JP2011507858A - 整形外科状態の治療のための、単独のまたは抗コネキシンポリヌクレオチドと組み合わせた、抗コネキシンペプチドの使用 - Google Patents

整形外科状態の治療のための、単独のまたは抗コネキシンポリヌクレオチドと組み合わせた、抗コネキシンペプチドの使用 Download PDF

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Abstract

整形外科的障害、疾患、または状態を治療するための抗コネキシン剤を含み、整形外科的処置または手術における回復および結果を改善する方法、化合物、組成物、キットおよび製品。１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を、１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤および／または１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドとの組合せて投与する工程を含む、種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象の治療のための、本発明の組成物および方法が開示されそして特許請求される。

Description

本発明は、整形外科疾患、障害および状態、ならびにこれらの治療方法、ならびに関連する医薬組成物、製剤、製品およびそのような組成物を含むキットに関する。
背景
以下は、本発明の理解に有用でありうる情報を含む。このことは、本明細書に記載される情報が、本明細書に記載または特許請求されている発明に対する先行技術であるか、もしくはこれに関連していることを認めるものでも、明示的にもしくは暗黙に言及される刊行物もしくは文書が先行技術であることを認めるものでもない。
ヒトおよび他の哺乳動物において、創傷は、細胞イベントおよび生化学的イベントの組織化された複雑なカスケードを誘発し、この結果、大半の場合において創傷の治癒がもたらされる。理想的に治癒した創傷とは、細胞レベル、組織レベル、器官レベル、および生物レベルにおける正常な解剖学的構造、機能、および外見が回復しているものである。手術、外傷、微生物、または外来物質のいずれにより誘発されたものでも、創傷の治癒は、炎症、上皮形成、新脈管形成、およびマトリックス産生および沈着を含めたいくつものオーバーラップした段階を包含する複雑な過程により進行する。通常、これらの過程により、創傷の完成（ｍａｔｕｒｅ ｗｏｕｎｄ）およびある程度の瘢痕形成がもたらされる。炎症および修復は大半が既定の経過に沿って起こるが、その過程の感受性は、例えば、調節サイトカインおよび成長因子のネットワークを含めた種々の創傷治癒調節因子の均衡に依存している。
関節の正常機能およびその運動は、整形外科的処置に続くその後の創傷治癒過程中に、炎症、瘢痕ならびに／または関節内部および／もしくは周囲の両方（関節内または関節周囲）または他の任意の患部で起こる異常組織形成により著しく損なわれることがある。これにより、圧痛、痛み、疼痛、および長期の回復時間、ならびに関節運動性の喪失または、例えば、筋肉、腱、被膜、骨もしくは靭帯などの関節構造の可動域、緊張性、もしくは弾力性の低下をもたらされうる。関節運動性の低下は、関節または組織構造の恒久的変化または短縮も含む。
関節運動性または関節構造の変化または異常は、例えば、代謝障害、虚血、外傷、関節、被膜、骨、軟骨、腱、靭帯もしくは筋肉への損傷、骨折、亜脱臼、脱臼、圧挫損傷、長期の固定化（例えば、ギブスもしくは副木での関節の固定化）、および麻痺などの種々の傷害または状態を伴うことも、これらにより引き起こされることもある。
外科的矯正処置は一種の制御された損傷または外傷でもあり、その処置は組織における炎症および増殖、ならびに関節先端周囲において傷痕および組織異常の再形成を引き起こしたり、再発させることが多いために、今日まで、瘢痕および異常組織形成により引き起こされる変化したもしくは異常な関節運動性または関節構造を緩和するための一般的外科的介入は成果が限られていた。
特定の場合には、低下した関節動作は遺伝的要素がある可能性があり、主要な傷痕および／または異常な組織増殖が関節の周囲および／または外側で起こることがある。１つのそのような状態は、デュピュイトラン拘縮であり、手の手掌面の結合組織が瘢痕になり肥厚し始め、最終的には肥厚部位で手が変形し、そのために指の可動域が失われる。拘縮の治療は、拘縮がすでに定着した後に限定される。外科的リリース処置は、患者を眠らせ、関節を強制することにより癒着を分離する麻酔下での操作（強制操作）が含まれる。これにより、組織における炎症および増殖、ならびに瘢痕および硬直の再形成が再発することが多い。外科的介入には、制限瘢痕および異常組織のリリース（オープンリリース）および除去（減量）を行うオープン手術が含まれうる。この手術は関節鏡を使って実施してもよく、その場合、瘢痕および制限組織が特別な器具を使用してリリースおよび除去が行われる（関節鏡リリース）。不運なことに、外科的介入には失敗があり、手術それ自体が制御された傷害または外傷であるために実際に状態を悪化させる可能性があり、これにより外科的傷害に応答してさらに多くの瘢痕および異常組織形成を引き起こしうる。物理療法および可動域運動などの治療が利用されるが、成果は限られている。薬理療法も試みられてきたが、成果は限られているかまったくなかった。最もよく使用される薬剤には、非ステロイド性抗炎症薬、ステロイド薬、および放射線が挙げられる。
異常なコネキシン機能は特定の病態（例えば、心臓疾患）と関連している可能性があることが報告されている（Ａ． Ｃ． ｄｅ Ｃａｒｖａｌｈｏら、Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ １９９４年、５巻、６８６頁）。特定のコネキシンタンパク質では、代謝回転および輸送特性の変化は、ギャップジャンクション細胞間情報伝達のレベルに影響しうる追加の外因性薬剤により誘導されうる（Ｄａｒｒｏｗ， Ｂ． Ｊ．ら（１９９５年）． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ７６巻： ３８１頁； Ｌｉｎ Ｒら、（２００１年）Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １５４巻（４号）：８１５頁）。ギャップジャンクションは、直接的な細胞間情報伝達（ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）を促進する細胞膜構造である。ギャップジャンクションチャネルは、各々が６つずつのコネキシンサブユニットからなる２つのコネクソン（ｃｏｎｎｅｘｉｎ）（ヘミチャネル）から形成される。各６量体コネクソンは、向い側の膜内のコネクソンとドッキングして、単一のギャップジャンクションを形成する。ギャップジャンクションチャネルは、全身において見出される。例えば、角膜上皮などの組織は、６〜８層の細胞層を有するが、異なる層では異なるギャップジャンクションチャネルを発現することが報告されており、基底層ではコネキシン４３を有し、基底層から中翼細胞層ではコネキシン２６を有する。一般に、コネキシンは１つのタンパク質ファミリーであり、通常、それらの分子量により命名されるか、または系統発生に基づき、アルファ、ベータ、およびガンマのサブクラスに分類されている。ヒトで少なくとも２０種のアイソフォームが、また、マウスで少なくとも１９種のアイソフォームが同定されている。特徴的なパターンのコネキシンタンパク質発現を有する様々な組織および細胞型が報告されており、角膜などの組織は、傷害または移植後において、コネキシンタンパク質の発現パターンを変化させることが示されている（Ｑｕｉ， Ｃ．ら（２００３年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１３巻、１９６７〜１７０３頁； Ｂｒａｎｄｅｒ ら（２００４年）、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第１２２巻、１３１０〜２０頁）。
異常なコネキシン機能は、特定の疾患状態（例えば、心疾患）と関連し得ることが報告されている（Ａ． Ｃ． ｄｅ Ｃａｒｖａｌｈｏら、Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ、１９９４年、第５巻、６８６頁）。ある種のコネキシンタンパク質では、ギャップジャンクションを介した細胞間情報伝達レベルに影響を及ぼしうる外因性物質の追加により、代謝回転特性および輸送特性の変化が誘導されうる（Ｄａｒｒｏｗ， Ｂ．、Ｊ． ら（１９９５年）、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ、第７６巻、３８１頁； Ｌｉｎ Ｒら（２００１年）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１５４巻、第４号、８１５頁）。ウイルス性疾患、真菌性疾患、および代謝性疾患に関係する遺伝子の発現調節について、アンチセンス技術が報告されている。例えば、特許文献１（ＨＩＶに対するオリゴヌクレオチド阻害剤）、特許文献２（単純ヘルペスウイルスのＶｍｗ６５ ｍＲＮＡにハイブリダイズし、複製を阻害するオリゴマー）を参照されたい。また、Ｂｅｃｋｅｒらに対する特許文献３（コネキシンに対するアンチセンスヌクレオチドを含む製剤）も参照されたい。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤（模倣性ペプチドを含む）が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ， Ｖ．Ｍ． ら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年）； Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁；ならびにＤｅ Ｖｒｉｅｓｅ Ａ．Ｓ． ら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎ、特許文献４（「Ａｎｔｉ−ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ」）も参照されたい。
米国特許第５，１６６，１９５号明細書 米国特許第５，００４，８１０号明細書 米国特許第７，０９８，１９０号明細書 国際公開第２００６／１３４４９４号
整形外科的処置に関連する創傷治癒過程の根底にある機序の原理についての理解は進んでいるにもかかわらず、結果と回復を改善するのに適した治療選択に対する、満たされていない重大な必要性がいまだにある。
簡単な要旨
本明細書で記載および特許請求される発明は、この「簡単な要旨」において説明または記載または言及される属性および実施形態を含むがこれらに限定されない多くの属性および実施形態を有する。それは包括的であることが意図されるものでなく、本明細書で記載および特許請求される発明は、限定ではなくて例示だけを目的として組み入れられているこの「簡単な要旨」に限定されるものでも、「簡単な要旨」において特定される特徴または実施形態により限定されるものでもない。
本発明は、一般的に、種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象の治療のための、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤（例えば、アルファ１抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤）、および／またはギャップジャンクション改変剤（例えば、ＺＯ−１タンパク質相互作用もしくは結合を遮断もしくは阻害するもしくは他の方法で妨げるコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含めたコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド、およびコネキシンリン酸化化合物を含めたヘミチャネル閉鎖化合物）と組み合わせた、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、アルファ１コネキシンオリゴデオキシヌクレオチドなどのコネキシン阻害剤）の使用（治療におけるまたは組成物、製剤、製品およびキットの製造もしくは調製における使用のためを含む）に関する。好ましい抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、アンチセンスコネキシンポリヌクレオチド）、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、およびギャップジャンクション改変剤（例えば、ＺＯ−１タンパク質相互作用または結合を遮断または阻害するまたは他の方法で妨げるコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含めたコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド、およびコネキシンリン酸化化合物を含めたヘミチャネル閉鎖化合物）は、抗コネキシン４３ポリヌクレオチド（例えば、アンチセンスコネキシン４３ポリヌクレオチド）、抗コネキシン４３ペプチド、抗コネキシン４３ペプチド模倣剤、およびコネキシン４３ギャップジャンクション改変剤（例えば、ＺＯ−１タンパク質相互作用または結合を遮断または阻害するまたは他の方法で妨げるコネキシン４３カルボキシ末端ポリペプチドを含めたコネキシン４３カルボキシ末端ポリペプチド、およびコネキシン４３リン酸化化合物を含めたコネキシン４３ヘミチャネル閉鎖化合物）である。
１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を、１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤および／または１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドとの組合せて投与する工程を含む、種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象の治療のための、本発明の組成物および方法が開示されそして特許請求される。
１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤および／または１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと組み合わせて、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤を投与することを含む、整形外科的処置または手術中または後における、対象を治療するための本発明の組成物および方法が開示および特許請求される。
第１の抗コネキシン剤を第２の抗コネキシン剤と組み合わせて用いる、種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象の治療のための、本発明の組成物および方法もまた開示されそして特許請求される。第１の抗コネキシン剤は、抗コネキシンオリゴヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドからなる群から選択することができる。第２の抗コネキシン剤は、そこから第１の抗コネキシン剤が選択された、抗コネキシン剤のサブカテゴリーを差し引くように改変した上記の群から選択される。
第２の抗コネキシン剤と組み合わせて第１の抗コネキシン剤を用いる、整形外科的処置もしくは手術中または後における、対象を治療するための本発明の組成物および方法も開示および特許請求される。第１の抗コネキシン剤は、抗コネキシンオリゴヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドからなる群から選択されうる。第２の抗コネキシン剤は、そこから第１の抗コネキシン剤を選択された、抗コネキシン剤のサブカテゴリーを差し引くように改変された上記の群から選択される。
本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象の治療のための、薬学的に許容される抗コネキシンポリヌクレオチドおよび薬学的に許容される抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む医薬組成物を包含する。本発明はまた、第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤を含み、第１の抗コネキシン剤が、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象を治療するのに有用な抗コネキシンオリゴヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドからなる群から選択され、第２の抗コネキシン剤が、そこから第１の抗コネキシン剤が選択された抗コネキシン剤のサブカテゴリーを差し引いて改変した上記の群から選択される医薬組成物も包含する。このような製剤には、例えば、局所送達、点滴注入送達、および注射可能な送達形態および製剤が含まれる。このような送達の形態および製剤には、本明細書で開示される、対象を治療する形態および製剤が含まれる。好ましい抗コネキシンポリヌクレオチドは、抗コネキシン４３オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）である。好ましいペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤は、抗コネキシン４３ペプチド、抗コネキシン４３ペプチド模倣剤、または抗コネキシン４３ギャップジャンクション改変剤、例えば、抗コネキシン４３ヘミチャネル遮断ペプチドまたは抗コネキシン４３ヘミチャネル遮断ペプチド模倣剤である。好ましいギャップジャンクション閉鎖化合物およびヘミチャネル閉鎖化合物は、コネキシン４３ギャップジャンクション閉鎖化合物およびコネキシン４３ヘミチャネル閉鎖化合物である。好ましいコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドは、コネキシン４３カルボキシ末端ポリペプチドである。
本発明の１または複数の医薬組成物、例えば、ペプチドもしくはペプチド模倣剤、例えば、抗コネキシンオリゴヌクレオチド（例えば、抗コネキシンＯＤＮ）およびコネキシンヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプチドもしくはペプチド模倣剤、または第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤を使用した、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療は、それら薬剤の同時投与、個別投与、逐次投与または持続投与を含みうる。
一実施形態において、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤と同時にまたはほぼ同時に投与される。一実施形態において、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤から少なくとも約３０分以内に投与される。一実施形態において、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤から少なくとも約１時間以内に投与される。一実施形態において、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤から少なくとも約２〜１２時間以内に投与される。一実施形態において、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤から少なくとも約２４〜４８時間以内に投与される。別の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチド、および抗コネキシンペプチド、または抗コネキシンペプチド模倣剤は、互いから約１〜８時間以内、互いから約１日以内、または互いから約１週間以内に投与される。他の実施形態は、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および／あるいは１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤、ならびに１もしくは複数のギャップジャンクション閉鎖化合物、１もしくは複数のヘミチャネル閉鎖化合物、および／または１もしくは複数のコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドの投与を包含する。
本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用であり、（ａ）治療有効量の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤、および（ｂ）コネキシンタンパク質のｍＲＮＡに対する治療有効量のアンチセンスポリヌクレオチドを含む医薬組成物も包含する。最も好ましくは、このコネキシンはコネキシン４３である。本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用であり、（ａ）治療有効量の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、ならびに／または（ｂ）ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドのうちの治療有効量の１もしくは複数を含む医薬組成物も包含する。最も好ましくは、ギャップジャンクション改変剤、例えば、有用なギャップジャンクション閉鎖化合物およびヘミチャネル閉鎖化合物の場合、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルはコネキシン４３ギャップジャンクションまたはヘミチャネルである。最も好ましくは、コネキシンカルボキシ末端ポリペプチドの場合、コネキシンはコネキシン４３である。他の実施形態では、治療有効量以下の２つ以上の抗コネキシン剤が、治療的に有効な複合作用を別々にまたは一緒に提供するための投与に使用される。
整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用な医薬組成物は、複合調製物の形で、例えば、治療有効量の２つ以上の抗コネキシン剤の混合剤として、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと１または複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、もしくはギャップジャンクション改変剤の混合物としても提供される。他の実施形態では、治療有効量以下の２つ以上の抗コネキシン剤が、目的の治療効果を与えるために組み合わせて使用される。
用語「組合せ調製物」は、上で定義される組合せ相手は、独立してまたは区別された量の組合せ相手（ａ）および（ｂ）との異なった一定の組合せを使用することにより、すなわち、同時に、別々に、もしくは逐次的に投与することができるという意味で、「要素キット（ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）」を含む。したがって、キットの部分は、例えば、同時にまたは経時的に交互に、すなわち、部分のキットのいかなる部分でも、異なる時点で、および等しいもしくは異なる時間間隔をおいて投与することができる。
一実施形態では、組合せ調製物が投与され、２つ以上の別々の組成物が対象に投与され、第１の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含み、第２の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣剤を含む。別の実施形態では、治療有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含む第３の組成物が投与される。第３の組成物は、治療有効量の１または複数のギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含んでいてもよい。他の実施形態では、治療有効量以下の１または複数の抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、抗コネキシン４３ペプチドもしくはペプチド模倣剤、ギャップジャンクション改変剤、ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、および／またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドが、目的の治療効果を与えるために組み合わせて使用される。
一態様では、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用であり、薬剤的に許容可能な担体、ならびに治療有効量の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤を単独でまたは抗コネキシンオリゴヌクレオチド、および／もしくはギャップジャンクション改変剤と組み合わせて含む局所送達形態および製剤を含む医薬組成物を包含する。別の態様では、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害、もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用であり、薬剤的に許容可能な担体、ならびに治療有効量の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤を単独で、または抗コネキシンオリゴヌクレオチドおよび／もしくはギャップジャンクション改変剤と組み合わせて含む滴下注入または注射可能な送達形状および製剤を含む医薬組成物を包含する。
一態様において、本発明は、薬学的に許容される担体と、治療有効量の、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤とを含む、局所送達、点滴注入送達、および注射可能な送達の形態および製剤を含めた、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象を治療するのに有用な医薬組成物を包含する。抗コネキシンポリヌクレオチドの例には、アンチセンス（改変骨格アンチセンスおよび非改変骨格アンチセンスを含む）、ＲＮＡｉ、およびｓｉＲＮＡを含めた抗コネキシンオリゴデオキシヌクレオチド（「ＯＤＮ」）が含まれる。適切な抗コネキシンペプチドには、コネキシン結合ペプチドが含まれる。適切な抗コネキシン剤には、例えば、アンチセンスＯＤＮならびにコネキシン４３、２６、３７、３０、および３１．１、および３２に対する他の抗コネキシンオリゴヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、および抗コネキシンペプチド模倣剤が含まれる。特定の実施形態では、適切な組成物に、例えば、抗コネキシン４３剤、抗コネキシン２６剤、抗コネキシン３０剤、および抗コネキシン３１．１剤を含めた、複数種の抗コネキシン剤の組合せが含まれる。抗コネキシンオリゴヌクレオチドと、抗コネキシンペプチドおよび抗コネキシンペプチド模倣剤とを含めた好ましい抗コネキシン剤は、コネキシン４３に対するものである。
本発明は、同時投与、個別投与、または逐次投与される２つ以上の抗コネキシン剤の使用を通じた、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象を治療を提供する。好ましい実施形態において、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤の組合せ使用は、種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象を治療するのに相加効果、相乗効果、または超相加効果を有する。好ましい実施形態では、このような組合せ使用の結果として、組合せ調製物の投与により、投与時点が減少し、かつ／または投与間の時間間隔が延長される。別の好ましい実施形態では、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤の組合せ使用により、投与頻度を低下させることができる。別の好ましい実施形態では、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤の組合せ使用により、上記薬剤を単独で投与した場合に有効でありうる１または複数の用量と比較して、このような薬剤の用量を低減して用いることができる。一般に、これらの抗コネキシン剤の組合せは、抗コネキシン剤（複数）の単一の投与を上回る治療結果の改善を有する。
別の態様において、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象に対して、遅延放出調製物、徐放調製物、持続放出調製物、制御放出調製物、および／または反復作用調製物の形で調合された、治療有効量の、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を投与する方法を包含する。
特定の他の態様では、本発明は、整形外科的処置または手術中の対象、またはその後の対象の治療法であって、（ａ）治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤を、単独でまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤と組み合わせて、および（ｂ）治療有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与することを含む方法にも関する。一実施形態では、手術結果は改善される。一実施形態では、投与は術後の対象における関節収縮を全体的にまたは部分的に軽減させるまたは予防するのに有効である。一実施形態では、投与は術後の対象における回復時間を改善するのに有効である。一実施形態では、投与は術後の対象における疼痛を軽減するのに有効である。一実施形態では、投与は術後の対象における全体的な回復結果を改善するのに有効である。一実施形態では、改善された回復結果は術後運動性の改善を含む。他の実施形態では、治療有効量以下の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤は、目的の治療効果を与えるために、単独でまたは組み合わせて投与される。
一態様では、本発明は、（ａ）１もしくは複数の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤を、単独でまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤と組み合わせて、および（ｂ）１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与することを含む、手術部位の整形外科手術後の血管損傷を軽減するための方法および組成物に関する。
一態様では、本発明は、（ａ）治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤を、単独でまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤と組み合わせて、および（ｂ）治療有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与することを含む、整形外科手術もしくは他の処置中および／またはその最中もしくはその後に、血管完全性を改善するもしくは維持するための方法および組成物に関する。他の実施形態では、治療有効量以下の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤および／またはギャップジャンクション改変剤が、目的の治療効果を与えるために、単独でもしくは組み合わせて使用される。
一実施形態では、対象は以下の手術、例えばリリース処置、関節鏡検査処置、関節手術（例えば、置換処置を含む股、肩または膝手術）のうちの１つの時点でまたはその後に治療される。一般に、本明細書に記載され主張される本発明品を使用して取り組む整形外科手術には、手の手術、肩および肘の手術、全関節再建（関節形成）、足および足首の手術、脊椎手術、外科的スポーツ医学、ならびに整形外科的外傷が挙げられる。したがって、例えば、整形外科的手術には、膝関節鏡検査および半月板切除術、肩関節鏡検査および減圧術、手根管開放術、膝関節鏡検査および軟骨形成術、支持移植片の除去、膝関節鏡検査および前十字靭帯再建、膝置換術、大腿骨頚部骨折の修復、転子骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリドマン、両半月板の膝関節鏡検査修復、人工股関節置換術、肩関節鏡検査／末端鎖骨切除、回旋腱板腱の修復、橈骨／尺骨の修復骨折、椎弓切除術、足関節骨折の修復（両果タイプ）、肩関節鏡検査およびデブリドマン、腰椎固定術、橈骨遠位端の修復骨折、腰部椎間板手術、切開指腱鞘、足関節骨折の修復（腓骨）、大腿骨骨幹軸骨折の修復、転子骨折の修復が挙げられる。関節炎の膝の片側のみが置換される膝関節片側置換術、および肘、手首、足首、および指を含む他の関節の関節置換術同様に、人工股関節全置換術、人工肩関節全置換術、および人工膝関節全置換術も含まれる。整形外科的手術には、骨移植術、すなわち、患者自身の体由来の材料、または人工、合成もしくは天然代用骨を使用して欠けた骨を置換する手術も含まれる。
関節鏡適用、局所適用、注射および滴下注入も本発明に包含される。
さらに別の態様では、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療法を提供し、この方法は、それらを必要とする対象に第１の組成物および第２の組成物を投与する工程を含み、前記第１の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ポリヌクレオチド剤を含み、前記第２の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤を含む方法を提供する。一実施形態では、第１の組成物が最初に投与される。別の実施形態では、第２の組成物が最初に投与される。さらなる実施形態において、上記方法は、抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含む第３の組成物の投与をさらに含む。一実施形態では、第３の組成物が最初に投与される。
一つの態様において、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後の関節性拘縮を予防および／または軽減する方法を提供し、それらを必要とする対象に、本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含む治療有効量の医薬組成物を投与する工程を含む方法を提供する。一実施形態において、前記方法は、第１の医薬組成物が治療有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含み、第２の医薬組成物が治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含む、２つの医薬組成物の投与を含む。一実施形態では、第１の組成物が最初に投与される。別の実施形態では、第２の組成物が最初に投与される。さらなる実施形態において、上記方法は、治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、または抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第３の組成物の投与をさらに含む。一実施形態では、第３の組成物が最初に投与される。一実施形態では、第３の組成物が最初に投与される。一実施形態において、組成物は、異常組織ならびに／またはさらなる拘縮の再発を防止するリリース手順（例えば、緊急処置、オープンリリース、関節鏡リリース、または瘢痕減量）の前に、同時に、および／または後に、障害部位に投与される。他の実施形態では、治療有効量以下の抗コネキシン剤は、治療的に効果のある複合作用を与えるために、投与のために別々にまたは一緒に使用される。
さらなる態様において、本発明は、包帯材、およびマトリックスを含み、これらは、治療有効量の抗コネキシンペプチド（例えば、ヘミチャネル遮断剤）、または本明細書に記載の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を、整形外科的処置もしくは手術中または後の対象の治療のための、あるいは種々の整形外科関連疾患、障害、または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象に送達することが可能である。
別の態様において、本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチド（例えば、ヘミチャネル遮断剤）、または本明細書に記載の治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の薬学的に許容される抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の薬学的に許容される抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含有する容器と、本明細書に記載のような対象の治療のための使用を含む使用のための指示書とを含む製品を包含する。他の実施形態では、治療有効量以下の第１および第２の抗コネキシン剤を使用して、目的の治療効果を与える。
本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチド（例えば、ヘミチャネル遮断剤）、または本明細書に記載される治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、もしくはギャップジャンクション改変剤を含有する１または複数の剤形を含有するパッケージ材料であって、前記剤形は整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象のために使用することができることを示す表示を有するパッケージ材料を含む製品を包含する。他の実施形態では、治療有効量以下の第１および第２の抗コネキシン剤が、合わせると目的の治療効果を与える製品の調製に使用される。
本発明は、本明細書に記載される治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１または複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤もしくはギャップジャンクション改変剤を、整形外科的処置もしくは手術中にもしくはその後に治癒を促進する、回復時間を改善する、全体的回復結果を改善する、関節性拘縮を軽減する、かつ／または血管損傷を軽減するのに有効な量含む製剤を包含する。そのような製剤には、例えば、局所送達形態および製剤の他にも注射、滴下注入および関節鏡投与のための製剤が挙げられる。好ましい製剤には、例えば、フォーム、スプレーまたはゲルとして処方される本発明の医薬組成物が挙げられる。一実施形態では、ゲルはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体ベースのゲルまたはカルボキシメチルセルロースベースのゲルである。好ましい実施形態では、ゲルはプルロニックゲルである。他の実施形態では、本発明は、合わされば目的の治療効果を与えることになる治療有効量以下の第１および第２の抗コネキシン剤を含む製剤を提供する。
本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するための薬物の製造において、本明細書に記載される第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤もしくはギャップジャンクション改変剤を含む治療有効量の組成物の使用のための方法を包含する。そのような薬物には、例えば、局所送達形態および製剤の他にも注射、滴下注入および関節鏡投与のための製剤が挙げられる。そのような薬物には、本明細書で開示される対象の治療のための薬物が挙げられる。そのような薬物は、そのような薬剤が組み合わせて投与されていない場合の投与される量、例えば、本明細書において言及される１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１または複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤の減量された量と比べて、本明細書に記載される治療有効量から減量された第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤を随意に含んでいてもよい。他の実施形態では、合わせれば目的の治療効果を与えることになる治療有効量以下の抗コネキシン剤が使用される。
本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するための薬物を調製する方法であって、例えば、第１の組成物および第２の組成物を含む本明細書に記載される有効量の抗コネキシンペプチド（例えば、ヘミチャネル遮断剤）または第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤を１つに合わせることを含む方法を含み、前記第１の組成物が有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを含み前記第２の組成物が有効量の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤を含む。他の実施形態は、治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、ギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、および／またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む第１および第２の組成物を含む薬物であって、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または整形外科疾患、障害および／もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するのに有用な薬物を調製する。他の実施形態では、合わせれば目的の治療効果を与えることになる組合せで使用される治療有効量以下の抗コネキシン剤が提供される。
本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するのに有用な剤形の製造における、本明細書に記載される治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤もしくはギャップジャンクション改変剤の使用のための方法を包含する。そのような剤形には、例えば、局所送達形状および製剤の他にも注射、滴下注入および関節鏡投与のための製剤が挙げられる。そのような剤形には、本明細書において開示される対象の治療のための剤形が挙げられる。そのような剤形には、好ましくは、治療有効量から減量された前記１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、または、本明細書において言及されるように、減量されたギャップジャンクション閉鎖化合物、ヘミチャネル閉鎖化合物、および／もしくはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含むギャップジャンクション改変剤が挙げられる。他の実施形態では、合わせれば目的の治療効果を与えることになる治療有効量以下の抗コネキシン剤が使用される。
別の態様では、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための医薬品の製造における、本明細書に記載される治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤、例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、抗アルファ１−ＯＤＮ）および抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤の使用を提供する。他の実施形態では、本明細書に記載される治療有効量以下の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤が目的の治療効果を与えるために使用される。
特定の他の態様では、本発明は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための、治療有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを、１または複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤またはギャップジャンクション改変剤と組み合わせて使用するための指示書と共に含むパッケージを提供する。他の実施形態では、前記パッケージは、組み合わせて使用すると治療的に効果のある、治療有効量以下の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび１または複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤またはギャップジャンクション改変剤を含有する。
この「簡単な要旨」における情報に限定されるかまたはこれにより限定されることのない、本発明のこれらおよび他の態様を以下に記載する。
定義
本明細書に記載される化合物、組成物、および治療法を使用して治療される対象には、例えば、整形外科疾患、障害および／または状態に罹患している、その素因がある、またはその危険性がある対象、ならびに整形外科的処置を受けたことがあるまたは受けることになっている対象が挙げられる。
本明細書で用いられる「対象」とは、ヒト、家畜動物、農場動物、動物園動物、競技動物、またはペット動物（イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなど）を含む任意の哺乳動物を指す。本明細書で好ましい哺乳動物は、成人、小児、および老齢者を含めたヒトである。
本明細書で用いられる「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」とは、状態の進行を全体的もしくは部分的に予防するか、またはこれらを改善するかもしくは制御するか、またはこれらを軽減するか、弱めるか、抑制するか、もしくは停止させることを意味する。
本発明の化合物または組成物に関して本明細書で用いられる「有効量」または「治療有効量」とは、所望の生物学的結果、薬学的結果、または治療結果を誘導するのに十分な量を指す。その結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因の緩和、または生物学的系の他の任意の望ましい変化でありうる。本発明では、前記結果は、治癒の促進、疼痛の予防および／もしくは軽減、血管損傷の予防および／もしくは軽減、関節内部および／もしくは周囲での異常組織形成の予防および／もしくは軽減、ならびに／または関節性拘縮の全体的もしくは部分的予防、軽減もしくは逆転、ならびに／または回復時間の改善、ならびに／または術後運動性の増加を含む全体的回復結果の改善を伴うことになる。本明細書に記載され主張される本発明品は、整形外科手術後の患者の回復時間も改善することができる。
本明細書で用いられる「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、治療的処置および予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）措置または予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す。
本明細書で用いられる「抗コネキシン剤」とは、コネキシン、コネキシンヘミチャネル（コネクソン）、またはギャップジャンクションの活性、発現、または形成に影響を及ぼすかまたはこれを調節する化合物である。抗コネキシン剤は、限定せずに述べると、アンチセンス化合物（例えば、アンチセンスポリヌクレオチド）、ＲＮＡｉ化合物およびｓｉＲＮＡ化合物、抗体およびそれらの結合フラグメント、ならびに「ペプチド模倣剤」含むペプチドおよびポリペプチドと、ペプチド類似体とを含む。抗コネキシンポリヌクレオチドおよび抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤に加えて、他の抗コネキシン剤には、ギャップジャンクション閉鎖化合物（例えば、コネキシンリン酸化化合物）、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または整形外科疾患、障害および／もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用なヘミチャネル閉鎖化合物（例えば、コネキシンリン酸化化合物）、ならびに整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または整形外科疾患、障害および／もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療に有用なコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド（これは、例えば、コネキシン４３などのコネキシンとのＺＯ−１タンパク質相互作用を遮断または中断することができる）が挙げられる。好ましい抗コネキシン剤は、抗コネキシン４３剤、抗コネキシン４３ギャップジャンクション剤、および抗コネキシン４３ヘミチャネル剤である。例となる抗コネキシン剤は、本明細書においてさらに詳細に考察される。
「ペプチド模倣剤」および「模倣剤」という用語は、それらが模倣するタンパク質領域と同じ構造的特徴および機能的特徴を実質的に有しうる天然に存在する化合物および合成化合物を含む。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネキシン同士のドッキングおよび細胞間のチャネル形成に関与する、向かい合うコネキシンの細胞外ループを模倣してよい。
「ペプチド類似体」とは、鋳型のペプチドの特性に類似する特性を有する化合物を指し、それらは非ペプチド薬剤でありうる。ペプチドベースの化合物を含む「ペプチド模倣剤」（また、「模倣ペプチド」としても公知）はまた、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに対して構造的に類似するペプチド模倣剤を用いて、同等であるかまたは増強された治療効果または予防効果をもたらすことができる。一般に、ペプチド模倣剤は、パラダイムポリペプチド（すなわち、生物学的または薬理学的な機能または活性を有するポリペプチド）と構造的に同一であるかまたはこれに構造的に類似するが、また、場合によって、例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される結合により置換される１または複数のペプチド結合も有しうる。模倣剤は、天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸類似体だけから構成されたものであっても、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的に非天然のアミノ酸類似体からなるキメラ分子であってもよい。任意量の天然アミノ酸に対する保存的置換もまた実質的に模倣剤の活性を変化させない限りにおいて、模倣剤はまたこのような置換も含みうる。例えば、模倣剤組成物が、例えば、ヘミチャネル同士のドッキングによるギャップジャンクションを介する細胞間情報伝達の形成を予防すること、またはヘミチャネルの開口による細胞の細胞質の細胞外環境への曝露を予防することなどの、コネキシンタンパク質またはヘミチャネルの生物学的な作用または活性を下方調節することができる場合、それは、抗コネキシン剤として有用でありうる。
ギャップジャンクション改変剤のほか、コネキシンリン酸化化合物およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含むペプチド模倣剤には、本明細書で記載されるかまたは言及されるペプチド模倣剤のほか、現在公知の場合であれ将来的に開発される場合であれ、当技術分野において公知でありうるペプチド模倣剤が含まれる。
本明細書においてその各形態において用いられるコネキシン活性の「調節剤」および「調節」という用語は、コネキシンまたはコネキシンヘミチャネルまたはコネキシンギャップジャンクションの発現または作用または活性に対する全体的または部分的な阻害を指し、抗コネキシン剤として機能しうる。
一般に、「タンパク質」という用語は、１つのアミノ酸（またはアミノ酸残基）のアルファ炭素に結合したカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接するアミノ酸のアルファ炭素に結合したアミノ基のアミノ窒素原子に共有結合する場合に生じるペプチド結合により連結される、２つ以上の個々のアミノ酸（天然の場合であれ非天然の場合であれ）による任意のポリマーを指す。これらのペプチド結合、およびこれらを含む原子（すなわち、アルファ炭素原子、カルボキシルの炭素原子（およびこれらの置換基の酸素原子）、およびアミノの窒素原子（およびこれらの置換基の水素原子））は、タンパク質の「ポリペプチド骨格」を形成する。加えて、本明細書で用いられる「タンパク質」という用語は、「ポリペプチド」および「ペプチド」（本明細書では、場合によって、互換的に用いられうる）という用語を含む形で理解される。同様に、本明細書では、タンパク質のフラグメント、類似体、誘導体、および変異体も「タンパク質」と称し、別段に示されない限り、「タンパク質」であるとみなされるものとする。タンパク質の「フラグメント」という用語は、タンパク質のすべてのアミノ酸残基よりも少数のアミノ酸残基を含むポリペプチドを指す。タンパク質の「ドメイン」もまたフラグメントであり、多くの場合、活性または機能を付与することが必要とされる、タンパク質のアミノ酸残基を含む。
本明細書で用いられる「同時に」が、本発明の１または複数の薬剤を同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）投与することを意味するように用いられるのに対し、「組み合わせて」という用語は、同時にまたは物理的に混合してではないにせよ、それらの両方を治療的に作用させることに利用される時間枠内で「逐次的に」投与することを意味するように用いられる。したがって、「逐次的に」投与することにより、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、または抗コネキシンペプチド模倣剤の両者が有効量で同時に存在する限りにおいて、１つの薬剤を、他の薬剤の投与後数分（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０分）以内、またはおおよそ数時間以内、おおよそ数日以内、おおよそ数週間以内、もしくはおおよそ数カ月以内に投与することが可能となりうる。成分の１回または複数回の投与間における時間の遅延（ｔｉｍｅ ｄｅｌａｙ）は、成分の正確な性質、それらの間における相互作用、およびそれら各々の半減期に応じて変化する。
整形外科疾患、障害および状態は当技術分野では周知であり、例えば、前十字靭帯（ａｃｌ）傷害、肩の関節炎、膝の関節軟骨損傷、Ｏ脚、骨折した背骨、骨折股関節（骨盤）、骨折した脚、骨折した頚部、腱膜瘤、滑液包炎、手根管症候群、慢性腰痛症、内反足、脊椎湾曲（脊柱側弯症）、糖尿病足、肘の脱臼、股関節脱臼、デュピュイトラン拘縮、偏平足、足奇形、小児の前腕骨折、血友病関節炎、椎間板ヘルニア（椎間板破裂）、股関節唇裂傷、股関節炎、感染性関節炎、炎症性股関節状態、母趾内反、膝関節炎、Ｘ脚、半月板裂傷、骨関節炎、骨壊死、骨粗鬆症、関節リウマチ、回旋腱板損傷、脊柱側弯症、肩関節炎、肩関節不安定症、肩痛、椎間板破裂（椎間板ヘルニア）、脊柱管狭窄／変性脊椎すべり症、脊椎すべり症、足へのスポーツ損傷、足関節捻挫、腱炎、母指関節炎、ばね指、および関節性拘縮が挙げられる。
整形外科疾患、障害または状態には、疼痛、血管損傷、腫脹、炎症、瘢痕および整形外科損傷の後に生じる関節性拘縮も挙げられる。炎症、瘢痕および関節性拘縮を生じることがある損傷の代表例には、例えば、外傷（例えば、特に関節内もしくは周囲の挫滅、切断、裂傷、破損、衝撃および牽引）、骨折（これは肘もしくは股関節などの関節内もしくは周囲で起こることがある）、亜脱臼、脱臼（例えば、指、肘、肩、足首、膝もしくは股関節において）、または関節（例えば、肩、肘、股関節、顎関節、小関節、指、膝、足首もしくは足指）破損および他の骨、軟骨、腱もしくは靭帯損傷が挙げられるが、あるいは特定できる原因がなくてもよい（例えば、凍結肩）。
整形外科的処置も当技術分野では周知であり、例えば、整形外科関連疾患、障害または状態に罹患している対象を治療するために現在公知のまたはその後に開発されたあらゆる処置および／または治療法が挙げられ、例となる処置には、関節鏡検査、人工椎間板置換術、自己軟骨細胞移植、骨移植、腱膜瘤切除、手根管開放術、内反足修復、コルチコステロイド類（注射および投薬療法）、機能回復プログラム、股関節鏡視下手術、人工股関節置換術、膝関節鏡視下手術、最小侵襲全人工股関節置換術、部分的人工膝関節置換術、部分的人工股関節置換術、肩関節鏡視下手術、肩関節置換術、全人工股関節置換術、全人工膝関節置換術、手関節鏡視下手術、膝関節鏡視下手術および半月板切除術、肩関節鏡視下手術および徐圧術、手根管開放術、膝関節鏡視下手術および軟骨形成術、サポートインプラントの除去、膝関節鏡視下手術および前十字靭帯再構築、人工膝関節置換術、大腿骨頚部骨折の修復、転子骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリドマン、両半月板の膝関節鏡視下手術修復、人工股関節置換術、肩関節鏡視下手術／遠位鎖骨切除術、回旋腱板腱の修復、橈（骨）／尺骨の修復骨折、椎弓切除術、足首骨折の修復（両果タイプ）、肩関節鏡視下手術およびデブリドマン、腰椎固定術、橈骨の遠位部分の修復骨折、腰部椎間板手術、切開手指腱鞘、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹軸骨折の修復、転子骨折の修復の他にも一般的、特殊化した、または非定形な手の手術、肩および肘の手術、全関節再建（関節形成術）、小児整形外科、足と足首の手術、脊椎外科、筋骨格腫瘍学、外科的スポーツ医学、ならびに整形外科的外傷に関連するすべての処置が含まれうる。
抗コネキシン剤
本明細書に記載の本発明の抗コネキシン剤は、細胞内への、また細胞からの分子の輸送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす（例えば、遮断するかまたは阻害するかまたは下方調節する）ことができる。したがって、本明細書に記載の一部の抗コネキシン剤は、細胞情報伝達（例えば、細胞間）を調節する。一部の抗コネキシン剤は、ギャップジャンクション調節剤である。一部の抗コネキシン剤は、細胞の細胞質と、ペリプラズム腔または細胞外腔との間における分子の移送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす。このような抗コネキシン剤は一般に、コネキシンおよび／またはコネキシンヘミチャネル（コネクソン）もしくはギャップジャンクション自体を標的とする。コネキシンを含むヘミチャネルおよび結果として生じるギャップジャンクションは、開口ヘミチャネルの場合における、細胞質と細胞外腔または細胞外組織との間における低分子の放出または交換、また開口ギャップジャンクションの場合における、隣接する細胞の細胞質間における低分子の放出または交換に独立して関与する。したがって、本明細書で提供される抗コネキシン剤は、細胞間における結合および情報伝達を直接的または間接的に低下させる場合もあり、細胞と細胞外腔または細胞外組織との間における情報伝達（または分子の伝達）を低下させるかまたは遮断する場合もあり、細胞から細胞外腔もしくは細胞外組織への（または細胞外腔もしくは細胞外組織から細胞内への）または隣接する細胞間における分子輸送の調節は、本発明の抗コネキシン剤および本発明の実施形態の範囲内にある。コネキシンは、コネキシン４３であることが好ましい。
本発明の実施形態では、ギャップジャンクションまたはコネキシンヘミチャネルを介する分子の通過（例えば、輸送）に対する望ましい阻害を誘発することが可能な任意の抗コネキシン剤を用いることができる。ギャップジャンクションまたはコネキシンヘミチャネルを介する分子の通過を調節する任意の抗コネキシン剤はまた、特定の実施形態においても提供される（例えば、ある細胞の細胞質から細胞外腔または隣接する細胞の細胞質への分子の通過を調節するか、遮断するか、または低下させる抗コネキシン剤）。このような抗コネキシン剤は、ギャップジャンクションの結合解除（ギャップジャンクションを介する分子輸送の遮断）を伴う場合であれ伴わない場合であれ、ギャップジャンクションまたはコネキシンヘミチャネルを介する分子の通過を調節しうる。このような化合物は、例えば、タンパク質およびポリペプチド、ポリヌクレオチド、および他の有機化合物を含み、これらは、例えば、部分的または全体的にギャップジャンクションまたはヘミチャネルの機能または発現を遮断する場合もあり、全体的または部分的にコネキシンの生成を下方調節する場合もある。一部のギャップジャンクション阻害剤は、Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁（２００１年）において列挙されている。他の化合物は、全体的または部分的にギャップジャンクションおよび／またはヘミチャネルを閉鎖するコネキシンリン酸化化合物、ならびにコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。コネキシンは、コネキシン４３であることが好ましい。
一部の抗コネキシン剤は、コネキシン発現の下方調節（例えば、ｍＲＮＡの転写または翻訳に対する下方調節による）をもたらすか、またはこれ以外の形で、コネキシンタンパク質、コネキシンヘミチャネル、もしくはギャップジャンクションの活性を低下させるかもしくは阻害する。下方調節の場合、これは、コネキシン発現が下方調節される部位において、ギャップジャンクションによる直接的な細胞間情報伝達、またはヘミチャネルによる細胞の細胞質の細胞外腔への曝露を低下させる効果を有する。抗コネキシン４３剤が好ましい。
抗コネキシン剤の例は、コネキシンｍＲＮＡおよび／もしくはコネキシンタンパク質の発現もしくは機能を低下させるかもしくは阻害するか、またはコネキシン、コネキシンヘミチャネル、もしくはギャップジャンクションの活性、発現、もしくは形成を低下させる薬剤を含む。抗コネキシン剤は、アンチセンスポリヌクレオチドおよび他のポリヌクレオチド（ｓｉＲＮＡまたはリボザイムの機能性を有するポリヌクレオチドなどの）などの抗コネキシポリヌクレオチドのほか、抗体およびその結合フラグメント、ならびにヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を調節するペプチド模倣剤およびペプチド類似体を含むペプチドおよびポリペプチドを含む。抗コネキシン４３剤が好ましい。
抗コネキシンポリヌクレオチド
抗コネキシンポリヌクレオチドは、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドのほか、それらによるコネキシン発現の下方調節を可能とする機能性を有するポリヌクレオチドも含む。他の適切な抗コネキシンポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉポリヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含む。抗コネキシン４３ポリヌクレオチドが好ましい。
ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、およびリボザイムポリヌクレオチドのほか、骨格が改変および混合されたポリヌクレオチドなどの、アンチセンスポリヌクレオチドおよび他の抗コネキシンポリヌクレオチドの合成は、当業者に公知である。例えば、Ｓｔｅｉｎ Ｃ．Ａ．およびＫｒｉｅｇ Ａ．Ｍ．（編）、「Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１９９８年、（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）を参照されたい。抗体および結合フラグメントのほか、ペプチド模倣剤およびペプチド類似体を含むペプチドおよびポリペプチドを合成する方法は、当業者に公知である。例えば、Ｌｉｈｕ Ｙａｎｇら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．、１；第９５巻、第１８号、１０８３６〜１０８４１頁（１９９８年９月１日）； ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９年）、「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。
一態様によれば、コネキシン発現の下方調節は一般に、アンチセンスポリヌクレオチド（ＤＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡポリヌクレオチドなど）を用いるアンチセンス法に基づき、またより具体的に、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）の使用に基づきうる。これらのポリヌクレオチド（例えば、ＯＤＮ）は、（１または複数の）コネキシンタンパク質を標的としてこれらを下方調節する。ポリヌクレオチドは、一本鎖であることが典型的であるが、二本鎖の場合もある。
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンの転写および／または翻訳を阻害しうる。ポリヌクレオチドは、コネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡからの転写および／または翻訳の特異的な阻害剤であり、他の遺伝子またはｍＲＮＡからの転写および／または翻訳を阻害しないことが好ましい。生成物は、（ｉ）コード配列に対する５’側、および／または（ｉｉ）コード配列に対する、および／または（ｉｉｉ）コード配列に対する３’側にあるコネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡに結合しうる。
アンチセンスポリヌクレオチドは一般に、コネキシンｍＲＮＡ、好ましくはコネキシン４３ ｍＲＮＡに対してアンチセンスである。このようなポリヌクレオチドはコネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズすることが可能であり、したがって、転写、ｍＲＮＡのプロセッシング、核からのｍＲＮＡの輸送、翻訳、またはｍＲＮＡの分解を含む、コネキシンｍＲＮＡ代謝の１つまたは複数の側面に干渉することにより、コネキシン発現を阻害しうる。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズして、ｍＲＮＡ翻訳の直接的な阻害および／またはｍＲＮＡの不安定化を引き起こしうる二重鎖を形成することが典型的である。このような二重鎖は、ヌクレアーゼによる分解に対して感受性でありうる。
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部にハイブリダイズしうる。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡのリボソーム結合領域またはコード領域にハイブリダイズすることが典型的である。ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部の領域に対して相補的でありうる。例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部の完全な相補体でありうる。しかし、絶対的な相補性は必要とされず、生理学的条件下において約２０℃、３０℃、または４０℃を超える融解温度を有する二重鎖を形成するのに十分な相補性を有するポリヌクレオチドが、本発明における使用に特に適する。
したがって、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡに対して相補的な配列の相同体であることが典型的である。ポリヌクレオチドは、約５０℃〜約６０℃における０．０３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．０３Ｍクエン酸ナトリウムなどの中程度〜高度に厳密な条件下においてコネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズするポリヌクレオチドでありうる。
一部の態様について述べると、適切なポリヌクレオチドは、約６〜４０ヌクレオチドの長さであることが典型的である。ヌクレオチドは、好ましくは約１２〜約３５ヌクレオチドの長さでもあり、代替的には、約１２〜約２０ヌクレオチドの長さでもあり、より好ましくは、約１８〜約３２ヌクレオチドの長さでもありうる。代替的な態様によれば、ポリヌクレオチドは、少なくとも約４０ヌクレオチド、例えば、少なくとも約６０ヌクレオチドまたは少なくとも約８０ヌクレオチドの長さでありえ、最長約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約１０００、約２０００、または約３０００ヌクレオチド以上の長さでありうる。
ポリヌクレオチドにより標的とされる１または複数のコネキシンタンパク質は、下方調節が行われる部位に依存する。これは、コネキシンサブユニットの組成に関して、全身の異なる部位において（１または複数の）ギャップジャンクションの構成が一様でないことを反映する。コネキシンは、一態様における、ヒトもしくは動物の天然に存在するコネキシンであるか、またはコネキシンの発現または活性を低下させる予定の組織内の天然に存在するコネキシンである。コネキシン遺伝子（コード配列を含む）は一般に、表８に示すコネキシン４３コード配列との相同性など、本明細書で言及される１または複数の特異的なコネキシンのコード配列との相同性を有する。コネキシンは、αコネキシンまたはβコネキシンであることが典型的である。コネキシンはαコネキシンであり、治療される組織において発現することが好ましい。
しかし、組織内における分布に関して、一部のコネキシンタンパク質は、他のコネキシンタンパク質よりも遍在性である。最も広範に存在するコネキシンタンパク質の１つが、コネキシン４３である。コネキシン４３を標的とするポリヌクレオチドが、本発明における使用に特に適する。他の態様では、他のコネキシンが標的とされる。
抗コネキシンポリヌクレオチドは、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドのほか、それらによるコネキシン発現の下方調節を可能とする機能性を有するポリヌクレオチドも含む。他の適切な抗コネキシンポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉポリヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含む。
好ましい一態様において、アンチセンスポリヌクレオチドは、１種のコネキシンタンパク質のｍＲＮＡだけを標的とする。このコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。別の態様において、コネキシンタンパク質は、コネキシン２６、３０、３１．１、３２、３６、３７、４０、または４５である。他の態様において、コネキシンタンパク質は、コネキシン３０．３、３１、４０．１、または４６．６である。
別個のコネキシンタンパク質を標的とするポリヌクレオチドを組み合わせて用いることもまた意図される（例えば、１種、２種、３種、４種以上の異なるコネキシンを標的とすることができる）。例えば、コネキシン４３を標的とするポリヌクレオチドと、コネキシンファミリーの１つまたは複数の他のメンバー（コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４５、および４６．６など）とを標的とするポリヌクレオチドを、組み合わせて用いることができる。
代替的に、アンチセンスポリヌクレオチドは、複数種のコネキシンタンパク質に対するポリヌクレオチドを含みうる組成物の一部でもありうる。ポリヌクレオチドが対象とするコネキシンタンパク質の１つは、コネキシン４３であることが好ましい。オリゴデオキシヌクレオチドが対象とする他のコネキシンタンパク質は、例えば、コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４５、および４６．６を含みうる。各種のコネキシンを対象とするのに適する例示的なポリヌクレオチド（およびＯＤＮ）を、表１に示す。
個々のアンチセンスポリヌクレオチドは、特定のコネキシンに特異的な場合もあり、１種、２種、３種以上の異なるコネキシンを標的とする場合もある。特異的なポリヌクレオチドが一般に、コネキシン間において保存されないコネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡ内の配列を標的とする一方、非特異的なポリヌクレオチドは、各種コネキシンの保存的配列を標的とする。
本発明で用いられるポリヌクレオチドは、非改変のホスホジエステルオリゴマーでありうるのが好都合である。このようなオリゴデオキシヌクレオチドは、長さが変わりうる。３０マーのポリヌクレオチドが特に適することが分かっている。
本発明の多くの態様は、オリゴデオキシヌクレオチドに関して説明される。しかし、これらの態様では、他の適切なポリヌクレオチド（ＲＮＡポリヌクレオチドなど）も用いうることが理解される。
アンチセンスポリヌクレオチドは、化学修飾することができる。これにより、ヌクレアーゼに対するこれらの耐性を増強することができ、これらが細胞内に入る能力を増強することができる。例えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを用いることができる。他のデオキシヌクレオチド類似体は、メチルホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロジチオエート、Ｎ３’Ｐ５’−ホスホラミデート、ならびにオリゴリボヌクレオチドホスホロチオエートおよびそれらの２’−Ｏ−アルキル類似体、ならびに２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドメチルホスホネートを含む。代替的に、混合骨格オリゴヌクレオチド（「ＭＢＯ」）も用いることができる。ＭＢＯは、ホスホチオエートオリゴデオキシヌクレオチドのセグメントと、改変されたオリゴデオキシヌクレオチドまたはオリゴリボヌクレオチドの適切に配置されたセグメントとを含有する。ＭＢＯは、ホスホロチオエート結合のセグメントと、非イオン性で、ヌクレアーゼまたは２’−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチドに対して極めて耐性なメチルホスホネートなどの、他の改変オリゴヌクレオチドの他のセグメントとを有する。改変骨格オリゴヌクレオチドおよび混合骨格オリゴヌクレオチドを調製する方法は、当技術分野において公知である。
本発明で用いられるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は、標的のコネキシンタンパク質に依存する。一実施形態において、適切なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、表１に記載される以下の配列から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドなどのポリヌクレオチドを含みうる。
Figure 2011507858
Figure 2011507858
 本明細書に記載の、ポリヌクレオチドの組合せ組成物の調製に適するポリヌクレオチドは、例えば、上記の表１に記載したコネキシンＣｘ４３に対するポリヌクレオチドと、コネキシン２６、３０、３１．１、３２、および３７に対するポリヌクレオチドとを含む。
本発明において用いられるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は、標的のコネキシンタンパク質に依存するが、コネキシン４３の場合、以下の配列：
ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号１）；
ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号２）；および
ＧＧＣ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＡＧＡ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＴ（配列番号３）
を有するアンチセンスポリヌクレオチドが特に適することが分かっている。
例えば、コネキシン２６、３１．１、および３２に適するアンチセンスポリヌクレオチドは、以下の配列：
５’ ＴＣＣ ＴＧＡ ＧＣＡ ＡＴＡ ＣＣＴ ＡＡＣ ＧＡＡ ＣＡＡ ＡＴＡ（コネキシン２６）（配列番号４）；
５’ ＣＧＴ ＣＣＧ ＡＧＣ ＣＣＡ ＧＡＡ ＡＧＡ ＴＧＡ ＧＧＴ Ｃ（コネキシン３１．１）（配列番号９）；および
５’ ＴＴＴ ＣＴＴ ＴＴＣ ＴＡＴ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＴＧ ＧＴＧ Ａ（コネキシン３２）（配列番号１２）
を有する。
本発明の方法により有用な他のコネキシンアンチセンスポリヌクレオチド配列は、
５’ ＣＡＴ ＣＴＣ ＣＴＴ ＧＧＴ ＧＣＴ ＣＡＡ ＣＣ ３’（コネキシン３７）（配列番号５）；
５’ ＣＴＧ ＡＡＧ ＴＣＧ ＡＣＴ ＴＧＧ ＣＴＴ ＧＧ ３’（コネキシン３７）（配列番号６）；
５’ ＣＴＣ ＡＧＡ ＴＡＧ ＴＧＧ ＣＣＡ ＧＡＡ ＴＧＣ ３’（コネキシン３０）（配列番号７）；
５’ ＴＴＧ ＴＣＣ ＡＧＧ ＴＧＡ ＣＴＣ ＣＡＡ ＧＧ ３’（コネキシン３０）（配列番号８）；
５’ ＡＧＡ ＧＧＣ ＧＣＡ ＣＧＴ ＧＡＧ ＡＣＡ Ｃ ３’（コネキシン３１．１）（配列番号１０）；および
５’ ＴＧＡ ＡＧＡ ＣＡＡ ＴＧＡ ＡＧＡ ＴＧＴ Ｔ ３’（コネキシン３１．１）（配列番号１１）
を含む。
コネキシンタンパク質を対象とする、ＯＤＮを含むポリヌクレオチドは、任意の簡便な従来の手法により、それらのヌクレオチド配列に関して選択することができる。例えば、コンピュータプログラムであるＭａｃＶｅｃｔｏｒおよびＯｌｉｇｏＴｅｃｈ（Ｏｌｉｇｏｓなど、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎ、ＵＳＡ製）を用いることができる。選択されると、ＤＮＡ合成器を用いてＯＤＮを合成することができる。
ポリヌクレオチドの相同体
本明細書では、相同性および相同体（例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡ中の配列に対する相補体の相同体でありうる）について論じる。このようなポリヌクレオチドは、例えば、（相同配列の）少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約４０、少なくとも約１００以上の連続ヌクレオチドの領域にわたって、対象の配列と少なくとも約７０％の相同性、好ましくは少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の相同性を有することが典型的である。
相同性は、当技術分野における任意の方法に基づいて計算することができる。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージでは、相同性を計算するのに用いうるＢＥＳＴＦＩＴプログラム（例えば、そのデフォルト設定で用いられる）が提供される（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１２巻、３８７〜３９５頁）。ＰＩＬＥＵＰアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴアルゴリズムは、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ． Ｆ．（１９９３年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ、第３６巻、２９０〜３００頁； Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ， Ｆら（１９９０年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、第２１５巻、４０３〜１０頁において説明される通り、相同性を計算するか、または配列を整列するのに用いることができる（それらのデフォルト設定における場合が典型的である）。
ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）により公に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中における同じ長さのワードにより整列する場合、ある正の値の閾値スコアＴにマッチするかまたはこれを満たすクエリー配列中における長さＷの短いワードを同定することによる、高スコアリング配列対（ＨＳＰ）の同定を伴う。Ｔを、近傍ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と称する。これらの初期近傍ワードヒットは、それらを含有するＨＳＰを見出す検索を開始するためのシード（ｓｅｅｄ）として作用する。ワードヒットは、累積のアライメントスコアが増大しうる限りにおいて、各配列に沿って両方向に延長される。各方向におけるワードヒットの延長は、累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から量Ｘだけ低下する場合；累積スコアが、１つまたは複数の負のスコアの残基アライメントの累積により、ゼロ以下に低下する場合；またはいずれかの配列の端部に到達する場合に停止される。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸにより、アラインメントの感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴプログラムでは、ワード長（Ｗ）、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、第８９巻、１０９１５〜１０９１９頁を参照されたい）によるアライメント（Ｂ＝５０）、期待値（Ｅ＝１０）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較が、デフォルトとして用いられる。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、２つの配列間における類似性に対する統計学的解析が実施される。例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、第９０巻、５８７３〜５７８７頁を参照されたい。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間におけるマッチが偶然に生じる確率を示す、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、第２の配列に対して第１の配列を比較した場合の最小合計確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、また最も好ましくは約０．００１未満である場合、ある配列は別の配列に対して類似すると考えられる。
