KR101784940B1

KR101784940B1 - 피부 탄력 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101784940B1
Application number: KR1020100084506A
Authority: KR
Inventors: 손의동; 민대진; 장희경; 최현정; 조성아; 김지현; 이태룡
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2010-08-31
Filing date: 2010-08-31
Publication date: 2017-10-12
Also published as: EP2612654A2; EP2612654B1; CN103079541B; EP2612654A4; KR20120020716A; JP2013540715A; HK1179155A1; WO2012030138A2; WO2012030138A3; US20130171274A1; CN103079541A

Abstract

여우구슬(Phyllanthus urinaria) 추출물 및 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀(polymersome)을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 개선, 피부 탄력성 회복 및 피부 수분 함유량 증대 효능을 포함하여 피부 탄력을 개선하는 효과가 있다.

Description

피부 탄력 개선용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN ELASTICITY}

본 발명은 피부 탄력 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

표피, 진피 등의 구조가 변화하는 경우 피부가 탄력성을 잃고 처져 보이게 된다.

진피의 두께는 점차적으로 감소하는데 진피층의 콜라겐(교원질)의 총량은 성인이 된 후 1년에 1%씩 소실되며, 또한 남아있는 콜라겐 섬유는 점차 두꺼워지면서 가교(cross-linking)가 증가하게 되어 용해도, 팽창력 등이 감소한다.

아울러 탄력섬유도 두꺼워지게 되며, 가교도 증가하게 된다. 그 외 진피 내에서는 섬유아세포의 증식 활성이 떨어지고 콜라겐의 합성능은 감소, 분해능은 증가한다.

표피와 진피 등의 재생이 늦어지고, 표피와 진피간의 부착력이 떨어지게 됨에 따라 피부의 탄력도는 급속히 낮아지게 된다.

이와 같은 여성피부탄력의 현상 등을 개선하기 위하여 콜라겐 증가나, 엘라스틴 증가와 같은 방법을 통한 탄력 개선을 응용하였던 반면, 표피와 진피부착에 관련된 연구는 거의 진행되지 않았다.

본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위해 여우구슬(Phyllanthus urinaria) 추출물 및 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 피부 탄력성 회복 효능을 가지는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 여우구슬(Phyllanthus urinaria) 추출물 및 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 개선, 피부 탄력성 회복 및 피부 수분 함유량 증대 효능을 가져서 피부 탄력을 개선시키는 효과가 있다.

도 1은 여우구슬 추출물 및 ABcell™을 처리하였을 때, 섬유아세포에서 퍼리칸 유전자 변화를 나타낸 결과이다.
도 2는 여우구슬 추출물 처리시 인간 섬유아세포에서 퍼리칸 단백질의 변화를 나타낸 것이다.
도 3은 ABCell™처리시 인간 섬유아세포에서 퍼리칸 변화를 나타낸 것이다.
도 4는 여우구슬 추출물 및 ABCell을 함유한 화장품 제형을 통해 외부임상시험기관인 더마프로에서 주름 및 탄력성 증가에 대한 임상수행을 실시한 결과를 나타낸 것이다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 여우구슬(Phyllanthus urinaria) 추출물 및 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀(polymersome)을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

여우구슬(Phyllanthus urinaria)은 어린초 또는 진주초라고도 불리며, 주로 밭이나 풀밭에서 자란다. 여우구슬은 장염, 이질, 전염성 간염 및 신염으로 인한 수종, 요로 감염, 명목, 수아의 감적, 화안목옹, 구창두창 및 무명 소종에 대한 치료 효과가 있고, 화장료에 첨가되어 미백 효능을 나타낼 수 있음이 알려져 있다. 대한민국 공개특허공보 제2004-59004호에는 진주초 추출물, 첨미우 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 생성 억제 활성을 갖는 식물 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물이 개시되어 있다. 또한 일본공개특허공보 평8-12566호에는 진주초 추출물(Phyllanthus niruri L.), 마티코(Piper elongatum Vahl. & Piper ungustifolium) 및 서양 쐐기풀(Urtica urens)로 이루어진 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상을 배합하여 함유하는 티로시나제 활성 저해제가 개시되어 있다.

상기 항노화 펩타이드는 항노화 효능을 보이는 펩타이드를 말하며, 예를 들어, 팔미토일트리펩타이드-5(Palmitoyl Tripeptide-5) 또는 다이아미노프로피오노일 트리펩타이드 33(Diaminopropionoyl Tripeptide-33) 일 수 있다. 상기 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀은 앱셀(ABcell)™(아모레퍼시픽)일 수 있다.

폴리머좀이란 소수성 블록과 친수성 블록을 함께 가지고 있는 다양한 양친성 고분자의 합성을 통한 효과적인 나노구조체로, 베지클(vesicle) 형태의 구조체이다. 수용액 내에서 이러한 양친성 고분자는, 소수성 블록이 시스템의 자유에너지를 낮추기 위해 물을 피해 자기들끼리 회합하려는 성질에 의해 회합체를 이루고, 친수성 블록이 수용액 내에서 균일하게 용해되기 때문에, 수용액 내에서 열역학적으로 안정한 구조체를 유지할 수 있게 된다. 상기 폴리모좀은 피부로의 침투 및 유효성분의 포집성이 우수하며, 수용액 속에서 현저하게 안정적이어서, 체내 투여시 상당 기간 동안 그 구조를 유지할 수 있다.

본 발명의 조성물은 퍼리칸(Perlecan) 유전자의 발현을 증가시킬 수 있고, 퍼리칸 단백질 생성을 증가시킬 수 있다. 퍼리칸은 표피와 진피에 존재하는 프로테오글리칸(proteoglycan)으로서 다양한 성장 인자(growth factor)들이 붙어있어 표피세포의 증식 및 분화, 부착에 영향을 주는 것을 발견하였다. 본 발명의 조성물은 퍼리칸(Perlecan) 유전자의 발현을 증가시켜서 표피와 진피의 재생 및 표피와 진피의 부착력 향상을 촉진하여 피부 구조를 유지시킨다. 그래서, 피부 탄력을 개선시켜 피부 탄력성을 회복시킬 수 있다.

또한, 상기 조성물은 UV에 의한 퍼리칸 단백질 생성 저하를 회복시킨다.

본 발명의 조성물은 피부 주름 개선, 피부 탄력성 회복 및 피부 수분 함유량을 증대시킨다

[ 시험예 1] 퍼리칸 유전자 증가 실험 ( RNA 분리 및 RT - PCR )

신생아의 섬유아세포를 10% 혈청이 들어있는 DMEM 배지를 사용하여 60 mm 세포 배양 디쉬(cell culture dish)에 1.25×10⁶cells/dish의 밀도로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 80% 정도 confluency 까지 배양한다. 그 후 세포를 24시간 동안 starvation 시킨 후 PBS로 2번 세척한 여우구슬 추출물 및 ABcell™을 각 농도별로 처리하여 2일 동안 배양한다. 배양 후 배지를 제거하고 트리졸(Trizol) (Invitrogen) 1 ml을 첨가하여 invitrogen社의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리한다. 자외선 검출기(HEWLETT PACKARD)를 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량한 후, RT-PCR (Reverse transcription-polymerase chain reaction)을 실시한다. 각 샘플에 대한 유전자 분석을 위해 상보적인 유전자인 36B4를 기준으로 보정하였다. 퍼리칸 프라이머 서열은 다음과 같다.

센스: 5'- ctgagtgatgcaggcaccta-3'

안티센스: 5'- ctctctgggctcacttggac-3'

도 1의 결과를 보면, 섬유아세포에서 여우구슬 추출물과 Abcell에 의해서 퍼리칸이 증가한 것을 확인할 수 있다.

[ 시험예 2] 면역형광염색을 통한 퍼리칸 변화

정상 인간 섬유아세포(Normal Human fibroblast)를 10% 혈청이 들어있는 DMEM 배지를 사용하여 60 mm 세포 배양디쉬에 1.25×10⁶cells/dish의 밀도로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 80% 정도 confluency 까지 배양한다. 그 후 세포를 24시간동안 starvation 시킨 후 PBS로 2번 세척한 후 자외선B를 조사함과 동시에 여우구슬 추출물을 처리하여 2일 동안 배양하여 세포상태에서의 퍼리칸 단백질의 증가현상을 파악하였다.

섬유아세포(Human Dermal Fibroblast - adult, HDFa)는 미국 Cascade Biologics에서 구매하여 실험에 사용하였으며, M106배지(Cascade Biologics, USA)를 이용하여 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다.

면역형광 염색용 슬라이드 글래스에 세포를 도포하고, 48시간 동안 물질을 처리한 후에 면역형광 염색을 진행하였다. 자세한 면역형광 염색의 방법은 다음과 같다. 세포를 디피비에스 (DPBS)로 두 번 세척하고 3.5% 파라포름알데하이드 (paraformaldehyde) 10분간 처리해서 고정시킨다. 고정된 세포를 디피비에스 (DPBS)로 10분씩 3번 세척하고 0.1% 트리톤 X -100 (Triton X-100)을 5분간 처리해서 세포에 침투시킨다. 피비에스 (PBS)로 10분간 세척하고 5% 고우트 세럼(Goat serum)으로 30분간 블로킹한다. 블로킹이 끝난 세포에 일차 항체가 첨가된 5% 고우트 세럼을 처리하고 상온에서 1시간 동안 반응시켜서 일차 항체(anti-Perlecan antibody, Santa Cruz Biotechnology, USA)가 대항 항체에 결합하게 한다. 디피비에스 (DPBS)로 10분씩 3번 세척해서 여분의 일차 항체를 제거하고, 이차 항체를 상온에서 30분간 처리한다. 피비에스 (PBS)로 10분씩 3번 세척해서 여분의 2차 항체를 완전히 제거 한다. 슬라이드 글래스위에 마운팅 솔루션(mounting solution)을 한방울 떨어뜨리고 커버 슬립으로 덮는다. 커버 슬립 밖으로 나온 여분의 마운팅 솔루션을 제거하고 커버 슬립을 실링 한다.

이후 공초점현미경(confocal microscope)을 이용하여 각 실험군간의 형광 차이를 관찰 한다.

실험결과 자외선 B에 의해 퍼리칸이 감소하였고, 여우구슬 추출물은 자외선에 의한 퍼리칸 생성저하를 회복시키는 효과를 보여 주였다(도 2).

[ 시험예 3] ABCell ™의 퍼리칸 면역형광염색 실험

정상 인간 섬유아세포(Normal Human fibroblast)(20세와 40세에서 분리)를 10% 혈청이 들어있는 DMEM 배지를 사용하여 60 mm 세포 배양 디쉬에 1.25×10⁶cells/dish의 밀도로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 80% 정도 confluency 까지 배양한다. 배양 후 세포를 다시 1% FBS 배지 + Cytokinol100ppm + 10% BASF 처리 48시간 뒤 퍼리칸 염색 후 관찰한다. Abcell™은 10ug/ml을 처리하였다. 시험방법은 시험예 4와 유사하다.

그 강도(intensity)를 표 1과 도 3에 나타냈다. 그 결과를 보면 40yr NHF의 퍼리칸이 20yr에 비해 감소되어 있고, 감소된 40yr NHF의 퍼리칸이 HERA™ ABCell에 의해 20yr NHF 수준으로 회복되는 것을 확인하였다.

[ 시험예 4] 주름 및 탄력성 증가

여우구슬 추출물 및 ABCell을 함유한 화장품 제형을 통해 외부임상시험기관인 더마프로(성남)에서 주름 및 탄력성 증가에 대한 임상수행을 실시하였다. 30-40대 여성 40명을 각각 20명씩 2조로 나누어 아침 저녁 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 총 8주를 진행하였으며 주름에 대한 평가로 모사판을 이용한 일반적인 피부상태 값인 R1~R5 값을 통해 평균 주름 및 탄력성 감소를 평가하였다.

평균주름, 깊은 주름 및 탄력성이 제형을 바른 후 4주부터 개선됨을 알 수 있다(도 4).

[ 시험예 5] 피부 수분량 평가

하기 표 2의 비교예 1 및 실시예 1의 피부 보습력을 알아보기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 30-40대 여성 40명을 각각 20명씩 2조로 나누어 아침 저녁 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부수분 함유량(Corneometer, Germany)를 이용하여 피부의 수분함유량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 표 3 의 결과값은 피부 수분 함유량을 의미한다.

하기에 본 발명에 따른 화장료 조성물 및 약학 조성물의 제형예를 설명하나, 하기 예시 이외에도 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예1] 유연 화장수(스킨 로션)

하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 유연 화장수를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	0.1
글리세린	3.5
올레일알코올	1.5
에탄올	5.5
폴리솔베이트 80	3.2
카르복실비닐폴리머	1.0
부틸렌 글리콜	2.0
프로필렌 글리콜	2.0
방부제, 향료	적량
정제수	잔량
계	100

[제형예 2] 영양 화장수(밀크 로션)

하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양 화장수를 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	1.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
카프릴릭/카프릭 리글리세라이드	5.0
스쿠알란	5.0
솔비타세스퀴올레이트	1.5
세테아릴 알코올	1.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 향료	적량
정제수	잔량
계	100

[제형예 3] 영양 크림

하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양 크림을 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	1.0
글리세린	3.5
부틸렌글리콜	3.0
유동파라핀	7.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 리글리세라이드	3.0
스쿠알란	5.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
트리에탄올아민	0.1
방부제, 향료	적량
정제수	잔량
계	100

[제형예 4] 맛사지 크림

하기 표 7에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 맛사지 크림을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	1.0
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	3.0
유동파라핀	45.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
밀납	4.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄	0.9
파라핀	1.5
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
계	100

[제형예 5] 팩

하기 표 8에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	1.0
글리세린	4.0
폴리비닐알콜	15.0
히알루론산 추출물	5.0
베타글루칸	7.0
알란토인	0.1
노닐 페닐에테르	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
에탄올	적량
방부제, 향료	적량
정제수	잔량
계	100

[제형예 6] 패취

하기 표 9에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 패취를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
여우구슬 추출물	0.1
ABcell™	0.1
베타-1,3-글루칸	3.0
디에틸아민	0.7
아황산나트륨	0.1
폴리옥시에틸렌라우릴에테르(E.O=9)	1.0
폴리히드록시에틸렌세틸스테아릴에테르 (Cetomacrogol 1000)	1.0
점성의 파라핀 오일	2.5
카프릴산에스테르/카프르산에스테르 (Cetiol LC)	2.5
폴리에틸렌글리콜400	3.0
폴리아크릴산(Carbopol 934P)	1.0
정제수	잔량
계	100

본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN ELASTICITY <130> 10P422IND <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 ctgagtgatg caggcaccta 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 ctctctgggc tcacttggac 20

Claims

팔미토일트리펩타이드-5 또는 다이아미노프로피오노일 트리펩타이드-33 중 하나 이상의 항노화 펩타이드, 소수성 블록과 친수성 블록을 가지는 양친성 고분자를 합성하여 제조되고 상기 항노화 펩타이드가 내부에 안정화된 폴리머좀(polymersome), 및 여우구슬(Phyllanthus urinaria) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 조성물은 퍼리칸(Perlecan) 유전자의 발현을 증가시켜서 표피와 진피의 재생 및 표피와 진피의 부착력 향상을 촉진하여 피부 구조를 유지시키는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 퍼리칸 단백질 생성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 UV에 의한 퍼리칸 단백질 생성 저하를 회복시키는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 주름 개선, 피부 탄력성 회복 및 피부 수분 함유량 증대 효능을 가지는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.