JP2011506289A - ジベンゾアゼピンおよびジベンゾオキサゼピン・ｔｒｐａ１アゴニスト - Google Patents

Abstract

【化１】

本発明は、ＴＲＰＡ１受容体アゴニスト特性を有する式（Ｉ）の新規な三環式化合物、これらの化合物を含んでなる製薬学的組成物、これらの化合物を製造する化学的方法、および薬理学的ツールとして、または刺激原不能化薬（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｔｓ）として、または動物、特にヒトにおけるＴＲＰＡ１受容体の調節に関連した疾病の処置におけるそれらの使用に関する。

Description

本発明は、ＴＲＰＡ１受容体アゴニスト特性を有する式（Ｉ）の新規な三環式化合物、これらの化合物を含んでなる製薬学的組成物、これらの化合物を製造する化学的方法、および薬理学的ツールとして、または刺激原不能化薬（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｔｓ）として、または動物、特にヒトにおけるＴＲＰＡ１受容体の調節に関連した疾病の処置におけるそれらの使用に関する。

従来はＡＮＫＴＭ１と名付けられた一過性受容体電位Ａ１（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ａ１（ＴＲＰＡ１））受容体は、陽イオン選択性チャンネルの一過性受容体電位（ＴＲＰ）ファミリーに属し、これは機械的、熱的および疼痛関連の炎症シグナルを変換することが示されている（参照、例えば、非特許文献１；非特許文献２）。

ＴＲＰＡ１は、カルシウムおよびナトリウムイオンのような陽イオンの流動を調節することによって膜電位を調節する非選択性カルシウム透過性チャンネルである。イオンチャンネルの誤制御は、しばしば、病理学的症状に関連し、そしてＴＲＰＡ１を含むイオンチャンネルの１つ以上の機能を調節することができる化合物は、可能性のある治療学的作用物として大きな興味がもたれる。ＴＲＰＡ１受容体のアクチベーターまたはアゴニスト、例えばイソチオシアネート（アリルイソチオシアネート、からしの刺激成分）は、急性疼痛および神経性の炎症を惹起する。（参照、例えば、非特許文献３；非特許文献４）。

イオンチャンネルのこのファミリーのその他のメンバーはＴＲＰＶ１受容体である。この受容体の活性化がその受容体の脱感作と、それによる鎮痛活性を誘導することが示された（参照、非特許文献５）。同様に、ＴＲＰＡ１受容体の調節は、イオン−流動と膜電位のホメオスタシスの改良を誘導することができる。既知のアゴニスト・アリルイソチオシアネートおよびシンナムアルデヒドによるＴＲＰＡ１受容体の脱感作が例証されている（参照、非特許文献６、非特許文献７）。ＴＲＰＡ１アゴニスト・アリルイソチオシアネートによるマウスの局所的前処置は、耳の腫脹応答における減退によって示されるようなフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）に対する接触過敏症を減退した（参照、非特許文献８）。また、ＴＲＰＡ１受容体の活性化は、ラットの膀胱（非特許文献６）およびマウスの腸（非特許文献９）の収縮をもたらすことを示した。

ＴＲＰＡ１に関連する疾病または症状の症候を予防、処置または軽減することに使用可能であるＴＲＰＡ１受容体に対するリガンドの同定および開発には興味がもたれる（参照、例えば、特許文献１または特許文献２）。本発明のＴＲＰＡ１アゴニスト化合物 −アリル−もしくはベンジルイソチオシアネートのようなスクリーニング目的のために使用される現在記述されているアゴニストを凌駕する力価をもつ− は、ＴＲＰＡ１アンタゴニストを同定するためのスクリーニングアッセイにおいて、またはそれらの親和力および力価の決定において作用剤（ａｇｅｎｔ）として使用することができる。アリル−もしくはベンジルイソチオシアネートのような現在使用されるアゴニストを越える増大された力価に加えて、本発明のＴＲＰＡ１アゴニスト化合物は、アッセイにおいて存在する他の求核性作用物に対するそれらの比較的低い感受性によって得られるシグナルをより安定にさせるので、これらの既知化合物以上に付加された利点を有する。

ジベンズ［ｂ，ｆ］［１，４］オキサゼピン（ミリタリーコード（ｍｉｌｉｔａｒｙ ｃｏｄｅ ＣＲ）は、強力な催涙性かつ皮膚刺激特性をもつ既知の騒乱抑制剤である。そ
れは、ＣＮ（クロロアセトフェノン）のような若干の他の通常使用される騒乱抑制剤よりもその低い毒性のために騒乱抑制剤として特に興味がもたれる（参照、例えば、非特許文献１０；非特許文献１１）。ＣＲとは別に、対応するジベンズ［ｂ，ｅ］アゼピン（モルファントリジン（ｍｏｒｐｈａｎｔｈｒｉｄｉｎｅ）およびジベンズ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピンもまた、刺激性化合物として記述された（参照、例えば、非特許文献１２）。ＣＲの使用の欠点は、水性媒質中でのその安定性による環境における残存である。ＣＲはＴＲＰＡ１受容体の強力なアクチベーター（ｐＥＣ５０ｈＴＲＰＡ１＝９．５）であることが示された（内部データ）。アクロレインと同様に、催涙ガスとして使用された既知の環境刺激剤は、ＴＲＰＡ１受容体のアクチベーターであることが示されている（非特許文献４）。

本特許請求化合物は、ＣＲと類似する催涙特性と皮膚刺激特性を示し、したがって、催涙ガスまたは騒乱抑制剤における成分として使用することができ、また、刺激剤、刺激性薬剤、撹乱性薬剤および不能化薬剤もしくは短期不能化剤とも呼ばれる。さらに、それらは、比較的可溶性であり、そして水性媒質中では比較的不安定であるので、それらを環境において、より低い持続性にさせるであろう。

Ｒ^５−Ｒ^８上にＣＯＯＲ置換基をもつジベンズ［ｂ，ｆ］［１，４］オキサゼピンは特許文献３に記述されており、これは、脂質低下活性、血糖低下活性および血小板の凝集抑制活性を有するジベンズオキサゼピン誘導体を開示している。ＣＮ，ＣＦ_３およびＮＯ_２のような電子求引基を含有するジベンズオキサゼピンおよびモルファントリジンを含む三環式化合物は、殺虫活性を有するとして特許文献４において特許請求された。

本特許請求化合物は、予期せぬことに、ヒトＴＲＰＡ１受容体のアクチベーターであることが示された。

ＷＯ−２００７／０７３５０５ ＷＯ−２００７／０９８２５２ 欧州特許第０，０４０，８６０−Ａ号 ＷＯ−２００４／０２６０３０

Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １７７２（２００７）９８９−１００３ Ｃｅｌｌ １２４（２００６）１１２３−１１２５ ＰＮＡＳ １０３（２００７）１３５１９−１３５２４ Ｃｅｌｌ １２４（２００６）１２６９−１２８２ Ｂｌｅｙ，Ｋ．Ｒ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．２００４ １３（１１），１４４５−１４５６ Ａｎｄｒａｄｅ，Ｅ．Ｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６，７２，１０４−１１４ Ａｋｏｐｉａｎ，Ａ．Ｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．２００７，５８３（Ｐｔ１），１７５−１９３ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２００７），１４３（２），１４４−１５４ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００７），５７６，１４３−１５０ Ｂｌａｉｎ，Ｐ．Ｇ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｒｅｖ．２００３，２２，１０３−１１０：Ｔｅａｒ ｇａｓｓｅｓ ａｎｄ Ｉｒｒｉｔａｎｔ Ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｔｓ Ｏｌａｊｏｓ，Ｅ．Ｊ．，Ｓａｌｅｍ，Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００１，２１，３５５−３９１ Ｗａｒｄｒｏｐ，Ａ．Ｗ．Ｈ．；Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，Ｇ．Ｌ．；Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．；Ｉｎｃｈ，Ｔ．Ｄ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ．Ｔｒａｎｓ．Ｉ．１９７６，１２７９−１２８５およびこの論文のｒｅｆｓ １および２

本発明は、式（Ｉ）

［式中、
Ａは、ＣＨ_２，ＣＯ，またはＯであり；
Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は、各々独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキル、ポリハロＣ_１−６アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、Ｃ_１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ_１−６アルキルオキシ、ＣＯＯＲ^９またはＣＯＮＲ^１０Ｒ^１１から選ばれ；
Ｒ^９，Ｒ^１０およびＲ^１１は、各々独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−４アルキルオキシＣ_１−４アルキル、ポリハロＣ_１−６アルキル、ポリハロＣ_１−４アルキルオキシＣ_１−４アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、Ｃ_３−６シクロアルキルＣ_１−４アルキル、アミノＣ_２−５アルキル、モノ−もしくは（ジＣ_１−４アルキル）アミノＣ_２−６アルキルから選ばれ；そして
ここで、ＮＲ^１０Ｒ^１１は、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジンまたはＣ_１−４アルキルにより置換されたピペラジンから選ばれる複素環式環を形成してもよく；ただし、Ｒ^１〜Ｒ^８の少なくとも１つは、ＣＯＯＲ^９またはＣＯＮＲ^１０Ｒ^１１として定義されることが条件であり；そして
基ＡがＯを表す場合には、置換基Ｒ^５〜Ｒ^８はＣＯＯＲ^９であってはならないことが条件である］
のすべての立体化学的異性形態物を含む新規化合物、またはその製薬学的に許容できる酸付加塩、またはその溶媒和物、またはそのＮ−オキシドに関する。

