JP2010536847A - 血管新生活性とmmp阻害活性を有するメリッサの葉抽出物の分画およびそれを含む組成物 - Google Patents
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Abstract
【選択図面】図2
Description
血管腫、血管線維腫、血管変形・奇形、およびアテローム性動脈硬化、血管狭窄症、風土性(地方病性)硬化症および狭窄症などの心疾患;
糖尿病性網膜症、黄斑変性症(加齢性黄斑変性症を含む)、翼状片、網膜変性症、角膜の移植における血管新生、血管新生緑内障などの眼科疾患、角膜の癒着と虹彩の癒着、水晶体後線維増殖、顆粒結膜炎、角膜潰瘍、増殖性硝子体網膜症、未成熟網膜症、眼の炎症、円錐角膜、シェーグレン症候群、近視、眼腫瘍と角膜移植の拒絶反応などの血管新生角膜疾患;
肥満症;
関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、敗血症性関節炎などの慢性炎症性疾患、MMP媒介性のオステオパシーおよび外傷性関節損傷後の変性軟骨減少;
中枢神経系の炎症や炎症性腸疾患などの炎症疾患;
乾癖、毛細血管拡張症、化膿性肉芽腫、脂漏性皮膚炎およびざ瘡などの皮膚科疾患;
アルツハイマー疾患;
角膜の癒着、蛋白尿、腹部の大動脈瘤、神経脱髄疾患、肝線維症、腎糸球体疾患、胎膜の早期破水、歯肉炎と歯周炎などの歯周疾患。
また、MMPの酵素前駆体を活性化するMMP-3は、前記疾患の病態生理学にも関与する。[Leake A、Morris CMおよびWhateleyのJ Neurosci Lett、291、201−3、2000;Yoshiyama Y、Asahina M、およびHattori TのActa Neu-ropathol (berl)、99、91−5、2000)。
強力な抗血管新生活性を有するメリッサの葉抽出物を作製するため、蒸留水、50%水溶性エタノール、75%水溶性エタノール、100%エタノールおよびメタノールをそれぞれ用いてメリッサの葉を抽出する。その粗抽出物を遠心分離し、ろ過・濃縮し、次いで凍結乾燥して抽出物の粉末を得た。前記粉末は使用するまで4℃にて保存する。前記抽出物の抗血管新生作用を50μg/mlの濃度にてHUVECチューブ形成アッセイで検査した。表1に示したように、水、50%、75%、100%エタノール、および100%メタノール抽出液を含むすべての抽出液はHUVECチューブ形成アッセイで阻害作用を示した。特に、前記75%エタノール抽出液が、他の抽出液と比べて相対的に良好な阻害活性を示したことから、75%エタノールを第1抽出溶媒として選択する。
乾燥した100kgのメリッサの葉を、83℃にて4時間、350Lの75%水溶性エタノールを用いて2回抽出した。前記抽出物を10μmフィルタでろ過し、30Lに濃縮し、次いで40Lエチルアセテートを用いて2回分画した。この分画を蒸留水で洗浄した後、15Lの容量になるまで濃縮し、次いで45℃の熱風で乾燥した。最終的に、5kgのALS−L1023を乾燥粉末形態で得た。
(1)MMP阻害アッセイ
大量作製したALS−L1023によるMMP阻害を調べるために、分光蛍光分析方法(パーキンエルマー社製LS50B)を用いてMMP酵素活性アッセイを行った。
前記アッセイに使用するヒトMMP酵素は、AngioLab社のバキュロウイルスシステムを用いた組換え体タンパク質産生法によって調製し、蛍光定量的基質(Bachem社カタログNo.M-2105)をMMP−2とMMP−9の基質として使用し、さまざまな濃度のALS−L1023をMMP酵素と基質を含有する反応緩衝液に添加して蛍光強度を測定した。MMP−2とMMP−9に対するALS−L1023のIC50はそれぞれ17.7+1.0mg/mLと12.3±1.4mg/mLであった。
MMP−2とMMP−9に対するメリッサの葉の75%エタノール抽出液のIC50はそれぞれ33.6+1.5mg/mLと26.0±1.7mg/mLであった。かくして、ALS−L1023のMMP阻害活性はメリッサの葉の75%エタノール抽出液の阻害活性と比べて高いことが確認された(図1)。
前記HUVEC(ヒト臍帯静脈内皮細胞)チューブ形成アッセイは、インビボ有効性に緊密に関連するインビトロアッセイであるので、HUVECチューブ形成に対するALS−L1023の作用を調べた。
前記チューブ形成アッセイを行うため、HUVECを新たに得られたコードから単離した。細胞を培養し、抗第VIII因子抗体を用いた免疫細胞の化学的染色によって識別した。通路5以内で培養したHUVECを、さまざまな濃度のALS−L1023の不在下または存在下で、37℃にてマトリゲル(米国マサチューセッツ州ベッドフォードのBDバイオサイエンス社製)上で18時間増殖させた。チューブ形成を顕微鏡で観察した。図2に示したように、大量作製したALS−L1023は50mg/mLの濃度でチューブ形成を阻害した。チューブの毛細管ネットワークは、対照で観察されたが、ALS−L1023によって連絡切断した。また、表3に示したように、ALS−L1023は用量依存方式でHUVECチューブ形成を阻害した。
