JP2010536788A - タンパク質−高分子結合体 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2007年8月16日に出願された米国特許仮出願番号第60/956,273号の優先権を主張するものであり、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の一態様は、1以上の高分子部位、タンパク質部位、およびリンカーを含む実質的に純粋(≧80%純度)な結合体に関連する。前記結合体において、1以上の高分子部位は前記リンカーと結合しており、タンパク質部位のN末端の窒素原子はリンカーに結合している。前記リンカーは共有結合、C1−10のアルキレン、C2−10のアルケニレン、またはC2−10のアルキニレンであり、前記タンパク質部位がインターフェロンα部位、ヒト成長ホルモン部位、またはエリスロポイエチンである。好ましくは、前記結合体の純度が90%以上である。この結合体は予想以上に長い生体内半減期を有している。
アルキレンオキシド部位であり、G1およびG2はそれぞれ
本発明のタンパク質−高分子結合体は、化学分野でよく知られた合成方法を用いて調製されうる。例えば、リンカー分子を同時にまたは徐々に、二つの高分子と結合し、続けてタンパク質分子をこのリンカー分子に結合し、本発明のタンパク質−高分子結合を形成する。
[修飾されたインターフェロンの調製]
本明細書に開示されるすべての事項はいかなる組合せで組み合わされていてもいい。本明細書に開示される事項は、それぞれ同様の、等価の、または似通った目的を果たす代替事項によって置き換えられてもいい。このように、特記されない限り、それぞれの開示される事項は本質的な事項、そのものまたは同様の事項の一例としてのみ用いられている。
Claims (23)
- 少なくとも一つの高分子部位と、タンパク質部位と、およびリンカーとを含む実質的に純粋な結合体であって、前記少なくとも一つの高分子部位が前記リンカーと結合しており、タンパク質部位のN末端のN原子が前記リンカーに結合しており、前記リンカーは共有結合、C1−10のアルキレン、C2−10のアルケニレン、またはC2−10のアルキニレンであり、前記タンパク質部位がインターフェロンα部位、ヒト成長ホルモン部位、またはエリスロポイエチンである、結合体。
- 前記タンパク質部位が、N−末端にさらに1−4のアミノ酸残基を含む修飾されたインターフェロンα2b部位である、請求項1に記載の結合体。
- 前記結合体の純度が90%またはそれ以上である、請求項2に記載の結合体。
- 化学式Iで表されるタンパク質−高分子結合体、
R1、R2、R3、R4、およびR5がそれぞれ独立して、H、Cl−5のアルキル、C2−5のアルケニル、C2−5のアルキニル、アリール、ヘテロアリール、C3−8のシクロアルキル、またはC3−8のヘテロシクロアルキルであり、
A1およびA2がそれぞれ独立して、高分子部位であり、
G1、G2、およびG3がそれぞれ独立して、結合または結合性官能基であり、
Pがタンパク質部位であり、
mが0または1−10の整数であり、および
nが1−10の整数である。 - G3が結合であり、Pが、N末端のアミノ基がG3と結合しているタンパク質部位である、請求項4に記載の結合体。
- A1およびA3がそれぞれ10―30kDの分子量を有するmPEG部位である、請求項5に記載の結合体。
- G1およびG2がそれぞれ
- Pが、そのN末端にさらに1−4のアミノ酸残基を含む修飾されたインターフェロン部位である、請求項7に記載の結合体。
- nが2である、請求項8に記載の結合体。
- 前記結合体が、
mPEGは20kDの分子量を有し、IFNがインターフェロンα2b部位である、請求項9に記載の結合体。 - 化学式IIの化合物、
Xは反応性基であり、
A1およびA2はそれぞれ独立して高分子部位である、またはA1およびA2の一方が高分子部位であり、かつ他方が反応性基であり、
G1、G2およびG3はそれぞれ独立して結合または結合性官能基であり、
R1、R2、R3、R4、およびR5がそれぞれ独立して、H、Cl−5のアルキル、C2−5のアルケニル、C2−5のアルキニル、アリール、ヘテロアリール、C3−8のシクロアルキル、C3−8のヘテロシクロアルキル、または−G4−X’であり、ここでG4は結合または結合性官能基、X’は反応性基であり、
mおよびnがそれぞれ独立して0または1−10の整数であり、
この際、仮に−G3−Xが−CO(O)−N−スクシンイミジルであるときは、nが1−10の整数である。 - A1およびA2がそれぞれ独立して高分子部位であり、R1、R2、R3、R4、およびR5がそれぞれ独立して、H、Cl−5のアルキル、C2−5のアルケニル、C2−5のアルキニル、アリール、ヘテロアリール、C3−8のシクロアルキルまたはC3−8のヘテロシクロアルキルであり、XがCH(=O)または脱離基である、請求項11に記載の化合物。
- XがCH(=O)であり、G3が結合である、請求項12に記載の化合物。
- A1およびA3がそれぞれ12―30kDの分子量を有するmPEG部位である、請求項13に記載の化合物。
- G1およびG2がそれぞれ
- 化学式Iのタンパク質−高分子結合体の調製方法、
A1およびA2がそれぞれ独立して、高分子部位であり、
G1、G2、およびG3がそれぞれ独立して、結合または結合性官能基であり、
Pがタンパク質部位であり、そのN末端のアミノ基がG3と結合しており、
mが0または1−10の整数であり、
nが1−10の整数であり、
前記方法が、N末端のフリーなタンパク質H−P(Pはタンパク質部位である)と化学式IIの2量体枝分かれ分子とのカップリング反応を行い、
または、N末端のフリーなタンパク質H−P(Pはタンパク質部位である)と化学式IIの2量体枝分かれ分子とのカップリング反応を行い、
その後カップリング生成物を還元して、タンパク質−高分子結合体に形成することを含む。 - A1およびA2がそれぞれ、20kDの分子量を有するmPEG部位である、請求項16に記載の方法。
- G1およびG2がそれぞれ
- PがそのN末端にさらに1−4のアミノ酸残基を含む修飾されたインターフェロン部位である、請求項18に記載の方法。
- Pが
- G3が結合であり、XがCH(=O)である、請求項20に記載の方法。
- C型肝炎ウイルス感染症またはB型肝炎ウイルス感染症の治療を必要とする患者に化学式Iのタンパク質−高分子結合体の効果的な量を投与することを含むC型肝炎ウイルス感染症またはB型肝炎ウイルス感染症の治療方法、
R1、R2、R3、R4、およびR5がそれぞれ独立して、H、Cl−5のアルキル、C2−5のアルケニル、C2−5のアルキニル、アリール、ヘテロアリール、C3−8のシクロアルキル、またはC3−8のヘテロシクロアルキルであり、
A1およびA2がそれぞれ独立して、高分子部位であり、
G1、G2、およびG3がそれぞれ独立して、結合または結合性官能基であり、
Pがインターフェロン部位であり、
mは0または1−10の整数であり、および
nは1−10の整数である。 - 少なくとも一つの高分子部位と、タンパク質部位と、およびリンカーとからなる実質的に純粋な結合体であって、前記少なくとも一つの高分子部位が前記リンカーと結合しており、タンパク質部位のN末端のN原子が前記リンカーと結合しており、前記リンカーは共有結合、アルキレン、アルケニル、またはアルキニルであり、前記タンパク質部位がインターフェロンα2b部位である、実質的に純粋な結合体の効果的な量をC型肝炎ウイルス感染症またはB型肝炎ウイルス感染症の治療を必要とする患者に投与することを含む、C型肝炎ウイルス感染症またはB型肝炎ウイルス感染症を治療する方法。
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