この条件は、脂質低下活性、血糖低下活性および血小板の凝集抑制活性を有するジベンズオキサゼピン誘導体を開示する欧州特許第０，０４０，８６０−Ａ号に記述された化合物を除くことを意図している。

前記定義において使用されるように；
− ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードに対する総称であり；
− Ｃ_１−４アルキルは、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、１−メチルエチル、２−メチルプロピルなどのような、１〜４個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖の飽和炭化水素基を定義し；
− Ｃ_２−５アルキルは、例えば、エチル、プロピル、ブチル、１−メチルエチル、２−メチルプロピル、２−メチルブチル、ペンチルなどのような、２〜５個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖の飽和炭化水素基を定義し；
− Ｃ_１−６アルキルは、Ｃ_１−４アルキル、および例えば、２−メチルブチル、ペンチル、ヘキシルなどのような５〜６個の炭素原子を有する、より高級なその同族体を含むことを意味し；
− ポリハロＣ_１−４アルキルは、ポリハロ置換Ｃ_１−４アルキル、特に、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチルなどのような２〜６個のハロゲン原子により置換されたＣ_１−４アルキル（先に定義されたような）として定義され；
− Ｃ_３−６シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルに対する総称である。

先に使用された用語「立体化学的異性形態物」は、式（Ｉ）の化合物が保持してもよいすべての可能な異性形態物を定義する。特に記述または指定しなければ、化合物の化学的名称は、すべての可能な立体化学的異性形態物の混合物を指し、該混合物は、基本分子構造物のすべてのジアステレオマーおよび鏡像異性体を含む。より具体的には、立体形成中心は、Ｒ−もしくはＳ−立体配置を有してもよく；二価の環式（部分）飽和基における置換基は、シス−もしくはトランス−配置のいずれを有してもよい。式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性形態物は、本発明の範囲内に包含されることを明白に意図している。

式（Ｉ）の化合物およびそれらの製造において使用される中間体の絶対立体化学的配置は、周知の方法、例えば、Ｘ線回折を使用して当業者によって容易に決定することができる。

さらにまた、若干の式（Ｉ）の化合物およびそれらの製造において使用される若干の中間体は多形を表すことがある。本発明が、先に示された症状の処置において有用な特性を保持するいかなる多形形態物をも包含することは理解されねばならない。

前述のような製薬学的に許容できる酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療学的に活性のある非毒性の酸付加塩形態物を含むことを意味する。これらの製薬学的に許容できる酸付加塩は、便利には、塩基形態物をそのような適当な酸により処理することによって得ることができる。適当な酸は、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば、塩化水素酸もしくは臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸および類似の酸のような無機酸；あるいは例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸および類似の酸のような有機酸を含む。

反対に、該塩形態物は、適当な塩基により処理することによって遊離の塩基形態物に変換することができる。

式（Ｉ）の化合物は、非溶媒和および溶媒和形態物の両方において存在することができる。用語「溶媒和物」は、本発明の化合物と１種以上の製薬学的に許容できる溶媒分子、例えば、水もしくはエタノールを含んでなる分子会合物を記述するために本明細書では使用される。用語「水和物」は該溶媒が水である場合に使用される。

好ましくは：置換基Ｒ^１〜Ｒ^８の１つはＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２である。

より好ましくは：置換基Ｒ^１〜Ｒ^８の１つはＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２であり、そして他のＲ^１〜Ｒ^８置換基は水素であり、かつＡはＣＨ_２，ＣＯまたはＯである。

もっとも好ましくは：置換基Ｒ^４はＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２であり、そして他の置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^５，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２またはＯであるか、あるいは、Ｒ^６はＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルであり、そして置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２であるか、あるいはＲ^５はＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルであり、そして置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２である。

一般的合成（合成ルート）
一般構造Ｉ（Ａ＝Ｏ）の（置換）三環式化合物の合成が評論されている（Ｎａｇａｒａｊａｎ，Ｋ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７９，３，３１７−３４０）。

同様にして、対応するジベンゾ［ｂ，ｅ］アゼピンが製造できる（参照、例えば、Ｗａｒｄｒｏｐ，Ａ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１，１９７６，１２７９）。

カルボン酸エステルまたはアミド置換基の導入は、所望の化合物のジヒドロ中間体（ＩＩ）においてもっとも便利であることが見いだされ、続いて所望の化合物（Ｉ）へ最終的に酸化された。式（ＩＩ）の中間体におけるＣＨ_２ＮＨ結合のＣＨ＝Ｎ結合への酸化は、中間体（ＩＩ）の適当な溶液（例えば、ＤＭＳＯ中）の空気への長期（数週〜数カ月）曝露によるか、あるいは硫黄の存在下で中間体（ＩＩ）を加熱するか、あるいは適当な溶媒、例えばキシレンもしくはトルエン中、室温から還流までの範囲の温度で、パラジウム触媒またはその他の酸化剤、例えば酸化マンガン（ＭｎＯ_２）により式（ＩＩ）の中間体を処理することによって達成することができる。

式（Ｉ）［式中、Ｒ^１０＝Ｒ^１１＝水素］の化合物として定義される化合物（Ｉ−ｂ）もまた、式（Ｉ）［式中、Ｒ^１〜Ｒ^８の１つ＝ＣＮ］の化合物として定義される化合物（ＩＩ−ａ）の硫酸による処理と、それに続く、化合物（Ｉ−ｂ）の合成に関する前記の酸化方法によって得ることができる。中間体（ＩＩ−ｃ）もまた、（ＩＩ−ｂ）またはその対応する酸（Ｒ９＝Ｈ）におけるエステル官能基のアミド官能基への転化によって得ることができる。

式（ＩＩ−ａ）［式中、ＡはＣＨ_２である］の化合物として定義される式（ＩＩ−ｄ）のジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］アゼピン化合物は、中間体（ＶＩ）の硫酸による処理によって製造することができる。中間体（ＶＩ）は、中間体（ＩＩＩ）とアルデヒド（ＩＶ）との縮合と、それに続く、得られた中間体（Ｖ）の還元により製造することができる。

式（ＩＩ−ａ）［式中、ＡはＯである］の化合物として定義される式（ＩＩ−ｅ）のジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］オキサゼピン化合物は、アニリン（ＶＩＩ）と酸塩化物（ＶＩＩＩ）または対応する活性化カルボン酸誘導体［式中、Ｘ＝ハロ］との間のアミド形成から出発して中間体（ＩＸ）を生成して製造することができる。中間体（ＩＸ）は、中間体（Ｘ）に環化されて環化することができ、これが続いて、化合物（ＩＩ−ｅ）へ還元することができる。

出発材料および中間体のあるものは既知の化合物であり、そして市販品より得ることができ、あるいは当該技術分野において一般に既知の慣用反応操作にしたがって製造されてもよい。

先に記述した方法において製造される式（Ｉ）の化合物は、鏡像異性体のラセミ混合物の形態で合成されてもよく、これらは、技術上既知の分割操作にしたがって互いに分離することができる。ラセミ形態で得られるそれらの式（Ｉ）の化合物は、適当なキラル酸との反応によって対応するジアステレオマー塩形態物に転化されてもよい。該ジアステレオマー塩形態物は、続いて、例えば、選択もしくは分画晶出によって分離され、そして鏡像異性体はアルカリによってそれらから遊離される。式（Ｉ）の化合物の鏡像異性形態物を分離する他の方式は、キラル固定相を使用する液体クロマトグラフィーを伴う。該純粋な立体化学的異性形態物もまた、反応が立体化学的に起きるならば、適当な出発材料の対応する純粋な立体化学的異性形態物から得ることができる。特定の立体異性体が所望される場合は、該化合物は好ましくは立体特異的製造方法によって合成される。これらの方法は、有利には、鏡像異性体として純粋な出発材料を使用する。

式（Ｉ）の化合物、製薬学的に許容できる塩およびその立体異性形態物は、薬理学的実施例において例証されるように一過性受容体電位Ａ１受容体（ＴＲＰＡ１）アゴニスト特性を保持する。薬理学的実施例Ｄ．１は、ＴＲＰＡ１アゴニズムを測定する方法論を記述しており、そして結果が表３に列挙される。

したがって、本式（Ｉ）の化合物は、具体的には、ＴＲＰＡ１受容体、特にＴＲＰＡ１受容体アゴニスト活性によって媒介される症状または疾病の処置における薬物として有用
である。次に、本化合物は、ＴＲＰＡ１活性、特にＴＲＰＡ１アゴニスト活性によって媒介される症状または疾病の処置のための薬物の製造のために使用されてもよい。

好ましくは、本発明は、また、ＴＲＰＡ１媒介の症状または疾病から選ばれる症状または疾病の処置のための薬物の製造のための式（Ｉ）の化合物またはその製薬学的に許容できる塩の使用を提供する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその製薬学的に許容できる塩の治療学的に有効な量を、そのような処置を必要とする哺乳動物に対して投与することを含む、哺乳動物被験者におけるＴＲＰＡ１活性によって媒介される症状の処置の方法を提供する。

ＴＲＰＡ１媒介の症状または疾病は、例えば、疼痛、慢性疼痛、触覚感受性、かゆみ感受性、皮膚過敏、術後疼痛、がん疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、片頭痛、尿失禁、毛髪成長の抑制または促進、涙液分泌、目の傷害、眼瞼痙攣および肺性過敏である。

さらにまた、それらの涙液分泌特性および皮膚刺激特性によって、一般にＴＲＰＡ１アゴニストおよび特に本発明の化合物は、また、騒乱抑制、動物害虫防除のため、そして自己防御のための作用剤として使用することができる。

本明細書で使用されるように、用語「処置すること」および「処置」は、そのような用語が適合する疾病、障害または症状、またはそのような疾病、障害または症状の１種以上の症候の進行を反転、軽減、阻止すること、またはそれらを予防することを含む、治癒的、緩和的および予防的処置を指す。

さらに、本発明は、少なくとも１種以上の製薬学的に許容できる担体および式（Ｉ）の化合物の治療学的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物を提供する。

本発明の製薬学的組成物を製造するために、有効成分として塩基または酸付加塩形態物における特定の化合物の有効量が、少なくとも１種の製薬学的に許容できる担体とともに緊密な混合物中に組み合わされるが、この担体は投与のために望ましい調製物の形態により広範な種々の形態をとることができる。これらの製薬学的組成物は、好ましくは、経口投与、直腸投与、経皮投与または非経口注射のために適当な単位剤形において存在するのが望ましい。

例えば、経口剤形における組成物の製造では、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤および液剤のような経口液状調製物の場合には、例えば、水、グリコール、油、アルコールなどのような通常の液状製薬学的担体のいかなるものが使用されてもよく；あるいは、散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、澱粉、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などのような固形製薬学的担体が使用されてもよい。それらの容易な投与のために、錠剤およびカプセル剤はもっとも有利な経口単位剤形を代表し、この場合、固形の製薬学的担体が明らかに用いられる。非経口注射組成物では、製薬学的担体は、有効成分の溶解度を改良するために他の成分が含まれてもよいが、主として滅菌水を含むであろう。注射可能溶液は、例えば、生理食塩溶液、グルコース溶液または両方の混合液を含む製薬学的担体を使用することによって調製することができる。また、注射可能懸濁液は、適当な液状担体、懸濁化剤などを使用することによって調製されてもよい。経皮投与のために適当な組成物では、製薬学的担体は、皮膚に対して有意な悪い作用を惹起しない微量割合の適当な添加物と組み合わされた、浸透増進剤および／または適当な湿潤剤を場合によっては含んでもよい。該添加物は、皮膚に対する有効成分の投与を容易にするため、そして／または所望の組成物を製造するために役立つ目的で選ばれてもよい。これらの局所的組成物は、種々の方法で、例えば、経皮パッチ剤、スポット・オン剤または軟膏剤として投与され
てもよい。式（Ｉ）の化合物の付加塩は、対応する塩基形態物を越えるそれらの増大した水溶解度によって、明らかに、水性組成物の製造において一層適当である。

投与の容易さおよび用量の均一性のために単位剤形において本発明の製薬学的組成物を調合することは特に有利である。本明細書で使用されるような「単位剤形（ｄｏｓａｇｅ
ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）」は、単位用量として適当な物理的に区別された単位を指し、各々の単位は、要求される製薬学的担体と組み合わされて所望の治療学的効果を生成するよう計算された有効成分の予定量を含有する。そのような単位剤形の例は、錠剤（刻み目を付けたり、剤皮を施した錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末小包剤、ウェファー剤、注射可能溶液もしくは懸濁液、ティースプーン量剤、テーブルスプーン量剤など、およびそれらの分離した集合物である。

経口投与では、本発明の製薬学的組成物は、固形剤形、例えば、錠剤（嚥下および咀嚼できる両形態物）、カプセル剤もしくはゲルカップ剤（ｇｅｌｃａｐｓ）の形態をとってもよく、これらは、結合剤（例えば、予めゲル化されたトウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、フィラー（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸カルシウムなど）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカなど）、崩壊剤（例えば、ポテト澱粉、グリコール酸ナトリウム澱粉など）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）および類似物のような製薬学的に許容できる添加物および担体とともに慣用の手段によって製造される。また、そのような錠剤は、当該技術分野において周知の方法によって被覆されてもよい。

経口投与のための液状調製物は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとってもよく、あるいはそれらは、使用前に水および／またはその他の適当な液状担体との混合のための乾燥生産物として調合されてもよい。そのような液状調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）、非水性担体（例えば、アーモンド油、油性エステルまたはエチルアルコール）、甘味剤、着香剤、マスキング剤および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸）のような他の製薬学的に許容できる添加物とともに、場合によって慣用の手段によって製造されてもよい。

本発明の製薬学的組成物において有用な製薬学的に許容できる甘味剤は、好ましくは、少なくとも１種の強力甘味剤、例えば、アスパルテーム、アセスルファームカリウム、シクラミン酸ナトリウム、アリテーム、ジヒドロカルコン甘味剤、モネリン、ステビオサイド、スクラロース（４，１’，６’−トリクロロ−４，１’，６’−トリデオキシガラクトスクロース）または、好ましくはサッカリン、サッカリンナトリウムもしくはカルシウム、および場合によっては、少なくとも１種の多量甘味剤、例えば、ソルビトール、マンニトール、フルクトース、スクロース、マルトース、イソマルトース、グルコース、水素化グルコースシロップ、キシリトール、カラメルまたは蜂蜜を含む。強力甘味剤は便利なことには低濃度で使用される。例えば、サッカリンナトリウムの場合には、該濃度は最終調合物の約０．０４％〜０．１％（重量／容量）の範囲であってもよい。多量甘味剤は、約１０％〜約３５％、好ましくは約１０％〜１５％（重量／容量）の範囲の比較的高濃度で効果的に使用することができる。

低用量調合物において苦味成分を遮蔽できる製薬学的に許容できる着香剤は、好ましくは、チェリー、ラズベリー、黒スグリまたはイチゴの香料のような果実香料である。２種の香料の組み合わせ物が非常に良好な結果をもたらすであろう。高用量調合物では、比較的強い製薬学的に許容できる着香剤、例えば、カラメルチョコレート、ミントクール、ファンタジーなどが必要とされてもよい。各着香剤は、約０．０５％〜１％（重量／容量）
の範囲の濃度で最終組成物において存在することができる。該強い着香剤の組み合わせ物が有利に使用される。好ましくは、調合物の環境下で味および／または色のいかなる変化または損失も受けない着香剤が使用される。

式（Ｉ）の化合物は、注射、便利には静脈内、筋肉内または皮下注射による、例えば、ボーラス注射または連続静脈内注入による非経口投与のために調合されてもよい。注射のための調合物は、添加された保存剤を含む、単位剤形において、例えば、アンプル剤または複数用量容器（ｍｕｌｔｉ−ｄｏｓｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ）において提供されてもよい。それらは、懸濁液、溶液または油性または水性媒質における乳液のような形態物をとってもよく、そして等張化剤、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤のような製剤化薬剤を含有してもよい。あるいはまた、有効成分は、使用前に、適当な媒質、例えば、無菌の発熱物質を含まない水と混合するための粉末形態において提供されてもよい。

また、式（Ｉ）の化合物は、例えば、ココアバターおよび／または他のグリセリドのような慣用の坐剤用基剤を含有する坐剤または滞留浣腸剤のような直腸内組成物において調合されてもよい。

ＴＲＰＡ１受容体の媒介に関連する疾病の処置における当業者は、これ以降に提示される試験結果から、式（Ｉ）の化合物の治療学的に有効な量を容易に決定することができる。一般に、治療学的有効用量は、投与されるべき患者の体重について、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであることが考えられる。１日をとおして適当な間隔において２回以上のサブ用量の形態で治療学的に有効な用量を投与することが適当であろう。該サブ用量は、例えば、単位剤形当たり有効成分の約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、より好ましくは、約１〜約５００ｍｇを各々が含有する単位剤形として調合されてもよい。

