JP2011126893A

JP2011126893A - 感覚毛細胞及び蝸牛ニューロンへの損傷を予防する／処置するための方法

Info

Publication number: JP2011126893A
Application number: JP2011014273A
Authority: JP
Inventors: Jukka Ylikoski; イリコスキ，ジユカ; Ulla Pirvola; ピルボラ，ウラ; Mart Saarma; サールマ，マルト; Kevin Walton; ウオルトン，ケビン; Robert L Hudkins; ハドキンス，ロバート・エル
Original assignee: Cephalon LLC
Current assignee: Cephalon LLC
Priority date: 1998-09-25
Filing date: 2011-01-26
Publication date: 2011-06-30
Anticipated expiration: 2019-09-24
Also published as: DE69936059D1; DE69936059T2; CA2345295A1; HK1040053A1; NZ511024A; KR100628847B1; JP5190125B2; ATE361752T1; US7789610B2; AU6053299A; CN1329034C; AU763435B2; US6448283B1; CA2345295C; HK1040053B; US20020115706A1; EP1126855A1; KR20010085848A; EP1126855A4; EP1126855B1

Abstract

【解決手段】感覚毛細胞及び蝸牛ニューロンへの損傷を予防もしくは処置するための方法を開示する。該方法は有効量の式Ｉ又は式ＩＩの化合物の投与を含む。該方法は聴覚障害及び平衡感覚の喪失の両方の予防／処置を与える。
【選択図】なし

Description

発明の技術分野本発明は聴覚障害および平衡感覚の障害を予防および／または処置する方法を提供する。より特に、本発明は有効量の式Ｉおよび／または式IIの化合物を投与することによる患者の感覚毛細胞および蝸牛ニューロンを保護する方法を提供する。

本出願は１９９８年９月２５日に出願された米国暫定出願番号６０１１０１,７６３の恩典を主張し、その開示はここに引用することによりその全体が本発明の内容に含まれる。

哺乳動物の耳は音波または空気振動を電気衝撃に変換することにより機能する。次に脳がこれらの電気衝撃を音として認識する。耳は３つの主要部分である外耳、中耳、および内耳を有する。音波は外耳に入りそして鼓膜を振動させる。鼓膜の振動は中耳内の３つの小骨である、それぞれ、つち骨（ｈａｍｍｅｒ）、きぬた骨（ａｎｖｉｌ）およびあぶみ骨（ｓｔｉｒｒｕｐ）とも称するつち骨（ｍａｌｌｅｕｓ）、きぬた骨（ｉｎｃｕｓ）およびあぶみ骨（ｓｔａｐｅｓ）の中を順次伝達される。あぶみ骨は振動を内耳に伝達する。内耳は蝸牛を含んでなりそして楕円形および円形の窓を介して中耳に連結されている。内耳には流体が充填されそして内耳に伝達された振動が内耳の蝸牛中で流体運動を引き起こす。蝸牛中の流体運動が、神経衝撃を起こす感覚毛細胞の運動を引き起こす。これらの神経衝撃は脳内で音として判断される。

感覚毛細胞は、蝸牛の内部周辺を巻いているコルティ器官内に含まれる。コルティ器官内には、内部および外部感覚毛細胞がある。外部感覚毛細胞はＯＨＣ１、ＯＨＣ２およびＯＨＣ３と表示される３列で存在し、内部感覚毛細胞は１列で存在する。感覚毛細胞は基底板に連結されそして蓋膜と接触している。内耳中の流体の運動が蓋膜と関連する基底板の運動を引き起こす。この関連運動が感覚毛細胞上の線毛を曲げさせそして電気活性を生ずる。感覚毛細胞の下にある蝸牛神経節ニューロンがこの電気活性を内耳神経を介して脳の聴覚領域に伝達する。

膜迷路とも称する流体が充填された内耳は、前庭系を構成する哺乳動物の２つの平衡器官をさらに含有する。第一の平衡器官は、情報を検知しそして重力に関連する身体位置に伝える小嚢および卵形嚢から構成される。小嚢および卵形嚢の両者も感覚毛細胞を含有する。炭酸カルシウムの微小粒子が小嚢および卵形嚢中の感覚毛細胞上にありそして線毛を曲げて感覚毛細胞を刺激して、特定方向での「上」、「下」、「傾斜」および「加速」を包含する、適切な信号を脳に送る。卵形嚢中の感覚毛細胞は水平面の線状運動を検知し、小嚢中の感覚毛細胞は垂直面の運動を検知する。

第二の平衡器官は、流体加速として検知される運動に関する情報を検知しそして伝える３つの骨半規管から構成される。骨半規管も感覚毛細胞で裏打ちされ、そして互いに関して約９０度の角度で配置されそして三次元で運動を検知することができる。頭がこれらの面の１つで加速されるにつれて、運動面に対応する管内の流体運動が感覚毛細胞の線毛の運動を刺激する。

前庭器官−小嚢、卵形嚢および骨半規管−が前庭神経節ニューロンの神経終末を刺激し、それが次に情報を異なる目的のための多数の部位に伝達する。例えば、情報は前庭系から眼に伝達されて、身体が動きながら眼は標的に焦点をあてたままにする。円滑で且つ二組以上の運動ができる身体運動を行うためにニューロンは前庭系および小脳とも相互関連している。適切な体位および平衡を保つために前庭情報は脊髄を下方に移動して筋肉にも行く。

意志疎通問題を引き起こすかなりの聴覚障害は人口の約１０％で起きそして我々の１／３以上が老齢による実質的な聴覚障害となるであろう。騒音で誘発される聴覚障害は聴覚障害のある２８，０００，０００人のアメリカ人の約１／３の聴覚障害の原因であると推定される（ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９７−４２３３，Ａｐｒｉｌ１９９７）。ほとんどの場合、聴覚障害はコルティ器官内の感覚毛細胞の死滅から生ずる。感覚毛細胞は敏感な細胞でありそしてそれ故、騒音、感染症、薬品、脈管不全および特発性作用を包含するがそれらに限定されない数種の原因からの損傷を受けやすい。特発性作用は瞬間的にまたは未知のもしくは不明な原因から生ずる作用である。

老人性難聴は年令と関連する聴覚障害である。オージオグラムおよび病理学的分析に基づく４つの顕著なタイプの老人性難聴：１）感覚的−感覚毛細胞の障害および蝸牛ニューロン構造の二次的変性、２）神経的−蝸牛神経節細胞および／または神経の障害、３）代謝的−血管条の萎縮、および４）機械的−基底板の硬化、が記載されている（Ｓｃｈｕｋｎｅｃｈｔ，Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌ．，８０：３６９−３８２，１９６４）。老人性難聴の神経的および代謝的原因は毛細胞の最終的な障害をもたらすかもしれない。

老人性難聴のタイプの記述に関連する周波数データはないが、感覚的老人性難聴が最も一般的である（ＷｏｒｋｉｎｇＧｒｏｕｐｏｎＳｐｅｅｃｈＵｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇａｎｄＡｇｉｎｇ，Ｓｐｅｅｃｈｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇａｎｄａｇｉｎｇ，Ｊ．Ａｃｏｕｓｔ．Ｓｏｃ．Ａｍ．８３：８５９−８９５，１９８８）。Ｊｏｈｎｓｓｏｎ他は新生児から９７才までの年令範囲内の１５０人の患者の血管条の変性および毛細胞障害の両方を記載している。両方とも進行性でありそして老人患者で最も顕著である。老人の前庭障害の原因となる前庭器官−小嚢および卵形嚢−の毛細胞の年令関連障害も注目された（Ｊｏｈｎｓｓｏｎｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ．Ｒｈｉｎｏｌ．Ｌａｒｙｎｇｏｌ．８１：１７９−１９３，１９７２；Ｊｏｈｎｓｓｏｎｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ．Ｒｈｉｎｏｌ．Ｌａｒｙｎｇｏｌ．８１：３６４−３７６，１９７２）。

我々は１つの耳の中に約１６，０００個の感覚毛細胞および３０，０００個の聴覚ニューロンの全必要量を有して生まれる。これらの細胞は生後の人生で再生しない。従って、例えば、騒音、感染症、有毒薬品（例えば白金をベースにした細胞毒性剤およびアミノグリコシド類）または特発性作用による各細胞の障害は不可逆的であり且つ累積的である。充分な感覚細胞が障害を受ける場合には、最終結果は完全な聴覚消失である。

騒音外傷が聴覚障害の一般的な原因である。音への過剰露呈が鳥類の内耳中の感覚毛細胞の細胞消滅をもたらすことが示された（Ｎａｋａｇａｗａｅｔａｌ．，ＯＲＬ，５９：３０３−３１０，１９９７）。例えば白金をベースにした細胞毒性剤およびアミノグリコシド類の如き薬品により引き起こされる感覚毛細胞の死滅は、たとえ主ではなくても、部分的に細胞消滅性である証拠が次第に増えている。蝸牛内の騒音で誘発される感覚毛細胞障害は明らかに同様な機構を有する。

アミノグリコシド類はグラム−陰性細菌感染症の患者で使用されている使いやすい抗生物質である（Ｐａｐａｒｅｌｌａｅｔａｌ，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ，１８１７，Ｓａｕｎｄｅｒｓ−Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９８０）。アミノグリコシド類が感覚毛細胞に対する損傷を引き起こしそしてそれにより聴覚に影響を与えることは知られている。アミノグリコシド類はネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、ストレプトマイシンおよびゲンタマイシンを包含するが、それらに限定されない。アミカシンはラットの蝸牛内の感覚毛細胞の細胞消滅を引き起こす（Ｖａｇｏｅｔａｌ．，ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ９：４３１−４３６，１９９８）。ゲンタマイシン処置はモルモットで感覚毛細胞の変性をもたらす（Ｌｉｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＮｅｕｒ．，３５５：４０５−４１７，１９９５；Ｌａｎｇｅｔａｌ．，ＨｅａｒｉｎｇＲｅｓ．，１１１：１７７−１８４，１９９７）。

蝸牛内の感覚毛細胞の障害はアミノグリコシド耳毒性に起因している。モルモットの感覚毛細胞の細胞消滅がアミノグリコシドを用いる持続的処置後に観察された（Ｎａｋａｇａｗａｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｒ．，２５４：９−１４，１９９７；Ｎａｌａｇａｗａｅｔａｌ．，ＡｃｔａＯｔｏｌ．，２５５（３）；１２７−１３１，１９９８）。研究は、蝸牛内の感覚毛細胞に対する種々のポリペプチド類の保護効果を評価した（例えば、Ｍａｌｇｒａｎｇｅｅｔａｌ．，Ａｂｓｔｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｒｅｓ．Ｏｔｏｌ．，１７：１３８，１９９４；Ｌｏｗｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１６７：４４３−４５０，１９９６およびＥｒｎｆｏｒｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２：４６３−４６７，１９９６参照）。Ｅｒｎｆｏｒｓ他は、ペプチドＮＴ−３は螺旋神経節ニューロンの変性を予防するための有効な因子であるが、ＮＴ−３は「毛細胞を不充分に保護する」と述べた（Ｅｒｎｆｏｒｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２：４６３−４６７，１９９６）。

白金をベースにした細胞毒性剤はシスプラチンおよびカルボプラチンを包含するが、それらに限定されない。シスプラチンは内耳および末梢感覚ニューロパシーにおける構造的変化を引き起こす使いやすい抗腫瘍薬である。シスプラチンによる聴覚障害は普通は永久的であり且つ累積的である。

突発性の感覚神経聴覚障害とも称する急速発症性聴覚障害も明白な理由なしに起きる。これらの状況における聴覚障害は瞬間的にまたは数時間後のいずれかに進行する。損傷の部位は蝸牛内であり、そして感覚毛細胞損傷に部分的に起因していた。そのような聴覚障害は特発性の原因によるか、または血管疾病、高血圧および甲状疾病を包含する他の原因並びに流行性耳下腺炎、麻疹、単球増加症、アデノウイルスを包含するウイルスによるウイルス感染症の結果として起きる（Ｔｈｕｒｍｏｎｄｅｔａｌ．，Ｊ．Ｌａ，ＳｔａｔｅＭｅｄ．Ｓｏｃ．，１５０：２０１−２０３，１９９８）。

感覚毛細胞および蝸牛ニューロンに対する損傷は感染症の結果としても起きる。例えば、髄膜炎の発症は感覚毛細胞に対する損傷の結果としての聴覚障害に関連していた（Ｂｌａｎｋｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌ．ＨｅａｄＮｅｃｋＳｕｒｇ．，１２０：１３４２−１３４６，１９９４）。大腸菌感染症の結果としての髄膜炎も感覚毛細胞を損傷する（Ｍａｒｗｉｃｋｅｔａｌ．，ＡｃｔａＯｔｏｌ．（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ），１１６（３）：４０１−４０７，１９９６）。肺炎連鎖球菌からの毒素も感覚毛細胞に対する損傷と関連していた（Ｃｏｍｉｓｅｔａｌ．，ＡｃｔａＯｔｏｌ．（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ）１１３（２）：１５２−１５９，１９９３）。

蝸牛および神経支配蝸牛ニューロンの補助的上皮構造は外傷後のかなり長い時間にわたり無傷のままであるが、ＩＨＣの障害後に二次的な退行性変性を受ける（Ｙｌｉｋｏｓｋｉｅｔａｌ．，１９７４；Ｈａｗｋｉｎｓ，１９７６）。

数人の著者が最近、種々の化合物を用いて蝸牛感覚毛細胞を耳毒性および騒音損傷の両者からある程度保護できることを示した。これは動物モデルシステムにおいて毛細胞数および例えば聴覚脳幹応答による聴覚閾値測定を用いて示された。最も一般的に使用される治療用化合物は酸化防止剤またはフリーラジカルスカベンジャーであった。

即時の機械的損傷の他に、フリーラジカルの生成に関連する酸化的ストレス（論議参照）および刺激細胞毒性（Ｂａｓｉｌｅｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＭｅｄ．２：１３３８−１３４３，１９９６）が聴覚障害の病因に含まれている。種々の細胞系統並びにインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）のニューロンおよび非−ニューロンモデルシステムにおける証明は、細胞消滅性の死滅が酸化ストレスおよび刺激細胞毒性の両者により誘導されうることを示している（ＰｅｔｔｍａｎｎａｎｄＨｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ｎｅｕｒｏｎ２０：６３３−６４７，１９９８により検証された）。内耳では、細胞膨潤により同定される壊死性の毛細胞の死滅が聴覚外傷後に示された（Ｋｅｌｌｅｒｈａｌｓ，Ａｄｖ．Ｏｔｏ−Ｒｈｉｎｏ．Ｌａｒｙｉｎｇ．１８：９１−１６８，１９７２）。耳毒性薬品で損傷した内耳で得られたより最近のデータは、核断片化の観察に基づいて、毛細胞も細胞消失により死滅するかもしれないことを示唆した（Ｆｏｒｇｅ，Ｈｅａｒ．Ｒｅｓ．１９：１７１−１８２，１９８５；Ｌｅｅｅｔａｌ．Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒ．，ｖｏｌ．３５５，４０５−４１７，１９９５；Ｌｉｕｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ９：２６０９−２６１４，１９９８；Ｎａｋａｇａｗａｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ．２５５：１２７−１３１，１９９８；Ｖａｇｏｅｔａｌ．，ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ９：４３１−４３６，１９９８）。しかしながら、聴覚機能の障害に対する細胞消滅性の毛細胞の死滅の寄与は知られていない。さらに、毛細胞の死滅に対する責任に含まれる分子機構は知られていない。

耳毒性薬品および騒音損傷の両者が内耳中の過剰の反応性酸素種（ＲＯＳ）を製造すると仮定されたため、酸化防止剤およびフリーラジカルスカベンジャーが試験された。ＲＯＳの過剰製造が蝸牛の酸化防止防御系を圧倒することにより感覚毛細胞損傷を引き起こすと思われる（Ｒａｖｉｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ７６：３８６−３９４，１９９５）。

種々のストレスの多い刺激に応答する細胞消滅性の死滅を緩和するために示された信号カスケードの１つはストレスで活性化される蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）経路としても知られているｃ−Ｊｕｎ−Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）経路である（Ｄｅｒｉｊａｒｄｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ７６：１０２５−１０３７，１９９４；Ｋｙｒｉａｋｉｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６９：１５６−１６０，１９９４）。ホスホリル化によるＪＮＫ活性化がインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）での栄養因子除去後のおよびインビボでの損傷後のニューロン細胞の死滅にとって重要であることが示された（Ｘｉａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：１３２６−１３３１，１９９５；Ｄｉｃｋｅｎｓｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７７：６９３−６９６，１９９７；Ｙａｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３８９：８６５−８７０，１９９７）。ＪＮＫはまた転写因子ＡＰ−１の成分であるｃ−Ｊｕｎをホスホリル化する。インビトロでのｃ−Ｊｕｎ活性化および転写活性の妨害がニューロン細胞の死滅を予防することが示された（Ｅｓｔｕｓｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１２７：１７１７−１７２７，１９９４；Ｈａｒｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ１４：９２７−９３９，１９９５；Ｗａｔｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１５：７５１−７６２，１９９８）。ｃ−Ｊｕｎホスホリル化が不足したマウス（Ｂｅｈｒｅｎｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＧｅｎ．２１：３２６−３２９，１９９８）およびＪＮＫノックアウトマウス（Ｙａｎｇｅｔａｌ．，１９９７）からの最近のデータは、ｃ−Ｊｕｎホスホリル化が損傷で誘発されるニューロンの死滅に必須であることを示している。

ＮＴ−３、ＢＤＮＦおよびＧＤＮＦを包含する神経栄養因子が内耳中のニューロンの保護にとって重要であることも示され、そして蝸牛傷害後の毛細胞保護における役割を有するかもしれない（Ｇａｂａｉｚａｄｅｈｅｔａｌ．，ＡｃｔａＯｔｏｌ．（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ），１１７：２３２−２３５，１９９７；Ｅｒｎｆｏｒｓｅｔａｌ．Ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＳａｖｅｌｌｅｔｒｉｄｉＦａｓａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，Ｊｕｎｅ１８−２０，１９９８，ＡｂｓｔｒａｃｔＮｏ．１２；Ｋｅｉｔｈｌｅｙｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，９：（１０），２１８３−２１８７，１９８８；Ｓｈｏｊｉｅｔａｌ．，ＡＲＯＭｅｅｔｉｎｇ，Ｓｔ．ＰｅｔｅｒｓｂｕｒｇＢｅａｃｈ，Ｆｌｏｒｉｄａ，ＡｂｓｔｒａｃｔＮｏ．５３９，１９９８；Ｔａｙｅｔａｌ．，ＡＲＯＭｅｅｔｉｎｇ，Ｓｔ．ＰｅｔｅｒｓｂｕｒｇＢｅａｃｈ，Ｆｌｏｒｉｄａ，ＡｂｓｔｒａｃｔＮｏ．５３８，１９９８；Ｙｌｉｋｏｓｋｉｅｔａｌ．，ＨｅａｒＲｅｓ１２４：１７−２６，１９９８）。シスプラチンで誘発されるニューロパシー後の機械的受容の障害はＮＴ−３の投与により逆転された（Ｇａｏｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，３８：３０−３７，１９９５）。

以下の表１はインビボでの損傷からの蝸牛感覚毛細胞の保護に関して試験した数種の化合物をまとめている。

表１
表１からの記号で表された参考文献（これまでに引用されていない）。
１.−Quirk et al., Hear. Res., 74: 217-220, 1994
２.−Hu et al., Hear. Res., 113: 198-206, 1997
３.−Garetz et al., Hear. Res., 77; 81-87, 1994
４.−Yamasoba et al., Hear. Res., 784; 82-90, 1998
５.−Campbell et al., Hear. Res., 102; 90-98, 1996
６.−Kaltenbach et al., Otol. Head Neck Surg., 117: 493-500, 1997
７.−Basile et al., Nat. Med., 2: 1338-1343, 1996
８.−DeGroot et al., Hear. Res., 106; 9-19, 1997
９.−Song et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 282: 369-377, 1997
１０.−Hulka et al., Am. J. Otol., 14: 352-356, 1993

蝸牛病変の薬品を基にした療法における１つの問題は外因的に投与されたポリペプチド類の限定された生物学的活性である。多くの神経栄養因子の生物学的半減期は非常に短いことが示された。他方では、感覚毛細胞の変性は瞬間的に起きず、多数の感覚毛細胞はまず可逆的に損傷を受けるようでありそして直ちに処置する場合には回復するかもしれない。騒音露呈後に、コルティ器官内の細胞損傷の典型的なパターンは完了するのに２−３週間かかる。３−４週間の後露呈で、騒音が感覚毛細胞および神経末端を破壊した後に影響を受けた蝸牛ニューロンは変性し始める。

聴覚感覚毛細胞障害のための有効な医学的処置は現在までにない。また、聴覚器官に対する損傷の正確な分子機構が知られていないことにより感覚毛細胞変性の予防が妨げられている。その結果として、感覚毛細胞に対する損傷を予防または処置するための有効な養生法は開発されていない。従って、感覚毛細胞損傷を予防および／または処置するための組成物および方法に対する要望が存在する。

蝸牛ニューロンの障害のための有効な医学的処置も現在まで知られていない。従って、蝸牛ニューロンの損傷または障害を予防および／または処置するための組成物および方法に対する要望が存在する。

以上の論議から明らかなように、感覚毛細胞または蝸牛ニューロンに対する損傷は前庭系にも影響を与えることができそして、例えば、めまいを引き起こすことができる。良性の発作性の体位性めまい（ＢＰＰＶ）は毎年１００,０００人の人口当たり約４０〜６０人の人間に影響を与える。また、メニエル病は毎年１００,０００人の人口当たり約４０人の人間に影響を与える。これらのおよび他の疾病の経過中に、前庭系の感覚毛細胞は変性する傾向を有する。前庭系中の感覚毛細胞に対する損傷を予防または処置するための有効な養生法は現在まで開発されていなかった。従って、前庭系における感覚毛細胞およびニューロンに対する損傷を予防および／または処置するための組成物および方法に対する要望が存在する。

本発明の一面によると、
有効量の式：

［式中、
環Ｄはフェニル及び二重結合ａ−ｂを有するシクロヘキセンから選ばれ；
環Ｂ及び環Ｆは独立して：
（ａ）１〜３個の炭素原子が複素原子で置き換えられていることができる６−員炭素環式環；
（ｂ）５−員炭素環式環；及び
（ｃ）（１）１つの炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄原子で置き換えられているか；
（２）２つの炭素原子が硫黄及び窒素原子、酸素及び窒素原子、又は２つの窒素原子で置き換えられているか；あるいは
（３）３個の炭素原子が３個の窒素原子、１つの酸素及び２つの窒素原子、又は１つの硫黄及び２つの窒素原子で置き換えられている
５−員炭素環式環から選ばれ；
Ｇ−Ｘ−Ｗは：
（ａ）（Ｚ^１Ｚ^２）Ｃ−Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（Ｚ^１Ｚ^２）；
（ｂ）ＣＨ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ^１）；及び
（ｃ）Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｒ^１）から選ばれ、
Ｚ^１及びＺ^２は、それぞれの存在において独立してＨ，Ｈ；Ｈ，ＯＲ；Ｈ，ＳＲ；Ｈ，Ｎ（Ｒ）_２；ならびにＺ^１及びＺ^２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ及び＝ＮＲから選ばれる部分を形成する基から選ばれ；但しＺ^１とＺ^２の対の少なくとも１つは＝Ｏを形成し；
Ｒは独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ＣＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、場合により置換されていることができるアリールアルキル及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキルから選ばれ；
Ｒ^１は独立して：
（ａ）Ｈ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル；
（ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ；
（ｃ）ＯＲ^１ｂ；
（ｄ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１ｂ、ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^１ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１ｂは独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^１ｃ及びＲ^１ｄはそれぞれ独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基から選ばれ；
Ｘ^１は独立してＯ、Ｓ及びＣＨ_２から選ばれ；
ＱはＮＲ^２、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^２２、ＣＨＲ^２３、Ｘ^４ＣＨ（Ｒ^２３）、ＣＨ（Ｒ^２３）Ｘ^４から選ばれ、ここでＸ^４はＯ、Ｓ、ＣＨ_２、ＮＲ^２２及びＮＲ^２から選ばれ；
Ｒ^２はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であり；
Ｒ^２ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル、場合により置換されていることができるヘテロシクリル、ＯＲ^２ｂ、ＣＯＮＨ_２、ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄから選ばれ；
Ｒ^２ｂはＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^２ｃ及びＲ^２ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して：
（ａ）Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^９及びＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９；
（ｂ）ＣＨ_２ＯＲ^１４；
（ｃ）ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、（ＣＨ_２）_ｐＮＨＲ^１４及びＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２；
（ｄ）Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９及びＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^１４；
（ｅ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^５基である、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^９はアルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１０はＨ、アルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１１及びＲ^１２は独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^５はアリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルキルオキシ−アルコキシ、ヒドロキシアルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣＯ_２Ｒ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１０、Ｏ−テトラヒドロピラニル、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＮＲ^１０ＣＯ_２Ｒ^９、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ＮＲ^１０Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^９、Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^９、ＣＨ＝ＮＮＨＣＨ（Ｎ＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１０）_２、ＯＲ^１４及び単糖から選ばれ、ここで単糖のそれぞれのヒドロキシル基は独立して非置換であるか、又はＨ、アルキル、アルキルカルボニルオキシもしくはアルコキシにより置き換えられており；
Ｘ^２はＯ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｙは：
（ａ）直接結合；
（ｂ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^１９基である、場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；ならびに
（ｃ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（Ｒ^１８）_２、Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１９）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（ＯＲ^２０）Ｒ^２０、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨ（Ｒ^１８）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨＲ^２１Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^２１）、Ｎ（Ｒ^２１）Ｃ（＝Ｏ）、ＺがＣ（Ｒ^２０）_２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ_２Ｒ^２０、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）及びＮ（Ｒ^２０）から選ばれるＣＨ_２Ｚ、ＺＣＨ_２及びＣＨ_２ＺＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１８は独立してＨ、ＳＯ_２Ｒ^１８ａ、ＣＯ_２Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^１８ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル及び場合により置換されていることができるヘテロシクリルから選ばれ；
Ｒ^１８ｃ及びＲ^１８ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^１９は独立してＲ^２０、チオアルキル、ハロゲン、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２０は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^２１、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロシクリルアルキル及び場合により置換されていることができるカルボシクリルから選ばれ；
Ｒ^２１は独立してＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｑ’は：
（ａ）直接結合；
（ｂ）ＮＲ^６；
（ｃ）場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；
（ｄ）ＣＲ^２２Ｒ^２４；ならびに
（ｅ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、Ｃ（ＯＲ^１１）（Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（Ｒ^１０）_２、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、ＣＨ_２Ｚ’、Ｚ’−ＣＨ_２及びＣＨ_２Ｚ’ＣＨ_２から選ばれ；
Ｚ’はＣ（Ｒ^１１）（ＯＲ^１２）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）及びＮＲ^１１から選ばれ；
Ｒ^６はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であるか；あるいはまた、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６又はＣ（Ｒ^１０）_２である場合、Ｒ^２及びＲ^６又はＲ^１０の１つは一緒になって：

を形成し、ここでＲ^７及びＲ^８はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２及び（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２から選ばれるか；あるいはＲ^７とＲ^８は一緒になって式ＣＨ_２−Ｘ^３−ＣＨ_２の結合基を形成し；
Ｘ^３は結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｊは結合、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ（ＯＲ^１０）、Ｎ（Ｒ^１０）、Ｎ（ＯＲ^１０）、ＣＨ（ＮＲ^１１Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^１７）、Ｎ（Ｒ^１７）Ｃ（＝Ｏ）、Ｎ（Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９）、Ｎ（Ｓ（Ｏ）_ｙＮＲ^１１Ｒ^１２）、Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１７）、Ｃ（Ｒ^１５Ｒ^１６）、Ｎ^＋（Ｏ⁻）（Ｒ^１０）、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）及びＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^９）ＣＨ（ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９）から選ばれ；
Ｊ’はＯ、Ｓ、Ｎ（Ｒ^１０）、Ｎ^＋（Ｏ⁻）（Ｒ^１０）、Ｎ（ＯＲ^１０）及びＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１３はアルキル、アリール及びアリールアルキルから選らばれ；
Ｒ^１４はカルボキシル基のヒドロキシル基が除去された後のアミノ酸の残基であり；
Ｒ^１５及びＲ^１６は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１０、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^９、アルキル−ＯＨ、アルコキシ及びＣＯ_２Ｒ^１０から選ばれ；
Ｒ^１７はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^２２は

であり、Ｘ^５及びＸ^６は独立してＯ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^７及びＸ^８は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^９及びＸ^１０は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨＲ^２６から選ばれ；
Ｘ^１１は結合又は場合によりＮＲ^１１Ｒ^１２もしくはＯＲ^３０で置換されていることができるアルキレンであり；
Ｒ^２３はＨ、ＯＲ^２７、ＳＲ^２７、Ｒ^２２及びＲ^２８から選ばれ；
Ｒ^２４はＲ、チオアルキル及びハロゲンから選ばれ；
Ｒ^２５はＲ^１及びＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^２６はＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び場合により置換されていることができるアルコキシから選ばれ、ここで（１）環Ｇは０〜約３個の環複素原子を含有し；
（２）環Ｇのいずれか２つの隣接ヒドロキシル基は一緒になってジオキソラン環を形成することができ；
（３）環Ｇのいずれか２つの隣接環炭素原子は一緒になって縮合アリールもしくはヘテロアリール環を形成することができ；但し；
（ａ）Ｘ^１１が結合の場合、環Ｇはヘテロアリールであることができ；
（ｂ）環Ｇは：（ｉ）少なくとも１つの飽和されている炭素原子を含有し；
（ｉｉ）２つの隣接する環Ｏ原子を含有せず；
（ｉｉｉ）最高で２個のＣ（＝Ｏ）基を含有し；
Ｒ^２７はＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｒ^２８はアリール、アリールアルキル、ＳＯ_２Ｒ^２９、ＣＯ_２Ｒ^２９、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２９、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２９はアルキル、アリール及びヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^３０はＨ、アルキル、アシル及びＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２から選ばれ；
ｍは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｐは独立して１、２、３及び４から選ばれ；
ｒは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｙは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｚは０、１、２、３及び４から選ばれ；
但し、Ｙ及びＱ’の少なくとも１つは直接結合であり、Ｙが直接結合の場合にはＱ’は直接結合以外であり、Ｑ’が直接結合の場合にはＹは直接結合以外であり、環Ｂ及びＦがフェニルであり、Ｇ−Ｘ−ＷがＣＨ_２ＮＨＣ（＝Ｏ）であり、Ｙが直接結合であり、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６であり、ここでＲ^６がＲ^２と一緒になって

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における聴覚障害を予防するための方法が提供される。

本発明の他の面は患者に有効量の以上で定義された式Ｉの縮合ピロロカルバゾールを投与することを含んでなる患者の平衡感覚の障害を予防する方法を提供する。

本発明のさらに他の面は有効量の以上で定義された式Ｉの化合物を投与することを含んでなる患者の感覚毛細胞の死滅を予防する方法を提供する。

本発明の別の面は有効量の以上で定義された式Ｉの化合物を投与することを含んでなる感覚毛細胞の障害による突発性の感覚神経性聴覚障害を予防する方法を提供する。

本発明の他の面は有効量の以上で定義された式Ｉの化合物を投与することを含んでなる患者の外傷前または後の感覚毛細胞の機能を保護する方法を提供する。

本発明のさらに他の面は有効量の以上で定義された式Ｉの化合物を投与することを含んでなる損傷した感覚毛細胞を処置する方法を提供する。

本発明の別の面は有効量の以上で定義された式Ｉの化合物を投与することを含んでなる患者の蝸牛ニューロンの死滅を予防する方法を提供する。

本発明の別の面は患者に有効量の式ＩＩ；

の化合物を投与することを含んでなる患者の聴覚障害を予防する方法を提供する。

本発明のさらに別の面は患者に有効量の以上で定義された式ＩＩの化合物を投与することを含んでなる患者の平衡感覚の障害を予防する方法を提供する。
本発明のさらに別の面は患者に有効量の以上で定義された式ＩＩの化合物を投与することを含んでなる感覚毛細胞の死滅を予防する方法を提供する。

本発明の別の面は患者に有効量の以上で定義された式ＩＩの化合物を投与することを含んでなる感覚毛細胞の死滅による患者の突発性の感覚神経性聴覚障害を予防する方法を提供する。

本発明の別の面は患者に有効量の以上で定義された式ＩＩの化合物を投与することを含んでなる患者の外傷前または後の感覚毛細胞の機能を保護する方法を提供する。

本発明のさらに別の面は患者に有効量の以上で定義された式ＩＩの化合物を投与することを含んでなる患者の蝸牛ニューロンの死滅を予防する方法を提供する。

図１は、ＡＢＲ（聴覚脳幹応答）測定を図示しそして式Ｉの化合物が騒音で誘発される感覚毛細胞障害を予防することを示す。ＡＢＲ測定は騒音で誘発される病変（塗りつぶした菱形）前に２、４、８、１６および３２ｋＨｚで行われた。４匹の動物に式ＩＩの化合物（１ｍｇ／ｋｇ、皮下）を与え、引き続きその後２４時間にわたり騒音外傷を与えた。動物を２１日間維持し、処置した動物に１日に１回式ＩＩの化合物を１ｍｇ／ｋｇで投与した。ＡＢＲ測定を２１日間の終わりに再び行った。病変抑制は塗りつぶした三角形として示され、式ＩＩの化合物で処置した動物は塗りつぶした四角形として示される。図２ａおよび２ｂは、式ＩＩの化合物を用いる処置を図示する。式ＩＩの化合物を用いる処置はコルティ器官全体にわたり外部感覚毛細胞を保護した。細胞を器官の一方の端部からミリメートル（Ｘ軸）で計数しそして処置後に残っている細胞の数を元々存在する合計数（細胞およびディータース瘢痕の合計）の百分率としてＹ軸に表示される。図２ａは同定番号（ＳＩＮ）１３、１４、１９および２０がついた式ＩＩの化合物で処置された動物におけるＯＨＣの数を示す。図２ｂは対照動物であるＳＩＮ１５、１７および１８に存在するＯＨＣの数を示す。式ＩＩの化合物で処置した４匹の動物の中の３匹（ＳＩＮ１３、１４および１９）は１−３％の範囲内のわずかな感覚毛細胞の障害だけを示した（図２）。第４の動物（ＳＩＮ２０）には１９％の障害があった。ほとんど完全に感覚毛細胞が保護された３匹の動物では、細胞障害の少ない百分率はコルティ器官中の特定部位に局在しないようであった（図２ａ）。図２ａおよび２ｂは、式ＩＩの化合物を用いる処置を図示する。式ＩＩの化合物を用いる処置はコルティ器官全体にわたり外部感覚毛細胞を保護した。細胞を器官の一方の端部からミリメートル（Ｘ軸）で計数しそして処置後に残っている細胞の数を元々存在する合計数（細胞およびディータース瘢痕の合計）の百分率としてＹ軸に表示される。図２ａは同定番号（ＳＩＮ）１３、１４、１９および２０がついた式ＩＩの化合物で処置された動物におけるＯＨＣの数を示す。図２ｂは対照動物であるＳＩＮ１５、１７および１８に存在するＯＨＣの数を示す。式ＩＩの化合物で処置した４匹の動物の中の３匹（ＳＩＮ１３、１４および１９）は１−３％の範囲内のわずかな感覚毛細胞の障害だけを示した（図２）。第４の動物（ＳＩＮ２０）には１９％の障害があった。ほとんど完全に感覚毛細胞が保護された３匹の動物では、細胞障害の少ない百分率はコルティ器官中の特定部位に局在しないようであった（図２ａ）。図３ａ−ｆは騒音露呈（１２０ｄＢ、４ｋＨｚ、６時間）後１日のモルモット蝸牛中の毛細胞の死滅を図示する。第二蝸牛巻き部におけるコルティ器官の横断（中央蝸牛軸（ｍｉｄｍｏｄｉｏｌａｒ））パラフィン切片にＤＡＰＩ核染色（図３ａ）およびＴＵＮＥＬ−方法（図３ｂ）で二重染色する。３個の外部毛細胞（矢印）は捩れた核を示しそしてＴＵＮＥＬ−陽性である。毛細胞の下に見える支持細胞はＴＵＮＥＬ−標識付けされていない。図３ｃはＴＵＮＥＬ−標識付けされたパラフィン切片を示しそしてＤＮＡ断片化を有する外部毛細胞核を高倍率で示す。図３ｄはコルティ器官のトルイジンブルーで染色された樹脂に埋め込まれた中程度の薄い切片を横断面で図示しそして内部毛細胞（大きい矢印）および３列の外部毛細胞（ＯＨＣ、小さい矢印）を示す。ＯＨＣ１だけが断片化した核（太い矢印）を示す。示された切片は拡散した毛細胞障害の領域からである（Ｄｅ＝ディータース細胞）。図３ｅはトルイジンブルーで染色された樹脂に埋め込まれた中程度の薄い切片を水平面で且つ毛細胞核の水準において示す。切片は最大外傷領域からである。断片化した核（薄い矢印）を示す１個の外部毛細胞を除いて、ほとんどの毛細胞は障害を受けている。図３ｆはコルティ器官の外傷を受けていない領域からの、図３ｅの通りにして製造された、切片を図示する。３列の外部毛細胞が存在しそしてそれらの核は断片化されていない。目盛り線は図３ａおよび３ｂでは８０ｍｍを、図３ｃでは１０ｍｍを、図３ｄでは１８ｍｍを、そして図３ｅおよび３ｆでは１５ｍｍを表す。図４ａ−ｃはＡＢＳにより測定された式ＩＩの化合物を用いる処置後の永久的な聴覚障害に対する保護を図示する。図４ａは騒音外傷から２日後のＡＢＳ閾値移動を示す。図４ｂは騒音外傷から６日後のＡＢＳ閾値移動を示す。図４ｃはＡＢＳが騒音外傷から１４日後のＡＢＳ閾値移動を示す。結果は平均±ＳＥＭを示す。露呈から６および１４日後に、対照動物の平均閾値移動は式ＩＩで処置した動物のものより意義あるほど大きい。（＊＊＊Ｐ<０．００１、＊＊Ｐ<０．０５、スチューデントｔ−試験。）図５ａおよび５ｂは式ＩＩの化合物で処置した動物における外傷性騒音露呈から２週間後の感覚毛細胞の障害の保護を図示する。対照（図５ａ、ｎ＝１３）および式ＩＩで処置した動物（図５ｂ、ｎ＝１２）のコクレオグラム（Ｃｏｃｈｌｅｏｇｒａｍｕｓ）は、対照動物と比べて処置した動物では意義あるほど低い百分率の感覚毛細胞が障害を受けたことを示した。結果は平均±ＳＥＭを示す。図６ａおよび６ｂは式ＩＩの化合物を用いる処置によるネオマイシン処置後の感覚毛細胞の保護を図示する。新生期ラットのコルティ体外移植組織器官を表面組織標本用に切開し、１００μＭのネオマイシンを用いて単独でまたは式ＩＩの化合物（５００ｎＭ）と組み合わせて４８時間にわたり処置し、ファロイジンで染色し、そしてレーザー同焦点顕微鏡により像にした（図６ａ）。ネオマイシンは多数の毛細胞の変性を引き起こす（図６ｂ）。式ＩＩの化合物はネオマイシンで誘発される細胞死滅から毛細胞を保護する。図７ａ−ｃはネオマイシンに４８時間にわたり露呈された新生期ラットの蝸牛体外移植組織器官中の毛細胞障害の保護を図示する。ファロイジンで標識が付けられた同焦点像で示されるように、図７ａはネオマイシンにより引き起こされる毛細胞の障害を示す。図７ｂは蝸牛の基底巻き部内の毛細胞障害の予防における式ＩＩの保護効果を示し（ｉ＝内部毛細胞、１、２、３＝外部毛細胞の列）、そして図７ｃは基底および中間の巻き部内の保護された外部毛細胞の数を示す。ヒストグラムおよび線は３回の実験に関する平均±ＳＥＭを表し、各々が対照および式ＩＩで処置した群の両方の４個の体外移植組織を包含する。目盛り線は図７ａおよび７ｂでは５０ｍｍを表す。図８は式ＩＩの投与によるゲンタマイシンで誘発される聴覚障害の減衰を示す。式ＩＩで処置した蝸牛は試験した全ての周波数において対照蝸牛より統計的に意義あるほど少ない閾値移動を示した。図９はインビトロでの新生期蝸牛ニューロンの生存に対する式ＩＩ（５００ｎＭ）、ニューロトロフィン（２ｎｇ／ｍｌ）および神経成長因子（２ｎｇ／ｍｌ）の効果を示す。加えられた化合物を有する培養物中のニューロンの数は対照培養物中のニューロンの数の百分率として表示される。培養物中での４８時間後にニューロンが計数された。値は３回の別個の実験からの平均±ＳＥＭを表す。式ＩＩは蝸牛ニューロンの生存促進においてＮＴ−３と同じくらい有効であった。ＮＧＦを負の対照として使用した。図１０は騒音で誘発される聴覚障害後の式ＩＩの遅延投与の効果を図示する。聴覚障害の減衰は騒音病変前の式ＩＩの投与後に最も有効であるが、騒音病変発生から１および４日後の両方における式ＩＩの投与は対照と比較して聴覚障害を減衰させる。図１１ａ−ｄは騒音で誘発される聴覚障害後の式ＩＩの遅延投与の効果を図示する。式ＩＩで処置した動物（図１１ａ−ｃ、ｎ＝１２）および対照（図１１ｄ、ｎ＝１３）のコクレオグラムは対照動物と比べて処置した動物では意義あるほど低い百分率の感覚毛細胞が障害を受けたことを示した。結果は平均±ＳＥＭを示す。図１２ａ−ｆは新生期ラットのネオマイシン（１００ｍＭ）に露呈された蝸牛体外移植組織中の毛細胞死滅、並びにＪＮＫおよびｃ−Ｊｕｎホスホリル化を図示する。検体をパラフィン中に埋めそして横断（中間蝸牛軸）面で切断した。図１２ａは１列のカルビンジン−免疫反応性の内部毛細胞を示しそして３列の外部毛細胞（矢印）が露呈されなかった体外移植組織中で見られることを示す。図１２ｂはＴＵＮＥＬで染色された外部毛細胞核（矢印）がネオマイシンに１２日間にわたり露呈された培養物中で見られることを示す。図１２ｃはＴＵＮＥＬ−陽性ＤＮＡ断片化を示す外部毛細胞核のさらに高い倍率を示す。図１２ｄおよび１２ｅは、それぞれ、ホスホ−ＪＮＫおよびホスホ−ｃ−Ｊｕｎ免疫標識がネオマイシンに６時間にわたり露呈された毛細胞の核（矢印）中に見られることを示す。図１２ｆは、ホスホ−ｃ−Ｊｕｎ免疫反応性毛細胞がネオマイシンおよび式ＩＩ（５００ｎＭ）と６時間にわたりコインキュベーションされた培養物では見られないことを示す。矢印が毛細胞を示す。目盛り線は図１２ａ、１２ｂ、１２ｄ、１２ｅ、および１２ｆでは２７ｍｍを、図１２ｃでは１０ｍｍを表す。

以上でそして我々の開示全体にわたり使用される下記の用語は、断らない限り、下記の意味を有すると理解されよう。

ここで使用される用語「アルキル」は直鎖状、環式、もしくは分枝鎖状の炭素数１〜８のアルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシル、オクチル、シクロプロピル、およびシクロペンチル、を意味する。アルキル−含有基、例えばアルコキシ、アルコキシカルボニル、およびアルキルアミノカルボニル基、のアルキル部分は以上で定義したアルキルと同じ意味を有する。好ましい低級アルキル基は１〜４個の炭素を含有する以上で定義したアルキル基である。

置換基、例えばアラルキル、アルコキシ、アリールアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルコキシ−アルコキシ、ヒドロキシ−アルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、アルキルカルボニルオキシ、ヒドロキシアルキルおよびアシルオキシ基、の中に含まれるアルキル基およびアルキル部分は置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。置換されたアルキル基は１〜３個の独立して選択される置換基、好ましくはヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルコキシ−アルコキシ、置換されたもしくは置換されていないアリールアルコキシ−低級アルコキシ、置換されたもしくは置換されていないヘテロアリールアルコキシ−低級アルコキシ、置換されたもしくは置換されていないアリールアルコキシ、置換されたもしくは置換されていないヘテロシクロアルコキシ、ハロゲン、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−低級アルキルアミノ、ジオキソラン、ジオキサン、ジチオラン、ジチオン、フラン、ラクトン、またはラクタム、を有する。

ここで使用される用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖状、環式、もしくは分枝鎖状の炭化水素連鎖を包含することを意図する。アルケニル基の例はエテニル、プロペニル、３−メチルブテニル、およびシクロヘキセニル基を包含する。ここで使用される用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖状、環式、もしくは分枝鎖状の炭化水素連鎖を包含することを意図する。アルキニル基の例はエチニル、プロピニル、３−メチルブチニル、およびシクロヘキシニル基を包含する。

ここで使用されるアシル−含有基、例えばアシルオキシ基、の「アシル」部分は直鎖状、環式、もしくは分枝鎖状の炭素数１〜６のアルカノイル基、例えばホルミル、アセチル、プロパノイル、ブチリル、バレリル、ピバロイルまたはヘキサノイル、を包含することを意図する。

ここで使用される用語「炭素環式」または「カルボシクリル」は環部分が炭素原子だけから構成される環式基をさす。これらはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルを包含するが、それらに限定されない。用語「炭素環式芳香族環」はこれもアリール環である炭素環式環を包含することを意図する。用語「ヘテロシクロ」、「複素環式」および「ヘテロシクリル」は環部分が少なくとも１個のヘテロ原子、例えばＯ、Ｎ、またはＳ、を包含する環式基をさす。ヘテロシクリル基はヘテロアリールおよびヘテロアルキル基を包含する。

ここで使用される用語「アリール」は炭素数６〜１２の芳香族環、例えばフェニル、ビフェニルおよびナフチル、を意味する。好ましいアリール基は置換されていないもしくは置換されたフェニルおよびナフチル基を包含する。ここで使用される用語「ヘテロアリール」は１個もしくはそれ以上の環炭素原子がヘテロ（すなわち、非炭素）原子、例えばＯ、ＮまたはＳ、により置換されているアリール基を示す。好ましいヘテロアリール基はピリジル、ピリミジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、およびベンゾチアゾリル基を包含する。用語「ヘテロアルキル」は１個もしくはそれ以上の環炭素原子がヘテロ原子、例えばＯ、Ｎ、またはＳ、により置換されているシクロアルキル基を示す。

ここで使用される用語「アラルキル」（または「アリールアルキル」）はアリール基を担持するアルキル基よりなる炭素数７〜１５の基を示すことを意図する。アラルキル基の例はベンジル、フェネチル、ベンジルヒドリルおよびナフチルメチル基を包含するが、それらに限定されない。置換されたアリール、置換された複素環および置換されたアラルキル基は各々、好ましくは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−低級アルキルアミノ、およびハロゲンである１〜３個の独立して選択される置換基を有する。

窒素原子を含んで形成される好ましい複素環式基はピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジノ、モルホリニル、モルホリノ、チオモルホリノ、Ｎ−メチルピペラジニル、インドリル、イソインドリル、イミダゾール、イミダゾリン、オキサゾリン、オキサゾール、トリアゾール、チアゾリン、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール類、トリアジン類、イソキサゾール、オキシインドール、インドキシル、ピラゾール、ピラゾロン、ピリミジン、ピラジン、キノリン、イソキノリン、およびテトラゾール基を包含する。酸素原子を含んで形成される好ましい複素環式基はフラン、テトラヒドロフラン、ピラン、ベンゾフラン類、イソベンゾフラン類、およびテトラヒドロピラン基を包含する。硫黄原子を含んで形成される好ましい複素環式基はチオフェン、チアナフテン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチアピラン、およびベンゾチオフェン類を包含する。

ここで使用される「ヒドロキシアルキル」基はそれに付随したヒドロキシル基を有するアルキル基である。ここで使用される「ヒドロキシアルコキシ」基はそれに付随したヒドロキシル基を有するアルコキシ基である。ここで使用される「ハロゲン」は弗素、塩素、臭素およびヨウ素をさす。

ここで使用される用語「ヘテロアリールアルキル」はアリール部分にヘテロ原子を含有するアリールアルキル基を意味する。用語「オキシ」は酸素原子の存在を示す。それ故、「アルコキシ」基は酸素原子を介して結合されたアルキル基であり、そして「カルボニルオキシ」基は酸素原子を介して結合されたカルボニル基である。

ここで使用される用語「ヘテロシクロアルキル」および「ヘテロシクロアルコキシ」はそのアルキル部分に結合されたヘテロシクロ基を有するアルキルまたはアルコキシ基を意味し、そして用語「アリールアルコキシ」はそのアルキル部分に結合されたアリール基を有するアルコキシ基を意味する。ここで使用される用語「アルキルカルボニルオキシ」は式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキルの基を意味する。

ここで使用される用語「アルキルオキシ−アルコキシ」はそのアルキル部分に結合されたアルキルオキシ置換基を含有するアルコキシ基を示す。用語「アルコキシ−アルキルチオ」はそのアルキル部分に結合されたアルコキシ置換基を含有するアルキルチオ基（すなわち、式−Ｓ−アルキルの基）を意味する。用語「ヒドロキシ−アルキルチオ」はそのアルキル部分に結合されたヒドロキシ置換基を含有するアルキルチオ基（すなわち、式−Ｓ−アルキルの基）を意味する。

ここで使用される用語「単糖」は単純糖としてのその慣用された意味を有する。ここで使用される用語「アミノ酸」はアミノ基およびカルボキシル基の両者を含有する分子を示す。アミノ酸の具体例はａ−アミノ酸、すなわち、一般式ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ_２）−（側鎖）のカルボン酸を包含する。アミノ酸の側鎖は天然産出および非−天然産出部分を包含する。非−天然産出（すなわち、非自然）アミノ酸側鎖は、例えばアミノ酸同族体中の天然産出アミノ酸側鎖の代わりに使用される一部分である。例えば、ここに引用されることにより本発明の内容となるＬｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＷｏｒｔｈＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ，１９７５，ｐａｇｅｓ７３−７５を参照のこと。ある種の具体例では、ここに記載された化合物に対する置換基はそのカルボキシル基のヒドロキシル部分の除去後のアミノ酸の基、すなわち、式−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）−（側鎖）の基、を包含する。

ここで使用される「製薬学的に許容され得る塩類」は親化合物がその酸または塩基塩類を製造することにより改変されている開示された化合物の誘導体をさす。製薬学的に許容され得る塩類の例は塩基性の基、例えばアミン類、の鉱酸または有機酸塩類、酸性の基、例えばカルボン酸類、のアルカリまたは有機塩類などを包含するが、それらに限定されない。製薬学的に許容され得る塩類は、例えば無毒の無機または有機酸類から製造される親化合物の一般的な無毒の塩類または第４級アンモニウム塩類を包含する。例えば、そのような一般的な無毒の塩類は無機酸類、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、燐酸、硝酸などから誘導されるもの、並びに有機酸類、例えば酢酸、プロピオン酸、琥珀酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などから製造される塩類を包含する。本発明は、式Ｉの化合物が感覚毛細胞に対する損傷を予防しそして処置することの両方が可能であるという驚くべき発見に基づく。ここに示されているように、式Ｉの化合物の投与は感覚毛細胞に対する損傷を予防する。さらに、式Ｉの化合物が感覚毛細胞または蝸牛ニューロンに対する損傷を有効に処置することも示された。

本発明は有効量の式Ｉの化合物を投与することによる患者の感覚毛細胞または蝸牛ニューロンに対する損傷を予防する方法を提供する。本発明はさらに治療的に有効な量の式Ｉの化合物を投与することによる患者の感覚毛細胞に対する損傷を処置する方法も提供する。

本発明は、有効量の式：

［式中、環Ｄはフェニル及び二重結合ａ−ｂを有するシクロヘキセンから選ばれ；
環Ｂ及び環Ｆは独立して：
（ａ）１〜３個の炭素原子が複素原子で置き換えられていることができる６−員炭素環式環；
（ｂ）５−員炭素環式環；及び
（ｃ）（１）１つの炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄原子で置き換えられているか；
（２）２つの炭素原子が硫黄及び窒素原子、酸素及び窒素原子、又は２つの窒素原子で置き換えられているか；あるいは
（３）３個の炭素原子が３個の窒素原子、１つの酸素及び２つの窒素原子、又は１つの硫黄及び２つの窒素原子で置き換えられている５−員炭素環式環から選ばれ；
Ｇ−Ｘ−Ｗは：
（ａ）（Ｚ^１Ｚ^２）Ｃ−Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（Ｚ^１Ｚ^２）；
（ｂ）ＣＨ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ^１）；及び
（ｃ）Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｒ^１）から選ばれ、
Ｚ^１及びＺ^２は、それぞれの存在において独立してＨ，Ｈ；Ｈ，ＯＲ；Ｈ，ＳＲ；Ｈ，Ｎ（Ｒ）_２；ならびにＺ^１及びＺ^２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ及び＝ＮＲから選ばれる部分を形成する基から選ばれ；但しＺ^１とＺ^２の対の少なくとも１つは＝Ｏを形成し；
Ｒは独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ＣＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、場合により置換されていることができるアリールアルキル及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキルから選ばれ；
Ｒ^１は独立して：
（ａ）Ｈ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル；
（ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ；
（ｃ）ＯＲ^１ｂ；
（ｄ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１ｂ、ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^１ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１ｂは独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^１ｃ及びＲ^１ｄはそれぞれ独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基から選ばれ；
Ｘ^１は独立してＯ、Ｓ及びＣＨ_２から選ばれ；
ＱはＮＲ^２、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^２２、ＣＨＲ^２３、Ｘ^４ＣＨ（Ｒ^２３）、ＣＨ（Ｒ^２３）Ｘ^４から選ばれ、ここでＸ^４はＯ、Ｓ、ＣＨ_２、ＮＲ^２２及びＮＲ^２から選ばれ；
Ｒ^２はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であり；
Ｒ^２ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル、場合により置換されていることができるヘテロシクリル、ＯＲ^２ｂ、ＣＯＮＨ_２、ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄから選ばれ；
Ｒ^２ｂはＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^２ｃ及びＲ^２ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して：
（ａ）Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^９及びＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９；
（ｂ）ＣＨ_２ＯＲ^１４；
（ｃ）ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、（ＣＨ_２）_ｐＮＨＲ^１４及びＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２；
（ｄ）Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９及びＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^１４；
（ｅ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^５基である、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^９はアルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１０はＨ、アルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１１及びＲ^１２は独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^５はアリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルキルオキシ−アルコキシ、ヒドロキシアルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣＯ_２Ｒ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１０、Ｏ−テトラヒドロピラニル、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＮＲ^１０ＣＯ_２Ｒ^９、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ＮＲ^１０Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^９、Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^９、ＣＨ＝ＮＮＨＣＨ（Ｎ＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１０）_２、ＯＲ^１４及び単糖から選ばれ、ここで単糖のそれぞれのヒドロキシル基は独立して非置換であるか、又はＨ、アルキル、アルキルカルボニルオキシもしくはアルコキシにより置き換えられており；
Ｘ^２はＯ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｙは：
（ａ）直接結合；
（ｂ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^１９基である、場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；ならびに
（ｃ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（Ｒ^１８）_２、Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１９）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（ＯＲ^２０）Ｒ^２０、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨ（Ｒ^１８）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨＲ^２１Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^２１）、Ｎ（Ｒ^２１）Ｃ（＝Ｏ）、ＺがＣ（Ｒ^２０）_２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ_２Ｒ^２０、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）及びＮ（Ｒ^２０）から選ばれるＣＨ_２Ｚ、ＺＣＨ_２及びＣＨ_２ＺＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１８は独立してＨ、ＳＯ_２Ｒ^１８ａ、ＣＯ_２Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^１８ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル及び場合により置換されていることができるヘテロシクリルから選ばれ；
Ｒ^１８ｃ及びＲ^１８ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^１９は独立してＲ^２０、チオアルキル、ハロゲン、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２０は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^２１、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロシクリルアルキル及び場合により置換されていることができるカルボシクリルから選ばれ；
Ｒ^２１は独立してＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｑ’は：
（ａ）直接結合；
（ｂ）ＮＲ^６；
（ｃ）場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；
（ｄ）ＣＲ^２２Ｒ^２４；ならびに
（ｅ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、Ｃ（ＯＲ^１１）（Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（Ｒ^１０）_２、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、ＣＨ_２Ｚ’、Ｚ’−ＣＨ_２及びＣＨ_２Ｚ’ＣＨ_２から選ばれ；
Ｚ’はＣ（Ｒ^１１）（ＯＲ^１２）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）及びＮＲ^１１から選ばれ；
Ｒ^６はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であるか；あるいはまた、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６又はＣ（Ｒ^１０）_２である場合、Ｒ^２及びＲ^６又はＲ^１０の１つは一緒になって：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である（換言すれば、後者の条件は式ＩＩの化合物を対象とする）］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における聴覚障害を予防するための方法を提供する。

１つの好適な態様では、Ｙが直接結合であり、そしてＱがＮＲ^２である。より好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールの環Ｂ及び環Ｆがフェニルであり、Ｇ−Ｘ−ＷがＣＨ_２ＮＲ^１Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ＣＨ_２及びＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１Ｃ（＝Ｏ）から選ばれ、Ｑ’がＮＲ^６である。さらにより一層好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールは式：

を有する。

さらにより一層好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールのＲ^３及びＲ^４がＨ、アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＳＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、ＮＨＣＯＮＨＣ_６Ｈ_５、ＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｓ−フェニル、ＣＨ_２Ｓ−ピリジル、ＣＨＮＨＣＯ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ＝ＮＮＨ、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_３から選ばれ；Ｒ^７がＨ及びアルキルから選ばれ；Ｒ^１５及びＲ^１６が独立してＨ、アルキル、ＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ、アルコキシ及びＣＯ_２アルキルから選ばれる。さらにより一層好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールは式：

を有する。

別の好適な態様では、Ｑ’がＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２、Ｓ又はＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３）（ＯＨ））である。より好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールの環Ｂ及び環Ｆがフェニルであり、Ｇ−Ｘ−ＷがＣＨ_２ＮＲ^１Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ＣＨ_２から選ばれる。さらにより一層好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールは式：

を有する。

さらにより好適な態様では、Ｒ^２がＨ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｃ_６Ｈ_５−ＯＨ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨであり、縮合ピロロカルバゾールのＲ^３及びＲ^４がＨ、アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、アルコキシ、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＳＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、ＮＨＣＯＮＨＣ_６Ｈ_５、ＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｓ−フェニル、ＣＨ_２Ｓ−ピリジル、ＣＨＮＨＣＯ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ＝ＮＮＨ、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_３から選ばれ；Ｒ^７がＨ及びアルキルから選ばれ；Ｒ^１５及びＲ^１６が独立してＨ、アルキル、ＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ、アルコキシ及びＣＯ_２アルキルから選ばれる。さらにより好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールは式：

を有する。

別の好適な態様では、縮合ピロロカルバゾールは式：

を有する。

本発明で使用するように、聴覚障害、平衡感覚の喪失、感覚有毛細胞または蝸牛ニューロンの死、感覚神経的な聴覚障害、または感覚有毛細胞または蝸牛ニューロンの損傷等を防止するという内容において、用語「予防する」とは、そのような喪失または損傷を減らし、最小とし、または完全に排除することを称する。本明細書で使用する「予防する」とは例えば、少なくとも約１５％、より好ましくは少なくとも約２５％、さらに好ましくは少なくとも約５０％、より一層好ましくは少なくとも約７５％、さらにより一層好ましくは少なくとも約８０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９５％、そして最も好ましくは約１００％の喪失または損傷の減少を含むことができる。本明細書で使用する、用語「感覚有毛細胞」とは、コルチ器官中に存在する聴覚器官の感覚有毛細胞および骨半規管に存在する前庭感覚有毛細胞および内耳の斑を含む脊椎動物に存在する感覚有毛細胞を称する。

本明細書で使用する用語「個体」とは、限定するわけではないがヒトおよび霊長類を含む哺乳類；鳥類；イヌ、ネコ、ヒトジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタを含む家庭、スポーツおよび農場における動物；ラット、マウス、ウサギおよびモルモットを含む実験動物；魚類；爬虫類；動物園の動物および野生動物を称する。

本明細書で使用する用語「聴覚障害」とは、正常に機能する個体により感知できる音の刺激を感知することができないことを言う。

本明細書で使用する用語「平衡感覚の喪失」とは、正常に機能する個体の前庭系に比べて、動物の前庭系における欠失を称する。

本明細書で使用する用語「感覚有毛細胞の死」とは、感覚刺激の認知かつ／または伝達において１以上の感覚有毛細胞の能力の停止を称する。

用語「投与」とは、限定するわけではないが経口、サブバッカル、経皮、非経口、皮下および局所を含む。このような投与経路に共通する要件は、式Ｉの化合物の標的への効率的かつ容易な送達である。

本発明で意図する投与の１様式は、局所である。式Ｉの化合物は、クリーム、ローション、軟膏として、エアゾールスプレーとして、限定するわけではないが点耳薬および点鼻薬を含めた液滴を含む多数の方法で局所的に投与することができる。

式Ｉの化合物の別の個体への投与様式は、錠剤を介するサブバッカルである。

さらに式Ｉの化合物の別の投与様式は、皮下投与である。

式Ｉの化合物の別の投与様式は経口である。式Ｉの化合物は限定するわけではないが、錠剤、カプセルおよびキャプレットを含め、多数の方法で個体に経口的に投与することができる。

局所投与の好適な様式は、点耳剤の使用を介する。点耳剤の調合および投与はる当該技術分野の範囲内である。好適な態様では、点耳剤は０．１％〜２０重量％の式Ｉの化合物を適当なキャリアー中に含んで成る。８時間毎に２〜４滴を患者に投与することができる。

より好適な投与様式は、式Ｉの化合物をその場で蝸牛窓へカテーテルを介して直接投与することである。そのような投与は、低い投薬用量を可能とすることができる（Ｋｏｒｖｅｒｅｔ．ａｌ．，ＡＲＯの第２１回ミッドウィンターリサーチミーティング、セントピーターバーグビーチ、フロリダ州、１９９８年２月１５〜１９、アブストラクトＮｏ．５３６、１３５頁）。

投与用の製薬組成物の特性は投与様式に依存し、そして当業者により容易に決定することができる。例えば経口投与のためには、製薬組成物は式Ｉの化合物に加えて、製薬学的に許容され得るキャリアー、賦形剤、緩衝剤および補助剤を含むことができる。

本明細書で使用する用語「有効量」とは、毒性、炎症またはアレルギー反応のような望ましくない副作用なしに、予防および処置の両方で意図する目的を達成するために必要な式Ｉおよび式ＩＩの化合物の量を称する。個別の必要量は変動するかもしれないが、調剤の有効量に関する最適な範囲の決定は、当業者の範囲内である。ヒトの用量は動物実験から容易に推定することができる（Ｋａｔｏｃｓｅｔａｌ．、レミングトンの製薬科学、第１８版の第２７章、Ｇｅｎｎａｒｏ編集、マック出版社社（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ）、イーストン、ペンシルバニア州、１９９０）。一般に当業者により調整され得る調剤の有効量を提供するために必要な投薬用量は、年齢、健康、身体条件、体重、受容体の疾患または障害の種類または程度、処置の頻度、必要ならば併用する治療法の種類を含むいくつかの因子、ならびに望む効果（１つまたは複数）の性質および範囲に大変依存するだろう（Ｎｉｅｓｅｔａｌ．、グッグマンアンドギルマンの治療の薬理学的基礎（Ｇｏｏｄｍａｎ & Ｇｉｌｍａｎ’ｓＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、第９版、Ｈａｒｄｍａｎｅｔ．ａｌ．編集、マグロー−ヒル（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ）、ニューヨーク、ＮＹ、１９９６）。

本発明に従い、式Ｉの化合物を個体に約０．１μｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で、そしてより好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与する。一般に、始めは式Ｉの化合物を低い投薬用量で患者に投与する。投薬用量は所望のレベルに達するまで増分的に増すことができる。式Ｉの化合物は、点耳剤を使用して鼓膜上に局所的に投与することができる。また式Ｉの化合物はカテーテルの使用を介して蝸牛窓に直接投与することもできる（Ｌｅａｒｙ、ニューヨークタイムズ、ヘルス、１９９８年９月１日）。

本発明はまた、有効量の式：

であり、Ｘ^５及びＸ^６は独立してＯ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^７及びＸ^８は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^９及びＸ^１０は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨＲ^２６から選ばれ；
Ｘ^１１は結合又は場合によりＮＲ^１１Ｒ^１２もしくはＯＲ^３０で置換されていることができるアルキレンであり；
Ｒ^２３はＨ、ＯＲ^２７、ＳＲ^２７、Ｒ^２２及びＲ^２８から選ばれ；
Ｒ^２４はＲ、チオアルキル及びハロゲンから選ばれ；
Ｒ^２５はＲ^１及びＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^２６はＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び場合により置換されていることができるアルコキシから選ばれ、ここで
（１）環Ｇは０〜約３個の環複素原子を含有し；
（２）環Ｇのいずれか２つの隣接ヒドロキシル基は一緒になってジオキソラン環を形成することができ；
（３）環Ｇのいずれか２つの隣接環炭素原子は一緒になって縮合アリールもしくはヘテロアリール環を形成することができ；但し；
（ａ）Ｘ^１１が結合の場合、環Ｇはヘテロアリールであることができ；
（ｂ）環Ｇは：
（ｉ）少なくとも１つの飽和されている炭素原子を含有し；
（ｉｉ）２つの隣接する環Ｏ原子を含有せず；
（ｉｉｉ）最高で２個のＣ（＝Ｏ）基を含有し；
Ｒ^２７はＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｒ^２８はアリール、アリールアルキル、ＳＯ_２Ｒ^２９、ＣＯ_２Ｒ^２９、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２９、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２９はアルキル、アリール及びヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^３０はＨ、アルキル、アシル及びＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２から選ばれ；
ｍは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｐは独立して１、２、３及び４から選ばれ；
ｒは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｙは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｚは０、１、２、３及び４から選ばれ；
但し、Ｙ及びＱ’の少なくとも１つは直接結合であり、Ｙが直接結合の場合にはＱ’は直接結合以外であり、Ｑ’が直接結合の場合にはＹは直接結合以外であり、環Ｂ及びＦがフェニルであり、Ｇ−Ｘ−ＷがＣＨ_２ＮＨＣ（＝Ｏ）であり、Ｙが直接結合であり、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６であり、ここでＲ^６がＲ^２と一緒になって

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における平衡感覚の喪失を予防するための方法を提供する。

本発明はまた、有効量の式：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における感覚有毛細胞の死を予防するための方法を提供する。

本発明はまた、有効量の式：

［式中、環Ｄはフェニル及び二重結合ａ−ｂを有するシクロヘキセンから選ばれ；
環Ｂ及び環Ｆは独立して：
（ａ）１〜３個の炭素原子が複素原子で置き換えられていることができる６−員炭素環式環；
（ｂ）５−員炭素環式環；及び
（ｃ）（１）１つの炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄原子で置き換えられているか；
（２）２つの炭素原子が硫黄及び窒素原子、酸素及び窒素原子、又は２つの窒素原子で置き換えられているか；あるいは
（３）３個の炭素原子が３個の窒素原子、１つの酸素及び２つの窒素原子、又は１つの硫黄及び２つの窒素原子で置き換えられている５−員炭素環式環から選ばれ；
Ｇ−Ｘ−Ｗは：
（ａ）（Ｚ^１Ｚ^２）Ｃ−Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（Ｚ^１Ｚ^２）；
（ｂ）ＣＨ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ^１）；及び（ｃ）Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｒ^１）から選ばれ、
Ｚ^１及びＺ^２は、それぞれの存在において独立してＨ，Ｈ；Ｈ，ＯＲ；Ｈ，ＳＲ；Ｈ，Ｎ（Ｒ）_２；ならびにＺ^１及びＺ^２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ及び＝ＮＲから選ばれる部分を形成する基から選ばれ；但しＺ^１とＺ^２の対の少なくとも１つは＝Ｏを形成し；
Ｒは独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ＣＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、場合により置換されていることができるアリールアルキル及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキルから選ばれ；
Ｒ^１は独立して：
（ａ）Ｈ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル；
（ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ；
（ｃ）ＯＲ^１ｂ；
（ｄ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１ｂ、ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^１ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１ｂは独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^１ｃ及びＲ^１ｄはそれぞれ独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基から選ばれ；
Ｘ^１は独立してＯ、Ｓ及びＣＨ_２から選ばれ；
ＱはＮＲ^２、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^２２、ＣＨＲ^２３、Ｘ^４ＣＨ（Ｒ^２３）、ＣＨ（Ｒ^２３）Ｘ^４から選ばれ、ここでＸ^４はＯ、Ｓ、ＣＨ_２、ＮＲ^２２及びＮＲ^２から選ばれ；
Ｒ^２はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であり；
Ｒ^２ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル、場合により置換されていることができるヘテロシクリル、ＯＲ^２ｂ、ＣＯＮＨ_２、ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄから選ばれ；
Ｒ^２ｂはＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^２ｃ及びＲ^２ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して：
（ａ）Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^９及びＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９；
（ｂ）ＣＨ_２ＯＲ^１４；
（ｃ）ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、（ＣＨ_２）_ｐＮＨＲ^１４及びＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２；
（ｄ）Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９及びＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^１４；
（ｅ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^５基である、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^９はアルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１０はＨ、アルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１１及びＲ^１２は独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^５はアリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルキルオキシ−アルコキシ、ヒドロキシアルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣＯ_２Ｒ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１０、Ｏ−テトラヒドロピラニル、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＮＲ^１０ＣＯ_２Ｒ^９、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ＮＲ^１０Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^９、Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^９、ＣＨ＝ＮＮＨＣＨ（Ｎ＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１０）_２、ＯＲ^１４及び単糖から選ばれ、ここで単糖のそれぞれのヒドロキシル基は独立して非置換であるか、又はＨ、アルキル、アルキルカルボニルオキシもしくはアルコキシにより置き換えられており；
Ｘ^２はＯ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｙは：
（ａ）直接結合；
（ｂ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^１９基である、場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；ならびに
（ｃ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（Ｒ^１８）_２、Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１９）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（ＯＲ^２０）Ｒ^２０、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨ（Ｒ^１８）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨＲ^２１Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^２１）、Ｎ（Ｒ^２１）Ｃ（＝Ｏ）、ＺがＣ（Ｒ^２０）_２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ_２Ｒ^２０、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）及びＮ（Ｒ^２０）から選ばれるＣＨ_２Ｚ、ＺＣＨ_２及びＣＨ_２ＺＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１８は独立してＨ、ＳＯ_２Ｒ^１８ａ、ＣＯ_２Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^１８ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル及び場合により置換されていることができるヘテロシクリルから選ばれ；
Ｒ^１８ｃ及びＲ^１８ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^１９は独立してＲ^２０、チオアルキル、ハロゲン、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２０は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^２１、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロシクリルアルキル及び場合により置換されていることができるカルボシクリルから選ばれ；
Ｒ^２１は独立してＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｑ’は：
（ａ）直接結合；
（ｂ）ＮＲ^６；
（ｃ）場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；
（ｄ）ＣＲ^２２Ｒ^２４；ならびに
（ｅ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、Ｃ（ＯＲ^１１）（Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（Ｒ^１０）_２、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、ＣＨ_２Ｚ’、Ｚ’−ＣＨ_２及びＣＨ_２Ｚ’ＣＨ_２から選ばれ；
Ｚ’はＣ（Ｒ^１１）（ＯＲ^１２）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）及びＮＲ^１１から選ばれ；
Ｒ^６はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であるか；あるいはまた、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６又はＣ（Ｒ^１０）_２である場合、Ｒ^２及びＲ^６又はＲ^１０の１つは一緒になって：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、感覚有毛細胞の死による患者における突然の感覚神経的な聴覚障害を予防する方法を提供する。

本明細書で使用する用語「突然の感覚神経的な聴覚障害」とは、特発的な要因の結果として生じる聴覚障害を称する。

本発明はまた、有効量の式：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における外傷の前後の感覚有毛細胞の機能を保つための方法を提供する。

本明細書で使用する有毛細胞等の機能を保つ内容において、用語「保つ」とは、１以上の有毛細胞の正常な機能を維持することを称する。本明細書で使用するように、「保つ」とは例えば、少なくとも約５０％の正常な有毛細胞の機能、より好ましくは少なくとも約７５％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９５％、そして最も好ましくは約１００％の正常な有毛細胞の機能を維持することを含むことができる。

本発明はまた、有効量の式：

［式中、環Ｄはフェニル及び二重結合ａ−ｂを有するシクロヘキセンから選ばれ；
環Ｂ及び環Ｆは独立して：
（ａ）１〜３個の炭素原子が複素原子で置き換えられていることができる６−員炭素環式環；
（ｂ）５−員炭素環式環；及び
（ｃ）（１）１つの炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄原子で置き換えられているか；
（２）２つの炭素原子が硫黄及び窒素原子、酸素及び窒素原子、又は２つの窒素原子で置き換えられているか；あるいは
（３）３個の炭素原子が３個の窒素原子、１つの酸素及び２つの窒素原子、又は１つの硫黄及び２つの窒素原子で置き換えられている５−員炭素環式環から選ばれ；
Ｇ−Ｘ−Ｗは：
（ａ）（Ｚ^１Ｚ^２）Ｃ−Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（Ｚ^１Ｚ^２）；
（ｂ）ＣＨ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ^１）；及び
（ｃ）Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｒ^１）から選ばれ、
Ｚ^１及びＺ^２は、それぞれの存在において独立してＨ，Ｈ；Ｈ，ＯＲ；Ｈ，ＳＲ；Ｈ，Ｎ（Ｒ）_２；ならびにＺ^１及びＺ^２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ及び＝ＮＲから選ばれる部分を形成する基から選ばれ；但しＺ^１とＺ^２の対の少なくとも１つは＝Ｏを形成し；
Ｒは独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ＣＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、場合により置換されていることができるアリールアルキル及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキルから選ばれ；
Ｒ^１は独立して：
（ａ）Ｈ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル；
（ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ；
（ｃ）ＯＲ^１ｂ；
（ｄ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１ｂ、ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^１ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１ｂは独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^１ｃ及びＲ^１ｄはそれぞれ独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基から選ばれ；
Ｘ^１は独立してＯ、Ｓ及びＣＨ_２から選ばれ；
ＱはＮＲ^２、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^２２、ＣＨＲ^２３、Ｘ^４ＣＨ（Ｒ^２３）、ＣＨ（Ｒ^２３）Ｘ^４から選ばれ、ここでＸ^４はＯ、Ｓ、ＣＨ_２、ＮＲ^２２及びＮＲ^２から選ばれ；
Ｒ^２はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であり；
Ｒ^２ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル、場合により置換されていることができるヘテロシクリル、ＯＲ^２ｂ、ＣＯＮＨ_２、ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄから選ばれ；
Ｒ^２ｂはＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^２ｃ及びＲ^２ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して：
（ａ）Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^９及びＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９；
（ｂ）ＣＨ_２ＯＲ^１４；
（ｃ）ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、（ＣＨ_２）_ｐＮＨＲ^１４及びＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２；
（ｄ）Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９及びＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^１４；
（ｅ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^５基である、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^９はアルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１０はＨ、アルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１１及びＲ^１２は独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^５はアリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルキルオキシ−アルコキシ、ヒドロキシアルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣＯ_２Ｒ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１０、Ｏ−テトラヒドロピラニル、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＮＲ^１０ＣＯ_２Ｒ^９、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ＮＲ^１０Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^９、Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^９、ＣＨ＝ＮＮＨＣＨ（Ｎ＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１０）_２、ＯＲ^１４及び単糖から選ばれ、ここで単糖のそれぞれのヒドロキシル基は独立して非置換であるか、又はＨ、アルキル、アルキルカルボニルオキシもしくはアルコキシにより置き換えられており；
Ｘ^２はＯ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｙは：
（ａ）直接結合；
（ｂ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^１９基である、場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；ならびに
（ｃ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（Ｒ^１８）_２、Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１９）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（ＯＲ^２０）Ｒ^２０、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨ（Ｒ^１８）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨＲ^２１Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^２１）、Ｎ（Ｒ^２１）Ｃ（＝Ｏ）、ＺがＣ（Ｒ^２０）_２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ_２Ｒ^２０、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）及びＮ（Ｒ^２０）から選ばれるＣＨ_２Ｚ、ＺＣＨ_２及びＣＨ_２ＺＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１８は独立してＨ、ＳＯ_２Ｒ^１８ａ、ＣＯ_２Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^１８ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル及び場合により置換されていることができるヘテロシクリルから選ばれ；
Ｒ^１８ｃ及びＲ^１８ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^１９は独立してＲ^２０、チオアルキル、ハロゲン、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２０は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^２１、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロシクリルアルキル及び場合により置換されていることができるカルボシクリルから選ばれ；
Ｒ^２１は独立してＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｑ’は：
（ａ）直接結合；
（ｂ）ＮＲ^６；
（ｃ）場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；
（ｄ）ＣＲ^２２Ｒ^２４；ならびに
（ｅ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、Ｃ（ＯＲ^１１）（Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（Ｒ^１０）_２、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、ＣＨ_２Ｚ’、Ｚ’−ＣＨ_２及びＣＨ_２Ｚ’ＣＨ_２から選ばれ；
Ｚ’はＣ（Ｒ^１１）（ＯＲ^１２）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）及びＮＲ^１１から選ばれ；
Ｒ^６はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であるか；あるいは又、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６又はＣ（Ｒ^１０）_２である場合、Ｒ^２及びＲ^６又はＲ^１０の１つは一緒になって：

であり、Ｘ^５及びＸ^６は独立してＯ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^７及びＸ^８は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＣＨＲ^２６、Ｃ（ＯＨ）Ｒ^２６、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨ_２＝Ｃから選ばれ；
Ｘ^９及びＸ^１０は独立して結合、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）及びＣＨＲ^２６から選ばれ；
Ｘ^１１は結合又は場合によりＮＲ^１１Ｒ^１２もしくはＯＲ^３０で置換されていることができるアルキレンであり；
Ｒ^２３はＨ、ＯＲ^２７、ＳＲ^２７、Ｒ^２２及びＲ^２８から選ばれ；
Ｒ^２４はＲ、チオアルキル及びハロゲンから選ばれ；
Ｒ^２５はＲ^１及びＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^２６はＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び場合により置換されていることができるアルコキシから選ばれ、ここで
（１）環Ｇは０〜約３個の環複素原子を含有し；
（２）環Ｇのいずれの２つの隣接ヒドロキシル基も一緒になってジオキソラン環を形成することができ；
（３）環Ｇのいずれの２つの隣接環炭素原子も一緒になって縮合アリールもしくはヘテロアリール環を形成することができ；但し；
（ａ）Ｘ^１１が結合の場合、環Ｇはヘテロアリールであることができ；
（ｂ）環Ｇは：
（ｉ）少なくとも１つの飽和されている炭素原子を含有し；
（ｉｉ）２つの隣接する環Ｏ原子を含有せず；
（ｉｉｉ）最高で２個のＣ（＝Ｏ）基を含有し；
Ｒ^２７はＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｒ^２８はアリール、アリールアルキル、ＳＯ_２Ｒ^２９、ＣＯ_２Ｒ^２９、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２９、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２９はアルキル、アリール及びヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^３０はＨ、アルキル、アシル及びＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２から選ばれ；
ｍは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｐは独立して１、２、３及び４から選ばれ；
ｒは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｙは独立して０、１及び２から選ばれ；
ｚは０、１、２、３及び４から選ばれ；
但し、Ｙ及びＱ’の少なくとも１つは直接結合であり、Ｙが直接結合の場合にはＱ’は直接結合以外であり、Ｑ’が直接結合の場合にはＹは直接結合以外であり、環Ｂ及びＦがフェニルであり、Ｇ−Ｘ−ＷがＣＨ_２ＮＨＣ（＝Ｏ）であり、Ｙが直接結合であり、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６であり、ここでＲ^６がＲ^２と一緒になって

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における損傷した感覚有毛細胞を処置するための方法を提供する。

本明細書で使用する損傷した感覚有毛細胞を処置する内容において、用語「処置する」とは、外傷により損傷した少なくとも幾つかの感覚有毛細胞の感覚刺激を感知し、かつ／または伝達する能力の再生または回復を称する。本明細書で使用するように、「処置する」とは外傷により損傷した少なくとも幾つかの感覚有毛細胞が、正常な感覚有毛細胞の感覚刺激を感知し、かつ／または伝達する能力の少なくとも約１５％、より好ましくは少なくとも約２５％、さらにより好ましくは少なくとも約５０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約７５％、さらにより一層好ましくは少なくとも約８０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９０％、さらにより一層好ましくは少なくとも約９５％、そして最も好ましくは約１００％を回復することを含むことができる。

本明細書で使用するように、用語「損傷した」とは、１以上の感覚有毛細胞が外傷により、正常な感覚有毛細胞よりも外部刺激を感知し、かつ／または伝達する能力が劣ることを称する。

本明細書で使用する用語「外傷」とは限定するわけではないが、騒音、感染、薬物毒性、加齢、疾患および特発性要因を含む。

本発明はまた、有効量の式：

本発明はまた、有効量の式：

［式中、環Ｄはフェニル及び二重結合ａ−ｂを有するシクロヘキセンから選ばれ；
環Ｂ及び環Ｆは独立して：
（ａ）１〜３個の炭素原子が複素原子で置き換えられていることができる６−員炭素環式環；
（ｂ）５−員炭素環式環；及び
（ｃ）（１）１つの炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄原子で置き換えられているか；
（２）２つの炭素原子が硫黄及び窒素原子、酸素及び窒素原子、又は２つの窒素原子で置き換えられているか；あるいは
（３）３個の炭素原子が３個の窒素原子、１つの酸素及び２つの窒素原子、又は１つの硫黄及び２つの窒素原子で置き換えられている５−員炭素環式環から選ばれ；
Ｇ−Ｘ−Ｗは：
（ａ）（Ｚ^１Ｚ^２）Ｃ−Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（Ｚ^１Ｚ^２）；
（ｂ）ＣＨ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ^１）；及び
（ｃ）Ｎ（Ｒ^１）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（Ｒ^１）から選ばれ、
Ｚ^１及びＺ^２は、それぞれの存在において独立してＨ，Ｈ；Ｈ，ＯＲ；Ｈ，ＳＲ；Ｈ，Ｎ（Ｒ）_２；ならびにＺ^１及びＺ^２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ及び＝ＮＲから選ばれる部分を形成する基から選ばれ；但しＺ^１とＺ^２の対の少なくとも１つは＝Ｏを形成し；
Ｒは独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ＣＲ^１ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、場合により置換されていることができるアリールアルキル及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキルから選ばれ；
Ｒ^１は独立して：
（ａ）Ｈ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールアルキル；
（ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ａ；
（ｃ）ＯＲ^１ｂ；
（ｄ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１ｂ、ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１ｂ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１ｃＲ^１ｄから選ばれ；
Ｒ^１ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール及び場合により置換されていることができるヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１ｂは独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^１ｃ及びＲ^１ｄはそれぞれ独立してＨ、場合により置換されていることができるアルキル及び式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基から選ばれ；
Ｘ^１は独立してＯ、Ｓ及びＣＨ_２から選ばれ；
ＱはＮＲ^２、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^２２、ＣＨＲ^２３、Ｘ^４ＣＨ（Ｒ^２３）、ＣＨ（Ｒ^２３）Ｘ^４から選ばれ、ここでＸ^４はＯ、Ｓ、ＣＨ_２、ＮＲ^２２及びＮＲ^２から選ばれ；
Ｒ^２はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であり；
Ｒ^２ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル、場合により置換されていることができるヘテロシクリル、ＯＲ^２ｂ、ＣＯＮＨ_２、ＮＲ^２ｃＲ^２ｄ、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄ及びＯ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^２ｃＲ^２ｄから選ばれ；
Ｒ^２ｂはＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれ；
Ｒ^２ｃ及びＲ^２ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して：（ａ）Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^１０、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^９及びＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９；
（ｂ）ＣＨ_２ＯＲ^１４；
（ｃ）ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^１０、（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、（ＣＨ_２）_ｐＮＨＲ^１４及びＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２；
（ｄ）Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９及びＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^１４；
（ｅ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^５基である、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^９はアルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１０はＨ、アルキル、（ＣＨ_２）_ｒアリール及び（ＣＨ_２）_ｒヘテロアリールから選ばれ；
Ｒ^１１及びＲ^１２は独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^５はアリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アルキルオキシ−アルコキシ、ヒドロキシアルキルチオ、アルコキシ−アルキルチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＣＯ_２Ｒ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＳ（Ｏ）_ｙＲ^９、Ｘ^２（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ^１０、Ｏ−テトラヒドロピラニル、ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＮＲ^１０ＣＯ_２Ｒ^９、ＮＲ^１０Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ＮＲ^１０Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^９、Ｓ（Ｏ）_ｙＲ^９、ＣＯ_２Ｒ^１０、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^９、ＣＨ_２ＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＮＲ^１１Ｒ^１２、ＣＨ＝ＮＯＲ^１０、ＣＨ＝ＮＲ^９、ＣＨ＝ＮＮＨＣＨ（Ｎ＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１１Ｒ^１２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１０）_２、ＯＲ^１４及び単糖から選ばれ、ここで単糖のそれぞれのヒドロキシル基は独立して非置換であるか、又はＨ、アルキル、アルキルカルボニルオキシもしくはアルコキシにより置き換えられており；
Ｘ^２はＯ、Ｓ又はＮＲ^１０であり；
Ｙは：
（ａ）直接結合；
（ｂ）場合による置換基が１〜約３個のＲ^１９基である、場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；ならびに
（ｃ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（Ｒ^１８）_２、Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１９）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（ＯＲ^２０）Ｒ^２０、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨ（Ｒ^１８）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）ＣＨ（Ｒ^１８）、ＣＨＲ^２１Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^２１）、Ｎ（Ｒ^２１）Ｃ（＝Ｏ）、ＺがＣ（Ｒ^２０）_２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ_２Ｒ^２０、Ｃ（＝ＮＯＲ^２０）及びＮ（Ｒ^２０）から選ばれるＣＨ_２Ｚ、ＺＣＨ_２及びＣＨ_２ＺＣＨ_２から選ばれ；
Ｒ^１８は独立してＨ、ＳＯ_２Ｒ^１８ａ、ＣＯ_２Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^１８ａは独立して場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアリール、場合により置換されていることができるカルボシクリル及び場合により置換されていることができるヘテロシクリルから選ばれ；
Ｒ^１８ｃ及びＲ^１８ｄはそれぞれ独立してＨ及び場合により置換されていることができるアルキルから選ばれるか、又は一緒になって式（ＣＨ_２）_２−Ｘ^１−（ＣＨ_２）_２の結合基を形成し；
Ｒ^１９は独立してＲ^２０、チオアルキル、ハロゲン、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ；
Ｒ^２０は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^１８ａ、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＮＲ^１８ｃＲ^１８ｄ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｐＯＲ^２１、場合により置換されていることができるアリールアルキル、場合により置換されていることができるヘテロシクリルアルキル及び場合により置換されていることができるカルボシクリルから選ばれ；
Ｒ^２１は独立してＨ及びアルキルから選ばれ；
Ｑ’は：
（ａ）直接結合；
（ｂ）ＮＲ^６；
（ｃ）場合により置換されていることができるＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２；
（ｄ）ＣＲ^２２Ｒ^２４；ならびに
（ｅ）ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、Ｃ（ＯＲ^１１）（Ｒ^１２）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（Ｒ^１０）_２、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）ＣＨ（Ｒ^１３）、ＣＨ（Ｒ^１３）Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）、ＣＨ_２Ｚ’、Ｚ’−ＣＨ_２及びＣＨ_２Ｚ’ＣＨ_２から選ばれ；
Ｚ’はＣ（Ｒ^１１）（ＯＲ^１２）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝ＮＯＲ^１１）及びＮＲ^１１から選ばれ；
Ｒ^６はＨ、ＳＯ_２Ｒ^２ａ、ＣＯ_２Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２ａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１ｃＲ^１ｄ、場合により置換されていることができるアルキル、場合により置換されていることができるアルケニル及び場合により置換されていることができるアルキニルから選ばれ、ここで該場合による置換基は１〜約３個のＲ^５基であるか；あるいはまた、ＱがＮＲ^２であり、Ｑ’がＮＲ^６又はＣ（Ｒ^１０）_２である場合、Ｒ^２及びＲ^６又はＲ^１０の１つは一緒になって：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における蝸牛ニューロンの死を予防するための方法を提供する。

本明細書で使用するように、用語「蝸牛ニューロンの死」とは、正常に機能するニューロンと比較して、ニューロンが入力源から最終目的地までインパルスを伝達する能力の停止を称する。

本発明はまた、有効量の式：

を形成する場合、Ｒ^３はＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ_３以外である］
を有する式Ｉの縮合ピロロカルバゾールあるいはそれらの立体異性体又は製薬学的に許容され得る塩の形態を患者に投与することを含む、患者における蝸牛ニューロンの死を予防するための方法を提供する。
別の態様では本発明の方法は、インドールカルバゾールＫ−２５２ａの誘導体である低有機分子である式ＩＩの化合物を含むことができる。式ＩＩの化合物は、ストレスおよび傷害に関連するＪＮＫシグナル伝達経路を阻害することにより、インビトロで運動ニューロンの死を防止することが示された（Ｍａｒｏｎｅｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１８（１），１０４−１１１，１９９８）。

式ＩＩの化合物はＫ−２５２ａのビス−チオエチルメチル同族体である。機能的活性を保存する式ＩＩの修飾も意図する。本明細書で使用する用語「機能的活性」とは、組成物が聴覚障害を防ぎ、平衡感覚の喪失を防ぎ、感覚有毛細胞の死を防ぎ、感覚有毛細胞の損失による突発的な感覚神経的な聴覚障害を防ぎ、外傷の前後での感覚有毛細胞の機能を保ち、損傷した感覚有毛細胞を処置し、蝸牛ニューロンの死を防ぐ能力を称する。式ＩＩの化合物は、以下に示すインドールカルバゾール骨格および構造を有する。

また本発明は、有効量の式ＩＩ：

の化合物を患者に投与することを含む、患者における聴覚障害を予防するための方法を提供する。
さらに本発明は、有効量の式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、患者における平行感覚の喪失を予防するための方法を提供する。

さらに本発明は、有効量の式ＩＩ：

の化合物を患者に投与することを含む、患者における感覚有毛細胞の死を予防するための方法を提供する。

さらに本発明は、有効量の上記式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、感覚有毛細胞の死による患者における突然の感覚神経的な聴覚障害を予防するための方法を提供する。

さらに本発明は、有効量の上記式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、患者における外傷前後の感覚有毛細胞の機能を保つための方法を提供する。

さらに本発明は、治療に有効量の上記式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、蝸牛ニューロンの死を予防するための方法を提供する。

インドールカルバゾールは一般に親水性であるので、タンパク質よりも大変容易に生物の膜を通ることが可能である。さらにインドールカルバゾールはインビボでポリペプチドよりも大変長い寿命を有することができる。

Ｋ−２５２ａ誘導体は、アルツハイマー病、運動ニューロン疾患、パーキンソン病、ハンチントン病および癲癇のような障害に有望である（例えば１９９５年１０月２４日に発効された米国特許第５，４６１，１４６号明細書；１９９７年４月１５日に発効された米国特許第５，６２１，１００号明細書を参照にされたい）。

式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、末梢または中枢神経障害の処置およびサイトカインの過剰生産にも有用である（１９９７年１２月３１に国際出願された国際公開第９７／４９４０６号明細書を参照にされたい。その内容は全部、引用により本明細書に編入する）。

別の態様では、本発明の方法は式Ｉおよび式ＩＩの化合物の製造における中間体である化合物を含むことができる。そのような中間体化合物の例には、例えば実施例１１の５、および実施例１２の１、２、３、４、５、６、７および８で確認される。特に好適な中間体化合物は、実施例１２の７である。

蝸牛は種々の物質が感覚有毛細胞に及ぼす保護的な治療的効力を研究するための有用な生物モデル系である。蝸牛の機能は、２つのレベル：蝸牛の拡音器的能力（ｍｉｃｒｏｐｈｏｎｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌ）および耳音響的放出（ｏｔｏａｃｏｕｓｔｉｃｅｍｉｓｓｉｏｎ）を測定することによるコルティ器官のレベル、ならびに化合物の作用能力を測定し、能力を合算し、または聴覚の脳幹反応（ＡＢＲｓ）による蝸牛の神経レベルで正確に監視することができる。さらにコルティ器官の感覚有毛細胞および蝸牛ニューロンの量は周知であり、そして外傷が誘発する変化はサイトコクレオグラム（ｃｙｔｏｃｏｃｈｌｅｏｇｒａｍ）およびニューロン計数を含む体型測定（ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ）法により正確に評価することができる。実験的に誘発した損傷後、哺乳動物の聴覚器官における変性および出来事の連鎖パターンは周知である。感覚有毛細胞は騒音および耳に毒性の薬剤の第１の標的である。我々は現在、どの種類の騒音および耳に毒性の薬剤用量が内耳の位置で感覚有毛細胞の破壊を誘導するのかを知っている。感覚有毛細胞が破壊されると、続いて神経感応性の蝸牛ニューロンの変性が起こる。

本発明の縮合ピロロカルバゾールは、プロドラッグ形態で存在することができる。本明細書で使用する用語「プロドラッグ」は、そのようなプロドラッグが哺乳動物の個体に投与された時、インビボで式Ｉおよび／またはＩＩに従う活性なもとの薬剤または本発明の他の式または化合物を放出する任意の共有結合したキャリアーを含むことを意図している。プロドラッグは薬剤の多数の望ましい性質（例えば溶解性、生物学的利用能、加工性等）を強化することが知られているので、本発明の化合物はプロドラッグ形態で送達されてもよい。すなわち本発明は特許請求する化合物のプロドラッグ、それを含む組成物、およびその送達法を意図する。本発明の化合物、例えば式ＩおよびＩＩのプロドラッグは、修飾が経路の操作またはインビボのいずれかにより開裂してもとの化合物となるように、化合物に存在する官能基を修飾することにより製造することができる。

したがってプロドラッグには、例えばヒドロキシ、アミノまたはカルボキシ基が任意の基に結合している本発明の化合物を含み、これはプロドラッグを哺乳動物個体に投与すると、開裂して遊離のヒドロキシル、遊離のアミノまたはカルボン酸をそれぞれ形成する。例として限定するわけではないが、アルコールおよびアミン官能基のアセテート、ホルメートおよびベンゾエート誘導体；メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、フェニル、ベンジルおよびフェニチルエステル等のようなアルキル、炭素環式、アリールおよびアルキルアリールエステルを含む。

本発明の製薬学的に許容され得る塩は、塩基性または酸性部分を含むもとの化合物から、通例の化学法により合成することができる。一般にそのような塩はこのような化合物の遊離の酸または塩基形態を、化学量論的量の適切な塩基または酸と、水もしくは有機溶媒中、または２つの混合物中で反応させることにより調製することができる。一般に非水性媒質様のエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルが好適である。適当な塩のリストは、レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ）、１７版、マック出版社（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ）、イーストン、ペンシルバニア州、１９８５、１４１８頁に見いだされ、その開示内容は引用により本明細書に編入する。

本発明の化合物は、当業者に周知な多数の方法で製造することができる。化合物は例えば以下に記載する方法により、あるいは当業者により認識されているそれらの変更法により合成することができる。本発明に関連して開示するすべての方法は、ミリグラム、グラム、マルチグラム、キログラム、マルチキログラムを含む任意の規模、あるいは工業的規模で実施されることを意図している。

本発明の化合物は１以上の非対称的に置換された炭素原子を含むことができ、そして光学的に活性な、またはラセミ体で単離することができる。すなわち特別な立体化学または異性体を具体的に指さない限り、すべてのキラル、ジアステレオマー、ラセミ体および構造のすべての幾何異性体を意図する。当該技術分野ではそのような光学活性体をどのように調製し、そして単離するかは周知である。例えば立体異性体の混合物は限定するわけではないが、ラセミ体の分割、標準、逆相およびキラルクロマトグラフィー、優先的な塩の形成、再結晶等を含む標準的な技法により、あるいはキラルな出発材料から、または標的とするキラル中心の意図的な合成のいずれかによるキラル合成により分離することができる。

存在する官能基は合成の過程で保護基を含むことができると容易に認識されるだろう。例えば本化合物のアミノ酸側鎖置換基は、ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル基のような保護基により置換することができる。保護基は、ヒドロキシル基およびカルボキシル基のような官能基に選択的付加し、そして除去できる化学的官能基としてそれ自体は既知である。このような基は化学化合物に存在して、化合物が暴露される化学反応条件に対してそのような官能基を不活性にする。任意の様々な保護基を本発明に使用することができる。好適な保護基は、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ；Ｚ）基およびｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を含む。本発明に従い他の好適な保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，ａｎｄＷｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．、有機合成における保護基（ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第２版、ウィリーアンドサンズ（Ｗｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ）、１９９１に見いだすことができる。

インドールカルバゾールのような縮合ピロロカルバゾールは、例えば米国特許第４，９２３，９８６号；同第４，８７７，７７６号；同第５，０９３，３３０号；同第５，４６１，１４６号；同第５，４６８，８７２号；同第５，６２１，１００号；同第５，６２１，１０１号；同第５，５１６，７１１号；および同第５，５９９．８０８号明細書；ならびに国際公開第９３／０８８０９号および同第９７／４６５６５号明細書に教示されている方法により合成することができ、この開示は全部、引用により本明細書に編入する。さらなる製造法は、Ｍｏｏｄｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５７：２１０５−２１１４（１９９２）にも説明され、これも引用により本明細書に編入する。

インデノカルバゾールのような縮合ピロロカルバゾールならびにさらなる化合物（ここでＱ’は単純な窒素ではない）は、例えば米国特許第５，４７５１１０号；同第５，５９１，８５５号；同第５，５９４，００９号；同第５，７０５，５１１号；同第５，６１６，７２４号および同第５，８０１，１９０号明細書に教示されている方法により合成することができ、この開示は全部、引用により本明細書に編入する。

架橋化インデノカルバゾールのような縮合ピロロカルバゾールは、例えば同時係属中の米国仮出願第０９／３２５，１４０号明細書に教示されている方法により製造することができ、この開示は全部、引用により本明細書に編入する。

環式置換ピロロカルバゾールおよびイソインドロンのような縮合ピロロカルバゾールは、例えば同時係属中の米国仮出願第６０／１１９，８３４号明細書に教示されている方法により製造することができ、この開示は全部、引用により本明細書に編入する。

本発明の以下の実施例でより詳細に説明する。以下の実施例は本発明を具体的に説明することを目的とし、そして本発明をどのようにも限定するように解釈されることはない。当業者は、本発明の精神および範囲内にある修飾を認識するだろう。ここで引用するすべての技術文献は全部、本明細書に編入する。

実施例１−聴覚障害／細胞死滅の予防８匹の顔料着色されたモルモット（２００−３００ｇ）の基準聴覚を下記のＡＢＲにより試験した。ＡＢＲは聴覚機能の測定値である。４匹の動物を騒音外傷前２４時間から始めて騒音外傷への露呈から２１日後まで続ける１ｍｇ／ｋｇの式ＩＩの化合物の毎日の皮下（ｓ．ｃ．）注射で処置した。４匹の動物は対照用でありそして賦形剤だけを受容させた（４番目の動物は麻酔下で死亡した）。全ての動物を４．０ｋＨｚの中心周波数、１２５ｄＢＳＰＬ（音圧水準）の外傷性オクターブ帯騒音に１０５分間にわたり呈した。

ＡＢＲ閾値を騒音外傷への露呈から２１日後に再び測定した。ＡＢＲ閾値をシステム（Ｓｙｓｔｅｍ）ＩＩハードウエアおよびビオシグ（ＢｉｏＳｉｇ）ソフトウエア（タッカー・デービス・テクノロジー（ＴｕｃｋｅｒＤａｖｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて測定した。１ｍｓｃｏｓ２上昇および下降並びに１８ｍｓ平坦部を有する刺激は反射鏡（外耳管の道の中に置かれる）に連結されたバイエル・カルフォン（Ｂｅｙｅｒｃａｒｐｈｏｎｅ）を用いて２０Ｈｚの割合で表された。刺激をブルエル・アンド・ジャエル（Ｂｒｕｅｌ & Ｋｊａｅｒ）２２０３音水準計に連結されたブルエル・アンド・ジャエル４１３４マイクロホンに対して目盛りつけした。グラス（Ｇｒａｓｓ）Ｐ１５予備増幅器および一般的な増幅器は１０^５の増加および０．３〜３．０ｋＨｚのフィルター機能を与えた。各強度水準において２つの応答が得られた。閾値を周波数２、４、８、１６および３２ｋＨｚに関して１組の応答から種々の強度で閾値付近の５ｄＢ間隔および１０００スイープを用いて測定した。

２１日間の処置期間およびＡＢＲの測定後に、動物を殺しそして側頭骨をリンパ周囲灌流により４％ＰＦＡ（パラホルムアルデヒド）により固定した。左蝸牛を表面検体から切開しそして各聴覚器官中の間隔毛細胞の数をシトコクレオグラム（ｃｙｔｏｃｏｃｈｌｅｏｇｒａｍｓ）により評価した。毛細胞の上半分を、埋め込まずに蝸牛の全封入部を０．２５％のトリトンＸ−１００を含有するＰＢＳ中のローダミンファロイジン（モレキュラー・プローブス（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）、ユージン、オレゴン州）で４℃において一晩にわたり染色することによりシトコクレオグラム用に処理しそしてベクタシールド（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ））の中に設置した。ファロイジンは細胞Ｆ−アクチンに関する特異的マーカーである。蝸牛の基底半分をエポン（Ｅｐｏｎ）の中に埋め込みそしてシトコクレオグラム用に処理した。エポンに埋め込まれた蝸牛の巻き部の選択された切片を電子顕微鏡による精密構造試験用に処理した。

結果
ＡＢＲにより測定されるように、騒音露呈は全てのモルモット（各群とも４匹）で聴覚障害を引き起こした（図１）。３２ｋＨｚ以外の全ての周波数において、処置した動物はそれらのＡＢＲ測定において中間的な移動があった。閾値移動は対照（賦形剤で処置し、騒音に露呈された）動物では試験周波数を越えて４０−６０ｄＢＳＰＬであったが、式ＩＩの化合物を受容した動物では２０−４０ｄＢだけであった。

騒音病変発生前に、ＯＨＣ（またはディータース瘢痕、ＯＨＣが位置していた部位）の合計数は対照および処置群で等しかった。ＯＨＣの合計数は、対照群では約６０００〜７０００個の感覚毛細胞の範囲であり、平均して６５８３＋／−２０３個であり、そして処置した群では６４４５＋／−２３４感覚毛細胞であった。全ての騒音で病変した対照蝸牛では、コルティ器官は蝸牛全体にわたり外部感覚毛細胞の多くの変性を示し、細胞の１７−８４％が障害を受けた（表２）。最も影響を受けた領域は中間巻き部および上部基底巻き部に位置する円形窓（ＲＷ）から１１ｍｍ〜７ｍｍの間であった。この領域では、毛細胞は約１．５−３．０ｍｍの距離にわたり存在しなかった（図２ｂ）。

対照的に、式ＩＩの化合物で処置した４匹の動物の中の３匹は１−３％の範囲の感覚毛細胞の少量の障害だけを示した（表２）。４番目の動物は１９％の障害があった。ほとんど完全に感覚毛細胞が保護された３匹の動物では、障害を受けた細胞の少割合はコルティ器官中の特定の部位に局在しないようであった（図２ａ）。処置した動物中の保護された感覚毛細胞の光顕微鏡形態研究は正常を表しそして電子顕微鏡によると少量だけの変化を示した。

この騒音−外傷モデルでは、ＡＢＲの機能的測定値および実際の細胞計数は式ＩＩの化合物が外部感覚毛細胞自体およびそれらの機能的能力の両者を保護するのに有効であったことを示唆する。

実施例２−聴覚障害／細胞消滅の予防
騒音病変発生。成体ダンキン−ハートレイ（Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ）雌モルモット（体重３００−５００ｇ）を、１回に４匹の動物ずつ、実施例１に記載された通りにして４．０ｋＨｚの中心周波数、１２０ｄＢＳＰＬを有するオクターブ帯騒音に６時間にわたり露呈した。断片化した毛細胞核を騒音露呈直後に並びに１、２、４、６、８および１４日後に騒音に露呈された蝸牛から評価した。騒音に露呈されたおよび露呈されなかったモルモットを深い麻酔下で断頭しそして内耳にリンパ周囲でＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドを灌流させ、そして５ｍｍ厚さのパラフィンに埋め込まれた切片用に処理した（ＹＩｉｋｏｓｋｉｅｔａｌ．，ＨｅａｒＲｅｓ６５：６９−７８，１９９３；Ｙｌｉｋｏｓｋｉｅｔａｌ．，ＨｅａｒＲｅｓ１２４：１７−２６，１９９８）。ＴＵＮＥＬ−染色は下記の通りにして行われた。ＤＮＡ断片化はＤＡＰＩ核対比染色によっても証明された（以下参照）。さらに、外傷で誘発される核断片化は、０．１Ｍ燐酸塩緩衝液、ｐＨ７．４中２．５％グルタルアルデヒドを用いてリンパ周囲で固定され、１％四酸化オスミウムで後固定され、エポキシ樹脂の中に埋め込まれ、そして表面組織標本用に製造された対側性蝸牛の形態学的分析により証明された（以下参照）。選択された蝸牛区域を次に横方向および水平面で中程度の薄さ（１．０ｍｍ）の切片に切断し、それらを１％トルイジンブルーで染色した。分析をノマルスキー（Ｎｏｍａｒｓｋｉ）光学素子が装着されたオリンパス・プリビス（ＯｌｙｍｐｕｓＰｒｏｖｉｓ）顕微鏡下で行った。

試験−物質伝達
式ＩＩを騒音に露呈されたモルモットに１ｍｇ／ｋｇの投与量で、騒音露呈より２時間前から始めてそして２週間にわたり毎日続けて、皮下注射した。式ＩＩをＰＢＳ、ｐＨ７．４中５％ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）（ＢＡＳＦコーポレーション（ＢＡＳＦＣｏｒｐ．）、パルシッパニー、ニュージャージー州）の中に溶解させた。１ｍｇ／ｋｇ投与量の式ＩＩの化合物は４℃で貯蔵された２５％ソルトール中１０ｍｇ／ｍｌの原料から毎日製造した。騒音に露呈された対照モルモットは賦形剤だけを受容した。

聴覚試験
聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）を騒音露呈より２日前並びに露呈から２、６および１４日後に麻酔（キシラジン１０ｍｇ／ｋｇおよびケタミン４０ｍｇ／ｋｇ）下で測定した。周波数２、４、６、８、１６および３２ｋＨｚの０．５ｍｓ上昇および降下による１ｍｓハニング（ｈａｎｎｉｎｇ）の孔を開ける両耳刺激は１０Ｈｚの割合で表された。予備増幅器および一般的なデータ取得は８００００の増加を与え、０．３〜１０ｋＨｚのフィルターの働きをした。１０００回の試験からまとめられた２つの応答が各強度水準で得られた。聴覚閾値は１組の応答から種々の強度で測定された。閾値はＡＢＲ波形におけるピーク３または４の最後の現象として定義される。試験は音が減衰される箱の中で行われそして動物の体温は３７℃に保たれた。

シトコクレオグラム
騒音露呈から２週間後に、対照および式ＩＩで処置したモルモットを深い麻酔下で断頭しそして内耳を０．１Ｍ燐酸塩緩衝液、ｐＨ７．４中２．５％グルタルアルデヒドを用いてリンパ周囲で固定し、１％四酸化オスミウムで後固定し、エポキシ樹脂中に埋め込みそして以上で詳細に記載された通りにして表面組織標本用に処理した（Ｙｌｉｋｏｓｋｉ，ＡｃｔａＯｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ（Ｓｔｏｃｋｈ）Ｓｕｐｐｌ３２６：５−２０，１９７４）。簡単に述べると、蝸牛管の区域を蝸牛軸から自由に切開し、形を整えそして樹脂中に再び埋め込んだ。再び埋め込まれた蝸牛区域を表面組織標本としてノマルスキー光学素子が装着されたオリンパス・プリビス顕微鏡下で試験した。小毛板および不動毛の両方が適当な位置で観察されなかった場合に、毛細胞は障害を受けていると同定された。細胞計数に関しては、１０×１０平方アイレチクルおよび４０倍の対物レンズを使用した。障害を受けている毛細胞の百分率をコルティ器官の百分率長さの関数としてプロットした。

結果
騒音外傷後の細胞消滅による毛細胞の死滅
騒音外傷は円形窓から９ｍｍの領域（第二の蝸牛巻き部）でコルティ器官の毛細胞に対する最大損傷を誘発した。損傷に露呈された（ｎ＝１６）および露呈されなかった（ｎ＝３）蝸牛を横（中央蝸牛軸）面で切断し、そしてＤＡＰＩ対比染色（図３ａ）およびＴＵＮＥＬ−方法（図３ｂ、ｃ）で二重染色した。さらに、騒音に露呈された蝸牛の樹脂に埋め込まれたコルティ器官（ｎ＝６）を横（図３ｄ）または水平面（図３ｅ、ｆ）で切断し、そしてトルイジンブルーで染色した。ＴＵＮＥＬで標識付けされた細胞のほとんどは最大病変領域である第二の蝸牛巻き部の中に位置していた。試験期間中に、騒音露呈から最初の２週間後に、ＴＵＮＥＬ−標識付けはコルティ器官の支持細胞中で（図３ａ、ｂ）または蝸牛ニューロン中で検出されなかった。露呈されなかった蝸牛では、コルティ器官の細胞並びにニューロンはＴＵＮＥＬで標識付けされなかった。騒音露呈から２週間後に、ＴＵＮＥＬで標識付けされた感覚毛細胞は対照または処置された蝸牛ではみられなかった。

対照蝸牛では、毛細胞の細胞消滅の主部分は騒音露呈後の最初の６日間中に起きた。感覚毛細胞障害がこの領域に集中している（軸から約５０％の距離）ことを示すシトコクレオグラムの結果によると、細胞消滅プロフィルは上部の基底および下の方の中間巻き部に集中した。細胞消滅性の毛細胞障害量は式ＩＩで処置された蝸牛においてはより少なく、これらの結果はこの後露光時点での二群間の聴覚機能における統計的に意義ある差を示すＡＢＲ−測定値と一致する。

式ＩＩはインビボで騒音で誘発される聴覚障害を減衰させる騒音露呈の２日前に測定された聴覚閾値（基準値）は騒音露呈された対照および処置群の間で意義ある差を示さなかった。騒音露呈は露呈から２日後に見られるように全てのモルモット（騒音露呈された対照ｎ＝４、式ＩＩで処置されたｎ＝５）において閾値移動を引き起こした（図４ａ）。６日間の後露呈により、閾値移動は式ＩＩ群（ｎ＝１１）では騒音に露呈された対照群（ｎ＝８）におけるものより意義あるほど少なかった（４および８ｋＨｚにおけるＰ<０．０５、１６ｋＨｚにおけるＰ<０．０１）（図４ｂ）。２週間の後露呈により、２群（騒音露呈された対照ｎ＝１７、式ＩＩで処置したｎ＝１７）の間の差はより顕著になった（図４ｃ）。この段階で、ＡＢＲ閾値移動は騒音に露呈された対照では２８〜４５ｄＢＳＰＬの範囲であり、そして式ＩＩで処置した動物では１２〜２２ｄＢＳＰＬの範囲であった（全ての周波数においてＰ<０．０１）。

式ＩＩは騒音で誘発される毛細胞障害を減衰させる騒音露呈および最後のＡＢＲ記録を行ってから２週間後に、保護されたおよび障害を受けている毛細胞の数を樹脂に埋め込まれた蝸牛表面組織標本中で評価した。１個のモルモット蝸牛当たりのＯＨＣの合計数（障害を受けたおよび保護された毛細胞）は６２４０〜６８９７の範囲であった（表３）。騒音に露呈された対照蝸牛での蝸牛損傷量における大きな変動があり、そこでは障害を受けた毛細胞の量は３０５〜１２６６（ｎ＝１３）の範囲であった。式ＩＩで処置した蝸牛では、障害を受けている毛細胞の数は１０６〜６３２（ｎ＝１３）の範囲であった（表３）。この差は統計的に意義がある（Ｐ<０．０１）。

賦形剤で処置した騒音に露呈された対照蝸牛は、障害を受けている毛細胞の他に、不規則的な構造および混乱した不動毛を有するが最大損傷部位に隣接する領域での保護された小毛板および核を有する数個の捩れたＯＨＣがあった。騒音に露呈された対照蝸牛のほとんどは円形窓から約９ｍｍの領域で０．５〜１．０ｍｍにわたる最大損傷のより良く区分された領域を示した。さらに、特に蝸牛の上半分全部に沿って拡散されたＯＨＣ障害が見られた。式ＩＩで処置した蝸牛はコルティ器官の一部の破壊を示したが、一般的には０．１−０．２ｍｍだけにわたる領域であった。騒音に露呈された対照蝸牛でも拡散されたＯＨＣ障害はより少なかった。シトコクレオグラム（図５ａ、ｂ）は騒音に露呈された対照（ｎ＝１３）および式ＩＩで処置した（ｎ＝１３）蝸牛におけるコルティ器官の長さに沿った障害を受けているＩＨＣおよびＯＨＣの平均百分率を示す。これらの結果は、我々の強い騒音範例では、式ＩＩが３列の各々のＩＨＣ並びにＯＨＣを救済することを示す。

実施例３−新生期ラットの蝸牛体外移植組織内でのネオマイシンに対する式ＩＩの化合物の保護効果
式ＩＩの化合物はインビトロでネオマイシンで誘発される蝸牛感覚毛細胞障害を減衰させた。ネオマイシンで誘発される毛細胞変性に対する式ＩＩの化合物の効果は新生期コルティ器官の臓器向性培養物の中で測定した。

蝸牛培養物
基底および中間巻き部を含有する蝸牛の基底の半分を生後２日のウィスターラットから切開した。培養物を１５％の胎牛血清（ライフ・テクノロジーズ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ガイセスブルグ、メリーランド州）を含有するＦ１２培地（ライフ・テクノロジーズ）中で金属グリッド上に置かれたヌクレオポル（Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ）フィルター（孔寸法０．１ｍｍ、プレサントン、カリフォルニア州）上で維持した。２時間続く安定化期間後に、体外移植組織を１００ｍＭ硫酸ネオマイシン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス、ミズーリ州）に４８時間にわたり露呈した。式ＩＩ（５００ｎＭ）を培養の開始時およびその後１２時間毎に加えた。

蝸牛培養物中の毛細胞計数
体外移植組織を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中４％パラホルムアルデヒド／０．５％グルタルアルデヒドを用いて３０分間にわたり固定させ、そして表面組織標本用に切開した。それらを０．２５％のトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００を含有するＰＢＳ中ローダミン−ファロイジンの１：１００希釈物を用いて染色しそしてベクタシールド（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ））の中に設置した。外部毛細胞（ＯＨＣ）数をバイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）ＭＲＣ−１０２４同焦点レーザー走査システム（リッチモンド、カリフォルニア州）に連結されたツァイス・アキソバート（ＺｅｉｓｓＡｘｉｏｖｅｒｔ）１００／１３５エピフルオレッセント顕微鏡を用いて定量化した。不動毛および小皮板が観察されなかった場合に、毛細胞が障害を受けていると同定された。４０倍の対物レンズおよび接眼グリッドを用いてＯＨＣの数を評価した。各々の体外移植組織から、３列（これらの全てが存在する時に）の各々で３０個のＯＨＣにより充填された９〜１１の聴野を試験した。基底および中間巻き部を別個に分析した。各々が両方の条件（ネオマイシンおよびネオマイシンと式（ＩＩ））の４個の体外移植組織を包含する別個の３実験を分析した。

結果
培養物を１００μＭネオマイシンで処置した時に、特に蝸牛の基底半分において、多くの感覚毛細胞が４８時間以内に障害を受けた。１００μＭネオマイシンは、Ｆ−アクチン（ファロイジン）を感覚毛細胞マーカーとして使用する培養物の表面組織標本中で検知すると、ほとんどの基底位置にある感覚毛細胞の障害を引き起こした（図６ａ）。これらの結果は、蝸牛の基底部分に位置する感覚毛細胞は尖端に位置するものより抗生物質に対してより敏感であることを示すこれまでのデータに従う。５００ｎＭの式ＩＩの化合物を培養物にネオマイシンと一緒に加えた時には、感覚毛細胞変性が減じられた（図６）。

１００ｍＭネオマイシンに４８時間にわたり露呈された体外移植組織（ｎ＝１２）では、ファロイジンで標識が付けられた同焦点像で示されるように、ひどい毛細胞変性が蝸牛の基底巻き部で起きた（図７ａ）。式（ＩＩ）は蝸牛の基底巻き部で毛細胞障害を予防した（図７ｂ）。基底巻き部でＯＨＣの約９０％がそして中間巻き部でＯＨＣの２５％が障害を受けた（図７ｃ）。５００ｎＭの式ＩＩおよびネオマイシンと共に４８時間にわたりコインキュベーションされた培養物（ｎ＝１２）では、基底巻き部でＯＨＣの約９０％が保護された。

実施例４−蝸牛および前庭毛細胞中でのゲンタマイシン毒性に対する式ＩＩの化合物の保護効果動物、組織、病変発生および試験薬品伝達。

成体ダンキン−ハートレイ雌モルモット（体重３００−４００ｇ）を使用した。それらに水および普通のモルモット飼料を自由に摂取させた。基準ＡＢＲ記録およびゲンタマイシン（ＧＭ）処置の直前に動物に調整期間を１週間与えた。

２つの実験群を形成した。群１のモルモットは対照用でありそしてゲンタマイシンだけで処置した。動物にゲンタマイシンを１２０ｍｇ／ｋｇの体重で、１日１回１４日間にわたり皮下注射した。この群には３匹のモルモット（合計６つの内耳となる）が含まれた。動物を注射の開始から３０日後に断頭した。

群２のモルモットはゲンタマイシンおよび式ＩＩで処置した。動物に１２０ｍｇ／ｋｇの体重のＧＭおよび１ｍｇ／ｋｇの式ＩＩを１日１回１４日間にわたり皮下注射した。式ＩＩの処置はＧＭ注射の１日間に開始した。式ＩＩの処置を２８または２９日間にわたり続けた。４匹のモルモット（８つの内耳）がこの群に含まれた。動物を注射開始から３０日後に断頭した。

動物群１および２の他に、ＧＭだけを受容した２匹のモルモットおよびＧＭと式ＩＩとを受容した２匹のモルモットを１４日目に断頭した。これらの内耳を細胞消滅の傍証用に使用した。多数の細胞消滅性の前庭および蝸牛毛細胞がＧＭで処置した内耳中でのみ見られた（ＴＵＮＥＬ−染色）。

聴覚機能の評価
ＡＢＲをＧＭ注射の１日前（基準値）およびＧＭ注射開始から３０日目に測定した。閾値移動は基準と最終的閾値との間の差を示す。閾値は周波数２、４、８、１６および３２ｋＨｚにおいて１組の応答から種々の強度で閾値近くで５ｄＢ間隔および１０００スイープを用いて測定された。ＡＢＲはシステムＩＩハードウエアおよびビオシグソフトウエアを用いて測定した。ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）を麻酔用に使用した。

体型測定分析用の内耳の処理モルモットを深い麻酔下で断頭しそして内耳をリンパ周囲で固定し、そして０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）中２．５％グルタルアルデヒドで浸し、１％四酸化オスミウムで後固定し、エポンの中に埋め込んだ。蝸牛をシトコクレオグラム用に処理した（Ｙｌｉｋｏｓｋｉ，ＡｃｔａＯｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ（Ｓｔｏｃｋｈ）Ｓｕｐｐｌ３２６：５−２０，１９７５）。別個に切開されそしてエポンに埋め込まれた前庭器官を１μｍ厚さの切片用に切断した。２５番目毎の切片をスライド上で集めそして１％トルイジンブルーで染色した。少なくとも１０個の水平または上方の膨大部の稜の対応する横方向の切片の中で毛細胞を計数することにより前庭器官中の毛細胞障害量を評価した。２つの対照（ＧＭで処置した）および３つの式ＩＩとＧＭとで処置した膨大部を分析用に使用した。感覚上皮の感覚層（上半分）中の細胞核の存在が毛細胞の存在とみなされる。支持細胞核は毛細胞と、上皮中のそれらの位置（下部）および毛細胞を支持細胞より弱く染色するトルイジンブルーにより、明らかに区別された。感覚層中の毛細胞核の数を基底細胞層中の毛細胞核の数と比較することにより毛細胞障害を測定した。

結果
式ＩＩはゲンタマイシンで誘発される聴覚障害を減衰させる。

対照蝸牛（ＧＭだけ、ｎ＝６）と比べて、式ＩＩで処置した蝸牛（ｎ＝８）は試験した全ての周波数においてより少ない閾値移動を示した。試験した全ての周波数において差は統計的に意義あるものであった（Ｐ<０．０１）。平均閾値移動は図８に示されている。

式ＩＩはゲンタマイシン中毒後の前庭末端器官中の毛細胞障害を減衰させる。

対照（ＧＭだけ）の膨大部（ｎ＝２）と比べて、式ＩＩで処置した膨大部（ｎ＝３）は、相対的毛細胞障害の分析（表４）により示されるように、より少ない毛細胞障害を示した。膨大部中の式ＩＩの保護効果は７０％であった。

実施例５−インビトロでの蝸牛ニューロンの死滅に対する式ＩＩの化合物の保護効果。
分離したニューロン培養物。

胚日数２１（Ｅ２１）のラットの蝸牛神経節からのニューロンに富んだ培養物を前記の通りにして製造した（Ｙｌｉｋｏｓｋｉ，Ｈｅａｒ．Ｒｅｓ．，１９９８，１２４：１７−２６）。培養物を１０％の馬血清（ライフ・テクノロジーズ）を含有するＦ１４培地（ライフ・テクノロジーズ、ガイセスブルグ、メリーランド州）の中で維持した。式ＩＩ（５００ｎＭ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３、２ｎｇ／ｍｌ、プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、マジソン、ウィスコンシン州）または神経成長因子（ＮＧＦ、２ｎｇ／ｍｌ、プロメガ）を開始時およびその後１２時間毎に培地に加えた。４８時間後に、培養物を４％パラホルムアルデヒドで固定しそして応答を位相差顕微鏡下で評価した。生存するニューロンは相−鮮明細胞体（ｐｈａｓｅ−ｂｒｉｇｈｔｃｅｌｌｂｏｄｙ）および明確な神経突起により区別された。

結果
式ＩＩはインビトロの蝸牛ニューロンの死滅を減衰させた。ＮＴ−３は周産期ラットの分離した蝸牛ニューロンの生存を促進する最も有効な臓器向性因子であり、そしてＮＧＦは全く効果を有していないかまたはその効果は非常に弱い（Ｙｌｉｋｏｓｋｉｅｔａｌ．，１９９８）。平行培養物中で評価されたように、蝸牛ニューロンの生存促進において式ＩＩはＮＴ−３と同程度有効であった。ＮＧＦは負の対照用であった（図９）。

実施例６
騒音外傷後の式ＩＩの遅延投与
モルモットを１２０ｄＢ、４ｋＨｚ騒音に６時間にわたり露呈した。式ＩＩの化合物を騒音外傷の２時間ないし１日前から、または騒音外傷の１日後に、または騒音外傷の４日後に、始めて投与した。投与は騒音露呈後２週間にわたり続けた。上記のように、蝸牛を処理しそして保護されたおよび障害を受けた内部毛細胞（ＩＨＣ）および異なる列の外部毛細胞（ＯＨＣ１、ＯＨＣ２、ＯＨＣ３）を騒音外傷から２週間後に計数した。

聴覚機能の評価
騒音外傷（基準値）および騒音外傷から２週間後にＡＢＲを測定した。閾値移動は基準と最終的閾値との間の差を示す。閾値は周波数２、４、８、１６および３２ｋＨｚにおいて１組の応答から種々の強度で閾値近くで５ｄＢ間隔および１０００スイープを用いて測定された。ＡＢＲはシステムＩＩハードウエアおよびビオシグソフトウエアを用いて測定した。ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）を麻酔用に使用した。

結果
式ＩＩで処置した動物は試験した全ての周波数において賦形剤で処置された騒音に露呈された対照より少ない閾値移動を示した。対照動物の平均閾値移動は病変前に始めた式ＩＩで処置した動物のものより２０−４０ｄＢほど大きい。これらのデータは図１０にそしてまた、別個に図４ｃとして、表示されている。ＣＥＰ−１３４７の投与を騒音への露呈から１日または４日後に始める場合にも減少した閾値移動が見られる。これらのデータは図１０に表示されている。

対照蝸牛と比べて、式ＩＩで処置した蝸牛は騒音への露呈後の毛細胞のより少ない障害を示した。毛細胞障害に対する式ＩＩの遅延投与の効果は図１１に示され、上部および下部のグラフは別個に図５として表示されている。毛細胞障害において１日遅延群（ｎ＝６）と騒音処置対照群（ｎ＝１３）との間に統計的な差が存在した、Ｐ<０．０１。４日遅延群（ｎ＝１１）と騒音処置対照群（ｎ＝１３）との間に統計的な差が存在した、Ｐ<０．０５。結果は表５に示される。

対照蝸牛と比べて、式ＩＩで処置した蝸牛は試験した全ての周波数において対照より少ない閾値移動を示した。平均閾値移動は図１０に示される。対照からの最も意義ある差は騒音外傷前に式ＩＩが投与された動物群により示された。式ＩＩの１日および４日遅延投与の両方とも対照群より少ない閾値移動を示した。対照蝸牛と比べて、式ＩＩで処置した蝸牛はより少ない毛細胞障害を示した。毛細胞障害に対する式ＩＩの遅延投与の効果は図１１に示される。

実施例７
蝸牛培養物中の毛細胞死滅および免疫組織化学の評価
培地に対する１００μＭのネオマイシン添加から６、１２および２４時間後に、蝸牛培養物をＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで３０分間にわたり固定した。検体を５μｍ厚さのパラフィン切片用に製造した。それらをＴＵＮＥＬ−キットで染色し、ＤＡＰＩ核対比染色を含有するベクタシールド（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ）、バーリンガム、カリフォルニア州）の中に設置し、そしてエピフルオレッセンスを用いるオリンパス・プロビス顕微鏡（東京、日本）下で観察した。ＴＵＮＥＬ−染色の他に、ＤＮＡ断片化を紫外線照射下でＤＡＰＩ対比染色を用いて証明した。

隣接切片をポリクローン性のホスホ−ｃ−Ｊｕｎ抗体（Ｓｅｒ７３、１：５００、ニュー・イングランド・バイオラブス（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）、ベベリー、マサチュセッツ州）およびポリクローン性のホスホ−ＪＮＫ抗体（Ｔｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５，１：２５０希釈度、ニュー・イングランド・バイオラブス）で免疫染色した。ホスホ−ＪＮＫ抗体はＪＮＫ１、２および３の二重ホスホリル化されたイソ形態を検出する。ホスホ−特異的抗体の特異性はウェスタンブロッティングによりソルビトールで処置したＰＣ１２細胞を用いて証明された。ソルビトールで処置したＰＣ１２細胞ではホスホ−ＪＮＫ抗体はホスホリル化したｐ５４／ｐ４６ＪＮＫを認識しそしてホスホ−ｃ−Ｊｕｎ抗体はホスホリル化したｐ４６ｃ−Ｊｕｎを認識したが、未処置のＰＣ１２細胞ではしなかった。免疫組織化学検出用に、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ方法（エライトＡＢＣキット（ＥｌｉｔｅＡＢＣＫｉｔ）、ベクター）およびジアミノベンジジンを使用した。染色をチラミド信号増幅（ＴＳＡ−インディレクトキット（ＴＳＡ−ＩｎｄｉｒｅｃｔＫｉｔ）、ケン・ライフ・サイエンス・プロダクツ（ＫＥＮＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＰｒｏｄｕｃｔｓ）、ボストン、マサチュセッツ州）を用いてＢｒａｄｙｅｔａｌ．（１９９９），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１９：２１３１−２１４２）に従い増幅させた。対比染色はホスホ−特異的抗体と一緒に使用されなかった。さらに、ポリクローン性カルビンジン抗体（１：１００００希釈度、スワント（Ｓｗａｎｔ）、スイス）が毛細胞用のマーカーとして使用された。カルビンジン免疫反応はＡＢＣ方法およびジアミノベンジジンを用いてチラミド信号増幅なしに検出され、そして切片を１％トルイジンブルーで軽く対比染色した。分析はオリンパス・プロビス顕微鏡および明視野光学素子下で行われた。

結果
式ＩＩはストレスを受けた毛細胞中のＪＮＫ活性化の妨害において有効である新生期ラットの毛細胞死滅および臓器向性の蝸牛体外移植組織中のＪＮＫ信号カスケードの包含を試験した。正常な（未処置の）体外移植組織のパラフィン切片では、コルティ器官の正常な細胞構造である１列のＩＨＣおよび３列のＯＨＣは毛細胞を標識付けするカルビンジン−抗体を用いて見ることができた（図１２ａ）。断片化したＤＮＡを標識付けするＴＵＮＥＬ−方法により染色されたパラフィン切片中で細胞死滅を試験した。さらに、ＴＵＮＥＬ−陽性細胞が見られた時には、ＤＡＰＩ対比染色を用いることによりＤＮＡ断片化が証明された。ＴＵＮＥＬで標識付けされた毛細胞は正常な体外移植組織（ｎ＝５）の中で見られなかった。対照的に、１００μＭネオマイシンに６、１２、２４および４８時間にわたり露呈された体外移植組織（ｎ＝１５）では、ＴＵＮＥＬ−陽性毛細胞が見られ、それらのほとんどを最初の２回の時点で試験した（図１２ｂ、ｃ）。標識付けされた毛細胞の多数は基底蝸牛巻き部に位置し、そこでは毛細胞は耳毒性抗体に対して最も敏感である。ＴＵＮＥＬ−陽性毛細胞核が上皮内で見られ（図１２ｂ、ｃ）、そして、さらに、培養物中の上皮から押し出された毛細胞は核断片化を示した。

１００μＭネオマイシンに６および１２時間にわたり露呈された蝸牛体外移植組織（ｎ＝１０）では、ホスホ−ＪＮＫ（図１２ｄ）およびホスホ−ｃ−Ｊｕｎ（図１２ｅ）免疫反応性毛細胞は、基底および上の方の中間蝸牛巻き部で、病変発生した領域で見られた。毛細胞の核だけがこれらのホスホ−特異的抗体により染色された。尖端の病変発生しなかった領域中に位置する毛細胞はホスホ−ＪＮＫまたはホスホ−ｃ−Ｊｕｎ免疫標識付けを示さず、ＪＮＫ経路が毛細胞ストレス応答に含まれることを示唆する。式ＩＩはＪＮＫの活性化を妨害することによりニューロンの細胞消滅を減衰することを示した（Ｍａｒｏｎｅｙｅｔａｌ．，１９９８）。蝸牛体外移植組織（ｎ＝５）を５００ｎＭの式ＩＩおよびネオマイシンと共にコインキュベーションした時には、ＴＵＮＥＬ−標識付け並びにＪＮＫおよびｃ−Ｊｕｎホスホリル化の誘発の両者（図１２ｂ、ｃ）を毛細胞中で保護した。これらのデータは式ＩＩがストレスを受けた毛細胞中のＪＮＫ活性化の妨害において有効であることを示す。

実施例８−６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンの製造
段階Ａ：２−（２−（２−ヒドロキシ）インンダニル）インドールの製造
ｎ−ＢｕＬｉ（１０７．５ミリモル、４３ｍＬのヘキサン類中２．５Ｍ溶液）をインドールの乾燥ＴＨＦ（４００ｍＬ）中溶液（１２．０ｇ、１０２．４ミリモル）に−７８℃で滴下した（１５分間）。（窒素雰囲気）。溶液を３０分間にわたり撹拌し、次にＣＯ_２（気体）を溶液の中に１０分間にわたり通した。透明溶液を自然に周囲温度に暖め、次にそれを減圧下で元の容量の半分に濃縮した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）を加えそして溶液は−７８℃に再冷却した。この時点で、ｔ−ＢｕＬｉ（１０２ミリモル、６０ｍＬのヘキサン類中１．７Ｍ溶液）を滴下した（４５分間）。生じた黄色溶液を−７８℃で２時間にわたりそのまま撹拌した。次に、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の２−インダノン（１５．０ｇ、１１２．６ミリモル）を滴下し（３０分間）そして混合物を１時間にわたり撹拌した。水（５ｍＬ）の添加により反応を停止させ、生じた混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（２５０ｍＬ）中に注ぎそして次にエーテル（１×ｍＬ）で抽出した。エーテル層を１００ｍＬの飽和ＮＨ_４Ｃｌで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、そして減圧下で濃縮して油状生成物を与えた。生成物（Ｖ）をＥｔ_２Ｏ−ヘキサンから再結晶化させて１０．５ｇの２４４°−２４５℃の融点を有する黄褐色粉末を与えた。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ２．４（ｂｓ，１Ｈ）、３．３（ｄ，２Ｈ）、３．６（ｄ，２Ｈ）、６．４（ｓ，１Ｈ）、７．１−７．４（ｍ，７Ｈ）、７．６（ｄ，１Ｈ）、８．６（ｂｓ，１Ｈ）。分析計算値、Ｃ_１７Ｈ_１５ＮＯ；Ｃ、８１．９０、Ｈ、６．０６、Ｎ、５．６２。実測値、Ｃ、８２．１６、Ｈ、６．０３、Ｎ、５．５８。

母液を濃縮して油状生成物を生成した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン１：２）がさらに２．１ｇの生成物を生成し、１２．６ｇ（４９％）の合計収率となった。

段階Ｂ：２−（２−インデニル）インドールの製造
２−（２−（２−ヒドロキシ）インダニル）インドール（４．０ｇ、１６．１ミリモル）のアセトン（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液に２ＮＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。混合物を周囲温度において１時間にわたり撹拌した。約２０ｍＬの水を加えそして沈澱を濾過により集めた。濾液を水で良く洗浄しそして乾燥して３．６ｇ（９８％）の２７３°−２７４℃の融点を有する白色固体生成物を与えた（ＭｅＯＨ）。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ３．９（ｓ，２Ｈ）、６．７（ｓ，２Ｈ）、７．０−７．６（ｍ，９Ｈ）、８．３（ｂｓ，１Ｈ）。分析計算値、Ｃ_１７Ｈ_１３Ｎ、Ｃ、８８．２８、Ｈ、５．６７、Ｎ、６．０６。実測値、Ｃ、８８．１１、Ｈ、５．６０、Ｎ、５．９８。

段階Ｃ：４ｃ，７ａ，７ｂ，１２ａ−テトラヒドロ−６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−（５Ｈ，７Ｈ）ジオンの製造
２−（２−インデニル）インドール（１．０ｇ、４．３ミリモル）およびマレイミド（５２５ｍｇ、５．４１ミリモル）の混合物を１０ｃｍ密封反応瓶の中で１８０°−１９０℃に３０分間にわたり加熱した。反応を周囲温度に冷却した後に、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を加えた。生成物を集めて８８０ｍｇ（６２％）の２５４°−２５５℃の融点を有する白色固体生成物を与えた（ＭｅＯＨ）。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ３．１−３．４（ｍ，２Ｈ）、３．８（ｍ，２Ｈ）、３．９５（ｔ，１Ｈ）、４．３５（ｄ，１Ｈ）、６．９−７．４（ｍ，７Ｈ）、７．７５（ｄ，１Ｈ）、１１．０５（ｓ，１Ｈ）、１１．２５（ｓ，１Ｈ）。

段階Ｄ：６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（５Ｈ，７Ｈ）ジオンの製造
４ｃ，７ａ，７ｂ，１２ａ−テトラヒドロ−６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−（５Ｈ，７Ｈ）ジオン（８００ｍｇ、２．４４ミリモル）をトルエン（６０ｍＬ）中に溶解させた。固体の２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（１．４ｇ、６．１ミリモル）をトルエン溶液に１回で加えた。溶液を６０°−６５℃に６時間にわたり保った。氷浴上で冷却した後に、固体生成物を濾過により集め、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）の中に再懸濁させそして濾過により集めた。生成物をアセトン−ＭｅＯＨから再結晶化させて７１０ｍｇ（９０％）の３３０℃より高い融点を有する黄色固体生成物を与えた。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ４．３（ｓ，２Ｈ）、７．３５（ｔ，１Ｈ）、７．４５−７．６５（ｍ，４Ｈ）、７．７５（ｄ，１Ｈ）、８．９５（ｄ，１Ｈ）、９．１（ｄ，１Ｈ）、１１．１５（ｓ，１Ｈ）、１２．３（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｅ３２５（ｍ＋１）^＋。Ｃ_２１Ｈ_１２Ｎ_２Ｏ_２．０．７５Ｈ_２Ｏに関する分析計算値、Ｃ、７４．６５、Ｈ、４．０３、Ｎ、８．２９。実測値、Ｃ、７４．４０、Ｈ、３．７５、Ｎ、８．２６。

実施例９−１３−（２−ヒドロキシエチル）：５Ｈ；６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンの製造
段階Ａ：５Ｈ，６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンの製造
Ｚｎ粉末（５ｇ）および塩化水銀（１ｇ）の撹拌された懸濁液を１０ｍＬの水中で製造した。濃塩酸（２ｍＬ）を滴下した。１０分後に、水層を傾斜させそして除去した。得られた亜鉛アマルガムを最初に水で、次にＥｔＯＨで繰り返し洗浄した。亜鉛アマルガムをＥｔＯＨ（７５ｍＬ）中に懸濁させた。次に、固体の６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（５００ｍｇ、１．５ミリモル）を１回に加えた。混合物を還流下で２時間わたり保ちながらＨＣｌ（気体）を通した。周囲温度に冷却した後に、溶液を減圧下で濃縮して油状残渣を生成した。ＴＨＦ−ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ、１：１）を油状生成物に加えそして混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３×１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ溶液（３×１００ｍＬ）で抽出し、そして生じた溶液を乾燥した（ＭｇＳＯ_４）。乾燥剤を除去し、そして溶媒を減圧下で濃縮して粗製固体を与えた。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、９５：５、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨ）による精製で２４０ｍｇ（５０％）の５Ｈ，６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンおよび６Ｈ，７Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５（５Ｈ）オンの１：４混合物を生成した。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ４．１５（ｓ，１．６Ｈ）、４．２５（ｓ，０．４Ｈ）、４．９（ｓ，０．４Ｈ）、４．９５（ｓ，１．６Ｈ）、７．２−７．８（ｍ，６Ｈ）、８．０（ｄ，１Ｈ）、８．６（ｓ，０．８Ｈ）、８．８（ｓ，０．２Ｈ）、９．２（ｄ，０．２Ｈ）、９．４（ｄ，０．８Ｈ）、１１．８（ｓ，０．２Ｈ）、１１．９５（ｓ，０．８Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｅ３１１（ｍ＋１）^＋。

段階Ｂ：１３−（２−ヒドロキシエチル）：５Ｈ；６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンの製造
５Ｈ，６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オン（２００ｍｇ、０．６５ミリモル）をＮａＨ（２５ｍｇの６０％油分散液、０．６５ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に窒素雰囲気下で加えた。濃色混合物を周囲温度で１時間にわたり撹拌した。ブロモ酢酸エチル（１２０ｍｇ、０．０８ｍＬ、０．７２）を滴下しそして混合物を１２時間にわたり撹拌した。生じた黄色溶液を減圧下で濃縮して粗製黄色固体を与えた。生成物を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解させそして水素化アルミニウムリチウム（１ｍＬのエーテル中１Ｍ溶液）を滴下した。溶液を室温で６時間にわたり撹拌し、次にＨ_２Ｏ（１ｍＬ）の添加により反応を停止させた。混合物を濾過しそして減圧下で濃縮した。ＴＨＦを残渣に加えそして生成物を集めて３０ｍｇ（１７％）の１３−（２−ヒドロキシエチル）：５Ｈ；６Ｈ，１２Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンを白色固体状で与えた。融点は３００℃より高かった。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ３．８−３．９（ｂ，２Ｈ）、４．５５（ｓ，２Ｈ）、４．７７（ｔ，２Ｈ）、４．９（ｓ，２Ｈ）、５．０（１Ｈ，Ｄ_２Ｏ交換）、７．３−７．４５（ｍ，３Ｈ）、７．５−７．５７（ｔ，１Ｈ）、７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、７．５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、８．０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、８．５７（ｓ，１Ｈ）、９．５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｅ３５５（ｍ＋１）^＋。

実施例１０−６Ｈ，１２−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（５Ｈ，７Ｈ）ジオンの製造
２−（２−ベンゾ［ｂ］チエニル）インドール、マレイミド（１２０ｍｇ、１．２ミリモル）およびトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）の乾燥トルエン（７５ｍＬ）中溶液を還流下で１２時間にわたり撹拌した。溶液を周囲温度に冷却しそして減圧下で濃縮して粗製固体を生成した。固体を氷ＨＯＡｃ（４０ｍＬ）中に溶解させ、５％Ｐｄ（ＯＡｃ）_２を加えそして混合物を還流下に１２時間にわたり保った。溶液を周囲温度に冷却し、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）（商標）を通して濾過し、次に減圧下で濃縮した。ＭｅＯＨを残渣に加えそして生成物を集めた（８０ｍｇ、２３％）。生成物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン２：１Ｒｆ＝０．５）により精製して６Ｈ，１２−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（５Ｈ，７Ｈ）ジオンを与えた。融点は３００℃より高かった。下記のＮＭＲデータが得られた：^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ７．４（ｔ，１Ｈ）、７．５５−７．７５（ｍ，４Ｈ）、８．２５（ｍ，１Ｈ）、９．０５（ｄ，１Ｈ）、９．８（ｍ，１Ｈ）、１１．４（ｓ，１Ｈ）、１２．８（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｅ３４３（ｍ＋１）^＋。Ｃ_２０Ｈ_１０Ｎ_２ＯＳ．０．５Ｈ_２Ｏに関する分析計算値、Ｃ、６７．４９、Ｈ、３．２６、Ｎ、７．８７。実測値、Ｃ、６７．５０、Ｈ、３．０７、Ｎ、７．５１。

実施例１１−下記の縮合ピロロカルバゾールの製造

２の製造：
１ｍＬのトルエン中のジエン１（５０ｍｇ、０．１８２ミリモル）、７．５ｍｇ（．０１８ミリモル）の臭化イッテルビウムおよび６８ｍｇ（３当量）のシアノアクリル酸エチルを還流下で３．５時間にわたり加熱した。混合物を室温に放冷した時に生成物が沈澱した。固体を濾過し、トルエンで洗浄して４８ｍｇ（理論値の６６％）の生成物２を灰白色固体状で与えた。それはｈｐｌｃによると均質であることが示された。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１１．２（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｂｑ，１Ｈ）、７．３５（ｄ，１Ｈ）、７．２（ｂｑ，１Ｈ）、７．１（ｔ，１Ｈ）、７．０５（ｔ，１Ｈ）、６．７（ｂｑ，１Ｈ）、６．５５（ｓ，１Ｈ）、３．７（ｓ，３Ｈ）など。

３の製造：
１．５Ｌのトルエン中に懸濁させた６０ｇ（０．１５０モル）のジエルス・アルダー付加物２に７１．４ｇ（０．３１５モル、５％過剰）のＤＤＱを室温で激しく撹拌しながら加えた。反応混合物の温度は１時間にわたり徐々に３３℃に上昇し、その後室温に戻った。固体をフィルター上で集め、トルエンで充分洗浄しそして空気乾燥した。それを次に２Ｌの水中に激しく撹拌しながら分散させ、そして８０ｇ（理論値の５２．８％）の炭酸水素ナトリウムを滴下した。２〜３時間にわたり撹拌した後に、混合物を濾過しそして洗浄液が中性になるまで固体を水で充分洗浄した。粗製生成物３の重量は６１．５ｇであった（ｈｐｌｃによる９６％純度）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１２．１（ｓ，１Ｈ）、８．４５（ｄ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．２５−７．４（ｍ，２Ｈ）、７．０（ｓ，１Ｈ）、６．９（ｓ，１Ｈ）、４．３５（ｑ，２Ｈ）、３．８（ｓ，３Ｈ）、３．１５（ｍ，２Ｈ）、２．９（ｍ，２Ｈ）、１．２５（ｔ，３Ｈ）。粗製生成物はさらなる精製なしに次の段階用に使用された。

４の製造：
５０ｇ（０．１２６モル）のシアノエステル３、１２０ｇ（０．５６モル、４．４３当量）の２−ブロモエチルベンジルエーテルおよび２５０ｍＬの１０Ｎ水酸化ナトリウムの混合物を１４５０ｍＬのアセトン中で還流下で一晩加熱した。アセトンの大部分が減圧下で除去され、５００ｍＬの水および１２５０水のヘキサンを加えそして混合物を０．５時間にわたり激しく撹拌した。生じた固体を濾過し、洗浄液が中性となるまで水で充分洗浄した。固体を真空下で乾燥し、次にヘキサンで洗浄して６０ｇの生成物４（理論値の８９．５％、ｈｐｌｃによる９５％純度）を与えた。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ８．５５（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、７．１５（ｔ，１Ｈ）、７．４（ｔ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ）、７．１５（ｍ，３Ｈ）、７．０（ｓ，１Ｈ）、６．９（ｍ，３Ｈ）、４．９（ｂｓ，２Ｈ）、４．３０（ｍ，４Ｈ）、３．８（ｍ，５Ｈ）、３．４５（ｔ，２Ｈ）、２．７５（ｔ，２Ｈ）、１．２（ｔ，３Ｈ）。

５の製造：
５９．８ｇ（０．１１３モル）の４の１００ｍＬのメタノールを含有する１ＬのＤＭＦ中溶液を１００ｇのラネーニッケル上で５５ｐｓｉにおいてパル装置上で水素化した。触媒を濾過により除去しそして濾液を減圧下で濃縮しそして生じた半固体を１．８Ｌのエーテルと共に一晩にわたり粉砕して５３．６ｇのラクタム（理論値の６３％）を与え、ｈｐｌｃによるとそれは４％のさらに還元された生成物（脱ベンジル化された、５１０４）、９２％の所望する生成物５および４％の不純物を含有することが示された。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ８．４５（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、７．７（ｄ，１Ｈ）、７．５０（ｔ，１Ｈ）、７．３（ｔ，１Ｈ）、７．１５（ｂｑ，３Ｈ）、７．０５（ｂｑ，２Ｈ）、６．８５（ｓ，１Ｈ）、６．８０（ｄ，１Ｈ）など。粗製物質はさらなる精製なしにその後の反応用に使用された。

標記化合物の製造

４３．６ｇ（８９．２ミリモル）のラクタムの５滴の１２Ｍ塩酸を含有する１ＬのＤＭＦ中溶液を２．２ｇの水酸化パラジウム上で５０ｐｓｉにおいて水素化した。触媒をセライトの床を通す濾過により除去し、そして濾液を減圧下で濃縮しそして生じた半分固体を２Ｌのエーテルと共に一晩にわたり粉砕してＣＥＰ−５１０４を薄黄色がかった固体状で与えた、３６ｇ（理論値の１００％、ｈｐｌｃによる９７％純度。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ８．４（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、７．７（ｄ，１Ｈ）、７．５０（ｔ，１Ｈ）、７．３（ｔ，１Ｈ）、６．９（ｓ，１Ｈ）、６．８（ｄ，１Ｈ）、５．０（ｂｓ，１Ｈ）、４．８（ｓ，２Ｈ）、４．６５（ｂｔ，２Ｈ）、３．８（ｂｓ，５Ｈ）、３．３（ｂｔ，２Ｈ）、２．７５（ｂｔ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ３９９（Ｍ＋１）。

実施例１２−下記の縮合ピロロカルバゾール類がここに記載された方法を用いて製造された。

実施例１２Ａ

実施例１２Ｂ

実施例１２Ｃ

実施例１２Ｄ

実施例１３−１３−（３−ヒドロキシプロピル）−３−（ピリジル−２−チオメチル）−６Ｈ，１２Ｈ−インデノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−７（７Ｈ）オンの製造

２の製造：
１（８．０ｇ、０．２５８モル）のアセトニトリル（３００ｍＬ）中懸濁液に室温において窒素下でアクリル酸エチル（４．１９ｍＬ、０．３８７モル）を、引き続き１，８−ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（ＤＢＵ）（１．９３ｍＬ、０．０１３モル）を加えた。ＤＢＵの添加後に、反応が色を橙色から緑色に変えた。反応混合物を一晩にわたり加熱還流した。混合物は反応工程中は不均質のままでありそして色が濃くなった。小さい部分試料を１８時間後に除去しそして固体を濾過により集めた。サンプルの１ＨＮＭＲは出発物質が残っていないことを示した。反応混合物を室温に冷却しそして固体を濾過により集めた。固体を冷たいアセトニトリルで数回洗浄しそして真空中で５５℃において乾燥させて薄橙色固体を生成した（５．４ｇ、７８％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ９．７２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８）、２．８７（ｍ，２Ｈ）、３．８９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝６．８）、４．４９（ｓ，２Ｈ）、４．８８（ｓ，２Ｈ）、４．９２（ｍ，２Ｈ）、７．２９−７．４８（ｍ，３Ｈ）、７．５０−７．７３（ｍ，３Ｈ）、７．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３３）、８．５６（ｓ，１Ｈ）、９．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３３）。

３の製造：
２（５．６２ｇ、０．０１３７モル）のベンゼン（３００ｍＬ）およびＮ−メチルピロリジン（ＮＭＰ）（６０ｍＬ）中懸濁液に室温において窒素下でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２．４８ｇ、０．０１３モル）および４，４’−ジメトキシベンズヒドロール（３．１９ｇ、０．０１３モル）を加えた。フラスコの内容物を８時間にわたり加熱還流した。４５分後に、最初は不均質であった反応混合物が均質になった。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈しそして飽和炭酸水素塩溶液、水、および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮して橙色固体とした（８．３１ｇ、９５％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、３００ＭＨｚ）：ｄ１．１８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１）、２．８４（ｍ，２Ｈ）、３．８０（６Ｈ，ｓ）、４．１２（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．１）、４．３８（ｓ，２Ｈ）、４．７２（２Ｈ，ｓ）、４．９４（ｍ，２Ｈ）、６．９０（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．５）、６．９５５（ｓ，１Ｈ）、７．２６（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．５）、７．３４−７．４９（ｍ，５Ｈ）、７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４）、７．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７）、９．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８）。

４の製造：
３（７．８ｇ、０．０１２２モル）のＴＨＦ（４８０ｍＬ）およびメタノール（９３ｍＬ）中の撹拌された懸濁液に水素化ホウ素リチウム（１８．９ｍＬの２．０Ｍ溶液、０．０３７９モル）を滴下した。反応混合物は最初は均質であったが、反応が進行するにつれて、混合物は不均質になった。出発物質の全てが消費された時に、反応混合物を氷浴中で冷却しそして２ＮＨＣｌ（６０ｍＬ）を用いて注意深く停止させた。反応混合物は均質にそして薄橙色になった。水（７５０ｍＬ）を混合物に加えそして乳状の白色沈澱が生成した。沈澱を濾過により集めそして真空中で乾燥して綿状の白色固体を与えた（７．２ｇ、９９％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１．９３（ｍ，２Ｈ）、３．６６（ｍ，２Ｈ）、３．７１（ｓ，６Ｈ）、４．５５（ｓ，２Ｈ）、４．７３（ｍ，２Ｈ）、４．７９（ｓ，２Ｈ）、６．７０（ｓ，１Ｈ）、６．９３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．４４）、７．２２（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．４）、７．２６（ｍ，１Ｈ）、７．３４−７．４６（ｍ，２Ｈ）、７．４９（ｍ，１Ｈ）、７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０１）、７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２６）、７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８２）、９．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４９）。

５の製造：
４（２．０２ｇ、０．００３４モル）のＴＨＦ（１３１ｍＬ）中懸濁液に室温において窒素下でＮ−ブロモスクシンイミド（０．６３ｇ、０．００３６モル）を１回で加えた。反応混合物を室温において一晩にわたり撹拌した。反応溶媒を真空中で除去すると、薄黄色固体が残った。固体を冷たいメタノールと共に粉砕しそして濾過により集めた。固体を真空中で乾燥して薄黄色固体を与えた（１．９８ｇ、８７％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１．９１（ｍ，２Ｈ）、３．４４（ｍ，２Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、４．５３（ｓ，２Ｈ）、４．７４（ｍ，２Ｈ）、４．８７（ｓ，２Ｈ）、６．７１（ｓ，１Ｈ）、６．９３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．１４）、７．２５（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．１）、７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．５９−７．６９（ｍ，３Ｈ）、８．０８（ｓ，１Ｈ）、９．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０１）。

６の製造：
シュレンク管の中にメトキシエタノール（２５ｍＬ）中の５（０．７９ｇ、０．００１７モル）を、引き続き酢酸ナトリウム（０．５７ｇ、０．００７０２モル）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（ＩＩ）（０．０８２ｇ、０．０００１１７モル）を入れた。管を真空にしそして一酸化炭素を充填した。反応混合物を密封管中で１５５℃において油浴中で３時間にわたり加熱した。反応を室温に冷却しそして追加の一酸化炭素を加えた。混合物をさらに３時間にわたり１５０℃に再加熱した。追加のＣＯおよびＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２を加えそして混合物を４時間にわたり加熱した。反応混合物を塩化メチレンで希釈しそしてセライトのパッド中に流し出した。濾液を真空中で濃縮して残渣を与え、それを酢酸エチル中に溶解させそして水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして真空中で濃縮して固体とし、それをエチルエーテルと共に粉砕しそして濾過により集めて薄橙色固体を生成した（０．７ｇ、８５％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、３００ＭＨｚ）：ｄ２．１４（ｍ，２Ｈ）、３．４４（ｓ，３Ｈ）、３．６７−３．７８（ｍ，４Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、４．４４（ｓ，２Ｈ）、４．５１（ｍ，２Ｈ）、４．８１（ｍ，４Ｈ）、６．９１（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．５３）、６．９８（ｓ，１Ｈ）、７．２８（ｄ，４Ｈ，８．６）、７．３４−７．６１（ｍ，４Ｈ）、８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３２）、８．４２（ｓ，１Ｈ）、９．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６１）。

７の製造：
６（０．９６ｇ、０．００１３８モル）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）中溶液に０℃において窒素下でチオアニソール（３．２ｍＬ、０．１１０モル）を、引き続きトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（８．５ｍＬ、０．０２７６モル）を加えた。ＴＦＡの添加で、反応混合物は色が赤色に変わった。混合物を０℃で１時間にわたり撹拌しそして一晩にわたり室温に暖めた。反応溶媒を真空中で除去すると、濃赤色の油が残った。エチルエーテルを油に加えると、反応混合物は色が黄色に変わりそして溶液から黄褐色固体が沈澱した。固体を濾過により集めた（０．６ｇ、９２％収率）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ２．２９（ｍ，２Ｈ）、３．３（ｍ，２Ｈ）、３．７３（ｍ，２Ｈ）、４．４５（ｍ，２Ｈ）、４．５４（ｍ，３Ｈ）、４．８２（ｍ，２Ｈ）、４．９９（ｓ，２Ｈ）、７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、８．１３（ｄ，１Ｈ）、８．５２（ｓ，１Ｈ）、８．６（ｓ，１Ｈ）、９．４９（ｄ，１Ｈ）。

８の製造：
７（４．４ｇ、０．００９３５モル）のＣＨＣｌ_２（２２０ｍＬ）中の撹拌された懸濁液に０℃において窒素下でＤＩＢＡＬ−Ｈをゆっくり滴下した。反応は徐々に均質になった。橙色の反応混合物を０℃において１時間にわたり撹拌し、次に室温に暖めそして６時間にわたり撹拌した。混合物を氷浴中で０℃に冷却しそして水（５０ｍＬ）を外部から最初はゆっくり加えた。気体の激しい発生が観察された。ＮａＯＨの水溶液（１Ｍ、３００ｍＬ）を加えそして反応混合物を室温において１時間にわたり撹拌した。沈澱が生成しそして濾過により集めて黄褐色固体を与えた（３．６ｇ、９６％）。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１．９２（ｍ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，２Ｈ）、４．５０（ｓ，２Ｈ）、４．６５（ｓ，２Ｈ）、４．７１（ｍ，２Ｈ）、４．８８（ｓ，２Ｈ）、７．３２−７．３９（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３４）、７．６５（ｍ，２Ｈ）、７．８９（ｓ，１Ｈ）、８．５３（ｓ，１Ｈ）、９．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４４）。

９の製造：
８（１０５．６ｍｇ、０．２６５ミリモル）のジオキサン（３ｍＬ）中懸濁液に２−メルカプトピリジン（７３．７ｍｇ、０．６６３ミリモル）および樟脳スルホン酸（１８４．７ｍｇ、０．７９５ミリモル）を加えた。懸濁液を密封管の中で８０℃に５時間にわたり加熱し、その間に反応混合物は均質溶液になった。反応混合物を一晩にわたり室温冷却した。薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）が出発物質が存在することを示したので、混合物をさらに６時間にわたり８０℃に加熱した。室温に冷却した後に、反応混合物をエチルエーテルと共に粉砕した。固体が溶液から沈澱しそして濾過により集めた。固体を酢酸エチルの中に懸濁させそして飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄して樟脳スルホン酸を除去した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮して薄橙色固体とした。固体をエチルエーテルと共に粉砕しそして濾過により集めて純粋な生成物を生成した（６７ｍｇ、５１％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｅ５１４（Ｍ＋Ｎａ）^＋、^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：ｄ１．０１４（ｍ，２Ｈ）、３．４５（ｍ，２Ｈ）、４．５１（ｓ，２Ｈ）、４．６０（ｓ，２Ｈ）、４．７２（ｍ，３Ｈ）、４．８５（ｓ，２Ｈ）、７．１１（ｍ，１Ｈ）、７．３０−７．４１（ｍ，３Ｈ）、７．５４−７．６７（ｍ，４Ｈ）、８．０２（ｓ，１Ｈ）、８．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３９）、８．５５（ｓ，１Ｈ）、９．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３６）。

実施例１４−下記の縮合ピロロカルバゾール類がここに記載された方法を用いて製造された。

実施例１４Ａ

実施例１４Ｂ

実施例１５−新生期ラット蝸牛体外移植組織でのネオマイシンに対する種々の式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物の保護効果
式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物はインビトロでネオマイシンで誘発される蝸牛感覚毛細胞障害を減衰させた。ネオマイシンで誘発される毛細胞変性に対する式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物の効果を新生期コルティ器官の臓器向性培養物中で測定した。

蝸牛培養物
基底および中間巻き部を含有する蝸牛の基底の半分を生後２日のウィスターラットから切開した。培養物を１５％の胎牛血清（ライフ・テクノロジー、ガイセスブルグ、メリーランド州）を含有するＦ１２培地（ライフ・テクノロジー）中で金属グリッド上に置かれたヌクレオポルフィルター（孔寸法０．１ｍｍ、プレサントン、カリフォルニア州）上に維持した。２時間の長さの安定化期間後に、体外移植組織を１００μＭ硫酸ネオマイシン（シグマ、セントルイス、ミズーリ州）に４８時間にわたり露呈した。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物を５００ｎＭで培養の開始時およびその後１２時間毎に加えた。ネオマイシンおよび賦形剤を対照として使用した。

蝸牛培養物中の毛細胞計数
体外移植組織を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中４％パラホルムアルデヒド／０．５パラグルタルアルデヒドを用いて３０分間にわたり固定させ、そして表面組織標本用に切開した。それらを０．２５％のトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００を含有するＰＢＳ中のローダミン−ファロイジンの１：１００希釈物を用いて染色しそしてベクタシールド（ベクター）の中に設置した。外部毛細胞（ＯＨＣ）数をバイオ−ラドＭＲＣ−１０２４同焦点レーザー走査システム（リッチモンド、カリフォルニア州）に連結されたツァイス・アキソバート（ＺｅｉｓｓＡｘｉｏｖｅｒｔ）１００／１３５エピフルオレッセント顕微鏡を用いて定量化した。不動毛および小皮板が観察されなかった場合に、毛細胞が障害を受けていると同定された。４０倍の対物レンズおよび接眼グリッドを用いてＯＨＣの数を評価した。各々の体外移植組織からの３列（これらの全てが存在する時に）の各々で３０個のＯＨＣにより充填された数個の聴野を試験した。基底および中間の巻き部を別個に分析した。

結果
培養物を１００μＭネオマイシンで処置した時に、多くの感覚毛細胞が４８時間以内に障害を受けた。１００μＭネオマイシンは、Ｆ−アクチン（ファロイジン）を感覚毛細胞マーカーとして使用する培養物の表面組織標本中で検知されるように、ほとんどの基底位置にある感覚毛細胞の障害を引き起こした。５００ｎＭの式Ｉの化合物を培養物にネオマイシンと一緒に加えた時には、異なる水準の感覚毛細胞保護が得られた。表６は式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物を用いるコインキュベーションによる感覚毛細胞変性の障害に対する保護を示す。「＊＊」印がついたデータ点は人為結果を示すと思われる結果を示す。

この書類に引用されているかまたは記載されている各々の特許、特許出願および刊行物の開示はここに引用することによりそれら全体が本発明の内容となる。

ここに記載されているものの他の本発明の種々の変更は以上の記述から当業者に明らかになるであろう。そのような変更も添付されている請求項の範囲内に入ることが意図される。

Claims

難聴を引き起こす薬剤又は事象に曝されている又は曝される患者における難聴を軽減し又は最小限に抑えるための、式ＩＩの化合物を有する薬学的組成物。
請求項１記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露前に、及び難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露後少なくとも１４日間に使用されるものである、組成物。
請求項１記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露後に使用されるものである、組成物。
請求項３記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露４日後までに使用されるものである、組成物。
請求項４記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露１日後までに使用されるものである、組成物。
請求項１記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露後少なくとも１４日間使用されるものである、組成物。
請求項２記載の組成物において、この組成物は、難聴を引き起こす薬剤又は事象への暴露中に使用されるものである、組成物。
耳毒性薬剤又は耳毒性事象に曝されている又は曝される患者における感覚有毛細胞の死滅を最小限に抑え又は軽減するための、式ＩＩの化合物を有する薬学的組成物。
請求項８記載の薬学的組成物において、この薬学的組成物は、耳毒性薬剤又は耳毒性事象への暴露前に、及び当該暴露後少なくとも１４日間に使用されるものである、薬学的組成物。
請求項８記載の薬学的組成物において、前記耳毒性薬剤又は耳毒性事象は、感染、耳毒性薬物、又は衝撃的騒音から選択されるものである、薬学的組成物。
請求項１０記載の薬学的組成物において、この薬学的組成物は、前記暴露４日後までに使用されるものである、薬学的組成物。
請求項１１記載の薬学的組成物において、この薬学的組成物は、前記暴露１日後までに使用されるものである、薬学的組成物。
請求項９記載の薬学的組成物において、前記耳毒性薬剤又は耳毒性事象は、感染、耳毒性薬物、又は衝撃的騒音から選択されるものである、薬学的組成物。
請求項８記載の薬学的組成物において、前記患者は、２４時間以内に耳毒性薬剤又は耳毒性事象に曝されるものである、薬学的組成物。
請求項９記載の薬学的組成物において、この薬学的組成物は、耳毒性薬剤又は耳毒性事象への暴露中に使用されるものである、薬学的組成物。
請求項１５記載の薬学的組成物において、前記耳毒性薬剤又は耳毒性事象は、感染、耳毒性薬物、又は衝撃的騒音から選択されるものである、薬学的組成物。