JP5409605B2 - 新規ウイルスベクター - Google Patents
新規ウイルスベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP5409605B2 JP5409605B2 JP2010504369A JP2010504369A JP5409605B2 JP 5409605 B2 JP5409605 B2 JP 5409605B2 JP 2010504369 A JP2010504369 A JP 2010504369A JP 2010504369 A JP2010504369 A JP 2010504369A JP 5409605 B2 JP5409605 B2 JP 5409605B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acnpv
- cap
- pfcsp
- pcap
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title description 100
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 80
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 272
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 50
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 36
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 35
- 101710141347 Major envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 30
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 20
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 24
- 241000701366 unidentified nuclear polyhedrosis viruses Species 0.000 claims 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 196
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 135
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 102
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 89
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 83
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 83
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 81
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 74
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 73
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 72
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 70
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 62
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 62
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 description 54
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 52
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 47
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 46
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 41
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 39
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 39
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 37
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 28
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 25
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 22
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 22
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 22
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 22
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 22
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 21
- 101150045064 gp64 gene Proteins 0.000 description 20
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 17
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 17
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 14
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 14
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 13
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 13
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 13
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 12
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 12
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 11
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 description 10
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- 101710117490 Circumsporozoite protein Proteins 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 241001505483 Plasmodium falciparum 3D7 Species 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 6
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 102100034330 Chromaffin granule amine transporter Human genes 0.000 description 5
- 101000641221 Homo sapiens Chromaffin granule amine transporter Proteins 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 101150101299 gene 4 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- 108010057081 Merozoite Surface Protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 4
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 101710088341 Dermatopontin Proteins 0.000 description 3
- 102100025800 E3 SUMO-protein ligase ZBED1 Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241001646725 Mycobacterium tuberculosis H37Rv Species 0.000 description 3
- 108700035964 Mycobacterium tuberculosis HsaD Proteins 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 101000983333 Plasmodium falciparum (isolate NF54) 25 kDa ookinete surface antigen Proteins 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 3
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000409811 Bombyx mori nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101000583086 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2b Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000224017 Plasmodium berghei Species 0.000 description 2
- 241000287530 Psittaciformes Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 2
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 101150026451 csp gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N docosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- -1 phosphate triester Chemical class 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQPKMEYBZUPZGK-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-azido-2-nitroanilino)methyl]-5-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-3-ol Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CNC=2C(=CC(=CC=2)N=[N+]=[N-])[N+]([O-])=O)=C1O KQPKMEYBZUPZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 235000021357 Behenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241001275954 Cortinarius caperatus Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101001111984 Homo sapiens N-acylneuraminate-9-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101900082162 Human immunodeficiency virus type 1 group M subtype B Surface protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 101900159346 Influenza A virus Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 102100023906 N-acylneuraminate-9-phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001465803 Orgyia pseudotsugata Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000224021 Plasmodium berghei ANKA Species 0.000 description 1
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 description 1
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 description 1
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010078233 Thymalfasin Proteins 0.000 description 1
- 102400000800 Thymosin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010065667 Viral Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940008309 acetone / ethanol Drugs 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004637 bakelite Substances 0.000 description 1
- 229940116226 behenic acid Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150086609 groEL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000011170 pharmaceutical development Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 210000004879 pulmonary tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N thymalfasin Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N 0.000 description 1
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/445—Plasmodium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
- C07K16/205—Plasmodium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
- C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は，新規なトランスファーベクター，該トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとが相同組換えされた組換えバキュロウイルス及びそれらの製造方法が提供される。
また，本発明は上記組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬（例えばワクチン，マラリア，インフルエンザウイルス感染症の予防または治療薬）に関する。
バキュロウイルスのベクターとしての使用は昆虫細胞を用いた目的タンパク質の工業的生産方法に利用されていた。近年，バキュロウイルスが昆虫細胞のみならず，哺乳動物において外来遺伝子を導入できることが分かり，治療用遺伝子導入ベクターの可能性が見出され特許文献1には，バキュロウイルスの初期遺伝子由来プロモーターにウイルス非構造タンパク質をコードする遺伝子を含むDNA領域と後期遺伝子由来のプロモーターにウイルスの構造タンパク質をコードする遺伝子を含むDNA領域からなる複数の独立したプロモーターを有する組換えバキュロウイルス発現ベクターが開示されている。
特許文献2には，複数の独立したプロモーターにそれぞれ所望の外来遺伝子が結合したベクターの外因性遺伝子が発現されるように制御されたプロモーターを含む非哺乳動物ＤＮＡウイルスを細胞に導入し，哺乳動物細胞内で外来遺伝子を発現させる方法が開示されている。
さらに，特許文献3には，バキュロウイルスを用いた遺伝子組換え技術によるタンパク質の生産方法について開示されており，バキュロウイルスのgp64遺伝子と所望のタンパク質をコードする遺伝子とが結合した融合遺伝子を発現させて，所望のタンパク質をウイルス粒子に融合させた形で生産し，所望のタンパク質が融合されたウイルス粒子を回収し，さらに該ウイルス粒子から所望のタンパク質を切断して回収するタンパク質の生産方法が開示されている。
特許文献4には，バキュロウイルス発現系について，宿主細胞において活性であり，かつ，非許容細胞において不活性である第1のプロモーターに機能しうる形が連結された検出マーカーをコードする 第1の核酸配列，および非許容細胞において活性である第２のプロモーターに機能しうる形で連結された外来核酸配列を含む第2の核酸配列を含んでなる，複数の独立したプロモーターを有する組換えバキュロウイルス発現ベクターが開示されている。
特許文献5には，チキンβアクチン由来のCAGプロモーターに連結されたインフルエンザウイルス・ヘマグルチニン（HA）抗原発現組換えバキュロウイルスベクターがインフルエンザウイルス感染予防効果を有することからワクチン製剤として有用であることが開示されている。
特許文献6には，バキュロウイルスプロモーターと哺乳動物細胞由来のプロモーターのそれぞれに細胞表面に発現可能なタンパク質をコードする遺伝子を連結させたプラスミド，または二組のバキュロウイルスプロモーターのそれぞれに細胞表面に発現可能なタンパク質をコードする遺伝子を連結させたプラスミドとを昆虫細胞にコトランスフェクトするコトランスフェクション工程を含むバキュロウイルスベクターの製造方法が開示されている。
特許文献7にはCAGプロモーターにインフルエンザウイルスHAのcDNAが組み込まれた組換えバキュロウイルスを用いたインフルエンザウイルス感染に対する抗インフルエンザウイルス活性の検討を開示しており，組換えバキュロウイルスだけでなく，野生型バキュロウイルスにも該活性を有することが開示されている。
このように近年，様々な組換えバキュロウイルスベクターが開発され，それらを用いた当該組換えバキュロウイルスを有効成分として，哺乳動物に対する医薬開発が検討されている。
当業界では，新規な構造を有する組換えバキュロウイルスベクターであって，インフルエンザウイルス，マラリア，結核などの感染症，或いは癌などの疾患に対して有効な新規な組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬製剤，特にワクチン製剤の開発が所望されている。
本発明の目的は，新規な組換えトランスファーベクター，当該組換えトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとが相同組換えされた組換えバキュロウイルス及びそれらの製造方法を提供することにある。また，本発明の他の目的は上記組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬，特にワクチン製剤を提供することにある。
本発明者らは，昆虫細胞中および脊椎動物（特に，哺乳類，鳥類など）細胞中の両者において所望の免疫原性を有するタンパク質，或いは部分タンパク質がウイルス構成タンパク質と融合して発現可能な新規な構造を有するトランスファーベクター，当該組換えトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとが相同組換えされた組換えバキュロウイルスを見出した。当該組換え体バキュロウイルスの提供により，効果的に疾患の感染予防，および／または治療効果を有する組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬について，鋭意研究を重ねた結果，当該組換えバキュロウイルスが，所望の医薬として効果を有することを新たに見出した。
そして，本発明によれば，新規な構造を有する組換えトランスファーベクター，当該組換えトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとが相同組換えされた組換えバキュロウイルスとそれらの製造方法，そして組換えバキュロウイルス自身が標的細胞中において所望の免疫原性を有するタンパク質を発現可能な医薬として，マラリア，インフルエンザウイルスなどの感染症の予防医薬として有効であることを確認しここに発明を完成した。
本発明は，下記項1−22に示される発明を提供する。
項1．pCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかであるトランスファーベクター。
項２．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかである組換えバキュロウイルス。
項３．項２の組換えバキュロウイルスを有効成分とする感染症用組成物。
項４．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与される、項２の組換えバキュロウイルスを有効成分として含む感染症用組成物。
項５．項２の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項６．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項３に記載の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項７．AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項８．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項７に記載のインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項９．AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項１０．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項７に記載のインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項１１．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467， AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467， AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64を有効成分とするヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項１２．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項１１に記載のヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項１３．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467， AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467， AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかを有効成分とするヒトマラリア感染症用ワクチン。
項１４．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項１３に記載のヒトマラリア感染症用ワクチン。
項１５． 項２に記載の組換えバキュロウイルス、項３または４に記載の感染症用組成物、項５、６、９，１０，１３または１４に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、マラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法またはマラリアもしくはインフルエンザの治療方法 。
項１６． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項１５に記載の方法。
項１７． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１５に記載の方法 。
項１８． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１６に記載の方法 。
項１９． 項２に記載の組換えバキュロウイルス、項３または４に記載の感染症用組成物、項５、６、９，１０，１３または１４に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、免疫賦活方法 。
項２０． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項１９に記載の方法。
項２１． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１９に記載の方法。
項２２． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項２０に記載の方法。
項1．pCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかであるトランスファーベクター。
項２．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかである組換えバキュロウイルス。
項３．項２の組換えバキュロウイルスを有効成分とする感染症用組成物。
項４．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与される、項２の組換えバキュロウイルスを有効成分として含む感染症用組成物。
項５．項２の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項６．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項３に記載の組換えバキュロウイルスを有効成分とするワクチン。
項７．AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項８．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項７に記載のインフルエンザウイルス感染症治療または予防剤。
項９．AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhuiのいずれかを有効成分とするインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項１０．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項７に記載のインフルエンザウイルス感染症用ワクチン。
項１１．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467， AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467， AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64を有効成分とするヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項１２．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項１１に記載のヒトマラリア感染症治療または予防剤。
項１３．AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467， AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467， AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかを有効成分とするヒトマラリア感染症用ワクチン。
項１４．筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで投与されることを特徴とする項１３に記載のヒトマラリア感染症用ワクチン。
項１５． 項２に記載の組換えバキュロウイルス、項３または４に記載の感染症用組成物、項５、６、９，１０，１３または１４に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、マラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法またはマラリアもしくはインフルエンザの治療方法 。
項１６． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項１５に記載の方法。
項１７． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１５に記載の方法 。
項１８． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１６に記載の方法 。
項１９． 項２に記載の組換えバキュロウイルス、項３または４に記載の感染症用組成物、項５、６、９，１０，１３または１４に記載のワクチンの有効量を、被験体に投与することを含む、免疫賦活方法 。
項２０． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンがリポソーム製剤として被験体に投与されることを特徴とする、項１９に記載の方法。
項２１． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項１９に記載の方法。
項２２． 前記組換えバキュロウイルス、組成物もしくはワクチンが筋肉内，経気道，または経鼻的のいずれかのルートで被験体に投与される、項２０に記載の方法。
本発明によれば，新規な組換えトランスファーベクター，当該組換えトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとが相同組換えされた組換えバキュロウイルス及びそれらの製造方法が提供される。本発明の組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬は，マラリア，インフルエンザウイルスなどの感染症等の治療及び／又は予防薬として，或いは細胞医療やワクチン製剤として有用である。
本明細書におけるアミノ酸，ペプチド，塩基配列，核酸などの略号による表示は，IUPAC-IUBの規定[IUPAC-IUB Communication on Biological Nomenclature， Eur. J. Biochem.， 138: 9(1984)]，「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」(特許庁編)および当該分野における慣用記号に従うものとする。本明細書において，DNA分子とは，2本鎖DNAのみならず，それを構成するセンス鎖およびアンチセンス鎖という各1本鎖DNAを包含する趣旨であり，またその全長に制限されるものではない。従って，本発明免疫原性外来遺伝子をコードするポリヌクレオチド（DNA分子）には，特に言及しない限り，ゲノムDNAを含む2本鎖DNAおよびcDNAを含む1本鎖DNA（センス鎖）並びに該センス鎖と相補的な配列を有する1本鎖DNA（アンチセンス鎖）および合成DNA，それらの断片のいずれもが含まれる。
本明細書において，ポリヌクレオチドまたはDNA分子は，機能領域の別を問うものではなく，発現抑制領域，コード領域，リーダー配列，エキソンおよびイントロンのいずれか少なくともひとつを含むことができる。
また，ポリヌクレオチドの例には，RNAおよびDNAが含まれる。特定アミノ酸配列からなるポリペプチドおよび特定DNA配列を含むポリヌクレオチドには，それらの断片，同族体，誘導体および変異体が含まれる。
ポリヌクレオチドの変異体，例えば変異体DNAの例には，天然に存在するアレル変異体；人工変異体；欠失，置換，付加および挿入がなされた変異体などが含まれる。但し，これらの変異体は，変異前のポリヌクレオチドがコードするポリペプチドの機能と実質的に同じ機能を有するポリペプチドをコードするものとする。
本発明において，トランスファーベクターとは一方が脊椎動物プロモーター（哺乳動物プロモーターや鳥類のプロモーター）と他方がバキュロウイルスのプロモーターである２つのプロモーターが連結したデュアル・プロモーターの下流に，少なくとも一つのウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質をコードする遺伝子と，少なくとも一つの免疫原性外来遺伝子とが連結した融合遺伝子が組み込まれた構造体を含む組換えバキュロウイルスを製造するためのプラスミドをいう。
本発明の好ましい一つの実施形態においては，免疫原性外来遺伝子がデュアル・プロモーターの下流であって，ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質をコードする遺伝子の上流側に位置するのがよい。また，本発明の組換えバキュロウイルスは医薬，あるいはワクチンの有効成分として，脊椎動物に用いられる。該脊椎動物としては，ヒトを含む哺乳動物，例えばウシ，ウマ，ブタ，ヒツジ，ヤギ，サル，マウス，イヌ，ネコなどを例示でき，鳥類としては，ニワトリ，ウズラ，ガチョウ，カモ，ハト，七面鳥，ホロホロチョウ，オウムなどを例示できる。
1つの実施形態において，本発明は，一方が脊椎動物プロモーターで他方がバキュロウイルスのプロモーターである連結したデュアル・プロモーターの制御下に，昆虫細胞で発現可能なウイルス膜タンパク質をコードする遺伝子と，一つの免疫原性外来遺伝子とを含む融合遺伝子が組み込まれた新規な構造体を含むトランスファーベクターを提供する。このトランスファーベクターを，昆虫細胞中でバキュロウイルスDNAとコトランスフェクトすることにより，相同組換えを誘発し，バキュロウイルスのプロモーターの制御下にあり，昆虫細胞で発現し，発芽したウイルス粒子の構成成分となり得る融合タンパク質を産生することが可能な前記融合遺伝子をバキュロウイルスに組み込んだ組換えバキュロウイルスを得ることができる。
本発明において組換えバキュロウイルスを脊椎動物に投与すると発芽したウイルス粒子の構成成分となり得るタンパク質と免疫原性タンパク質との融合タンパク質がコンポーネントワクチンとして機能する。さらに，脊椎動物に投与された組換えバキュロウイルスが脊椎動物細胞に侵入し，ウイルスゲノムから脊椎動物細胞内で目的免疫原性外来抗原との融合抗原が産生され，DNAワクチンとして機能する。
従って，例えば哺乳動物の場合，本発明の組換えバキュロウイルスを哺乳動物に投与することにより，ウイルス粒子の構成成分となり得るタンパク質と免疫原性タンパク質との融合タンパク質がウイルス表面に抗原として提示され，ウイルス粒子の構成成分となり得るタンパク質と免疫原性タンパク質との融合タンパク質が哺乳動物の細胞内で産生され，その免疫賦活作用により，ウイルス感染症，原虫感染症，細菌感染症などの予防ないし治療剤として機能すると考えられる。
トランスファーベクターとコトランスフェクトされるバキュロウイルスDNAは，野生型，変異型，及び組換えバキュロウイルスDNAのいずれであってもよい。コトランスフェクトされる宿主細胞として，例えばヨトウガ細胞（Spodoptera frugiperda）などの昆虫細胞が挙げられる。
なお，本発明においては，マラリアやインフルエンザウイルスなどの感染症などの予防・治療のためのワクチン療法を含めた免疫療法の免疫原となる抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子，例えばマラリア抗原やインフルエンザウイルス抗原などのタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子を免疫原性外来遺伝子という。
ここで，「外来」遺伝子とは，外部から導入した遺伝子を意味し，同一の遺伝子が細胞内にあったとしても，「外来」遺伝子に該当する。
本発明において，上記免疫原となるタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子は感染症などの疾患起因物質に対する免疫原性を有する抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子である限り，抗原タンパク質のアミノ酸配列をコートずる遺伝子としては特に限定されない。これら免疫原性を有する抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子の一例としては，以下が挙げられる。
マラリア抗原のアミノ酸配列をコードする遺伝子としては，マラリア原虫のスポロゾイト表面の表面抗原CSP（Circumsporozoite Protein），メトロゾイト表面の膜タンパク質のMSP1（Merozoite Surface Protein 1），マラリア感染赤血球から分泌されるマラリアＳ抗原，マラリア感染赤血球のノブに存在するPfEMP1タンパク質，SERAタンパク質，TRAMPタンパク質，AMA1タンパク質などのタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子を例示できる。
インフルエンザウイルス抗原のアミノ酸配列をコードする遺伝子としては，HA抗原（ヘマグルチニン抗原），NA抗原（ノイラミニダーゼ抗原），M2抗原（マトリックスプロテイン抗原），NP抗原（ヌクレオプロテイン抗原）などのタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子が例示できる。
脊椎動物の遺伝子のうち，哺乳動物遺伝子としては，ヒト，ウシ，ウマ，ブタ，ヒツジ，サル，マウス，イヌ，ネコなどの感染症の抗原タンパク質をコードする遺伝子が例示でき，鳥類遺伝子としては，ニワトリ，カモ，ハト，七面鳥，ホロホロチョウ，オウムなどの感染症の抗原遺伝子（例えばトリインフルエンザHA抗原）が例示できる。
前記の哺乳動物，鳥類の感染症との関連が報告されている病原体遺伝子はGenbankなどの病原体遺伝子が登録されている公共のデータを保存している機関から容易に入手できる。
本発明では，これら免疫原性外来遺伝子を有するトランスファーベクター，並びにその相同組換された組換えバキュロウイルスを提供でき，該免疫原性外来遺伝子を含有する組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬組成物，前記医薬組成物からなるワクチン製剤を提供することが出来る。
本発明に用いるバキュロウイルスは，昆虫に感染を起す昆虫病原ウイルスで環状の二本鎖DNAを遺伝子として保有するDNAウイルスの一群（バキュロウイルス科）である。その中で，核多角体病ウイルス（Nuclear Polyhedorosis Virus: NPV）といわれる一群のウイルスは感染後期には感染細胞の核内に多角体と呼ばれる封入体を作る。多角体遺伝子の代わりに発現したい外来遺伝子を挿入してもウイルスは問題なく感染，増殖し，所望の外来遺伝子産物を大量に産生することから，近年所望のタンパク質の製造に応用されている。
前記本発明に用いられるバキュロウイルスとしては，オートグラファ核多角体病ウイルス（Autographa californica nucleopolyhedrosis virus: AcNPV），およびカイコガ核多角体病ウイルス（Bombyx mori nucleopolyhedrosis virus: BmNPV），オルギア・シュードツガタ核多角体病ウイルス（Orgyia pseudotsugata nucleopolyhedrosis virus: OpNPV），マイマイガ核多角体病ウイルス（Lymantria dispernucleopolyhedrosis virus: LdNPV）を例示できる。
バキュロウイルスDNAは，本発明のトランスファーベクターとの相同組換えを起こすことができるものであればよい。具体的には，本発明のトランスファーベクターとの相同組換えを起こすことができるバキュロウイルスDNAのウイルス遺伝子は130kbpと巨大であり，15kbp以上の免疫原性外来遺伝子を挿入できる。また，バキュロウイルス遺伝子自体は脊椎動物細胞では，殆ど発現しないため，細胞傷害性を殆ど考慮することなく，従って，有害な免疫応答の誘導もないと考えられる。
(1) 本発明のトランスファーベクターおよびトランスファーベクターの製造
免疫原性外来遺伝子ＤＮＡの製造
バキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるウイルス遺伝子に融合可能な免疫原性外来遺伝子ＤＮＡの製造法は，本明細書に開示された目的とする免疫原性を有する抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの核酸配列情報に基づいて合成するか，或いは免疫原性外来遺伝子の核酸配列情報に基づいて該免疫原性外来遺伝子のコード領域の核酸配列に相当するDNAをそのまま合成することにより（化学的DNA合成法），容易に製造，取得することができる。この製造には，一般的遺伝子工学的手法が適用できる[例えば，Molecular Cloning 2d Ed， Cold Spring Harbor Lab. Press(1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法I，II，III」，日本生化学会編(1986)など参照]。
(1) 本発明のトランスファーベクターおよびトランスファーベクターの製造
免疫原性外来遺伝子ＤＮＡの製造
バキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるウイルス遺伝子に融合可能な免疫原性外来遺伝子ＤＮＡの製造法は，本明細書に開示された目的とする免疫原性を有する抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの核酸配列情報に基づいて合成するか，或いは免疫原性外来遺伝子の核酸配列情報に基づいて該免疫原性外来遺伝子のコード領域の核酸配列に相当するDNAをそのまま合成することにより（化学的DNA合成法），容易に製造，取得することができる。この製造には，一般的遺伝子工学的手法が適用できる[例えば，Molecular Cloning 2d Ed， Cold Spring Harbor Lab. Press(1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法I，II，III」，日本生化学会編(1986)など参照]。
また，該DNAの合成方法としては，リン酸トリエステル法，リン酸アミダイト法などの化学合成手段[J. Am. Chem. Soc.， 89，4801(1967)；同91，3350(1969)；Science， 150， 178(1968)；Tetrahedron Lett.， 22， 1859(1981)；同24， 245(1983)]およびそれらの組合せ方法が例示できる。より具体的には，該DNAは，ホスホルアミダイト法またはトリエステル法によって化学合成することもでき，市販されている自動オリゴヌクレオチド合成装置を利用して合成することもできる。二本鎖断片は，相補鎖を合成し，適当な条件下で該相補鎖を化学合成した一本鎖とアニーリングさせるか，または適当なプライマー配列と共にDNAポリメラーゼを用いて該相補鎖を化学合成した一本鎖に付加することによって得ることができる。
本発明において製造される免疫原性外来遺伝子DNAの具体的一態様としては，マラリア抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列やインフルエンザウイルス抗原タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列からなるDNAを例示できる。
なお，本発明において利用されるDNAは，前記免疫原性を有する抗原タンパク質のポリペプチドのアミノ酸配列をコードするDNA配列の全長DNA配列に限定されず，DNA配列によってコードされるアミノ酸配列のタンパク質が抗原性を有する限り，部分配列をコードするDNA配列であってもかまわない。
本発明に用いられる免疫原性外来遺伝子のDNAは，かかる特定のDNA配列を有するDNA分子に限らず，各アミノ酸残基に対して任意のコドンを組合せ，選択したDNA配列を有することも可能である。コドンの選択は，常法に従うことができる。その際には例えば利用する宿主のコドン使用頻度などを考慮することができる[Nucleic Acids Res.， 9，43(1981)]。
遺伝子工学的手法による本発明に用いられる免疫原性外来遺伝子のDNAの製造は，より具体的には，免疫原性外来遺伝子のDNAが発現される適当な起源より，常法に従ってcDNAライブラリーを調製し，該ライブラリーから免疫原性外来遺伝子のDNAに特有の適当なプローブや発現物に対する抗体を用いて所望クローンを選択することにより実施できる[Proc. Natl. Acad. Sci.， USA.， 78， 6613(1981)；Science， 222， 778(1983)など参照]。
上記において，ゲノムDNAの起源としては，免疫原性外来遺伝子のDNAを発現する各種細胞，組織，これらに由来する培養細胞などを例示することができる。特に，マラリア原虫が感染した感染赤血球抽出物やインフルエンザウイルス感染細胞抽出物などを起源とするのが望ましい。該起源からの全DNAやRNAの抽出および分離，mRNAの分離および精製，cDNAの取得およびそのクローニングなどは，いずれも常法に従って実施することができる。
免疫原性外来遺伝子のDNAの製造は，上述したとおり，前記抽出物を起源として，免疫原組織・細胞のmRNAを抽出・分離・精製して得られる各免疫原のcDNAライブラリーを用いて実施する他にも，例えば上記各免疫原のmRNAを抽出後，当該RNAにポリAを付加した後，当該ポリA付加RNAを集め，逆転写酵素を用いてcDNAを製造し，当該cDNAの両端に制限酵素部位を付加後，ファージに組み込んで調製したファージライブラリーを用いても実施することができる。
免疫原性外来遺伝子のDNAをcDNAのライブラリーからスクリーニングする方法も，特に制限されず，通常の方法に従うことができる。具体的方法としては，例えばcDNAによって産生されるタンパク質に対する特異抗体（例えば，抗マラリア抗体や抗インフルエンザウイルス抗体）を使用した免疫的スクリーニングによって対応するcDNAクローンを選択する方法；目的のDNA配列に選択的に結合するプローブを用いるプラークハイブリダイゼーション法；コロニーハイブリダイゼーション法など；およびこれらの組合せを例示することができる。
上記各ハイブリダイゼーション法において用いられるプローブとしては，免疫原性外来遺伝子のDNA配列に関する情報を基にして化学合成されたDNA断片などが一般的である。また，既に取得された免疫原性外来遺伝子およびその断片のDNA配列も上記プローブとして有利に利用できる。更に，免疫原性外来遺伝子のDNA配列情報に基づき設定したセンス・プライマーおよびアンチセンス・プライマーを，上記スクリーニング用プローブとして用いることもできる。
プローブとして用いられるDNA（ヌクレオチド）は，免疫原性外来遺伝子のDNA配列に対応する部分DNA（ヌクレオチド）であって，少なくとも15個の連続したDNA，好ましくは少なくとも20個の連続したDNA，より好ましくは少なくとも30個の連続したDNAを有するものである。前記したDNAの製造のための陽性クローン自体もプローブとして用いることができる。
免疫原性外来遺伝子のDNAの取得に際しては，PCR法[Science， 230， 1350(1985)]によるDNA/RNA増幅法が好適に利用できる。殊に，ライブラリーから全長のcDNAが得難い場合には，RACE法[Rapid amplification of cDNA ends；実験医学，12(6)，35(1994)]，特に5'-RACE法[M. A. Frohman et al.，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA.，8，8998(1988)] などの採用が好適である。
PCR法に用いられるプライマーは，免疫原性外来遺伝子のDNA配列情報に基づいて適宜設定し，常法に従って合成することができる。尚，このプライマーとしては，後記実施例に示すように，免疫原性外来遺伝子のDNAが組み込まれたベクタープラスミドの該DNAの両端に付加したDNA部分（SP6 プロモーター・プライマーおよびT7ターミネーター・プライマー）も使用することができる。
尚，PCR法で増幅させたDNA/RNA断片の単離精製は，常法に従い例えばゲル電気泳動法などによって実施することができる。
上記の如くして得られる免疫原性外来遺伝子のDNA或いは各種DNA断片は，常法，例えばジデオキシ法[Proc. Natl. Acad. Sci.， USA.， 74， 5463(1977)]，マキサム-ギルバート法[Methods in Enzymology， 65， 499(1980)]などに従って，また簡便には市販のシークエンスキットなどを用いて，そのDNA配列を決定することができる。
上記の如くして得られる免疫原性外来遺伝子のDNA或いは各種DNA断片は，常法，例えばジデオキシ法[Proc. Natl. Acad. Sci.， USA.， 74， 5463(1977)]，マキサム-ギルバート法[Methods in Enzymology， 65， 499(1980)]などに従って，また簡便には市販のシークエンスキットなどを用いて，そのDNA配列を決定することができる。
ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子としては，目的の細胞で上記免疫原性外来遺伝子と融合して融合タンパク質として，昆虫細胞においてウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質として発現可能なタンパク質をコードする遺伝子であれば，何れでもよい。
前記ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子としては，例えば，gp64タンパク質（GenBank Accession No. L22858），水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質G（VSVG：GenBank Accession No. J02428），単純ヘルペスウイルス糖タンパク質（KOS：GenBank Accession No. K01760），1型ヒト免疫不全ウイルスgp120 （GenBank Accession No. U47783），ヒト呼吸器合胞体ウイルス膜糖タンパク質（GenBank Accession No. M86651），A型インフルエンザウイルスヘマグルチニンタンパク質（GenBank Accession No. U38242）などの遺伝子，或いはバキュロウイルスに近縁のウイルスエンベロープタンパク質などの遺伝子を例示できる。本発明においては，後記実施例に示されるgp64遺伝子を好ましく例示できる。
上記ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子のＤＮＡの製造は，前記免疫原性外来遺伝子のDNAの製造と同様に，目的とするウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子のポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの核酸配列情報に基づいて合成するか，或いはウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子のアミノ酸配列情報に基づいて該アミノ酸配列をコードする核酸配列に相当するDNAをそのまま合成することにより（化学的DNA合成法），容易に製造，取得することができる。
ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする核酸配列に相当するDNA配列はコード領域の全長に限定されず，部分的DNA配列からなるDNAであってもよい。
前記した免疫原性外来遺伝子のDNA分子の製造の場合と同様，一般的遺伝子工学的手法を用いて，ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子のＤＮＡを製造することが出来る。[例えば，Molecular Cloning 2d Ed， Cold Spring Harbor Lab. Press(1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法I，II，III」，日本生化学会編(1986)など参照]。
本発明においては，後記する免疫原性外来遺伝子の発現を制御するプロモーターの一部が既に組み込まれ，ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸をコードする遺伝子（の一部）が予め導入された市販のベクタープラスミドを用いることもできる。
脊椎動物プロモーター
本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである脊椎動物プロモーター（脊椎動物細胞で機能し得るプロモーター）としては，哺乳動物プロモーターや鳥類のプロモーターなどのプロモーターを例示できる。
本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである脊椎動物プロモーター（脊椎動物細胞で機能し得るプロモーター）としては，哺乳動物プロモーターや鳥類のプロモーターなどのプロモーターを例示できる。
哺乳動物プロモーター
また，本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである哺乳動物プロモーター（哺乳動物細胞で機能し得るプロモーター）としては，サイトメガロウイルスプロモーター，SV40プロモーター，レトロウイルスプロモーター，メタロチオネインプロモーター，ヒートショックプロテインプロモーター，CAGプロモーター，エロンゲーションファクター1αプロモーター，アクチンプロモーター，ユビキチンプロモーター，アルブミンプロモーター，MHCプロモーターなどを例示できる。
また，本発明に用いられるトランスファーベクターの構成成分の一つである哺乳動物プロモーター（哺乳動物細胞で機能し得るプロモーター）としては，サイトメガロウイルスプロモーター，SV40プロモーター，レトロウイルスプロモーター，メタロチオネインプロモーター，ヒートショックプロテインプロモーター，CAGプロモーター，エロンゲーションファクター1αプロモーター，アクチンプロモーター，ユビキチンプロモーター，アルブミンプロモーター，MHCプロモーターなどを例示できる。
鳥類のプロモーター
鳥類のプロモーターとしては，βアクチンプロモーター，ヒートショックプロテインプロモーター，エロンゲーションファクタープロモーター，ユビキチンプロモーター，アルブミンプロモーターを例示できる。
鳥類のプロモーターとしては，βアクチンプロモーター，ヒートショックプロテインプロモーター，エロンゲーションファクタープロモーター，ユビキチンプロモーター，アルブミンプロモーターを例示できる。
バキュロウイルスプロモーター
本発明に用いられるバキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるバキュロウイルスプロモーターとしては，ポリヘドリンプロモーター，p10プロモーター，IE1プロモーター，p35プロモーター，vp39プロモーター，gp64プロモーター等を例示できる。
本発明に用いられるバキュロウイルストランスファーベクターの構成成分の一つであるバキュロウイルスプロモーターとしては，ポリヘドリンプロモーター，p10プロモーター，IE1プロモーター，p35プロモーター，vp39プロモーター，gp64プロモーター等を例示できる。
組換えトランスファーベクターの製造
本発明は，昆虫細胞と脊椎動物細胞，特に哺乳動物細胞の両者の細胞において目的とする免疫原性外来遺伝子を抗原タンパク質として発現可能な新規な構造を有する新規なトランスファーベクターに関する。本発明において，作製される新規なトランスファーベクターの構造は，一方が脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターで，他方がバキュロウイルスのプロモーターであり，これらが連結された下流に所望の免疫原性タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とが連結した構造を有する。連結される脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターの２つのプロモーターのDNA配列を含むDNA領域は，直接連結してもよいし，互いのプロモーターのDNA配列の間に介在DNA配列が存在してもよい（ただし，この場合には互いのプロモーターが昆虫細胞と脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物細胞においてプロモーター活性を有する必要がある）。また，連結される脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターは，プロモーター領域においていずれが発現させる遺伝子に近い方に配置されてもよい，後記実施例においては，バキュロウイルスプロモーターが哺乳動物プロモーターよりも発現させる遺伝子に近い方に位置する構造で作製されている。
本発明は，昆虫細胞と脊椎動物細胞，特に哺乳動物細胞の両者の細胞において目的とする免疫原性外来遺伝子を抗原タンパク質として発現可能な新規な構造を有する新規なトランスファーベクターに関する。本発明において，作製される新規なトランスファーベクターの構造は，一方が脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターで，他方がバキュロウイルスのプロモーターであり，これらが連結された下流に所望の免疫原性タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードするDNA配列とが連結した構造を有する。連結される脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターの２つのプロモーターのDNA配列を含むDNA領域は，直接連結してもよいし，互いのプロモーターのDNA配列の間に介在DNA配列が存在してもよい（ただし，この場合には互いのプロモーターが昆虫細胞と脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物細胞においてプロモーター活性を有する必要がある）。また，連結される脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターとバキュロウイルスプロモーターは，プロモーター領域においていずれが発現させる遺伝子に近い方に配置されてもよい，後記実施例においては，バキュロウイルスプロモーターが哺乳動物プロモーターよりも発現させる遺伝子に近い方に位置する構造で作製されている。
該構造においてウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質をコードする遺伝子と，所望の免疫原性外来遺伝子とを含む融合遺伝子のDNA配列は，これらの２つの遺伝子を直接連結したDNA配列からなるものであってもよいし，これらの間に介在DNA配列が存在していてもよい（ただし，この場合には下流側の遺伝子と上流側の遺伝子がフレームシフトを起こさないように配置される必要がある）。所望の免疫原性を有する外来遺伝子のタンパク質の抗原提示領域が，ウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質と融合されることが好ましいことから，所望の免疫原性を有する外来遺伝子のタンパク質をウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質から切り離すことなく該タンパク質と融合された形態で用いることが必要である。
また，これらの2つの遺伝子を含む融合遺伝子を予め形成し，これをベクターに組み込んでも良いし，先にいずれか一方の遺伝子をベクターに組み込み，次いで，他の遺伝子をベクターに組み込んでベクター内で融合遺伝子を形成してもよい。
上記操作は，本発明のトランスファーベクターとしての必要とする構成の一部である上記した脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターやバキュロウイルスプロモーター等のプロモーター領域やウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子領域を既に有する市販の発現ベクターをそれぞれ使用し，任意に制限酵素で切り出し，別のプロモーターを組み込むなどして，該ベクターのクローニング領域に所望の免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子とが融合したDNA配列を挿入するか，或いは所望の免疫原性外来遺伝子を既にプラスミドに組み込まれているウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子のDNA領域のＮ末端側に挿入するなどして，必要な構成要素を挿入することができる。
本発明においては，本発明の昆虫細胞と脊椎動物細胞，特に哺乳動物細胞の両者の細胞において所望の免疫原性外来遺伝子を抗原タンパク質として発現可能な構造を有するプラスミドベクターの，これら一部を既に満足する構成を有する市販のプラスミドを用いて製造してもよい。脊椎動物細胞内で酵素により融合タンパク質を開裂させるためのペプチドのアミノ酸配列を介在させてもよい。また，本発明のトランスファーベクターは，二つのプロモーター領域の上流には，脊椎動物，特に哺乳動物細胞における転写活性を上昇させるためのエンハンサーを配置しても良く，また発現したタンパク質の宿主外分泌を促すためのシグナル・ペプチドのアミノ酸配列をコードするDNA配列を融合発現させる遺伝子に結合させてもよい。また，融合発現させる遺伝子の下流には，例えば脊椎動物細胞において有効なウサギβグロブリンターミネーターのような脊椎動物ターミネーター領域を転写終了のために有するものであってもよい。
かくして所望の免疫原性をバキュロウイルス粒子中に発現可能な免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子が融合した形態で，発現可能なトランスファーベクターを製造することができる。
本発明のトランスファーベクター及びその製造方法の具体的な一例は，後記実施例に示されるように，脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターとしてサイトメガロウイルス（CMV）プロモーターが改良されたCAGプロモーターが接合したプロモーターと，バキュロウイルスプロモーターとしてポリヘドリン（polh）のプロモーター，vp39プロモーター，gp64プロモーターなどとが連結され，外来遺伝子として，インフルエンザウイルス抗原遺伝子，マラリア抗原遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子としてgp64抗原遺伝子とのDNA配列が融合したDNA配列が挿入された構造からなるトランスファーベクターがpCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64として例示できる。
(2)組換えバキュロウイルスの製造
また本発明は，一方が脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターで，他方がバキュロウイルスのプロモーターである連結したデュアル・プロモーターの下流に連結された，少なくとも一つのウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子と，少なくとも一つの免疫原性外来遺伝子とを含む融合遺伝子が組み込まれた構造体からなるトランスファーベクターを製造する工程，該トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとを宿主細胞にコトランスフェクションする工程からなる，組換えバキュロウイルスを分離する工程を含む，組換えバキュロウイルスの製造方法を提供する。
(2)組換えバキュロウイルスの製造
また本発明は，一方が脊椎動物のプロモーター，特に哺乳動物プロモーターで，他方がバキュロウイルスのプロモーターである連結したデュアル・プロモーターの下流に連結された，少なくとも一つのウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子と，少なくとも一つの免疫原性外来遺伝子とを含む融合遺伝子が組み込まれた構造体からなるトランスファーベクターを製造する工程，該トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとを宿主細胞にコトランスフェクションする工程からなる，組換えバキュロウイルスを分離する工程を含む，組換えバキュロウイルスの製造方法を提供する。
上記組換えバキュロウイルスの製造方法において，所望の組換えDNA（トランスファーベクター）の宿主細胞への導入法およびこれによる形質転換法としては，特に限定されず一般的なこの分野で周知慣用技術となっている各種方法を採用することができ，例えば通常の遺伝子組換え技術（例えば， Science， 224，1431 (1984); Biochem. Biophys. Res. Comm.，130，692(1985); Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 80，5990 (1983)）に従って調製することができる。組換えDNA（トランスファーベクター）の発現方法は，大野らの「タンパク実験プロトコール１機能解析編，細胞工学別冊，実験プロトコールシリーズ，1997年，秀潤社」を参考に製造することができる。また，昆虫細胞の取扱い方，遺伝子組換え，コトランスフェクションの一般的手法は，周知の昆虫細胞の組換えウイルス作製法と同様の手法を用いることができる(BACULOVIRUS EXPRESSION VECTORS : A LABORATORY MANUAL, Oxford University Press, 1994)。
得られる組換えバキュロウイルスは，常法に従い培養でき，該培養により所望のように設計した本発明における免疫原性外来遺伝子のDNAとウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードするDNAとが融合した融合物（発現物）が，昆虫細胞の細胞内，細胞外または細胞膜上に発現，生産（蓄積，分泌）される。
培養に用いられる培地としては，採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択利用でき，培養も宿主細胞の生育に適した条件下で実施できる。
組換えバキュロウイルスの製造方法は，より詳しくは，上記で製造されたトランスファーベクターと相同組換えを行うためのバキュロウイルスDNAを準備する工程と該トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとをSpodoptera frugiperda由来の Sf-9細胞，Sf-21細胞，イラクサギンウワバ（Trichoplusia ni）由来のTn5細胞（High Five細胞：Invitrogen）などの昆虫細胞を宿主細胞とする細胞中にコトランスフェクションする工程からなる。
上記で製造されたトランスファーベクターと相同組換えを行うためのバキュロウイルスDNAは，野生型，変異型，或いは組換えバキュロウイルスDNAの何れでもよい。バキュロウイルスDNAは，本発明のトランスファーベクターとの相同組換えを起こすことができるように，デュアル・プロモーター領域のDNAと免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子とが融合した融合遺伝子のDNAを挟んだバキュロウイルス由来DNAと相同であるDNA構造を有する限り，相同組換えの確率を高めることができる。
相同組換えを起こすためには，トランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとの重量比は，例えば1：1〜10：1程度で混合するのがよい。
コトランスフェクション工程により昆虫細胞に同時に導入後，培養した後，前記培養上清からウイルスのプラークを作製した後，培養液に浮遊させ，ボルテックスして寒天よりウイルスを溶出させ，遠心分離し，組換えウイルスを含む溶液を得る。
上記においてバキュロウイルスDNAは，市販品を用いてもよく，例えば，AcNPVよりポリへドリン遺伝子が除かれているBacVector-1000 DNAやBacVector-2000 DNA（Novagen）などを使用できる。
これら上記で得られたトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAを昆虫細胞において相同組換えのためのコトランスフェクションは，上記したように市販のベクタートランスフェクションキット（BacVector Transfection Kits: Novagen）を用いて，該ベクタートランスフェクションキットに付属の取扱書に従い実施することができる。かくして，上記で製造されたトランスファーベクターはバキュロウイルスDNAと共にSf-9細胞などの昆虫細胞にコトランスフェクトされた組換えバキュロウイルスを得ることができる。
本発明においては，上記組換えバキュロウイルスの製造方法に従い，pCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかのトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとを用いてSf-9昆虫細胞においてコトランスフェクションし，AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスを得た。
上記の組換えバキュロウイルスの製造法のほか，他の組換えバキュロウイルスの作製方法としては，全バキュロウイルスゲノムを組み込んだファージミド（バクミド）にトランスポゾンを利用して，大腸菌体内で効率よく外来遺伝子を挿入できる方法も使用できる。
当該方法によればウイルス遺伝子を持ったバクミドを菌体から抽出し，昆虫細胞にトランスフェクトするだけで容易に組換えバキュロウイルス製造し，回収することができる。
上記組換えバキュロウイルスの製造方法で得られた本発明の組換えバキュロウイルス精製は，公知のウイルス精製法を用いて行うことができる。
組換えバキュロウイルスの精製は，例えば，Sf-9細胞などの昆虫細胞（1 x 10７個/10cm皿）に上記組換えバキュロウイルスの製造方法で得られたストックウイルス（通常1 x 107-8pfu/ml）を0.5〜1.0ml接種し，感染数日後に培養上清を回収した後，遠心分離して得られたウイルスペレットをPBSなどの緩衝液に懸濁する。得られた懸濁液を10〜60%のショ糖密度勾配にかけた後，更に遠心分離（25000rpm，60分間，4℃の条件）してウイルスバンドで回収する。回収物を更にPBSに懸濁後，続いて遠心分離（同上）し，得られた精製組換え体ウイルスのペレットをPBS等の緩衝液中に4℃で保存する。
なお，上記で得られた精製組換え体ウイルスの感染価は，Sf-9細胞などの昆虫細胞を用いて，プラークアッセイにて測定できる（BACULOVIRUS EXPRESSION VECTORS : A LABORATORY MANUAL, Oxford University Press, 1994）。
本実施例で例示した組換えウイルスでは，バキュロウイルスタンパク質gp64は，Ｎ末端が粒子の外側に露出し，Ｃ末端が粒子の内側に露出するので，所望の免疫原性外来遺伝子のタンパク質をgp64のＮ末端側に融合させれば，昆虫細胞においてウイルス粒子の構成成分としてウイルスタンパク質粒子の外側にその全体が露出することになり，より抗原提示し易くなり本発明のワクチン製剤としての目的に適うものといえる。
(3)本発明医薬組成物（本発明組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬）
本発明医薬組成物において有効成分とする本発明組換えバキュロウイルスは，前記(2)に示す遺伝子工学的手法により得ることができる。
(3)本発明医薬組成物（本発明組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬）
本発明医薬組成物において有効成分とする本発明組換えバキュロウイルスは，前記(2)に示す遺伝子工学的手法により得ることができる。
本発明医薬組成物は，本発明免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子とが融合した融合物を昆虫細胞及び脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物細胞において発現できるように構築されたトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAを相同組換えさせて得られる組換えバキュロウイルスをその有効成分として本質的に含有する。
特に本発明医薬組成物は，特定のAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスのいずれかを有効成分とする医薬組成物を提供する。
本発明医薬組成物において有効成分とする本発明AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスは，感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を有しており，この作用乃至活性を利用して，標的細胞乃至組織の感染に関連する疾患の処置に利用することができる。かかる感染の影響を受ける標的細胞としては，例えば血液細胞，他の標的細胞は肝細胞，腎細胞，脳細胞，肺細胞，上皮細胞，筋肉細胞などを挙げることができる。これらの細胞を含む組織としては，肺，肝臓，腎臓，脳，動静脈血管，胃・腸，尿道，皮膚，筋肉などを挙げることができる。
該医薬組成物は，例えばマラリア原虫のスポロゾイト表面の表面抗原（CSP及びTRAP），メトロゾイト表面の膜タンパク質のMSP1，マラリア感染赤血球から分泌されるマラリアＳ抗原，マラリア感染赤血球のノブに存在するPfEMP1タンパク質，SERAタンパク質，TRAMPタンパク質，AMA1タンパク質，伝播阻止抗原として知られるPfs25などのマラリア抗原に対して，またはHA抗原，NA抗原，M2抗原，NP抗原などのインフルエンザウイルス抗原に対して，これら感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価(例えば，ウイルス感染価)を低下させることにより，感染したヒトを含む哺乳動物に対する生存期間の延長や生存率を本発明医薬組成物が投与されなかった群との比較において，特にマラリアやインフルエンザウイルス感染の予防または治療剤として有用である。
本発明医薬組成物は，感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を利用して，インフルエンザウイルスやマラリアなど，病原体による感染が発症の原因となる感染性疾患や合併症の治療または予防剤として有用である。
また，本発明医薬組成物において有効成分とする組換えバキュロウイルスを得るためのトランスファーベクターの免疫原性外来遺伝子を，ヒト以外の脊椎動物に対する免疫原性遺伝子を用いることにより，例えばニワトリインフルエンザワクチンとして，それら疾患の感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を有しており，この作用乃至活性を利用して，標的細胞乃至組織の感染に関連する疾患の処置に利用することができる。
本発明の医薬組成物は，薬学的有効量の本発明の組換えバキュロウイルスと薬学的に許容される担体を含む組成物として調製することができる。
本発明組換えバキュロウイルスの脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物または哺乳動物細胞における感染防御効果は，例えば本発明組換えバキュロウイルスと医薬品投与用に添加可能な組成物とによって製造された医薬組成物を予め対象とする脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物に筋肉内，経鼻的，または経気道的に投与した後，複数回，本発明組換えバキュロウイルスを有効成分とする医薬組成物により免疫する。本発明の医薬組成物の投与は特に経気道的に投与することが好ましく例示できる。
そして，本発明医薬組成物の複数回の免疫後，対象とする病原体を脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物に投与して感染させた場合における一定期間経過後の本発明の医薬組成物の有効成分である組換えバキュロウイルスが投与された脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物における生存率の比較によって，感染予防効果を測定することができる。
(4) 本発明ワクチン
本発明の医薬組成物のその有効成分であるAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスは，後記実施例に示されるように病原体に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を示す所望の免疫原性を有する本発明免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子の融合したDNA配列の融合発現物が，昆虫細胞より出芽したウイルス粒子として，生成される。次いで，本発明の医薬組成物をウイルス粒子の形態で脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物に投与されることにより，ウイルス粒子の構成成分となった外来抗原タンパク質が獲得免疫（液性免疫及び細胞性免疫）を促進し，さらに脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物細胞内において前記融合DNA配列の発現物である抗原タンパク質がさらに獲得免疫（液性免疫及び細胞性免疫）を促進すると考えられ，かくしてワクチンとしても有用である。
(4) 本発明ワクチン
本発明の医薬組成物のその有効成分であるAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスは，後記実施例に示されるように病原体に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を示す所望の免疫原性を有する本発明免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分になり得るタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子の融合したDNA配列の融合発現物が，昆虫細胞より出芽したウイルス粒子として，生成される。次いで，本発明の医薬組成物をウイルス粒子の形態で脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物に投与されることにより，ウイルス粒子の構成成分となった外来抗原タンパク質が獲得免疫（液性免疫及び細胞性免疫）を促進し，さらに脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物細胞内において前記融合DNA配列の発現物である抗原タンパク質がさらに獲得免疫（液性免疫及び細胞性免疫）を促進すると考えられ，かくしてワクチンとしても有用である。
特に本発明ワクチンは，特定のAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれかの組換えバキュロウイルスのいずれかを有効成分とするワクチンを提供する。
該ワクチンは，上記(3)の医薬組成物と同様に，例えばマラリア原虫のスポロゾイト表面の表面抗原（CSP及びTRAP），メトロゾイト表面の膜タンパク質のMSP1，マラリア感染赤血球から分泌されるマラリアＳ抗原，マラリア感染赤血球のノブに存在するPfEMP1タンパク質，SERAタンパク質，TRAMPタンパク質，AMA1タンパク質などのマラリア抗原に対して，またはインフルエンザウイルスHA抗原，インフルエンザウイルスNA抗原，インフルエンザウイルスM2抗原，インフルエンザウイルスNP抗原などのインフルエンザ抗原に対して，これら病原生物に対する感染予防効果を高め，感染価（例えば，ウイルス感染価）を低下させることにより，感染したヒトを含む哺乳動物に対する生存期間の延長や生存率を本発明医薬組成物が投与されなかった群との比較において，特にマラリアやインフルエンザウイルス感染の予防または治療剤として有用である。
本発明のワクチンは，感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を利用して，インフルエンザウイルスやマラリアなど，病原体による感染が発症の原因となる感染性疾患や合併症の治療または予防剤として有用である。
また，本発明のワクチンにおいて有効成分とする組換えバキュロウイルスを得るためのトランスファーベクターの免疫原性外来遺伝子を，ヒト以外の脊椎動物に対する免疫原性遺伝子を用いることにより，例えばニワトリインフルエンザワクチンとして，それら疾患の感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を有しており，この作用乃至活性を利用して，標的細胞乃至組織の感染に関連する疾患の処置に利用することができる。
特に，本発明ワクチンにおいて有効成分とする本発明AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64の組換えバキュロウイルスは，感染性抗原に対する感染予防効果を高め，感染価を低下させる作用を有しており，この作用乃至活性を利用して，標的細胞乃至組織のウイルス感染に関連する疾患の処置に利用することができる。
かかる感染の影響を受ける標的細胞としては，例えば血液細胞，他の標的細胞は肝細胞，腎細胞，脳細胞，肺細胞，上皮細胞，筋肉細胞などを挙げることができる。これらの細胞を含む組織としては，肺，肝臓，腎臓，脳，動静脈血管，胃・腸，尿道，皮膚，筋肉などを挙げることができる。
本発明のワクチンは，上記(3)の医薬組成物として，薬学的有効量の本発明の組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか）と薬学的に許容される担体を含む組成物として調製することができる。
ワクチンは，上記(3)の医薬組成物と同様の医薬として許容される担体を利用して常法に従い医薬組成物形態に調製することができる。該担体としては，例えば，滅菌生理食塩水，滅菌緩衝化生理食塩水などの生理的に許容できる溶液を挙げることができる。
また，ワクチン（以下，製剤について医薬組成物と同様とする）は，前記した本発明組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか）を有効成分とするリポソーム製剤として調製することができ，アジュバントなどと併用することもできる。
また，ワクチン（以下，製剤について医薬組成物と同様とする）は，前記した本発明組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか）を有効成分とするリポソーム製剤として調製することができ，アジュバントなどと併用することもできる。
本発明のワクチン（医薬組成物）の一具体例としては，リポソーム製剤を挙げることができる。リポソーム製剤は，酸性リン脂質を膜構成成分とするかあるいは中性リン脂質と酸性リン脂質とを膜構成成分とするリポソームに，本発明組換えバキュロウイルスを保持させたものであることができる。
膜構成成分としての酸性リン脂質および中性リン脂質としては，特に制限はなく，この種のリポソーム製剤に慣用される各種脂質の一種を単独で，または二種以上を混合して使用することができる。
リポソーム膜は，酸性リン脂質を単独で用いるかまたは中性リン脂質と酸性リン脂質とを併用して，常法に従い形成される。中性リン脂質と併用される場合，酸性リン脂質の併用割合は，リポソーム膜構成成分中に0.1〜100モル％程度，好ましくは1〜90モル％，より好ましくは10〜50モル％程度とするのがよい。
上記リポソームの調製に当たっては，例えばコレステロールなどを添加することができる。これによりリン脂質の流動性を調製して，リポソームの調製をより簡便なものとすることができる。該コレステロールは，通常リン脂質に対して等量まで，好ましくは0.5倍重量から等重量の量で添加配合されるのが好ましい。
リポソーム製剤中の有効成分と酸性リン脂質との配合割合は，有効成分に対して酸性リン脂質が0.5〜100当量程度，好ましくは1〜60当量程度，より好ましくは1.5〜20当量程度とされるのがよい。
有効成分とする本発明組換えバキュロウイルスの全脂質に対する使用モル％は，数モル％から数十モル％程度，好ましくは5〜10モル％程度，通常5モル％前後であることができる。
尚，上記リポソーム製剤の製造，濃縮，粒径コントロールなどは，常法に従い実施できる。またリポソーム製剤には，所望により前記した各種の添加剤などを配合することもできる。
上記リポソーム製剤の製造において，有効成分とする本発明組換えバキュロウイルスは，これに脂肪酸（例えばベヘン酸，ステアリン酸，パルミチン酸，ミリスチン酸，オレイン酸など），アルキル基，コレステリル基などを結合させて用いることもできる。これらを結合させて調製するリポソーム製剤の製造もまた常法に従うことができる（Long Circulating Liposomes: old drugs，New therapeutics.， M. C. Woodle， G. Storm， Eds: Springer-Verlag Berlin(1998) など参照）。
本発明のワクチン（医薬組成物）は，好ましくはワクチン組成物として使用できる。その使用に際しては，薬学的有効量のアジュバントと併用されるのが抗感染（抗マラリアまたは抗インフルエンザウイルス）効果を高めるためにより好ましい。
アジュバントとしては，この種ワクチンに慣用されるものをいずれも制限なく使用できる。その例としては，例えばフロイント完全アジュバント，ムラミルジペプチド，水酸化アルミニウム，BCG，IL-12，N-アセチルムラミン-L-アラニル-D-イソグルタミン（MDP），サイモシンα1，QS-21などを例示することができる。併用されるアジュバントの量は，その投与後，ヒトまたは動物に対する免疫反応の一部として表出するおそれのある皮膚の軟化，痛み，紅斑，発熱，頭痛，筋肉痛などの症状の程度に応じて適宜決定することができる。
本発明のワクチン（医薬組成物）は，例えば免疫応答促進ペプチド，抗菌剤（合成抗菌剤）などの他の公知の医薬品などと併用することもできる。
更に，ワクチン（医薬組成物）には，任意の薬剤，添加物などを含ませることもできる。その例としては，例えばカルシウムイオンなどの本発明組換えバキュロウイルスの細胞内取込みの助けとなる薬剤を例示することができる。また，前記リポソームおよび例えばフルオロカーボン乳剤，コクリエート（cochleate），チューブル （tubule），金粒子，生分解性マイクロスフェア，カチオン性ポリマーなどのトランスフェクションを容易にする薬剤乃至添加物をも使用することができる。
本発明のワクチン（医薬組成物）（薬物）中に含まれる有効成分の量は， 薬学的有効量である限り特に制限されず広範囲から選択することができる。上記ワクチン（医薬組成物）の投与量も，特に限定されず，所望の治療効果，投与方法（投与経路），治療期間，患者の年齢，性別その他の条件などに応じて広範囲から適宜選択することができる。
また，ヒトに本発明のワクチン（組成物）の有効成分である組換えバキュロウイルスを投与する場合，組み換えウイルスのPFUで換算し，１患者あたり，102〜1014PFU相当の，好ましくは105〜1012PFU相当の，より好ましくは106〜1010PFU相当の組換えバキュロウイルスが投与される。
本発明のワクチン（医薬組成物）の有効成分である組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか）の投与量は，ワクチン宿主に導入される発現可能なＤＮＡとして，または転写されたＲＮＡの量としては，非常に広い範囲から選択される。それらの量は，例えば本発明のトランスファーベクターに使用される転写および翻訳プロモーターの強さにも依存する。
本発明のワクチン（医薬組成物）の投与は，ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）または生理食塩水などに懸濁した組換えバキュロウイルス懸濁液の局所（例えば，肺組織内，肝臓内，筋肉内および脳内など）への直接注入か，経鼻的・経気道的に吸入か，または血管内（例えば，動脈内， 静脈内および門脈内）への投与によりなされる。本発明のワクチンの投与は特に経気道的に投与することが好ましく例示できる。
本発明ワクチン（医薬組成物）は，一度のみの投与によるのではなく，初回投与後の状態をみながら，１から複数回の追加ワクチン投与を行うことにより投与されるのが好ましい。これによって，所望の効果をより高めることが可能となる。また，ワクチン（医薬組成物）投与後，前記した本発明組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64のいずれか）からなる医薬組成物で追加免疫することも可能である。更に，前記した各種併用薬の併用もワクチン（医薬組成物）投与による治療効果を高める可能性がある。
本発明のワクチン（医薬組成物）の１つの実施態様において，本発明のワクチン（医薬組成物）の有効成分のひとつである組換えバキュロウイルスは，一般には，この所望の免疫原性外来遺伝子とウイルス粒子の構成成分となり得るタンパク質をコードする遺伝子が融合した遺伝子を導入したトランスファーベクターとバキュロウイルスDNAとを相同組換えして得られた組換えバキュロウイルスを単位用量注入可能な形態（溶液，懸濁液または乳濁液）で，薬学的に受容可能なキャリア（すなわち，使用された投薬量および濃度においてヒトを含む脊椎動物に対して非毒性であり，そして処方物の他の成分と適合性であるもの）とを混合することによって処方され得る。例えば，処方物は，好ましくは，酸化剤および組換えバキュロウイルスにとって有害であることが公知である他の化合物を含まない。
キャリアは，等張性および化学的安定性を増強する物質のような微量の添加物を適宜含む。このような物質は，使用された投薬量および濃度において脊椎動物，特にヒトを含む哺乳動物に対して非毒性であり，そしてリン酸，クエン酸，コハク酸，酢酸，および他の有機酸またはそれらの塩のような緩衝剤；アスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド（例えば，ポリアルギニンまたはトリペプチド）；タンパク質（例えば，血清アルブミン，ゼラチン，またはイムノグロブリン）；親水性ポリマー（例えば，ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば，グリシン，グルタミン酸，アスパラギン酸，またはアルギニン）；単糖，二糖および他の炭水化物（セルロースまたはその誘導体， グルコース，マンノース，またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば，ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば，マンニトールまたはソルビトール）；対イオン（例えば，ナトリウム）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば，ポリソルベート，ポロキサマー），またはＰＥＧを含み得る。
組換えバキュロウイルスを含む薬学的ワクチン（組成物）は，代表的には，単位または多用量容器，例えば，密封アンプルまたはバイアルにおいて，水溶液若しくは凍結乾燥品として貯蔵され得る。
本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなるマラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法、あるいは、マラリアもしくはインフルエンザの治療方法に関する。本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなる免疫賦活方法に関する。なお、ここで被験体としては、マラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスの感染を受ける可能性のある者（ヒト若しくはその他の動物（ほ乳類、鳥類、は虫類、魚類、両生類等を含む）並びにマラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスに感染した者を挙げることができる。好ましくは感染に係るインフルエンザウイルスがＡ型に属するものであり、より好ましくはＡ型Ｈ１亜型又はＨ３亜型に属するものである。また、マラリア原虫に関しては、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、四日熱マラリア原虫(Plasmodium malariae)、卵形マラリア原虫(Plasmodium ovale)を挙げることができる。
本発明の組換えバキュロウイルスは、そのままか、若しくは薬学的に許容される担体を含むワクチン、製剤ないし医薬組成物として調製され、被験者に投与される。
投与経路は、上記に例示される経路が挙げられる。本発明で用いられる薬学的に許容される担体は、調製される薬学的組成物の形態に応じて、当該分野において慣用されている担体の中から適宜選択して用いることができる。
本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなるマラリアもしくはインフルエンザの感染予防方法、あるいは、マラリアもしくはインフルエンザの治療方法に関する。本発明はさらに、本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤ないし医薬組成物を被験体に投与することからなる免疫賦活方法に関する。なお、ここで被験体としては、マラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスの感染を受ける可能性のある者（ヒト若しくはその他の動物（ほ乳類、鳥類、は虫類、魚類、両生類等を含む）並びにマラリア原虫もしくはインフルエンザウイルスに感染した者を挙げることができる。好ましくは感染に係るインフルエンザウイルスがＡ型に属するものであり、より好ましくはＡ型Ｈ１亜型又はＨ３亜型に属するものである。また、マラリア原虫に関しては、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、四日熱マラリア原虫(Plasmodium malariae)、卵形マラリア原虫(Plasmodium ovale)を挙げることができる。
本発明の組換えバキュロウイルスは、そのままか、若しくは薬学的に許容される担体を含むワクチン、製剤ないし医薬組成物として調製され、被験者に投与される。
投与経路は、上記に例示される経路が挙げられる。本発明で用いられる薬学的に許容される担体は、調製される薬学的組成物の形態に応じて、当該分野において慣用されている担体の中から適宜選択して用いることができる。
例えば、薬学的組成物が水溶液形態として調製される場合、上記の担体としては、精製水（滅菌水）または生理学的緩衝液を利用することができる。また、該組成物が適当な溶液形態に調製される場合、上記担体としては例えば、グリコール、グリセロール、オリーブ油のような注射投与可能な有機エステルなどを使用することができる。また、これらの組成物には、当該分野、特にワクチン製剤の分野で慣用的に用いられる安定剤、賦形剤などを含むことができる。
本発明のワクチン、製剤もしくは医薬組成物中の組換えバキュロウイルスの量としては、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常組成物中０．０００２〜０．２（ｗ／ｖ％）程度、好ましくは０．００１〜０．１（ｗ／ｖ％）程度とするのがよい。本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤もしくは医薬組成物の投与方法は特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、疾病の重篤度等に応じて適宜決定される。製剤形態としては注射剤、点滴剤、点鼻剤及び吸入剤等の非経口投与形態を好適に挙げることができ、特に注射剤や点滴剤として調製される場合は、必要に応じてブドウ糖やアミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与されるか、また筋肉内投与、皮内投与、皮下投与もしくは腹腔内投与される。
本発明の組換えバキュロウイルス、ワクチン、製剤もしくは医薬組成物の１日当りの投与量は、被験者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概に決定できないが、組換えバキュロウイルスの量に換算して通常成人１日当り約０．００１〜１００ｍｇ程度の範囲から選ぶことができる。当該ワクチン、製剤ないし組成物は１日１回投与に限らず、数回に分けて投与することができる。
また、本発明のワクチン（製剤もしくは医薬組成物）の有効成分である組換えバキュロウイルスを投与する場合、組み換えウイルスのPFUで換算する場合は、１患者あたり、102〜1014PFU相当の、好ましくは105〜1012PFU相当の、より好ましくは106〜1010PFU相当の組換えバキュロウイルスが投与される。
本発明のワクチン（組成物）を含む薬学的組成物は医療実施基準（Good Medical Practice）に一致した様式で，個々の患者の臨床状態（例えば，予防または処置されるべき状態），組換えバキュロウイルスを含むワクチン（組成物）の送達部位，標的組織，投与方法，投与計画および当業者に公知の他の因子を考慮しつつ投与される。従って，本明細書のワクチン（組成物）の適切な投与量は，上記を考慮し決定される。
また、本発明のワクチン（製剤もしくは医薬組成物）の有効成分である組換えバキュロウイルスを投与する場合、組み換えウイルスのPFUで換算する場合は、１患者あたり、102〜1014PFU相当の、好ましくは105〜1012PFU相当の、より好ましくは106〜1010PFU相当の組換えバキュロウイルスが投与される。
本発明のワクチン（組成物）を含む薬学的組成物は医療実施基準（Good Medical Practice）に一致した様式で，個々の患者の臨床状態（例えば，予防または処置されるべき状態），組換えバキュロウイルスを含むワクチン（組成物）の送達部位，標的組織，投与方法，投与計画および当業者に公知の他の因子を考慮しつつ投与される。従って，本明細書のワクチン（組成物）の適切な投与量は，上記を考慮し決定される。
以下，本発明を更に詳しく説明するため実施例を挙げる。これらの実施例は，単なる例示であり，本発明を限定するものではない。
実施例1：本発明トランスファーベクタープラスミドおよびその製造法
(1) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP， pCAP-PfCSP/272， pCAP-PfCSP/467の構築
(1.1)プラスミドpBACsurf-Hsp65の構築
Hsp65遺伝子は，結核菌H37Rv株よりQIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いて，結核菌H37RvのゲノムDNAを抽出し，PCRにてクローニングした。すなわち，抽出した結核菌H37RvのゲノムDNAをプライマーphsp65-F1 (primer (5'-AATAATAGATCTAATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGA-3'(配列番号1): BgIII サイトは下線で表示) とphsp65-R1 ((5'- AATCCAATGCGGCCGCGGGAATTCGATTCCTGCAGGTCAGAAATCCATGCCACCCATGTCGCC -3'(配列番号2); NotIは下線で表示) を用いてPCRを行った。PCR産物を精製した後，制限酵素BgIIIとNotIで切断し，BamHIとNotIで処理したpcDNA3.1(+) (Invitrogen)にライゲーションし，得られたプラスミドをpcDNA-hsp65と名付けた。pcDNA-hsp65を鋳型としてプライマーphsp65-F2(5’- CACCCCTGCAGGACTACAAGGACGACGATGACAAGGAATTCATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGAGGCC -3’ (配列番号3): Sse8387I， EcoRI サイトは下線，FLAG配列はイタリックで表示) とphsp65-R2 (5’- CCCGGGCGAAATCCATGCCACCCATGTCGCCGCCACC-3’ (配列番号4): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたHsp65遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPO (Invitrogen)にクローニングした後，Sse8387I/Cfr9Iで処理し， pBACsurf-CSP (Yoshida et aI.ViroIogy 316: 161-70， 2003)のPstI/Cfr9Iサイトに挿入した。かくして構築したプラスミドをpBACsurf-Hsp65と名付けた。
(1.2) プラスミドpENTR-gp64の構築
pBACsurf-1(Novagen)を鋳型としてプライマーpPoIh-F2(5’- CACCCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAG-3’ (配列番号5): RsrIIサイトは下線表示) とpgp64-R2 (5’- GGTACCATATTGTCTATTACGGTTTCTAATCATAC-3’ (配列番号6): KpnI サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたgp64遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOに挿入し，プラスミドpENTR-gp64を構築した。かくして構築したプラスミドをpENTR-gp64と名付けた。
(1.3) プラスミド pDuaI-Hsp65-gp64の構築
pBACsurf-Hsp65をPstI/Cfr9Iで切断し，hsp65遺伝子断片をpENTR-gp64のPstI/Cfr9Iサイトに挿入し，プラスミドpENTR-Hsp65-gp64を構築した。さらにpENTR-Hsp65-gp64をRsrII/KpnIで切断し，ポリヘドリンプロモーターとhsp65-gp64遺伝子よりなるDNA断片をRsrIIとKpnIで処理したpTriEx-3.1 (Novagen)に挿入し，所望のデュアル・プロモーターによって発現が制御されるトランスファーベクタープラスミドpDuaI-Hsp65-gp64を構築した。
実施例1：本発明トランスファーベクタープラスミドおよびその製造法
(1) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP， pCAP-PfCSP/272， pCAP-PfCSP/467の構築
(1.1)プラスミドpBACsurf-Hsp65の構築
Hsp65遺伝子は，結核菌H37Rv株よりQIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いて，結核菌H37RvのゲノムDNAを抽出し，PCRにてクローニングした。すなわち，抽出した結核菌H37RvのゲノムDNAをプライマーphsp65-F1 (primer (5'-AATAATAGATCTAATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGA-3'(配列番号1): BgIII サイトは下線で表示) とphsp65-R1 ((5'- AATCCAATGCGGCCGCGGGAATTCGATTCCTGCAGGTCAGAAATCCATGCCACCCATGTCGCC -3'(配列番号2); NotIは下線で表示) を用いてPCRを行った。PCR産物を精製した後，制限酵素BgIIIとNotIで切断し，BamHIとNotIで処理したpcDNA3.1(+) (Invitrogen)にライゲーションし，得られたプラスミドをpcDNA-hsp65と名付けた。pcDNA-hsp65を鋳型としてプライマーphsp65-F2(5’- CACCCCTGCAGGACTACAAGGACGACGATGACAAGGAATTCATGGCCAAGACAATTGCGTACGACGAAGAGGCC -3’ (配列番号3): Sse8387I， EcoRI サイトは下線，FLAG配列はイタリックで表示) とphsp65-R2 (5’- CCCGGGCGAAATCCATGCCACCCATGTCGCCGCCACC-3’ (配列番号4): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたHsp65遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPO (Invitrogen)にクローニングした後，Sse8387I/Cfr9Iで処理し， pBACsurf-CSP (Yoshida et aI.ViroIogy 316: 161-70， 2003)のPstI/Cfr9Iサイトに挿入した。かくして構築したプラスミドをpBACsurf-Hsp65と名付けた。
(1.2) プラスミドpENTR-gp64の構築
pBACsurf-1(Novagen)を鋳型としてプライマーpPoIh-F2(5’- CACCCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAG-3’ (配列番号5): RsrIIサイトは下線表示) とpgp64-R2 (5’- GGTACCATATTGTCTATTACGGTTTCTAATCATAC-3’ (配列番号6): KpnI サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたgp64遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOに挿入し，プラスミドpENTR-gp64を構築した。かくして構築したプラスミドをpENTR-gp64と名付けた。
(1.3) プラスミド pDuaI-Hsp65-gp64の構築
pBACsurf-Hsp65をPstI/Cfr9Iで切断し，hsp65遺伝子断片をpENTR-gp64のPstI/Cfr9Iサイトに挿入し，プラスミドpENTR-Hsp65-gp64を構築した。さらにpENTR-Hsp65-gp64をRsrII/KpnIで切断し，ポリヘドリンプロモーターとhsp65-gp64遺伝子よりなるDNA断片をRsrIIとKpnIで処理したpTriEx-3.1 (Novagen)に挿入し，所望のデュアル・プロモーターによって発現が制御されるトランスファーベクタープラスミドpDuaI-Hsp65-gp64を構築した。
(1.4) プラスミドpDuaI-H1N1/HA1-gp64の構築
インフルエンザウイルスPR/8/34株が感染したMDCK細胞上清よりQIAamp MiniEIute Virus Spin Kit (QIAGEN)を用いてRNAを抽出し，プライマーHA-f(5’- CCTGCAGGTATGAAGGCAAACCTACTGGTC -3’ (配列番号7): SbfI サイトは下線で表示)とHA-r(5’- GCCCGGGCGATGCATATTCTGCA-3’ (配列番号8): SbfI サイトは下線で表示)と用いてRT-PCRを行い，全長約1700 bpのインフルエンザウイルスHA遺伝子断片をpCR-BIunt II-TOPO(Invitrogen社)にクローニングした。得られたプラスミドをpCR-BIunt-HAと名付けた。pCR-BIunt-HAを鋳型としてプライマーpHA-F1 (5’- CACCGAATTCGACACAATATGTATAGGCTACCATGCG-3’ (配列番号9): EcoRI サイトは下線で表示) とpHA-R1 (5’-CCCGGGCACCTCTGGATTGGATGGACGGAATG-3’ (配列番号10): Cfr9I サイト は下線で表示)を用いてPCRを行い，得られたH1N1/HA1遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで処理し，pDuaI-Hsp65-gp64のEcoRI/Cfr9Iサイトに挿入し，プラスミドpDuaI-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.5)プラスミドpBACsurf-HA1の構築
pDuaI-H1N1/HA1-gp64 をEcoRI/CfrIで切断し，H1N1/HA1遺伝子DNA断片をEcoRIとCfrIで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入し，プラスミドpBACsurf-HA1を構築した。
(1.6) プラスミドpCP-H1N1/HA1-gp64の構築
pBACsurf-HA1を鋳型にPoIh-f RsrII(5’- GGGCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCG-3’ (配列番号11): RsrIIサイトは下線表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行なった。得られたDNA断片をRsrIIとDraIIIで処理したpDuaI-H1N1/HA1-gp64に挿入し，pCP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.7) プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64の構築
pCP- H1N1/HA1-gp64をHA1とgp64の遺伝子断片を調整するために制限酵素RsrIIとDraIIIで切断した。得られた断片を、pTriEx-1.1(Novagen)を制限酵素RsrIIとDraIIIで切断することにより調整したベクターに挿入することにより、CAGプロモーターとポリヘドリン・プロモーターからなる所望のデュアル・プロモーターの制御下に哺乳動物及び昆虫細胞においてHA1抗原とgp64タンパクの融合タンパクの発現を可能にするトランスファー・ベクター・プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.8) プラスミドpCAP-H1N1/NP-gp64の構築
インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAを鋳型にNP-f EcoRI(5’- ACGGAATTCCATTCAATTCAAACTGGA-3’(配列番号13): EcoRIサイトは下線表示)とNP-r Cfr9I(5’- GATCCCGGGCCTTGTCAATGCTGAATGGCAA-3’(配列番号14): Cfr9Iサイトは下線表示)を用いてRT-PCRを行ない，得られた断片を制限酵素EcoRIとXmaｌで処理し，同様に制限酵素EcoRIとCfr9Iで処理したpCAP-H1N1/HA1-gp64に挿入することで，pCAP-H1N1/NP-gp64を作製した。
(1.9) プラスミドpCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467の構築
pCAP-H1N1/HA1-gp64のgp64(272)-f (5’- GACTCCCCGGGTCGAGCACCGAGTCAAGAAG-3’(配列番号15): XmaIサイトは下線表示)及びgp64(467)-f (5’- GACTCCCCGGGACATCACTTCCATGGCTGAA -3’(配列番号16): XmaIサイトは下線表示)とGP64-DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC -3’(配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行ない，得られた断片を制限酵素XmaIとDraIIIで処理し，同様にXmaIとDraIIIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64に挿入することで，pCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467を作製した。
(1.10)本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467の構築
熱帯熱マラリア原虫Plasmodium falciparum 3D7株が感染したヒト赤血球より，QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. falciparumゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATC -3’ (配列番号18): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片とpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467をPstIとXmaIで処理し、結合した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272， pCAP-PfCSP/467と名付けた。
インフルエンザウイルスPR/8/34株が感染したMDCK細胞上清よりQIAamp MiniEIute Virus Spin Kit (QIAGEN)を用いてRNAを抽出し，プライマーHA-f(5’- CCTGCAGGTATGAAGGCAAACCTACTGGTC -3’ (配列番号7): SbfI サイトは下線で表示)とHA-r(5’- GCCCGGGCGATGCATATTCTGCA-3’ (配列番号8): SbfI サイトは下線で表示)と用いてRT-PCRを行い，全長約1700 bpのインフルエンザウイルスHA遺伝子断片をpCR-BIunt II-TOPO(Invitrogen社)にクローニングした。得られたプラスミドをpCR-BIunt-HAと名付けた。pCR-BIunt-HAを鋳型としてプライマーpHA-F1 (5’- CACCGAATTCGACACAATATGTATAGGCTACCATGCG-3’ (配列番号9): EcoRI サイトは下線で表示) とpHA-R1 (5’-CCCGGGCACCTCTGGATTGGATGGACGGAATG-3’ (配列番号10): Cfr9I サイト は下線で表示)を用いてPCRを行い，得られたH1N1/HA1遺伝子DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで処理し，pDuaI-Hsp65-gp64のEcoRI/Cfr9Iサイトに挿入し，プラスミドpDuaI-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.5)プラスミドpBACsurf-HA1の構築
pDuaI-H1N1/HA1-gp64 をEcoRI/CfrIで切断し，H1N1/HA1遺伝子DNA断片をEcoRIとCfrIで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入し，プラスミドpBACsurf-HA1を構築した。
(1.6) プラスミドpCP-H1N1/HA1-gp64の構築
pBACsurf-HA1を鋳型にPoIh-f RsrII(5’- GGGCGGACCGGATAATTAAAATGATAACCATCTCG-3’ (配列番号11): RsrIIサイトは下線表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行なった。得られたDNA断片をRsrIIとDraIIIで処理したpDuaI-H1N1/HA1-gp64に挿入し，pCP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.7) プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64の構築
pCP- H1N1/HA1-gp64をHA1とgp64の遺伝子断片を調整するために制限酵素RsrIIとDraIIIで切断した。得られた断片を、pTriEx-1.1(Novagen)を制限酵素RsrIIとDraIIIで切断することにより調整したベクターに挿入することにより、CAGプロモーターとポリヘドリン・プロモーターからなる所望のデュアル・プロモーターの制御下に哺乳動物及び昆虫細胞においてHA1抗原とgp64タンパクの融合タンパクの発現を可能にするトランスファー・ベクター・プラスミドpCAP-H1N1/HA1-gp64を構築した。
(1.8) プラスミドpCAP-H1N1/NP-gp64の構築
インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAを鋳型にNP-f EcoRI(5’- ACGGAATTCCATTCAATTCAAACTGGA-3’(配列番号13): EcoRIサイトは下線表示)とNP-r Cfr9I(5’- GATCCCGGGCCTTGTCAATGCTGAATGGCAA-3’(配列番号14): Cfr9Iサイトは下線表示)を用いてRT-PCRを行ない，得られた断片を制限酵素EcoRIとXmaｌで処理し，同様に制限酵素EcoRIとCfr9Iで処理したpCAP-H1N1/HA1-gp64に挿入することで，pCAP-H1N1/NP-gp64を作製した。
(1.9) プラスミドpCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467の構築
pCAP-H1N1/HA1-gp64のgp64(272)-f (5’- GACTCCCCGGGTCGAGCACCGAGTCAAGAAG-3’(配列番号15): XmaIサイトは下線表示)及びgp64(467)-f (5’- GACTCCCCGGGACATCACTTCCATGGCTGAA -3’(配列番号16): XmaIサイトは下線表示)とGP64-DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC -3’(配列番号12): DraIIIサイトは下線表示)を用いてPCRを行ない，得られた断片を制限酵素XmaIとDraIIIで処理し，同様にXmaIとDraIIIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64に挿入することで，pCAP-H1N1/NP/272とpCAP-H1N1/NP/467を作製した。
(1.10)本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467の構築
熱帯熱マラリア原虫Plasmodium falciparum 3D7株が感染したヒト赤血球より，QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. falciparumゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATC -3’ (配列番号18): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片とpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467をPstIとXmaIで処理し、結合した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272， pCAP-PfCSP/467と名付けた。
Plasmodium falciparum 3D7 circumporozoite (CS) 蛋白のGenBankのアミノ酸番号は，XP_001351122である。
(2) 本発明のトランスファーベクターpDual-Pfs25-PfCSP-gp64の構築
(2.1) プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64の構築
マウスマラリア原虫Plasmodium berghei ANKA株が感染したBALB/cマウスより採血を行い，QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. bergheiゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPbAMA1遺伝子domain 123 (D123)を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpAMA-F1 (5’- CACCGAATTCAATCCATGGGAAAAGTATACGGAAAAATAT -3’ (配列番号19): EcoRI サイトは下線で表示) とpAMA1-R1 (5’- CCCGGGCTTCTCTGGTTTGATGGGCTTTCATATGCAC-3’ (配列番号20): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPbAMA1D123 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで切断し，EcoRIとCfr9Iで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入した。構築したプラスミドをpBACsurf-PbAMA1D123と名付けた。
次いでpBACsurf-PbAMA1D123をEcoRI/Cfr9Iで切断し，PbAMA1D123遺伝子DNA断片をEcoRIとCfr9Iで処理したpDual-Hsp65-gp64に挿入し，プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64を構築した。
(2.2) プラスミドpDual-PfCSP-gp64の構築
P.falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfCSP-F1 (5’- CACCGAATTCTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAGT -3’ (配列番号21): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfCSP-R1 (5’- CCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTC-3’ (配列番号22): Cfr9I サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfCSP DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで切断し，EcoRIとCfr9Iで処理したpDual-PbAMA1D123-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfCSP-gp64と名付けた。
(2.3) 本発明のトランスファーベクターpDual-Pfs25-PfCSP-gp64の構築
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfs25遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfs25-F1 (5’- CACCGAATTCAAAGTTACCGTGGATACTGTATGCAAAAGAGGA -3’ (配列番号23): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfs25-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCAGTACATATAGAGCTTTCATTATCTATTATAAATCCATC -3’ (配列番号24): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfs25 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/MunIで切断し，EcoRI で処理したpDual -PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-Pfs25-PfCSP-gp64と名付けた。
(2.1) プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64の構築
マウスマラリア原虫Plasmodium berghei ANKA株が感染したBALB/cマウスより採血を行い，QIAamp DNA Midi Kit (キアゲン社)を用いてP. bergheiゲノムDNAを抽出した。このゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPbAMA1遺伝子domain 123 (D123)を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpAMA-F1 (5’- CACCGAATTCAATCCATGGGAAAAGTATACGGAAAAATAT -3’ (配列番号19): EcoRI サイトは下線で表示) とpAMA1-R1 (5’- CCCGGGCTTCTCTGGTTTGATGGGCTTTCATATGCAC-3’ (配列番号20): Cfr9I サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPbAMA1D123 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで切断し，EcoRIとCfr9Iで処理したpBACsurf-Hsp65に挿入した。構築したプラスミドをpBACsurf-PbAMA1D123と名付けた。
次いでpBACsurf-PbAMA1D123をEcoRI/Cfr9Iで切断し，PbAMA1D123遺伝子DNA断片をEcoRIとCfr9Iで処理したpDual-Hsp65-gp64に挿入し，プラスミドpDual-PbAMA1D123-gp64を構築した。
(2.2) プラスミドpDual-PfCSP-gp64の構築
P.falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfCSP遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfCSP-F1 (5’- CACCGAATTCTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAGT -3’ (配列番号21): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfCSP-R1 (5’- CCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTC-3’ (配列番号22): Cfr9I サイト は下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfCSP DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/Cfr9Iで切断し，EcoRIとCfr9Iで処理したpDual-PbAMA1D123-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfCSP-gp64と名付けた。
(2.3) 本発明のトランスファーベクターpDual-Pfs25-PfCSP-gp64の構築
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfs25遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfs25-F1 (5’- CACCGAATTCAAAGTTACCGTGGATACTGTATGCAAAAGAGGA -3’ (配列番号23): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfs25-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCAGTACATATAGAGCTTTCATTATCTATTATAAATCCATC -3’ (配列番号24): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfs25 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRI/MunIで切断し，EcoRI で処理したpDual -PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-Pfs25-PfCSP-gp64と名付けた。
(3) 本発明トランスファーベクタープラスミドpDual-PfMSP1-PfCSP-gp64の構築
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfMSP1遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfMSP119-F1 (5’- CACCGAATTCAACATTTCACAACACCAATGCGTAAAAAAAC -3’ (配列番号25): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfMSP119-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCGTTAGAGGAACTGCAGAAAATACCATCGAAAAGTGGA -3’ (配列番号26): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfMSP119 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRIとMunIで切断し，EcoRIで処理したpDual-PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
P. falciparumゲノムDNAを鋳型としてPCRによりPfMSP1遺伝子を下記の方法でクローニングした。即ち，プライマーpPfMSP119-F1 (5’- CACCGAATTCAACATTTCACAACACCAATGCGTAAAAAAAC -3’ (配列番号25): EcoRI サイトは下線で表示) とpPfMSP119-R2 (5’- CAATTGAGATCCGCCGCCACCGCCACCGTTAGAGGAACTGCAGAAAATACCATCGAAAAGTGGA -3’ (配列番号26): MunI サイトは下線で表示) を用いてPCRを行い，得られたPfMSP119 DNA断片をpENTR/D-TOPOにクローニングした後，EcoRIとMunIで切断し，EcoRIで処理したpDual-PfCSP-gp64に挿入した。構築したプラスミドをpDual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
(4) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP(A361E)， pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467の構築
pCAP-PfCSPからPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示)とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP(A361E)， pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467と名付けた。
pCAP-PfCSPからPfCSP-f(19) (5’- GACTCTGCAGTTATTCCAGGAATACCAGTGCTATGGAAG -3’ (配列番号17): PstIサイトは下線部で表示)とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP(A361E)， pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467と名付けた。