相同配列は、少なくとも約２、５、１０、１５、２０以上（または約２、５、１０、１５、２０以下）の変異（置換、欠失、または挿入でありうる）により対象配列と異なることが典型的である。これらの変異は、相同性の計算との関連で、上述の領域のいずれかにわたって測定することができる。
相同配列は、バックグラウンドを有意に上回るレベルで、元の配列に選択的にハイブリダイズすることが典型的である。選択的なハイブリダイゼーションは、中程度〜高度に厳密な条件（例えば、約５０℃〜約６０℃における０．０３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．０３Ｍクエン酸ナトリウム）を用いて達成することが典型的である。しかし、このようなハイブリダイゼーションは、当技術分野において公知の任意の適切な条件下で実施することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」を参照されたい）。例えば、高い厳密性が必要とされる場合、適切な条件は６０℃における０．２×ＳＳＣを含む。より低い厳密性が必要とされる場合、適切な条件は６０℃における２×ＳＳＣを含む。
ペプチドおよびポリペプチドによる抗コネキシン剤
ペプチド、ペプチド模倣剤、抗体、抗体フラグメントなどを含む結合タンパク質もまた、ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに適する調節剤である。
結合タンパク質は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；単鎖抗体；単鎖Ｆｖ；また例えば、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと称する分子の部分）に結合可能な結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、組換え抗体、ならびに抗体フラグメントを含む単鎖結合分子などの単鎖結合分子を含む）を含む。抗体、抗体フラグメントなどを含むこれらの結合タンパク質は、キメラの場合もあり、ヒト化される場合もあり、他の形でこれらが投与される対象においてより低い免疫原性に作製する場合もあり、また、合成する場合もあり、組換えにより作製する場合もあり、発現ライブラリー内において作製する場合もある。本明細書で言及され、かつ／または当技術分野においてより詳細に説明される結合分子など、当技術分野において公知であるかまたは将来的に発見される任意の結合分子が想定される。例えば、結合タンパク質は、抗体などだけではなく、リガンド、受容体、ペプチド模倣剤、または標的（例えば、コネキシン、ヘミチャネル、または関連する分子）に結合する他の結合フラグメントもしくは他の結合分子（例えば、ファージディスプレイにより作製される）も含む。
結合分子は一般に、結合特異性を含むがこれに限定されない所望の特異性、および所望の親和性を有する。親和性は、例えば、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１のＫａでありうる。約１０９Ｍ−１以上、約１０１０Ｍ−１以上、約１０１１Ｍ−１以上、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。本発明による結合タンパク質の親和性は、従来の技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、１９４９年、Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、第５１巻、６６０頁により説明される技法を用いて容易に決定することができる。
ヒドロパシープロットから得られるデータを用いることにより、コネキシンは、４つの膜貫通領域および２つの短い細胞外ループを含有すると仮定されている。コネキシンの第１および第２の細胞外領域の配置は、分離されたギャップジャンクション上における対応するエピトープの免疫学的局在決定に用いられる抗ペプチド抗体の作製報告によりさらに特徴づけられた（Ｇｏｏｄｅｎｏｕｇｈ Ｄ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１０７巻、１８１７〜１８２４頁（１９８８年）； Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１１９巻、１７９〜１８９頁（１９９２年））。
隣接する２つの細胞が寄与するヘミチャネルの細胞外ドメインが互いに「結合（ｄｏｃｋ）」して、完全なギャップジャンクションチャネルが形成される。これらの細胞外ドメインの相互作用に干渉する試薬は、細胞間情報伝達を損なうことが可能である。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ， Ｖ．Ｍ．ら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年）； Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁；ならびにＤｅ Ｖｒｉｅｓｅ Ａ．Ｓ．ら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）を参照されたい。コネキシンの細胞外ループ内の配列に対応する短いペプチドが、細胞間情報伝達を阻害すると言われた（Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．およびＥｖａｎｓ Ｗ．、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、第２７９巻、Ｌ６２３〜Ｌ６３０頁（２０００年））。Ｘｅｎｏｐｕｓの卵母細胞対において発現されるコネキシン（Ｃｘ）３２によりもたらされる細胞間チャネル形成に対する阻害剤としてのペプチドの使用もまた報告されている（Ｄａｈｌ Ｇら、Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ、第６７巻、１８１６〜１８２２頁（１９９４年））。Ｂｅｒｔｈｏｕｄ， Ｖ．Ｍ．およびＳｅｕｌ， Ｋ．Ｈ．によりこれらの結果の一部がまとめられた（Ａｍ Ｊ．， Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年））。
抗コネキシン剤は、コネキシン（例えば、コネキシン４５、４３、２６、３０、３１．１、および３７）の膜貫通領域（例えば、第１〜第４）に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。抗コネキシン剤は、コネキシン４５の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含みうる。抗コネキシン剤は、配列番号１３の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１３の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１３の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の実施形態は、配列番号１３の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン剤を対象とする。本明細書で提供される一部の抗コネキシン剤では、配列番号１３の位置４６〜７５および１９９〜２２８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインを用いて、特定のペプチド配列を開発することができる。本明細書に記載の一部のペプチドは、配列番号１３の位置４６〜７５および１９９〜２２８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、配列番号１３のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置４６〜７５および１９９〜２２８に対応しない配列番号１３の部分）も標的としうる。
また、適切な抗コネキシン剤は、コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドも含む。抗コネキシン剤は、配列番号１４の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１４の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１４の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の抗コネキシン剤は、配列番号１４の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の抗コネキシン剤は、配列番号１４の位置３７〜７６および１７８〜２０８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインを含む。抗コネキシン剤は、配列番号１４の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する、本明細書に記載のペプチドを含む。ペプチドは、配列番号１４のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置３７〜７６および１７８〜２０８に対応しない配列番号１４の部分）も標的としうる。
Figure 2011507858
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 抗コネキシンペプチドは、ペプチドが機能的に活性な抗コネキシン剤であるような保存的アミノ酸置換を伴う、コネキシンの細胞外ドメインの一部に対応する配列を含みうる。例示的な保存的アミノ酸置換は、例えば、別の非極性アミノ酸による非極性アミノ酸の置換、別の芳香族アミノ酸による芳香族アミノ酸の置換、別の脂肪族アミノ酸による脂肪族アミノ酸の置換、別の極性アミノ酸による極性アミノ酸の置換、別の酸性アミノ酸による酸性アミノ酸の置換、別の塩基性アミノ酸による塩基性アミノ酸の置換、および別のイオン性アミノ酸によるイオン性アミノ酸の置換を含む。
コネキシン４３を標的とする例示的なペプチドを、以下の表２に示す。Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、およびＭ４は、それぞれ、コネキシン４３タンパク質の第１〜第４の膜貫通領域を指す。Ｅ１およびＥ２は、それぞれ、第１および第２の細胞外ループを指す。
Figure 2011507858
 表３は、ヘミチャネル機能またはギャップジャンクション機能を阻害するのに用いられる、さらなる例示的なコネキシンペプチドについて記載する。他の実施形態では、ペプチドまたはこれらのフラグメントに対して保存的なアミノ酸変化が作製される。
Figure 2011507858
 表４は、本明細書に記載の使用に供するペプチド阻害剤を開発するのに用いられるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ループについて記載する。表４に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントは、一部の非限定的な実施形態においてペプチド阻害剤として用いられる。他の非限定的な実施形態では、この表４中のペプチドの約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含むペプチドが、ペプチド阻害剤である。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。
Figure 2011507858
Figure 2011507858
 表５は、ペプチドによる抗コネキシン剤を開発するのに用いうるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ドメインについて記載する。表５に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントもまた、ペプチドによる抗コネキシン剤として用いることができる。このようなペプチドは、この表５中のペプチド配列の約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含みうる。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。
Figure 2011507858
 表６は、コネキシン４０の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４０に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４０の膜貫通領域を対象とする。
Figure 2011507858
 表７は、コネキシン４５の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４５に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４５の膜貫通領域を対象とする。
Figure 2011507858
 一部の実施形態では、一部のペプチド阻害剤が、既存のギャップジャンクションを破壊することなく、ヘミチャネルを遮断することが好ましい。特定の理論または機構のいかなるものにも拘束されることを望まないが、一部のペプチド模倣剤（例えば、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号２３））はまた、ギャップジャンクションの結合解除を引き起こすことなくヘミチャネルを遮断する（Ｌｅｙｂｅａｒｔら、Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎ． Ａｄｈｅｓ．、第１０巻、２５１〜２５７頁（２００３年）を参照されたい）か、または低用量でヘミチャネルを遮断するとも考えられている。例えば、ギャップジャンクションの結合解除を伴わずにヘミチャネルを遮断するには、ペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号１９）もまた用いることができる。ペプチドＳＲＧＧＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号１０７）は、対照配列として用いることができる（ＤｅＶｒｉｅｓｅら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００２年））。コネキシン４５に対するペプチド阻害剤の例は、ＹＶＣＳＲＬＰＣＨＰ （配列番号１０８）、ＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲＬ （配列番号１０９）、ＦＥＶＧＦＬＩＧＱＹＦＬＹ （配列番号１１０）、ＧＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰ （配列番号１１１）、ＧＦＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲ （配列番号１１２）、ＡＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱ （ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１１３）、ＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥ （配列番号１１４）、ＮＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹ （配列番号１１５）、ＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲ （配列番号１１６）、ＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦ （配列番号１１７）およびＬＩＧＱＹ （配列番号１１８）、ＱＶＨＰＦ （配列番号１１９）、ＹＶＣＳＲ （配列番号１２０）、ＳＲＬＰＣ （配列番号１２１）、ＬＰＣＨＰ （配列番号１２２）およびＧＥＳＩＹ （配列番号１２３）、ＹＤＥＱＳＫ （配列番号１２４）、ＳＫＦＶＣＮ （配列番号１２５）、ＴＥＱＰＧＣＥＮ （配列番号１２６）、ＶＣＹＤＡＦＡＰ （配列番号１２７）、ＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ （配列番号１２８）である。ペプチドは、ＳＲＬ、ＰＣＨ、ＬＣＰ、ＣＨＰ、ＩＹＹ、ＳＫＦ、ＱＰＣ、ＶＣＹ、ＡＰＬ、ＨＶＲを含む３アミノ酸長だけの場合もあり、例えば、ＬＩＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰＦ （配列番号１２９）、ＶＨＰＦＹＣＳＲＬＰＣＨＰ （配列番号１３０）、ＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥＱＰＧ （配列番号１３１）、ＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦ （配列番号１３２）、ＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ （配列番号１３３）など、より長い場合もある。
Figure 2011507858
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 ギャップジャンクション調節剤
本明細書に記載の一部の抗コネキシン剤は、細胞内へ、また細胞からの分子の輸送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす（例えば、遮断するかまたは阻害する）ことが可能である。したがって、本明細書に記載の一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞情報伝達（例えば、細胞間）を調節する。一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞の細胞質とペリプラズム腔または細胞外腔との間における分子の伝達を調節するかまたはこれに影響を及ぼす。このような薬剤は一般に、細胞の細胞質と細胞外腔または細胞外組織との間における小分子の交換に独立して関与しうるヘミチャネル（コネクソンとも呼ばれる）を標的とする。したがって、本明細書で提供される化合物は、細胞間（ギャップジャンクションを介する）または細胞と細胞外腔もしくは細胞外組織との間（ヘミチャネルを介する）における結合を直接的または間接的に低下させることが可能であり、細胞から細胞外腔内への分子の輸送の調節は、本発明の一部の化合物および実施形態の範囲内にある。
本発明の実施形態では、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを介する分子の通過（例えば、輸送）に対する所望の阻害を誘発することが可能な任意の分子を用いることができる。ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを介する分子の通過を調節する化合物はまた、特定の実施形態（例えば、細胞の細胞質から細胞外腔内への分子の通過を調節する実施形態）においても提供される。このような化合物は、ギャップジャンクションの結合解除を伴う場合であれ、伴わない場合であれ、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを介する分子の通過を調節しうる。このような化合物は、例えば、全体的または部分的にギャップジャンクションまたはヘミチャネルの機能または活性を遮断しうる、例えば、結合タンパク質、ポリペプチド、および他の有機化合物を含む。
本明細書で用いられる「ギャップジャンクション調節剤」とは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を全体的または部分的に防止するか、低下させるか、または調節するこれらの薬剤または化合物を広く含みうる。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの機能を、全体的または部分的に防止するかまたは低下させる。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを、全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低下させるかまたは防止する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔への開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、細胞外ヘミチャネル情報伝達を低下させることも可能であり、これを阻害することも可能である。ヘミチャネルおよび／またはギャップジャンクションの開口を遮断するペプチド模倣剤およびギャップジャンクションリン酸化化合物が現在好ましい。
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を防止するか、低下させるか、または変化させる。本明細書で用いられるギャップジャンクションの活性または機能の調節は、ギャップジャンクションの閉鎖、ヘミチャネルの閉鎖、ならびに／またはギャップジャンクションおよび／もしくはヘミチャネルを介する分子もしくはイオンの通過を含みうる。
例示的なギャップジャンクション調節剤は、限定なしに述べると、ポリペプチド（例えば、ペプチド模倣剤、抗体、これらの結合フラグメント、および合成構築物）、および他のギャップジャンクション遮断剤、およびギャップジャンクションタンパク質リン酸化剤を含みうる。ギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられる例示的な化合物（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらへの米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された（ａｓｓｏｒｔｅｄ）特許公報において報告されている。例示的なペプチドおよびペプチド模倣剤は、Ｇｒｅｅｎら、ＷＯ２００６１３４４９４において報告されている。また、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１；およびＴｕｄｏｒら、ＷＯ２００３０３２９６４も参照されたい。
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。ギャップジャンクション調節のための例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１つもしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１つまたは複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質共役受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ（２００１年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、第２７６巻、第１１号、８５４４〜８５４９頁を参照されたい。一実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖によって、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖によって、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
結合タンパク質（例えば、抗体、抗体フラグメントなど）、ペプチド、ペプチド模倣剤、およびペプチド模倣剤を含むポリペプチド化合物が、適切なギャップジャンクション調節剤である。
結合タンパク質は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；単鎖抗体；単鎖Ｆｖ；また例えば、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと称する分子の部分）に結合可能な結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、組換え抗体、ならびに抗体フラグメントを含む単鎖結合分子などの単鎖結合分子を含む）を含む。抗体、抗体フラグメントなどを含むこれらの結合タンパク質は、キメラの場合もあり、ヒト化される場合もあり、他の形でこれらが投与される対象においてより低い免疫原性であるよう作製する場合もあり、また、合成する場合もあり、組換えにより作製する場合もあり、発現ライブラリー内において作製する場合もある。本明細書で言及され、かつ／または当技術分野においてより詳細に説明される結合タンパク質などの、当技術分野において公知であるかまたは将来的に発見される任意の結合タンパク質が想定される。例えば、結合タンパク質は、抗体などだけではなく、リガンド、受容体、ペプチド模倣剤、または標的（例えば、コネキシン、コネクソン、ギャップジャンクション、または関連する分子）に結合する他の結合フラグメントもしくは分子（例えば、ファージディスプレイにより作製される）も含む。
結合タンパク質は一般に、結合特異性を含むがこれに限定されない所望の特異性、および所望の親和性を有する。親和性は、例えば、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１以上のＫａでありうる。約１０９Ｍ−１以上、約１０１０Ｍ−１以上、約１０１１Ｍ−１以上、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。本発明による結合タンパク質の親和性は、従来の技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（１９４９年）、Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、第５１巻、６６０頁により説明される技法を用いて容易に決定することができる。
本発明は、ギャップジャンクションおよびヘミチャネルを調節するペプチド（１および複数のペプチド模倣剤を含む）の使用を含む。ヒドロパシープロットから得られるデータを用いることにより、コネキシンは、４つの膜貫通領域および２つの短い細胞外ループを含有すると仮定されている。コネキシンの第１および第２の細胞外領域の配置は、分離されたギャップジャンクション上における対応するエピトープの免疫学的局在決定に用いられる抗ペプチド抗体の作製報告によりさらに特徴づけられた（Ｇｏｏｄｅｎｏｕｇｈ Ｄ．Ａ．（１９８８年）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１０７巻、１８１７〜１８２４頁； Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．（１９９２年）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１１９巻、１７９〜１８９頁）。