本明細書で使用されるように、化合物の「治療学的に有効な量」は、個人または動物に投与された場合、個人または動物においてその化合物の十分に高いレベルをもたらして、ＴＲＰＡ１受容体の刺激において識別できる増加または減少を惹起する化合物の量である。

正確な用量および投与の頻度は、当業者には周知であるように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、処置される特定の症状、処置されている症状の重篤度、特定の患者の年齢、体重および一般的な肉体的状況、ならびに患者がとっているであろう他の薬物により異なる。さらにまた、該「治療学的に有効な量」は、処置される患者の応答に応じて、そして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて低下または増加されるであろう。したがって、前述された有効な１日量の範囲は単なるガイドラインに過ぎない。

実験の部
「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルと定義され、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドと定義され、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドと定義され、「ＤＣＭ」はジクロロメタンと定義され、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルと定義され、「ＭｅＯＨ」はメタノールと定義され、「ＥｔＯＨ」はエタノールと定義され、そして「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランと定義される。

高速液体クロマトグラフィー精製法：
−精製法Ａ
生成物は逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ^（Ｒ）Ｃ１８ ＢＤＳ（Ｂａｓｅ Ｄｅａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｓｉｌｉｃａ）８μｍ，２５０ｇ，Ｉ．Ｄ．５ｃｍ）によって精製された。
３種の移動相による勾配が適用された（相Ａ：水中０．２５％ＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液；相Ｂ：ＣＨ_３ＯＨ；相Ｃ：ＣＨ_３ＣＮ）。所望の画分が回収され、そして精製された。

−精製法Ｂ
生成物は逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ^（Ｒ）Ｃ１８ ＢＤＳ（Ｂａｓｅ Ｄｅａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｓｉｌｉｃａ）８μｍ，２５０ｇ，Ｉ．Ｄ．５ｃｍ）によって精製された。
３種の移動相による勾配が適用された（相Ａ：水中０．５％ＮＨ_４ＯＡｃ溶液の９０％＋１０％のＣＨ_３ＣＮ；相Ｂ：ＣＨ_３ＯＨ；相Ｃ：ＣＨ_３ＣＮ）。所望の画分が回収され、そして精製された。

−精製法Ｃ
生成物は逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ^（Ｒ）Ｃ１８ ＢＤＳ（Ｂａｓｅ Ｄｅａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｓｉｌｉｃａ）８μｍ，２５０ｇ，Ｉ．Ｄ．５ｃｍ）によって精製された。
２種の移動相による勾配が適用された（相Ａ：水中０．２５％ＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液；相Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ）。所望の画分が回収され、そして精製された。

Ａ．中間体の合成
例Ａ．１

２−プロパノール（１００ｍｌ）中２−アミノ−ベンゼンメタノール（０．０７３ｍｏｌ）および３−ブロモ−ベンズアルデヒド（０．０７３ｍｏｌ）の混合液を室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発した。残渣（２０．５ｇ）の一部（３ｇ）をヘキサンから晶出した。沈殿物を濾別し、乾燥して、中間体（１）の１．３７ｇを得た。

窒素雰囲気下での反応。ホウ水素化ナトリウム（０．１１７２ｍｏｌ）をエタノール（２００ｍｌ）中中間体（１）（０．０５８６ｍｏｌ）の混合液に徐々に添加した。反応混合液を撹拌し、そして１時間還流した。混合液を氷水浴上で冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ ２０％により反応停止し、そしてＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層を乾燥し、濾過し、そして溶媒を蒸発して、中間体（２）の１４．８ｇを得た。

ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍｌ）中中間体（２）（０．１８０ｍｏｌ）の溶液を、濃Ｈ_２ＳＯ_４（５００ｍｌ）の冷却（±−１０〜−２０℃）溶液に１時間かけて添加した。次いで、氷浴を除去し、そして混合液を室温で１時間撹拌した。反応混合液を氷水に添加し、氷上で冷却し、そして５０％ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性にした。得られる混合液（±３Ｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして濾液を真空濃縮した。この残渣の一部（８ｇ）を超臨界液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ，カラム：Ｄｉａｃｅｌ ＡＤ−Ｈ ３０ｘ２５０ｍｍ，移動相：５５％ＭｅＯＨ／４５％ＣＯ_２＋０．２％イソプロピルアミン、４０℃、１００ｂａｒ）により精製して、中間体（４）（７−ブロモ−異性体）２ｇおよび中間体（３）（９−ブロモ−異性体）４．６５ｇを得た。

メタノール（１００ｍｌ）およびＴＨＦ（１００ｍｌ）中中間体（４）（０．００８ｍｏｌ）、酢酸カリウム（４ｇ）、Ｐｄ（ＯＡＣ）_２（０．０４ｇ）および１，１’−（１，３−プロパンジイル）ビス［１，１−ジフェニル−ホスフィン（０．１６ｇ）の混合液を、圧力反応器に入れ、ＣＯガスにより５０ｋｇ／ｃｍ^２まで加圧した。反応混合液を１２５℃で１６時間加熱し、次いで、冷却し、ジカライト（ｄｉｃａｌｉｔｅ）上で濾過し、そして溶媒を蒸発した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２と水の間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、次いで、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製した。所望の画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（５）１．８６ｇを得た。

段階ａ），ｂ），ｃ）およびｄ）において記述したような類似の操作を使用して、中間体（２１）を４−ブロモ−ベンズアルデヒドから出発して製造した。

段階ｄ）において記述したような類似の操作を使用して、中間体（２３）を中間体（３）と２−プロパノールから出発して製造した。

例Ａ．２

メタノール（１５０ｍｌ）中２−ブロモ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｅ］アゼピン（０．０５ｍｏｌ）、酢酸カリウム（０．１ｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．１１２ｇ）および１，１’−（１，３−プロパンジイル）ビス［１，１−ジフェニル−ホスフィン（０．４１２ｇ）の混合液を圧力反応器に入れ、ＣＯガスにより５０ｋｇ／ｃｍ^２まで加圧した。反応混合液を１５０℃で２４時間加熱し、次いで冷却し、そして溶媒を蒸発した。残渣をＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２ＯとＣＨ_２Ｃｌ_２の間で分配した。有機層を分離し、乾燥し、濾過し、そして溶媒を蒸発した。残渣をＤＩＰＥ下で粉砕し、濾別し、そして乾燥（真空、４０℃）して、中間体（６）１０．５ｇを得た。

ＣＨ_２Ｃｌ_２（乾燥、２０ｍｌ）中１−メチル−ピペラジン（０．０１４９６ｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下０℃で撹拌した。ヘキサン中クロロジメチルアルミニウム１Ｍ（０．０１４９６ｍｏｌ）を滴下し、得られる混合液を室温に温め、１５分間撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（乾燥、２０ｍｌ）中中間体（６）（０．００７４８ｍｏｌ）の溶液を添加し、そして得られる反応混合液を撹拌し、２日間還流した。次いで、反応混合液を０℃まで冷却し、そして２０％ＮＨ_４Ｃｌ溶液を注意深く添加した。有機層を洗浄し、生成した乳濁液をジカライトをとおして濾過した。有機層を乾燥し、減圧下で蒸発した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２中に再溶解し、そして３ＮＨＣｌで洗浄した。水層を２回ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、２０％ＮａＯＨでアルカリ性にした。この混合液をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。分離した有機層を乾燥し、濾過し、そして溶媒を真空蒸発させた。残渣をシリカゲルでのＨＰＬＣ（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＯＨ９５／５〜９０／１０）により精製した。所望の画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（７）、融点１３８．３℃の０．１８２２０ｇを得た。

段階ｂ）において記述したような類似の操作を使用して、中間体（２２）を中間体（２１）から出発して製造した。

例Ａ．３

ＤＭＦ（１５ｍｌ）中中間体（４）（０．００２９ｍｏｌ）およびシアン化銅（０．００７３ｍｏｌ）の混合液を脱気し、次いで、窒素雰囲気下１４０℃で３日間振盪した。反応混合液を冷却した。ＮａＯＨ（２００ｍｌ，０．２Ｎ）を添加した。この混合液を酢酸エチルの１００ｍｌで２回抽出した。有機層を分離し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして濾液の溶媒を蒸発した。残渣をシリカゲルフィルターで精製した（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２）。生成画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（８）の０．５３ｇを得た。

トルエン（１５ｍｌ）中中間体（８）（０．００１８ｍｏｌ）および酸化マンガン（０．００９ｍｏｌ）の混合液を９０℃で４時間撹拌した。反応混合液をジカライト・パッドで濾過し、そしてＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。有機層を蒸発した。残渣をジエチルエーテルに溶解し、そしてジエチルエーテル中１ＮＨＣｌの２ｍｌを添加した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空乾燥して、中間体（９）の０．３５０ｇを得た。

例Ａ．４

４−ブロモ−２−フルオロ−安息香酸（２４ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（２０ｍｌ）のこの混合液を２時間還流した。反応混合液を真空濃縮し、そしてトルエン（４０ｍｌ
）とともに２回共蒸発させて、中間体（１０）を得た。残渣それ自体を次の段階で使用した。

ＴＨＦ（２５ｍｌ）中中間体（１０）（２４ｍｍｏｌ）の混合液を、ＴＨＦ（７５ｍｌ）中２−アミノ−フェノール（２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４８ｍｍｏｌ）の混合液に０℃で滴下した。反応混合液を放置して室温まで温め、そして一夜撹拌し、次いで、水（４００ｍｌ）中に注入し、そして１ＮＨＣｌ水溶液でｐＨ４〜５まで酸性にした。沈殿物を濾別し、１ＮＨＣｌおよび水で洗浄し、真空乾燥して、中間体（１１）の６６００ｍｇを得た。

ＤＭＦ（１００ｍｌ）中中間体（１１）（２０．９６ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（２０．９６ｍｍｏｌ）の混合液を５時間還流した。反応混合液を８００ｍｌの氷水上に注入し、そして得られる沈殿物を濾別し、１ＮＮａＯＨ水溶液および水で洗浄し、次いで真空乾燥して、中間体（１２）の５６００ｍｇを得た。

ＴＨＦ（１００ｍｌ）中中間体（１２）（１０．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ボラン−硫化ジメチル複合体（１：１）（ＴＨＦ中２Ｍ；２９．４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合液をさらに室温で２日間撹拌した。反応混合液を氷上で冷却し、そして１００ｍｌの１ＮＨＣｌ水溶液を添加した。混合液をある程度真空濃縮し、次いで固形ＮａＨＣＯ_３でアルカリ性（ｐＨ約７）にした。水層を２００ｍｌＣＨ_２Ｃｌ_２で２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＣＨ_２Ｃｌ_２７０／３０〜２０／８０）により精製した。生成物画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（１３）１７００ｍｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、中間体（１３）（５．９４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１０ｍｇ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）−プロパン（４０ｍｇ），酢酸カリウム（１．５ｇ）、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして一酸化炭素により５０ｂａｒまで加圧し、反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液を濾過し、真空濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２と水の間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製して、中間体（１４）１３８０ｍｇを得た。

例Ａ．５

３−ブロモ−２−フルオロ−安息香酸（２２ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（２０ｍｌ）のこの混合液を撹拌し、そして２時間還流した。反応混合液を真空濃縮し、そしてトルエン（４０ｍｌ）とともに２回共蒸発させ、そして中間体（１５）を得て、これをそのまま次の段階で使用した。

ＴＨＦ（２５ｍｌ）中中間体（１５）（２２ｍｍｏｌ）の混合液を、ＴＨＦ（７５ｍｌ）中２−アミノ−フェノール（２２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４４ｍｍｏｌ）の混合液に０℃で滴下した。反応混合液を放置して室温まで温め、そして一夜撹拌した。反応混合液を水（４００ｍｌ）中に注入し、そして１ＮＨＣｌ水溶液でｐＨ４〜５まで酸性にした。沈殿物を濾別し、１ＮＨＣｌおよび水で洗浄し、真空乾燥して、中間体（１６）の６３５０ｍｇを得た。

ＤＭＦ（１００ｍｌ）中中間体（１６）（２０．５ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（粉末にして、２０．５ｍｍｏｌ）の混合液を撹拌し、そして５時間還流した。反応混合液を８００ｍｌの氷水上に注入し、そして得られる沈殿物を濾別し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液および水で洗浄し、次いで真空乾燥して、中間体（１７）の５２００ｍｇを得た。

ジオキサン（２００ｍｌ）中中間体（１７）（１７．９ｍｍｏｌ）およびＬｉＡｌＨ_４（８９．６ｍｍｏｌ）の混合液を撹拌し、そして５時間還流した。反応混合液を氷上で冷却した。注意深く、３．５ｍｌの水を添加し、３．５ｍｌの１５％水酸化ナトリウム水溶液、次いで１０．５ｍｌの水を添加した。混合液を室温で一夜撹拌し、濾過し、そして真空濃縮した。残渣をＲＰ ＨＰＬＣ，方法Ａにより精製して、中間体（１８）７５０ｍｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、中間体（１８）（２．６２６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１０ｍｇ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）−プロパン（４０ｍｇ）、酢酸カリウム（０．７ｇ）、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒ一酸化炭素まで加圧し、反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液を濾過し、真空濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２と水の間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＣＨ_２Ｃｌ_２７０／３０〜０／１００）により精製して、中間体（１９）５５０ｍｇを淡黄色オイルとして得た。

例Ａ．６

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、中間体（３）（６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１０ｍｇ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（４０ｍｇ），酢酸カリウム（１．５ｇ）、ｎ−ブタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒ一酸化炭素まで加圧し、反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液を濾過し、真空濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２と水の間で分配した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ １００／０〜８０／２０）により精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させて、中間体（２０）７６０ｍｇを得た。

例Ａ．７

２−プロパノール（１２０ｍｌ）中２−アミノ−６−ブロモ−ベンゼンメタノール（３５ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（３７ｍｍｏｌ）の混合液を室温で一夜撹拌した。溶媒を蒸発して、中間体（２４）を得た。

窒素雰囲気下での反応。ホウ水素化ナトリウム（７０ｍｍｏｌ）をエタノール（２００ｍｌ）中中間体（２４）（３５ｍｍｏｌ）の混合液に徐々に添加した。反応混合液を撹拌し、そして２時間還流した。混合液を氷水浴上で冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ ２０％（２００ｍｌ）、続いて水（２００ｍｌ）により反応停止した。沈殿物を濾過し、そして乾燥して、中間体（２５）の９．２ｇを得た。

Ｈ_２ＳＯ_４溶液（８０ｍｌ）を氷−塩浴上で−１０℃まで冷却した。ＤＣＭ（６０ｍｌ）中中間体（２５）（３１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。氷浴を除去し、そして撹拌を室温で９０分間継続した。反応混合液を再び冷却し、そして水酸化カリウム溶液（１０Ｍ）を注意深く滴下してｐＨを塩基性にした。沈殿物を濾別し、そしてＤＣＭで洗浄し、そして水性濾液をＤＣＭ（２回の３００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥（ＭｇＳＯ_４））し、そして減圧下で濃縮して、中間体（２６）８．４ｇを得た。

メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中、中間体（２６）（７．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．１５ｍｍｏｌ），酢酸カリウム（２２ｍｍｏｌ）および１，１’−（１，３−プロパンジイル）ビス［１，１−ジフェニル−ホスフィン（０．２９ｍｍｏｌ）の混合液を、圧力反応器中で、５０ｂａｒＣＯガスにおいて１２５℃で１６時間反応させた。反応混合液を冷却し、ジカライト上で濾過し、次いで真空濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２と水の間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、次いで、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製した。所望の画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（２７）１．５４ｇを得た。

例Ａ．８

１−ブロモ−３−メチル−２−ニトロ−ベンゼン（４６．２９ｍｍｏｌ）、過酸化ジベンゾイル（２５０ｍｇ）、テトラクロロメタン（１００ｍｌ）および１−ブロモ−２，５−ピロリジンジオン（４６．２９ｍｍｏｌ）を一夜還流した。特級の過酸化ジベンゾイル（２５０ｍｇ）を添加し、そして一夜還流を続けた。反応混合液を真空濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃと水との間で分配した。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮して、中間体（２８）１５ｇを得た。

ＤＭＦ（２００ｍｌ）中、中間体（２８）（４６ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（３２２ｍｍｏｌ）を７０℃で２時間撹拌した。反応混合液を冷却し、そして氷水上に注入し、３００ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧濃縮した。残留物をＳｉＯ_２カラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ ９０／１０〜６０／４０）により精製した。純画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（２９）５．９ｇを得た。

Ｐｔ／Ｃ ５％（１ｇ）＋Ｖ_２Ｏ_５（５０ｍｇ）を窒素流動下のＴＨＦ中に懸濁した。４％チオフェン溶液（０．５ｍｌ）を添加した。中間体（２９）（２１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合液を水素雰囲気下で３当量の水素が吸収されるまで撹拌した。触媒をジカライト上で濾過によって除去した。混合液を濃縮して、中間体（３０）５．２ｇを得て、これをそのまま次の段階で使用した。

ＤＭＦ（５０ｍｌ）中、中間体（３０）（６．８ｍｍｏｌ）、臭化ベンジル（７．４ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（７．４ｍｍｏｌ）を、８０℃で６時間撹拌した。反応混合液を冷却し、そして水（５００ｍｌ）を添加した。混合液を２５０ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして真空濃縮した。残渣を精製方法Ｃを用いて精製した。純画分を回収し、溶媒を蒸発して、中間体（３１）を得た。

中間体（３１）（５．７ｍｍｏｌ）、メタノール（２０ｍｌ）およびメタノール中ナトリウムメチラート（３０％、１０ｍｌ）を、マイクロ波中で１６０℃２０分間加熱した。反応混合液を減圧濃縮し、そして残渣をＤＣＭと水との間に分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、減圧濃縮して、中間体（３２）１．７ｇを得て、それ自体を次の段階で使用した。

