JP2010535466A - 新規ウイルスベクター - Google Patents
新規ウイルスベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010535466A JP2010535466A JP2010504369A JP2010504369A JP2010535466A JP 2010535466 A JP2010535466 A JP 2010535466A JP 2010504369 A JP2010504369 A JP 2010504369A JP 2010504369 A JP2010504369 A JP 2010504369A JP 2010535466 A JP2010535466 A JP 2010535466A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acnpv
- cap
- pfcsp
- pcap
- vietnam
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 103
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 80
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims abstract description 213
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims abstract description 86
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 51
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 44
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 84
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 63
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 53
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 37
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 23
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 22
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 16
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 12
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 254
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 23
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 abstract description 20
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 135
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 102
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 89
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 83
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 81
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 74
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 73
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 70
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 62
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 62
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 59
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 52
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 49
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 39
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 39
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 38
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 29
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 28
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 25
- 101710141347 Major envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 24
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 22
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 22
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 22
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 22
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 22
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 22
- 101150045064 gp64 gene Proteins 0.000 description 20
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 17
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 17
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 14
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 13
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 13
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 11
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 description 10
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- 101710117490 Circumsporozoite protein Proteins 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 241001505483 Plasmodium falciparum 3D7 Species 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 6
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 102100034330 Chromaffin granule amine transporter Human genes 0.000 description 5
- 101000641221 Homo sapiens Chromaffin granule amine transporter Proteins 0.000 description 5
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 101150101299 gene 4 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- 108010057081 Merozoite Surface Protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 4
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 101710088341 Dermatopontin Proteins 0.000 description 3
- 102100025800 E3 SUMO-protein ligase ZBED1 Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241001646725 Mycobacterium tuberculosis H37Rv Species 0.000 description 3
- 108700035964 Mycobacterium tuberculosis HsaD Proteins 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 101000983333 Plasmodium falciparum (isolate NF54) 25 kDa ookinete surface antigen Proteins 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000409811 Bombyx mori nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101000583086 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2b Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000224017 Plasmodium berghei Species 0.000 description 2
- 241000287530 Psittaciformes Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 101150026451 csp gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N docosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- -1 phosphate triester Chemical class 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQPKMEYBZUPZGK-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-azido-2-nitroanilino)methyl]-5-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-3-ol Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CNC=2C(=CC(=CC=2)N=[N+]=[N-])[N+]([O-])=O)=C1O KQPKMEYBZUPZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 235000021357 Behenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241001275954 Cortinarius caperatus Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101001111984 Homo sapiens N-acylneuraminate-9-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101900082162 Human immunodeficiency virus type 1 group M subtype B Surface protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 101900159346 Influenza A virus Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 102100023906 N-acylneuraminate-9-phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001465803 Orgyia pseudotsugata Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000224021 Plasmodium berghei ANKA Species 0.000 description 1
