JP2012062247A

JP2012062247A - ウイルス治療剤

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Publication number: JP2012062247A
Application number: JP2010205164A
Authority: JP
Inventors: Masako Yamashita; 雅子山下
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-09-14
Filing date: 2010-09-14
Publication date: 2012-03-29

Abstract

【課題】エンテロウイルス７１を効果的に抑制することができる、安全なピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物を提供する。エンテロウイルス７１感染によって誘発される病態の治療または予防に用いられる薬学的組成物を提供する。
【解決手段】ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物及びアズキ抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とするエンテロウイルス７１によって誘発される病態の治療または予防法に使用する薬学的組成物を提供する。
【選択図】なし

Description

本発明は、抗エンテロウイルス活性を有するピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物に関する。更に詳しくは、本発明はピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とするエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）の感染によって誘発される病態の治療または予防のために使用される際の、薬学的組成物に関する。

手足口病は、口腔粘膜および手や足などに現れる水疱性の発疹を主症状とした急性ウイルス感染症である。大人にも発症することがあるが、１０歳以下の小児が大多数を占める。臨床的特徴は、感染から３〜５日の潜伏期間の後に、口腔粘膜、手掌、足底や足背などの四肢末端に、２〜３ｍｍの水泡性発疹が出現する。発熱は約３分の１に認められるが、軽度で、高熱が続くことは通常はない。患者が回復してからも１ヶ月程はウイルスが残っており、糞便と一緒に排泄されているので、回復してからの期間も周囲への感染には注意が必要である。

本疾患は、ピコルナウイルス科のコクサッキーＡ１６（ＣＡ１６）、ＣＡ１０、ＥＶ７１などのエンテロウイルスによりおこり、基本的に予後は良好な疾患である。しかし、急性髄膜炎の合併が時に見られ、稀に急性脳炎を生ずることもある。特に、ＥＶ７１は中枢神経系の合併症を引き起こす割合が高いことが知られている(非特許文献１)。

夏に流行することが知られているが、春からの流行も最近見られている。東アジア地域では、近年、マレーシア、台湾等において、大規模な手足口病流行時にＥＶ７１による急性死症例が多発した（非特許文献２、３）。中国においては、２００９年１月までに１０万人以上が発症し、重症例や死亡例がみられ、深刻な状況となった(非特許文献４)。このように、ＥＶ７１感染の広がりと重篤化の要因について注目が集まっている。ワクチンなどの積極的な予防法はなく、水分補給など対処療法のみである。そのため、死亡率を低下させるには早期治療が重要である。

安全な植物エキスまたは薬草で手足口病を予防または治療することが望まれ、抗ＥＶ７１活性を有する成分が報告されてきた。抗ＥＶ７１活性を持つ植物由来成分として、甘草エキス（非特許文献５）、ウードフォルディア・フルティコサの没食子酸（非特許文献６）、エピガロカテキンガレート及びガロカテキンガレート（非特許文献７）、ＰｕｅｒａｒｉａＬｏｂａｔａ（非特許文献８）、ＨｏｕｔｔｕｙｎｉａＣｏｒｄａｔａＴｈｕｂ(非特許文献９)、フラクタス・リグストリ・ルシジの微粉砕果実、リゾマ・ポリゴナチ、ヘルバ・アグリモニエ、ラジクス・リューマニエ・グルチノーザ・コンキタエ（特許文献１）が開示されている。

しかしながら、食経験のあるピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物がＥＶ７１と接触させることよりＥＶ７１に拮抗することは、発明者の知る限りこれまで報告されていない。

Ｌａｎｃｅｔ, ３５４：１６８２−１６８６, １９９９ＮＥｎｇＪＭｅｄ, ３４１：９２９−９３５,１９９９ＪｐｎＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ, ５２：１２−１５, １９９９Ｎａｔｕｒｅ, ４５８：５５４−５５５, ２００９ＡｍＪＣｈｉｎＭｅｄ, ３７（２）：３８４−３９４, ２００９ＬｅｔｔＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ, ５０（４）：４３８−４４０, ２０１０ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ, ５７（１４）：６１４０−６１４７, ２００９ＪＭｅｄＳｃｉ, ２４（１０）：５２３−５３０, ２００８ＡｍＪＣｈｉｎＭｅｄ, ３７（１）：１４３−１５８, ２００９

特許公開２００５−２０９４号公報

本発明の目的は、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とする、ＥＶ７１感染によって誘発される病態の治療または予防のために使用される際の、薬学的組成物を提供することを課題とする。

本発明に係るピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物は、ＥＶ７１の増殖を抑制する。従って、
これらの抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とする薬学的組成物は、ＥＶ７１感染によって誘発される病態の治療または予防が可能となる。

本発明者は、食経験を有する植物抽出物に着目し、鋭意研究を重ねた結果、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物およびアズキ抽出物にＥＶ７１の増殖を抑制する活性を見出した。従って、本発明の目的は、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とすることを特徴とする、ＥＶ７１感染によって誘発される疾患、特に手足口病の治療または予防に有効な薬学的組成物に関する。本発明の好ましい実施形態は、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物より選択される少なくとも一つを有効成分として含有することを特徴とする経口、直腸または腸管剤である。

ピーナツ種皮、ブドウ種子、アズキは、そのまま、或いは必要に応じて、乾燥、細切、破砕したものを使用することができる。それぞれの抽出方法は特に制限されず、当業者に周知の方法に従って実施することができる。なお、抽出に使用する溶媒は、なんら限定されるものではないが、冷水、熱水、低級アルコール、アセトン、アルキルケトン、酢酸、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン、液体二酸化炭素等が挙げられ、好ましくは水またはエタノール、あるいは水とエタノールとの混合液を挙げることができる。一例として、それぞれの乾燥粉砕物１重量部に対して２〜５００重量部、好ましくは５０〜２００重量部の水または含水エタノールを加え、室温〜１００℃程度、好ましくは５０〜８０℃程度で撹拌しながら１〜３００分程度、好ましくは１０〜９０分程度抽出を行った後、濾過や遠心分離などの固液分離法により固形分を取り除く方法を挙げることができる。

得られたそれぞれの抽出物をさらに吸着法、膜分離法、溶剤分別法、またはこれらを組み合わせて、高純度の抽出物を得ることができる。例えば、活性炭（和光純薬工業製）、イオン交換樹脂（和光純薬工業製）、シリカゲルＣ１８（ダイソー製）、ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化成工業製）、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（東ソー製）、などに供して、水及び適当な溶媒で吸脱着工程を一回または複数回行い、高純度抽出物を得ることができる。それぞれの抽出物は乾燥粉末あるいは液状の形態で使用することができる。また。それぞれの抽出物は市販品を使用することもできる。ピーナツ種皮抽出物としては、例えばピーナツ種皮抽出物粉末形態のものが常盤化学株式会社より、ブドウ種子抽出物粉末形態のものが株式会社キッコーマンより、またアズキ抽出物粉末形態のものがコスモ食品株式会社より市販されており、商業的に容易に入手することができる。

本発明のピコルナウイルス科ウイルスは、好ましくはエンテロウイルスである。従って、本発明は、ヒトまたはヒト以外の動物におけるエンテロウイルスの感染の影響を改善または予防することを意図しており、本発明は、ヒトまたはヒト以外の動物に、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物から選択される一つまたは複数の抽出物を有効量投与する段階を含む。更により具体的には、エンテロウイルス属のウイルス種は、ヒトにおける手足口病の原因であるＥＶ７１である。

従って、本発明は、ヒトにおけるＥＶ７１の感染によって誘発される病態を、治療または予防する方法を意図しており、本方法は、ヒトに、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物から選択される一つまたは複数の抽出物からなる薬学的組成物を経口的に有効量投与する段階を含む。

発明は更に、本発明の抽出物を含む、ＥＶ７１の感染によって誘発される疾病の治療または予防に有用な薬学的組成物に及ぶ。この点で、本発明の抽出物は、ＥＶ７１の感染によって誘発される病態の治療または予防のための活性成分として用いられうる。抽出物は、活性成分として、総重量に対し、０．１〜９０重量％、好ましくは１〜５０重量％で含有し、これに適当な薬学的に許容される担体または補助材とを混ぜた薬学的組成物として投与されうる。

有効量とは、ウイルスの複製、プロセシング、及び／または付着または放出を抑制し、減少させ、または妨害するのに効果的な量である。

従って、本発明は、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物から選択される一つまたは複数の抽出物と薬学的に許容される担体及び／または希釈剤とを共に含む、ＥＶ７１感染によって誘発される病態の治療または予防のために使用される際の、薬学的組成物を提供する。

本発明の薬学的組成物は、経口、直腸、腸管を通じて投与されうる。従って、本発明の薬学的組成物は、技術分野において周知の薬学的に許容される担体を用いて、経口投与に好適な剤形へと容易に製剤化することができる。そのような担体により、本発明の抽出物を、治療対象の患者のための経口摂取用の錠剤、ピル、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、及び懸濁液などのような剤形へと製剤化できる。このような担体は、糖、デンプン、セルロース及びそれらの誘導体、寒天、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、野菜油、合成油、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝液、乳化剤、等張性生理食塩水、及び、パイロジェンフリーの水から選択されうる。そのような組成物はいかなる製剤化の方法によっても調製されうるが、そのすべての方法が、上記の一つまたは複数の抽出物を、一つまたは複数の担体と組み合わせる段階を含む。

本発明に用いられる任意の薬剤に関して、治療または予防に有効な服用量は、インビトロで細胞培養アッセイから最初に予測されうる。例えば、服用量は、細胞培養で決定されるＩＣ_５０（例えば、感染の最大半減の抑制を達成する抽出物濃度）から形成されうる。そのような情報は、ヒトに有効な服用量をさらに正確に決めるのに用いられうる。正確な服用量は、医師による患者の状態の観察により選択されうる。

本発明は、下記の実施例によりさらに具体的に例示される。しかし、これらの実施例は、単に本発明の具現例であり、本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例１）ＥＶ７１抑制効果

ＥＶ７１に対するウイルス抑制効果を以下のように評価した。なお、本評価においてＥＶ７１としては、ＢｒＣｒ株（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を用いた。ＥＶ７１の感受性細胞としては、Ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎臓上皮由来細胞株）を用いた。培養液としては、ＭＥＭ培地（ＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）（ＧＩＢＣＯ製）を用いた。

Ｖｅｒｏ細胞（１５，０００細胞数／ウェル）を、１０体積％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）含有ＭＥＭ培地を添加した９６ウェルマイクロプレートで、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で一晩培養した。培養液を除去し、無血清ＭＥＭ培地でＶｅｒｏ細胞単層を一度洗浄後、２倍段階希釈した試験物質（ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物）、対照（エピガロカテキンガレート；ＥＧＣＧ）の添加に続きＥＶ７１液（４ＴＣＩＤ_５０／ウェルを１００μｌ／ウェルを加え、３７℃、３日間培養した。培養後、培養液を除去し、７０％エタノール水溶液２００μｌ／ウェルを添加後、室温で５分間静置して細胞を固定した。７０％エタノール水溶液を除去し、０．５％クリスタルバイオレット溶液２００μｌ／ウェルで添後、室温で５分間静置して生細胞を染色した。染色後、プレートを水で軽く洗浄して風乾し、染色された生細胞を吸光度（ＯＤ５６０ｎｍ）で測定した。試験はｎ＝２で実施し、試験物質の各濃度におけるコントロール細胞（ウイルス非感染）に対するＥＶ７１感染細胞の生存率を求めて、試験物質のＥＶ７１抑制効果を５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）にて評価した（表１）。

表１に示すように、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ抽出物、アズキ抽出物のいずれもＥＶ７１に対するウイルス抑制効果が認められた。
（実施例２）ゲル剤の製造

５０Ｌタンクに８０℃の温水を１０Ｌ投入し、アズキ抽出物１００g、キシリトール５００g、増粘多糖類５００gを秤量し、随時投入、攪拌を繰り返した。完全に溶解後、１０ｇのアルミパウチ容器に充填し、４０℃以下に冷却してゲル状の薬学的組成物を得た。小豆抽出物に換えて、ピーナツ種皮抽出物あるいはブドウ種子抽出物ゲル剤についても同様に製造した。

本発明は抗ウイルス組成物に関し、ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物より選択される一つまたは複数の抽出物を有効成分とする組成物を薬剤学的に許容可能な担体とともに含有することを特徴とする抗ウイルス組成物に関する。ピーナツ種皮抽出物またはブドウ種子抽出物またはアズキ抽出物は、エンテロウイルス７１に対して抑制効果を有するものである。従って、当該抽出物を有効成分とする薬学的組成物は、エンテロウイルス７１によって誘発される病態の改善または予防のために使用される際の薬学的組成物として効果が期待されるものである。

Claims

ヒトまたはヒト以外の動物におけるピコルナウイルス科ウイルスの感染によって誘発される病態の治療または予防するためであって、ヒトまたはヒト以外の動物にピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物から選択される一つまたは複数の抽出物からなる治療または予防のために使用される際の、薬学的組成物。
ピコルナウイルス科ウイルスがエンテロウイルスである、請求項1記載の薬学的組成物。
エンテロウイルスが、エンテロウイルス７１である請求項１および２記載の薬学的組成物。
ピーナツ種皮抽出物、ブドウ種子抽出物、アズキ抽出物から選択される一つまたは複数の抽出物、並びに、薬学的に許容される担体及び／または希釈剤を含む、エンテロウイルウイルス７１感染によって誘発される病態の治療または予防のために使用される際の、薬学的組成物。
薬学的組成物が、経口的に投与するのに好適な形態にあることを特徴とする請求項１〜４の何れかに記載の薬学的組成物。