硫酸（２５ｍｌ）を氷−塩浴上で−１０℃まで冷却した。次いで、ＤＣＭ（２０ｍｌ）中中間体（３２）（５．８ｍｍｏｌ）を滴下した。氷浴を除去し、そして撹拌を室温で１．５時間継続した。反応混合液を再び冷却し、そしてＫＯＨ（１０Ｍ）溶液を注意深く滴下してｐＨを塩基性にした。生成した塩を濾別し、そしてＤＣＭで洗浄した。水性濾液をＤＣＭ（２ｘ３００ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して、中間体（３３）１．３６ｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中、中間体（３３）（３．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．０６３ｍｍｏｌ）、１，３ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンおよび酢酸カリウム（６．３ｍｍｏｌ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒＣＯまで加圧し、そして反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液をジカライト上で濾過し、真空濃縮し、そして残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液とＤＣＭとの間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮して、中間体（３４）５４５ｍｇを得た。

例Ａ．９

イソプロパノール（６０ｍｌ）中２−アミノ−ベンゼンメタノール（４０．６ｍｍｏｌ）および３−ブロモ−ベンズアルデヒド（４０．６ｍｍｏｌ）を室温で一夜撹拌した。反応混合液を真空濃縮し、そして残渣をそれ自体次の段階で使用して、中間体（３５）を得た。

窒素雰囲気下で、テトラヒドロホウ酸ナトリウム（８０ｍｍｏｌ）をエタノール（１２０ｍｌ）中中間体（３５）（４０ｍｍｏｌ）に滴下した。混合液を１時間還流下で撹拌し、氷浴上で冷却し、そして２０％ＮＨ_４Ｃｌ水溶液により反応停止した。水層をＤＣＭ（２ｘ２５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空濃縮して、中間体（３６）の１１．７ｇを得た。

硫酸（１００ｍｌ）を氷−塩浴上で−１０℃まで冷却した。次いで、中間体（３６）（４０ｍｍｏｌ）を滴下した。氷浴を除去し、そして室温で１．５時間撹拌を継続した。反応混合液を再び冷却し、そして水酸化カリウム水溶液（１０Ｍ）を注意深く滴下して、ｐＨを塩基性にした。生成した塩を濾別し、そしてジエチルエーテルで洗浄した。水性濾液を３００ｍｌのジエチルエーテルで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮して、最初の残渣を得た。抽出前に生成した塩をＤＣＭとともに撹拌し、そして再び濾過した。有機層を乾燥し、減圧下で濃縮し、最初の残渣と合わせた。合わせた残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ，溶出液ヘプタン／ＥｔＯＡｃ ９６／４〜７０／３０）により精製した。純粋画分を回収し、溶媒を蒸発して、中間体（３７）５．４ｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中、中間体（３７）（７．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１０ｍｇ）、１，３ビス（ジフェニルホスフィノ）−プロパン（４０ｍｇ）および酢酸カリウム（１．５ｇ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒＣＯまで加圧し、そして反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液を濾過し、真空濃縮した。残渣をＤＣＭと水との間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ＤＣＭ）により精製した。純粋画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（３８）１．５２０ｇを得た。

例Ａ．１０

イソプロパノール（１２０ｍｌ）中２−アミノ−４−ブロモ−ベンゼンメタノール（３７．１２ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（４０．８３ｍｍｏｌ）を室温で一夜撹拌した。反応混合液を１時間８０℃まで加熱し（澄明溶液）、次いで、徐々に室温まで冷却した。混合液を真空濃縮し、そしてトルエン（１２０ｍｌ）を添加した。反応混合液をＤｅａｎ−Ｓｔｒａｋ条件下で３時間還流した。反応混合液を減圧下で濃縮し、そして残渣それ自体を次の段階で使用して、中間体（３９）を得た。

窒素雰囲気下で、テトラヒドロホウ酸ナトリウム（７４ｍｍｏｌ）をエタノール（１２０ｍｌ）中中間体（３９）（３７ｍｍｏｌ）に滴下した。混合液を１時間還流下で撹拌し、氷浴上で冷却し、そして２０％ＮＨ_４Ｃｌ水溶液により反応停止した。水層をＤＣＭ（２ｘ２５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空濃縮して、１０．８ｇを得て、これをそのまま次の段階で使用した。

硫酸（１００ｍｌ）を氷−塩浴上で−１０℃まで冷却した。次いで、ＤＣＭ（３０ｍｌ）中中間体（４０）（３７ｍｍｏｌ）を滴下した。氷浴を除去し、そして室温で１．５時間撹拌を継続した。反応混合液を再び冷却し、そして水酸化カリウム水溶液（１０Ｍ）を注意深く滴下して、ｐＨを塩基性にした。この塩混合物に、ＤＣＭ（５００ｍｌ）を添加し、そして混合液を室温で１時間撹拌した。塩を濾別し、そしてＤＣＭで洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカ
ラムクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ，溶出液ＤＣＭ／ヘプタン／ＥｔＯＡｃ
１０／８６／４〜７／６３／３０）により精製した。純粋画分を回収し、溶媒を蒸発して、白色固体として中間体（４１）６．４ｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中、中間体（４１）（７．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（１０ｍｇ）、１，３ビス（ジフェニルホスフィノ）−プロパン（４０ｍｇ）、酢酸カリウム（１．５ｇ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒＣＯまで加圧し、そして反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液を濾過し、真空濃縮した。残渣をＤＣＭと水との間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＤＣＭ ５０／５０〜０／１００）により精製した。純粋画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、中間体（４２）１．１ｇを得た。

例Ａ．１１

ＤＭＦ（１５ｍｌ）中、中間体（１８）（２．７ｍｍｏｌ）およびシアン化銅（６．８ｍｍｏｌ）を脱気し、次いで、窒素雰囲気下１４０℃で一夜振盪した。反応混合液を室温まで冷却し、そして水酸化ナトリウム（２００ｍｌ，０．２Ｎ）を添加した。混合液を１００ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして真空濃縮して、中間体（４３）２５５ｍｇを得た。

トルエン（１５ｍｌ）中中間体（４３）（１．１２５ｍｍｏｌ）および酸化マンガン（３．３７５ｍｍｏｌ）を８０℃で３時間撹拌した。反応混合液をジカライト・パッドで濾過した、溶出液トルエン、次いでＤＣＭ。ＤＣＭ層を濃縮し、そしてＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。有機層を蒸発した。残渣を精製方法Ｃを用いて精製して、中間体（４４）９０ｍｇを得た。

例Ａ．１２

ＴＨＦ（２５ｍｌ）中塩化２−フルオロ−ベンゾイル（１５．６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（７５ｍｌ）中２−アミノ−６−ブロモ−フェノール（１５．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３１．１ｍｍｏｌ）の混合液に０℃で滴下した。反応混合液を放置して室温まで温め、そして一夜撹拌した。反応混合液を水（４００ｍｌ）中に注入し、そして１ＮＨＣｌ水溶液でｐＨ４〜５まで酸性にした。水層をＤＣＭ２００ｍｌで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして真空濃縮した。残渣を精製方法Ａを用いて精製して、中間体（４５）の２．８ｇを得た。

ＤＭＦ（６０ｍｌ）中中間体（４５）（８．９ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（粉末、８．９ｍｍｏｌ）を５時間還流した。反応混合液を氷水（８００ｍｌ）上に注入し、そして得られる沈殿物を濾別し、１ＮＮａＯＨ水溶液および水で洗浄し、次いで真空乾燥して、中間体（４６）を得た。

ＴＨＦ（８０ｍｌ）中中間体（４６）（８．４４５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ中ボラン１Ｍ（２５．３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合液をさらに室温で１週間以上撹拌した。反応混合液を氷上で冷却し、そして１００ｍｌの１ＮＨＣｌ水溶液を添加した。混合液をある程度真空濃縮し、次いで固形ＮａＨＣＯ_３で塩基性（ｐＨ約７）にした。水層を１５０ｍｌＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮した。残渣を精製方法Ａを用いて精製して、中間体（４７）１．３５０ｇを得た。

７５ｍｌのステンレススチール製オートクレーブに窒素雰囲気下で、メタノール（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中、中間体（４７）（２．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．０４６ｍｍｏｌ）、１，３ビス（ジフェニルホスフィノ）−プロパン（０．０９３ｍｍｏｌ），酢酸カリウム（６．９５ｍｍｏｌ）を入れた。オートクレーブを閉じ、そして５０ｂａｒＣＯまで加圧し、反応を温度１２５℃で１６時間実施した。反応混合液をジカライト上で濾過し、真空濃縮し、そして残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液とＤＣＭの間で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして濃縮して、中間体（４８）５５０ｍｇを得た。

