JP2011087498A - 容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置 - Google Patents
容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011087498A JP2011087498A JP2009242826A JP2009242826A JP2011087498A JP 2011087498 A JP2011087498 A JP 2011087498A JP 2009242826 A JP2009242826 A JP 2009242826A JP 2009242826 A JP2009242826 A JP 2009242826A JP 2011087498 A JP2011087498 A JP 2011087498A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- counting
- container
- thickness
- cells
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 44
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 36
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 162
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 3
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229920000092 linear low density polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004707 linear low-density polyethylene Substances 0.000 description 2
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229920002725 thermoplastic elastomer Polymers 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/14—Bags
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】 密封された容器内の液体中の計数対象物の数を計測する方法であって、容器の少なくとも一部の厚みを調整し、調整した範囲の少なくとも一部を測定対象範囲として、当該測定対象範囲における計数対象物の数を計測する容器内の計数対象物の計数方法。
【選択図】 図2
Description
このような細胞培養においては、細胞の増殖に併せて、培養液における細胞の密度を適正な範囲に維持することが必要である。
そこで、細胞培養においては、培養中に細胞密度を把握するため、適宜培養容器内における培養液中の細胞数を計測する必要があった。
このような細胞培養装置を用いて細胞数の計測を行う場合、従来は培養容器内につながるチューブから培養細胞が含まれる培養液を採集し、所定の緩衝液を加えて培養液における細胞を測定に適する密度に調整した後、計数盤へ注入し、人や機械によってその数を読み取って、細胞密度を算出するということが行われていた。
すなわち、特許文献2に記載の撮影手段により培養容器内の細胞を撮影する場合、細胞画像の細胞数を計測して、これを当該撮影手段の視野内における培養液の容積で除算することで、細胞密度を算出することはできる。
しかし、このように細胞容器内の細胞を直接観察する場合、図17に示すように、細胞の密度が大きく細胞が重なり合うときは、細胞数を正確に計測することができない。また、細胞の密度が小さすぎるときは、全体の密度予測が難しく、算出される細胞密度の精度が低くなってしまうという問題があった。
このため、撮影手段から見える細胞数は、同じ体積密度でも計数盤を用いて実測する場合の100〜200倍となってしまう。したがって、培養容器内の細胞は互いに重なり合う場合が多く、培養容器内の細胞を直接観測して細胞数を計測することは、困難であった。
すなわち、本発明は、培養系を開放することなく、かつ増殖した細胞の密度に拘わらず、培養環境下のあらゆる密度範囲で細胞数を計測することが可能な容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置を提供することを目的とする。
また、本発明の容器内の計数対象物の計数方法は、容器の液体を攪拌し、液体中の計数対象物を均等化した後に、容器の少なくとも一部の厚みを調整する方法としてある。
また、本発明の計数用装置に、さらに調整部材により容器の厚みを調整する前に、容器内の液体を攪拌する攪拌部材を備えた構成とすることもできる。
まず、本発明の容器内の計数対象物の計数方法の原理について、図1を参照して説明する。
同図は、顕微鏡を用いて培養容器内の細胞を直接観察し、その数を計測する様子を示したものであり、図1(A)は、従来のように、容器の厚さを調節することなく、観測する場合を示している。なお、培養液としてその比重が細胞の比重よりも小さいものを使用することで、細胞を容器の底に沈め、顕微鏡観察に適したものとすることができる。また反対に比重の大きい培養液を使用して細胞を容器の上部に集めて観察するようにしても良い。
これによって、培養容器により細胞を大量に培養する場合でも、培養容器内の細胞を直接観察することで、培養系を開放することなく、細胞数を計測することが可能となっている。
また、培養容器内の細胞数が少なく、培養容器全体の密度予測が難しい場合にも、容器の厚みを増大させることで、観測範囲内における細胞数を増加させ、計測に適した細胞数に調整することができる。
次に、本発明の第一実施形態の容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置について、図2を参照して説明する。同図は、本実施形態の計数用装置の構成を示す図である。
本実施形態の計数用装置1は、同図に示すように、厚さ調整部材2、容器積載台3、撮影手段4、駆動装置(調節部材用)5、駆動装置(撮影手段用)6、及び照明7を備えており、容器積載台3上に培養容器8を配置して、培養容器8内の培養細胞数を計測する。
なお、厚さ調整部材2は、図2に示すような平面部分により培養容器8を押圧する押圧板に限定されるものではなく、ローラや引張部材を用いて構成することもできる。
この容器積載台3における測定対象範囲の下方部分は、ガラス板などの透明な部材により構成され、撮影手段4により下方から培養容器8を観測できるようになっている。
この駆動装置(調節部材用)5には、例えばロッド型電動シリンダ(垂直方向動作用アクチュエータ)を用いることができ、これによって、培養容器8の厚さを0.1ミリ単位できめ細かく調整することが可能である。
なお、駆動装置(調節部材用)5や駆動装置(撮影手段用)6を、電動アクチュエータの他、空気圧や油圧、電磁力を利用したアクチュエータを用いて構成したり、あるいはモータやカムを用いて構成したりすることもできる。
培養容器8は、軟包材を材料として、袋状(バック型)に形成した容器である。このように、培養容器8の材料として軟包材を用いることで、培養容器8に可撓性・柔軟性を付与することができる。軟包材としては、例えば、特開2002−255277号公報(軟包材フィルムシートを用いた食品包装体及び食品の取り出し方法)や、特開2004−323077号公報(加圧抽出形の袋状容器)に記載されているものなどを用いることができる。
また、図4の(e)に示すように、厚さ調整部材2としてローラなどを使用し、これを移動させて培養容器8を押圧することで、培養容器8の水平面積を減少させ、培養容器8の厚みを増加させることもできる。
まず、培養容器8内の細胞数を計測する工程に先だって、培養容器8内の培養液を攪拌することが好ましい。なお、培養液の攪拌手段については、第二実施形態において、詳細に説明する。
次に、駆動装置(調節部材用)5を用いて、厚さ調整部材2を降下させ、培養容器8の厚さを所定の厚さに調整する。
このとき、所定の厚さは、細胞の種類、培養容器のサイズ、測定対象範囲の面積、及び培養期間などにより種々の値を取り得る。
そこで、本実施形態の容器内の計数対象物の計数方法では、このように測定対象範囲における細胞が重なり合う場合は、厚さ調整部材2を移動させて培養容器8の厚さを減少し、計測対象の細胞数を減らすことで、細胞を計測可能にしている。
このような細胞密度及び培養容器8全体の細胞数も、計数手段により自動的に算出させることができる。
次に、本発明の第二実施形態の容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置について、図5及び図6を参照して説明する。図5は、本実施形態の計数用装置の構成を示す図であり、図6は、本実施形態の計数用装置における駆動装置(攪拌部材用)の構成を示す図である。
本実施形態の計数用装置は、第一実施形態の計数用装置の構成に加えて、さらに攪拌部材を備えている。本実施形態では、この攪拌部材を用いて培養容器8内の培養液を攪拌することにより、細胞を観測しやすいように分散できるようになっている。その他の点は、第一実施形態と同様のものとすることができる。
同図の例では、攪拌部材9により培養容器8を所定の押圧量で押圧しつつ、この攪拌部材9を容器積載台3と平行に所定の速度及び所定のサイクルで繰り返し移動させることで、培養液を攪拌する構成となっている。
また、この支持台10は、図6に示すように、連結部下に取り付けたロッド型電動シリンダ12(垂直方向動作用アクチュエータ)によって上下に移動させることができ、支持台10に取り付けられた攪拌部材9による培養容器8に対する押圧量を0.1ミリ単位できめ細かく調整することが可能となっている。
なお、撹拌部材の動作制御には、ロッド型電動シリンダ12やスライダ型電動シリンダ16のような電動アクチュエータにかえて、空気圧や油圧、電磁力を利用したアクチュエータを使用したり、モータやカムを用いた構成にしたりすることもできる。
これによって、培養容器8内の培養液を攪拌することができ、培養容器8内における培養細胞を計数し易いように分散させることが可能となる。
次に、本発明の第三実施形態の容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置について、図7〜図11を参照して説明する。これらの図はそれぞれ、本実施形態の容器内の計数対象物の計数方法における計数用装置の基本位置(図7)、攪拌状態(図8)、厚さ調整及び沈殿待ち状態(計数する細胞を減らしたい場合 図9)、顕微鏡観察状態(図10)、厚さ調整及び沈殿待ち状態(計数する細胞を増やしたい場合 図11)を示す模式図である。
以下、本実施形態の容器内の計数対象物の計数方法における計数用装置の動作手順について、培養容器8の厚さを増加させる動作及び減少させる動作を含めて説明する。
まず、図7を参照して、本実施形態の計数用装置の構成要素の基本位置について説明する。
同図において、容器積載台3には顕微鏡観察用の観測孔が設けられ、この観測孔の上部に容器積載台3の上面の一部を構成するガラス板がはめ込まれている。
また、培養容器8の縁の一端には厚さ調整部材2−2(ローラ)が配置され、これを移動させることで、培養容器8の水平面積を減少させ、厚さを増加させることが可能になっている。
また、基本位置では、細胞を撮影するための撮影装置4を構成する顕微鏡レンズ4−1とCCDカメラ4−2、及び照明7は、容器積載台3の外側に配置されている。
次に、図8を参照して、容器内の計数対象物の数の計数を行うに先だち、培養容器8内の培養液を攪拌する手順について説明する。
まず、図7の基本位置から攪拌部材9を下方に移動させて、培養容器8を所定の押圧量で押圧する。次に、この攪拌部材9を容器積載台3と平行に、所定の速度及び所定のサイクルで繰り返し移動させる。
これにより、培養容器8内の培養液を攪拌し、培養液中の細胞を均等化することが可能となる。
次に、図9を参照して、培養容器8の厚さを減少させ、計数する細胞を減らす手順について説明する。
まず、攪拌部材9を上方に移動させて図7の基本位置に戻し、厚さ調整部材2−1を下方に移動させて、培養容器の厚さを減少させる。このとき、厚さ調整部材2−1により、容器積載台3の観測孔上の領域を含む培養容器8の一部を押圧し、培養容器8の測定対象範囲の厚さを所定のサイズに調整する。このとき、培養環境下において、培養容器8の厚さが小さいほど、計数する細胞を減らすことができる。
培養容器8の厚さを減少させた後、培養容器8内の細胞が沈殿するまで静置させる。
次に、図10を参照して、細胞計数を行う手順について説明する。
培養容器8の厚さを減少させた状態で、培養容器8内の細胞が沈殿した後、図10に示すように、顕微鏡4−1とCCDカメラ4−2とからなる撮影手段4、及び照明7を図7の基本位置から水平方向に移動させ、撮影手段4を観測孔の真下に、照明7を観測孔の上方に配置させる。そして、CCDカメラ4−2により培養容器8内に沈殿している細胞を撮影する。
これにより、培養容器8内の細胞が増殖して、そのままの厚さで沈殿させると、重なり合いが生じて正確に計数できない場合でも、培養容器8の厚さを調整することで計数可能にすることができ、培養容器8内の細胞密度を、培養系を開放することなく、算出することが可能となる。
一方、培養の初期段階などにおいては、細胞数が少ないため、計数はできるものの、得られる細胞密度の精度が低くなる場合がある。
このため、観測される細胞数が少ない場合は、図11に示すように、培養容器8の厚さを増加させ、測定対象範囲における細胞数を増やしてから、(4)で説明した顕微鏡観察を行う。
培養容器8内の細胞数が少ない場合の具体的な細胞数は、細胞の種類や測定対象範囲の面積等にもとづき適宜決定されるが、例えば0又は10未満などの数にすることができる。
培養容器8として、LDPE(直鎖状低密度ポリエチレン)製、フィルム厚0.15mmのバッグを使用した。培養容器8は、図12に示すように、仕切り部材(ゴムローラ)で仕切ることにより、培養を行う領域である培養部の長辺を250mm、短辺を210mmとし、当該培養部に培養液640mlを入れて使用した。なお、このときの培養容器8を平置きした際の容器厚みは、容器上面が完全な水平面にならないが、およそ16mmであった。観察範囲(測定対象範囲)の水平面のサイズは一辺0.5mmの正方形である。
攪拌部材9として直径12mmのローラを使用し、押圧量13mm、速度50mm/s、往復回数10回の攪拌条件により攪拌を行った。
なお、実測密度は、従来の方法により計数盤を用いて、バッグから回収した培養液中の細胞数を計測し、これを観測範囲の容積で除算して得た。
実施例1と同一の培養容器8及び培養液を用いて、同一の攪拌条件で攪拌を行った。
次に、バッグの厚さを調節することなく、60分間静置させた後、観測範囲を撮影した。バッグの上面は押圧を行っていないため波打っており、バッグの厚みはおよそ16mmであった。
この場合、細胞に重なり合いが見られ、細胞数の計数を行うことはできず、密度の算出も行うことができなかった。その結果を図13,図14に示す。
実施例1とは細胞密度の異なる培養液を用いるとともに、細胞数の計測にあたり、バッグの厚さを11.0mmとし、その後の静置時間を45分間にした点以外は、実施例1と同様にして、実験を行った。培養液と培養細胞の種類は、実施例1と同じであるが、本実施例では実施例1に比較して培養細胞数が少ないものを使用した。その結果を図15及び図16に示す。
細胞数の計測にあたり、バッグの厚さを7.0mmとし、その後の静置時間を30分間にした点以外は、実施例2と同様にして、実験を行った。その結果を図15及び図16に示す。
細胞数の計測にあたり、バッグの厚さを4.0mmとし、その後の静置時間を12分間にした点以外は、実施例2と同様にして、実験を行った。その結果を図15及び図16に示す。
細胞数の計測にあたり、バッグの厚さを3.1mmとし、その後の静置時間を12分間にした点以外は、実施例2と同様にして、実験を行った。その結果を図15及び図16に示す。
これに対して、実施例1では、バッグの厚さを減少させることで、細胞数を計測することができ、培養容器8内における細胞密度を算出することが可能であった。
よって、細胞数が多く、その計数ができない場合、細胞密度が大きい程、バッグの厚さをより大きく減少させることで、細胞を計測可能にできることがわかった。
これらの実験結果から、本発明の計数用装置を用いた容器内の計数対象物の計数方法によれば、培養系を開放することなく、また細胞密度に拘わらず、培養容器内の細胞数を計測でき、細胞密度を算出できることが明らかとなった。
例えば、上記実施形態及び実施例では、培養細胞を計測対象としているが、これに限定されるものではなく、例えばプランクトンなどその他の有機体、又は無機物を計測対象とすることも可能である。培養容器内の「液体」には、培養液などの液体の他、半流動体も含まれる。また、培養容器8内の培養液として、培養細胞の比重よりも大きいものを使用することで、培養細胞を培養容器8内の上部に位置させることができ、これを計数するようにしても良い。また、上記実施形態及び実施例において細胞を計数するのみならず、細胞の生育状態等を観察することもできる。さらに、攪拌部材9を円柱状ではなく、断面を星形などの種々の形状に構成して様々な振とう効果が得られるようにするなど適宜変更することが可能である。
2 厚さ調整部材
2−1 厚さ調整部材(厚さ減少用)
2−2 厚さ調整部材(厚さ増加用)
3 容器積載台
4 撮影手段
4−1 顕微鏡
4−2 CCDカメラ
5 駆動装置(調節部材用)
6 駆動装置(撮影手段用)
7 照明
8 培養容器
9 攪拌部材
10 支持台
11 移動台
12 ロッド型電動シリンダ(垂直方向動作用アクチュエータ)
13 ボールネジ
14 ガイド棒
15 基台
16 スライダ型電動シリンダ(水平方向動作用アクチュエータ)
17 ガラス板
Claims (12)
- 密封された容器内の液体中の計数対象物の数を計測する方法であって、前記容器の少なくとも一部の厚みを調整し、調整した範囲の少なくとも一部を測定対象範囲として、当該測定対象範囲における計数対象物の数を計測する
ことを特徴とする容器内の計数対象物の計数方法。 - 前記容器内の液体を攪拌し、前記液体中の前記計数対象物を均等化した後に、前記容器の少なくとも一部の厚みを調整する
ことを特徴とする請求項1記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 計測された前記計数対象物の数を用いて、前記液体中の計数対象物の密度を算出し、及び/又は、前記液体全体における計数対象物の数を算出する
ことを特徴とする請求項1又は2記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 前記計数対象物の数の計測が、前記測定対象範囲を撮影した画像中の前記計数対象物の数を計測することにより行われる
ことを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 前記測定対象範囲における前記計数対象物の数が所定値以上である場合、前記容器の少なくとも一部の厚みを減少させた後、前記計数対象物の数を計測する
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 厚み調整部材を用いて、前記容器を押圧し、又は、前記容器を引き伸ばし、前記容器の少なくとも一部の厚みを減少させる
ことを特徴とする請求項5記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 前記測定対象範囲における前記計数対象物の数が所定値未満である場合、前記容器の少なくとも一部の厚みを増加させた後、前記計数対象物の数を計測する
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 厚み調整部材を用いて、前記容器を押圧し、前記容器の少なくとも一部の厚みを増加させる
ことを特徴とする請求項7記載の容器内の計数対象物の計数方法。 - 前記容器が培養容器であり、前記計数対象物が細胞である請求項1〜8のいずれかに記載の容器内の計数対象物の計数方法。
- 密封された容器内の液体中の計数対象物の数を計測するための計数用装置であって、
前記容器を積載する積載台と、前記容器における測定対象範囲を含む少なくとも一部を所定の厚みに調整する調整部材とを備えたことを特徴とする計数用装置。 - 前記調整部材により前記容器の厚みを調整する前に、前記容器内の液体を攪拌する攪拌部材を備えたことを特徴とする請求項10記載の計数用装置。
- 前記容器内の前記計数対象物を撮影する撮影手段と、撮影された画像内の前記計数対象物の数を計測する計数手段と、前記計数手段による計測の結果、前記計数対象物の数が所定の範囲内に無い場合、前記画像内の計数対象物の数が、所定の範囲内になるように、前記調整部材を駆動して、前記容器の少なくとも一部を所定の厚みに調整させる駆動装置とを備えたことを特徴とする請求項10又は11記載の計数用装置。
Priority Applications (11)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009242826A JP5659479B2 (ja) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | 培養容器内の細胞の計数方法、及び細胞計数用装置 |
PCT/JP2010/001414 WO2010103748A1 (ja) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 細胞培養方法、細胞培養装置、容器内の計数対象物の計数方法、及び計数用装置 |
CN201080011026.6A CN102348794B (zh) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 细胞培养方法、细胞培养装置、容器内的计数对象物的计数方法及计数用装置 |
KR1020157009106A KR101828916B1 (ko) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 세포 배양 방법, 세포 배양 장치, 용기 내의 계수 대상물의 계수 방법, 및 계수용 장치 |
US13/138,589 US20110318725A1 (en) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | Cell culture method, cell culture device, method for counting subsject matters to be counted in container and device for counting |
CN201310220585.3A CN103276046B (zh) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 容器内的计数对象物的计数方法及计数用装置 |
KR1020147010508A KR20140071440A (ko) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 세포 배양 방법, 세포 배양 장치, 용기 내의 계수 대상물의 계수 방법, 및 계수용 장치 |
EP14163506.0A EP2772533B1 (en) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | Cell culture method, cell culture device, method for counting subject matters to be counted in container and device for counting |
KR1020137001482A KR101773601B1 (ko) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | 세포 배양 방법, 세포 배양 장치, 용기 내의 계수 대상물의 계수 방법, 및 계수용 장치 |
EP10750507.5A EP2407533B1 (en) | 2009-03-09 | 2010-03-02 | Cell culture method, cell culture device, method for counting subject matters to be counted in container and device for counting |
US14/023,575 US9388376B2 (en) | 2009-03-09 | 2013-09-11 | Method for counting subject matters to be counted in container |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009242826A JP5659479B2 (ja) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | 培養容器内の細胞の計数方法、及び細胞計数用装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011087498A true JP2011087498A (ja) | 2011-05-06 |
JP5659479B2 JP5659479B2 (ja) | 2015-01-28 |
Family
ID=44106412
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009242826A Active JP5659479B2 (ja) | 2009-03-09 | 2009-10-21 | 培養容器内の細胞の計数方法、及び細胞計数用装置 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5659479B2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8684592B2 (en) | 2011-02-25 | 2014-04-01 | Algenol Biofuels Inc. | Magnetically coupled system for mixing |
WO2015004862A1 (ja) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 計数用装置 |
JP2015008667A (ja) * | 2013-06-28 | 2015-01-19 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞剥離方法 |
KR20150038073A (ko) * | 2012-09-24 | 2015-04-08 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | 기포 제거 방법 및 기포 제거 장치 |
JP2016202120A (ja) * | 2015-04-27 | 2016-12-08 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞培養システムの攪拌装置、及び細胞培養システムの攪拌方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0843292A (ja) * | 1993-11-24 | 1996-02-16 | Inst Fr Petrole | コロイド状の媒体の薄層による散乱光の光度を測定する検知器 |
WO2008136371A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Toyo Seikan Kaisha, Ltd. | 細胞培養装置、細胞培養システム及び細胞培養方法 |
-
2009
- 2009-10-21 JP JP2009242826A patent/JP5659479B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0843292A (ja) * | 1993-11-24 | 1996-02-16 | Inst Fr Petrole | コロイド状の媒体の薄層による散乱光の光度を測定する検知器 |
WO2008136371A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Toyo Seikan Kaisha, Ltd. | 細胞培養装置、細胞培養システム及び細胞培養方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6014010181; 許南浩編: 細胞培養なるほどQ&A 意外と知らない基礎知識+とっさに役立つテクニック 第3刷, 20050210, 第134-137頁 * |
Cited By (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9139805B2 (en) | 2011-02-25 | 2015-09-22 | Algenol Biotech LLC | Magnetically coupled system for mixing |
US8684592B2 (en) | 2011-02-25 | 2014-04-01 | Algenol Biofuels Inc. | Magnetically coupled system for mixing |
KR101696380B1 (ko) * | 2012-09-24 | 2017-01-13 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | 기포 제거 방법 및 기포 제거 장치 |
KR20150038073A (ko) * | 2012-09-24 | 2015-04-08 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | 기포 제거 방법 및 기포 제거 장치 |
CN104619855A (zh) * | 2012-09-24 | 2015-05-13 | 东洋制罐集团控股株式会社 | 气泡去除方法以及气泡去除装置 |
CN107252708A (zh) * | 2012-09-24 | 2017-10-17 | 东洋制罐集团控股株式会社 | 气泡去除方法以及气泡去除装置 |
CN104619855B (zh) * | 2012-09-24 | 2018-05-25 | 东洋制罐集团控股株式会社 | 气泡去除方法 |
US10077124B2 (en) | 2012-09-24 | 2018-09-18 | Toyo Seikan Group Holdings, Ltd. | Bubble removal method and bubble removal device |
JP2015008667A (ja) * | 2013-06-28 | 2015-01-19 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞剥離方法 |
JP2015015908A (ja) * | 2013-07-09 | 2015-01-29 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 計数用装置 |
KR20160011657A (ko) | 2013-07-09 | 2016-02-01 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | 계수용 장치 |
WO2015004862A1 (ja) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 計数用装置 |
US10330585B2 (en) | 2013-07-09 | 2019-06-25 | Toyo Seikan Group Holdings, Ltd. | Device for counting |
JP2016202120A (ja) * | 2015-04-27 | 2016-12-08 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞培養システムの攪拌装置、及び細胞培養システムの攪拌方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5659479B2 (ja) | 2015-01-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101773601B1 (ko) | 세포 배양 방법, 세포 배양 장치, 용기 내의 계수 대상물의 계수 방법, 및 계수용 장치 | |
JP5659479B2 (ja) | 培養容器内の細胞の計数方法、及び細胞計数用装置 | |
JP5786444B2 (ja) | 細胞培養方法、及び細胞培養システム | |
EP3312268B1 (en) | Cell culture method, use of an apparatus for cell culture, and cell culture device | |
JP6051730B2 (ja) | 気泡除去方法、及び気泡除去装置 | |
CN202322860U (zh) | 高分辨成像的玻璃底细胞培养皿 | |
AU2010257471A1 (en) | Continuous Culture Apparatus with Mobile Vessel, Allowing Selection of Filter Cell Variants | |
JP2018019631A (ja) | 細胞培養装置、及び撹拌方法 | |
JP5995397B2 (ja) | 細胞培養方法、及び細胞培養装置 | |
KR101785693B1 (ko) | 계수용 장치 | |
JP5764887B2 (ja) | 細胞培養容器、細胞培養装置、細胞培養システム、及び細胞培養方法 | |
KR20110137300A (ko) | 세포 배양 방법, 세포 배양 장치, 용기 내의 계수 대상물의 계수 방법, 및 계수용 장치 | |
CN206279193U (zh) | 一种带自动照相功能的智能化细菌培养箱 | |
CN102533537B (zh) | 一种高通量筛选细胞在三维基质中生长迁移行为的装置及方法 | |
CN111830764B (zh) | 一种无菌拍照的辅助装置及其应用方法 | |
CN110484444B (zh) | 生物培养组件及生物培养系统 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120919 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140318 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140428 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20141104 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141117 |
|
R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Ref document number: 5659479 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |