JP2010528090A - テンシン1発現を刺激することのできる活性薬剤を含む化粧用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
a)植物のガム又は樹脂の水蒸気蒸留と、
b)精油の除去と、
c)3.5より大きい極性指数を有する水以外の極性有機溶媒、例えばアルコール、特にメタノール、エタノール又はイソプロパノールなどを用いる、水蒸気蒸留残留物の抽出とを含む方法に従って得ることができる。いかなる場合でも、抽出は考慮される植物の全て又は一部で実施され得、植物は通常の方法で粉砕されるか又は小片にされ得る。抽出は、一般に、例えば周囲温度から100℃の範囲の温度にて、およそ30分から12時間の間、粉砕した材料を1又はそれ以上の上述の溶媒中に浸漬するか又は穏やかに攪拌することにより実施される。次いで、植物の不溶性物質を除去するために、溶液を濾過することが好ましい。適切な場合には、溶媒が揮発性溶媒、例えばエタノール又はメタノールである場合、溶媒も取り除く。
−油、特に、揮発性又は不揮発性の、直鎖もしくは環状シリコーン油、例えばポリジメチルシロキサン(ジメチコン)、ポリアルキルシクロシロキサン(シクロメチコン)及びポリアルキルフェニルシロキサン(フェニルジメチコン)など;合成オイル、例えばフッ素油、アルキルベンゾエート及びポリイソブチレンなどの分枝炭化水素など;植物油、特に、ダイズ油又はホホバオイル;ならびに鉱油、例えば流動パラフィンなどから選択され得る;
−ろう、例えばオゾケライト、ポリエチレンろう、蜜ろう又はカルナウバろうなど;
−シリコーンエラストマー、特に、触媒の存在下、少なくとも1つの反応性基(特に水素又はビニル)を含有し、かつ少なくとも1つのアルキル基(特にメチル)又はフェニル基を、末端及び/又は側鎖に有するポリシロキサンと、有機シリコーン、例えば有機水素ポリシロキサンなどとの反応により得られるもの;
−界面活性剤、好ましくは、それらが非イオン性、陰イオン性、陽イオン性又は両性であろうと、乳化界面活性剤、及び特に、ポリオールの脂肪酸エステル、例えばグリセロールの脂肪酸エステル、ソルビタンの脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル及びスクロースの脂肪酸エステル;ポリエチレングリコールの脂肪アルコールエーテル;アルキルポリグルコシド;ポリシロキサン改質ポリエーテル;ベタイン及びその誘導体;ポリクオタニウム;エトキシ化脂肪アルコール硫酸塩;スルホスクシネート;サルコシネート(sarcosinates);リン酸アルキル及びジアルキル、及びそれらの塩;ならびに脂肪酸石鹸など;
−共界面活性剤、例えば直鎖脂肪アルコール及び特にセチルアルコール及びステアリルアルコール;
−増粘剤及び/又はゲル化剤、及び特に、アクリルアミドメチルプロパンスルホン酸(AMPS)の、及び/又はアクリルアミドの、及び/又はアクリル酸の、及び/又はアクリル酸塩もしくはエステルの、親水性もしくは両親媒性の架橋もしくは非架橋ホモポリマー又はコポリマー;キサンタンガム又はグアーガム;セルロース誘導体;ならびにシリコーンガム(ジメチコノール);
−保湿剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び糖を含むポリオール、ならびにグリコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸及びその塩及びエステル;
−有機スクリーニング剤、例えば、ジベンゾイルメタン誘導体(ブチルメトキシジベンゾイルメタンを含む)、桂皮酸(cinammic acid)誘導体(エチルヘキシルメトキシシンナメートを含む)、サリチル酸塩、パラ−アミノ安息香酸、β,β’−ジフェニルアクリレート、ベンゾフェノン、ベンジリデンカンファー誘導体、フェニルベンズイミダゾール、トリアジン、フェニルベンゾトリアゾール及びアントラニル酸(anthranilic)誘導体;
−無機スクリーニング剤、被覆された又は被覆されていない色素又はナノ色素の形態の無機酸化物に基づくもの、及び特に二酸化チタン又は酸化亜鉛に基づくもの;
−染料;
−防腐剤;
−金属イオン封鎖剤、例えばEDTA塩;
−香料;
−ならびにそれらの混合物、
を含んでもよいが、このリストに限定されない。
エレミ(カナリウム・コムネ)の抽出物のテンシン1発現への効果を評価した。
−エレミ(カナリウム・コムネ)の抽出物の調製:
この抽出物は、エレミガムの水蒸気蒸留、得られる精油の除去、蒸留残留物(使い尽くされたガム)の回収及びエタノール抽出、濾液の濾過及び回収ならびに、糊状の液体抽出物を得るためにジプロピレングリコールに溶解し濾過する、エタノールの蒸発により得られる。次の段階が実行される。