ペプチドまたはこれらの変異体は、例えば、固相ペプチド合成法によっても、酵素触媒ペプチド合成によっても、組換えＤＮＡ法を援用しても、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができる。固相ペプチド合成法は確立されて広く用いられている方法であり、以下：Ｓｔｅｗａｒｔら（１９６９年）、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ； Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３年）、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、第８５巻、２１４９頁； Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、「Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｃ．Ｈ． Ｌｉ編、第２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７３年）、４８〜２６７頁； ならびにＢａｖａａｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｅ． ＧｒｏｓｓおよびＦ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、第２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８０年）、３〜２８５頁などの参考文献中において説明されている。これらのペプチドは、免疫親和性カラムまたはイオン交換カラム上における分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陰イオン交換樹脂上におけるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を用いるゲル濾過；リガンド親和性クロマトグラフィー；または非極性溶媒もしくは非極性／極性溶媒の混合物からの結晶化もしくは沈殿によりさらに精製することができる。結晶化または沈殿による精製が好ましい。
隣接する２つの細胞が寄与するヘミチャネルの細胞外ドメインが互いに「結合」して、完全なギャップジャンクションチャネルが形成される。これらの細胞外ドメインの相互作用に干渉する試薬は、細胞間情報伝達を損なうかまたは細胞外環境に対するヘミチャネルの開口を損なうことが可能である。
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン（例えば、コネキシン４５、４３、２６、３０、３１．１、および３７）の膜貫通領域（例えば、第１〜第４）に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含むギャップジャンクション調節剤が、本発明における使用に好ましい。
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４５の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含みうる。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号１３の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１３の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１３の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の実施形態は、配列番号１３の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドであるギャップジャンクション調節化合物を対象とする。本明細書で提供される一部のギャップジャンクション調節剤では、配列番号１３の位置４６〜７５および１９９〜２２８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインを用いて、特定のペプチド配列を開発することができる。本明細書に記載の一部のペプチドは、配列番号１３の位置４６〜７５および１９９〜２２８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、配列番号１３のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置４６〜７５および１９９〜２２８に対応しない配列番号１３の部分）も標的としうる。
また、適切なギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドも含みうる。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号１４の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１４の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１４の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号１４の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号１４の位置３７〜７６および１７８〜２０８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインを含む。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号１４の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する、本明細書に記載のペプチドを含む。ペプチドは、配列番号１４のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置３７〜７６および１７８〜２０８に対応しない配列番号１４の部分）も標的としうる。
さらに他の抗コネキシン剤は、コネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６／０６９１８１を参照されたい。
ギャップジャンクション改変剤：他の抗コネキシン剤
ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションおよび／またはヘミチャネルを閉鎖もしくは遮断するか、またはギャップジャンクションを介する細胞間情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させるか、またはヘミチャネルを介する細胞外環境への細胞の情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させる薬剤を含む。これらは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を、全体的または部分的に防止するか、低下させるか、または阻害する薬剤または化合物を含む。
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを、全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低下させるかまたは防止する。
一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔への開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、細胞外ヘミチャネル情報伝達を低下させることも可能であり、これを阻害することも可能である。
ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられるギャップジャンクション改変剤（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらへの米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された特許公報において報告されている。例えば、ＺＯ−１タンパク質の結合を阻害すると言われるコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドに関しては、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１もまた参照されたい。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１は、このようなペプチドを含む製剤の使用について説明している。
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１つもしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１つまたは複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質共役受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、第２７６巻、第１１号、８５４４〜８５４９頁、２００１年３月１６日を参照されたい。一実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖によって、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖によって、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
さらに他の抗コネキシン剤は、コネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６／０６９１８１を参照されたい。
ある別の態様において、ギャップジャンクション改変剤は、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔剤（例えば、ハロタン）、エトレン、フルオタン、プロポフォール、およびチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾアート（ＦＦＡ：親油性であるフルフェナム酸および類似の誘導体）；カルベンオキソロン；カルコン（２’，５’−ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３−クロロ−４−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（および他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドであるトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））模倣剤；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸、およびリポキシゲナーゼ代謝物）；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、およびメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ−グリチルレチン酸および１８−β−グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンダン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２−メチル−１，４−ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞内酸性化によるゲーティング、例えば、酸性化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸およびアラキドン酸）；キニジン；キニーネ；全 トランス−レチノイン酸；およびタモキシフェンを含みうる。
剤形および製剤ならびに投与
治療有効量の各組合せパートナー（例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド、および抗コネキシンペプチド、または抗コネキシンペプチド模倣剤）は、同時投与、個別投与、または逐次投与が可能であり、しかも任意の順序で可能である。薬剤は、個別投与される場合もあり、固定の組合せとして投与される場合もある。固定の組合せとして投与されない場合、好ましい方法は、物理的にまたは創傷の治療の過程において、１または複数の薬剤が単独で投与される場合、すなわち、それらが組み合わせて投与されない場合に用いられる量または用量よりも少ない量または用量でそれらの一方または両方が供給される、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤の逐次的投与を含む。投与される薬剤のこのような低量は、単独で投与される場合の該薬剤の１つの量または複数の量の約２０分の１〜約１０分の１であることが典型的であり、単独で投与される場合の量の約８分の１、単独で投与される場合の量の約６分の１、単独で投与される場合の量の約５分の１、単独で投与される場合の量の約４分の１、単独で投与される場合の量の約３分の１、および単独で投与される場合の量の約２分の１であってよい。薬剤は、互いから少なくとも約３０分以内に逐次投与されることが好ましい。薬剤はまた、互いから約１時間以内に投与することもでき、互いから約１日〜約１週間以内に投与することもでき、適切であるとみなされる他の形で投与することもできる。抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、例えば、ヘミチャネルの開口を遮断するかまたは低下させうる抗コネキシン剤は、例えば、コネキシンタンパク質発現の下方調節により、コネキシン発現またはヘミチャネルの形成もしくはギャップジャンクションの形成を遮断するかまたは低下させる抗コネキシン剤の投与よりも前に投与されることが好ましい。１または複数の抗コネキシン剤は、（１または複数の）抗コネキシン４３剤であることが好ましい。
本発明の薬剤は、本明細書で言及される疾患または状態のいずれかを有する対象など、治療を必要とする対象に投与することができる。こうして、対象の状態を改善することができる。したがって、抗コネキシン剤は、治療による対象の身体の処置に用いることができる。これらは、本明細書で言及される状態のいずれかを治療する薬剤の製造において用いることができる。したがって、本発明により、細胞間情報伝達を一過性の様式および部位特異的な様式で下方調節しうる製剤が提供される。
抗コネキシン剤は、実質的に単離形態で存在しうる。生成物は、生成物の意図される目的に干渉しない担体または希釈剤と混合することができ、これをなおも実質的に単離状態にあるとみなしうることが理解される。本発明の生成物はまた、実質的に精製形態の場合もあり、この場合、生成物は一般に、ポリヌクレオチド（または他の抗コネキシン剤）の、または調製物の乾燥質量の、約８０％、８５％、または９０％、例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を含む。
意図される投与の経路に応じて、本発明の医薬品、医薬組成物、組合せ調製物、および薬剤は、例えば、溶液、懸濁液、点滴、軟膏剤（ｓａｌｖｅｓ）、クリーム、ゲル、泡沫、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、エマルジョン、ローション、ペイント、持続放出製剤、または粉末の形態をとる可能性があり、（１または複数の）有効成分の約０．１％〜９５％を含有することが典型的であり、（１または複数の）有効成分の約０．２％〜７０％を含有することが好ましい。他の適切な製剤は、プロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ベースの製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ｈｙｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＨＰＭＣ）ベースの製剤を含む。プルロニックゲルを含む適切な製剤は、例えば、約１０〜約１５パーセント、適切には約１２パーセントのプルロニックゲルを有する。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
ゲルまたはゼリーは、ゼラチン、トラガカント、またはセルロース誘導体を含むがこれらに限定されない適切なゲル化剤を用いて作製することができ、保湿剤、皮膚軟化剤、および防腐剤としてグリセロールを含みうる。軟膏は、脂肪基剤、蝋基剤、または合成基剤中に組み込まれた有効成分からなる半固体調製物である。適切なクリームの例は、油中水エマルジョンおよび水中油エマルジョンを含むがこれらに限定されない。油中水クリームは、セチルアルコールまたはセトステアリルアルコールなどの脂肪族アルコールによる乳化剤および乳化蝋と類似するがこれらに限定されない特性を有する適切な乳化剤を用いて調合することができる。水中油クリームは、セトマクロゴール乳化蝋などの乳化剤を用いて調合することができる。適切な特性は、エマルジョンの粘稠度を変化させる能力、および広範なｐＨにわたる物理および化学の両面における安定性を含む。水溶性または混和性のクリーム基剤は、防腐剤系を含有する場合があり、また、許容される生理学的なｐＨを維持するように緩衝化することもできる。
泡沫調製物は、不活性の噴霧剤を用いる適切なアプリケーターにより、加圧エアゾールキャニスターから送達するように調合することができる。泡沫基剤の製剤に適する賦形剤は、プロピレングリコール、乳化蝋、セチルアルコール、およびステアリン酸グリセリルを含むがこれらに限定されない。潜在的な防腐剤は、メチルパラベンおよびプロピルパラベンを含む。
本発明の薬剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と組合せて、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の食塩液、例えば、リン酸塩緩衝化食塩液を含む。適切な希釈剤および賦形剤はまた、例えば、水、食塩液、デキストロース、グリセロールなど、およびこれらの組合せ物も含む。加えて、所望の場合、保湿剤または乳化剤、安定化剤またはｐｈ緩衝剤などの物質もまた存在しうる。
「薬学的に許容される担体」という用語は、組成物を投与される個体に有害な抗体の生成をそれ自体では誘導せず、不適切な毒性なしに投与しうる任意の薬学的な担体を指す。適切な担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、およびアミノ酸コポリマーなどの大型でゆっくりと代謝される高分子でありうる。
例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などのような鉱酸塩、および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩など、薬学的に許容される塩もまた存在しうる。
適切な担体物質は、局所投与用のクリーム、ローション、ゲル、エマルジョン、ローション、またはペイントのための基剤として一般に用いられる任意の担体またはビークルを含む。例は、乳化剤、炭化水素による基剤を含む不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、または水溶性の基剤を含む。特に適切な例は、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、および他のセルロース基剤の成分、ラノリン、硬質パラフィン、液体パラフィン、軟質黄色パラフィン、または軟質白色パラフィン、白色蜜蝋、黄色蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコーン、乳化蝋、ミリスチン酸イソプロピル、微晶質蝋、オレイルアルコール、およびステアリルアルコールを含む。
薬学的に許容される担体またはビークルは、ゲルであることが好ましく、非イオン性ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーゲル、例えば、プルロニックゲル、好ましくはＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．）であることが適切である。このゲルは、低温では液体であるが、生理学的温度では急速に固まり、これにより、薬剤の放出が適応部位またはその部位にすぐの近接部位に限定されるので特に好ましい。
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、膠、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤中に組み入れることができる。
他の適切な製剤は、プロニックゲル基剤の製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）基剤の製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）基剤の製剤を含む。組成物は、局所投与、点滴投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与を含む、任意の所望の送達形態に応じて調合することができる。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
抗コネキシン剤が、ポリヌクレオチドなどの核酸である場合、哺乳動物細胞による核酸の取込みは、複数種の公知のトランスフェクション法、例えば、トランスフェクション剤の使用を含むトランスフェクション法により増強される。このような技法は、ポリヌクレオチドを含む一部の抗コネキシン剤と共に用いることができる。投与される製剤は、このようなトランスフェクション剤を含有しうる。これらの薬剤の例は、陽イオン剤（例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥデキストラン）およびリポフェクション剤（例えば、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍ（商標）およびｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標））、ならびに界面活性剤を含む。
抗コネキシン剤がポリヌクレオチドを含む場合、製剤がポリヌクレオチドの細胞透過を補助する界面活性剤をさらに含むか、または製剤が任意の適切な充填剤を含有すると好都合である。ＤＭＳＯなど、任意の適切な無毒性界面活性剤を組み入れることができる。代替的に、尿素などの経皮透過剤も組み入れることができる。
所与の対象または状態に対して有効な用量は、日常的な実験または当技術分野において公知であるかもしくは将来的に開発される他の方法により決定することができる。例えば、ある範囲の用量値を調合するために、細胞培養アッセイおよび動物試験を用いることができる。このような化合物の用量は、集団の少なくとも５０％に対して治療的に有効な用量内にあり、このレベルにおいてほとんどまたはまったく毒性を示さないことが好ましい。
本発明の方法および組成物において用いられる各抗コネキシン剤の有効用量は、用いられる１または複数の特定の抗コネキシン剤、組合せのパートナー、投与方式、投与頻度、治療される状態、治療される状態の重症度、投与経路、治療される患者部分集団の必要、またはその患者の異なる必要がその患者に特異的な年齢、性別、体重、関連する治療状態に起因しうる個々の患者の必要を含むいくつかの因子に応じて異なりうる。
患者に抗コネキシン剤が投与される場合の用量は、患者の年齢、体重、および全般的な状態、治療される状態、ならびに投与される特定の抗コネキシン剤などの、各種の因子に依存する。
抗コネキシン剤の適切な治療有効用量は、約０．０１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ体重など、約０．００１〜約１ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。しかし、適切な用量は、約０．０１〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ体重など、約０．００１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。
約１〜１００、１００〜２００、１００〜３００または２００〜３００、１００〜４００または２００〜４００または３００〜４００、および１００〜５００または２００〜５００または３００〜５００または４００〜５００マイクログラムの治療有効用量の抗コネキシン剤が適切である。約１〜１０００マイクログラムの用量もまた適切である。最大２ミリグラムの用量もまた用いることができる。１または複数の抗コネキシン剤が包帯材の形態で提供される場合、用量は適切な形で調整され、所望の総用量投与を維持するよう上方に調整されることが典型的である。
代替的に、抗コネキシンオリゴヌクレオチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤の場合、組成物中における各ギャップジャンクション調節剤の用量は、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することができる。例えば、一部の局所適用において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、グラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜約１０マイクログラムの範囲にある。一部の用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜２、約１〜５、約２〜４、約５〜７、および約８〜１０マイクログラムである。他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１０マイクログラムを超え、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約１５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約２０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約２５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約３５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約４０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約５０マイクログラム、および創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約１００〜少なくとも約１５０マイクログラムを含む。他の用量は、平方センチメートル当たり約１５０〜２００マイクログラム、平方センチメートル当たり約２００〜２５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約２５０〜３００マイクログラム、平方センチメートル当たり約３００〜３５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約３５０〜４００マイクログラム、および平方センチメートル当たり約４００〜５００マイクログラムを含む。
一部の実施形態において、抗コネキシン剤組成物は、治療部位および／または治療部位に隣接して、約０．０１マイクロモル（μＭ）または０．０５μＭ〜約２００μＭ、 または最大３００μＭ、または最大１０００μＭ、または最大２０００μＭ、または最大３２００μＭ以上の最終濃度、およびこれらの用量数値内にある任意の用量および用量範囲で適用することができる。アンチセンスポリヌクレオチド組成物は約０．０５μＭ〜約１００μＭの最終濃度で適用されることが好ましく、抗コネキシン剤組成物は約１．０μＭ〜約５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましく、抗コネキシン剤組成物は約５〜１０μＭ〜約３０〜５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましい。加えて、組合わされた抗コネキシン剤組成物は約８μＭ〜約２０μＭの最終濃度で適用され、また代替的に、抗コネキシン剤組成物は約１０μＭ〜約２０μＭの最終濃度、または約１０〜約１５μＭの最終濃度で適用される。他の一部の実施形態において、抗コネキシン剤は、約１０μＭの最終濃度で適用される。さらに別の実施形態において、抗コネキシン剤組成物は、約１〜１５μＭの最終濃度で適用される。他の実施形態において、抗コネキシン剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００、または１０００〜１５００μＭ、または１５００μＭ〜２０００μＭ、または２０００μＭ〜３０００μＭ以上で適用される。
抗コネキシン剤の投与量は、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、または４〜５マイクログラム（μｇ）、約５〜約１０μｇ、約１０〜約１５μｇ、約１５〜約２０μｇ、約２０〜約３０μｇ、約３０〜約４０μｇ、約４０〜約５０μｇ、約５０〜約７５μｇ、約７５〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、および２５０μｇ〜約５００μｇを含む。上記で言及した通り、０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。投与容量は治療される部位のサイズに依存し、例えば、約２５〜１００μＬ〜約１００〜２００μＬ、約２００〜５００μＬ〜約５００〜１０００μＬの範囲でありうる。より大きな治療部位には、ミリリットル用量もまた適切である。
さらに他の用量は、本明細書に記載の各薬剤に対して、１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重のレベルである。一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、ｋｇ体重当たり約１ｎｇ〜約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇ〜約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、ｋｇ体重当たり約１０ｎｇ〜約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約０．１マイクログラム〜約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約２０ｎｇ〜約１００ｎｇ、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇ〜約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、またはｋｇ体重当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲である。一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇ〜約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲である。複数種の抗コネキシン剤を用いる場合、各抗コネキシン剤の用量は、他方の用量と同じ範囲である必要はない。例えば、１種の抗コネキシン剤の用量はｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの可能性があり、別の抗コネキシン剤の用量はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの可能性がある。
本明細書で言及されるすべての用量および用量範囲は、例えば、抗コネキシンオリゴヌクレオチドに適用可能である。これらの用量範囲はまた、例えば、抗コネキシンペプチド、抗コネキシン模倣ペプチド、および抗コネキシンペプチド模倣剤にも適用可能である。
抗コネキシン剤は、投与後少なくとも約０．５〜１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間にわたってコネキシンタンパク質の発現を下方調節するか、またはギャップジャンクションの形成もしくはコネクソンの開口を調節するのに十分な量で投与されると好都合である。
対象発明の組成物および方法における各抗コネキシン剤の用量はまた、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することもできる。例えば、一部の局所適用および他の適用、例えば、点滴において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、マイクログラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。
本明細書で言及される通り、組合せで投与される抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくは抗コネキシンペプチド模倣剤、またはこれらの一方もしくは両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤の用量は、単独で施される場合に投与される用量よりも下方に調整することができる。
複数種の薬剤を組み合わせて用いることにより、異なる薬剤の効果の発生および持続が補完的となりうるため、任意の個々の薬剤に対して必要とされる用量を低減することができる。好ましい実施形態において、２つ以上の抗コネキシン剤を組み合わせて用いると、相加効果、相乗効果、または超相加効果が得られる。
場合によって、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤を組み合わせると、相加効果が得られる。他の場合において、組合せは、相加を超える効果を有しうる。本明細書では、このような効果を「超相加（ｓｕｐｒａ−ａｄｄｉｔｉｖｅ）」効果と称し、これは、相乗的であるかまたは強化された相互作用に起因する可能性がある。
「創傷治癒の超相加的促進」という用語は、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤の組合せを投与することによりもたらされる平均創傷治癒が、いずれかの薬剤を単独で個別に投与することによりもたらされる創傷治癒の和よりも統計学的に有意に高度であることを指す。１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤の組合せ投与によりもたらされるものが、個々の化合物について予測される加算値よりも「統計学的に有意に高度」であるかどうかは、本明細書に記載され、かつ／または当業者により公知である各種の統計学的方法により判定することができる。「相乗的」という用語は、抗コネキシンポリヌクレオチド、および抗コネキシンペプチドもしくは抗コネキシンペプチド模倣剤の両方、またはこれらの一方との組合せでもしくはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤が、創傷治癒を促進する能力を個別に有する、超相加的阻害の種類を指す。「強化された」という用語は、抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくは抗コネキシンペプチド模倣剤、またはこれらの一方との組合せでもしくはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤の一つが、創傷治癒を促進する増大した能力を個別にもつ、超相加的効果の種類を指す。
一般に、それらの治療群それぞれにおいて個々の治療によりもたらされる平均創傷治癒増加の合計と比較した場合、組合せ治療が、治療群において統計学的に有意に超相加的な平均創傷治癒の増大をもたらすかどうかを判定することにより強化を評価することができる。平均創傷治癒の増大は、対照群の平均創傷治癒と、治療群の平均創傷治癒との間の差として計算することができる。創傷治癒の増加率である「作用率（ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｆｆｅｃｔｅｄ）」（Ｆａ）は、治療群における平均創傷治癒の増加を、対照群における平均創傷治癒で除することにより計算することができる。統計学的に有意な強化に対する検定は、各治療群に対するＦａの計算を必要とする。組合せ治療に対して予測される相加Ｆａは、組合せのいずれかのエレメントを投与される群に由来する平均Ｆａの合計であると理解することができる。例えば、１試料による両側Ｔ検定を用いて、実験により得られる結果が偶然だけに起因する可能性はどの程度であるかを、ｐ値による測定の形で評価することができる。０．０５未満のｐ値は統計学的に有意である、すなわち、偶然だけに起因する可能性は低いと考えられる。したがって、組合せの結果として強化された超相加効果がもたらされるとみなすために、組合せ治療群に対するＦａは、単一エレメントによる治療群に対して予測される相加Ｆａよりも統計学的に有意に高度でなければならない。
組合せ治療から相乗効果がもたらされるかどうかは、中央値効果／組合せ指標によるアイソボログラム法（Ｃｈｏｕ， Ｔ．およびＴａｌａｌａｙ， Ｐ．（１９８４年）、Ａｄ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇ．、第２２巻、２７〜５５頁）により評価することができる。この方法では、抗コネキシン剤単独に対する、創傷治癒に有用な１または複数の薬剤単独に対する、および固定したモル比での２者の組合せに対する中央値効果プロットに由来するパラメータに基づき、異なる用量効果レベルに対する組合せ指数（ＣＩ）値を計算する。ＣＩ値が＆１ｔ；１は相乗効果を示し、ＣＩ−１は相加効果を示し、ＣＰ１はアンタゴニスト効果を示す。この解析は、ＣａｌｃｕＳｙｎ，Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ Ｄｏｓｅ Ｅｆｆｅｃｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｂｉｏｓｏｆｔ（Ｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ）などのコンピュータソフトウェアツールを用いて実施することができる。
組合せ療法について、超相加効果が存在するかどうかを解析するための、当技術分野において公知であるかまたは将来的に開発される任意の方法は、組み合わせて用いるのに適する抗コネキシン剤のスクリーニングにおける使用が意図される。
別の好ましい実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤とを組み合わせて用いることにより、前記薬剤が単独で投与される場合の有効用量と比較して、任意のこのような薬剤の有効用量が低下する。一部の実施形態において、組み合わせて用いられる場合の薬剤の有効用量は、単独で用いられる場合の薬剤用量の約１／１５〜約１／２、約１／１０〜約１／３、約１／８〜約１／６、約１／５、約１／４、約１／３、または約１／２である。
別の好ましい実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方と組み合わせるかまたはこれらの両方と組み合わせる他の抗コネキシン剤とを組み合わせて用いることにより、前記薬剤が単独で投与される場合の頻度と比較して、前記薬剤が投与される頻度が低下する。したがって、これらの組合せにより、所望の治療目標を達成するのにかつて必要とされた場合よりも低量および／または低頻度の投与で、各薬剤を用いることができる。
用量は、単一の適用で投与することもでき、分割した適用で投与することもできる。用量は、一度に投与することもでき、適用を反復することもできる。創傷治癒が促進されるまで適用を毎週反復するか、または創傷治癒が遅れるかもしくは停滞する場合には反復適用を行いうることが典型的である。用量は、３〜７日間以上の間隔で適用することができる。慢性創傷の場合、例えば、毎週、もしくは隔週、もしくは毎月、または他の頻度、例えば、創傷治癒が遅れるかもしくは停滞する場合および時点において、反復適用を行うことができる。ある種の眼科使用など一部の適応の場合、最高１時間ごとのより高頻度の投与を用いることができる。
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を、同じ経路または異なる経路を介して投与することができる。本発明の各種の薬剤は、治療経過における異なる時点において個別に投与することもでき、組合せ形態を分割して投与することもでき、単一の組合せ形態で同時に投与することもできる。
本発明の一態様では、抗コネキシンポリヌクレオチドを１種の組成物で投与し、抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を第２の組成物で投与する。一実施形態では、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第１の組成物を、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む第２の組成物の前に投与する。一実施形態では、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第１の組成物を、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む第２の組成物の後に投与する。一実施形態では、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第１の組成物を、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む第２の組成物の前および後に投与する。一実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む第２の組成物を、１または複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第１の組成物の前および後に投与する。一実施形態では、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を含む第１の組成物を、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む第２の組成物とほぼ同時に投与する。
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤は、固体支持体（包帯材および他のマトリックスなど）および医薬製剤（ゲル、混合物、懸濁液、および軟膏など）を用いる局所投与を含むがこれらに限定されない局所投与（末梢投与または部位への直接投与）により送達されることが好ましい。一実施形態において、固体支持体は、生体適合膜または治療部位内への挿入を含む。別の実施形態において、固体支持体は、包帯材またはマトリックスを含む。本発明の一実施形態において、固体支持体組成物は、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤が、アルギン酸塩、コラーゲン、または合成の生体吸収性ポリマーのマトリックスなどの徐放固体マトリックス中に分散される、徐放の固体支持体組成物でありうる。固体支持体組成物は、無菌であるかまたは低バイオバーデンであることが好ましい。一実施形態では、２つ以上の抗コネキシン剤を含む洗浄液を用いることができる。
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方との組合せで投与されるかまたはこれらの両方との組合せで投与される他の抗コネキシン剤を含む製剤を、ある時間、場合によって、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８時間、または約２４時間以上にわたり送達することは、より重度の傷害または状態において特に有利でありうる。場合によって、細胞喪失は、手術部位をはるかに超えて、周囲の細胞にまで拡大しうる。このような喪失は、元の手術から２４時間以内に生じる可能性があり、ギャップジャンクションによる細胞間情報伝達またはヘミチャネルの開口によって媒介される。したがって、例えば、コネキシン発現の下方調節、またはコネクソン（ｃｏｎｎｅｘｉｎ）の開口もしくは活性の遮断もしくは阻害のための（１または複数の）抗コネキシン剤の投与により、細胞間情報伝達が調節されるか、またはコネクソン調節の場合には細胞外腔内への喪失が調節され、さらなる細胞の喪失もしくは傷害または傷害の帰結が最小化される。
下方調節が誘導される部位および所望される治療効果の両方に送達時間が依存する一方で、約０．５〜１時間、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８時間または約２４時間以上にわたる連続送達または徐放送達がもたらされる。本発明によれば、これは、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方と組み合わせるかまたはこれらの両方と組み合わせる他の抗コネキシン剤を、薬学的に許容される担体またはビークルと一体の製剤、特に、連続投与または徐放投与のための製剤の形態で組み入れることにより達成される。
言及の通り、本発明の１または複数の薬剤は、例えば、創傷前、創傷の間、創傷直後、または例えば、創傷後約１８０日以内、約１２０日以内、約９０日以内、約６０日以内、または約３０日以内に投与し得るが、好ましくは創傷後約１０日以内、約９日以内、約８日以内、約７日以内、約６日以内、約５日以内、約４日以内、約３日以内、または約２日以内に投与し得、最も好ましくは創傷後約２４時間以内、約１２時間以内、約１０時間以内、約９時間以内、約８時間以内、約７時間以内、約６時間以内、約５時間以内、約４時間以内、約３時間以内、約２時間以内、または創傷後約６０分以内、約４５分以内、約３０分以内、約１５分以内、約１０分以内、約５分以内、約４分以内、約３分以内、約２分以内、約１分以内に投与することができる。
医師により、任意の特定の患者および状態に対して最適な投与経路および用量が決定されるので、本明細書に記載の投与経路および用量は、指針だけのものとして意図される。
本明細書で言及または説明される創傷および／または状態を有する対象を治療する方法のいずれかでは、本明細書に記載の用量、剤形、製剤、および／または組成物のいずれかが投与されうる。
包帯材およびマトリックス
一態様において、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび／または１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤は、包帯材またはマトリックスの形態で提供される。一部の実施形態では、本発明の１または複数の薬剤が直接的な適用のための液体組成物、半固体組成物、もしくは固体組成物の形態で提供されるか、あるいは組成物が包帯材ガーゼもしくはマトリックスなどの固体接触層の表面へと適用されるか、またはこの中へと組み込まれる。包帯材組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供することができる。１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤は、局所適用のための従来の医薬賦形剤と組合せて提供することができる。適切な担体は、プルロニックゲル、ポロキサマーゲル、セルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびこれらの混合物を含む）を含有するヒドロゲル；ならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル（Ｃａｒｂｏｐｏｌｓ）を含む。適切な担体はまた、局所医薬調製物に用いられるクリーム／軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏に基づくクリームも含む。上記の担体は、アルギン酸塩（増粘剤または刺激剤として）、ベンジルアルコールなどの防腐剤、リン酸水素二ナトリウム／リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整のための緩衝液、塩化ナトリウムなどの浸透圧を調整するための薬剤、およびＥＤＴＡなどの安定化剤を含みうる。
既に言及した生物学的マトリックスに加え、適切な包帯材またはマトリックスは、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤（またはこれらの一方もしくは両方と組み合わせて投与される他の抗コネキシン剤）を伴う以下のものを含みうる。
１）吸収材：適切な吸収材は、例えば、セルロース、木綿、またはレーヨンなどの高度に吸収性の繊維層と組み合わせた、例えば、半接着質または非接着層をもたらしうる、例えば、吸収性包帯材を含みうる。代替的に、吸収材は、主要な（ｐｒｉｍａｒｙ）包帯材または補助的な（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）包帯材として用いることができる。
２）アルギン酸塩：適切なアルギン酸塩は、例えば、天然の多糖繊維または海藻に由来するキセロゲルからなる不織パッド、非接着パッド、およびリボンである包帯材を含む。適切なアルギン酸塩包帯材は、例えば、滲出物との接触の場合イオン交換過程を介して湿潤ゲルを形成しうる。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、やわらかく快適であり、不規則的な形状をした領域上での填塞、陥入、または適合が容易であるように設計される。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、第２の包帯材と共に用いることができる。
３）抗菌包帯材：適切な抗菌包帯材は、例えば、例えば銀およびポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）などの生体活性薬剤の送達を促進して、これが必要であるかまたは望ましい場所で、感染に対する効力を維持しうる包帯材を含みうる。一部の実施形態において、適切な抗菌包帯材は、例えば、スポンジ、浸透化織りガーゼ、フィルム包帯材、吸収性製品、アイランド包帯材、ナイロン繊維、非接着バリア、または材料の組合せとして入手可能でありうる。
４）生体物質および生合成物質：適した生体物質包帯材または生合成物質包帯材は、例えば、天然供給源（例えば、ブタまたはウシ）に由来するゲル、溶液、または半透性シートを含みうる。一部の実施形態において、ゲルまたは溶液は、治療部位に適用され、バリア保護のための包帯材により被覆される。別の実施形態では、膜として作用する可能性があり、単回の適用後においてその場に残存する生体物質基剤（例えば、ブタの腸粘膜または膀胱組織）もしくは生合成物質基剤のシートをｉｎ ｓｉｔｕで配置するか、または１もしくは複数、好ましくは２つの抗コネキシン剤を組み入れるように、生体物質包帯材もしくは生合成物質包帯材をあらかじめ調製することができる。
５）コラーゲン：適切なコラーゲン包帯材は、例えば、ウシ、ブタ、もしくは鳥類の供給源、または他の天然の供給源もしくはドナーに由来する、例えば、ゲル、パッド、粒子、ペースト、粉末、シート、または溶液を含みうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、治療部位における滲出物と相互作用してゲルを形成しうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、補助的な包帯材と組み合わせて用いることができる。
６）複合材料：適切な複合材料包帯材は、例えば、物理的に異なる成分を単一の生成物へと混合して、例えば、細菌バリア、吸収、および接着など複数の機能を提供する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、複数の層からなり、半接着パッドまたは非接着パッドを組み込む。一部の実施形態において、複合材料はまた、例えば、接着性の輪郭を有する不織布製テープまたは透明フィルムも含む。他の一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、主要な包帯材としても補助的な包帯材としても機能することが可能であり、さらに別の実施形態において、包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
７）接触層：適切な接触層包帯材は、例えば、ある領域上に配置されて、例えば、治療部位に適用された他の薬剤または包帯材との直接的な接触から組織を保護する、薄型の非接着シートを含みうる。一部の実施形態において、接触層は、治療部位領域の形状に調和するように配置することができ、また多孔性であるため、透過する滲出物を、上部の補助的な包帯材に吸収させることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
８）弾性包帯：適切な弾性包帯は、例えば、伸縮して身体の外形に調和する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、繊維成分は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨン、またはナイロンを含みうる。他の一部の実施形態において、弾性包帯は、例えば、第２層としてのまたは補助的包帯材としての吸収をもたらし、被覆をその場に保持するか、圧力を加えるか、または治療部位にクッションを与えることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
９）発泡体：適切な発泡体包帯材は、例えば、流体の保持が可能な小さな開放セルを有する、発泡ポリマー溶液（ポリウレタンを含む）のシートおよび他の形状を含みうる。例示的な発泡体は、例えば、他の材料と組み合わせて浸透化または層状化することができる。一部の実施形態では、発泡体の厚さおよび組成に基づいて吸収能を調製することができる。他の一部の実施形態において、治療部位と接触する領域は、取り外しを容易とするために非接着性でありうる。さらに別の実施形態において、発泡体は、接着性の輪郭および／または抗感染性バリアとして働きうる透明のフィルムコーティングと組み合わせて用いることができる。
１０）ガーゼおよび不織包帯材：適切なガーゼ包帯材および織地包帯材は、例えば、吸収性の程度が多様な乾燥織地スポンジまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織スポンジおよび吸収性の程度が多様な乾燥織地ラップまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織ラップを含みうる。例示的な繊維組成物は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨンを含みうる。一部の実施形態において、ガーゼおよび不織包帯材は、バルクにおいて滅菌の場合であれ非滅菌の場合であれ、また、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能でありうる。例示的なガーゼ包帯材および不織包帯材は、各種の治療部位を消毒、パッキング、被覆に用いることができる。
１１）親水コロイド：適切な親水コロイド包帯材は、例えば、ゼラチン、ペクチン、またはカルボキシメチルセルロースからなるウェハー、粉末、またはペーストを含みうる。一部の実施形態において、ウェハーは自己接着性であり、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能であり、また多種多様な形状およびサイズで入手可能である。例示的なハイドロコロイドは、外形合わせを必要とする領域において有用である。一部の実施形態において、粉末およびペーストの親水コロイドは、第２の包帯材と組み合わせて用いることができる。
１２）ヒドロゲル（アモルファス）：適切なアモルファスヒドロゲル包帯材は、例えば、水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持し、治療部位に水分を補給するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、補助的な包帯材カバーと組み合わせて用いることができる。