例Ａ．１３

中間体（４７）（２．７１６ｍｍｏｌ）、シアン化銅（６．７９ｍｍｏｌ）を脱気し、次いで、窒素下１４０℃で一夜振盪した。反応混合液を室温まで冷却し、そしてＮａＯＨ水溶液（２００ｍｌ，０．２Ｎ）を添加した。混合液を１００ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、そして真空濃縮して、中間体（４９）５００ｍｇを得て、これを、そのまま次の段階で使用した。

Ｈ_２ＳＯ_４（３ｍｌ）中中間体（４９）（２．２５ｍｍｏｌ）を室温で一夜撹拌し、次いで、室温でさらに２日間撹拌した。反応混合液を１００ｍｌの氷水に注入し、そしてＮＨ３水溶液で塩基性にし、次いで、１００ｍｌのＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、そして濃縮して、中間体（５０）の５１０ｍｇを得た。

Ｂ．最終化合物の製造
例Ｂ．１

メタノール（５０ｍｌ）およびＴＨＦ（５０ｍｌ）中、中間体（３）（０．０１０ｍｏｌ）、１，１’−（１，３−プロパンジイル）ビス［１，１−ジフェニル−ホスフィン（
０．０８ｇ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．０２ｇ）およびトリエチルアミン（３ｇ）の混合液を、オートクレーブ中で、ＣＯ圧５０大気圧下１２５℃で１６時間、次いで１５０℃で４時間撹拌した。反応混合液を冷却し、そしてジカライト上で濾過した。濾液の溶媒を蒸発させた。残渣を逆相ＨＰＬＣ（方法Ｂ）により精製した。所望の画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、化合物（１）の３８０ｍｇを得た。

例Ｂ．２

トルエン（２０ｍｌ）中中間体（５）（０．００７３５ｍｏｌ）および酸化マンガン（０．０３６７ｍｏｌ）の混合液を９０℃で４時間撹拌した。反応混合液をシリカゲル・パッド（溶出液：トルエン、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２）で濾過した。（黄色の）ＣＨ_２Ｃｌ_２層を濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ １００／０〜７０／３０）により精製した。生成物画分を回収し、そして溶媒を蒸発した。残渣をＤＩＰＥ下で粉砕し、濾別し、そして乾燥して、化合物（２）１．３５ｇを得た。

例Ｂ．３

ＴＨＦ（３０ｍｌ）中中間体（５）（０．００１ｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（１Ｎ水溶液、１０ｍｌ）の混合液を室温で２時間撹拌した。反応混合液を５０℃で一夜加熱し、次いで室温で週末を超えて静置した。混合液を真空濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（方法Ａ）により精製して、化合物（４）の０．１００ｇを得た。

例Ｂ．４

ＣＯ挿入によるＨｅｃｋ反応。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中、中間体（４）（０．００３ｍｏ
ｌ）、Ｎ−エチル−エタンアミン（１ｇ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（０．０１０ｇ）および１，１’−（１，３−プロパンジイル）ビス［１，１−ジフェニル−ホスフィン（０．０４０ｇ）の混合液を、圧力反応器中で、ＣＯ圧５０大気圧下１５０℃で１６時間、反応させた。反応混合液をジカライトをとおして濾過し、そして濾液を濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（方法Ａ）により精製した。所望の画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、化合物（５）の０．００６ｇを得た。

例Ｂ．５

ＤＭＳＯ（０．４９ｍｌ）中中間体（７）（１．５８ｍｇ）の混合液を約６カ月室温で保存して、ＤＭＳＯ中の溶液として化合物（８）の０．７１ｍｇを得た。

例Ｂ．６

中間体（９）および硫酸を温度０〜５℃で２時間撹拌した。混合液を室温で４日間撹拌し続けた。反応混合液を５０ｍｌの氷水に注ぎ込み、そして濃ＮＨ_３水溶液で塩基性にした。生成した沈殿物を濾別し、メタノールに溶解し、そして濃縮した。残渣をＲＰ ＨＰＬＣ（方法Ａ）により精製して、化合物（９）を得た。

例Ｂ．７

トルエン（２０ｍｌ）中中間体（１４）（３．０１６ｍｍｏｌ）および酸化マンガン（９．０４９ｍｍｏｌ）の混合液を８０℃で３時間撹拌した。反応混合液をシリカゲル・パッド（溶出液：トルエン、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２）で濾過し、そしてシリカゲル・クロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ １００／０〜５０／５０）により精製して、１つの純粋画分を得て、これを真空濃縮後、ＤＩＰＥから凝固させ、濾別し、そして乾燥して、化合物（１０）５０ｍｇを得た。

例Ｂ．８

トルエン（２０ｍｌ）中中間体（１９）（１．９９８ｍｍｏｌ）および酸化マンガン（５．９９４ｍｍｏｌ）の混合液を８０℃で３時間撹拌した。反応混合液をジカライト・パッド（溶出液：トルエン、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２）で濾過した。（黄色の）ＣＨ_２Ｃｌ_２層を濃縮し、そしてシリカゲル・クロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＯＨ（ＮＨ_３） １００／０〜９９／１）により精製した。純画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、化合物（１１）４４０ｍｇを得た。

例Ｂ．９

トルエン（２０ｍｌ）中中間体（２０）（２．４０４ｍｍｏｌ）および酸化マンガン（７．２１１ｍｍｏｌ）の混合液を８０℃で３時間撹拌した。反応混合液をジカライト・パッドで濾過（溶出液：トルエン、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２）した。ＣＨ_２Ｃｌ_２層を濃縮し、そしてシリカゲル・クロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＯＨ（ＮＨ_３）
１００／０〜９９／１）により精製した。純画分を回収し、そして溶媒を蒸発して、化合物（１３）６３０ｍｇを得た。

化合物（１３）の一部分（５８７ｍｇ）をジエチルエーテル（１２ｍｌ）中に溶解し、そしてジエチルエーテル中１ｍｌの２Ｎ ＨＣｌを添加した。得られる粘々した物質をＣＨ_３ＣＮの１．５ｍｌを添加することによって溶解した。次いで、ジイソプロピルエーテル１．５ｍｌを添加し、この後、生成物を結晶化させた。固体を濾別し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、そして真空乾燥して、化合物（１４）６１６ｍｇを得た。

例Ｂ．１０

ＤＭＳＯ（０．７ｍｌ）中中間体（２２）（０．００４９２ｍｍｏｌ）の混合液を約６カ月室温で保存して、ＤＭＳＯ中の溶液として化合物（１５）の０．４５ｍｇを得た。

例Ｂ．１１

トルエン（１５ｍｌ）中中間体（２３）（１．１５ｍｍｏｌ）および酸化マンガン（３．４５１ｍｍｏｌ）の混合液を８０℃で３時間撹拌した。反応混合液をジカライト・パッド（溶出液：トルエン、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２）で濾過し、次いで、ＣＨ_２Ｃｌ_２層を濃縮し、そしてシリカゲル・クロマトグラフィー（溶出液：ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製した。純画分を回収し、そして溶媒を蒸発した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（方法Ａ）によりさらに精製して、化合物（１６）４０ｍｇを得た。

例Ｂ．１２

Ｈ_２ＳＯ_４（２ｍｌ）中中間体（４４）（０．２７２ｍｍｏｌ）の混合液を２日間撹拌した。反応混合液を水（１００ｍｌ）に注入し、そしてＮＨ_３水溶液で塩基性にした。この混合液をＤＣＭ（２００ｍｌで２回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮して、化合物（２１）を得た。

表１は上記例の１つにしたがって製造された化合物を列挙する。

Ｃ．分析の部
Ｃ．１．ＬＣ−ＭＳ 一般操作１
ＬＣ測定は、以下の各方法において具体的に述べられるように、二連のポンプ、サンプル・オルガナイザー、カラム・ヒーター（５５℃に設定）、ダイオード−アレイ・ディテクター（ＤＡＤ）およびカラムを含んでなる、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して実施された。カラムからの流出はＭＳ分析計に分割された。ＭＳ検出器はエレクトロスプレー・イオン化ソースとともに構成された。質量スペクトルは、０．０２秒の滞留時間を使用して０．１８秒において１００から１０００までの走査によって得られた。キャピラリーニードル電位は３．５ｋＶであり、そしてソース温度は１４０℃に維持された。窒素がネブライザーガスとして使用された。データの取得はＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘ ｄａｔａ ｓｙｓｔｅｍにより実施された。
逆相ＵＰＬＣ（超高速（Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）液体クロマトグラフィー）は、０．８ｍｌ／ｍｉｎの流速によって架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ；Ｗａｒｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ）において実施された。２種の移動相（移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ／メタノール９５／５中０．１％ギ酸；移動相Ｂ：メタノール）が使用されて、１．３分で９５％Ａおよび５％Ｂから５％Ａおよび９５％Ｂまでの勾配条件を作動させ、そして０．２分間維持した。０．５μｌの注入量が使用された。コーン電位は正イオン化モードでは１０Ｖおよび負イオン化モードでは２０Ｖであった。

Ｃ．２．ＬＣ−ＭＳ 一般操作２
ＨＰＬＣ測定は、以下の各方法において具体的に述べられるように、脱気装置をもつ四連のポンプ、オートサンプラー、カラム・オーブン（特に指示しなければ４０℃に設定）、ダイオード−アレイ・ディテクター（ＤＡＤ）およびカラムを含んでなる、Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＴ ２７９０（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して実施された。カラムからの流出はＭＳ分析計に分割された。ＭＳディテクターはエレクトロスプレー・イオン化ソースとともに構成された。質量スペクトルは、０．１秒の滞留時間を使用して１秒において１００から１０００までの走査によって得られた。キャピラリーニードル電位は３ｋＶであり、そしてソース温度は１４０℃に維持された。窒素がネブライザーガスとして使用された。データの取得はＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘ ｄａｔａ ｓｙｓｔｅｍにより実施された。
カラムヒーターは４５℃に設定された。逆相ＨＰＬＣは、１．６ｍｌ／ｍｉｎの流速によってＸｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６ｘ１００ｍｍ）において実施された。３種の移動相（移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ／メタノール９５／５中０．１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相Ｃ：メタノール）が使用されて、７分で１００％Ａから１％Ａ，４９％Ｂおよび５０％Ｃまでの勾配条件を作動させ、そしてこれらの条件を１分間維持した。１０μｌの注入量が使用された。コーン電位は正イオン化モードでは１０Ｖで
あった。

Ｃ．３．融点
多数の化合物について、融点（ｍ．ｐ．）はＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）によって決定された。融点は温度勾配３０℃／分を用いて測定された。報告された値はピーク値である。最高温度は４００℃であった。値は、この分析法に共通に関連している実験上の不確定さを含んで得られた。

Ｄ．薬理学的実施例
細胞および培養
ヒトＴＲＰＡ１遺伝子が、ｐＴ−ＲＥｘ−Ｄｅｓｔ３０誘導ベクター中にクローン化され、その後、Ｔ−Ｒｅｘ^ＴＭ−２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍから購入）に安定にトランスフェクトされた。このテトラサイクリン誘導ｈＴＲＰＡ１発現系は、持続したＴＲＰＡ１発現によって培養細胞におけるＣａ^２＋過負荷を防ぐために使用された。ｈＴＲＰＡ１／ＴＲＥｘ−ＨＥＫ２９３細胞（以下の記述ではｈＴＲＰＡ１細胞として言及される）は標準無菌細胞培養条件下で維持された。ｈＴＲＰＡ１−ＨＥＫ細胞の培養培地は，０．５ｇ／ｌ ゲネチシン（Ｇｉｂｃｏ），５ｍｇ／ｌ ブラストシジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），１４．６ｇ／ｌ Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ；Ｇｉｂｃｏ）、５ｇ／ｌ ペニシリン／ストレプトマイシン（５．１０^−６ＩＵ／ｌ，Ｇｉｂｃｏ），５．５ｇ／ｌ ピルビン酸（Ｇｉｂｃｏ）および１０％胎児ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ ＵＴ，ＵＳＡ）を補足された、ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）であった。

Ｃａ ^２＋ 蛍光定量法
ＴＲＰＡ１イオン・チャンネルへのアゴニストの結合は、イオン・チャンネルを活性化かつ開放し、これが細胞内Ｃａ^２＋濃度における確実な増加を惹起する。細胞内Ｃａ^２＋濃度を検出し、測定するために、細胞はＣａ^２＋感受性染料を負荷された。細胞内のＣａ^２＋濃度の変化に対応する細胞における蛍光の変化が、ＦＤＳＳ機器（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）により動力学的に追跡することができ、そしてＴＲＰＡ１イオン・チャンネルへのアゴニズムに関する指標になる。

蛍光分析Ｃａ^２＋測定では、ｈＴＲＰＡ１−ＨＥＫ細胞がＨＢＳＳ種母培地に再懸濁された：１４．６ｇ／ｌ Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ；Ｇｉｂｃｏ）、５ｇ／ｌ ペニシリン／ストレプトマイシン（５．１０^−６ＩＵ／ｌ，Ｇｉｂｃｏ），５．５ｇ／ｌ ピルビン酸（Ｇｉｂｃｏ），５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ），５ｍｌ インスリン−トランフフェリン−キセレニウム−ｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１０％胎児ウシ血清（５６℃で３０分間熱失活された；Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ ＵＴ，ＵＳＡ）を補足された、ＨＢＳＳ（ＣａＣｌ_２およびＭｇＣｌ_２を含有）。細胞は、１２０００細胞／ウェルにおいてポリ−Ｄ−リジン被覆された３８４穴丸底ポリプロピレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｄａｔａ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ，Ｃａｍｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ，ＵＳＡ）に接種された。５０ｎｇ／ｍｌ テトラサイクリンが添加されて、実験前２４時間にｈＴＲＰＡ１発現を誘導した。
細胞は、０．７ｇ／ｌ Ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ）を補足されたＨＢＳＳ種母培地に溶解された５ｍｇ／ｌ Ｆｌｕｏ４−ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を負荷され、そして３７℃で１時間、続いて２０℃で１〜２時間インキュベートされた。蛍光はＦＤＳＳ ６０００画像に基づくプレート・リーダー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ Ｋ．Ｋ．，Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｃｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）において測定された。励起波長は４８８ｎｍであり、発光波長は５４０ｎｍであった。１２秒の調節期間後、化合物が添加され、そしてＣａ^２＋シグナルが適用後１４分以内に測定された。

Claims (10)

1. 式（Ｉ）
   

   

   ［式中、
   Ａは、ＣＨ_２，ＣＯまたはＯであり；
   Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は、各々独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキル、ポリハロＣ_１−６アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、Ｃ_１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ_１−６アルキルオキシ、ＣＯＯＲ^９またはＣＯＮＲ^１０Ｒ^１１から選ばれ；
   ここで、Ｒ^９，Ｒ^１０およびＲ^１１は、各々独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−４アルキルオキシＣ_１−４アルキル、ポリハロＣ_１−６アルキル、ポリハロＣ_１−４アルキルオキシＣ_１−４アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、Ｃ_３−６シクロアルキルＣ_１−４アルキル、アミノＣ_２−５アルキル、モノ−もしくは（ジＣ_１−４アルキル）アミノＣ_２−６アルキルから選ばれ；そして
   ここで、ＮＲ^１０Ｒ^１１は、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジンまたはＣ_１−４アルキルにより置換されたピペラジンから選ばれる複素環式環を形成してもよく；ただし、Ｒ^１〜Ｒ^８の少なくとも１つは、ＣＯＯＲ^９またはＣＯＮＲ^１０Ｒ^１１として定義されることが条件であり；そして
   基ＡがＯを表す場合には、置換基Ｒ^５〜Ｒ^８はＣＯＯＲ^９であってはならないことが条件である］
   の、すべての立体化学的異性形態物を含む新規化合物、またはその製薬学的に許容できる酸付加塩、またはその溶媒和物、またはそのＮ−オキシド。
2. 置換基Ｒ^１〜Ｒ^８の１つがＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２である、請求項１に記載の化合物。
3. 置換基Ｒ^１〜Ｒ^８の１つがＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２であり、そして他のＲ^１〜Ｒ^８置換基は水素であり、かつＡはＣＨ_２，ＣＯまたはＯである、請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ^４がＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルまたはＣＯＮＨ_２であり、そして置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^５，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２またはＯであるか、あるいは、Ｒ^６がＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルであり、そして置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２であるか、あるいはＲ^５がＣＯＯＲ^９であり、ここで、Ｒ^９はＣ_１−４アルキルであり、そして置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^６，Ｒ^７およびＲ^８は水素であり、かつＡはＣＨ_２である、請求項１に記載の化合物。
5. 製薬学的に許容できる担体および請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の治療学的に活性な量を含んでなる製薬学的組成物。
6. 請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の治療学的に活性な量が、製薬学的に許容できる担体とともに緊密に混合される、請求項５に記載の製薬学的組成物の製造方法。
7. 薬物として使用するための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
8. ＴＲＰＡ１アンタゴニストを同定するためのスクリーニングアッセイにおける作用剤としての、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
9. 催涙ガスまたは不能化薬剤として騒乱抑制のため、動物害虫防除のため、そして自己防御のための作用物としての、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
10. ａ）置換基Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^６，Ｒ^７，Ｒ^８およびＡが請求項１において定義される、式（ＩＩ）の中間化合物が酸化されるか
    

    

    あるいは、ｂ）式（Ｉ）の化合物が、技術上既知の変換反応にしたがって互いに転化されるか；または所望ならば、式（Ｉ）の化合物が製薬学的に許容できる酸付加塩に転化されるか、または反対に、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩がアルカリによって遊離塩基形態物に転化され；そして所望ならば、その立体化学的異性形態物を製造する、
    式（Ｉ）の化合物の製造方法。