JP2010526530A - スライシングデバイス - Google Patents
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Abstract
Description
スライシングデバイスまたは装置を供給することにより、非常に再現性のよい方法で、大量に、所定の大きさの微小片に、細胞、細胞凝集体および他の生物学的材料を切断することが可能である。本発明方法は、自動化された手順を用いて組織または細胞凝集体を切断するために、流体工学系で容易に実施され得る。説明されたデバイスは、幹細胞、前駆細胞または成熟細胞の凝集体を切断するように、デバイスを通過するそれらを吸引または吐出することにより、細胞培養に用いられ得、それにより酵素解離およびトリプシン酵素の必要性、ならびにかなりの細胞死滅に関連する機械的解離を回避する。
本発明においては次のような定義が適用される。
説明
マイクログリッドおよびスライシングデバイス
本発明は、1または幾つかのマイクログリッドを含む生物学的材料スライシングデバイスに関する。ディスクであり得るマイクログリッドは、細胞、細胞凝集体、組織または他の生物学的材料が孔を通過できるように選ばれた大きさを有する、少なくとも2つの孔を含み、そしてスライシングビームは孔を互いに分離し、そこでは生物学的材料はマイクログリッドを通過する際に、少なくとも2つの部分に分割され/切片化され/裂かれる。生物学的材料は、細胞、細胞凝集体、細胞生成物、組織、もしくは組織の一片、または器官もしくはその部分であり得る。スライシングビームは、異なるか、または同一の形状を有していてもよく、たとえば鋭い、丸い、刃先の丸い(blunt)または任意形状の、上端および/または下端を有し得る。マイクログリッドは2〜約1000の孔を有し得、1〜約200、たとえば1,2、4、10、100、200のスライシングビームにより分離される。マイクログリッドは約5μm〜500μm、たとえば10、50、100、200μmの大きさの孔を有し得る。スライシングビームの大きさは、孔の大きさの1/5 〜1/20であり得、その厚さに等しくてもよい。スライシングビームの高さは、マイクログリッドの厚さに等しくてもよい。所定のマイクログリッドにおける孔は、同一の大きさおよび形状(長方形の、丸い等)または異なる大きさおよび形状を有していてもよい。さらに、マイクログリッドの孔の大きさおよび形状は、同一スライシングデバイス内において、もう1つのマイクログリッドの孔と異なっていてもよい。
1つの例は、浮遊細胞凝集体の培養物の通過時に、細胞のクラスターを裂く装置であり、そこでは1またはそれより多いマイクログリッドを含むスライシングデバイスは、フロースルーユニットに埋められ、そのフロースルーユニットは第1および第2の開口を備えており、細胞凝集体および/または組織が第1の開口を通過し、
スライシングデバイス内で1またはそれより多いマイクログリッドを通過し、得られる比較的小さい細胞クラスターが第2の開口を出るのを可能にする。第1および第2の開口は、シリンダーおよび配管への接続を可能にするようにルアー設備を有する。生物学的材料を切片化または裂くことができるように、装置は1つか、幾つかのマイクログリッドを含む。スライシング装置は特定の用途のために適切な大きさの、2またはそれより多い孔を有する、少なくとも1つのマイクログリッドを含む。さらに、スライシング装置は入口と出口、配管の接続、流体を吸引し吐出する機構を含み、それにより生物学的組織にマイクログリッドを通過させる。流体における有害な高圧力を避けるために、スライシング装置は加えられる流体圧力のフィードバック制御のための圧力センサーを備え得る。これは細胞または組織をデバイスに吐出するとき、増加された圧力の、そして細胞または組織を吸引するとき、低圧力の、制御を保持することを含む。上記のように定義されるスライシングデバイスおよびスライシング装置は、1つのユニットとして、または使用時に1つのユニットに集合される、少なくとも1またはもっと多い、分離した部分を含む組み立てキットとして、構成され得る。スライシングデバイスの、1またはそれより多い部品は使い捨て可能であってもよい。
細胞培養または他のビトロ用途に適切な大きさの切片に切断するために、または互いに1またはそれより多い細胞に分離するために、使用され得る。
マイクログリッドは、従来の微細組み立て技術により製造され得る。マイクログリッドの所望の突き出し形状は、シリコンウェハ上にフォトリソグラフィで定められ、第1シリコンウェハ上に多数のマイクログリッドの輪郭を形成させ、ついで露光され現像されたウェハは湿式または乾式エッチングに供され、マイクログリッドを構成する所望の微細構造、すなわち所望のビーム幅および長さならびに対応するビーム間距離、を形成する。もし他の孔の寸法、丸い穴、正方形のグリッドパターン等が所望されれば、フォトリソグラフィマスクを変更することにより達成される。エッチングプロセス後に、個々のスライシング装置は、従来のウェハダイシングソー装置によりウェハ解放されるのが一般的である。
例2
孔径100×500μm、スライシングビーム30μmを有する1つのマイクログリッドが、内径1.5mmのポリマー製シリンダー内で鋳込み成形される。シリンダーの一端は15cm長さ、内径0.7mmのステンレス鋼管に取り付けられ、
他端は標準的なプラスチック製、10mlの使い捨て可能な殺菌シリンジ上に取り付けられ、開口を有する。このデバイスにより浮遊細胞凝集体を含む媒体をゆっくりと吸引し吐出することにより、細胞凝集体はもっと小さい凝集体に切片化される。
例3
正方形の10μmの孔、ビーム幅2μmを有する、2つの代替可能なマイクログリッドが両端にルアー設備を有するシリンダー内に直列に置かれる。細胞凝集体または組織片が分離された容器内で流体に捕集され、容器内圧力は増加して生物学的材料に2つのマイクログリッドを通過させ、それにより酵素解離を必要とせずに、単一細胞の懸濁を創り出す。
Claims (11)
- 細胞、細胞凝集体、組織または他の生物学的材料が孔を通過できるように選ばれた大きさを有する、少なくとも2つの孔を含み、そしてスライシングビームは孔を互いに分離し、そこでは生物学的材料はマイクログリッドを通過する際に、少なくとも2つの部分に分割され/切片化され/裂かれる、生物学的材料マイクログリッド。
- 該マイクログリッドが、約1〜約200のスライシングビームにより分離される、約2〜約1000の孔を有する請求項1に記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 該孔が約5〜500μmの大きさを有する請求項1または2に記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 該マイクログリッドが、金属、ガラス、ポリマー、セラミックス、およびシリカもしくはそれらの混合物よりなる群から選ばれる材料で製造される請求項1または2に記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 該スライシングビームが鋭い、丸いまたは刃先の丸い上端および/または下端を有する請求項1〜4のいずれかに記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 該マイクログリッドが、図1〜6に示されるマイクログリッドを含む群から選ばれる請求項1〜5のいずれかに記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 該マイクログリッドが、タンパク、酵素、脂質もしくはそれらの混合物、またはマイクログリッド表面の物理的特性を修飾する他の材料で被覆される請求項1〜6のいずれかに記載の生物学的材料マイクログリッド。
- 少なくとも1つの、請求項1〜7のいずれかに記載の生物学的材料マイクログリッドを含む生物学的材料スライシングデバイス。
- 少なくとも1つの、請求項8に記載のスライシングデバイスを含む生物学的材料スライシング装置。
- 生物学的材料スライシングデバイスがフロースルーユニットに埋められ、そのフロースルーユニットは第1および第2の開口を備えており、生物学的材料が第1の開口を通過し、分割され/切片化され/裂かれた生物学的材料が第2の開口を出るのを可能にする、請求項9に記載の生物学的材料スライシング装置。
- 器官、組織、幹細胞凝集体のような細胞凝集体、または胚性幹細胞から、細胞クラスターを得るように、分割され/切片化され/裂かれた生物学的材料を得る、請求項1〜7のいずれかに記載のマイクログリッド、請求項8に記載スライシングデバイスまたは請求項9または10に記載のスライシング装置の使用。
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