１３）ヒドロゲル：浸透化包帯材：適切な浸透化ヒドロゲル包帯材は、例えば、アモルファスヒドロゲルに浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。アモルファスヒドロゲルは、例えば、乾燥治療部位に水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。
１４）ヒドロゲルシート：適切なヒドロゲルシートは、例えば、水中において不溶性であり、膨潤により水溶液と相互作用する、架橋された親水性ポリマーの三次元ネットワークを含みうる。例示的なヒドロゲルは、高度に適合性でありそして透過性であり、それらの組成に応じて、広範な量のドレナージを吸収できる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、治療部位に対して非接着性であるか、または取り外しが容易であるように処置される。
１５）浸透化包帯材：適切な浸透化包帯材は、例えば、溶液、エマルジョン、油、ゲル、または例えば、食塩液、油、亜鉛塩、ワセリン、ゼロフォーム（ｘｅｒｏｆｏｒｍ）、およびスカーレットレッド（ｓｃａｒｌｅｔ ｒｅｄ）のほか、本明細書に記載の化合物を含む、他の一部の薬学的に活性な化合物もしくは担体薬剤に浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。
１６）シリコンゲルシート：適切なシリコンゲルシート包帯材は、例えば、メッシュまたは布により補強されるかまたはこれに結合した架橋ポリマーからなる軟質カバーを含みうる。
１７）溶液：適切な液体包帯材は、例えば、細胞外マトリックス中に見出される多タンパク質物質および他のエレメントの混合物を含みうる。一部の実施形態では、デブリドマンおよび洗浄の後において例示的な溶液を治療部位に適用し、次いで、吸収性包帯材または非接着性パッドにより被覆することができる。
１８）透明フィルム：適切な透明フィルム包帯材は、片面が接着剤によりコーティングされる、多様な厚さのポリマー膜を含みうる。一部の実施形態において、透明フィルムは液体、水、および細菌に対しては不透過性であるが、水蒸気および大気中の気体に対しては透過性である。一部の実施形態では、透明性により、治療部位が視覚化される。
１９）充填剤：適切な充填剤包帯材は、例えば、ビーズ、クリーム、発泡体、ゲル、軟膏、パッド、ペースト、クッション（ｐｉｌｌｏｗ）、粉末、ストランド、または他の調合物を含みうる。一部の実施形態において、充填剤は非接着性であり、経時放出型抗菌剤を含みうる。例示的な充填剤は、湿潤環境の維持、滲出物の管理、また、例えば、部分層創傷および全層創傷、感染創傷、排液性創傷、およびパッキングを要する深部創傷の治療に有用でありうる。
創傷の組合せ治療
一般的な態様
本発明は、治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいは１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび／または抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤と組み合わせた他の抗コネキシン剤を含む医薬組成物およびそれらの使用法を対象とする。組成物は、急性創傷、および慢性創傷などの予測される速度では治癒しない創傷、ならびに従来の創傷治療または創傷治癒促進療法に対して治癒が遅いかあるいは不応な場合もある他の創傷を含む創傷の治癒を増強または促進するのに有用である。
他の組織損傷（特に、創傷）の場合も同様に、本発明の方法および組成物は、創傷治癒過程の促進、腫脹および炎症の軽減、ならびに瘢痕形成の最小化において有効である。製剤は、それが外部外傷（火傷を含む）、内部外傷、または手術による介入のほか、慢性創傷のいずれの結果であれ、創傷の治療において明白な利益をもたらす。
組成物
したがって、一態様において、本発明は、少なくとも１種の抗コネキシンポリヌクレオチド、および少なくとも１種の抗コネキシンペプチドもしくは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはこれらの一方と組合せるかもしくはこれらの両方と組み合わせてまたは単独で投与される他の抗コネキシン剤を含む、治療的処置において用いられる組成物を提供する。好ましい実施形態において、組成物は、薬学的に許容される担体またはビークルをさらに含む。
好ましい一形態において、組成物は、１種のコネキシンタンパク質のｍＲＮＡだけに対する１または複数のアンチセンスポリヌクレオチドを含有する。別の好ましい形態において、組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。このコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。
別の好ましい形態において、組成物は、抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、およびコネキシンタンパク質のｍＲＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドを含む。このコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。
治療
一般的側面
本発明は、抗コネキシンポリヌクレオチドおよび／または抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤のうちの１つもしくは複数と組み合わせて、治療有効量の１もしくは複数のペプチドもしくはペプチド模倣剤、または１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤もしくはギャップジャンクション改変剤、または他の抗コネキシン剤を含む、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための医薬組成物およびその使用法に向けられている。
他の実施形態では、治療有効量以下の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、および／またはギャップジャンクション改変剤が、目的の治療効果を与えるために、単独でもしくは組み合わせて使用されるまたは提供される。
組成物
したがって、一態様では、本発明は、一方ともしくは両方と組み合わせて、または単独で投与される少なくとも１つの抗コネキシンポリヌクレオチドおよび少なくとも１つの抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤またはギャップジャンクション改変剤を含む、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療において使用するための組成物を提供する。好ましい実施形態では、前記組成物は、薬剤的に許容可能な担体または媒体をさらに包含する。
特定の実施形態では、治療有効量以下の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、および／またはギャップジャンクション改変剤を含む組成物は、目的の治療効果を与えるために、単独でもしくは組み合わせて使用してもよいし、または提供してもよい。
好ましい一形態において、組成物は、１種のコネキシンタンパク質のｍＲＮＡだけに対する１または複数のアンチセンスポリヌクレオチドを含有する。別の好ましい形態において、組成物は、１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤（例えば、ギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド）を含む。このコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。
別の好ましい形態において、組成物は、抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、およびコネキシンタンパク質のｍＲＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドを含む。このコネキシンは、コネキシン４３であることが最も好ましい。
組成物は、複数種のコネキシンタンパク質を対象とする、抗コネキシンポリヌクレオチドもしくは抗コネキシンペプチド、またはこれらの一方もしくは両方を伴う他の抗コネキシン剤を含みうる。ポリヌクレオチドもしくは抗コネキシンペプチドまたは他の抗コネキシン剤が対象とするコネキシンタンパク質の１つが、コネキシン４３であることが好ましい。ポリヌクレオチドもしくは抗コネキシンペプチドまたは他の抗コネキシン剤が対象とする他のコネキシンは、例えば、コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４４．６、４５、および４６を含みうる。各種のコネキシンを対象とするのに適する例示的なポリヌクレオチド（およびＯＤＮ）を、表１に記載する。本明細書では、適切な抗コネキシンペプチドもまた提供される。適切なギャップジャンクションリン酸化剤またはヘミチャネルリン酸化剤およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドは、当技術分野において公知である。
キット、薬剤、および製品
場合によって、抗コネキシンペプチド、あるいは１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤はまた、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための薬剤の製造においても用いることができる。
一態様において、本発明は、記載される１もしくは複数の組成物または製剤を含む、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するためのキットを提供する。例えば、本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を、単独で含むかまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤との組合せで含む組成物を含むキットを含む。例えば、キットは、有効量の抗コネキシンペプチド、あるいは１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤を含む組成物を含みうる。
整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するための製品であって、本明細書に記載の本発明の組成物または製剤を含有する容器と、対象の治療のために用いられる指示書とを含む製品もまた提供される。例えば、別の態様において、本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を、単独で含むかまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤との組合せで含有する容器を含む製品を含む。別の態様において、本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチド、あるいは１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤および／または他の抗コネキシン剤を含有する容器と、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための使用を含む使用のための指示書とを含む製品を含む。別の態様では、治療有効量以下の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、および／またはギャップジャンクション改変剤が、目的の治療効果を与えるために単独でまたは組み合わせて使用されるかまたは提供される。
治療
本発明の組成物および製剤は、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための組成物と併用してまたは組み合わせて使用してもよい。
一態様では、本発明は、種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象の治療のための方法であって、治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤を単独で、あるいは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤、または随意に、１もしくは複数の抗コネキシンヌクレオチドおよび１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクションもしくはヘミチャネルリン酸化剤もしくはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤と組み合わせて投与することを含む方法に向けられている。別の態様では、治療有効量以下の１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、および／またはギャップジャンクション改変剤が、目的の治療効果を与えるために単独でまたは組み合わせて使用されるかまたは提供される。
一実施形態では、整形外科疾患、障害および状態は、例えば、例えば、前十字靭帯（ａｃｌ）損傷、肩の関節炎、膝の関節軟骨損傷、Ｏ脚、骨折した背骨、骨折股関節（骨盤）、骨折した脚、骨折した頚部、腱膜瘤、滑液包炎、手根管症候群、慢性腰痛症、内反足、脊椎湾曲（脊柱側弯症）、糖尿病足、肘の脱臼、股関節脱臼、デュピュイトラン拘縮、偏平足、足奇形、小児の前腕骨折、血友病関節炎、椎間板ヘルニア（椎間板破裂）、股関節唇裂傷、股関節炎、感染性関節炎、炎症性股関節状態、母趾内反、膝関節炎、Ｘ脚、半月板裂傷、骨関節炎、骨壊死、骨粗鬆症、関節リウマチ、回旋腱板損傷、脊柱側弯症、肩関節炎、肩関節不安定症、肩痛、椎間板破裂（椎間板ヘルニア）、脊柱管狭窄／変性脊椎すべり症、脊椎すべり症、足へのスポーツ損傷、足関節捻挫、腱炎、母指関節炎、ばね指を含む整形外科疾患、障害および状態が挙げられる。
一態様において、本発明は、外科手術後の患者を治療する方法であって、治療有効量の１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤を単独で投与するかまたは１もしくは複数のギャップジャンクション改変剤と組み合わせて投与するか、あるいは場合によって、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤を投与する工程を含む方法を対象とする。特定の実施形態では、投与は術後関節性拘縮に有効である。特定の実施形態では、投与は、拘縮を全体的にまたは部分的に予防または軽減するのに有効である。特定の実施形態では、投与は、術後の対象における回復時間を改善するのに有効である。一実施形態では、投与は、術後の対象における疼痛を軽減するのに有効である。一実施形態では、投与は、術後の対象における全体的回復結果を改善するのに有効である。一実施形態では、改善された回復結果は術後運動性の増加を含む。一実施形態では、投与は、手術部位内または周囲における血管損傷を予防または軽減するのに有効である。他の実施形態では、治療有効量以下の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣剤、および／またはギャップジャンクション改変剤は、目的の治療もしくは他の効果を与えるために単独でまたは組み合わせて使用されるまたは提供される。
一実施形態では、前記方法は、以下の整形外科的処置、すなわち、関節鏡視下手術、関節手術（例えば、関節置換術を含む股、肩または膝手術）のうちの１つの後の対象の治療を含む。一般に、本明細書に記載され主張される本発明品を使用して取り組まれる整形外科手術には、手の手術、肩および肘の手術、全関節再建（関節形成術）、足および足首の手術、脊椎手術、外科的スポーツ医学、ならびに整形外科的外傷が挙げられる。したがって、例えば、整形外科手術には、膝関節鏡視下手術および半月板切除術、肩関節鏡視下手術および徐圧術、手根管開放術、膝関節鏡視下手術および軟骨形成術、サポートインプラントの除去、膝関節鏡視下手術および前十字靭帯再構築、人工膝関節置換術、大腿骨頚部骨折の修復、転子骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリドマン、両半月板の膝関節鏡視下手術修復、人工股関節置換術、肩関節鏡視下手術／遠位鎖骨切除術、回旋腱板腱の修復、橈骨／尺骨の修復骨折、椎弓切除術、足首骨折の修復（両果タイプ）、肩関節鏡視下手術およびデブリドマン、腰椎固定術、遠位橈骨の修復骨折、腰部椎間板手術、切開手指腱鞘、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹軸骨折の修復、転子骨折の修復が挙げられる。関節炎の膝の片側のみが置換される膝関節片側置換術、および肘、手首、足首、および指を含む他の関節の関節置換術同様に、人工股関節全置換術、人工肩関節全置換術、および人工膝関節全置換術も含まれる。整形外科的手術には、骨移植術、すなわち、患者自身の体由来の材料、または人工、合成もしくは天然代用骨を使用して欠けた骨を置換する手術も含まれる。
すでに罹患している疾患、障害または状態の場合、本発明の組成物を使用して、関節内および／または周囲における再発異常組織形成および／または追加の拘縮形成を予防するためにリリース処置（例えば、強制操作、オープンリリース、関節鏡リリース、または瘢痕の減量）を補完することができる。例えば、本発明の一実施形態において、抗コネキシン剤を含む有効量の組成物を投与することを含む、手根管症候群（例えば、手根管開放術）、関節内および／もしくは周囲における拘縮（「関節性拘縮」）、またはその再発を治療するための方法が提供される。一実施形態では、前記組成物は、リリース処置の前、時点、または後に傷害の部位に投与される。
一態様では、本発明は、治療有効量の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤を、１または複数のギャップジャンクション改変剤と組み合わせて投与することを含む、手術の後の対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するための方法に向けられている。一実施形態では、抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤は手術結果を改善するのに有効である。一実施形態では、抗コネキシンペプチド、ペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤は、拘縮を予防または軽減するのに有効である。他の実施形態では、治療有効量以下の１または複数の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤、１または複数のギャップジャンクション改変剤は、目的の治療効果を与えるために単独でまたは組み合わせて使用または提供される。
一実施形態において、抗コネキシン剤は、コネキシンタンパク質の発現を下方調節または阻害するのに有効なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドである。一実施形態において、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシン２６のアンチセンスポリヌクレオチド、ペプチド、またはペプチド模倣剤、コネキシン４３のアンチセンスポリヌクレオチド、ペプチド、もしくはペプチド模倣剤、またはこれらの混合物である。
一態様において、本発明は、抗コネキシンペプチド（例えば、ペプチド模倣剤などのヘミチャネル遮断剤）、あるいは１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤の持続投与、あるいは場合によって、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および／または１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤の持続投与を対象とする。一実施形態において、抗コネキシン剤は、少なくとも約０．５時間、約１〜２４時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間にわたり投与される。一実施形態において、コネキシンの発現は、持続的な期間にわたり阻害または下方調節される。別の実施形態において、コネキシンヘミチャネルは、好ましい期間にわたり、全体的または部分的に遮断されるかまたは閉鎖される。持続的な期間にわたり、全体的または部分的に、コネキシン４３の発現が阻害または下方調節され、コネキシンヘミチャネルの開口が遮断されるかまたは阻害されることが好ましい。少なくとも約１、２、４、６、８、１０、１２、または２４時間にわたりコネキシン４３の発現が下方調節されるか、またはヘミチャネルが遮断されるかもしくは阻害されると好都合である。
固定した組合せとして投与されない場合、好ましい方法は、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいは場合によって、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および／または１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤の逐次投与を含む。薬剤は、互いから少なくとも約３０分以内に逐次投与されることが好ましい。薬剤はまた、互いから約１時間以内に投与することもでき、互いから約１日〜約１週間以内に投与することもでき、適切であるとみなされる他の形で投与することもできる。抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、例えば、ヘミチャネルの開口を遮断するかまたは低下させうる抗コネキシン剤は、例えば、コネキシンタンパク質発現の下方調節により、コネキシン発現またはヘミチャネルの形成もしくはギャップジャンクションの形成を遮断するかまたは低下させる抗コネキシン剤の投与よりも前に投与されることが好ましい。１または複数の抗コネキシン剤は、（１または複数の）抗コネキシン４３剤であることが好ましい。
整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療するための別の実施形態では、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいは場合によって、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および／または１もしくは複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤の一方または両方が、１または複数の薬剤が単独で投与される場合（すなわち、それらが組み合わせて投与されない場合）に用いられる量または用量よりも少ない量または用量で供給される。投与される薬剤のこのような低量は、単独で投与される場合の該薬剤の１つの量または複数の量の約２０分の１〜約１０分の１であることが典型的であり、単独で投与される場合の量の約８分の１、単独で投与される場合の量の約６分の１、単独で投与される場合の量の約５分の１、単独で投与される場合の量の約４分の１、単独で投与される場合の量の約３分の１、および単独で投与される場合の量の約２分の１でありうる。治療されうる対象は、哺乳動物、好ましくはヒトを含む。
一実施形態において、整形外科的処置もしくは手術中または後における対象、または種々の整形外科関連疾患、障害もしくは状態に罹患している、その素因がある、もしくはその危険性がある対象を治療する方法は、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤、あるいは場合によって、１もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、および１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、または場合によって１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび／もしくは１または複数の抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、あるいはギャップジャンクションリン酸化剤もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドなどのギャップジャンクション改変剤の持続投与を含む。一実施形態において、１または複数の組成物は、持続放出製剤において投与される。別の実施形態において、１または複数の組成物は、持続的な期間にわたり投与される。組成物は少なくとも約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約４〜８時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間にわたり、コネキシン４３レベルを低下させるか、またはコネキシン４３ヘミチャネルの開口を遮断するかもしくは抑制するのに有効であると好都合である。治療されうる対象は、哺乳動物、好ましくはヒトを含む。
以下の実施例は、例示のみを目的として記載されるものであり、本発明の範囲に対する限定を構成するものではないと理解される。
（実施例１）
関節内注射による最大耐量決定
以下の例示的な配列：ＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号１９）を用いて調製された抗コネキシン４３ペプチド製剤を逐次投与し、続いて以下の例示的な配列：ＧＴＡＡＴＴＧＣＧＧＣＡＧＧＡＧＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣＴＣＴＣ（コネキシン４３）（配列番号２）およびＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＡＴＴＴＡＣ（センス対照）（配列番号７）を用いて調製された抗コネキシン４３ポリヌクレオチド製剤を投与する方法を、整形外科関連状態の治療における効力について評価する。
少なくとも生後６週間の雄ハートレイモルモットを密封チャンバー中で５％イソフルランを使用して麻酔する。前記動物の体重を量り、次に２％イソフルランでノーズコーン（ｎｏｓｅ ｃｏｎｅ）により麻酔が維持される手術台に移す。両脚の膝領域を剪毛し、大腿骨頭の膝幅を両脚で測定する。右膝の皮膚を殺菌する。２５Ｇ針を内側到達法を使用して滑液腔に導入し、０．１ｍｌの試験製剤を注射する。注射の７日後、前記動物は深麻酔（５％イソフルラン）下で０．７ｍｌ Ｅｕｔｈａｎｙｌの心臓注射により屠殺する。
耐容性の評価：膝機能は、歩行方法の変化および圧痛の徴候を記録することにより屠殺前に評価される。前記動物は、屠殺後直ちに体重を量る。次に、大腿骨頭の両膝の幅をキャリパーを使用して測定する。四頭筋腱を横に切断し、外側と内側の関節包を切り開き、脛骨を覆う膝蓋骨をひっくり返すことによって膝関節は切開される。皮下組織の他にも内部関節構造における膨腫、血管新生、液体貯留の徴候および色の変化を記録することにより膝炎症を評価する。
（実施例２）
脊髄手術モデル
本明細書に記載されるウサギ椎弓切除脊髄癒着モデルを使用して、抗コネキシン剤の局所投与による脊髄瘢痕および異常組織形成（例えば、癒着）の予防を調査する。有意義な統計的分析を可能にするために各実験グループには５〜６匹の動物が含まれることになる。瘢痕および癒着形成の阻害を評価するために、様々な濃度の抗コネキシン剤を有する製剤が対照動物に対して試験される。
ケタミン／ジラジンの筋肉注射によりウサギを麻酔する。ハロタンを使用した麻酔維持のために気管内チューブを挿入する。前記動物を、手術台上の加温パッドの上にうつぶせに乗せ、背中の下半分の皮膚を剪毛し無菌手術に備える。長径正中線皮膚切開を、Ｌ−１からＬ−５までおよび腰仙部筋膜の下方へ行う。筋膜を切開して、棘突起先端を露出させる。傍脊柱筋群を解体して、棘突起およびＬ−４の薄膜から後退させる。薄膜を両側から慎重に切除して棘突起を除去することによりＬ−４において椎弓切除を実施し、こうして小さな５×１０ｍｍの椎弓切除欠損を作り出す。うっ血はゼルフォームを使用して得られる。試験製剤を傷害の部位に適用し、傷はＶｉｃｒｙｌ縫合糸で層内に閉じる。前記動物は麻酔から覚醒するまでインキュベータ中に置き、次に檻に戻す。
手術の２週間後、前記動物は上記の手順に類似する手順を使用して麻酔する。動物はＥｕｔｈａｎｙｌを使用して安楽死させる。皮膚切開の後、椎弓切除部位を解体により分析し、瘢痕および癒着の量を、この種の損傷について科学文献に発表されている採点システムを使用して点数化する。
（実施例３）
腱手術モデル
このモデルは、抗コネキシンペプチドおよび抗コネキシンポリヌクレオチドの局所化された逐次投与により予防することができる腱損傷の予防に使用される。徐放性製剤には、薬物、好ましくは１または複数の抗コネキシン４３剤が負荷され、ウサギの損傷腱の周囲に埋め込まれる。
前記ウサギは麻酔され、右後肢上の皮膚を剪毛し、無菌手術に備える。無菌手術は、手術用顕微鏡の助けを借りて実施される。長径正中線皮膚切開は、指２および４において基節骨の裏側の掌側で行われる。腱の滑液鞘を慎重に露出させ、浅指屈筋分岐から遠位の深指屈筋に接近するために横方向に切開される。腱損傷は、湾曲鉗子を使用して深指屈筋を穏やかに持ち上げ、その組織の半分まで横方向に切開することにより実施する。試験製剤は、２本の指のうち無作為に選択される１本の鞘における腱周囲に適用される。他の指は未処理のままにして、対照として使用される。次に、前記鞘は６〜０ナイロン縫合糸で修復される。腱と鞘を単一の単位として固定化するために、固定化６〜０ナイロン縫合糸を、横中手靭帯を通して腱／鞘複合体まで挿入させる。傷は４〜０結節縫合糸を使用して閉ざす。後足の周りに包帯を巻いて、指の固定化をさらに増強し、動物の快適さと歩行運動を確保する。動物は正常な状態に戻され檻に戻される。
手術の３週間後、前記動物は麻酔される。皮膚切開後、滑液鞘周囲の組織平面は解体され、腱鞘複合体はエンブロックに摘出され、病理組織学的分析のために１０％リン酸緩衝ホルムアルデヒド中に移される。次に前記動物を安楽死させる。パラフィン包埋後、一連の５μｍ薄横断面は鞘と腱複合体を通じて２ｍｍごとに切断される。薄片はＨ＆Ｅおよびモバト染料で染色され、癒着増殖を評価する。各スライドは、デジタル顕微鏡カメラ（ニコンＭｉｃｒｏｐｕｂｌｉｓｈｅｒ冷却カメラ）に接続されたコンピュータを使用してデジタル化される。次に、画像解析ソフトウェア（ＩｍａｇｅＰｒｏ）を使用して形態計測分析を実施する。滑膜腔を抹消する物質として定義される癒着の厚みと面積が測定され、製剤治療された動物と対照動物間で比較される。
（実施例４）
抗コネキシン剤は、好都合には、本発明の方法による投与に適する形態に調合される。
適当な製剤は、以下の調合剤の混合物を含む。１つまたは複数の個々の抗コネキシン剤および調合剤の量は、予定される特定の用途に依存するはずである。
Figure 2011507858
 （実施例５）
本発明の方法による使用のための製剤を、下記の割合で化合物を混合することによって調製する。好ましい一実施形態において、抗コネキシン剤は、抗コネキシンポリヌクレオチドである。別の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号１のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
製剤Ａ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中抗のコネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．３３％）。製剤は、ｐＨ約６．７４および浸透圧モル濃度２４４の透明なゲルである。
製剤Ｂ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；０．５％ＢＡＣ（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．２３％）。製剤は、ｐＨ約６．６５および浸透圧モル濃度２３０の透明なゲルである。
製剤Ｃ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ポリクオタニウム１０（０．５％）；ポロキサマー１８８（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９５．７３％）。製剤は、ｐＨ約６．５９および浸透圧モル濃度２３３のやや濁ったゲルである。
製剤Ｄ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ＳＬＥＳ（０．５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９５．８３％）。製剤は、ｐＨ約６．８および浸透圧モル濃度２４６の透明なゲルである。
製剤Ｅ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ポロキサマー１８８（０．１％）；２５Ｋポリエチレンイミン（０．０７５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．１５５％）。製剤は、ｐＨ約７．８および浸透圧モル濃度２４９の濁ったゲルである。
製剤Ｆ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ヒアルロン酸ナトリウム（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．２３％）。製剤は、ｐＨ約６．８８および浸透圧モル濃度２８９の透明なゲルである。
製剤Ｇ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ヒアルロン酸ナトリウム（１．０％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．８３％）。製剤は、ｐＨ約６．８１および浸透圧モル濃度２４８の透明なゲルである。
本明細書において参照されたかまたは言及されたすべての特許、出版物、科学論文、ウェブサイトならびに他の文書および資料は、本発明が属する技術分野の当業者の技術水準を示すものであり、これらの参照文書および資料はそれぞれ、個別にその全体が参照により組み込まれたか、またはその全体が本明細書に記載された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、任意の上記の特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および別の参照資料または文書の、任意のおよびすべての資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を保有する。
本明細書に記載されている具体的な方法および組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、それらは例示的であって本発明の範囲を限定するものではない。別の目的、態様、および実施形態が、本明細書を考慮すれば当業者には思いつくはずであり、本特許請求の範囲によって定義されている通り本発明の精神に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な置換および変更を本明細書に開示されている本発明に対して行ってもよいことが、当業者には容易に明らかとなるはずである。例示的に本明細書に適当に記載されている本発明は、本明細書において不可欠であると特に開示されていない任意の１つまたは複数の要素、あるいは１つまたは複数の限定の不在下で実施されてもよい。したがって、例えば、本発明の実施形態または実施例において、本明細書におけるそれぞれの場合において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれかの用語は、本明細書中の他の２つの用語のいずれかと置き換えてもよい。また、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有している」などの用語は、包括的であって限定ではないと読み取るべきである。例示的に本明細書に記載されている方法およびプロセスは、異なる順序の工程で適当に実施されてもよく、必ずしも本明細書または本特許請求の範囲に示された工程の順序に制限されない。本明細書および添付の特許請求の範囲においても使用されているように、単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示のない限り複数形への言及を含む。いかなる場合においても、本特許は、本明細書に特に開示されている具体的な実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されるものではない。いかなる場合においても、本特許は、そのような陳述が、出願人による答弁書において明確に認められた限定または制限がなければ、特許商標庁のいかなる審査官またはいかなる別の当局者もしくは関係者によってなされたいかなる陳述によっても限定されると解釈されるものではない。
採用されている用語および表現は、説明であって限定するものではない用語として使用され、このような用語および表現の使用において、示されているおよび説明されている特徴のいかなる均等物またはその一部も除外する意図はないが、請求されている本発明の範囲内で様々な変更形態が可能であることが認識される。したがって、本発明を、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示してきたが、本明細書に開示されている概念の変更形態および変形形態が当業者によって用いられてもよいこと、およびこのような変更形態および変形形態が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされることが理解されるはずである。
本発明が、本明細書において広く一般的に記載された。一般的開示に含まれるそれぞれのより狭い種（ｓｐｅｃｉｅｓ）および亜属集団（ｓｕｂｇｅｎｅｒｉｃ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）もまた、本発明の一部を形成する。これは、削除された材料が本明細書で具体的に挙げられているか否かに関係なく、その属の任意対象を除くという条件または否定的な限定を伴う本発明の一般的記載を含む。
別の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュ（Ｍａｒｋｕｓｈ）グループに関して記載される場合、当業者は、本発明がマーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関してもそれによって記載されることを認識するはずである。

Claims (80)

  1. 整形外科的処置を受けている対象を治療する方法であって、治療有効量の第１の抗コネキシン剤および第２の抗コネキシン剤を含む組成物を、前記整形外科的処置の前、時点、または後に前記対象の中の傷害の部位に投与することを含み、ここで、前記第１の薬剤が抗コネキシンポリヌクレオチド剤であり前記第２の薬剤が抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤である、方法。
  2. 手術結果が改善される、請求項１に記載の方法。
  3. 前記手術結果が、改善された回復時間、軽減された疼痛および／または改善された運動性である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記ポリヌクレオチドがアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
  5. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが配列番号１〜１２から選択される配列を含む、請求項４に記載の方法。
  6. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号１）；ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号２）；およびＧＧＣ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＡＧＡ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＴ（配列番号３）から選択される請求項４に記載の方法。
  7. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、生理学的条件下において２０℃を超える融点を有する二重鎖を形成するのに十分な程度にコネキシン４３ ｍＲＮＡに対して相補的である、請求項４に記載の方法。
  8. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、コネキシン４３ ｍＲＮＡのアンチセンス配列に対して少なくとも約７０パーセントの相同性を有する、請求項４に記載の方法。
  9. 前記組成物が、約０．１〜約１０００マイクログラムの前記抗コネキシン剤を含み、前記抗コネキシン４３剤がアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
  10. 前記ペプチドが、配列番号１５〜２３から選択される配列を含む、請求項１に記載の方法。
  11. 前記組成物が、約０．０１〜約１００ミリグラムの前記抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤を含む、請求項１に記載の方法。
  12. 前記抗コネキシンポリヌクレオチド剤が、ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
  13. 前記対象が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
  14. 前記哺乳動物がヒトである、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記哺乳動物が、家畜動物、農場動物、動物園動物、スポーツ動物、およびペットからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記哺乳動物がウマである、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記哺乳動物がイヌまたはネコである、請求項１５に記載の方法。
  18. 整形外科手術後の対象における疼痛を軽減する方法であって、第１の組成物および第２の組成物を投与することを含み、前記第１の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含み、前記第２の組成物が治療有効量の抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣剤を含む方法。
  19. 手術結果が改善される、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記手術結果が、改善された回復時間、軽減された疼痛および／または改善された運動性である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記第１および第２の組成物が同時に投与される、請求項１８に記載の方法。
  22. 前記第１および第２の組成物が互いから少なくとも約１時間以内に投与される、請求項１８に記載の方法。
  23. 第１および第２の組成物が互いから約５分以内に、互いから約１０分以内に、互いから約１５分以内に、または互いから約３０〜９０分以内に投与される、請求項１８に記載の方法。
  24. 前記第１の組成物が最初に投与される、請求項１８に記載の方法。
  25. 前記第２の組成物が最初に投与される、請求項１８に記載の方法。
  26. 第３の組成物の投与をさらに含み、前記第３の組成物が抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチド、抗コネキシンペプチド模倣剤、またはギャップジャンクション改変剤を含む、請求項１８に記載の方法。
  27. 前記第３の組成物が最初に投与される、請求項１８に記載の方法。
  28. 前記ポリヌクレオチドがアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
  29. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが配列番号１〜１２から選択される配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記アンチセンスポリヌクレオチドがＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号１）；ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号２）；およびＧＧＣ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＡＧＡ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＴ（配列番号３）から選択される、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、生理学的条件下において２０℃を超える融点を有する二重鎖を形成するのに十分な程度にコネキシン４３ ｍＲＮＡに対して相補的である、請求項２８に記載の方法。
  32. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、コネキシン４３ ｍＲＮＡのアンチセンス配列に対して少なくとも約７０パーセントの相同性を有する、請求項２８に記載の方法。
  33. 前記組成物が約０．１〜約１０００マイクログラムの前記抗コネキシン剤を含み、前記抗コネキシン４３剤がアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
  34. 前記ペプチドが配列番号１５〜２３から選択される配列を含む、請求項１８に記載の方法。
  35. 前記組成物が、約０．０１〜約１００ミリグラムの前記抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤を含む、請求項１８に記載の方法。
  36. 前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
  37. 前記対象が哺乳動物である、請求項１８に記載の方法。
  38. 前記哺乳動物がヒトである、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記哺乳動物が、家畜動物、農場動物、動物園動物、スポーツ動物、およびペットからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
  40. 前記哺乳動物がウマである、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記哺乳動物がイヌまたはネコである、請求項３９に記載の方法。
  42. 整形手術後の対象における疼痛を軽減する方法であって、前記手術中にまたは前記手術の終了時に１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣剤および１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与することを含む方法。
  43. 前記ポリヌクレオチドがアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、配列番号１〜１２から選択される配列を含む、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号１）；ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号２）；およびＧＧＣ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＡＧＡ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＴ（配列番号３）から選択される、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、生理学的条件下において２０℃を超える融点を有する二重鎖を形成するのに十分な程度にコネキシン４３ ｍＲＮＡに対して相補的である、請求項４３に記載の方法。
  47. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、コネキシン４３ ｍＲＮＡのアンチセンス配列に対して少なくとも約７０パーセントの相同性を有する、請求項４３に記載の方法。
  48. 前記組成物が約０．１〜約１０００マイクログラムの前記抗コネキシンポリヌクレオチドを含み、前記抗コネキシン４３ポリヌクレオチドがアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項４２に記載の方法。
  49. 前記ペプチドが配列番号１５〜２３から選択される配列を含む、請求項４２に記載の方法。
  50. 前記組成物が、約０．０１〜約１００ミリグラムの前記抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤を含む、請求項４２に記載の方法。
  51. 前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項４２に記載の方法。
  52. 前記対象が哺乳動物である、請求項４２に記載の方法。
  53. 前記哺乳動物がヒトである、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記哺乳動物が、家畜動物、農場動物、動物園動物、スポーツ動物、およびペットからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
  55. 前記哺乳動物がウマである、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記哺乳動物がイヌまたはネコである、請求項５４に記載の方法。
  57. 整形外科処置または手術中または後における、対象の治療に使用するための医薬組成物であって、治療有効量の抗コネキシン４３ポリヌクレオチドおよび抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣剤を含む医薬組成物。
  58. 前記ポリヌクレオチドがアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項５７に記載の医薬組成物。
  59. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、配列番号１〜１２から選択される配列を含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
  60. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号１）；ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＴＣ（配列番号２）；およびＧＧＣ ＡＡＧ ＡＧＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＡＧＡ ＣＡＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＴ（配列番号３）から選択される、請求項５８に記載の医薬組成物。
  61. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、生理学的条件下において２０℃を超える融点を有する二重鎖を形成するのに十分な程度にコネキシン４３ ｍＲＮＡに対して相補的である、請求項５８に記載の医薬組成物。
  62. 前記アンチセンスポリヌクレオチドが、約１５〜約３５ヌクレオチドを有し、コネキシン４３ ｍＲＮＡのアンチセンス配列に対して少なくとも約７０パーセントの相同性を有する、請求項５８に記載の医薬組成物。
  63. 前記組成物が約０．１〜約１０００マイクログラムの前記抗コネキシン剤を含み、前記抗コネキシン４３剤がアンチセンスポリヌクレオチドである、請求項５８に記載の医薬組成物。
  64. 前記ペプチドが配列番号１５〜２３から選択される配列を含む、請求項５７に記載の医薬組成物。
  65. 前記組成物が、約０．０１〜約１００ミリグラムの前記抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤を含む、請求項５７に記載の医薬組成物。
  66. 前記抗コネキシン剤が、ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項５７に記載の医薬組成物。
  67. 局所投与用に処方される請求項５７に記載の医薬組成物。
  68. ゲルとして処方される請求項５７に記載の医薬組成物。
  69. 前記ゲルが、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーベースのゲルまたはカルボキシメチルセルロースベースのゲルである、請求項５７に記載の医薬組成物。
  70. 前記ゲルがプルロニックゲルである、請求項５７に記載の医薬組成物。
  71. 術後の対象における疼痛を予防または軽減するのに有効な、請求項５８に記載の医薬組成物。
  72. 整形外科手術または処置に伴う血管損傷を予防または軽減するのに有効な、請求項５８に記載の医薬組成物。
  73. 手術結果を改善するのに有効な、請求項５８に記載の医薬組成物。
  74. 整形外科手術または処置からの全体的回復を改善するのに有効な、請求項５８に記載の医薬組成物。
  75. 整形外科処置または手術中または後における、対象の中または表面で使用するための指示書と共に、請求項５７に記載の医薬組成物を含有するパッケージ材料を含む製品。
  76. 整形外科的処置を受けている対象を治療する方法であって、治療有効量の抗コネキシンペプチドを含む組成物を、単独でまたは抗コネキシンオリゴヌクレオチド、ヘミチャネルリン酸化化合物、およびＺＯ−１タンパク質相互作用を阻害するためのコネキシンカルボキシ末端ペプチドのうちの１つもしくは複数と組み合わせて、前記整形外科的処置の前、時点、または後に前記対象の中の傷害の部位へ投与することを含み、手術結果が改善される方法。
  77. 前記コネキシンがコネキシン４３である、請求項７６に記載の方法。
  78. 整形外科的処置を受けている対象を治療する方法であって、術後の疼痛、運動性および／または回復時間を改善するのに十分な量の抗コネキシンペプチドを含む組成物を、単独で、またはコネキシンタンパク質の発現を下方調節するための抗コネキシンオリゴヌクレオチド、ヘミチャネルを閉鎖するためのヘミチャネルリン酸化化合物、およびＺＯ−１タンパク質相互作用を阻害するためのコネキシンカルボキシ末端ペプチドのうちの１つもしくは複数と組み合わせて、前記整形外科的処置の前、時点、または後に前記対象の中の傷害の部位へ投与することを含み、手術結果が改善される方法。
  79. 前記コネキシンがコネキシン４３である、請求項７８に記載の方法。
  80. 対象の中の整形外科手術後関節性拘縮を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、有効量の抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含む第１の組成物および治療有効量のコネキシン４３ペプチドもしくはペプチド模倣剤を含む第２の組成物を含む組成物を、前記手術中または後に前記対象に投与することを含む方法。
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