JP2011136976A - メラニン合成促進物質の製造方法、メラニン合成促進物質、皮膚外用剤、チロシナーゼ活性物質の製造方法、チロシナーゼ活性物質、および医薬品 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】メラニン合成促進物質の製造方法。一例では、原料となるステビア植物の植物組織を乾燥・粉砕する乾燥粉砕工程S100と、乾燥粉砕工程S100で得られた乾燥ステビア粉末を発酵させる発酵工程S102と、発酵したステビア粉末(以下、単に発酵ステビアと称する)から、エタノール水溶液を用いて抽出を行い、抽出液を得る抽出工程S104と、発酵ステビアの抽出液を分画してエタノール可溶画分を得る第1分画工程S106と、エタノール可溶画分をさらに分画して脂溶性画分を得る第2分画工程S108と、を有する。
【選択図】 図1
Description
図1は、一実施例に従うメラニンの合成を促進させるメラニン合成促進物質の製造方法を説明するための説明図である。図1に示すように、本実施例に従うメラニン合成促進物質の製造方法は、ステビア植物組織を乾燥させて粉砕する工程(乾燥粉砕工程:S100)と、乾燥粉砕工程S100により得られた乾燥したステビア植物組織に酵母および水を加えて発酵させる工程(発酵工程:S102)と、発酵工程S102により得られた発酵ステビアから、エタノール水溶液を用いて抽出を行い、抽出液を得る工程(抽出工程:S104)と、抽出工程(S104)により得られた抽出液を分画してエタノール可溶画分を得る工程(第1分画工程:S106)と、第1分画工程(S108)により得られたエタノール可溶画分をさらに分画して脂溶性画分を得る工程(第2分画工程:S108)と、第2分画工程(S108)により得られた脂溶性画分を減圧し、濃縮乾固させる工程(濃縮乾固工程:S110)とを含む。以下に、各工程の構成を詳細に説明する。
乾燥粉砕工程S100は、原料となるステビア植物の植物組織を乾燥・粉砕する工程である。本実施例の原料の一つであるステビア植物は、南米のパラグアイを原産とするキク科の多年生植物である。また、ステビア植物の学名はステビア・レバウディアナ・ベルトニー(Stevia Rebaudiana Bertoni(学術名))である。ステビア植物を日本で栽培する場合、2月から5月にかけて、種、株苗あるいは挿し木苗を定植し、栽培を開始することが多い。収穫は、ステビア植物が十分に成熟する、10月から11月上旬頃にかけて行われることが多い。
発酵工程S102は、乾燥粉砕工程S100で得られた乾燥ステビア粉末を発酵させる工程である。乾燥ステビア粉末の発酵は、乾燥ステビア粉末に水と酵母を加えて撹拌し、放置することにより行うことができる。発酵工程S102において加える水は、発酵に必要なだけの量があればよく、全体が湿る程度の量で十分である。酵母としては、サッカロマイセス(Saccharomyces)類を用いることが好ましい。
発酵工程S102で得られた発酵したステビア粉末(以下、単に発酵ステビアと称する)から、エタノール水溶液を用いて抽出を行い、抽出液を得る工程である。発酵工程S102で得られた発酵ステビアから抽出した抽出液は、メラニンの合成を促進させる機能またはチロシナーゼを活性化させる機能を有する。本実施例において、発酵ステビアから抽出を行う際に用いる溶媒をエタノールとすることが重要である。これは、後の第1分画工程S108において、エタノール可溶画分を分画するためである。
第1分画工程S106は、抽出工程S104で得られた濃縮した抽出液(以下、単に濃縮抽出液と称する)を分画して、エタノール可溶画分を得る工程である。第1分画工程S106において、エタノール可溶画分を分画するために、イオン交換樹脂(合成吸着剤)を用いる。本実施例における第1分画工程S106では、DIAION(登録商標)HP20を充填したカラムに濃縮抽出液を通すことで、濃縮抽出液からエタノール可溶画分を分画する。
第2分画工程S108は、第1分画工程S106で得られたエタノール可溶画分をさらに分画して脂溶性画分を得る工程である。第2分画工程S108において、脂溶性画分を分画するために、弱陰イオン交換樹脂を用いる。本実施例における第2分画工程S108では、DIAION(登録商標)WA30を充填したカラムにエタノール可溶画分を通すことで、エタノール可溶画分から脂溶性画分を分画する。
濃縮乾固工程S110は、第2分画工程S108において得られた脂溶性画分を濃縮・乾固する工程である。濃縮乾固工程S110は、保存・運搬しやすいように、第2分画工程S108で分画された脂溶性画分を減圧濃縮乾固する。
図2は、メラニンの生合成経路を説明するための説明図である。図2に示すように、メラニンは、チロシンを出発物質として合成される。例えば、メラノサイトにおいて、血中から供給されたチロシンは、銅含有酵素であるチロシナーゼによって酸化されて、L−DOPAに合成される。さらにL−DOPAも、チロシナーゼによって酸化されてドーパキノンに合成される。そして、ドーパキノンは自動的に酸化されて、ドーパクロム、メラニンへと合成される。
図3は、B16メラノーマを用いたメラニン合成量の比較実験の実験手順を説明するための説明図である。図3に示すように、まず、B16メラノーマに上記製造方法により製造した脂溶性画分を添加した培地で、0.3×105cells/well、37℃、5%CO2下で96時間培養を行った。またコントロールとしてB16メラノーマに脂溶性画分を添加しない培地で、上記培養条件と同様の条件で培養を行った。
図6は、無細胞系におけるチロシナーゼ活性を測定するための実験手順を説明するための説明図である。図6に示すように、まず、100pg/mL、100ng/mL、100μg/mLとなるように、超音波を照射しながら脂溶性画分を、0.1MのPBS(Phosphate Buffered Saline)(pH6.8)で溶解した。そして、100pg/mL、100ng/mL、100μg/mLの脂溶性画分の溶液それぞれに200 unit/mLのマッシュルームチロシナーゼを添加し、37℃で10分インキュベートした。またコントロールとして0.1MのPBS(pH6.8)に200 unit/mLのマッシュルームチロシナーゼを添加し、37℃で10分インキュベートした。
図9は、細胞内におけるチロシナーゼ活性を測定するための実験手順を説明するための説明図である。図9に示すように、まず、B16メラノーマに上記製造方法により製造した脂溶性画分を100μg/mLの濃度となるように添加した培地で、0.3×105cells/well、37℃、5%CO2下で96時間培養を行った。またコントロールとしてB16メラノーマに脂溶性画分を添加しない培地で、上記培養条件と同様の条件で培養を行った。
S102 …発酵工程
S104 …抽出工程
S106 …第1分画工程
S108 …第2分画工程
S110 …濃縮乾固工程
Claims (14)
- メラニンの合成を促進させるメラニン合成促進物質の製造方法であって、
発酵ステビアの抽出液を分画してエタノール可溶画分を得る第1分画工程と、
前記エタノール可溶画分をさらに分画して脂溶性画分を得る第2分画工程と、
を含むメラニン合成促進物質の製造方法。 - 前記第1分画工程の前段に、
乾燥したステビア植物組織に酵母および水を加えて発酵させる発酵工程と、
前記発酵工程により得られた発酵ステビアからエタノール水溶液を用いて抽出を行い、前記抽出液を得る抽出工程と、
を含む請求項1に記載のメラニン合成促進物質の製造方法。 - 前記第1分画工程において得られるエタノール可溶画分は、30〜100%エタノール可溶画分である請求項1または2に記載のメラニン合成促進物質の製造方法。
- 発酵ステビアの抽出液を分画することにより得られるエタノール可溶画分をさらに分画して得た脂溶性画分を含む、メラニンの合成を促進させるメラニン合成促進物質。
- 請求項1から3のいずれか1項に記載の製造方法により製造された、メラニン合成促進物質を含む、皮膚外用剤。
- 化粧料である、請求項4に記載の皮膚外用剤。
- 医薬部外品である、請求項4に記載の皮膚外用剤。
- 医薬品である、請求項4に記載の皮膚外用剤。
- 白髪予防用医薬品である、請求項4に記載の皮膚外用剤。
- チロシナーゼを活性化させるチロシナーゼ活性物質の製造方法であって、
発酵ステビアの抽出液を分画してエタノール可溶画分を得る第1分画工程と、
前記エタノール可溶画分をさらに分画して脂溶性画分を得る第2分画工程と、
を含むチロシナーゼ活性物質の製造方法。 - 前記第1分画工程の前段に、
乾燥したステビア植物組織に酵母および水を加えて発酵させる発酵工程と、
前記発酵工程により得られた発酵ステビアからエタノール水溶液を用いて抽出を行い、前記抽出液を得る抽出工程と、
を含む請求項10に記載のチロシナーゼ活性物質の製造方法。 - 前記第1分画工程において得られるエタノール可溶画分は、30〜100%エタノール可溶画分である請求項10または11に記載のチロシナーゼ活性物質の製造方法。
- 発酵ステビアの抽出液を分画することにより得られるエタノール可溶画分をさらに分画して得た脂溶性画分を含む、チロシナーゼを活性化させるチロシナーゼ活性物質。
- 請求項10から12のいずれか1項に記載の製造方法により製造された、チロシナーゼ活性物質を含む、医薬品。
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