JP2005053862A - 炎症疾患予防・治療剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ゲットウ及び/又はその処理物を有効成分として含有し、好ましくは、処理物が、ゲットウの葉の抽出物であり、一酸化窒素産生抑制作用を有する。更に、ゲットウの葉の抽出物が、ピノシルビンモノメチルエーテルを含有する。
Description
式中、Aはコントロールの570nmの吸光度から630nmの吸光度を除した値、Bはサンプルの570nmの吸光度から630nmの吸光度を除した値を示す。本発明のNO産生抑制剤についてMTT法により検出した細胞生存率は、コントロールより高いものが多く、NO産生が抑制されたことにより細胞が増殖していることが明らかである。
ゲットウの葉を粒径1mmに粉砕し、60℃で1〜2日乾燥させた。得られた乾燥体1gを10mLのクロロホルム溶液により、室温で1週間抽出後、濾過し抽出物を得た。その後、抽出物を減圧濃縮して、20mg/mLのジメチルスルフォキシド溶液を調製し、ジメチルスルフォキシドで希釈することにより最終濃度20μg/mL、4μg/mLのサンプルを調製した。
逆層系(C18ゲル)の中圧カラムクロマトグラフィーの使用によりピノシルビンモノメチルエーテルを分離した。分離されたピノシルビンモノメチルエーテル(PME)の100μM、20μM、4μM、0.8μMの濃度のジメチルスルフォキシド溶液とし、サンプルを調製した。
24穴マイクロプレートに2×105 cell/ウェルになるようにマウスマクロファージ由来RAW264.7細胞を加え、37℃で12時間前培養した。その後、PBS1mLで2回洗浄し、培地のDMEMを0.5mL加え、実施例1、2で調製した各濃度のサンプルを5μL加えた。コントロールにはDMSO5μLを用いた。これに、L−アルギニン10μL(最終濃度を2mMとした。)、LPSを10μL(ブランクを除いた最終濃度を100ng/mLとした。)、IFN−γ10μL(IFN−γのブランクを除いた最終濃度を100U/mLとした。)と、培地のDMEM0.5mLとを加え、プレートをよく振り混ぜ、37℃で24時間培養した。
[NO2 -測定]
培養上清500μLに以下の組成のGriess試薬を500μL加え、攪拌後、543nmにおける吸光度を分光光度計(UV−2200AI:島津社製)で測定した。吸光度を表2に示す。コントロールの場合の吸光度を0としてサンプルの吸光度からNO2 -生成量の割合を求め、NO産生抑制率として、下記の式により算出した。結果を表1に示す。
式中、Aはコントロールの吸光度、Bはサンプルの吸光度を示す。
1重量%サルファニルアミドを5重量%リン酸水溶液に溶解した溶液と、0.1重量%N−(1−ナフチル)−エチレンジアミドジヒドロクロライド溶液とを、同容量の割合で混合し用いた。
上清を取り除いた上記プレートの各ウェルに培地のDMEM500μLと、MTT試薬50μLを加え、37℃で1.5時間培養した。その後、各ウェルにDMSO1mLを加え、超音波(超音波洗浄装置:東京理科器械(株)社製)にて細胞を壊した後、各ウェルに塩酸・2−プロパノール500μLを加えよく攪拌し、630nmを参照波長として570nmの波長における吸光度を分光光度計(UV−2200AI:島津社製)で測定した。吸光度を表2に示す。吸光度から以下の計算式により、細胞生存率を求めた。結果を表3に示す。
式中、Aはコントロールの吸光度、Bはサンプルの吸光度を示す。尚、吸光度は570nmの波長における吸光度から630nmの波長における吸光度を除した値とした。
Claims (5)
- ゲットウ及び/又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする炎症疾患予防・治療剤。
- 処理物が、ゲットウの葉の抽出物であることを特徴とする請求項1記載の炎症疾患予防・治療剤。
- 一酸化窒素産生抑制作用を有することを特徴とする請求項1又は2記載の炎症疾患予防・治療剤。
- ゲットウの葉の抽出物が、ピノシルビンモノメチルエーテルを含有することを特徴とする請求項1〜3のいずれか記載の炎症疾患予防・治療剤。
- 請求項1〜4のいずれか記載の炎症疾患予防・治療剤を有効成分とすることを特徴とする抗炎症疾患の予防・改善用機能性食品又は食品素材。
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