JP5814259B2 - 診断解析の方法及び装置 - Google Patents
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Description
・濁度及び/または病原体の濃度を測定及び継続的にモニタリングする第1工程、すなわち、試験試料中に存在する病原体の数、細菌数の場合にはCFUで表したものを、分析試料が接種され、病原体が存在する場合には内部で病原体の複製または増殖が起こる液体培地、好ましくは分析する病原体の増殖に特異的かつ選択的な液体培地を、機器計測法、好ましくは光散乱法により、または実施形態によっては分光法や他の光電子法により、または高周波や超音波に基づいて計数し、上記の測定及びモニタリングが液体培地中で増殖する病原体の複製の間に動的に行われる、第1工程、及び
・進行中の病原体の複製により、マクファーランド濁度スケールなどの標準化された尺度に基づく所望の濁度及び/または所望の病原体の濃度値もしくは数、及び/または細菌の場合にCFUで表現される病原体の濃度に達した、第1工程から直接得られた生体試料を含有する液体培地の少なくとも一定分量を取り出し、第1工程の測定結果に基づいてその機能を較正した質量分光光度法的同定手段に、該一定分量直接使用して病原体を同定する、病原体の同定を行う第2工程。
・試験試料中の濁度及び/または病原体の濃度もしくは病原体の数(細菌数の場合にはCFUで表す)を、分析試料が接種され、病原体が存在する場合には内部で病原体の複製が起こる液体培地を、好ましくは光散乱法により、または実施形態によっては分光法や他の光電子法により、または高周波や超音波に基づいて、測定及び継続的にモニタリングする手段、及び
・進行中の病原体の複製により、マクファーランド濁度スケールなどの標準化された尺度に基づく所望の濁度値及び/または病原体の濃度値もしくは数、及び/または細菌数の場合にはCFUで表現される病原体の濃度に達した、生体試料を含有する液体培地の少なくとも一定分量中の病原体を同定することができる質量分光光度法的同定手段であって、ここで、質量分光光度法的同定手段は、上記測定及びモニタリング手段により得られた濁度及び/または病原体の濃度の測定結果に基づいて、その機能が校正されている。測定及びモニタリング手段は、病原体の濃度または数の測定値と共にまたはその代替として、上記濁度値の所定の段階的経過に関する第1のデータ、並びに上記濁度値及び/または病原体の濃度もしくは数と、質量分光光度法的同定手段に、その機能に好適であるとして選択されて、投入された試料の重量値の範囲との間の定義済みの相関に関する第2のデータを記録する記録手段を有する処理手段を有する。
・液相の成長促進培養培地での培養増殖で陽性を示した試料をそのまま、またはその一定分量を、次に行う質量分光光度法による同定に使用すること、
・陽性試料を遠心分離によってペレット化することなく試料をそのまま使用できる可能性、
・陽性試料を遠心分離によってペレット化することを避けること、
・過剰に濁った試料の使用を避けて質量分光光度計の詰まりを避けるために、次に行う質量分光光度法のための3000〜15000ダルトンの最適範囲に好適かつ同等の、マクファーランド値及び/または病原体計数(細菌の場合にはCFUで表される)の結果を提供すること、
・一般的に、3時間以内の増殖で試料を使用する場合に、試料採取時の混入細菌の増殖を解析から除外すること、
・上述の3時間以内の増殖で使用する場合に、混入を伴わずに試料を質量分光光度計に供給すること、
・質量分光光度計での使用に要求される適切であると思われる濁度の範囲、典型的には0.1、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5、1.75、2.00、2.22、2.5など、の陽性の試料を、病原体数(細菌の場合にはCFUで表される)の表示も合わせて、提供すること、
・感染の原因となる病原体と同様に、同じ試料中の活性かつ複製可能な混入病原体を2種までその存在を質量分光光度計により同定すること、
・質量分光光度計により検出可能な最小値に同等なマクファーランド濁度値を有する、すなわち、2500ダルトンの陽性試料を調製すること、
・標準化したマクファーランドスケールによる濁度測定及び可能である場合には病原体数(細菌の場合にはCFUで表される)と質量分光光度計により検出するのに適切な分子量との間の相関性を決定すること、
・本発明のある種の実施形態では、特定のライブラリー(例えば、黄色ブドウ球菌(MRSA))を使用しての解釈が困難な細菌を検出できる選択性液体培地を使用し、質量分光光度計から適切な応答を得ること。
Claims (6)
- 診断解析方法、特に、生体試料中に存在するウイルス、細菌、その他の微生物等の対象病原体を同定する方法であって、
分析試料が接種され、対象病原体が存在する場合には内部で対象病原体の複製が起こる液体培地の濁度及び/または対象病原体の濃度を、機器計測法により測定及び継続的にモニタリングする第1工程であって、前記測定及びモニタリングが液体培地中で増殖する対象病原体の複製の間に動的に行われる第1工程、及び
マクファーランド濁度スケールなどの標準化された尺度に基づく所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の濃度に達した、前記第1工程から直接得られた生体試料を含有する液体培地の少なくとも一定分量を取り出し、前記第1工程の測定結果に基づいてその機能を校正した質量分光光度法的同定手段(15)に、前記一定分量を直接使用して対象病原体を同定する、対象病原体の同定を行う第2工程を有し、
前記所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の濃度は、前記第2の同定工程を行うために各段階において確認される特定の必要性に基づいて、前もって前記第1工程の間に選択され、
前記第1工程において所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の相対濃度を得るために必要な時間は、前記第2工程での同定が試料中の混入病原体の存在の影響を受けない時間である、
ことを特徴とする診断解析方法。 - 前記第1工程で前記所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の相対濃度を得るために必要な時間が45分から3時間である、
ことを特徴とする請求項1に記載の診断解析方法。 - 前記第1工程で前記所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の相対濃度にされた試料を、3時間以内に前記第2工程で使用する、
ことを特徴とする請求項1または2に記載の診断解析方法。 - 前記第1工程が、前記第2工程で同定される試料の重量が3000〜15000ダルトンの範囲に対応する試料の濁度値を提供することができる、
ことを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項に記載の診断解析方法。 - 前記第1工程において、所望の対象病原体の増殖のために、選択性液体培地または選択性物質を添加した培地を使用する、
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれか1項に記載の診断解析方法。 - 診断解析装置、特に、生体試料中に存在するウイルス、細菌、その他の微生物等の対象病原体を同定するための装置であって、
分析試料が接種され、対象病原体が存在する場合には内部で対象病原体の複製が起こる液体培地の濁度及び/または所望の対象病原体の濃度を、機器計測法により測定及び継続的にモニタリングする手段(12)、及び
マクファーランド濁度スケールなどの標準化された尺度に基づく所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の濃度値に達した、生体試料を含有する液体培地の少なくとも一定分量中の対象病原体を同定することができる質量分光光度法的同定手段(15)を有し、
前記質量分光光度法的同定手段(15)は、前記測定及びモニタリング手段(12)により得られた濁度及び/または所望の対象病原体の濃度の測定結果に基づいて、その機能が校正されており、
前記測定及びモニタリング手段(12)は、前記濁度値及び/または対象病原体の濃度の所定の段階的経過に関する第1のデータ(D1)、並びに前記濁度値及び/または対象病原体の濃度と、前記質量分光光度法的同定手段(15)に、その機能に好適であるとして選択されて、投入された試料の重量値の範囲との間の定義済みの相関に関する第2のデータ(D2)を記録する記録手段(28)を有する処理手段(26)を有し、
前記処理手段(26)は、前記質量分光光度法的同定手段(15)の特定の必要性に基づいて各段階において選択される前記第2のデータ(D2)に含まれる値の1つに基づいて、前記第1のデータ(D1)の中から所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の濃度を選択することができ、
前記測定及びモニタリング手段(12)が所望の濁度値及び/または所望の対象病原体の相対濃度を得るために必要な時間が、前記質量分光光度法的同定手段(15)による同定が試料中の混入病原体の存在の影響を受けない時間であるように構成されている、
ことを特徴とする診断解析装置。
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