JP2011505575A

JP2011505575A - マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂに対する誘導型耐性の検出

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Publication number: JP2011505575A
Application number: JP2010536986A
Authority: JP
Inventors: ユーチャールズ; マイケルゴスネルカーティス; ホイットリービッキー; ジェイ．ターナーデイビッド
Original assignee: Becton Dickinson and Co
Current assignee: Becton Dickinson and Co
Priority date: 2007-12-04
Filing date: 2008-11-25
Publication date: 2011-02-24
Also published as: EP2227554A1; BRPI0820719A2; AU2008331546A1; US20090142796A1; CA2707033A1; CN101903533A; WO2009073472A1; BRPI0820719A8

Abstract

本発明の実施形態は、自動化された微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムにおいて、微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出するための試験パネルおよび方法を提供する。複数ウェル試験パネルのウェルは、マクロライド薬、リンコサミド薬、およびマクロライド薬とリンコサミド薬の組合せを含む。試験パネルには、培養液で懸濁された微生物が接種され、自動化された微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システム中に配置される。試験パネルはシステム内で培養され、ウェルでは微生物の成長が監視される。

Description

患者の診断および治療に関係する微生物学的サンプルに対して試験を実施する従来システムは多く存在する。微生物サンプルは、感染した傷、生殖器の感染、脳脊髄液、血液、および膿瘍を含む様々なソースから得ることができる。これらの微生物サンプルから、所定濃度の細菌または細胞懸濁液を作成する確立された手順に従って、接種材料が調製される。懸濁液のさらなる処理は、使用する試験方法に依存するはずである。

これらのシステムは、例えば、どの微生物が患者のサンプル中に存在するかを同定するために使用される。通常、このようなシステムでは、試薬が、同定トレイのキューピュール（ｃｕｐｕｌｅ）、または試験ウェル中に置かれ、それは、微生物の活発に成長する培養物が存在すると変色する。変色するかしないかに基づいて、微生物は、参照表を用いることにより同定することができる。

微生物の感受性試験を目的として他のシステムが開発されてきた。これらのシステムは、抗生物質など、様々な治療に対するサンプル中の微生物の感受性を判定するために使用される。これらの試験結果に基づいて、医師は、次いで、例えば、微生物を殺すまたは抑制することに有効である抗菌製剤を調製することができる。具体的には、定性的な感受性試験は、特定の抗生物質に対して耐性があるか、それとも敏感であるかを示すが、微生物の感度または耐性の程度に対する指示を提供することはない。他方で、定量的な感受性試験は、微生物の成長を抑制するために必要な抗菌薬の濃度の指示を提供する。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）という用語は、微生物の成長を抑制するのに必要な抗菌性薬の最小濃度を指すために使用される。

技術者の処理時間を最小化するために、ならびに人的過誤の可能性を最小化するために、これらの試験を実施するには自動化されたシステムが望ましい。さらに、迅速かつ正確に結果が得られる自動化システムが好ましい。

参照によりその開示を本明細書に組み込む特許文献１、特許文献２、特許文献３は、試験過程中、人間の介入量を最小化させた、同定および感受性のために複数の複数ウェル試験パネルを試験するこのような１つの自動化された微生物学的試験システムについて述べている。さらに、このシステムは、比色タイプ試験、および蛍光分析タイプ試験を共に行う。さらに、このシステムは、収集した試験データを迅速に分析して、正確な同定および／または感受性試験結果を生成する。

ブドウ球菌および／または連鎖球菌のいくつかの菌株は、誘導型マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）として知られる抗生物質の耐性表現型を発現することができる。これらの微生物は、ｅｒｍ遺伝子を保有することが示されており、また微生物が誘導条件の下で成長するときに限って、遺伝子生成物を発現することになる。臨床検査標準委員会（ＣＬＳＩ）は、ｉＭＬＳｂ表現型を検出するために、「Ｄテスト」の使用を推奨している。「Ｄテスト」は、成長培地中にエリスロマイシンが存在すると、ｅｒｍ遺伝子の発現を誘導するという知識に基づいている。