ALS−L1023のHUVECに対する細胞毒性試験を行うため、ウェルあたり5,000〜10,000のHUVECを96ウェルプレートに播種し、さまざまな濃度のALS−L1023を各ウェルに添加した。前記細胞生存度を、XTTテトラゾリウム基(ナトリウム3’−[L−(フェニルアミノカルボニル)−3,4−テトラゾリウム]−ビス[4−メトキシ−6−ニトロ]ベンゼンスルホン酸水和物)細胞増殖キット(ドイツのロッシェ社製)で検査し、生細胞をELISA(酵素結合免疫測定法)プレートリーダーで測定した。ALS−L1023は50mg/mL濃度にて、HUVEC生存度に影響を及ぼさず、HUVECチューブ形成阻害活性を示した。
マウスのマトリゲル移植アッセイを行って、ALS−L1023でインビボ血管新生の阻害を定量的に測定した。
50ng/mLの塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)と50単位/mLのヘパリンを含有する0.4mLのマトリゲルを皮下注射でC57BL/6マウスに移植した。マウス1匹あたりに、10%エタノール中に溶解した0.5mgのALS−L1023を経口で1日2回、4日間にわたって投与した。10%エタノールを経口で対照群に投与した。5日目に、マウスの表皮を除去して、マトリゲルを回収し、次いで前記マトリゲル中のヘモグロビンの量をDrabkin試薬(シグマ社製、米国)で判定した。
図3に示したように、ALS−L1023による治療群から回収したマトリゲル中のヘモグロビン含有量は溶媒対照群に比べて減少した。ALS−L1023による血管新生阻害の割合は33%であった。
好適な賦形剤をALS−L1023に添加してその安定性を向上させ、次いでその250mgを硬質カプセルにパッケージングした。その混合比を以下の表4に記載する。
高脂肪食由来の肥満症に関し、以下の実験を行って腹部脂肪に対するALS−L1023の阻害作用を調べた。活性成分として製剤したALS-L1023を、0(対照群)、0.1%(低)、0.25%(中)、および0.5%(高)(製剤形態:0、0.17、0.42、0.83%)の含有量で、45KcaL%の高脂肪飼料(米国リサーチダイエット社製)と混合した。活性成分ALS−L1023を含有しない対照群の調製には、製剤したALS−L1023に含まれた賦形剤を、高用量として0.33%の含有量で前記高脂肪飼料と混合した。1週間の順化期間後、生後7週間の雄SDラットを群あたり7匹のマウスからなる群に分割し、12週間にわたって給餌した。次いで、その体重と腹部脂肪の重さを測定し、肝臓と脂肪組織の生化学的血液試験と病理組織学的試験を行った。
体重の測定は、マウス取得日、投与開始日、投与開始後1週間毎に1回の頻度、および解剖日に行った。表5にその結果をまとめた通り、溶媒対照群の平均体重は204.73±5.57g(投与前)から633.63±43.08g(12週間にわたる投与後)へと常に増加し、ALS−L1023群(低、中、および高用量群)の平均体重も、210.10+5.19g、204.97+6.61g、および208.01+7.65g(投与前)から623.72+58.02g、588.69+33.76g、および584.83+33.44g(12週間にわたる投与後)へと常に増加した。溶媒対照群とALS−L1023群の間に統計的有意差は認められなかったが、ALS−L1023群の平均体重は用量依存方式では減少した。
1日の飼料摂取量を以下の通りに決定した。フィーダーを粉末状の飼料で充填し、次いでその重量を測定した。前記フィーダーを用いた前記動物の給餌後24時間にてその重量を測定し、測定重量の差を1日の飼料摂取量として決定した。その測定は、投与開始日と、投与開始後1週間毎に1回の頻度で行った。
溶媒対照群の1日の平均飼料摂取量は12週間にわたって18.46〜22.73gの範囲内であり、低、中、および高用量群の1日の平均飼料摂取量はそれぞれ17.14〜21.84g、17.29〜22.03gおよび16.99〜20.84gの範囲内であった。溶媒対照群に比べて有意差認められなかった。
解剖と採血前に、18時間以上にわたって前記動物を絶食させ、エーテルで麻酔し、続いて採血と静脈切開を行った。その腸間膜脂肪組織、精巣上体脂肪組織、および後腹膜脂肪組織をその腹部の空洞から切除し、秤量し、その肝臓、心臓、腎臓、脾臓、および膵臓を秤量した。
結果として、溶媒対照群と実験群間の心臓、肝臓、膵臓、腎臓(左右)および脾臓の重量に有意差は認められなかった。低、中・高用量群の腸間膜脂肪組織の重量は、それぞれ15.90+4.36g、12.64+1.69g、および11.23+3.32gであった。つまり、用量依存方式では、実験群での重量は溶媒対照群の15.16±4.41gに比べて減少した。低、中・高用量群の精巣上体脂肪組織重量は、それぞれ17.74±3.37g、16.29±2.62g、および15.67±3.83gであった。つまり、用量依存方式では実験群での重量は溶媒対照群の20.80±4.41gに比べて減少し、高用量群で統計的な有意差(p<0.05)が観察された。低、中・高用量群の後腹膜脂肪組織重量は、それぞれ27.20±5.76g、21.36±4.03g、および23.94±6.24gであった。つまり、用量依存方式では実験群での重量は溶媒対照群の29.73±3.23gに比べて減少し、中用量群で統計的な有意差(p<0.05)が観察された。低、中・高用量群の腸間膜脂肪組織、精巣上体脂肪組織および後腹膜脂肪組織を含む腹部脂肪組織の総重量は、それぞれ60.84±11.66g、50.29±7.31g、および50.84±11.84gであった。つまり、実験群での重量は溶媒対照群の65.69±10.13gに比べて減少し、中・高用量群で統計的有意差(p<0.05)が観察された(表6を参照)。
生化学的血液試験では、対照群と実験群間のAST(アスパラギン酸アミノ基転移酵素)、ALT(アラニンアミノ基転移酵素)、およびALP(アルカリホスファターゼ)の血清レベルなどの肝指数に有意差は認められなかった。低、中・高用量群の全血液コレステロールレベル値は、それぞれ88.07+14.35mg/dL、86.96+17.68mg/dL、および79.90+10.45mg/dLであった。つまり、用量依存方式では、実験群でのコレステロール値は溶媒対照群の102.09+21.82mg/dLと比べて減少した。低、中・高用量群の中性脂肪値は、それぞれ50.93+15.28mg/dL、46.63+11.77mg/dL、および45.50+22.45mg/dLであった。つまり、用量依存方式では、実験群での中性脂肪値は溶媒対照群の58.13+25.04mg/dLと比べて減少した。低、中・高用量群のLDL値は、それぞれ9.56+2.67mg/dL、9.11+2.92mg/dL、および8.56+2.26mg/dLであった。つまり、用量依存方式では、実験群でのLDL値も溶媒対照群の12.31±3.70mg/dLと比べて減少した。しかしながら、対照群と実験群間のグルコース、全タンパク質、およびアルブミンのレベルに有意差は認められなかった。かくして、ALS−L1023の投与に関しては、総コレステロール、中性脂肪、およびLDLにおける実験群の血清レベルは、用量依存方式では溶媒対照群と比べて減少した(表7を参照)。
肝臓を秤量し、次いで10%中性緩衝ホルマリン溶液中に固定し、続いて慣用的な組織学的治療を行った。組織のスライドサンプルを調製し、次いでH&Eを用いて染色し、続いて顕微鏡下で脂肪肝を観察した。その結果、溶媒対照群では、肝細胞の肝小葉において脂肪小球の過剰蓄積が観察された。それは脂肪肝の発見であった。小滴性または大滴性脂肪性の変化は主に肝門脈の周りで観察された。脂肪肝の進行期で発生する炎症細胞浸潤は、脂肪肝が発生した風船化肝細胞相互間またはその周りに主に起こった。中度の脂肪肝では、炎症細胞浸潤は中心静脈の周りに起こった。その他の異常病理学的な知見は観察されなかった。
低用量群では、脂肪肝も観察され、それは溶媒対照群で観察されたものと同様であった。中用量群では、溶媒対照と低用量群に比べてわずか減少した脂肪肝と炎症細胞浸潤が観察された。
高用量群では、脂肪肝の阻害または炎症細胞浸潤の減少が観察され、それは中用量群で観察されたものと同様であった(図4を参照)。この結果は、ALS−L1023がその上に阻害作用を発揮したことを示唆する。
切除した後腹膜脂肪組織を秤量し、次いでパラフィン封入した組織サンプルを慣用的な病理組織プロセッシングで調製し、続いてH&E染色を行った。5つのサンプリング部位を無作為選択し、光学顕微鏡に接続されたStereo Investigatorソフトウェア(米国バーモント州のMicroBrightField社製)を用いて、各サンプリング部位に隣接する10の脂肪細胞面積の平均値を各被験体の脂肪細胞面積として決定した。図5に示したように、中・高用量群では脂肪細胞面積が溶媒対照群に比べて減少したことが観察された。高用量群では、有意差(p<0.05)が観察された。
総合すれば、高脂肪食誘発性肥満ラットにALS−L1023を12週間にわたって与えたところ、ALS−L1023は、腹部脂肪組織重量と総コレステロールと中性脂肪との血清レベルの減少、脂肪肝の軽減、および脂肪細胞サイズの縮小を含む肥満阻害作用を発揮した。
網膜血管新生に対するALS−L1023の有効性を評価するため、
ROP(未熟児網膜症)動物モデル中から酸素誘発性網膜症マウスを選び、その生後13日目に、DMSOで希釈したALS−L1023を25mg/kgの用量にて腹腔内注入し、それを5日間にわたって行った。
その結果、正常な網膜は血管の均1かつコンパクトパターンを示すが、ROP対照群では網膜血管新生と多くの異常血管が観察され、ALS−L1023群では、中心網膜と周辺網膜における血管新生の顕著な減少と、異常血管数がROP対照群に比べて減少したことが観察された。かくして、ALS-L1023は眼血管新生の予防と治療に効果的であると考えられる。
製剤したALS−L1023カプセルを、滲出性加齢黄斑変性症と診断された男性患者に、1日3回、1回あたり2カプセルを12週間にわたって経口投与し、次いで、患者の網膜下領域の写真を取り、黄斑変性症領域のサイズを投与前に取った写真と比べてた。図6に示したように、黄斑変性症領域における進行は観察されなかった。かくして、ALS−L1023は加齢性黄斑変性症の予防と治療に効果的であると考えられる。
本試験物質ALS−L1023の原料であるメリッサの葉は食品または医薬として長期間にわたって使用されており、米国IDAによってGRAS(一般に安全と見なされる)として分類されている。そのため、前記試験物質ALS−L1023は無毒性と考慮されるが、本実験は急性毒性試験(限度試験)として、OECDガイドラインに従って、単回経口投与量を2000mg/kgのALS−L1023と設定して行った。
10匹の雄ラットと10匹の雌ラットを、各群が5匹のラットからなるように対照群と実験群に無作為分割した。対照群には1mL/150g(体重)のトウモロコシ油を投与し、実験群には2000mg/kgのALS−L1023を含有するトウモロコシ油を投与した。本試験物質ALS−L1023は水に溶解しないので、本試験ではトウモロコシ油に懸濁した。本試験物質は投与日に調製し、投与に先立ってボルテックスすることによって懸濁した。
実験の最終日にCO2を用いて前記ラットを安楽死させて解剖した。病理学者の見地から調べた異常組織を切除し、生理組織学的検査に供した。
対照群と実験群との両方で、明白に異なる臨床的異常現象は観察されなかったが、1匹の雌ラットが投与後60分後でわずかな興奮状態を示したが、投与後90分後には安定した状態に戻った。
加えて、ALS−L1023の投与は対照群と実験群のいずれにおいても体重と体温に影響を及ぼさなかった(図7と図8を参照)。
総体重に対する胸腺、心臓、脾臓、腎臓、肝臓、および脳の相対重量(%)を図9に示す。わずかだが、対照群の雌ラットの肝臓の重さが、ALS−L1023を投与した試験群の雌ラットと比べて統計的な有意差をもって増加したことが観察された。ただしこれは雄ラットの場合には観察されなかった。解剖による異常な知見や他の風変わりな知見はなかった。
また、いくつかの異常な知見が病理学者の観点によって検出されたが、その組織学的検査では異常現象の証拠はなかった。
そのため、2000mg/kgのALS−L1023の単回経口投与量による有毒症状は観察期間にわたって誘発されなかった。
(産業上の利用可能性)
Claims (14)
- 血管新生活性とMMP阻害活性を有することを特徴とするメリッサの葉のエチルアセテート分画。
- メリッサの葉を50〜100%のC1〜C6アルコールで抽出・濃縮し、次いでその濃縮アルコール抽出物を水中で懸濁し、エチルアセテートを用いて分画し、さらにそれを乾燥してメリッサの葉のエチルアセテート分画を得ることを特徴とする請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画。
- 前記C1〜C6アルコールは70〜80%C1〜C6アルコールであることを特徴とする請求項2に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画。
- 前記C1〜C6アルコールはエタノールまたはメタノールであることを特徴とする請求項3に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画。
- 請求項1のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含む肥満症の予防または治療のための組成物。
- 糖尿病性網膜症、黄斑変性症(加齢性黄斑変性症を含む)、翼状片、網膜変性症、角膜の移植血管新生、新生血管緑内障、新生血管角膜疾患、水晶体後線維増殖、トラコーマ、角膜潰瘍、増殖性硝子体網膜症、未成熟網膜症、眼の炎症、円錐角膜、シェーグレン症候群、近視、眼腫瘍または移植拒絶後角膜移植の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 癌の増殖と転移の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 血管腫、血管線維腫、血管変形、動脈硬化症、血管付着/接着・粘着・固着・遵守、強皮症、または再狭窄症の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、敗血症性関節炎、MMP媒介性の骨減少症、または外傷性関節損傷後の変性軟骨減少の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 前記中枢神経系または炎症性腸疾患の炎症性疾患の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 乾癖、毛細血管拡張症、化膿性肉芽腫、脂漏性皮膚炎、またはざ瘡の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- アルツハイマー疾患の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 異常創部癒着、蛋白尿、腹部の大動脈瘤、神経脱髄疾患、肝線維症、腎糸球体疾患、胎膜の早期破水、または歯周疾患の予防または治療のための組成物において、請求項1に記載のメリッサの葉のエチルアセテート分画を含むことを特徴とする組成物。
- 前記組成物は、顆粒、粉末、錠剤、被覆錠剤、カプセル、ピル、シロップ剤、ドロップ剤、液剤、溶液、懸濁液、エマルジョン、または注射剤の剤形に製剤されることを特徴とする請求項5〜13の何れか一項に記載の組成物。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018177716A (ja) * | 2017-04-17 | 2018-11-15 | 株式会社アイビー化粧品 | マトリックスメタロプロテアーゼ9阻害剤とそれを含む皮膚外用剤 |
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004520294A (ja) * | 2000-12-12 | 2004-07-08 | アンジオラボ・インコーポレイテッド | 抗−血管新生およびマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害活性を有するメリッサ葉抽出物を含む組成物 |
WO2007040377A1 (en) * | 2005-10-05 | 2007-04-12 | Angiolab., Inc. | Antiobesity composition |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2952114C2 (de) | 1979-12-22 | 1984-01-05 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verwendung von Rosmarinsäure bei der Bekämpfung von Entzündungen und hierbei eingesetzte Arzneimittel |
CN1045527C (zh) | 1996-07-05 | 1999-10-13 | 荆树汉 | 芍药醇保健香烟的制取方法 |
JPH1112270A (ja) * | 1997-06-26 | 1999-01-19 | Asahi Breweries Ltd | 抗酸化作用を有する新規化合物 |
AU2000272667A1 (en) | 2000-09-13 | 2002-04-29 | Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co. | Pharmaceutical composition treating gynecological blood stasis diseases, cardio and cerebral vascular diseases, respiratory diseases and the like |
KR100473688B1 (ko) * | 2001-02-20 | 2005-03-07 | 주식회사 안지오랩 | 멜리사엽 엑스를 유효성분으로 하는 매트릭스메탈로프로테아제 활성 억제용 약학적 조성물 |
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---|---|---|---|---|
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WO2007040377A1 (en) * | 2005-10-05 | 2007-04-12 | Angiolab., Inc. | Antiobesity composition |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013022207; Nedjalka Vl. Yanishlieva et al: Die Nahrung 39(5/6), 1995, p.458-463 * |
JPN6013022209; Isao Agata et al: Chem. Pharm. Bull. 41(9), 1993, p.1608-1611 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018177716A (ja) * | 2017-04-17 | 2018-11-15 | 株式会社アイビー化粧品 | マトリックスメタロプロテアーゼ9阻害剤とそれを含む皮膚外用剤 |
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