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 description 1
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 description 1
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010078233 Thymalfasin Proteins 0.000 description 1
- 102400000800 Thymosin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010065667 Viral Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940008309 acetone / ethanol Drugs 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004637 bakelite Substances 0.000 description 1
- 229940116226 behenic acid Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150086609 groEL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000011170 pharmaceutical development Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 210000004879 pulmonary tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N thymalfasin Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N 0.000 description 1
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/445—Plasmodium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
- C07K16/205—Plasmodium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
- C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
項1.pCAP-PfCSP,pCAP-PfCSP/272,pCAP-PfCSP/467,pCAP-PfCSP(A361E),pCAP-PfCSP(A361E)/272,pCAP-PfCSP(A361E)/467,pCAP-PfCSP-76,pCAP-PfCSP-76/467,pCAP-PfCSP+209,pCAP-PfCSP+209/467,pCAP-PfCSP+76/209,pCAP-PfCSP+76/209/467,pCAP-HA1/Anhui,pCAP-HA1/Anhui/272,pCAP-HA1/Anhui/467,pCAP-HA1/Vietnam,pCAP-HA1/Vietnam/51,pCAP-HA1/Vietnam/101,pCAP-HA1/Vietnam/154,pCAP-HA1/Vietnam/201,pCAP-HA1/Vietnam/272,pCAP-HA1/Vietnam/467, pCAP-AH/345,pCAP-AH/345/467,pCAP-AH/410,pCAP-AH/410/467,pCAP-AH/473,pCAP-AH/473/467,pCAP-AH/520,pCAP-AH/520/467,pCAP-VN/346,pCAP-VN/346/467,pCAP-VN/410,pCAP-VN/410/467,pCAP-VN/473,pCAP-VN/473/467,pCAP-VN/520,pCAP-VN/520/467,pCAP-CO/full,pCAP-CO/full/467,pCAP-CO/19,pCAP-CO/19/467,pCAP-CO/76,pCAP-CO/76/467,pCAP-CO/205,pCAP-CO/205/467,pCA39-HA1/Anhui,pCA64-HA1/Anhui,pCA39-PfCSP(A361E),pCA64-PfCSP(A361E),pCAP-CO/full/VSV,pCAP-CO/19/VSV,pCAP-CO/76/VSV,pCAP-CO/205/VSV,pDual-Pfs25-PfCSP-gp64,pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかであるトランスファーベクター。
項2.AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhui,AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかである組換えバキュロウイルス。
項3.項2の組換えバキュロウイルスを有効成分とする感染症用組成物。
項4.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、項2の組換えバキュロウイルスを有効成分として含む感染症用組成物。
項5.項2の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項6.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項3に記載の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項7.AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項8.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項7に記載のインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項9.AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項10.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項7に記載のインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項11.AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467, AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467, AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64を有効成分とするヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項12.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項11に記載のヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項13.AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467, AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467, AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかを有効成分とするヒトマラリア感染症用ワクチン。
項14.筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項13に記載のヒトマラリア感染症用ワクチン。
項15. 項2に記載の組換えバキュロウイルス、項3または4に記載の感染症用組成物、項5、6、9,10,13または14に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、マラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法またはマラリアもしくはインフルエンザの治療方法 。
項16. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項15に記載の方法。
項17. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項15に記載の方法 。
項18. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項16に記載の方法 。
項19. 項2に記載の組換えバキュロウイルス、項3または4に記載の感染症用組成物、項5、6、9,10,13または14に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、免疫賦活方法 。
項20. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項19に記載の方法。
項21. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項19に記載の方法。
項22. 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項20に記載の方法。
(1) 本発明のトランスファーベクターおよびトランスファーベクターの製造
免疫原性外来遺伝子DNAの製造
バキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるウイルス遺伝子に融合可能な免疫原性外来遺伝子DNAの製造法は,本明細書に開示された目的とする免疫原性を有する抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの核酸配列情報に基づいて合成するか,或いは免疫原性外来遺伝子の核酸配列情報に基づいて該免疫原性外来遺伝子のコード領域の核酸配列に相当するDNAをそのまま合成することにより(化学的DNA合成法),容易に製造,取得することができる。この製造には,一般的遺伝子工学的手法が適用できる[例えば,Molecular Cloning 2d Ed, Cold Spring Harbor Lab. Press(1989);続生化学実験講座「遺伝子研究法I,II,III」,日本生化学会編(1986)など参照]。
上記の如くして得られる免疫原性外来遺伝子のDNA或いは各種DNA断片は,常法,例えばジデオキシ法[Proc. Natl. Acad. Sci., USA., 74, 5463(1977)],マキサム-ギルバート法[Methods in Enzymology, 65, 499(1980)]などに従って,また簡便には市販のシークエンスキットなどを用いて,そのDNA配列を決定することができる。
本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである脊椎動物プロモーター(脊椎動物細胞で機能し得るプロモーター)としては,哺乳動物プロモーターや鳥類のプロモーターなどのプロモーターを例示できる。
また,本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである哺乳動物プロモーター(哺乳動物細胞で機能し得るプロモーター)としては,サイトメガロウイルスプロモーター,SV40プロモーター,レトロウイルスプロモーター,メタロチオネインプロモーター,ヒートショックプロテインプロモーター,CAGプロモーター,エロンゲーションファクター1αプロモーター,アクチンプロモーター,ユビキチンプロモーター,アルブミンプロモーター,MHCプロモーターなどを例示できる。
鳥類のプロモーターとしては,βアクチンプロモーター,ヒートショックプロテインプロモーター,エロンゲーションファクタープロモーター,ユビキチンプロモーター,アルブミンプロモーターを例示できる。
本発明に用いられるバキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるバキュロウイルスプロモーターとしては,ポリヘドリンプロモーター,p10プロモーター,IE1プロモーター,p35プロモーター,vp39プロモーター,gp64プロモーター等を例示できる。
本発明は,昆虫細胞と脊椎動物細胞,特に哺乳動物細胞の両者の細胞において目的とする免疫原性外来遺伝子を抗原タンパク質として発現可能な新規な構造を有する新規なトランスファーベクターに関する。本発明において,作製される新規なトランスファーベクターの構造は,一方が脊椎動物のプロモーター,特に哺乳動物プロモーターで,他方がバキュロウイルスのプロモーターであり,これらが連結された下流に所望の免疫原性タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とが連結した構造を有する。連結される脊椎動物のプロモーター,特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターの2つのプロモーターのDNA配列を含むDNA領域は,直接連結してもよいし,互いのプロモーターのDNA配列の間に介在DNA配列が存在してもよい(ただし,この場合には互いのプロモーターが昆虫細胞と脊椎動物のプロモーター,特に哺乳動物細胞においてプロモーター活性を有する必要がある)。また,連結される脊椎動物のプロモーター,特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターは,プロモーター領域においていずれが発現させる遺伝子に近い方に配置されてもよい,後記実施例においては,バキュロウイルスプロモーターが哺乳動物プロモーターよりも発現させる遺伝子に近い方に位置する構造で作製されている。
(2)組換えバキュロウイルスの製造
また本発明は,一方が脊椎動物のプロモーター,特に哺乳動物プロモーターで,他方がバキュロウイルスのプロモーターである連結したデュアル・プロモーターの下流に連結された,少なくとも一つのウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子と,少なくとも一つの免疫原性外来遺伝子とを含む融合遺伝子が組み込まれた構造体からなるトランスファーベクターを製造する工程,該トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとを宿主細胞にコトランスフェクションする工程からなる,組換えバキュロウイルスを分離する工程を含む,組換えバキュロウイルスの製造方法を提供する。
(3)本発明医薬組成物(本発明組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬)
本発明医薬組成物において有効成分とする本発明組換えバキュロウイルスは,前記(2)に示す遺伝子工学的手法により得ることができる。
(4) 本発明ワクチン
本発明の医薬組成物のその有効成分であるAcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhui,AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスは,後記実施例に示されるように病原体に対する感染予防効果を高め,感染価を低下させる作用を示す所望の免疫原性を有する本発明免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子の融合したDNA配列の融合発現物が,昆虫細胞より出芽したウイルス粒子として,生成される。次いで,本発明の医薬組成物をウイルス粒子の形態で脊椎動物,特にヒトを含む哺乳動物に投与されることにより,ウイルス粒子の構成成分となった外来抗原タンパク質が獲得免疫(液性免疫及び細胞性免疫)を促進し,さらに脊椎動物,特にヒトを含む哺乳動物細胞内において前記融合DNA配列の発現物である抗原タンパク質がさらに獲得免疫(液性免疫及び細胞性免疫)を促進すると考えられ,かくしてワクチンとしても有用である。
また,ワクチン(以下,製剤について医薬組成物と同様とする)は,前記した本発明組換えバキュロウイルス(AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhui,AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか)を有効成分とするリポソーム製剤として調製することができ,アジュバントなどと併用することもできる。
本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなるマラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法、あるいは、マラリアもしくはインフルエンザの治療方法に関する。本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなる免疫賦活方法に関する。なお、ここで被験体としては、マラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスの感染を受ける可能性のある者(ヒト若しくはその他の動物(ほ乳類、鳥類、は虫類、魚類、両生類等を含む)並びにマラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスに感染した者を挙げることができる。好ましくは感染に係るインフルエンザウイルスがA型に属するものであり、より好ましくはA型H1亜型又はH3亜型に属するものである。また、マラリア原虫に関しては、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、四日熱マラリア原虫(Plasmodium malariae)、卵形マラリア原虫(Plasmodium ovale)を挙げることができる。
本発明の組換えバキュロウイルスは、そのままか、若しくは薬学的に許容される担体を含むワクチン、製剤ないし医薬組成物として調製され、被験者に投与される。
投与経路は、上記に例示される経路が挙げられる。本発明で用いられる薬学的に許容される担体は、調製される薬学的組成物の形態に応じて、当該分野において慣用されている担体の中から適宜選択して用いることができる。
また、本発明のワクチン(製剤もしくは医薬組成物)の有効成分である組換えバキュロウイルスを投与する場合、組み換えウイルスのPFUで換算する場合は、1患者あたり、102〜1014PFU相当の、好ましくは105〜1012PFU相当の、より好ましくは106〜1010PFU相当の組換えバキュロウイルスが投与される。
本発明のワクチン(組成物)を含む薬学的組成物は医療実施基準(Good Medical Practice)に一致した様式で,個々の患者の臨床状態(例えば,予防または処置されるべき状態),組換えバキュロウイルスを含むワクチン(組成物)の送達部位,標的組織,投与方法,投与計画および当業者に公知の他の因子を考慮しつつ投与される。従って,本明細書のワクチン(組成物)の適切な投与量は,上記を考慮し決定される。
実施例1:本発明トランスファーベクタープラスミドおよびその製造法
(1) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP, pCAP-PfCSP/272, pCAP-PfCSP/467の構築
(1.1)プラスミドpBACsurf-Hsp65の構築
Hsp65遺伝子は,結核菌H37Rv株よりQIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いて,結核菌H37RvのゲノムDNAを抽出し,PCRにてクローニングした。すなわち,抽出した結核菌H37RvのゲノムDNAをプライマーphsp65-F1 (primer (5'-AATAATAGATCTAATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGA-3'(配列番号1): BgIII サイトは下線で表示) とphsp65-R1 ((5'- AATCCAATGCGGCCGCGGGAATTCGATTCCTGCAGGTCAGAAATCCATGCCACCCATGTCGCC -3'(配列番号2); NotIは下線で表示) を用いてPCRを行った。PCR産物を精製した後,制限酵素BgIIIとNotIで切断し,BamHIとNotIで処理したpcDNA3.1(+) (Invitrogen)にライゲーションし,得られたプラスミドをpcDNA-hsp65と名付けた。pcDNA-hsp65を鋳型としてプライマーphsp65-F2(5’- CACCCCTGCAGGACTACAAGGACGACGATGACAAGGAATTCATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGAGGCC -3’ (配列番号3): Sse8387I, EcoRI サイトは下線,FLAG配列はイタリックで表示) とphsp65-R2 (5’- CCCGGGCGAAATCCATGCCACCCATGTCGCCGCCACC-3’ (配列番号4): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたHsp65遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPO (Invitrogen)にクローニングした後,Sse8387I/Cfr9Iで処理し, pBACsurf-CSP (Yoshida et aI.ViroIogy 316: 161-70, 2003)のPstI/Cfr9Iサイトに挿入した。かくして構築したプラスミドをpBACsurf-Hsp65と名付けた。
(1.2) プラスミドpENTR-gp64の構築
pBACsurf-1(Novagen)を鋳型としてプライマーpPoIh-F2(5’- CACCCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAG-3’ (配列番号5): RsrIIサイトは下線表示) とpgp64-R2 (5’- GGTACCATATTGTCTATTACGGTTTCTAATCATAC-3’ (配列番号6): KpnI サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたgp64遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOに挿入し,プラスミドpENTR-gp64を構築した。かくして構築したプラスミドをpENTR-gp64と名付けた。
(1.3) プラスミド pDuaI-Hsp65-gp64の構築
pBACsurf-Hsp65をPstI/Cfr9Iで切断し,hsp65遺伝子断片をpENTR-gp64のPstI/Cfr9Iサイトに挿入し,プラスミドpENTR-Hsp65-gp64を構築した。さらにpENTR-Hsp65-gp64をRsrII/KpnIで切断し,ポリヘドリンプロモーターとhsp65-gp64遺伝子よりなるDNA断片をRsrIIとKpnIで処理したpTriEx-3.1 (Novagen)に挿入し,所望のデュアル・プロモーターによって発現が制御されるトランスファーベクタープラスミドpDuaI-Hsp65-gp64を構築した。
インフルエンザウイルスPR/8/34株が感染したMDCK細胞上清よりQIAamp MiniEIute Virus Spin Kit (QIAGEN)を用いてRNAを抽出し,プライマーHA-f(5’- CCTGCAGGTATGAAGGCAAACCTACTGGTC -3’ (配列番号7): SbfI サイトは下線で表示)とHA-r(5’- GCCCGGGCGATGCATATTCTGCA-3’ (配列番号8): SbfI サイトは下線で表示)と用いてRT-PCRを行い,全長約1700 bpのインフルエンザウイルスHA遺伝子断片をpCR-BIunt II-TOPO(Invitrogen社)にクローニングした。得られたプラスミドをpCR-BIunt-HAと名付けた。pCR-BIunt-HAを鋳型としてプライマーpHA-F1 (5’- CACCGAATTCGACACAATATGTATAGGCTACCATGCG-3’ (配列番号9): EcoRI サイトは下線で表示) とpHA-R1 (5’-CCCGGGCACCTCTGGATTGGATGGACGGAATG-3’ (配列番号10): Cfr9I サイト は下線で表示)を用いてPCRを行い,得られたH1N1/HA1遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後,EcoRI/Cfr9Iで処理し,pDuaI-Hsp65-gp64のEcoRI/Cfr9Iサイトに挿入し,プラスミドpDuaI-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.5)プラスミドpBACsurf-HA1の構築
pDuaI-H1N1/HA1-gp64 をEcoRI/CfrIで切断し,H1N1/HA1遺伝子DNA断片をEcoRIとCfrIで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入し,プラスミドpBACsurf-HA1を構築した。
(1.6) プラスミドpCP-H1N1/HA1-gp64の構築
pBACsurf-HA1を鋳型にPoIh-f RsrII(5’- GGGCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCG-3’ (配列番号11): RsrIIサイトは下線表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行なった。得られたDNA断片をRsrIIとDraIIIで処理したpDuaI-H1N1/HA1-gp64に挿入し,pCP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.7) プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64の構築
pCP- H1N1/HA1-gp64をHA1とgp64の遺伝子断片を調整するために制限酵素RsrIIとDraIIIで切断した。得られた断片を、pTriEx-1.1(Novagen)を制限酵素RsrIIとDraIIIで切断することにより調整したベクターに挿入することにより、CAGプロモーターとポリヘドリン・プロモーターからなる所望のデュアル・プロモーターの制御下に哺乳動物及び昆虫細胞においてHA1抗原とgp64タンパクの融合タンパクの発現を可能にするトランスファー・ベクター・プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.8) プラスミドpCAP-H1N1/NP-gp64の構築
インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAを鋳型にNP-f EcoRI(5’- ACGGAATTCCATTCAATTCAAACTGGA-3’(配列番号13): EcoRIサイトは下線表示)とNP-r Cfr9I(5’- GATCCCGGGCCTTGTCAATGCTGAATGGCAA-3’(配列番号14): Cfr9Iサイトは下線表示)を用いてRT-PCRを行ない,得られた断片を制限酵素EcoRIとXmalで処理し,同様に制限酵素EcoRIとCfr9Iで処理したpCAP-H1N1/HA1-gp64に挿入することで,pCAP-H1N1/NP-gp64を作製した。
(1.9) プラスミドpCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467の構築
pCAP-H1N1/HA1-gp64のgp64(272)-f (5’- GACTCCCCGGGTCGAGCACCGAGTCAAGAAG-3’(配列番号15): XmaIサイトは下線表示)及びgp64(467)-f (5’- GACTCCCCGGGACATCACTTCCATGGCTGAA -3’(配列番号16): XmaIサイトは下線表示)とGP64-DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC -3’(配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行ない,得られた断片を制限酵素XmaIとDraIIIで処理し,同様にXmaIとDraIIIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64に挿入することで,pCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467を作製した。
(1.10)本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP,pCAP-PfCSP/272,pCAP-PfCSP/467の構築
熱帯熱マラリア原虫Plasmodium falciparum 3D7株が感染したヒト赤血球より,QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. falciparumゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち,プライマーPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATC -3’ (配列番号18): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い,得られたDNA断片とpCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/272,pCAP-H1N1/NP/467をPstIとXmaIで処理し、結合した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP,pCAP-PfCSP/272, pCAP-PfCSP/467と名付けた。
(2.1) プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64の構築
マウスマラリア原虫Plasmodium berghei ANKA株が感染したBALB/cマウスより採血を行い,QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. bergheiゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPbAMA1遺伝子domain 123 (D123)を下記の方法でクローニングした。即ち,プライマーpAMA-F1 (5’- CACCGAATTCAATCCATGGGAAAAGTATACGGAAAAATAT -3’ (配列番号19): EcoRI サイトは下線で表示) とpAMA1-R1 (5’- CCCGGGCTTCTCTGGTTTGATGGGCTTTCATATGCAC-3’ (配列番号20): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたPbAMA1D123 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後,EcoRI/Cfr9Iで切断し,EcoRIとCfr9Iで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入した。構築したプラスミドをpBACsurf-PbAMA1D123と名付けた。
次いでpBACsurf-PbAMA1D123をEcoRI/Cfr9Iで切断し,PbAMA1D123遺伝子DNA断片をEcoRIとCfr9Iで処理したpDual-Hsp65-gp64に挿入し,プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64を構築した。
(2.2) プラスミドpDual-PfCSP-gp64の構築
P.falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち,プライマーpPfCSP-F1 (5’- CACCGAATTCTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAGT -3’ (配列番号21): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfCSP-R1 (5’- CCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTC-3’ (配列番号22): Cfr9I サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたPfCSP DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後,EcoRI/Cfr9Iで切断し,EcoRIとCfr9Iで処理したpDual-PbAMA1D123-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfCSP-gp64と名付けた。
(2.3) 本発明のトランスファーベクターpDual-Pfs25-PfCSP-gp64の構築
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfs25遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち,プライマーpPfs25-F1 (5’- CACCGAATTCAAAGTTACCGTGGATACTGTATGCAAAAGAGGA -3’ (配列番号23): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfs25-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCAGTACATATAGAGCTTTCATTATCTATTATAAATCCATC -3’ (配列番号24): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたPfs25 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後,EcoRI/MunIで切断し,EcoRI で処理したpDual -PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-Pfs25-PfCSP-gp64と名付けた。
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfMSP1遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち,プライマーpPfMSP119-F1 (5’- CACCGAATTCAACATTTCACAACACCAATGCGTAAAAAAAC -3’ (配列番号25): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfMSP119-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCGTTAGAGGAACTGCAGAAAATACCATCGAAAAGTGGA -3’ (配列番号26): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い,得られたPfMSP119 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後,EcoRIとMunIで切断し,EcoRIで処理したpDual-PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
pCAP-PfCSPからPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示)とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し,PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/272,pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP(A361E), pCAP-PfCSP(A361E)/272,pCAP-PfCSP(A361E)/467と名付けた。
pCAP-PfCSP(A361E)からPfCSP-f(76) (5’- GACTCTGCAGGATGATGGAAATAACGAAGACAACG -3’ (配列番号28): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し,PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP-76,pCAP-PfCSP-76/467と名付けた。
P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列(ただし361番目のAをEに変換)からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて,人工合成遺伝子配列(PfCSP+:配列番号29)を作製した。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に,PfCSP-f(+209) (5’- GACTCTGCAGAACGCTAATCCAAACGCTAATCCCAACGCTAATCCCAATGCC -3’ (配列番号30): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し,PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+209 , pCAP-PfCSP+209/467と名付けた。
人工合成遺伝子配列(PfCSP+:配列番号29)を鋳型に,PfCSP-f(+76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGCAACAACGAAGACAACG -3’ (配列番号32): PstI サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+128) (5’- CGTTAGGATCCACATTTGGGTTGGCATTTGGG -3’ (配列番号33): BamH I サイト は下線部で表示)と,PfCSP-f(+209) BamHI (5’- GACTGGATCCTAACGCTAATCCAAACGCTAATCCC -3’ (配列番号34): BamH I サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれPstIとBamHI,BamHIとXmaIで切断し,pCAP-H1N1/NP-gp64, PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+76/209, pCAP-PfCSP+76/209/467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて,人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号35)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に,AH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し,PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/272,pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Anhui, pCAP-HA1/Anhui/272,pCAP-HA1/Anhui /467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/4のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて,人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号38)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に,VN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示) を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し,PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64, pCAP-H1N1/NP/272,pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam, pCAP-HA1/Vietnam/272, pCAP-HA1/Vietnam /467と名付けた。
さらに, pCAP-HA1/Vietnamを鋳型にgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはgp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはgp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはgp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示) を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれXmaIとDraIIIで切断し,XmaIとDraIIIで処理したpCAP-HA1/Vietnamに挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam/51,pCAP-HA1/Vietnam/101,pCAP-HA1/Vietnam/154,pCAP-HA1/Vietnam/201と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号45)。この人工配列を鋳型にAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示)とAH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはAH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはAH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ,もしくはAH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し,Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-AH/345,pCAP-AH/345/467,pCAP-AH/410,pCAP-AH/410/467,pCAP-AH/473,pCAP-AH/473/467,pCAP-AH/520,pCAP-AH/520/467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/2004のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号51)。この人工配列を鋳型にVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示)とVN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはVN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示),もしくはVN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ,もしくはVN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し,Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-VN/346,pCAP-VN/346/467,pCAP-VN/410,pCAP-VN/410/467,pCAP-VN/473,pCAP-VN/473/467,pCAP-VN/520,pCAP-VN/520/467と名付けた。
Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号57)。この人工配列を鋳型にPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示),及びPfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し,Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full,pCAP-CO/full/467,pCAP-CO/19,pCAP-CO/19 /467,pCAP-CO/76,pCAP-CO/76/467,pCAP-CO/205,pCAP-CO/205/467と名付けた。
BacVector-2000 DNA(Novagen)のTriple cut DNAを用い,gp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し,Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA64-HA1/Anhui及び pCA64-PfCSP(A361E)を構築した。
BacVector-2000 DNA(Novagen)のTriple cut DNAを用い,vp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い,得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し,Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA39-HA1/Anhui及び pCA39-PfCSP(A361E)を構築した。
pVSV-G(Clonetech)を鋳型にVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示)で,XmaIとDra IIIで処理した pCAP-CO/full,pCAP-CO/19,pCAP-CO/76,pCAP-CO/205に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full/VSV,pCAP-CO/19/VSV,pCAP-CO/76/VSV,pCAP-CO/205/VSVと名付けた。
(1)組換えバキュロウイルスは,組換えバキュロウイルス作製キット(BacVector-2000 Transfection Kit,ノバジェン社)を用い,上記実施例1で構築されたトランスファーベクター:pCAP-PfCSP,pCAP-PfCSP/272,pCAP-PfCSP/467,pCAP-PfCSP(A361E),pCAP-PfCSP(A361E)/272,pCAP-PfCSP(A361E)/467,pCAP-PfCSP-76,pCAP-PfCSP-76/467,pCAP-PfCSP+209,pCAP-PfCSP+209/467,pCAP-PfCSP+76/209,pCAP-PfCSP+76/209/467,pCAP-HA1/Anhui,pCAP-HA1/Anhui/272,pCAP-HA1/Anhui/467,pCAP-HA1/Vietnam,pCAP-HA1/Vietnam/51,pCAP-HA1/Vietnam/101,pCAP-HA1/Vietnam/154,pCAP-HA1/Vietnam/201,pCAP-HA1/Vietnam/272,pCAP-HA1/Vietnam/467, pCAP-AH/345,pCAP-AH/345/467,pCAP-AH/410,pCAP-AH/410/467,pCAP-AH/473,pCAP-AH/473/467,pCAP-AH/520,pCAP-AH/520/467,pCAP-VN/346,pCAP-VN/346/467,pCAP-VN/410,pCAP-VN/410/467,pCAP-VN/473,pCAP-VN/473/467,pCAP-VN/520,pCAP-VN/520/467,pCAP-CO/full,pCAP-CO/full/467,pCAP-CO/19,pCAP-CO/19/467,pCAP-CO/76,pCAP-CO/76/467,pCAP-CO/205,pCAP-CO/205/467,pCA39-HA1/Anhui,pCA64-HA1/Anhui,pCA39-PfCSP(A361E),pCA64-PfCSP(A361E),pCAP-CO/full/VSV,pCAP-CO/19/VSV,pCAP-CO/76/VSV,pCAP-CO/205/VSV,pDual-Pfs25-PfCSP-gp64,pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64の各々とBacVector-2000 DNAをSf9細胞にコトランスフェクト(co-transfection)することにより作製した。
作製した組換えバキュロウイルスは各々,AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhui,AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
実施例2で得たバキュロウイルスAcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,およびコントロールとして野生型バキュロウイルスAcNPV-WTをSf9細胞に48well Plate(Corning)あたり1x105 cellsになるように播種したウェルに,上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後に上清を取り除いたウェルに,Sample Buffer Solution(+2ME,×2)(WAKO)を1ウェルあたり0.05mL加えて細胞を完全に溶解した。細胞溶解液を100℃で5分間処理した後,7.5% SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後,タンパクをPVDFメンブレン(Immobilon-P,ミリポア)に転写し,2.5% Skim Milk/SuperBlock(Pierce)に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。各バキュロウイルス感染Sf9細胞タンパクを転写したメンブレンは,一次抗体として抗gp64抗体(AcV5,eBioScience)を,二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)(BioRad)を加えてインキュベーションし,ECLplus Western Blotting Detection kit(GE Healthcare)で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図1に示す。
図1中, ヒトマラリア遺伝子PfCSP,インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株HA1遺伝子,及びH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子が組み込まれた組換えバキュロウイルスの昆虫細胞内での融合抗原の発現を示すウェスタンブロッティング分析の図面であり,図中左レーンのレーン1は野生型バキュロウイルス(AcNPV-WT)を,レーン2本発明のデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス(AcNPV-CAP-PfCSP)のバンドを,レーン3は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス(AcNPV-CAP-HA1/Anhui),レーン4は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス(AcNPV-CAP-HA1/Vietnam)のバンドをそれぞれ示す。
このことから,本発明組換えウイルスは昆虫細胞で免疫原性外来抗原遺伝子とgp64遺伝子との融合発現産物が発現できることが確認された。
Sf9細胞を150 mm細胞培養用プレート(スミロン:秋田住友ベークライト) あたり1 x 107 cellsになるように培養し,上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後,培養液を3,000 ×g, 4oCで10分間2回遠心し,さらに25%のショ糖溶液の上にウイルス液を重層し,超遠心分離機で25,000 rpm,4°C で90分遠心することでウイルス粒子を得た。を超遠心分離で回収したAcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,及びAcNPV-WTのウイルス濃縮液(1×108 PFU/mL)各々0.05mLにSample Buffer Solution(+2ME,×2)(WAKO)を0.05mL加え,100oCで5分間処理した後,7.5 % SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後,タンパクをPVDFメンブレン(Immobilon-P,ミリポア)に転写し,2.5% Skim Milk/SuperBlock(Pierce)に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,及びAcNPV−CAP−PfCSP/467ウイルス溶解液を転写したメンブレンは,一次抗体として抗PfCSP抗体(2A10,MR-4)を,二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)(BioRad)を加えてインキュベーションした。AcNPV-CAP-HA1/Vietnamウイルス溶解液を転写したメンブレンは,一次抗体として抗H5N1抗体(IT-003-005,Immune Technology)を,二次抗体としてHRP標識ヤギ抗ウサギIgG抗体(GE Healthcare)を加えてインキュベーションした。メンブレンはECLplus Western Blotting Detection kit(GE Healthcare)で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図2に示す。
HepG2細胞にAcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSPを感染重複度約1で感染させた。48時間後,培養上清を除き,PBSで3回リンスした後,-20℃に冷したアセトン・エタノール液 (7:3混合)を加え,-20℃で5分間細胞の固定を行った。5%正常ヤギ血清液(SIGMA)を加え室温で1時間ブロッキングを行った。PfCSPの発現は,Alexa Flour 594で標識した抗PfCSP抗体(2A10,MR-4)を加え,PfMSP-119の発現は抗PfMSP-119抗体(5.2,MR-4)に続きFITCで標識した抗マウス抗体を加えてインキュベーションし,蛍光顕微鏡で反応する細胞を検出した。
その結果を図3に示す。
図3は,HepG2細胞におけるPfMSP1遺伝子とPfCSP遺伝子の融合遺伝子の組換えバキュロウイルスが抗原を発現していることで蛍光標識抗体に染色された細胞の図面を示す。(A)はPfCSP抗原の発現が,(B)はPfMSP-119抗原の発現が確認できており,融合抗原が哺乳動物細胞内で発現できることが確認できた。該図の(A)と(B)から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物細胞において,目的抗原を発現せしめることが分かる。
このことから,本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは,ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに,ウイルス粒子が哺乳動物細胞に侵入し,哺乳動物プロモーターが作動し,哺乳動物細胞内で目的外来抗原遺伝子とgp64遺伝子の融合物を産生し,獲得免疫が誘導されることが示唆される。
1.ウイルス液の接種
超遠心分離で濃縮したAcNPV-WT,AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Vietnamの1×108 PFUのウイルス液をBALB/c雌マウスの大腿筋筋肉内に,2週間間隔で2回接種した。
最終免疫から2週間後に安楽死を行ない,マウスから血清を回収し,特異的抗体価の測定に使用した。AcNPV-CAP-PfCSPとAcNPV-CAP-PfCSP/467によるPfCSP抗原特異的な抗体価の誘導はPfCSPのB細胞エピトープである(NANP)4NVDPCペプチド(Sigma)を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。また,AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamによる H5N1/HA抗原特異的な抗体価の誘導はH5N1ウイルスHA精製抗原(IT-003-005p, Immune Technology)を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。なお,ELISAプレートにはMaxiSoup(NUNC)を,2次抗体にはHRP標識ヤギ抗マウスIgG(H&L)抗体(American Qualex)を,発色反応にはTMB(Calbiochem)を使用し,OD450nmでの吸光度を測定した。
その結果を図4に示す。
図4(A)では,マウス血清を800倍から102,400倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために,800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し,AcNPV-CAP-PfCSP及びAcNPV-CAP-PfCSP/467を接種した群では800倍で吸光度が1.138と1.878と強く反応し,抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。また,図4(B)では,マウス血清を400倍から25,600倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために,800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し,AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamを接種した群では3200倍で吸光度が1.551と2.503と強く反応し,抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。図4から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物において,目的抗原に対する抗体を誘導せしめることが分かる。
AcNPV-CAP-HA1/Anhuiを接種したマウス血清を用いて、赤血球凝集抑制試験(Hemagglutination Inhibition試験)を行った。方法はインフルエンザウイルスHI試薬「生研」(デンカ生研株式会社)の添付文書の方法に準じて行った。H5N1ウイルスHA精製抗原(IT-003-0053p,Immune Technology)を使用した。非特異凝集物質の吸収は赤血球を,非特異的凝集インヒビターの除去はRDE(II)「生研」(デンカ生研株式会社)を用いて行った。HI試験は96 well Plate で0.025 mLの10倍希釈抗血清を希釈液で2倍段階希釈を行い、希釈抗血清が入ったウェルに0.025 mLで4HA価が得られるように希釈したH5N1ウイルスHA抗原0.025 mLを96 well Plateの各ウェルに添加し,室温で30分間放置した。そこへ0.05 mLの反応用赤血球浮遊液を添加し,よく攪拌した後,室温で60分間保持し、赤血球凝集を完全に阻止した検体の最終希釈倍数をHI抗体価とした。
その結果、PBS及びAcNPV-WTを接種した血清ではHI抗体価が10以下だったのに対し,AcNPV-CAP-HA1/AnhuiではHI抗体価が40を示した。
このことから,本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは,ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに,目的外来抗原遺伝子に対して効果的な抗体が誘導されることで,ワクチン効果を付与することが出来ることが推定される。
配列番号:3,4は,pcDNA-hsp65を鋳型としたPCR用プライマーphsp65-F2とphsp65-R2のプライマー配列である。
配列番号:5,6は,pBACsurf-1を鋳型とした,gp64遺伝子DNA断片を得るPCR用プライマーpPolh-F2とpgp64-R2のプライマー配列である。
配列番号:7,8は,インフルエンザウイルスHA遺伝子断片製造のPCR用プライマーHA-fとHA-rのプライマー配列である。
配列番号:9,10は,pCR-Blunt-HAを鋳型としたpHA-F1とpHA-R1のプライマー配列である。
配列番号:11,12は,pBACsurf-HA1を鋳型としたPCR用プライマーPolh-f RsrIIとGP64-r DraIIIのプライマー配列である。
配列番号:13,14は,インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAのRT-PCR用プライマーNP-f EcoRIとNP-r Cfr9Iのプライマー配列である。
配列番号:15,16,12は,pCAP-H1N1/HA1-gp64のPCR用プライマーgp64(272)-fとgp64(467)-fとGP64-DraIIIのプライマー配列である。
配列番号:17,18は,P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373)のプライマー配列である。
配列番号:19,20は,P. bergheiゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpAMA-F1とpAMA1-R1のプライマー配列である。
配列番号:21,22は,P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfCSP-F1とpPfCSP-R1のプライマー配列である。
配列番号:23,24は,P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfs25-F1とpPfs25-R2のプライマー配列である。
配列番号:25,26は,P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfMSP119-F1とpPfMSP119-R2のプライマー配列である。
配列番号:17,27は,pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号:28,27は,pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(76)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号:29は,P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列(ただし361番目のAをEに変換)からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列(PfCSP+)である。
配列番号:30,31は,人工合成遺伝子配列(PfCSP+)を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+209)とPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号:32,33,34,31は,人工合成遺伝子配列(PfCSP+)を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+76)とPfCSP-r(+128) とPfCSP-f(+209) BamHIとPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号:35は,インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号:36,37は,配列番号35の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号:38は,インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号:39,40は,配列番号38の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号:41,42,43,44、12は,pCAP-HA1/Vietnamを鋳型としたPCR用プライマーgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示),gp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示),gp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示),gp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示)のプライマー配列である。
配列番号:45は,インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号:46,47,48,49,50は,配列番号45の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示),AH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示),AH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示),AH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ,AH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号:51は,インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号:52,53,54,55,56は,配列番号51の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示),VN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示),VN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示),VN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ,VN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号:57は,Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い,作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号:58,59,60,61,62は,配列番号57の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-r(373) (5’-CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示),PfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号: 64,65,66,67は,BaculovirusゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーgp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示),及びvp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号:68,69は,pVSV-Gを鋳型としたPCR用プライマーVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
Claims (22)
- pCAP-PfCSP,pCAP-PfCSP/272,pCAP-PfCSP/467,pCAP-PfCSP(A361E),pCAP-PfCSP(A361E)/272,pCAP-PfCSP(A361E)/467,pCAP-PfCSP-76,pCAP-PfCSP-76/467,pCAP-PfCSP+209,pCAP-PfCSP+209/467,pCAP-PfCSP+76/209,pCAP-PfCSP+76/209/467,pCAP-HA1/Anhui,pCAP-HA1/Anhui/272,pCAP-HA1/Anhui/467,pCAP-HA1/Vietnam,pCAP-HA1/Vietnam/51,pCAP-HA1/Vietnam/101,pCAP-HA1/Vietnam/154,pCAP-HA1/Vietnam/201,pCAP-HA1/Vietnam/272,pCAP-HA1/Vietnam/467, pCAP-AH/345,pCAP-AH/345/467,pCAP-AH/410,pCAP-AH/410/467,pCAP-AH/473,pCAP-AH/473/467,pCAP-AH/520,pCAP-AH/520/467,pCAP-VN/346,pCAP-VN/346/467,pCAP-VN/410,pCAP-VN/410/467,pCAP-VN/473,pCAP-VN/473/467,pCAP-VN/520,pCAP-VN/520/467,pCAP-CO/full,pCAP-CO/full/467,pCAP-CO/19,pCAP-CO/19/467,pCAP-CO/76,pCAP-CO/76/467,pCAP-CO/205,pCAP-CO/205/467,pCA39-HA1/Anhui,pCA64-HA1/Anhui,pCA39-PfCSP(A361E),pCA64-PfCSP(A361E),pCAP-CO/full/VSV,pCAP-CO/19/VSV,pCAP-CO/76/VSV,pCAP-CO/205/VSV,pDual-Pfs25-PfCSP-gp64,pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかであるトランスファーベクター。
- AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467,AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhui,AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかである組換えバキュロウイルス。
- 請求項2の組換えバキュロウイルスを有効成分とする感染症用組成物。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、請求項2の組換えバキュロウイルスを有効成分として含む感染症用組成物。
- 請求項2の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、請求項3に記載の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
- AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、請求項7に記載のインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
- AcNPV-CAP-HA1/Anhui,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272,AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272,AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467, AcNPV-CAP-AH/345,AcNPV-CAP-AH/345/467,AcNPV-CAP-AH/410,AcNPV-CAP-AH/410/467,AcNPV-CAP-AH/473,AcNPV-CAP-AH/473/467,AcNPV-CAP-AH/520,AcNPV-CAP-AH/520/467,AcNPV-CAP-VN/346,AcNPV-CAP-VN/346/467,AcNPV-CAP-VN/410,AcNPV-CAP-VN/410/467,AcNPV-CAP-VN/473,AcNPV-CAP-VN/473/467,AcNPV-CAP-VN/520,AcNPV-CAP-VN/520/467,AcNPV-CA39-HA1/Anhui,AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、請求項7に記載のインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
- AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467, AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467, AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64を有効成分とするヒトマラリア感染症治療または予防剤。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与される、請求項11に記載のヒトマラリア感染症治療または予防剤。
- AcNPV-CAP-PfCSP,AcNPV-CAP-PfCSP/272,AcNPV-CAP-PfCSP/467,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272,AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467,AcNPV-CAP-PfCSP-76,AcNPV-CAP-PfCSP-76/467,AcNPV-CAP-PfCSP+209,AcNPV-CAP-PfCSP+209/467,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209,AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467, AcNPV-CAP-CO/full,AcNPV-CAP-CO/full/467,AcNPV-CAP-CO/19,AcNPV-CAP-CO/19/467,AcNPV-CAP-CO/76,AcNPV-CAP-CO/76/467,AcNPV-CAP-CO/205,AcNPV-CAP-CO/205/467, AcNPV-CA39-PfCSP(A361E),AcNPV-CA64-PfCSP(A361E),AcNPV-CAP-CO/full/VSV,AcNPV-CAP-CO/19/VSV,AcNPV-CAP-CO/76/VSV,AcNPV-CAP-CO/205/VSV,AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64,AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかを有効成分とするヒトマラリア感染症治療または予防剤。
- 筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする請求項13に記載のヒトマラリア感染症治療または予防剤。
- 請求項2に記載の組換えバキュロウイルス、請求項3または4に記載の感染症用組成物、請求項5、6、9,10,13または14に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、マラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法またはマラリアもしくはインフルエンザの治療方法。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、請求項15に記載の方法。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、請求項15に記載の方法 。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、請求項16に記載の方法 。
- 請求項2に記載の組換えバキュロウイルス、請求項3または4に記載の感染症用組成物、請求項5、6、9,10,13または14に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、免疫賦活方法 。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、請求項19に記載の方法。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、請求項19に記載の方法。
- 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内,経気道,または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、請求項20に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010504369A JP5409605B6 (ja) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | 新規ウイルスベクター |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007205785 | 2007-08-07 | ||
JP2007205785 | 2007-08-07 | ||
JP2010504369A JP5409605B6 (ja) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | 新規ウイルスベクター |
PCT/JP2008/064503 WO2009020236A2 (en) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | Baculoviral vectors with a dual vertebrate and baculovirus promoter controlling an immunogenic fusion gene |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010535466A true JP2010535466A (ja) | 2010-11-25 |
JP2010535466A5 JP2010535466A5 (ja) | 2011-08-18 |
JP5409605B2 JP5409605B2 (ja) | 2014-02-05 |
JP5409605B6 JP5409605B6 (ja) | 2014-03-26 |
Family
ID=
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016059911A1 (ja) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | 国立大学法人金沢大学 | マラリアワクチン |
WO2023157880A1 (ja) * | 2022-02-18 | 2023-08-24 | 国立大学法人金沢大学 | マラリアワクチン及びマラリア予防・治療方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002062381A1 (fr) * | 2001-02-05 | 2002-08-15 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Vaccin a vecteur de baculovirus |
WO2003020322A1 (de) * | 2001-09-04 | 2003-03-13 | DeveloGen Aktiengesellschaft für entwicklungsbiologische Forschung | Vektor zur induktion einer immunantwort |
JP2005015346A (ja) * | 2003-06-23 | 2005-01-20 | Hiroshi Takaku | バキュロウイルス含有抗ウイルス剤 |
US20050208066A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-09-22 | Yu-Chan Chao | Recombinant baculovirus and virus-like particle |
JP2006180865A (ja) * | 1994-03-31 | 2006-07-13 | Oxxon Therapeutics Ltd | マラリアペプチド |
JP2007023044A (ja) * | 1997-06-09 | 2007-02-01 | Oxxon Therapeutics Ltd | Cd8+t細胞免疫応答を発生するワクチン接種のための方法 |
WO2007027860A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Genvec, Inc. | Adenoviral vector-based malaria vaccines |
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006180865A (ja) * | 1994-03-31 | 2006-07-13 | Oxxon Therapeutics Ltd | マラリアペプチド |
JP2007023044A (ja) * | 1997-06-09 | 2007-02-01 | Oxxon Therapeutics Ltd | Cd8+t細胞免疫応答を発生するワクチン接種のための方法 |
WO2002062381A1 (fr) * | 2001-02-05 | 2002-08-15 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Vaccin a vecteur de baculovirus |
WO2003020322A1 (de) * | 2001-09-04 | 2003-03-13 | DeveloGen Aktiengesellschaft für entwicklungsbiologische Forschung | Vektor zur induktion einer immunantwort |
JP2005015346A (ja) * | 2003-06-23 | 2005-01-20 | Hiroshi Takaku | バキュロウイルス含有抗ウイルス剤 |
US20050208066A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-09-22 | Yu-Chan Chao | Recombinant baculovirus and virus-like particle |
WO2007027860A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Genvec, Inc. | Adenoviral vector-based malaria vaccines |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013034872; Molecular Therapy, 2007.01, Vol.15, No.1, p.193-202 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016059911A1 (ja) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | 国立大学法人金沢大学 | マラリアワクチン |
WO2023157880A1 (ja) * | 2022-02-18 | 2023-08-24 | 国立大学法人金沢大学 | マラリアワクチン及びマラリア予防・治療方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101772576A (zh) | 2010-07-07 |
RU2010108248A (ru) | 2011-09-20 |
BRPI0815034A2 (pt) | 2015-03-17 |
IL203411A (en) | 2017-01-31 |
CA2695894C (en) | 2016-09-20 |
WO2009020236A3 (en) | 2009-04-16 |
TW200911992A (en) | 2009-03-16 |
DK2191002T3 (en) | 2016-06-13 |
CA2695894A1 (en) | 2009-02-12 |
AP2010005146A0 (en) | 2010-02-28 |
IL203411A0 (en) | 2011-07-31 |
WO2009020236A2 (en) | 2009-02-12 |
TWI435934B (zh) | 2014-05-01 |
CN101772576B (zh) | 2016-05-04 |
AU2008284664A1 (en) | 2009-02-12 |
EP2191002B1 (en) | 2016-04-13 |
EP2191002A2 (en) | 2010-06-02 |
MY155412A (en) | 2015-10-15 |
ZA201000422B (en) | 2011-03-30 |
HK1142629A1 (zh) | 2010-12-10 |
JP5409605B2 (ja) | 2014-02-05 |
PE20090959A1 (es) | 2009-07-20 |
AR067833A1 (es) | 2009-10-21 |
AU2008284664B2 (en) | 2014-05-15 |
KR20100040947A (ko) | 2010-04-21 |
RU2491093C2 (ru) | 2013-08-27 |
MX2010001499A (es) | 2010-03-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4171930B2 (ja) | 新規ウイルスベクター | |
SG172184A1 (en) | Methods and compositions for use of a coccidiosis vaccine | |
US9327018B2 (en) | Recombinant baculovirus vaccine | |
AU2008284664B2 (en) | Baculoviral vectors with a dual vertebrate and baculovirus promoter controlling an immunogenic fusion gene | |
US9060972B2 (en) | Recombinant hemagglutinin protein of influenza virus and vaccine containing the same | |
JP5409605B6 (ja) | 新規ウイルスベクター | |
RU2588464C2 (ru) | Бакуловирусный вектор и его применение |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110628 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110628 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130716 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130913 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131015 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131105 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |