CN101903533A - 检测对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性 - Google Patents

检测对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性 Download PDF

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Abstract

本发明的实施方案提供了一种测试板和方法，用于在自动化微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统中检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)。多孔测试板的孔含有大环内酯剂和林可酰胺剂以及大环内酯剂与林可酰胺剂二者的组合。测试板与液体培养基悬浮的微生物一起孵育，并置于自动化微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统中。让测试板在系统内孵育，并监视孔内微生物的生长。

Description

检测对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性
发明背景
现有的许多常规系统用于对与患者诊断和治疗相关的微生物学样品进行测试。微生物样品可来自各种来源，包括感染的伤口、生殖器感染、脑脊髓液、血液和脓肿。根据产生预定浓度的细菌或细胞悬浮液的规定程序来从那些微生物样品制备接种物。悬浮液的进一步处理则可取决于应用的检测方法。
这些系统例如用于鉴定患者的样品中存在哪些微生物。典型地在这种系统中，把试剂置于其内存在微生物变色的活性生长培养物的鉴定盘的吸盘或试孔中。基于颜色改变或缺乏颜色改变，就能够通过利用参照表来鉴定微生物。
已经开发了用于微生物的易感性测试的其他系统。这些系统用于确定样品中微生物对各种治疗(如抗生素)的易感性。基于这些测验结果，医生由此能够例如开出将成功杀死或抑制该微生物的抗微生物产品的处方。更具体地，定性易感性测试产生一种微生物对一种特定抗生素是有抗性或是易感性的指示，但是不提供该微生物的易感性或抗性程度的指示。另一方面，定量易感性测试则提供抑制该微生物的生长所需的抗微生物剂的浓度的指示。术语最低抑菌浓度(MIC)用于指代抑制该微生物生长所需的抗微生物剂的最低浓度。
进行这些测试需要自动化系统来最小化技术人员处理时间，同时最小化人为误差的可能性。另外，优选快速并准确获得结果的自动化系统。
其公开通过引用合并在此的美国专利No.6,096,272、美国专利No.6,372,485、和美国专利No.7,115,384描述了这样一种自动化微生物测试系统，该系统测试多个用于鉴定和易感性的多孔测试板，且在测试过程期间人为干预最小。此外，该系统进行比色型与荧光型测试。另外，该系统快速分析积聚的测试数据，以产生准确的鉴定和/或易感性测试结果。
葡萄球菌属和/或链球菌属的某些菌株可表达一种抗生素抗性表型，该表型已知被称为可诱导的大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b(inducible-macrolide-lincosamide-streptogramin b，iMLSb)。这些微生物显示具有erm基因，而且只有当该微生物生长于诱导条件下时才会表达该基因产物。临床和实验室标准研究所(CLSI)推荐使用“D-测试(D-test)”来检测iMLSb表型。“D-测试”是基于生长培养基中存在红霉素将诱导erm基因表达的这一认识。
但是为了使“D-测试”对于检测iMLSb表型有诊断价值，首先必须对微生物进行测试以证实对红霉素的抗性和对克林霉素的易感性。
为了进行“D-测试”，首先必须制备该测试微生物的标准化悬浮液。然后把该微生物的薄菌苔置于琼脂平板上。把灌注有特定量红霉素的滤盘置于菌苔上。把灌注有特定量克林霉素的第二滤盘以与红霉素盘相隔固定的距离置于相同的菌苔上。随后该琼脂平板孵育过夜。孵育期间，滤盘中的抗生素将弥散到琼脂培养基中，形成跨越整个琼脂平板的抗生素梯度。由于红霉素盘与克林霉素盘彼此接近，在两个盘之间的琼脂中形成两种抗生素的复合梯度。如果测试微生物具有可诱导的erm基因，它将变得对两个盘之间区域内的克林霉素具有更强的抗性，从而形成“D”形生长抑制区。D-测试是一种用于检测iMLSb表型的高度有效的方法，但是需要对测试微生物和抗生素试剂进行大量操作，以及对测试结果的主观解释。
需要一种用户友好的测试用以在自动化抗菌素易感性测试(AST)系统中检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)，而无需处理抗生素盘。
发明概述
在一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、林可酰胺剂、以及大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。合适的林可酰胺剂的一个例子是克林霉素，合适的大环内酯剂的一个例子是红霉素。
在另一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、林可酰胺剂、以及大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，并且一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。
在又一个实施方案中，提供了一种用于诸如自动化微生物鉴定(ID)与抗微生物易感性测定(AST)系统之类的测试系统的测试板，该测试板具有多个孔、至少一种林可酰胺剂、以及至少一种大环内酯剂，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，并且一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者。
在另一个实施方案中，提供了一种用于在测试系统中通过用测试微生物接种具有多个孔的测试板来检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)的方法，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者，一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，以及一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，将该测试板置于测试系统中，以合适的温度孵育该测试板，监视该测试微生物在这些孔中的生长速率，随后将在含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂的孔中测试微生物的生长速率、在含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂的孔中测试微生物的生长速率、以及在含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者的孔中测试微生物的生长速率进行比较。通过含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂的孔中的抗性，含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂的孔中的易感性，以及含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者的所述孔中的抗性，指示测试微生物中存在对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的抗性(iMLSb)。
在再一个实施方案中，提供了一种用于在自动测试系统中通过用测试微生物接种具有多个孔的测试板来检测已知抗红霉素且对克林霉素易感的微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)的方法，其中一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者，把该测试板置于自动检测系统中，以合适的温度孵育该测试板，并且监测含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者的孔中测试微生物的生长速率。含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者的一个或多个孔中微生物生长的存在，指示存在对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的抗性(iMLSb)。
附图说明
图1是美国专利No.6,096,272中公开的用于进行微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的现有系统的机箱门关闭的正面透视图。
图2是美国专利No.6,096,272中公开的用于进行微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的现有系统的机箱门打开的正面透视图。
图3A是一种美国专利No.6,096,3A73A中公开的用于进行微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的现有系统的ID/AST测试板的透视图。
图3B是一种美国专利No.6,096,272中公开的用于进行微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的现有系统的ID/AST测试板的俯视图。
图3C是一种美国专利No.6,096,272中公开的用于进行微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的现有系统的ID/AST测试板的仰视图。
图4是美国专利No.6,096,272中公开的图1设备的内部组件的示意性俯视图。
具体实施方式
本发明的实施方案提供了一种测试板和方法，用于在测试系统中检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)。合适的测试系统包括微生物鉴定(ID)测试系统，或抗微生物易感性测定(AST)测试系统，或组合的微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)测试系统。此外，该测试系统可以是自动的、半自动的或人工检测系统。
其公开内容通过引用合并在此的美国专利No.6,096,272公开了一种用于进行高度可靠的微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)的合适的自动化测试系统的例子。该系统基于来自ID/AST板30中所含的孔31的读数来确定身份和易感性(参见图1和图2)。例如，在一个实施方案中，孔31含有在用微生物接种以后有时可能改变光学特性的不同的抗微生物稀释剂和/或不同的试剂底物。美国专利No.6,096,272中描述的检测方法测量在吸收、扩散和/或荧光的变化。也可以测定发光性。对这些变化进行处理以确定微生物的身份和易感性。
该系统允许技术人员例如在用未知微生物接种ID/AST板30的孔31以后，把该板置于仪器20中(图4中所示)，其中以设定的温度孵育该板，定期询问变化，并分析微生物身份和抗微生物易感性。设备20容纳有多个ID/AST板30，并且如下所述为技术人员提供肯定的分析结果。
如图1-3中所示，ID/AST板30是灌注有ID与AST测试所需试剂的一次性装置。在每个ID/AST板30上，对由置于单独的孔31中的样品与试剂生成的反应进行测试。孔31以具有行和列的二维阵列布置在ID/AST板30上。
仪器20独立且充分自治，用以测试ID/AST板30并提供合适的测试结果。仪器20储存、孵育并读取ID/AST板30。仪器20具有图1示出为关闭且图2示出为打开的门21，以允许进入仪器20内部。
图1示出了个人计算机(PC)工作站40与仪器20通讯连接。PC工作站补充仪器20的微生物学信息系统报告与数据管理特征，这在如下进行讨论。PC工作站40提供了改善经验治疗决定及确定治疗介入情况的工具。PC工作站40还包括用以辅助感染控制和流行病学的报告工具。
如图2所示，仪器20包括转盘50。转盘50包括由环和肋条组成的组件51，该环和肋条栓接至驱动环52以形成圆柱形笼。转盘50垂至于仪器外壳60安装(图1所示)。仪器外壳60限定了转盘舱61和电子器件舱62(图4所示)。转盘舱61是隔热的以提供基本上恒温的孵育环境，而且在正常条件下是不透光的以防止环境光线进入。
优选地，转盘舱61持续保持在35℃的温度，且带有分别设定在39℃和33℃的第一预定设定点和第二预定设定点。但是如本领域技术人员将理解的，可以使用其他温度设定来实现特定的检测要求。
如图4中所示，转盘舱61内部以及组件51的圆周外部安装有多个光源组件。在本发明的一个优选的实施方案中，光源组件包括可见光组件80及紫外(UV)光源组件81。
在图3A-3C中以组合形式提供ID/AST板30。每个ID/AST组合板30都具有能够在同一个板上进行ID与AST测试的试剂孔位置。ID/AST板30包括孔31，其被分隔成ID部分33与AST部分34。ID/AST板30的ID部分33包括51个孔31。ID/AST板30的AST部分34包括其中含有干燥抗生素的85个孔31。但是，本领域普通技术人员将理解，可以使用分开的ID板或AST板来代替ID/AST组合板。