米国特許第６，０９６，２７２号明細書米国特許第６，３７２，４８５号明細書米国特許第７，１１５，３８４号明細書

Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) M100-S15, p.114

しかし、「Ｄテスト」が、ｉＭＬＳｂ表現型の検出に対して診断的に有用であるためには、まず微生物を、エリスロマイシンに対する耐性とクリンダマイシンに対する感受性を確認するために試験する必要がある。

「Ｄテスト」を行うためには、まず、試験微生物の標準化された懸濁液を作成する必要がある。次いで、微生物の薄いローン（ｌａｗｎ）が寒天平板上で培養される。特定量のエリスロマイシンを含浸させたフィルタディスクがそのローン上に配置される。特定量のクリンダマイシンを含浸させた第２のフィルタディスクが、エリスロマイシンディスクから固定された距離の同じローン上に配置されることになる。次いで、寒天平板は、一晩培養される。培養中、フィルタディスク中の抗生物質は、寒天培地中に拡散し、寒天平板にわたって抗生物質の勾配を形成する。エリスロマイシンディスクとクリンダマイシンディスクの互いに対する近接性により、２つの抗生物質の複合された勾配が、２つのディスク間で寒天中に形成される。試験微生物が、誘導性のｅｒｍ遺伝子を保有する場合、２つのディスク間の領域で、クリンダマイシンに対してより耐性を有するようになり、したがって、「Ｄ」形状の成長抑制ゾーンが形成される。Ｄテストは、ｉＭＬＳｂ表現型を検出するには非常に有効な方法であるが、かなりの量の試験微生物および抗生物質試薬の操作を必要とし、また試験結果の主観的解釈が必要となる。

自動化された抗生物質感受性試験（ＡＳＴ）システムにおいて、微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出し、抗生物質ディスクを扱う必要性をなくすためのユーザが使いやすい試験が求められている。

一実施形態では、複数のウェル、リンコサミド薬、およびマクロライド薬を有する試験パネルであって、１つまたは複数のウェルが、リンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む、試験パネルが、自動化された微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムなどの試験システムに対して提供される。適切なリンコサミド薬の例は、クリンダマイシンであり、また適切なマクロライド薬の例は、エリスロマイシンである。

他の実施形態では、複数のウェル、リンコサミド薬、およびマクロライド薬を有する試験パネルであって、１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まず、また１つまたは複数のウェルがマクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まず、さらに１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む、試験パネルが、自動化された微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムなどの試験システムに対して提供される。

さらなる実施形態では、複数のウェル、少なくとも１つのリンコサミド薬、および少なくとも１つのマクロライド薬を有する試験パネルであって、１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まず、また１つまたは複数のウェルがマクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まず、さらに１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む、試験パネルが、自動化された微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムなどの試験システムに対して提供される。

他の実施形態では、複数のウェルを有する試験パネルに試験微生物を接種するステップであって、１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含み、また１つまたは複数のウェルがリンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まず、さらに１つまたは複数のウェルがマクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まない、ステップと、試験パネルを試験システム中に配置するステップと、試験パネルを適切な温度で培養するステップと、ウェル中の試験微生物の成長速度を監視するステップと、次いで、リンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まないウェル中の試験微生物の成長速度、マクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まないウェル中の試験微生物の成長速度、およびリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含むウェル中の試験微生物の成長速度を比較するステップとにより、試験システムにおいて、微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出する方法が提供される。試験微生物におけるマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）への耐性の存在は、マクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まないウェルにおける耐性により、リンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まないウェルにおける感受性により、かつリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む前記ウェルにおける耐性により示される。

さらなる実施形態では、複数のウェルを有する試験パネルに試験微生物を接種するステップであって、１つまたは複数のウェルが、リンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む、ステップと、自動化された試験システム中に試験パネルを配置するステップと、試験パネルを適切な温度で培養するステップと、リンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含むウェル中の試験微生物の成長速度を監視するステップとにより、自動化された試験システムにおいて、エリスロマイシンに耐性があり、かつクリンダマイシンに感受性があることが知られている微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出する方法が提供される。リンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む１つまたは複数のウェル内における微生物の成長の存在は、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する耐性の存在を示す。

筐体のドアが閉められた状態で開示された（例えば、特許文献１参照）、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を実施するための従来技術のシステムの正面斜視図である。筐体のドアが開いた状態で開示された（例えば、特許文献１参照）、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を実施するための従来技術のシステムの正面斜視図である。開示された（例えば、特許文献１参照）、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を実施するための従来技術のシステムのＩＤ／ＡＳＴ試験パネルの斜視図である。開示された（例えば、特許文献１参照）、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を実施するための従来技術のシステムのＩＤ／ＡＳＴ試験パネルの上面図である。開示された（例えば、特許文献１参照）、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を実施するための従来技術のシステムのＩＤ／ＡＳＴ試験パネルの底面図である。開示された（例えば、特許文献１参照）、図１の装置の内部コンポーネントの概略的な上面図である。

本発明の実施形態は、試験システムにおける微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出するための試験パネルおよび方法を提供する。適切な試験システムは、微生物の同定（ＩＤ）試験システム、または抗菌感受性定量（ＡＳＴ）の試験システム、または組み合わされた微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）の試験システムを含む。さらに、試験システムは、自動、半自動、または手動の試験システムとすることができる。

高い信頼性で、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）を行うための適切な自動化された試験システムの例が開示されており（例えば、特許文献１参照）、その開示を参照により本明細書に組み込む。このシステムは、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０に含まれるウェル３１からの読取りに基づいて同定および感受性を判定する（図１および２を参照）。例えば、一実施形態では、ウェル３１は、微生物が接種された後しばらくして、光学的性質を変化させることのできる異なる試薬基材および／または異なる抗菌性希釈液を含む。開示された検出法（例えば、特許文献１参照）では、吸収、散乱、および／または蛍光における変化を測定する。それはさらに、ルミネセンスを測定することもできる。これらの変化は処理されて、微生物の同定および感受性を判定する。

システムは、技術者に、例えば、未知の微生物をＩＤ／ＡＳＴパネル３０のウェル３１に接種した後、そのパネルを機器２０中に配置できるようにし（図４で示される）、パネルは、設定された温度で培養され、周期的に変化についての問い合わせが行われ、微生物の同定と抗菌剤感受性の分析が行われる。装置２０は、複数のＩＤ／ＡＳＴパネル３０を保持し、以下で示すように、陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙ）分析結果を技術者に提供する。

図１〜３で示すように、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、ＩＤおよびＡＳＴ試験の両方で必要な試薬が接種される使い捨てのデバイスである。試験は、各ＩＤ／ＡＳＴパネル３０上の個々のウェル３１中に配置されたサンプルおよび試薬により生成される反応に対して行われる。ウェル３１は、行および列を有する２次元配列として、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０上に配置される。

機器２０は、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０を試験するために必要なものを完備し、かつ十分に自律的であり、適切な試験結果を供給する。機器２０は、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０を格納し、培養し、かつ読取りを行う。機器２０は、図１では閉じた状態で、また図２では開いた状態で示されたドア２１を有し、機器２０の内部へのアクセスを可能にする。

図１は、機器２０に通信可能に接続されたパーソナルコンピュータ（ＰＣ）ワークステーション４０を示している。ＰＣワークステーションは、機器２０の微生物学的情報システムの報告およびデータ管理機能を補足するものであり、それを以下で論ずる。ＰＣワークステーション４０は、経験的な治療判断を改善し、治療介入例を特定するためのツールを提供する。ＰＣワークステーション４０はまた、感染制御および疫学を支援するための報告ツールを組み込む。

機器２０は、図２で示すようにカルーセル５０を含む。カルーセル５０は、円筒形のケージを形成するように、駆動リング５２にボルトで留められたリングおよびリブから構成されたアセンブリ５１を含む。カルーセル５０は、機器の筐体６０中に垂直に取り付けられる（図１で示される）。機器の筐体６０は、カルーセルコンパートメント６１、および電子機器コンパートメント６２を画定する（図４で示される）。カルーセルコンパートメント６１は、実質的に一様な温度の培養環境を提供するように隔離され、かつ通常の動作下では、周囲光が侵入しないように耐光性がある。

カルーセルコンパートメント６１は、第１および第２の所定の設定点が、それぞれ、３９℃と３３℃である場合、３５℃の温度で連続的に維持されることが好ましい。しかし、当業者であれば理解されるように、特定の試験要件を達成するために、他の温度設定を使用することもできる。

図４で示すように、複数の光源アセンブリが、カルーセルコンパートメント６１内に、かつアセンブリ５１の円周部の外に取り付けられる。本発明の好ましい実施形態では、光源アセンブリは、可視光源アセンブリ８０、および紫外線（ＵＶ）光源アセンブリ８１を備える。

図３Ａ〜３Ｃでは、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０が、組み合わされた形式で提供されている。各ＩＤ／ＡＳＴ組合せパネル３０は、同じパネル上でＩＤおよびＡＳＴ試験を実施できる試薬ウェルの位置を有する。ＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、ＩＤセクション３３とＡＳＴセクション３４とに分離されたウェル３１を含む。ＩＤ／ＡＳＴパネル３０のＩＤセクション３３は、５１個のウェル３１からなる。ＩＤ／ＡＳＴパネル３０のＡＳＴセクション３４は、乾燥させた抗生物質をその中に含む８５個のウェル３１からなる。しかし、当業者であれば、ＩＤ／ＡＳＴ組合せパネルに代えて、分離したＩＤパネルまたはＡＳＴパネルを使用できることも理解されよう。

一実施形態では、試験パネルは、０．０５マイクログラム／ｍｌから８．０マイクログラム／ｍｌの再水和濃度範囲で乾燥リンコサミド薬をその中に含むがマクロライド薬を含まない少なくとも１つまたは複数のウェル３１を有しており、例えば、３つのウェルが、乾燥クリンダマイシンを、０．１２５マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で含む。さらに、少なくとも１つまたは複数のウェル３１は、０．０５マイクログラム／ｍｌから８．０マイクログラム／ｍｌの再水和濃度範囲で、乾燥マクロライド薬をその中に含むがリンコサミド薬を含まず、例えば、２つのウェルが、乾燥エリスロマイシンを、０．４マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で含む。少なくとも１つまたは複数のウェルは、乾燥リンコサミド薬および乾燥マクロライド薬を共に、０．０５マイクログラム／ｍｌから８．０マイクログラム／ｍｌの再水和濃度範囲でその中に含み、例えば、１つのウェルが、乾燥クリンダマイシンを０．１２５マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で、また乾燥エリスロマイシンを、０．４マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で含む。この特定の実施形態では、個々のリンコサミド薬、個々のマクロライド薬を含むウェル、および両方の薬剤の組合せを含むウェルは、試験パネルのＡＳＴセクション中に位置するが、これらのウェルは、ＡＳＴセクションまたはＩＤセクションのいずれにも位置することもできる。さらに、この実施形態では、リンコサミド薬（クリンダマイシン）と同様のタイプのもの、およびマクロライド薬（エリスロマイシン）と同様のタイプのものが個々の薬剤ウェル中で使用され、かつ両方の薬剤の組合せを含むウェル中でも使用される。しかし、個々の薬剤ウェルは、両方の薬剤の組合せを含むウェル中で使用されるリンコサミド薬のタイプ、およびマクロライド薬のタイプを除いた別のタイプのリンコサミド薬および／またはマクロライド薬を含むことができる。

試験すべき微生物が、エリスロマイシンに対して耐性ＭＩＣ、およびクリンダマイシンに対して感受性ＭＩＣを有することが知られている他の実施形態では、試験パネルは、乾燥リンコサミド薬および乾燥マクロライド薬を、０．０５マイクログラム／ｍｌから８．０マイクログラム／ｍｌの再水和濃度範囲で含む少なくとも１つまたは複数のウェルを有しており、例えば、１つのウェルは、０．１２５マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で乾燥クリンダマイシンを、０．４マイクログラム／ｍｌの再水和濃度で乾燥エリスロマイシンを共に含む。

ＩＤ／ＡＳＴパネル３０はまた、ベース３５、シャーシ３６、蓋３７、およびアセチルセルロースパッド３８を含む。各ＩＤ／ＡＳＴパネル３０はまた、個々のＩＤ／ＡＳＴパネル３０の完全な製造履歴を特定するための情報を含むパネルラベル（図示せず）を含む。

バーコードラベルは、ＩＤ／ＡＳＴパネルタイプに関係する情報を提供し、さらに識別のために一意の一連番号を有する。バーコードラベルは、Ｃｏｄｅ１２８、数値フォーマット、または任意の他の適切なバーコードフォーマットで提供することができる。

各ＩＤ／ＡＳＴパネル３０には、機器２０中に配置される前に、培養液で懸濁された微生物が接種される。実際には、微生物は、ＩＤ接種材料液またはＡＳＴ接種材料液における一次培養からの微生物学的成長物が処理され、かつ再懸濁された希釈液であり、それは次いで、試験パネル中に注がれる。ＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、充填するために接種ポート３９の上部で傾斜させる。別個の接種材料が、手動でＩＤおよびＡＳＴポート３９に追加される。ＩＤセクション３３における各ウェル３１は、接種材料がパッド３８の方向にパネルを下って流れるにつれて、ＩＤ接種材料液が接種される。ＡＳＴセクション３４における各ウェル３１は、ＡＳＴ接種材料液で接種される。接種材料は、液の前部がパッド３８の方へ進むにつれて、曲がりくねってＩＤ／ＡＳＴパネル３０を下って流れ、ウェル３１を満たす。各ウェル３１には、通気孔がつけられており、液がウェル３１を満たすことができる。各ウェル３１は、鋭い、円形の縁を有しており、超過しないように均一量の液を分離し、かつ各ウェル３１を、隣接するウェル３１における液から隔離する。パッド３８は、余分の液を吸収する。

ＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、パネル接種ステーション（図示せず）で接種材料液が接種される。各ステーションは、接種材料液（すなわち、ＩＤ接種材料液およびＡＳＴ接種材料液）の２つの管を保持し、１つのＩＤ／ＡＳＴパネル３０を支持する。接種材料液は、重力によりＩＤ／ＡＳＴパネル３０を通って流れる。

ＩＤ接種材料液およびＡＳＴ接種材料液は、孤立した細菌コロニーを、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０のＩＤセクション３３およびＡＳＴセクション３４に加えるために、調製された接種材料へと処理するのに必要なすべての試薬を含む試薬サブシステムを備える。

ＩＤ接種材料液は微生物の同定用に使用される。様々なＩＤ接種材料液を使用することができるが、食塩水が好ましい。パネル接種ステーションにおいて、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０の充填を促進するために、界面活性剤を加えることもできる。ＩＤパネル接種のための接種材料密度は、少なくとも１×１０⁵ｃｆｕ／ｍｌであることが好ましい。フェノールレッド、およびイオドニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）を含む様々な同定試薬を使用することができる。４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）誘導体、メチルアミノクマリン（４−ＡＭＣ）誘導体、パラニトロフェノル誘導体、およびエスクリンを含む様々な基材を使用することもできる。

ＡＳＴ定量のために使用されるＡＳＴ接種材料液は、ミューラーヒントン培養液の修正された調合物である。ＡＳＴパネル接種に対する接種材料密度は、少なくとも１×１０⁵ｃｆｕ／ｍｌであることが好ましい。「迅速（ｒａｐｉｄ）」ＡＳＴ試験結果など、本発明の他の実施形態に対して、異なる接種材料密度を使用することができる。それは、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０に接種して１６時間以内に得られるＡＳＴ試験の結果をいう。

