JP2011500077A5

JP2011500077A5 -

Info

Publication number: JP2011500077A5
Application number: JP2010530545A
Authority: JP
Filing date: 2008-10-27
Publication date: 2011-12-01

Claims

Ｎ^ε−アセチルリシンを結合可能なｔＲＮＡシンテターゼ。
ｔＲＮＡシンテターゼが、ＭｂＰｙｌＲＳのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１に記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
ｔＲＮＡシンテターゼが、ＭｂＰｙｌＲＳの少なくともＬ２６６〜Ｃ３１３のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むポリペプチドからなる、請求項２に記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
ポリペプチドが、野生型ＭｂＰｙｌＲＳ配列に対し、Ｌ２６６、Ｌ２７０、Ｙ２７１、Ｌ２７４又はＣ３１３の１又は２以上において変異を有する、請求項３に記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
少なくとも１つの変異が、Ｌ２７０、Ｙ２７１、Ｌ２７４又はＣ３１３における変異である、請求項４に記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
少なくとも１つの変異が、Ｌ２７０、Ｌ２７４又はＣ３１３における変異である、請求項５に記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
Ｙ２７１Ｌを含む、請求項１〜６のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
Ｙ２７１Ｆを含む、請求項１〜７のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
Ｌ２６６Ｖを含む、請求項１〜８のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
Ｌ２７０Ｉ、Ｙ２７１Ｌ、Ｌ２７４Ａ及びＣ３１３Ｆを含む、請求項１〜９のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
Ｌ２６６Ｖ、Ｌ２７０Ｉ、Ｙ２７１Ｆ、Ｌ２７４Ａ及びＣ３１３Ｆを含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼ。
請求項１〜１１のいずれかに記載のｔＲＮＡシンテターゼをコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
ｔＲＮＡにＮ^ε−アセチルリシンをチャージするための、請求項１〜１１のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
ｔＲＮＡがＭｂｔＲＮＡ_ＣＵＡを含む、請求項１３に記載の使用。
ポリペプチドをコードするＲＮＡの翻訳をアレンジするステップを含むＮ^ε−アセチルリシンを含むポリペプチドを作製する方法であって、前記ＲＮＡがアンバーコドンを含み、前記翻訳が請求項１〜１１のいずれかに記載のポリペプチドの存在下で、かつ、Ｎ^ε−アセチルリシンをチャージすることができるｔＲＮＡの存在下で、かつ、Ｎ^ε−アセチルリシンの存在下で行われる方法。
翻訳が脱アセチル化阻害剤の存在下で行われる、請求項１５に記載の方法。
阻害剤がニコチンアミド（ＮＡＭ）を含む、請求項１６に記載の方法。
Ｎ^ε−アセチルリシンを含むポリペプチドを作製する方法であって、前記方法が、Ｎ^ε−アセチルリシンを取り込むのに望ましい前記ポリペプチドにおける位置に対応する１又は２以上の位置でアンバーコドンを提供するために、前記ポリペプチドをコードする核酸を修飾するステップを含む方法。
核酸を修飾するステップが、リシンに対するコドンをアンバーコドン（ＴＡＧ）に変異させるステップを含む、請求項１８に記載の方法。
Ｎ^ε−アセチルリシンを含むホモジニアスな組換えタンパク質。
タンパク質が、請求項１５〜１９のいずれかに記載の方法で作製される、請求項２０に記載のホモジニアスな組換えタンパク質。
請求項１２に記載の核酸を含むベクター。
ベクターが、ｔＲＮＡシンテターゼのｔＲＮＡ基質をコードする核酸配列をさらに含む、請求項２２に記載のベクター。
ｔＲＮＡ基質が、ＭｂＰｙｌＴ遺伝子によってコードされる、請求項２３に記載のベクター。
請求項１２に記載の核酸又は請求項２２〜２４のいずれかに記載のベクターを含む細胞。
不活性化されたデアセチラーゼ遺伝子をさらに含む、請求項２５に記載の細胞。
不活性化されたデアセチラーゼ遺伝子が、ＣｏｂＢの欠失又は破壊を含む、請求項２６に記載の細胞。
請求項２２〜２４のいずれかに記載のベクター又は請求項２５〜２７のいずれかに記載の細胞、及びニコチンアミドを一定量含むキット。
Ｎ^ε−アセチルリシンを結合可能なｔＲＮＡシンテターゼを作製する方法であって、Ｌ２６６、Ｌ２７０、Ｙ２７１、Ｌ２７４又はＣ３１３の１又は２以上において親ｔＲＮＡシンテターゼ配列をコードする核酸を変異させるステップと、Ｎ^ε−アセチルリシンを結合可能な１又は２以上の変異体を選択するステップとを含む方法。