在一个实施方案中，测试板具有至少一个或多个孔31，孔中含有浓度范围为0.05微克/ml到8.0微克/ml再水合的干燥林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，例如，3个孔含有浓度为0.125微克/ml再水合的干燥克林霉素。而且，至少一个或多个孔31含有浓度范围为0.05微克/ml到8.0微克/ml再水合的干燥大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，例如2个孔含有浓度为0.4微克/ml再水合的干燥红霉素。至少一个或多个孔31含有浓度范围为0.05微克/ml到8.0微克/ml再水合的干燥 林可酰胺剂与干燥大环内酯剂两者，例如，一个孔含有浓度为0.125微克/ml再水合的干燥克林霉素以及浓度为0.4微克/ml再水合的干燥红霉素。在这个特定实施方案中，仅含有林可酰胺剂的孔、仅含有大环内酯剂的孔、以及含有两种试剂组合的孔位于测试板的AST部分，不过这些孔也可以位于AST或者ID部分的任一部分。此外，在该实施方案中，相同种类的林可酰胺剂(克林霉素)与相同种类的大环内酯剂(红霉素)用于单独的试剂孔中以及含有两种试剂的组合的孔中。然而，单独的试剂孔可以含有不同类型的林可酰胺剂和/或大环内酯剂，其不同于含有两种试剂组合的孔中使用的林可酰胺剂种类和大环内酯剂种类。
在其中待检测的微生物已知具有对红霉素的抗性MIC和对克林霉素的易感性MIC的另一个实施方案中，测试板具有至少一个或多个孔，孔中含有浓度为0.05微克/ml到8.0微克/ml的再水合范围的干燥林可酰胺剂与干燥大环内酯剂，例如一个孔含有浓度为0.125微克/ml再水合的干燥克林霉素与浓度为0.4微克/ml再水合的干燥红霉素。
ID/AST板30还包括支架35、底盘36、盖子37、和醋酸纤维素垫38。每个ID/AST板30还包括板标记(未示出)，该标记包括确定特定ID/AST板30的全部制造历史的信息。
条型码标记提供了与ID/AST板类型相关的信息，并且还具有用于鉴定目的的唯一序号。条型码标记可提供为Code 128、数字格式或任何其他适合的条型码形式。
在置于仪器20内之前，用液体培养基-悬浮的微生物接种每个ID/AST板30。实际上，微生物是来自ID接种物液体或AST接种物液体中的原代培养物并在其后被倒入测试板中的微生物生长物的处理和重悬的稀释物。ID/AST板30是倾斜的，其顶部具有用于装料的接种口39。手动添加单独的接种物到ID与AST口39。用ID接种物液体接种ID部分33中的每个孔31，使该接种物朝向垫38流下测试板。用AST接种物液体接种AST部分34中的每个孔31。接种物以螺旋方式流下ID/AST板30并填充孔31，使液体朝向垫38行进。每个孔31是有口的，以允许液体填充孔31。每个孔31具有明显的圆形边缘以将相容量的液体与多余液体分开，并将每个孔31与相邻孔31中的液体隔离。垫38吸收多余的液体。
在板接种位置(未示出)处用接种物液体接种ID/AST板30。每个位置容纳2管接种物液体(即，ID接种物液体与AST接种物液体)，并支持1个ID/AST板30。重力驱使接种物液体通过ID/AST板30。
ID接种物液体与AST接种物液体包括试剂子系统，该试剂子系统包括把隔离的菌落处理成制备接种物所需的所有试剂，用以添加至ID/AST板30的ID部分33与AST部分34。
ID接种物液体用于微生物鉴定。可以使用各种ID接种物液体，但优选盐溶液。可以添加去污剂以增加板接种位置中的ID/AST板30填充。优选地，用于ID板接种的接种物密度为至少1×105 cfu/ml。可以使用各种鉴定试剂，包括酚红和碘代硝基四唑(INT)。也可以使用各种底物，包括4-甲基伞形酮(4-MU)衍生物、甲基-氨基-香豆素(4-AMC)衍生物、对硝基酚衍生物和七叶苷。
用于AST测定的AST接种物液体是Mueller-Hinton液体培养基的改良制剂。优选地，AST板接种的接种物密度为至少1×105 cfu/ml。不同的接种物密度可用于本发明的其他实施方案，诸如“快速”AST检测结果。这些是ID/AST板30接种16小时内获得的AST检测结果。
可以使用各种AST指示剂。用于本发明中AST测定的优选指示剂是alamarBlueTM，一种氧化还原-缓冲的氧化-还原指示剂。把指示剂添加到AST接种物液体中，并正好在添加通过仪器20待检测的微生物样品之前混合。
控制处理机70出于检测、鉴定和易感性测试目的解释来自孔31的数据。控制处理机使用3个可变阈值水平来解释该数据：绝对阈值、动态阈值和相对阈值。当使用绝对阈值时，通过确定标准化孔31的读数是否高于(阳性)或低于(阴性)给定的预定值来进行肯定性评估。当使用动态阈值时，使用第一和第二差异或者对检测数据的其他数学变换来计算试剂反应测定，其中所述检测数据的其他数学变换与随时间变化的信号增加变化率有关，而所述随时间的变化率则通过在已经超过计算的第一和/或第二差异的某些参数时确定。当使用相对阈值时，通过设定一个阈值进行试剂反应测定，该阈值是高于所讨论的孔31的起始信号水平的一个预定百分数。
在操作中，ID/AST板30被安装，并在仪器20的转盘50中孵育。随着可见光源组件80和UV光源组件81被顺序激发，读取对应于红光、绿光、蓝光和荧光波长的读数。基于转盘50的旋转速度，通过光学测量系统100以预定的间隔读取光强读数。
例如，当转盘50由驱动系统56以每分钟2.0转(RPM)的角速度驱动时，转盘50的一次旋转需要30秒。于是累积红光、绿光、蓝光和UV波长的数据需要2分钟。因此，在该例中，每2分钟由本发明读取一整套数据。由于可以改变角速度，因此不同的角速度可用于不同的检测。例如，期望以1.0RPM累积UV数据(同时以2.0RPM累积其他测试数据)。在这种情况下，一整套数据组将需要2分半钟来完成。
预定的孵育期之后可以获得基于孔31读数的AST终点结果，虽然优选的终点是在18-24小时的孵育之后。
根据一个实施方案，测定对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)的方法的阳性结果是这样一种微生物，该微生物对红霉素具有抗性因而在含有浓度为不小于8μg/ml的红霉素的孔中生长，对克林霉素易感因而在含有浓度小于或等于0.5μg/ml的克林霉素的孔中生长，而抗克林霉素与红霉素的组合因而在含有克林霉素与红霉素的孔中生长。
根据另一个实施方案，测定已知具有红霉素抗性且对克林霉素易感的微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)的方法的阳性结果，是在含有克林霉素与红霉素两者的孔中存在微生物生长。
控制处理机70包括ID分类群数据库，其包括大于126种革兰氏阴性生物体，和103种革兰氏阳性生物体。控制处理机70还包括AST分类群数据库，其革兰氏阳性和阴性生物体与ID分类群数据库的相等。为了AST测试的目的，该系统还包括目前已知的所有人类和兽医抗微生物剂的数据库。测试板30与光检测单元100之间布置有多个光滤波器。这些滤波器仅仅通过由孔(示出为图3B中的单元31)发出或被其吸收的具有预定波长的预定带宽的光。
实施例
根据本发明的一个实施方案(Phoenix iMLSb)并使用“D-测试”来测试葡萄球菌属的各种集合。然后比较如表1所示的针对每种微生物的每种测试方法的结果。
根据本发明的一个实施方案，测试板的AST部分中的4个孔含有以下浓度的干燥的克林霉素与红霉素(单位为μg/ml)：0.125与0.4再水合；0.125与0.8再水合；0.25与0.4再水合；0.25与0.80再水合。
用于这种AST测定的AST接种物液体是Mueller-Hinton液体培养基的改进制剂，同时alamarBlueTM用作指示剂。
接种的ID/AST板30装载到转盘舱中，并以35℃的温度孵育，直到获得存在对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)的阳性或阴性结果。
根据临床与实验室标准研究所(CLSI) M100-S15，p.114进行D-测试：使用纸片相邻测试(disk approximation test)通过在用于接种物纯度检验的标准血液琼脂板上远离15微克红霉素盘的边缘15mm放置2微克克林霉素盘来检测可诱导的克林霉素抗性。孵育之后，未显示出克林霉素区失去光泽(flatten)的微生物将被报告为克林霉素易感。显示出与红霉素盘邻近的克林霉素区(称为“D”区)失去光泽的微生物则具有可诱导的克林霉素抗性。这种隔离群也报告为克林霉素抗性的。
表1
Figure GPA00001148499700111
结果显示本发明的实施方案与“D-测试”之间吻合，并由此证实使用该实施方案作为一种替换方法用于检测微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的可诱导抗性(iMLSb)是有效的。
虽然如上已经根据特定的实施方案对本发明进行了描述，但是应当理解本发明并不旨在限于或局限于这里公开的实施方案。相反地，本发明旨在覆盖包括在所附权利要求的精神和范围内的各种方法、结构及其修改。
虽然上面仅详细描述了本发明的几个示例性的实施方案，但是本领域技术人员将很容易理解可以对示例性实施方案进行许多改进而实质上不背离本发明的新教导和优点。因此，所有这些修改都旨在包括在所附权利要求限定的本发明范围内。

Claims (28)

1.一种测试板，包括：
多个孔，
林可酰胺剂，和
大环内酯剂，
其中所述孔的一个或多个孔含有所述林可酰胺剂与所述大环内酯剂两者。
2.如权利要求1的测试板，其中所述孔的一个或多个孔包括所述林可酰胺剂且不含有所述大环内酯剂。
3.如权利要求2的测试板，其中所述孔的至少3个孔含有所述林可酰胺剂且不含有所述大环内酯剂。
4.如权利要求1的测试板，其中所述林可酰胺剂是克林霉素。
5.如权利要求4的测试板，其中所述克林霉素处于脱水状态。
6.如权利要求5的测试板，其中所述克林霉素再水合的浓度在0.05微克/ml到8微克/ml的范围内。
7.如权利要求5的测试板，其中所述克林霉素再水合的浓度为0.125微克/ml。
8.如权利要求1的测试板，其中所述孔的一个或多个孔包括所述大环内酯剂且不含有所述林可酰胺剂。
9.如权利要求8的测试板，其中所述孔的至少3个孔含有所述大环内酯剂且不含有所述林可酰胺剂。
10.如权利要求1的测试板，其中所述大环内酯剂是红霉素。
11.如权利要求10的测试板，其中所述红霉素处于脱水状态。
12.如权利要求11的测试板，其中所述红霉素再水合的浓度在0.05微克/ml到8微克/ml的范围内。
13.如权利要求11的测试板，其中所述红霉素再水合的浓度为0.4微克/ml。
14.一种方法，包括：
用测试微生物接种具有多个孔的测试板，其中所述孔的一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者，所述孔的一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，和所述孔的一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂，
把所述测试板置于测试系统中，
以合适的温度孵育所述测试板，和
监视所述测试微生物在所述孔中的生长速率，
比较在含有所述林可酰胺剂且不含有大环内酯剂的所述孔中所述测试微生物的生长速率、在含有所述大环内酯剂且不含有林可酰胺剂的所述孔中所述测试微生物的生长速率，和在含有所述林可酰胺剂与所述大环内酯剂两者的所述孔中所述测试微生物的生长速率，
由此通过在含有所述大环内酯剂且不含有林可酰胺剂的所述孔中的抗性，在含有所述林可酰胺剂且不含有大环内酯剂的所述孔中的易感性，和在含有所述林可酰胺剂与所述大环内酯剂两者的所述孔中的抗性，指示所述测试微生物对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的抗性(iMLSb)的存在。
15.如权利要求14的方法，其中所述孔的至少3个孔含有所述林可酰胺剂且不含有大环内酯剂。
16.如权利要求14的方法，其中所述林可酰胺剂是克林霉素。
17.如权利要求14的方法，其中所述孔的至少3个孔含有所述大环内酯剂且不含有林可酰胺剂。
18.如权利要求14的方法，其中所述大环内酯剂是红霉素。
19.如权利要求14的方法，其中所述测试系统是自动化的，半自动化的或人工的测试系统。
20.如权利要求19的方法，其中所述自动化测试系统是微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统。
21.如权利要求14的方法，其中所述测试系统是微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统。
22.如权利要求14的方法，其中所述测试系统是抗微生物易感性测定(AST)系统。
23.一种方法，包括：
用具有红霉素抗性并对克林霉素易感的测试微生物接种具有多个孔的测试板，其中所述孔的一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者，
把所述测试板置于测试系统中，
以合适的温度孵育所述测试板，和
监视所述孔中所述测试微生物的生长速率，
其中含有所述林可酰胺剂与所述大环内酯剂两者的所述孔的一个或多个孔内存在生长，指示存在对大环内酯-林可酰胺-链阳性菌素b的抗性(iMLSb)。
24.如权利要求23的方法，其中所述测试系统是自动化的，半自动化的或人工的测试系统。
25.如权利要求24的方法，其中所述自动化测试系统是微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统。
26.如权利要求23的方法，其中所述测试系统是微生物鉴定(ID)和抗微生物易感性测定(AST)系统。
27.如权利要求23的方法，其中所述测试系统是抗微生物易感性测定(AST)系统。
28.一种测试板，包括：
多个孔，
至少一种林可酰胺剂，和
至少一种大环内酯剂，
其中所述孔的一个或多个孔含有林可酰胺剂与大环内酯剂两者，所述孔的一个或多个孔含有林可酰胺剂且不含有大环内酯剂，和所述孔的一个或多个孔含有大环内酯剂且不含有林可酰胺剂。
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