様々なＡＳＴ指示薬を使用することができる。本発明におけるＡＳＴ定量に対して好ましい指示薬は、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）、すなわち、レドックスで緩衝化される酸化還元指示薬である。指示薬は、機器２０により試験される微生物サンプルを加える直前にＡＳＴ接種材料液に加えられて混合される。

制御プロセッサ７０は、検出、同定、および感受性試験のために、ウェル３１からのデータを解釈する。制御プロセッサは、このデータを解釈するために３つの可変の閾値レベル、すなわち、絶対閾値、動的閾値、および相対閾値を使用する。絶対閾値を使用する場合、正規化されたウェル３１の読取りが、所与の所定の値を超えるか（陽性）、それともそれ未満であるか（陰性）を判定することにより、陽性評価が行われる。動的閾値が使用される場合、試薬反応定量は、信号増加の変化率に関する検出データの第１および第２の差、または他の数学的操作を用いて、計算される第１および／または第２の差のいくつかのパラメータが、いつ超過したかを決定することにより時間の関数として計算される。相対閾値を用いる場合、試薬反応定量は、閾値を、問題のウェル３１の開始信号レベルを超える所定のパーセンテージに設定することにより行われる。

動作においては、ＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、機器２０のカルーセル５０中に取り付けられ、培養される。可視光源アセンブリ８０およびＵＶ光源アセンブリ８１が順次に通電されると、光の赤、緑、青、および蛍光波長に応じて、１つの読取りが行われる。カルーセル５０の回転速度に基づいて、光学的測定システム１００により所定の間隔で光度の読取りが行われる。

例えば、カルーセル５０が、毎分２．０回転（ＲＰＭ）の角速度で、駆動システム５６により駆動される場合、カルーセル５０の１回転には、３０秒を必要とする。したがって、赤、緑、青、およびＵＶ波長に対するデータを蓄積するためには２分を要する。したがって、この例では、データの完全な組は、本発明により、２分ごとに取得することができる。角速度を変えることは可能なので、異なる試験に対して、異なる角速度を使用することもできる。例えば、ＵＶデータを、１．０ＲＰＭで蓄積する（一方、他の試験データは、２．０ＲＰＭで蓄積される）ことが望ましい可能性がある。この場合、完全なデータの組は、完了するのに２分３０秒必要となるはずである。

ウェル３１の読取りに基づくＡＳＴの終点結果は、所定期間の培養後に取得することができるが、好ましい終点は１８〜２４時間の培養後である。

実施形態によれば、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を決定するための方法の陽性の結果は、エリスロマイシンに耐性があり、したがって８μｇ／ｍｌ以上の濃度でエリスロマイシンを含むウェル中で成長する微生物であり、クリンダマイシンに感受性があり、したがって０．５μｇ／ｍｌ以上の濃度でクリンダマイシンを含むウェル中で成長する微生物であり、かつエリスロマイシンとクリンダマイシンの組合せに耐性があり、したがってエリスロマイシンと共にクリンダマイシンを含むウェル中で成長する微生物である。

エリスロマイシンに対して耐性を有しており、かつクリンダマイシンに対して感受性のあることが知られている微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を判定するための方法に対する陽性の結果は、エリスロマイシンと共にクリンダマイシンを含むウェル中での微生物の成長が存在することである。

制御プロセッサ７０は、グラム陰性有機体に対する１２６を超える種、およびグラム陽性有機体に対する１０３を超える種を含むＩＤ分類群データベースを含む。制御プロセッサ７０はまた、グラム陽性およびグラム陰性の両方に対するＩＤ分類群データベースと等価なＡＳＴ分類群データベースを含む。ＡＳＴ試験のために、システムはまた、現在知られているすべてのヒトおよび獣医学的抗菌薬を有するデータベースを含む。試験パネル３０と光検出ユニット１００の間に、複数の光学的フィルタが配置される。フィルタは、所定の波長まわりの所定の帯域幅を有する（図３Ｂのエレメント３１で示された）ウェルから放出された光、またはそれにより吸収された光だけを通過させる。

ブドウ球菌の多様な収集物が、本発明の実施形態（ＰｈｏｅｎｉｘｉＭＬＳｂ）に従って、かつ「Ｄテスト」を用いて試験された。次いで、表１で示す各微生物に対する各試験法の結果が比較された。

本発明の実施形態によれば、試験パネルのＡＳＴセクション中の４つのウェルは、乾燥クリンダマイシンおよびエリスロマイシンを、以下の各再水和濃度（μｇ／ｍｌ）で含んでいる。すなわち、０．１２５および０．４、０．１２５および０．８、０．２５および０．４、０．２５および０．８０である。

このＡＳＴ定量に使用されるＡＳＴ接種材料液は、ミューラーヒントン培養液の修正された調合物であり、一方、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）が指示薬として使用された。

接種されたＩＤ／ＡＳＴパネル３０は、カルーセルコンパートメント中に装填され、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性の存在に関する陽性または陰性の結果が得られるまで、３５℃の温度で培養された。

Ｄテストは、臨床検査標準委員会（ＣＬＳＩ）のＭ１００−Ｓ１５、１１４頁に従って行われた。誘導型クリンダマイシン耐性は、接種材料純度検査に使用される標準の血液寒天培地の上に、１５マイクログラムのエリスロマイシンディスクの縁部から１５ｍｍ離して、２マイクログラムのクリンダマイシンディスクを置くことにより、ディスク近接試験を用いて検出することができる。培養を行った後に、クリンダマイシンゾーンの平坦化を示さない微生物は、クリンダマイシンに感受性があると報告されることになる。エリスロマイシンディスクに隣接するクリンダマイシンゾーンの平坦化（「Ｄ」ゾーンと呼ばれる）を示す微生物は、誘導型クリンダマイシン耐性を有する。このような分離株（ｉｓｏｌａｔｅｓ）は、クリンダマイシン耐性があるものとして報告されるべきである。

その結果は、本発明の実施形態と「Ｄテスト」の間でほぼ一致することを示しており、したがって、微生物内におけるマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）に対する誘導型耐性を検出する代替的方法として、実施形態の使用の妥当性が検証されている。

本発明を、特定の実施形態により上記で述べてきたが、本発明は、本明細書で開示された諸実施形態に制限または限定することを意図するものではないことを理解されたい。そうではなくて、本発明は、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれる様々な方法、構造、およびその修正形態を包含することが意図される。

本発明のいくつかの例示的な実施形態だけが上記で詳細に述べられてきたが、当業者であれば、本発明の新規の教示および利点から実質的に逸脱することなく、多くの修正が例示的な実施形態で可能であることを容易に理解されよう。したがって、このようなすべての修正形態は、添付の特許請求の範囲で定義された本発明の範囲内に含まれることが意図される。

Claims

複数のウェルと、
リンコサミド薬と、
マクロライド薬とを含み、
１つまたは複数の前記ウェルは、前記リンコサミド薬および前記マクロライド薬を共に含むことを特徴とする試験パネル。
１つまたは複数の前記ウェルは、前記リンコサミド薬を含むが、前記マクロライド薬を含まないことを特徴とする請求項１に記載の試験パネル。
前記ウェルの少なくとも３つは、前記リンコサミド薬を含むが、前記マクロライド薬を含まないことを特徴とする請求項２に記載の試験パネル。
前記リンコサミド薬は、クリンダマイシンであることを特徴とする請求項１に記載の試験パネル。
前記クリンダマイシンは、脱水状態であることを特徴とする請求項４に記載の試験パネル。
前記クリンダマイシンの再水和濃度は、０．０５マイクログラム／ｍｌから８マイクログラム／ｍｌの範囲内にあることを特徴とする請求項５に記載の試験パネル。
前記クリンダマイシンの再水和濃度は、０．１２５マイクログラム／ｍｌであることを特徴とする請求項５に記載の試験パネル。
１つまたは複数の前記ウェルは、前記マクロライド薬を含むが、前記リンコサミド薬を含まないことを特徴とする請求項１に記載の試験パネル。
前記ウェルの少なくとも３つは、前記マクロライド薬を含むが、前記リンコサミド薬を含まないことを特徴とする請求項８に記載の試験パネル。
前記マクロライド薬は、エリスロマイシンであることを特徴とする請求項１に記載の試験パネル。
前記エリスロマイシンは、脱水状態であることを特徴とする請求項１０に記載の試験パネル。
前記エリスロマイシンの再水和濃度は、０．０５マイクログラム／ｍｌから８マイクログラム／ｍｌの範囲内にあることを特徴とする請求項１１に記載の試験パネル。
前記エリスロマイシンの再水和濃度は、０．４マイクログラム／ｍｌであることを特徴とする請求項１１に記載の試験パネル。
複数のウェルを有する試験パネルに、試験微生物を接種するステップであり、１つまたは複数の前記ウェルはリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含み、また１つまたは複数の前記ウェルはリンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まず、さらに１つまたは複数の前記ウェルはマクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まない、ステップと、
前記試験パネルを試験システム中に配置するステップと、
前記試験パネルを適切な温度で培養するステップと、
前記ウェル中の前記試験微生物の成長速度を監視するステップと、
前記リンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まない前記ウェル中の前記試験微生物の成長速度、前記マクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まない前記ウェル中の前記試験微生物の成長速度、および前記リンコサミド薬と前記マクロライド薬を共に含む前記ウェル中の前記試験微生物の成長速度を比較するステップであり、前記試験微生物のマクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）への耐性の存在が、前記マクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まない前記ウェルにおける耐性により、前記リンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まない前記ウェルにおける感受性により、かつ前記リンコサミド薬と前記マクロライド薬を共に含む前記ウェルにおける耐性により示される、ステップと
を含むことを特徴とする方法。
前記ウェルの少なくとも３つは、前記リンコサミド薬を含むが、マクロライド薬を含まないことを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記リンコサミド薬は、クリンダマイシンであることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記ウェルの少なくとも３つは、前記マクロライド薬を含むが、リンコサミド薬を含まないことを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記マクロライド薬は、エリスロマイシンであることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記試験システムは、自動試験システム、半自動試験システム、または手動の試験システムであることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記自動試験システムは、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
前記試験システムは、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
前記試験システムは、抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
複数のウェルを有する試験パネルに、エリスロマイシンに対して耐性があり、かつクリンダマイシンに対して感受性を有する試験微生物を接種するステップであり、１つまたは複数の前記ウェルはリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含む、ステップと、
前記試験パネルを試験システム中に配置するステップと、
前記試験パネルを適切な温度で培養するステップと、
前記ウェル中の前記試験微生物の成長速度を監視するステップとを含み、
前記リンコサミド薬および前記マクロライド薬を共に含む前記１つまたは複数の前記ウェル内における成長の存在は、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミンｂ（ｉＭＬＳｂ）への耐性の存在を示していることを特徴とする方法。
前記試験システムは、自動試験システム、半自動試験システム、または手動の試験システムであることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
前記自動試験システムは、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
前記試験システムは、微生物の同定（ＩＤ）および抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
前記試験システムは、抗菌感受性定量（ＡＳＴ）システムであることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
複数のウェルと、
少なくとも１つのリンコサミド薬と、
少なくとも１つのマクロライド薬とを含み、
１つまたは複数の前記ウェルはリンコサミド薬およびマクロライド薬を共に含み、また１つまたは複数の前記ウェルはリンコサミド薬を含むがマクロライド薬を含まず、さらに１つまたは複数の前記ウェルはマクロライド薬を含むがリンコサミド薬を含まないことを特徴とする試験パネル。