(5) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP-76， pCAP-PfCSP-76/467の構築
pCAP-PfCSP(A361E)からPfCSP-f(76) (5’- GACTCTGCAGGATGATGGAAATAACGAAGACAACG -3’ (配列番号28): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467と名付けた。
pCAP-PfCSP(A361E)からPfCSP-f(76) (5’- GACTCTGCAGGATGATGGAAATAACGAAGACAACG -3’ (配列番号28): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(373 A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTACAAATTTTTTTTTCAATATCATTTTC -3’ (配列番号27): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467と名付けた。
(6) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP+209 ， pCAP-PfCSP+209/467の構築
P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列（ただし361番目のAをEに変換）からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列（PfCSP+：配列番号29）を作製した。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，PfCSP-f(+209) (5’- GACTCTGCAGAACGCTAATCCAAACGCTAATCCCAACGCTAATCCCAATGCC -3’ (配列番号30): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+209 ， pCAP-PfCSP+209/467と名付けた。
P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列（ただし361番目のAをEに変換）からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列（PfCSP+：配列番号29）を作製した。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，PfCSP-f(+209) (5’- GACTCTGCAGAACGCTAATCCAAACGCTAATCCCAACGCTAATCCCAATGCC -3’ (配列番号30): PstI サイトは下線部で表示) とPfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+209 ， pCAP-PfCSP+209/467と名付けた。
(7) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-PfCSP+76/209， pCAP-PfCSP+76/209/467の構築
人工合成遺伝子配列（PfCSP+：配列番号29）を鋳型に，PfCSP-f(+76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGCAACAACGAAGACAACG -3’ (配列番号32): PstI サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+128) (5’- CGTTAGGATCCACATTTGGGTTGGCATTTGGG -3’ (配列番号33): BamH I サイト は下線部で表示)と，PfCSP-f(+209) BamHI (5’- GACTGGATCCTAACGCTAATCCAAACGCTAATCCC -3’ (配列番号34): BamH I サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPstIとBamHI，BamHIとXmaIで切断し，pCAP-H1N1/NP-gp64， PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+76/209， pCAP-PfCSP+76/209/467と名付けた。
人工合成遺伝子配列（PfCSP+：配列番号29）を鋳型に，PfCSP-f(+76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGCAACAACGAAGACAACG -3’ (配列番号32): PstI サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+128) (5’- CGTTAGGATCCACATTTGGGTTGGCATTTGGG -3’ (配列番号33): BamH I サイト は下線部で表示)と，PfCSP-f(+209) BamHI (5’- GACTGGATCCTAACGCTAATCCAAACGCTAATCCC -3’ (配列番号34): BamH I サイトは下線部で表示) と PfCSP-r(+ A361E) (5’- CGATCCCGGGCTTTTTCCATTTTGCAAATTTTTTT -3’ (配列番号31): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPstIとBamHI，BamHIとXmaIで切断し，pCAP-H1N1/NP-gp64， PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-PfCSP+76/209， pCAP-PfCSP+76/209/467と名付けた。
(8) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-HA1/Anhui， pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui /467の構築
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号35)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，AH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Anhui， pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui /467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号35)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，AH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理したpCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Anhui， pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui /467と名付けた。
なお，インフルエンザウイルスA/H5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのアミノ酸配列のGenBankアクセッション番号はABD28180である。
(9) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam /467の構築
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/4のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号38)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，VN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam， pCAP-HA1/Vietnam/272， pCAP-HA1/Vietnam /467と名付けた。
さらに， pCAP-HA1/Vietnamを鋳型にgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれXmaIとDraIIIで切断し，XmaIとDraIIIで処理したpCAP-HA1/Vietnamに挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/4のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号38)。作製した人工合成遺伝子配列を鋳型に，VN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をPstI/XmaIで切断し，PstIとXmaIで処理した pCAP-H1N1/NP-gp64， pCAP-H1N1/NP/272，pCAP-H1N1/NP/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam， pCAP-HA1/Vietnam/272， pCAP-HA1/Vietnam /467と名付けた。
さらに， pCAP-HA1/Vietnamを鋳型にgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはgp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示) を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれXmaIとDraIIIで切断し，XmaIとDraIIIで処理したpCAP-HA1/Vietnamに挿入した。構築したプラスミドをpCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201と名付けた。
なお，インフルエンザウイルスA/ Vietnam/1203/2004(H5N1)ヘマグルチニンのアミノ酸配列のGenBankアクセッション番号はAAW80717である。
(10) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467の構築
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号45)。この人工配列を鋳型にAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示)とAH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはAH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはAH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ，もしくはAH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号45)。この人工配列を鋳型にAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示)とAH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはAH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはAH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ，もしくはAH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467と名付けた。
(11) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467の構築
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/2004のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号51)。この人工配列を鋳型にVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示)とVN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはVN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはVN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ，もしくはVN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467と名付けた。
インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/2004のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号51)。この人工配列を鋳型にVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示)とVN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはVN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示)，もしくはVN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ，もしくはVN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467と名付けた。
(12) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19 /467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467の構築
Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号57)。この人工配列を鋳型にPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，及びPfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19 /467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467と名付けた。
Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，人工合成遺伝子配列を作製した(配列番号57)。この人工配列を鋳型にPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，及びPfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示)とPfCSP_opt-r(373) (5’- CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれPst IとXma Iで切断し，Pst IとXma Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-HA1/Anhui/467に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19 /467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467と名付けた。
(13) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCA64-HA1/Anhui及びpCA64-PfCSP(A361E)の構築
BacVector-2000 DNA（Novagen）のTriple cut DNAを用い，gp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し，Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA64-HA1/Anhui及び pCA64-PfCSP(A361E)を構築した。
BacVector-2000 DNA（Novagen）のTriple cut DNAを用い，gp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し，Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA64-HA1/Anhui及び pCA64-PfCSP(A361E)を構築した。
(14) 本発明トランスファーベクタープラスミドpCA39-HA1/Anhui及びpCA39-PfCSP(A361E)の構築
BacVector-2000 DNA（Novagen）のTriple cut DNAを用い，vp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し，Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA39-HA1/Anhui及び pCA39-PfCSP(A361E)を構築した。
BacVector-2000 DNA（Novagen）のTriple cut DNAを用い，vp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)を用いてPCRを行い，得られたDNA断片をそれぞれRsr IIとSpe Iで切断し，Rsr IIとSpe Iで処理したpCAP-HA1/AnhuiもしくはpCAP-PfCSP(A361E) に挿入し、CAGプロモーター及びgp64プロモーターからなる所望のデュアルプロモーターの制御下の哺乳類細胞及び昆虫細胞におけるHA1抗原若しくはPfCSP抗原及びgp64タンパク質の融合タンパク質の発現を可能にするトランスファーベクタープラスミドpCA39-HA1/Anhui及び pCA39-PfCSP(A361E)を構築した。
(15) 本発明pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSVの構築
pVSV-G（Clonetech）を鋳型にVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示)で，XmaIとDra IIIで処理した pCAP-CO/full，pCAP-CO/19，pCAP-CO/76，pCAP-CO/205に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSVと名付けた。
pVSV-G（Clonetech）を鋳型にVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示)で，XmaIとDra IIIで処理した pCAP-CO/full，pCAP-CO/19，pCAP-CO/76，pCAP-CO/205に挿入した。構築したプラスミドをpCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSVと名付けた。
実施例2：本発明組換えバキュロウイルスおよびその製造法
(1)組換えバキュロウイルスは，組換えバキュロウイルス作製キット(BacVector-2000 Transfection Kit，ノバジェン社)を用い，上記実施例1で構築されたトランスファーベクター：pCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64の各々とBacVector-2000 DNAをSf9細胞にコトランスフェクト（co-transfection）することにより作製した。
作製した組換えバキュロウイルスは各々，AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
(1)組換えバキュロウイルスは，組換えバキュロウイルス作製キット(BacVector-2000 Transfection Kit，ノバジェン社)を用い，上記実施例1で構築されたトランスファーベクター：pCAP-PfCSP，pCAP-PfCSP/272，pCAP-PfCSP/467，pCAP-PfCSP(A361E)，pCAP-PfCSP(A361E)/272，pCAP-PfCSP(A361E)/467，pCAP-PfCSP-76，pCAP-PfCSP-76/467，pCAP-PfCSP+209，pCAP-PfCSP+209/467，pCAP-PfCSP+76/209，pCAP-PfCSP+76/209/467，pCAP-HA1/Anhui，pCAP-HA1/Anhui/272，pCAP-HA1/Anhui/467，pCAP-HA1/Vietnam，pCAP-HA1/Vietnam/51，pCAP-HA1/Vietnam/101，pCAP-HA1/Vietnam/154，pCAP-HA1/Vietnam/201，pCAP-HA1/Vietnam/272，pCAP-HA1/Vietnam/467， pCAP-AH/345，pCAP-AH/345/467，pCAP-AH/410，pCAP-AH/410/467，pCAP-AH/473，pCAP-AH/473/467，pCAP-AH/520，pCAP-AH/520/467，pCAP-VN/346，pCAP-VN/346/467，pCAP-VN/410，pCAP-VN/410/467，pCAP-VN/473，pCAP-VN/473/467，pCAP-VN/520，pCAP-VN/520/467，pCAP-CO/full，pCAP-CO/full/467，pCAP-CO/19，pCAP-CO/19/467，pCAP-CO/76，pCAP-CO/76/467，pCAP-CO/205，pCAP-CO/205/467，pCA39-HA1/Anhui，pCA64-HA1/Anhui，pCA39-PfCSP(A361E)，pCA64-PfCSP(A361E)，pCAP-CO/full/VSV，pCAP-CO/19/VSV，pCAP-CO/76/VSV，pCAP-CO/205/VSV，pDual-Pfs25-PfCSP-gp64，pDual-PfMSP1-PfCSP-gp64の各々とBacVector-2000 DNAをSf9細胞にコトランスフェクト（co-transfection）することにより作製した。
作製した組換えバキュロウイルスは各々，AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/272，AcNPV-CAP-PfCSP(A361E)/467，AcNPV-CAP-PfCSP-76，AcNPV-CAP-PfCSP-76/467，AcNPV-CAP-PfCSP+209，AcNPV-CAP-PfCSP+209/467，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209，AcNPV-CAP-PfCSP+76/209/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/272，AcNPV-CAP-HA1/Anhui/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/51，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/101，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/154，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/201，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/272，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam/467， AcNPV-CAP-AH/345，AcNPV-CAP-AH/345/467，AcNPV-CAP-AH/410，AcNPV-CAP-AH/410/467，AcNPV-CAP-AH/473，AcNPV-CAP-AH/473/467，AcNPV-CAP-AH/520，AcNPV-CAP-AH/520/467，AcNPV-CAP-VN/346，AcNPV-CAP-VN/346/467，AcNPV-CAP-VN/410，AcNPV-CAP-VN/410/467，AcNPV-CAP-VN/473，AcNPV-CAP-VN/473/467，AcNPV-CAP-VN/520，AcNPV-CAP-VN/520/467，AcNPV-CAP-CO/full，AcNPV-CAP-CO/full/467，AcNPV-CAP-CO/19，AcNPV-CAP-CO/19/467，AcNPV-CAP-CO/76，AcNPV-CAP-CO/76/467，AcNPV-CAP-CO/205，AcNPV-CAP-CO/205/467，AcNPV-CA39-HA1/Anhui，AcNPV-CA64-HA1/Anhui，AcNPV-CA39-PfCSP(A361E)，AcNPV-CA64-PfCSP(A361E)，AcNPV-CAP-CO/full/VSV，AcNPV-CAP-CO/19/VSV，AcNPV-CAP-CO/76/VSV，AcNPV-CAP-CO/205/VSV，AcNPV-Dual-Pfs25-PfCSP-gp64，AcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSP-gp64と名付けた。
実施例3：昆虫細胞における本発明組換えバキュロウイルスからのワクチン抗原の発現試験
実施例2で得たバキュロウイルスAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，およびコントロールとして野生型バキュロウイルスAcNPV-WTをSf9細胞に48well Plate（Corning）あたり1ｘ105 cellsになるように播種したウェルに，上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後に上清を取り除いたウェルに，Sample Buffer Solution（+2ME，×2）（WAKO）を1ウェルあたり0.05mL加えて細胞を完全に溶解した。細胞溶解液を100℃で5分間処理した後，7.5% SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後，タンパクをPVDFメンブレン（Immobilon-P，ミリポア）に転写し，2.5% Skim Milk/SuperBlock（Pierce）に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。各バキュロウイルス感染Sf9細胞タンパクを転写したメンブレンは，一次抗体として抗gp64抗体（AcV5，eBioScience）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)（BioRad）を加えてインキュベーションし，ECLplus Western Blotting Detection kit（GE Healthcare）で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図1に示す。
図1中， ヒトマラリア遺伝子PfCSP，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株HA1遺伝子，及びH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子が組み込まれた組換えバキュロウイルスの昆虫細胞内での融合抗原の発現を示すウェスタンブロッティング分析の図面であり，図中左レーンのレーン1は野生型バキュロウイルス(AcNPV-WT)を，レーン2本発明のデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP）のバンドを，レーン3は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-HA1/Anhui），レーン4は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-HA1/Vietnam）のバンドをそれぞれ示す。
実施例2で得たバキュロウイルスAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，およびコントロールとして野生型バキュロウイルスAcNPV-WTをSf9細胞に48well Plate（Corning）あたり1ｘ105 cellsになるように播種したウェルに，上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後に上清を取り除いたウェルに，Sample Buffer Solution（+2ME，×2）（WAKO）を1ウェルあたり0.05mL加えて細胞を完全に溶解した。細胞溶解液を100℃で5分間処理した後，7.5% SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後，タンパクをPVDFメンブレン（Immobilon-P，ミリポア）に転写し，2.5% Skim Milk/SuperBlock（Pierce）に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。各バキュロウイルス感染Sf9細胞タンパクを転写したメンブレンは，一次抗体として抗gp64抗体（AcV5，eBioScience）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)（BioRad）を加えてインキュベーションし，ECLplus Western Blotting Detection kit（GE Healthcare）で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図1に示す。
図1中， ヒトマラリア遺伝子PfCSP，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株HA1遺伝子，及びH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子が組み込まれた組換えバキュロウイルスの昆虫細胞内での融合抗原の発現を示すウェスタンブロッティング分析の図面であり，図中左レーンのレーン1は野生型バキュロウイルス(AcNPV-WT)を，レーン2本発明のデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP）のバンドを，レーン3は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-HA1/Anhui），レーン4は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-HA1/Vietnam）のバンドをそれぞれ示す。
該図のレーン2，3，及び4に示されるように本発明のデュアル・プロモーター下に各種抗原をgp64遺伝子と融合発現させた組換えバキュロウイルスでは免疫原性外来抗原遺伝子とgp64遺伝子との融合発現産物のバンドが観察される。
このことから，本発明組換えウイルスは昆虫細胞で免疫原性外来抗原遺伝子とgp64遺伝子との融合発現産物が発現できることが確認された。
このことから，本発明組換えウイルスは昆虫細胞で免疫原性外来抗原遺伝子とgp64遺伝子との融合発現産物が発現できることが確認された。
実施例4：本発明組換えバキュロウイルスのウイルス粒子（ビリオン）上に提示されたワクチン抗原中での融合抗原の確認試験
Sf9細胞を150 mm細胞培養用プレート（スミロン：秋田住友ベークライト） あたり1 ｘ 107 cellsになるように培養し，上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後，培養液を3,000 ×g， 4oCで10分間2回遠心し，さらに25％のショ糖溶液の上にウイルス液を重層し，超遠心分離機で25,000 rpm，4°C で90分遠心することでウイルス粒子を得た。を超遠心分離で回収したAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，及びAcNPV-WTのウイルス濃縮液（1×108 PFU/mL）各々0.05mLにSample Buffer Solution（+2ME，×2）（WAKO）を0.05mL加え，100oCで5分間処理した後，7.5 % SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後，タンパクをPVDFメンブレン（Immobilon-P，ミリポア）に転写し，2.5% Skim Milk/SuperBlock（Pierce）に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，及びAcNPV−CAP−PfCSP/467ウイルス溶解液を転写したメンブレンは，一次抗体として抗PfCSP抗体（2A10，MR-4）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)（BioRad）を加えてインキュベーションした。AcNPV-CAP-HA1/Vietnamウイルス溶解液を転写したメンブレンは，一次抗体として抗H5N1抗体（IT-003-005，Immune Technology）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗ウサギIgG抗体（GE Healthcare）を加えてインキュベーションした。メンブレンはECLplus Western Blotting Detection kit（GE Healthcare）で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図2に示す。
Sf9細胞を150 mm細胞培養用プレート（スミロン：秋田住友ベークライト） あたり1 ｘ 107 cellsになるように培養し，上述のバキュロウイルス各々を感染重複度約0.1で感染させた。5日後，培養液を3,000 ×g， 4oCで10分間2回遠心し，さらに25％のショ糖溶液の上にウイルス液を重層し，超遠心分離機で25,000 rpm，4°C で90分遠心することでウイルス粒子を得た。を超遠心分離で回収したAcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-HA1/Vietnam，及びAcNPV-WTのウイルス濃縮液（1×108 PFU/mL）各々0.05mLにSample Buffer Solution（+2ME，×2）（WAKO）を0.05mL加え，100oCで5分間処理した後，7.5 % SDS-PAGEで電気泳動を行った。泳動後，タンパクをPVDFメンブレン（Immobilon-P，ミリポア）に転写し，2.5% Skim Milk/SuperBlock（Pierce）に浸して4℃で一晩ブロッキングを行った。AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/272，及びAcNPV−CAP−PfCSP/467ウイルス溶解液を転写したメンブレンは，一次抗体として抗PfCSP抗体（2A10，MR-4）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗マウスIgG (H+L)（BioRad）を加えてインキュベーションした。AcNPV-CAP-HA1/Vietnamウイルス溶解液を転写したメンブレンは，一次抗体として抗H5N1抗体（IT-003-005，Immune Technology）を，二次抗体としてHRP標識ヤギ抗ウサギIgG抗体（GE Healthcare）を加えてインキュベーションした。メンブレンはECLplus Western Blotting Detection kit（GE Healthcare）で発色させて反応するタンパク質のバンドを検出した。その結果を図2に示す。
図2（A）中，組換えトランスファーベクターから作製した組換えバキュロウイルスのウイルス粒子中でのヒトマラリアCSP遺伝子(PfCSP)のそれぞれの発現を示すウェスタンブロッティング分析の図面であり，図中左レーンのレーン1はデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と完全長gp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP）を，レーン2は本発明のデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と部分長gp64遺伝子（C末から241アミノ酸残基）が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP/272）のバンド，レーン3は本発明のデュアル・プロモーター下にPfCSP遺伝子と部分長gp64遺伝子（C末から46アミノ酸残基）が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-PfCSP/467）を電気泳動し，PfCSP遺伝子とgp64遺伝子との融合発現物を確認した。該図のすべてのレーンで組換えウイルス粒子にPfCSP遺伝子とgp64遺伝子との融合抗原の存在を示す強いバンドをそれぞれ確認できた。
図2（B）中，組換えトランスファーベクターから作製した組換えバキュロウイルスのウイルス粒子中でのH5N1/HA1遺伝子の発現を示すウェスタンブロッティング分析の図面であり，図中左レーンのレーン1は実施例3で調製したAcNPV-WTの感染細胞溶解液を，レーン2は実施例3で調製したAcNPV-CAP-HA1/Anhuiの感染細胞溶解液を，レーン3は実施例3で調製したAcNPV-CAP-HA1/Vietnamの感染細胞溶解液を，レーン4は野生型バキュロウイルス（AcNPV-WT）のウイルス粒子を，レーン5は本発明のデュアル・プロモーター下にインフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子と全長のgp64遺伝子が挿入された組換えバキュロウイルス（AcNPV-CAP-HA1/Vietnam）のウイルス粒子，レーン6はH5N1の精製HA抗原（IT-003-0053p，Immune Technology）を電気泳動し，H5N1/HA1遺伝子とgp64遺伝子との融合発現物を確認した。該図の5のレーンで組換えウイルス粒子にH5N1/Vietnam/1203/04株のHA1遺伝子とgp64遺伝子との融合抗原の存在を示す強いバンドを確認できた。
このように実施例4から，本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された本発明の組換えバキュロウイルスは，組換えウイルス粒子中に所望の免疫原性外来遺伝子とgp64遺伝子の融合発現産物が存在できることが分かる。
実施例5：哺乳動物における本発明組換えバキュロウイルスからのワクチン抗原の発現試験
HepG2細胞にAcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSPを感染重複度約1で感染させた。48時間後，培養上清を除き，PBSで3回リンスした後，-20℃に冷したアセトン・エタノール液 （7:3混合）を加え，-20℃で5分間細胞の固定を行った。5%正常ヤギ血清液（SIGMA）を加え室温で1時間ブロッキングを行った。PfCSPの発現は，Alexa Flour 594で標識した抗PfCSP抗体（2A10，MR-4）を加え，PfMSP-119の発現は抗PfMSP-119抗体（5.2，MR-4）に続きFITCで標識した抗マウス抗体を加えてインキュベーションし，蛍光顕微鏡で反応する細胞を検出した。
その結果を図3に示す。
図3は，HepG2細胞におけるPfMSP1遺伝子とPfCSP遺伝子の融合遺伝子の組換えバキュロウイルスが抗原を発現していることで蛍光標識抗体に染色された細胞の図面を示す。（A）はPfCSP抗原の発現が，（B）はPfMSP-119抗原の発現が確認できており，融合抗原が哺乳動物細胞内で発現できることが確認できた。該図の（A）と（B）から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物細胞において，目的抗原を発現せしめることが分かる。
このことから，本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは，ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに，ウイルス粒子が哺乳動物細胞に侵入し，哺乳動物プロモーターが作動し，哺乳動物細胞内で目的外来抗原遺伝子とgp64遺伝子の融合物を産生し，獲得免疫が誘導されることが示唆される。
HepG2細胞にAcNPV-Dual-PfMSP1-PfCSPを感染重複度約1で感染させた。48時間後，培養上清を除き，PBSで3回リンスした後，-20℃に冷したアセトン・エタノール液 （7:3混合）を加え，-20℃で5分間細胞の固定を行った。5%正常ヤギ血清液（SIGMA）を加え室温で1時間ブロッキングを行った。PfCSPの発現は，Alexa Flour 594で標識した抗PfCSP抗体（2A10，MR-4）を加え，PfMSP-119の発現は抗PfMSP-119抗体（5.2，MR-4）に続きFITCで標識した抗マウス抗体を加えてインキュベーションし，蛍光顕微鏡で反応する細胞を検出した。
その結果を図3に示す。
図3は，HepG2細胞におけるPfMSP1遺伝子とPfCSP遺伝子の融合遺伝子の組換えバキュロウイルスが抗原を発現していることで蛍光標識抗体に染色された細胞の図面を示す。（A）はPfCSP抗原の発現が，（B）はPfMSP-119抗原の発現が確認できており，融合抗原が哺乳動物細胞内で発現できることが確認できた。該図の（A）と（B）から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物細胞において，目的抗原を発現せしめることが分かる。
このことから，本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは，ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに，ウイルス粒子が哺乳動物細胞に侵入し，哺乳動物プロモーターが作動し，哺乳動物細胞内で目的外来抗原遺伝子とgp64遺伝子の融合物を産生し，獲得免疫が誘導されることが示唆される。
実施例6： PfCSP抗原組換えウイルス及びH5N1/HA1抗原組み換えウイルスによる抗体の誘導
１．ウイルス液の接種
超遠心分離で濃縮したAcNPV-WT，AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Vietnamの1×108 PFUのウイルス液をBALB/c雌マウスの大腿筋筋肉内に，2週間間隔で2回接種した。
１．ウイルス液の接種
超遠心分離で濃縮したAcNPV-WT，AcNPV-CAP-PfCSP，AcNPV-CAP-PfCSP/467，AcNPV-CAP-HA1/Anhui，AcNPV-CAP-HA1/Vietnamの1×108 PFUのウイルス液をBALB/c雌マウスの大腿筋筋肉内に，2週間間隔で2回接種した。
２．抗体価の測定
最終免疫から2週間後に安楽死を行ない，マウスから血清を回収し，特異的抗体価の測定に使用した。AcNPV-CAP-PfCSPとAcNPV-CAP-PfCSP/467によるPfCSP抗原特異的な抗体価の誘導はPfCSPのB細胞エピトープである（NANP）４NVDPCペプチド（Sigma）を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。また，AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamによる H5N1/HA抗原特異的な抗体価の誘導はH5N1ウイルスHA精製抗原（IT-003-005p, Immune Technology）を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。なお，ELISAプレートにはMaxiSoup（NUNC)を，2次抗体にはHRP標識ヤギ抗マウスIgG(H&L)抗体（American Qualex）を，発色反応にはTMB（Calbiochem）を使用し，OD450nmでの吸光度を測定した。
その結果を図4に示す。
図4（A）では，マウス血清を800倍から102,400倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために，800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し，AcNPV-CAP-PfCSP及びAcNPV-CAP-PfCSP/467を接種した群では800倍で吸光度が1.138と1.878と強く反応し，抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。また，図4（B）では，マウス血清を400倍から25,600倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために，800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し，AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamを接種した群では3200倍で吸光度が1.551と2.503と強く反応し，抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。図4から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物において，目的抗原に対する抗体を誘導せしめることが分かる。
最終免疫から2週間後に安楽死を行ない，マウスから血清を回収し，特異的抗体価の測定に使用した。AcNPV-CAP-PfCSPとAcNPV-CAP-PfCSP/467によるPfCSP抗原特異的な抗体価の誘導はPfCSPのB細胞エピトープである（NANP）４NVDPCペプチド（Sigma）を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。また，AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamによる H5N1/HA抗原特異的な抗体価の誘導はH5N1ウイルスHA精製抗原（IT-003-005p, Immune Technology）を固相化したプレートを用いたELISA法で行なった。なお，ELISAプレートにはMaxiSoup（NUNC)を，2次抗体にはHRP標識ヤギ抗マウスIgG(H&L)抗体（American Qualex）を，発色反応にはTMB（Calbiochem）を使用し，OD450nmでの吸光度を測定した。
その結果を図4に示す。
図4（A）では，マウス血清を800倍から102,400倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために，800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し，AcNPV-CAP-PfCSP及びAcNPV-CAP-PfCSP/467を接種した群では800倍で吸光度が1.138と1.878と強く反応し，抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。また，図4（B）では，マウス血清を400倍から25,600倍まで2段階希釈を行なった際のOD450nmでの吸光度の各群の平均値をプロットした。PBS及びAcNPV-WTを接種した群の血清では抗原に反応する抗体がないために，800倍でも吸光度が0.1以下の反応しか見られないのに対し，AcNPV-CAP-HA1/Anhui及びAcNPV-CAP-HA1/Vietnamを接種した群では3200倍で吸光度が1.551と2.503と強く反応し，抗原特異的な抗体を誘導していることが明らかである。図4から明らかなように本発明のデュアル・プロモーターのトランスファーベクターを用いた組換えバキュロウイルスは哺乳動物において，目的抗原に対する抗体を誘導せしめることが分かる。
３．中和価の測定
AcNPV-CAP-HA1/Anhuiを接種したマウス血清を用いて、赤血球凝集抑制試験（Hemagglutination Inhibition試験）を行った。方法はインフルエンザウイルスHI試薬「生研」（デンカ生研株式会社）の添付文書の方法に準じて行った。H5N1ウイルスHA精製抗原（IT-003-0053p，Immune Technology）を使用した。非特異凝集物質の吸収は赤血球を，非特異的凝集インヒビターの除去はRDE（II）「生研」（デンカ生研株式会社）を用いて行った。HI試験は96 well Plate で0.025 mLの10倍希釈抗血清を希釈液で2倍段階希釈を行い、希釈抗血清が入ったウェルに0.025 mLで4HA価が得られるように希釈したH5N1ウイルスHA抗原0.025 mLを96 well Plateの各ウェルに添加し，室温で30分間放置した。そこへ0.05 mLの反応用赤血球浮遊液を添加し，よく攪拌した後，室温で60分間保持し、赤血球凝集を完全に阻止した検体の最終希釈倍数をHI抗体価とした。
その結果、PBS及びAcNPV-WTを接種した血清ではHI抗体価が10以下だったのに対し，AcNPV-CAP-HA1/AnhuiではHI抗体価が40を示した。
このことから，本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは，ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに，目的外来抗原遺伝子に対して効果的な抗体が誘導されることで，ワクチン効果を付与することが出来ることが推定される。
AcNPV-CAP-HA1/Anhuiを接種したマウス血清を用いて、赤血球凝集抑制試験（Hemagglutination Inhibition試験）を行った。方法はインフルエンザウイルスHI試薬「生研」（デンカ生研株式会社）の添付文書の方法に準じて行った。H5N1ウイルスHA精製抗原（IT-003-0053p，Immune Technology）を使用した。非特異凝集物質の吸収は赤血球を，非特異的凝集インヒビターの除去はRDE（II）「生研」（デンカ生研株式会社）を用いて行った。HI試験は96 well Plate で0.025 mLの10倍希釈抗血清を希釈液で2倍段階希釈を行い、希釈抗血清が入ったウェルに0.025 mLで4HA価が得られるように希釈したH5N1ウイルスHA抗原0.025 mLを96 well Plateの各ウェルに添加し，室温で30分間放置した。そこへ0.05 mLの反応用赤血球浮遊液を添加し，よく攪拌した後，室温で60分間保持し、赤血球凝集を完全に阻止した検体の最終希釈倍数をHI抗体価とした。
その結果、PBS及びAcNPV-WTを接種した血清ではHI抗体価が10以下だったのに対し，AcNPV-CAP-HA1/AnhuiではHI抗体価が40を示した。
このことから，本発明の組換えトランスファーベクターからの製造された組換えバキュロウイルスは，ヒトを含む哺乳動物に投与されたときに，目的外来抗原遺伝子に対して効果的な抗体が誘導されることで，ワクチン効果を付与することが出来ることが推定される。
配列番号：1，2は，結核菌H37RvのゲノムDNAのPCR用プライマーphsp65-F1とphsp65-R1のプライマー配列である。
配列番号：3，4は，pcDNA-hsp65を鋳型としたPCR用プライマーphsp65-F2とphsp65-R2のプライマー配列である。
配列番号：5，6は，pBACsurf-1を鋳型とした，gp64遺伝子DNA断片を得るPCR用プライマーpPolh-F2とpgp64-R2のプライマー配列である。
配列番号：7，8は，インフルエンザウイルスHA遺伝子断片製造のPCR用プライマーHA-fとHA-rのプライマー配列である。
配列番号：9，10は，pCR-Blunt-HAを鋳型としたpHA-F1とpHA-R1のプライマー配列である。
配列番号：11，12は，pBACsurf-HA1を鋳型としたPCR用プライマーPolh-f RsrIIとGP64-r DraIIIのプライマー配列である。
配列番号：13，14は，インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAのRT-PCR用プライマーNP-f EcoRIとNP-r Cfr9Iのプライマー配列である。
配列番号：15，16，12は，pCAP-H1N1/HA1-gp64のPCR用プライマーgp64(272)-fとgp64(467)-fとGP64-DraIIIのプライマー配列である。
配列番号：17，18は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373)のプライマー配列である。
配列番号：19，20は，P. bergheiゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpAMA-F1とpAMA1-R1のプライマー配列である。
配列番号：21，22は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfCSP-F1とpPfCSP-R1のプライマー配列である。
配列番号：23，24は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfs25-F1とpPfs25-R2のプライマー配列である。
配列番号：25，26は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfMSP119-F1とpPfMSP119-R2のプライマー配列である。
配列番号：17，27は，pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号：28，27は，pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(76)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号：29は，P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列（ただし361番目のAをEに変換）からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列（PfCSP+）である。
配列番号：30，31は，人工合成遺伝子配列（PfCSP+）を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+209)とPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号：32，33，34，31は，人工合成遺伝子配列（PfCSP+）を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+76)とPfCSP-r(+128) とPfCSP-f(+209) BamHIとPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号：35は，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：36，37は，配列番号35の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：38は，インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：39，40は，配列番号38の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：41，42，43，44、12は，pCAP-HA1/Vietnamを鋳型としたPCR用プライマーgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示)のプライマー配列である。
配列番号：45は，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：46，47，48，49，50は，配列番号45の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示)，AH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示)，AH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示)，AH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ，AH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号：51は，インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：52，53，54，55，56は，配列番号51の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示)，VN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示)，VN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示)，VN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ，VN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：57は，Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：58，59，60，61，62は，配列番号57の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-r(373) (5’-CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号： 64，65，66，67は，BaculovirusゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーgp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示)，及びvp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：68，69は，pVSV-Gを鋳型としたPCR用プライマーVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号：3，4は，pcDNA-hsp65を鋳型としたPCR用プライマーphsp65-F2とphsp65-R2のプライマー配列である。
配列番号：5，6は，pBACsurf-1を鋳型とした，gp64遺伝子DNA断片を得るPCR用プライマーpPolh-F2とpgp64-R2のプライマー配列である。
配列番号：7，8は，インフルエンザウイルスHA遺伝子断片製造のPCR用プライマーHA-fとHA-rのプライマー配列である。
配列番号：9，10は，pCR-Blunt-HAを鋳型としたpHA-F1とpHA-R1のプライマー配列である。
配列番号：11，12は，pBACsurf-HA1を鋳型としたPCR用プライマーPolh-f RsrIIとGP64-r DraIIIのプライマー配列である。
配列番号：13，14は，インフルエンザウイルスPR/8/34株のゲノムRNAのRT-PCR用プライマーNP-f EcoRIとNP-r Cfr9Iのプライマー配列である。
配列番号：15，16，12は，pCAP-H1N1/HA1-gp64のPCR用プライマーgp64(272)-fとgp64(467)-fとGP64-DraIIIのプライマー配列である。
配列番号：17，18は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373)のプライマー配列である。
配列番号：19，20は，P. bergheiゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpAMA-F1とpAMA1-R1のプライマー配列である。
配列番号：21，22は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfCSP-F1とpPfCSP-R1のプライマー配列である。
配列番号：23，24は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfs25-F1とpPfs25-R2のプライマー配列である。
配列番号：25，26は，P. falciparumゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーpPfMSP119-F1とpPfMSP119-R2のプライマー配列である。
配列番号：17，27は，pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(19)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号：28，27は，pCAP-PfCSPを鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(76)とPfCSP-r(373 A361E)のプライマー配列である。
配列番号：29は，P. falciparum 3D7株のPfCSPのアミノ酸配列（ただし361番目のAをEに変換）からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列（PfCSP+）である。
配列番号：30，31は，人工合成遺伝子配列（PfCSP+）を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+209)とPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号：32，33，34，31は，人工合成遺伝子配列（PfCSP+）を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP-f(+76)とPfCSP-r(+128) とPfCSP-f(+209) BamHIとPfCSP-r(+ A361E)のプライマー配列である。
配列番号：35は，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：36，37は，配列番号35の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATTTGCATC -3’ (配列番号36): PstI サイトは下線部で表示) とAH-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTGCGCCTGC -3’ (配列番号37): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：38は，インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA1領域のアミノ酸配列からSf9細胞とヒト細胞で使用率の高いコドンを用いて作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：39，40は，配列番号38の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN-F1(5’- CAGTCTGCAGGACCAGATCTGTATC -3’ (配列番号39): PstI サイトは下線部で表示) とVN-R4 (5’- CAGTCCCGGGCTCTCTTCTTCCTGC -3’ (配列番号40): Xma I サイト は下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：41，42，43，44、12は，pCAP-HA1/Vietnamを鋳型としたPCR用プライマーgp64(51)-f (5’- GACTCCCCGGGTGGAAATCACCATCGTGGAGACG -3’ (配列番号41): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(101)-f (5’- GACTCCCCGGGATTTGCTTATGTGGAGCATCAGG -3’ (配列番号42): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(154)-f (5’- GACTCCCCGGGCGCACCACACGTGCAACAAATCG -3’ (配列番号43): Xma I サイトは下線部で表示)，gp64(201)-f (5’- GACTCCCCGGGACACTGTGCTTCATCGAGACGGC -3’ (配列番号44): Xma I サイトは下線部で表示)とGP64-r DraIII(5’- GGGCACTTAGTGATATTGTCTATTACGGTTTCTAATC-3’ (配列番号12) : DraIIIサイトは下線表示)のプライマー配列である。
配列番号：45は，インフルエンザウイルスH5N1/Anhui/1/05のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：46，47，48，49，50は，配列番号45の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーAH17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATTGGGTACC -3’ (配列番号46): Pst I サイトは下線部で表示)，AH345-R (5’- CGATCCCGGGCTCTCTTTCTCCTCCGCTCGC -3’ (配列番号47): Xma I サイトは下線部で表示)，AH410-R (5’- CGATCCCGGGCGGCCTCGAACTGGGTGTTCATT -3’ (配列番号48): Xma I サイトは下線部で表示)，AH473-R (5’- CGATCCCGGGCGTCTCTGAGTTGAAGGCGCAC -3’ (配列番号49): Xma I サイトは下線部で表示) ，AH520-R (5’- CGATCCCGGGCACCACTAATTTCCTCTCGCTTC -3’ (配列番号50): Xma I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号：51は，インフルエンザウイルスH5N1/Vietnam/1203/04のHemagglutininのHA領域のアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：52，53，54，55，56は，配列番号51の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーVN17-F (5’- GACTCTGCAGGATCAGATCTGTATCGGATATC -3’ (配列番号52): Pst I サイトは下線部で表示)，VN346-R (5’- CGATCCCGGGCCCGCTTTTTCCTCCTCCGTTCG -3’ (配列番号53): Xma I サイトは下線部で表示)，VN410-R (5’- CGATCCCGGGCCTCAAACTGCGTATTCATTTTG -3’ (配列番号54): Xma I サイトは下線部で表示)，VN473-R (5’- CGATCCCGGGCTCTAAGCTGGAGCCTGACTTTGTC -3’ (配列番号55): Xma I サイトは下線部で表示) ，VN520-R (5’- CGATCCCGGGCACTAATCTCCTCTCTTTTAAGTC -3’ (配列番号56): Xma I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：57は，Plasmodium falciparum 3D7株のCSPのアミノ酸配列からDNA2.0社のGene Designerを用いてコドンの最適化を行い，作製した人工合成遺伝子配列である。
配列番号：58，59，60，61，62は，配列番号57の人工合成遺伝子配列を鋳型としたPCR用プライマーPfCSP_opt-f (5’- GACTCTGCAGATGATGCGAAAATTGGCCATACTG -3’ (配列番号58): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-r(397) (5’- CGATCCCGGGCATTGAGGAACAGAAAGGAAAGAACCATG -3’ (配列番号59): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(19) (5’- GACTCTGCAGCTGTTTCAGGAATACCAGTGCTATGG -3’ (配列番号60): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-r(373) (5’-CGATCCCGGGCCTTCTCCATCTTACAAATTTTCTTTTCAATATCATTAGC -3’ (配列番号61): Xma I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(76) (5’- GACTCTGCAGGACGACGGAAATAATGAGGACAACG -3’ (配列番号62): Pst I サイトは下線部で表示)，PfCSP_opt-f(205) (5’- GACTCTGCAGAATGCAAACCCAAATGCCAATCCAAACGC -3’ (配列番号63): Pst I サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
配列番号： 64，65，66，67は，BaculovirusゲノムDNAを鋳型としたPCR用プライマーgp64-p-f (5’- GACTCGGACCGGCCAGATAAAAATAATCTTATCAATTAAG -3’ (配列番号64): Rsr II サイトは下線部で表示)とgp64-p-r
(5’- CGATACTAGTAGCACTGAGGCTTCTTATATACCCG -3’ (配列番号65): Spe I サイトは下線部で表示)，及びvp39-p-f (5’- GACTCGGACCGCGTCGTACAAATCGAAATATTGTTGTG -3’ (配列番号66): Rsr II サイトは下線部で表示)とvp39-p-r (5’- CGATACTAGTGTGATTGAGAAAGAAATCTCTTATTC -3’ (配列番号67): Spe I サイトは下線部で表示)のプライマー配列である。
配列番号：68，69は，pVSV-Gを鋳型としたPCR用プライマーVSV-G-f (5’- GACTCCCCGGGCGTTCGAACATCCTCACATTCAAG -3’ (配列番号68): Xma I サイトは下線部で表示)とVSV-G-r (5’- GACTCACTTAGTGCTTTCCAAGTCGGTTCATCTC -3’ (配列番号69): Dra III サイトは下線部で表示) のプライマー配列である。
Claims (1)
- 組換えオートグラファ核多角体病ウイルス（AcNPV）を有効成分とする医薬組成物であって、
該組換えAcNPVが、少なくともポリヘドリンプロモーター及びCAGプロモーターが連結したデュアルプロモーターの制御下に以下のいずれかの融合遺伝子を含有することを特徴とする、医薬組成物：
(1) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の19〜373番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の21〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-PfCSP）；
(2) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の19〜373番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の467〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-PfCSP/467）；
(3) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の205〜373番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の21〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-CO/205）；
(4) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の76〜373番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の467〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-CO/76/467）；
(5) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の76〜373番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の21〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-CO/76）；及び
(6) 配列番号70で示されるアミノ酸配列の1〜397番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子と
AcNPVゲノム（GenBankアクセッション番号L22858）に含まれる、gp64タンパク質のアミノ酸配列の21〜512番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子
の融合遺伝子（AcNPV-CAP-CO/full）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010504369A JP5409605B6 (ja) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | 新規ウイルスベクター |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007205785 | 2007-08-07 | ||
| JP2007205785 | 2007-08-07 | ||
| JP2010504369A JP5409605B6 (ja) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | 新規ウイルスベクター |
| PCT/JP2008/064503 WO2009020236A2 (en) | 2007-08-07 | 2008-08-06 | Baculoviral vectors with a dual vertebrate and baculovirus promoter controlling an immunogenic fusion gene |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2010535466A JP2010535466A (ja) | 2010-11-25 |
| JP2010535466A5 JP2010535466A5 (ja) | 2011-08-18 |
| JP5409605B2 true JP5409605B2 (ja) | 2014-02-05 |
| JP5409605B6 JP5409605B6 (ja) | 2014-03-26 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2191002B1 (en) | 2016-04-13 |
| DK2191002T3 (en) | 2016-06-13 |
| WO2009020236A2 (en) | 2009-02-12 |
| RU2010108248A (ru) | 2011-09-20 |
| AU2008284664A1 (en) | 2009-02-12 |
| JP2010535466A (ja) | 2010-11-25 |
| CN101772576A (zh) | 2010-07-07 |
| TWI435934B (zh) | 2014-05-01 |
| CN101772576B (zh) | 2016-05-04 |
| KR20100040947A (ko) | 2010-04-21 |
| CA2695894C (en) | 2016-09-20 |
| HK1142629A1 (zh) | 2010-12-10 |
| ZA201000422B (en) | 2011-03-30 |
| BRPI0815034A2 (pt) | 2015-03-17 |
| CA2695894A1 (en) | 2009-02-12 |
| MY155412A (en) | 2015-10-15 |
| RU2491093C2 (ru) | 2013-08-27 |
| AR067833A1 (es) | 2009-10-21 |
| WO2009020236A3 (en) | 2009-04-16 |
| AU2008284664B2 (en) | 2014-05-15 |
| MX2010001499A (es) | 2010-03-15 |
| AP2010005146A0 (en) | 2010-02-28 |
| IL203411A0 (en) | 2011-07-31 |
| TW200911992A (en) | 2009-03-16 |
| EP2191002A2 (en) | 2010-06-02 |
| IL203411A (en) | 2017-01-31 |
| PE20090959A1 (es) | 2009-07-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4171930B2 (ja) | 新規ウイルスベクター | |
| AU2009328621A1 (en) | Methods and compositions for use of a coccidiosis vaccine | |
| US9327018B2 (en) | Recombinant baculovirus vaccine | |
| AU2008284664B2 (en) | Baculoviral vectors with a dual vertebrate and baculovirus promoter controlling an immunogenic fusion gene | |
| EP3599247A2 (en) | Recombinant hemagglutinin protein of influenza virus and vaccine containing the same | |
| JP5409605B6 (ja) | 新規ウイルスベクター | |
| RU2588464C2 (ru) | Бакуловирусный вектор и его применение |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110628 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110628 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130716 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130913 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130913 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131015 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131105 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |