したものをネガティブコントロールとした。これらから得られた吸光度からメラニン様物質の量を相対的に比較してチロシナーゼの基質としての評価をした（表３）。なお、基準としてはＬ−ＤＯＰＡを基質として生成されたメラニン様物質量を１とした。また、得られたメラニン様物質は、上記のように、メラニンを測定するのに用いる吸光度で測定できることから、メラニンに類似した構造を有する物質であり、チロシナーゼの処理物であることから、メラニンと同様の作用、即ち、色素としての効果を奏する物質であると考えられる。

これらの結果からＵＨＡ９０２０はカフェ酸及びＬ−ＤＯＰＡより最適なチロシナーゼ基質として認められた。このことからカフェ酸及びフェルラ酸を新規フェノール性２量体化合物ＵＨＡ９０２０に変換する有意性が強く示唆された。

（実施例５：Ｂ１６メラノーマ細胞中のメラニン様物質量の比較）
次にＵＨＡ９０２０を細胞に添加することによる細胞内メラニン様物質量の変動を調べるために、Ｂ１６メラノーマ細胞（「Ｂ１６−Ｆ０」、ＤＳファーマバイオメディカル（株）製）を用いて検証した。

Ｂ１６メラノーマ細胞の培養には１０％ＦＢＳ（Ｆｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ、バイオロジカルインダストリーズ社製）を含むＤ−ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ、シグマアルドリッチジャパン（株）製）を使用した。試験には細胞培養用６ｃｍディッシュ（日本ＢＤ（株）製）を用い、４×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように細胞数を調整したＢ１６メラノーマ細胞を５ｍＬ播種した。これを３７℃、５％ＣＯ₂下で４８時間培養し、８０％コンフルエント以上の状態で実験に使用した。

試料にはカフェ酸、フェルラ酸、本発明品であるＵＨＡ９０２０の３種類を使用した。試料調製については、各々の化合物をＤＭＳＯにて溶解しＢ１６メラノーマ細胞培養液中の最終濃度がそれぞれ１００μＭとなるように調整し、試験を開始した。またＤＭＳＯのみを同量添加したものをコントロールとした。

細胞中のメラニン様物質の定量は既存のメラニン定量法を用いて行った。つまり、試料を添加して３７℃、５％ＣＯ₂下で２４時間培養した細胞を回収し、１ｍＬの平衡リン酸緩衝塩液（ＰＢＳ）で再懸濁した。このうち１００μＬを、血球計算盤を用いて生細胞数のカウントに使用した。９００μＬは遠心分離でＰＢＳを除去し、１Ｍ 水酸化ナトリウムを１ｍＬ添加し１００℃で５分間加熱して細胞を溶解した。遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、室温）した後の上清を回収し、メラニンの吸収波長である４７５ｎｍの吸光度を測定した。定量には合成メラニン（シグマアルドリッチジャパン（株）製）を用いて作成した検量線にもとづいて行った。得られた生細胞数とメラニン様物質量から１細胞当りのメラニン様物質量を算出し、その相対値で比較した（表４）。なお、基準としてはコントロールであるＤＭＳＯのみ添加した細胞のメラニン様物質量を１とした。

この結果、ＵＨＡ９０２０を添加した細胞ではコントロールに比べてメラニン様物質量が約２倍増加していた。このことから、ＵＨＡ９０２０は細胞内に効率的に取り込まれ、チロシナーゼの基質として働いていることが推察できる。さらに顕微鏡観察（１００倍）の結果、ＵＨＡ９０２０を添加した細胞では、コントロールに比べてその黒色化が明確に進行していることから、顕著なメラニン様物質生成促進作用があることがわかる。
また、上記のようにメラニン様物質はメラニンと同様に４７５ｎｍに吸収をもつ化合物であることから、メラニンと同様の黒色色素として作用できる。これは前記顕微鏡観察の結果からも明らかである。したがって、例えば、ＵＨＡ９０２０を用いることで、白髪の原因の一つとして考えられるメラニンの生成量の減少を補うことが可能であることがわかる。
また、このメラニン様物質が増加したＢ１６メラノーマ細胞においては、前記顕微鏡観察で確認したところ、細胞が浮遊していたり、細胞が変形しているといった顕著な細胞傷害は見られなかった。
一方、カフェ酸又はフェルラ酸を添加した細胞ではメラニン量はコントロールと比べて差は見られなかった。
したがってカフェ酸及びフェルラ酸を新規フェノール性２量体化合物ＵＨＡ９０２０に変換する有意性が強く示唆された。

（実施例６：加熱温度によるＵＨＡ９０２０の生成量の違い）
カフェ酸５０ｍｇ、フェルラ酸５０ｍｇ、エタノール１ｍＬ、ミネラルウォーター１ｍＬの混合溶液（ｐＨ＝４．３）を、オートクレーブにて７０℃、９０℃、１１０℃、１３０℃の各温度条件で２０分間加熱した。それぞれの温度条件で得られた反応後組成物１ｍＬをメタノールにて５０ｍＬにメスアップし、実施例１と同様にＨＰＬＣにより分析した。

その結果、９０℃を超える条件下においてＵＨＡ９０２０の生成は確認できた。カフェ酸、フェルラ酸からＵＨＡ９０２０の生成比率は７０℃で非生成、９０℃で極微量、１１０℃で１重量％、１３０℃で６．６重量％であった。すなわち、１３０℃での加熱が最も効率的であった。

（実施例７：ＵＨＡ９０２０含有エキスの調製）
キウィフルーツジュース濃縮物（カフェ酸含有原料）１０ｇ、フェルラ酸（食品添加物、築野ライスファインケミカル（株）製）０．５ｇ、エタノール１０ｍＬ、ミネラルウォーターを１０ｍＬ加えて調製した混合溶液を、オートクレーブにて１３０℃、６０分間加熱した。得られた反応溶液を減圧加熱させて乾固し、ＵＨＡ９０２０含有エキスを１１ｇ得た。得られたＵＨＡ９０２０含有エキス１１ｇ中には、実施例１と同様の手法で確認したところＵＨＡ９０２０が０．０６ｇ含有されていた。必要に応じてこの作業を繰り返した。

以下、実施例１、２及び実施例６で得られたＵＨＡ９０２０（以下、ＵＨＡ９０２０）及び実施例７で得られたＵＨＡ９０２０含有エキス（以下、ＵＨＡ９０２０含有エキス）を配合した処方例を実施例として以下に示した。

（実施例８：ＵＨＡ９０２０を含有する食品）
ＵＨＡ９０２０含有エキス１ｇをあらかじめ１００ｍＬのエタノールに溶解させ、これに砂糖５００ｇ、水飴４００ｇを混合溶解し、生クリーム１００ｇ、バター２０ｇ、練乳７０ｇ、乳化剤１．０ｇを混合した後、真空釜にて−５５０ｍｍＨｇ減圧させ、１１５℃の条件下で濃縮し、水分値３．０重量％のミルクハードキャンディを得た。このミルクハードキャンディは、菓子として食べ易いものであることはもちろん、肥満予防による、メタボリックシンドローム等の生活習慣病の予防を期待した機能性食品としても利用できる。

（実施例９：ＵＨＡ９０２０を含有する医薬品）
ＵＨＡ９０２０をエタノールに溶解し、これを微結晶セルロースに吸着させた後に、減圧乾燥させた。これを常法に従い、打錠品を得た。処方は、ＵＨＡ９０２０ １０重量部、コーンスターチ２３重量部、乳糖１２重量部、カルボキシメチルセルロース８重量部、微結晶セルロース３２重量部、ポリビニルピロリドン４重量部、ステアリン酸マグネシウム３重量部、タルク８重量部の通りである。本打錠品は、肥満治療を目的とする医薬品として有効に利用できる。

（実施例１０：ＵＨＡ９０２０を含有する皮膚化粧品）
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット１重量部、ポリオキシエチレンステアリルエーテル０．５重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピルビン酸０．５重量部、ステアリルアルコール０．５重量部、アボガド油１重量部、ＵＨＡ９０２０ ０．１重量部を、常法に従って溶解させ、これに、乳酸ナトリウム１重量部、プロピレングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー０．１重量部、ごく少量の香料及び精製水８９．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、乳液を得た。本乳液は、ニキビ等の皮膚疾患治療や予防効果、加齢臭の予防効果や腋臭症の治療や予防効果をもつ薬用化粧品として有効に利用できる。

（実施例１１：ＵＨＡ９０２０を含有する頭髪化粧品）
９５％エタノール７５重量部、硬化ヒマシ油ＥＯ（４０）０．５重量部、１，３−ブチレングリコール０．１重量部、ＵＨＡ９０２０ ０．１重量部を常法に従って溶解させ、これにごく少量の香料及び精製水２４．３重量部を混合して頭髪化粧品を得た。本頭髪用化粧品は、白髪の改善や予防、頭皮の臭い防止効果をもつ薬用頭髪化粧品として有効に利用できる。

Claims (10)

1. 下記式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
   

   
2. 請求項１記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有するリパーゼ阻害剤。
3. 請求項１記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗肥満剤。
4. 請求項１記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する皮膚疾患治療剤。
5. 請求項１に記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする体臭防止剤。
6. 請求項１に記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするチロシナーゼ基質。
7. 請求項１に記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするメラニン様物質生成促進剤。
8. 請求項１に記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする毛髪黒化剤。
9. 請求項１に記載の新規フェノール性２量体化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品。
10. カフェ酸とフェルラ酸とを金属塩存在下で加熱処理することにより目的の化合物を生成させることを特徴とする、式（１）で表される新規フェノール性２量体化合物の製造方法。
    

    

Images