a.150gの粗エレミガム樹脂を従来型水蒸気蒸留装置の中に挿入。
b.ガム樹脂が使い尽くされるまで精油を蒸留。
c.蒸留装置の冷却及び蒸留残留物を濾過。
d.使い尽くされたエレミガムを乾燥。
a.100gの使い尽くされたガムを500mlのエタノールとともに96.3%(容積/容積)の反応器の中に挿入。
b.この混合物を60℃にて1時間攪拌。
c.溶液を冷却。
d.ブフナー漏斗を介する溶液の濾過及び濾液の回収。
e.ロータリーエバポレーターでエタノールを蒸発。
a.10gのエタノール抽出物を10gのジプロピレングリコール及び30mlのエタノールとともに96.3%(容積/容積)にて反応器の中に挿入。
b.30分間50℃にて混合物を攪拌。
c.溶液を周囲温度まで冷却。
d.濾過。
e.ロータリーエバポレーターでエタノールを蒸発。
f.ジプロピレングリコール溶液中20gの抽出物の回収。このようにして50重量%のジプロピレングリコールを含有する抽出物が得られる。
形成手術により得た5名のドナーに由来する皮膚サンプルから単離した細胞(線維芽細胞)を、プラスチック製マイクロプレート中、2mMのL−グルタミン、50IU/mlのペニシリン、50μg/mlのストレプトマイシン及び10%のウシ胎児血清(FCS)を添加したDMEM培地を用いて培養した。培養液及び補助剤はInvitrogenより入手した。TGFβ(R&D Systems)を10ng/mlで添加した後、テンシン1発現の刺激を制御した。
平均の標識された表面積の87138(±18188)μm2、すなわち非刺激対照に対して+48%のパーセント変化が測定された(p<0.05)。
実施例1に類似する方法で、α5インテグリン及びフィブロネクチンのテンシン1の発現を、胸部手術により生じる(正常成人ヒト皮膚、21〜51歳の5名のドナーのプール、プールPF2)、8代継代(正常線維芽細胞)で、又はHayflic複製老化モデルを用いる同じ皮膚サンプルの人工老化後(老化線維芽細胞)のいずれかで使用される(Hayflick, L., Clin Geriatr Med, 1985; Hayflick, L. How and Why We Age, Ballantine Books, 1994)、皮膚サンプル由来の線維芽細胞の培養物、ならびに、子供由来の皮膚サンプル(3〜5歳の5名のドナーのプール)(若年の線維芽細胞)由来の線維芽細胞の培養物の免疫蛍光により比較した。正常成人線維芽細胞を対照として使用する。この研究で用いたプロトコールは、実施例1に記載されるものと同一である。ヒトα5インテグリン(CD49e)及びヒトフィブロネクチンに対する一次抗体は、それぞれImmunotech及びSigma製である。
プロトコール:
培養後、実施例1に記載されるように調製した細胞を、血清を除去するために洗浄し、全RNAをTri試薬(登録商標)(Sigma)を用いて標準的なプロトコールに従って抽出した。サンプル(三重反復)を回収し、DNA−free(登録商標)システム(Ambion)を用いてDNアーゼで処理した。RNAの定性的及び定量的分析を、Bio−Analyzer(Agilent)を用いて行った。逆転写(RT;Superscipt II(登録商標)酵素、Invitrogen)を1μgのDNAを含まない全RNAで行い、10ngのcDNAを最終的にリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅法(定量的PCR又はQPCR)による分析目的に用いた。QPCR分析は、「SYBR Green I Master(登録商標)」ミックスを用いて検出するLight Cycler 480マシンを用いて行った。次のGENBANK配列:G3PDH(NM002046)、TNS1(NM022648)及びITGA5(NM002205)から、以下のプライマーを選択した。増幅した全ての断片は唯一のものであり、同定検証のために配列決定した。発現値を、同一培養条件下のG3PDHハウスキーピング遺伝子の発現に関係づけた。結果はそれぞれの対照に対するパーセントとして表される。
TNS1発現のRT−QPCR解析により、48時間培養した後の、実施例2の免疫蛍光により得た結果が確認された。テンシン1(TNS1)及びα5インテグリン(ITGA5)をコードするmRNAは、老化線維芽細胞に関しておよそ50%減少した。培養時間を48時間から96時間に増加させると、老化線維芽細胞においてTNS1 mRNAの相対量がさらに減少し、その値は対照(正常皮膚サンプル)について得た量の30%であった。逆に、テンシン1をコードするmRNAは、小児線維芽細胞に関して、対照の量の140%を示した。
a)TNS1の部分的不活性化ならびにマーカーの発現及び局在性への効果についての試験
実施例2に記載される正常皮膚サンプル由来の線維芽細胞を、供給業者のプロトコールに従って、OptiMEM培地(Invitrogen)中のLipofectamine LTX(Invitrogen)試薬と複合体を形成した、合計90nMのサイレンシングRNA(SiRNA Ambion AM16708A)にトランスフェクトした。ヒトTNS1を不活化させる3つの異なるRNA(参照番号50−52)を試験した。不適切なサイレンシングRNA及びDNAを含まないトランスフェクション試薬を対照として用いた。サイレンシングRNA ref.52(SiRNA ID 139898;センス配列CCGAGGCAGGAUAGGAGUUtt)を、予備実験に基づいて選択し、その後の不活性化及び機能調査に用いた。トランスフェクションの後、これらの細胞を10ng/mlのTGFβで処理し、又は処理しなかった。mRNAの分析(RT−QPCR)及び免疫蛍光分析は、実施例2及び実施例3にあるように、それぞれ48時間後及び72時間後に行った。
6−ウェルプレートに格子を調製し、7×104細胞(実施例2に記載されるように、正常、老化及び小児細胞)を10ng/mlのTGFβの存在下及び非存在下、2.4mg/ウェルのラットテールコラーゲンI(J Boy Institute)を添加した標準培地で培養した。サイレンシングRNAをトランスフェクトした細胞を、トランスフェクションの48時間後に収縮試験に用いた。1時間重合した後、真皮同等物(DE)を手作業で支持体から取り外し、培養液中で8時間浮遊させ続けた。培地を交換し、コンピュータ画像分析を1、3、6及び8日目に行った。Lucia3.0ソフトウェア(Nikkon)を用いて表面を測定した。
以下の組成物は、当業者に慣習的な方法で調製することができる。下に示す量は、重量パーセントとして表される。
Claims (12)
- (a)テンシン1発現を刺激することのできる少なくとも1種類の活性薬剤、及び(b)真皮において細胞外巨大分子の合成を刺激するための少なくとも1種類の活性薬剤を含む、化粧用組成物。
- 前記活性薬剤が、エレミ又はカナリウム・インディクム(Canarium indicum)L.又はカナリウム・ルゾニクム(Canarium luzonicum)又はカナリウム・コムネ(Canarium commune)の抽出物である、請求項1に記載の組成物。
- 前記活性薬剤が、
a)植物のガム又は樹脂の水蒸気蒸留と、
b)精油の除去と、
c)極性指数が3.5より大きい水以外の極性有機溶媒、例えばアルコール、特にメタノール、エタノール又はイソプロパノールなどを用いる、水蒸気蒸留残留物の抽出と、を含む方法に従って得ることのできる、請求項2に記載の方法。 - 前記細胞外巨大分子の合成を刺激する活性薬剤が、フィブロネクチンの合成を刺激する、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記フィブロネクチンの合成を刺激する活性薬剤がアシルオリゴペプチドである、請求項4に記載の方法。
- 前記組成物が、抗エラスターゼ剤、線維芽細胞及びケラチノサイトの移動度を増大させることができ、かつ/又は、ヒト皮膚の接着タンパク質及び/又は細胞骨格タンパク質の産生を促進することができる薬剤、ケラチノサイトにおいてエラフィン発現を刺激することのできる薬剤、ヒト線維芽細胞の成長を活性化することのできる薬剤、微小循環を活性化することができ、かつ/又は抗浮腫性を有する薬剤、抗酸化剤、及びそれらの混合物から選択される、少なくとも1種類の活性薬剤も含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1から6のいずれか一項に記載の組成物の皮膚への局所適用を含む、少なくとも1つの皮膚の老化の徴候を防ぎ、かつ/又は処置することを意図するスキンケア法。
- 皮膚のたるみを防ぎ、かつ/又はそれに対処することを目的とする、請求項7に記載の方法。
- 高齢者の皮膚で実施される、請求項7又は8に記載の方法。
- 請求項3に記載の方法に従って得ることのできる、エレミ又はカナリウム・インディクムL.又はカナリウム・ルゾニクム又はカナリウム・コムネの抽出物。
- 美容用に許容される媒体中に、請求項10に記載されるような少なくとも1種類の抽出物を含む、化粧用組成物。
- 請求項10に記載のカナリウム抽出物又は請求項11に記載の組成物の皮膚への局所適用を含む、少なくとも1つの皮膚の老化の徴候を防ぎ、かつ/又は処置することを意図する美容方法。
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