WO2018037841A1 - 細胞処理装置および細胞処理方法 - Google Patents

細胞処理装置および細胞処理方法 Download PDF

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WO2018037841A1
WO2018037841A1 PCT/JP2017/027718 JP2017027718W WO2018037841A1 WO 2018037841 A1 WO2018037841 A1 WO 2018037841A1 JP 2017027718 W JP2017027718 W JP 2017027718W WO 2018037841 A1 WO2018037841 A1 WO 2018037841A1
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WO
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cell
container
cell suspension
mesh member
plate
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PCT/JP2017/027718
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English (en)
French (fr)
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英章 香川
俊 後藤
敦 尾棹
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富士フイルム株式会社
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/12—Apparatus for enzymology or microbiology with sterilisation, filtration or dialysis means

Definitions

  • the present disclosure relates to a cell processing apparatus and a cell processing method.
  • JP 2010-172251 A a rotor is inserted into a biological container containing a biological sample containing cell aggregates, and the biological sample is stirred by rotating the rotor with a motor.
  • a cell disperser that disperses into one cell is described.
  • JP 2010-094071 A a cell suspension containing a cell mass is stored, and a syringe for discharging the cell suspension from an outlet is connected to the outlet of the syringe so that liquid can flow therethrough.
  • a cell dispersion device with a hollow fiber is described.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2010-094071 describes that a cell mass is dispersed in isolated cells by circulating a cell suspension through a hollow fiber.
  • a method of crushing cell aggregates there is a method of mechanically crushing cell aggregates by sucking up a cell suspension containing cell aggregates with a pipette and passing the cell aggregates through a mesh such as a cell strainer. Proposed.
  • the treatment state of the cells becomes non-uniform due to variations in the flow rate at which the cell aggregate passes through the mesh and variations in how the pipette tip is pressed against the mesh.
  • cell passage by manual pipetting is intended for processing of several mL scale and is not suitable for mass processing.
  • the operation is an open system with human intervention, there is a high risk of contamination such as contamination with bacteria.
  • a method for solving these problems a method is considered in which a mesh member is provided in a sterilized sealed container, and the cell suspension is caused to flow in the container so that the cell suspension is passed through the mesh member. It is done.
  • the flow velocity on the wall surface of the container is theoretically zero, and the velocity gradient of the liquid flow near the wall surface becomes large. Therefore, an excessive shearing force is applied to the cells adhering to the wall surface of the container due to the velocity gradient of the cell suspension, and the cell viability may be reduced due to damage caused by the shearing force.
  • the present disclosure relates to a cell processing apparatus for reducing damage to a cell by relaxing a velocity gradient of a cell suspension flowing inside a container provided with a mesh member for disintegrating a cell aggregate therein, and the cell A cell processing method using the processing apparatus is provided.
  • a first aspect according to the present disclosure is a cell treatment apparatus, which includes a container having an inflow port through which a cell suspension flows and an outflow port through which the cell suspension flows, and an inflow port and an outflow port inside the container.
  • a mesh member having a plurality of mesh surfaces extending in a direction intersecting the flow direction of the cell suspension inside the container when the cell suspension flows out from the outlet, and the mesh A plate-like member provided on at least one of the upstream side and the downstream side in the flow direction of the member, and having a plurality of through holes having a size larger than the mesh size of the mesh member extending in a direction crossing the flow direction; ,including.
  • the plate-like member may be provided in contact with the downstream surface of the mesh member in the flow direction.
  • the third aspect is provided in contact with a surface on the upstream side in the flow direction of the mesh member, and the contact surface with the mesh member is smaller than the mesh size of the mesh member.
  • a first plate-like member as a plate-like member provided with a plurality of large-sized through holes and a surface on the downstream side in the flow direction of the mesh member are provided, and a mesh is formed on the contact surface with the mesh member.
  • a second plate member as a plate member provided with a plurality of through holes having a size larger than the mesh size of the member.
  • the 4th aspect which concerns on this indication WHEREIN In the said 3rd aspect, the size of the through-hole of a 2nd plate-shaped member may be smaller than the size of the through-hole of a 1st plate-shaped member.
  • each of the plurality of through-holes provided in the plate-like member has an opening diameter of a surface on the upstream side in the flow direction of the plate-like member, on the downstream side in the flow direction. It is preferable that it is larger than the opening diameter of this surface.
  • WHEREIN It is preferable in the said 5th aspect that each internal diameter of several through-holes is gradually small toward the downstream from the upstream of a flow direction.
  • an intersection between the upstream surface in the flow direction of the plate-like member and the inner wall surface of each of the plurality of through holes is curved in a convex shape.
  • the curved surface is preferable.
  • the plate member is preferably subjected to a surface treatment by electrolytic polishing.
  • the inner diameter of the container is gradually decreased from a predetermined position upstream in the flow direction from the mesh member installation position toward the mesh member installation position. Is preferred.
  • the container may further include a gas inflow port through which a gas for pressurizing the inside of the container flows.
  • An eleventh aspect according to the present disclosure is provided between a container having an inflow port into which a cell suspension flows and an outflow port from which the cell suspension flows, and an inflow port and an outflow port inside the container,
  • a mesh member having a plurality of mesh surfaces extending in a direction intersecting the flow direction of the cell suspension in the container when the cell suspension flows out from the outlet, and upstream of the flow direction of the mesh member
  • a plate-like member provided on at least one of the downstream sides and extending in a direction intersecting the flow direction and having a plurality of through holes having a size larger than the mesh size of the mesh member.
  • the cell treatment method used is a first step of storing a cell suspension in a container by allowing a cell suspension containing cell aggregates to flow into the container from the inlet while the outlet is closed. And with the inside of the container pressurized Including by opening the outlet, and a second step of discharging the cell suspension stored in the container from the outlet and then disintegrated cell aggregates through a mesh member.
  • the flow rate of the cell suspension when the cell suspension is introduced from the inlet in the first step is the same as the cell suspension in the second step. May be slower than the flow rate of the cell suspension when passing through the mesh member.
  • the flow rate of the cell suspension is constant when the cell suspension is passed through the mesh member in the second step.
  • the cell aggregate in the first step, is preferably stored in a container in a state of being suspended in the cell suspension.
  • the container of the cell treatment apparatus may include a gas inflow port through which a gas for pressurizing the inside of the container is introduced.
  • a gas inflow port through which a gas for pressurizing the inside of the container is introduced.
  • the velocity gradient of the cell suspension flowing in the container provided with the mesh member for disintegrating the cell aggregate is reduced. It is possible to reduce the damage received by the cells.
  • FIG. 3 is a plan view of a mesh member according to an exemplary embodiment of the present disclosure.
  • FIG. 5 is an enlarged view of a mesh member according to an exemplary embodiment of the present disclosure.
  • FIG. 4B is a cross-sectional view taken along line 4B-4B in FIG. 4A. It is sectional drawing of the through-hole vicinity of the plate-shaped member which concerns on exemplary embodiment of this indication.
  • FIG. 1 is a side view showing the outer shape of the cell treatment device 10 according to the first exemplary embodiment of the present disclosure
  • FIG. 2 is a cross-sectional view showing the internal structure of the cell treatment device 10.
  • the cell processing apparatus 10 is a solution that breaks a cell aggregate that has grown to a predetermined size (for example, 200 ⁇ m to 300 ⁇ m) into a cell aggregate having a smaller size (for example, about 50 ⁇ m). A crushing process is performed.
  • the cell treatment apparatus 10 is configured to include a container 11 that contains a cell suspension containing cell aggregates to be crushed.
  • a container 11 that contains a cell suspension containing cell aggregates to be crushed.
  • the material of the container 11 is not specifically limited, It is preferable to be comprised with the material excellent in corrosion resistance and pressure resistance, for example, stainless steel can be used suitably.
  • the container 11 has an inlet 12 for allowing the cell suspension before the crushing process to flow into the container 11 and an outlet 13 for allowing the cell suspension after the crushing process to flow out of the container 11. And having.
  • the container 11 further has a gas inlet 14 for allowing a gas to pressurize the inside of the container 11 to flow in.
  • the cell processing apparatus 10 is set in such a direction that the outlet 13 is positioned at the lowest position in the vertical direction and the gas inlet 14 is positioned at the uppermost position in the vertical direction.
  • the cell processing apparatus 10 has a vertical configuration in which the flow direction F1 of the cell suspension when the cell suspension accommodated in the container 11 flows out from the outlet 13 is along the vertical direction.
  • a mesh member 20 for mechanically crushing cell aggregates is provided inside the container 11.
  • the mesh member 20 is a region between the inflow port 12 and the outflow port 13 inside the container 11 and is disposed in the vicinity of the outflow port 13.
  • FIG. 3A is a plan view of the mesh member 20, and FIG. 3B is an enlarged view of a portion 20a surrounded by a broken line in FIG. 3A.
  • the mesh member 20 has a plurality of meshes formed by plain weaving a plurality of fibrous members 21, for example.
  • the mesh member 20 may have a structure having a plurality of meshes, and the knitting method is not limited to plain weave.
  • the wire diameter and mesh size of the fibrous member 21 are appropriately determined according to the size of the cell aggregate after the crushing treatment.
  • the wire diameter of the fibrous member 21 is 50 ⁇ m or less
  • the mesh size (the length a of one side of the mesh) is 40 ⁇ m or more and 60 ⁇ m or less. It is preferable.
  • the material of the fibrous member 21 is not particularly limited, but is preferably made of a material having high corrosion resistance. For example, nylon or stainless steel can be suitably used.
  • the mesh member 20 has a surface having a plurality of meshes so as to extend in a direction intersecting with the cell suspension flow direction F1 when the cell suspension accommodated in the container 11 flows out from the outlet 13. It is installed in the container 11. The cell aggregate contained in the cell suspension is mechanically crushed by passing through the mesh member 20 on the way to the outflow port 13.
  • the planar shape of the mesh member 20 is, for example, a circle as shown in FIG. 3A, but can be appropriately modified according to the shape of the container 11.
  • a plate-like member 30 is provided inside the container 11 for relaxing the velocity gradient of the cell suspension in a plane that intersects the cell suspension flow direction F ⁇ b> 1.
  • the plate-like member 30 is disposed downstream of the mesh member 20 in the cell suspension flow direction F1.
  • FIG. 4A is a plan view of the plate-like member 30, and FIG. 4B is a cross-sectional view taken along line 4B-4B in FIG. 4A.
  • the plate member 30 is preferably made of a material having high corrosion resistance. For example, stainless steel (SUS316L) can be suitably used.
  • the thickness of the plate-shaped member 30 is 0.5 mm or more and 2 mm or less, for example, and is typically 1 mm.
  • the plate-like member 30 is provided with a plurality of through holes 32 having a size larger than the mesh size of the mesh member 20.
  • Each shape of the through hole 32 can be, for example, circular, and the diameter of each through hole 32 is, for example, about 4 mm.
  • the planar shape of the plate-like member 30 is, for example, a circle as shown in FIG. 4A, but can be appropriately modified according to the shape of the container 11.
  • the plate-like member 30 is installed in the container 11 so that a surface having a plurality of through holes 32 extends in a direction intersecting the cell suspension flow direction F1.
  • the cell suspension flowing toward the outflow port 13 passes through each of the plurality of through holes 32 provided in the plate member 30.
  • the plate-like member 30 having a plurality of through holes 32 functions like a shower head, and the flow rate of the cell suspension passing through the through holes 32 is approximately the same in each through hole 32.
  • region upstream from the plate-shaped member 30 inside the container 11 the velocity gradient of the cell suspension in the plane intersecting the flow direction F1 of the cell suspension is relaxed.
  • the difference between the flow rate of the suspension and the flow rate of the cell suspension flowing near the center of the container 11 can be reduced.
  • the shear force applied to the cells due to the velocity gradient of the cell suspension can be reduced, and the damage received by the cells can be reduced.
  • the plate-like member 30 is preferably provided in contact with the downstream surface of the mesh member 20 as shown in FIG.
  • the plate-shaped member 30 supports the mesh member 20 in addition to the function of relaxing the velocity gradient of the cell suspension, and the mesh by liquid flow.
  • the function of preventing the member 20 from bending can be exhibited. That is, when the mesh member 20 is made of a low-rigidity material such as nylon, the mesh member 20 may be plastically deformed due to the liquid flow of the cell suspension and may be bent.
  • the plate-like member 30 supports the mesh member 20 and exhibits a function of preventing the mesh member 20 from being bent, so that the fibrous member 21 constituting the mesh member 20 has low rigidity such as nylon but is inexpensive.
  • the material can be used.
  • the plate member 30 is meshed. You may arrange
  • the ratio of the total area of the plurality of through holes 32 (hereinafter referred to as the aperture ratio) to the area of the entire main surface including the through holes 32 of the plate member 30 is preferably 50% or more and 60% or less.
  • the aperture ratio of the plate-like member 30 By setting the aperture ratio of the plate-like member 30 to 50% or more, the flow of the cell suspension flowing toward the outlet 13 can be favorably maintained, and the processing capability can be ensured.
  • the mechanical strength required in order to support the mesh member 20 in the plate-shaped member 30 can be ensured by making the aperture ratio of the plate-shaped member 30 60% or less.
  • each of the through holes 32 has a tapered shape in which the opening diameter gradually decreases from the upstream surface S1 of the plate member 30 toward the downstream surface S2. That is, the opening diameter D1 of the through hole 32 on the upstream surface S1 of the plate member 30 is larger than the opening diameter D2 of the through hole 32 on the downstream surface S2.
  • the opening diameter D1 of the through-hole 32 in the upstream surface S1 larger than the opening diameter D2 in the downstream surface S2
  • the cell aggregate of the cell aggregate is secured while ensuring the mechanical strength of the plate-like member 30. Introduction into the through hole 32 can be promoted.
  • the intersection of the upstream surface S1 of the plate-like member 30 and the inner wall surface S3 of the through hole 32 is a curved surface curved in a convex shape by chamfering or R processing. It is preferable that When the intersection between the upstream surface S1 of the plate-like member 30 and the inner wall surface S3 of the through-hole 32 is angular, there is a possibility that cell aggregates adhere and stay at the corner. Forming a flow of introducing cell aggregates into the through-hole 32 by forming the intersection of the upstream surface S1 of the plate-like member 30 and the inner wall surface S3 of the through-hole 32 as a convex curved surface. And retention of cell aggregates can be suppressed. Thereby, the collection rate of a cell aggregate can be raised.
  • the distance b (see FIG. 4B) between the outer edges of the adjacent through holes 32 is preferably 1 mm or less.
  • the entire surface of the plate-like member 30 is subjected to surface treatment by electrolytic polishing.
  • Electropolishing is a technique for smoothing a metal surface by eluting metal ions from the metal surface in an electrolytic solution, and the surface can be made smoother than mechanical polishing treatment such as buffing.
  • mechanical polishing treatment such as buffing.
  • the plate member 30 by smoothing the surface by surface treatment by electrolytic polishing, the growth of bacteria can be suppressed, and the sanitary state of the plate member 30 can be kept good.
  • the inner diameter of the container 11 gradually decreases from the position P1 upstream of the mesh member 20 installation position P2 toward the mesh member installation position P2.
  • the cross-sectional area of the flow path of the cell suspension formed inside the container 11 is a position upstream of the installation position P ⁇ b> 2 of the mesh member 20. It gradually decreases from P1 toward the installation position P2 of the mesh member 20.
  • the flow rate of the cell suspension is made closer to the mesh member 20 by gradually reducing the cross-sectional area of the flow path of the cell suspension toward the installation position P2 of the mesh member 20. Can be gradually increased as By relatively increasing the flow rate when the cell suspension passes through the mesh member 20, the cell aggregate can be appropriately crushed. On the other hand, by causing the flow rate of the cell suspension upstream of the mesh member 20 to be relatively small, it is possible to suppress damage to the cells.
  • the inclination angle ⁇ of the inner wall surface S10 of the container 11 in the region from the position P1 of the container 11 to the installation position P2 of the mesh member is preferably 70 ° or more and less than 90 °.
  • the inclination angle ⁇ is an angle formed by the inner wall surface S10 of the container 11 and the horizontal plane H when the cell processing apparatus 10 is used.
  • the inner diameter of the container 11 is gradually increased from the installation position P2 of the mesh member 20 toward the upstream side by setting the inclination angle ⁇ to less than 90 °, the height of the cell processing apparatus 10 is increased.
  • the volume of the container 11 can be secured while suppressing.
  • FIG. 5 is a flowchart showing the procedure of the crushing process using the cell processing apparatus 10.
  • step A1 With the outlet 13 closed, a cell suspension containing cell aggregates to be crushed is introduced into the container 11 from the inlet 12, and the cell suspension is poured into the container 11.
  • a cell suspension containing cell aggregates to be crushed is introduced into the container 11 from the inlet 12, and the cell suspension is poured into the container 11.
  • Store As an example, cell aggregates grown to about 200 ⁇ m to 300 ⁇ m are targeted for crushing treatment.
  • FIG. 6 is a cross-sectional view showing a state in which the cell suspension L containing the cell aggregate C is stored in the container 11.
  • the cell processing apparatus 10 is set in such a direction that the outlet 13 is positioned at the lowest in the vertical direction and the gas inlet 14 is positioned at the uppermost in the vertical direction.
  • the solenoid valve 200 attached to the outlet 13 can be used to close and open the outlet 13.
  • the electromagnetic valve 200 maintains the closed state shown in FIG.
  • the cell suspension L is supplied from a pipe (not shown) connected to the inflow port 12 and flows into the container 11 through the inflow port 12.
  • the flow rate of the cell suspension when the cell suspension is introduced from the inlet 12 is defined as a flow rate V1.
  • the cell aggregate C is maintained in a suspended state in the cell suspension L stored in the container 11.
  • a polymer such as gellan gum may be added to the cell suspension L.
  • the mesh member 20 While the cell suspension L is stored in the container 11, the mesh member 20 is wetted, and the bubbles attached to the mesh member 20 are removed.
  • the bubbles may hinder the flow of the cell aggregate.
  • the mesh member 20 is wetted while the cell suspension L is stored in the container 11, and the bubbles attached to the mesh member 20 are removed. The flow when the cell aggregate passes through the mesh member 20 can be stabilized.
  • step A2 by opening the outlet 13 in a state where the inside of the container 11 is pressurized, the cell suspension stored in the container 11 is passed through the mesh member 20 to disintegrate the cell aggregate. It flows out from the outlet 13.
  • FIG. 7 is a cross-sectional view showing a state in which the cell suspension L flows through the mesh member 20 toward the outlet 13. Pressurization inside the container 11 supplies gas to the inside of the container 11 using compressed air supply means such as a compressor (not shown) connected to the gas inlet 14 while the electromagnetic valve 200 is closed. By doing.
  • compressed air supply means such as a compressor (not shown) connected to the gas inlet 14 while the electromagnetic valve 200 is closed.
  • the inner diameter of the container 11 is gradually reduced from the position P1 upstream from the installation position P2 of the mesh member 20 toward the installation position P2 of the mesh member. Thereby, the flow rate of the cell suspension L gradually increases as the cell suspension L approaches the mesh member 20.
  • the cell aggregate C is crushed into a cell aggregate having a smaller size (for example, about 50 ⁇ m) by passing through the mesh member 20 installed in the middle of the flow path to the outflow port 13.
  • the cell aggregate C crushed by passing through the mesh member 20 reaches the outlet 13 through the through hole 32 of the plate-like member 30, and flows out of the cell processing apparatus 10 from the outlet 13.
  • the flow rate when the cell suspension passes through the mesh member 20 is defined as a flow rate V2.
  • the flow rate V1 when the cell suspension is introduced from the inlet 12 is preferably smaller than the flow rate V2 when the cell suspension passes through the mesh member 20 (V1 ⁇ V2).
  • the flow rate V1 is a flow rate. It is preferable that it is 1/2 or less of V2 (V1 ⁇ V2 / 2).
  • V1 ⁇ V2 / 2 the damage which a cell receives can be reduced by making flow velocity V1 smaller than flow velocity V2.
  • the flow rate of the cell suspension passing through the through-holes 32 is approximately the same in each through-hole 32.
  • the velocity gradient of the cell suspension is relaxed in the plane intersecting the cell suspension flow direction F1. That is, the difference between the flow rate of the cell suspension flowing near the wall surface of the container 11 and the flow rate of the cell suspension flowing near the center of the container 11 is reduced.
  • the plate-shaped member 30 is not provided, the shear force applied to the cells due to the velocity gradient of the cell suspension can be reduced, and the damage received by the cells can be reduced.
  • the pressure inside the container 11 is kept constant until all the cell suspension L stored in the container 11 flows out from the outlet 13. Thereby, the passage speed at which the plurality of cell aggregates C (cell suspension L) pass through the mesh member 20 is maintained constant, and the processing state of the plurality of cell aggregates C is made uniform. Therefore, the homogeneity of the plurality of cell aggregates C after the division process can be ensured.
  • FIG. 8 is a cross-sectional view showing the internal structure of the cell treatment device 10a according to the second exemplary embodiment of the present disclosure.
  • two plate-like members 30a and 30b are provided inside the container 11 constituting the cell processing apparatus 10a for alleviating the velocity gradient of the cell suspension in the plane intersecting the cell suspension flow direction F1. It has been.
  • the plate-like member 30a is disposed upstream of the mesh member 20 in the cell suspension flow direction F1.
  • the plate-like member 30b is disposed downstream of the mesh member 20 in the cell suspension flow direction F1.
  • FIG. 9A is a plan view of the plate-like member 30a
  • FIG. 9B is a plan view of the plate-like member 30b.
  • the plate-like members 30a and 30b are provided with a plurality of through holes 32a and 32b having a size larger than the mesh size of the mesh member 20, respectively. Since the cell aggregate crushed by passing through the mesh member 20 flows on the downstream side of the mesh member 20, the size of the through hole 32b of the plate-like member 30b disposed on the downstream side of the mesh member 20 is It can be made smaller than the size of the through-hole 32a of the plate-like member 30a disposed on the upstream side of the mesh member 20. Note that the size of the through hole 32a and the size of the through hole 32b may be the same.
  • the plate-like members 30a and 30b are installed in the container 11 so that the surfaces having the plurality of through holes 32a and 32b extend in the direction intersecting with the cell suspension flow direction F1, respectively.
  • the cell suspension flowing toward the outlet 13 reaches the mesh member 20 via each of the plurality of through holes 32 a provided in the plate-like member 30 a and passes through the mesh member 20.
  • the cell suspension passes through each of the plurality of through holes 32b provided in the plate-like member 30b and travels toward the outflow port 13.
  • the plate-like members 30a and 30b each function like a shower head, and the flow rate of the cell suspension passing through the through holes 32a and 32b is approximately the same in each of the through holes 32a and 32b.
  • the velocity gradient of the cell suspension in the plane intersecting the flow direction F1 of the cell suspension is also reduced in the region inside the container 11 upstream of the plate-like member 30a.
  • the shearing force applied to the cells can be reduced, and the damage to the cells can be reduced.
  • the plate member 30 a is provided in contact with the upstream surface of the mesh member 20, and the plate member 30 b is provided in contact with the downstream surface of the mesh member 20. It may be.
  • the plate members 30a and 30b have the function of reducing the velocity gradient of the cell suspension, The function which supports the mesh member 20 and prevents the deformation of the mesh member 20 by a liquid flow can be exhibited.
  • the plate-like members 30a and 30b support the mesh member 20 and exhibit the function of preventing the mesh member 20 from being bent, so that the service life of the mesh member 20 can be extended, and the fibers constituting the mesh member 20 It is possible to use a low-rigid but inexpensive material such as nylon as the shaped member 21.
  • the plate members 30a and 30b may be spaced apart from the mesh member 20.
  • FIG. 10 is a cross-sectional view showing the internal structure of the cell treatment device 10b according to the third exemplary embodiment of the present disclosure.
  • the cell processing apparatus 10b is set in such a direction that the outlet 13 is positioned at the lowest position in the vertical direction and the gas inlet 14 is positioned at the uppermost position in the vertical direction.
  • the cell processing apparatus 10b has a horizontal configuration in which the flow direction F2 of the cell suspension in the case where the cell suspension accommodated in the container 11 flows out from the outlet 13 is along the horizontal direction.
  • the mesh member 20 for mechanically crushing the cell aggregate is provided inside the container 11.
  • the mesh member 20 is a region between the inflow port 12 and the outflow port 13 inside the container 11 and is disposed in the vicinity of the outflow port 13.
  • the mesh member 20 has a surface having a plurality of meshes extending in a direction intersecting with the cell suspension flow direction F ⁇ b> 2 when the cell suspension accommodated in the container 11 flows out from the outlet 13. It is installed in the container 11. The cell aggregate contained in the cell suspension is mechanically crushed by passing through the mesh member 20 on the way to the outflow port 13.
  • a plate-like member 30 is provided for alleviating the velocity gradient of the cell suspension in the plane intersecting the cell suspension flow direction F2.
  • the plate-like member 30 is disposed downstream of the mesh member 20 in the cell suspension flow direction F2.
  • the plate-like member 30 is installed in the container 11 so that a surface having a plurality of through holes 32 extends in a direction intersecting the cell suspension flow direction F2.
  • the cell suspension flowing toward the outflow port 13 passes through each of the plurality of through holes 32 provided in the plate member 30.
  • the plate-like member 30 having a plurality of through holes 32 functions like a shower head, and the flow rate of the cell suspension passing through the through holes 32 is approximately the same in each through hole 32.
  • the velocity gradient of the cell suspension is relieved in the plane that intersects the flow direction F2 of the cell suspension.
  • the shear force applied to the cells due to the velocity gradient of the cell suspension can be reduced, and the damage received by the cells can be reduced.
  • the procedure of the crushing process for crushing the cell aggregate using the cell processing apparatus 10b is the same as that of the cell processing apparatus 10 according to the first exemplary embodiment.
  • FIG. 11 is a cross-sectional view showing a state in which the cell suspension L containing the cell aggregate C is stored in the container 11.
  • the cell processing apparatus 10b is set in such a direction that the outlet 13 is positioned at the lowest position in the vertical direction and the gas inlet 14 is positioned at the uppermost position in the vertical direction.
  • the solenoid valve 200 attached to the outlet 13 can be used to close and open the outlet 13.
  • the electromagnetic valve 200 maintains the closed state shown in FIG.
  • the cell suspension L is supplied from a pipe (not shown) connected to the inflow port 12 and flows into the container 11 through the inflow port 12.
  • the cell aggregate C is preferably maintained in a floating state.
  • a polymer such as gellan gum may be added to the cell suspension L.
  • FIG. 12 is a cross-sectional view showing a state in which the cell suspension L flows through the mesh member 20 toward the outlet 13. Pressurization inside the container 11 supplies gas to the inside of the container 11 using compressed air supply means such as a compressor (not shown) connected to the gas inlet 14 while the electromagnetic valve 200 is closed. By doing.
  • compressed air supply means such as a compressor (not shown) connected to the gas inlet 14 while the electromagnetic valve 200 is closed.
  • the electromagnetic valve 200 is opened while the inside of the container 11 is pressurized, and the outlet 13 is opened.
  • the cell suspension L stored in the container 11 a liquid flow in the flow direction F2 toward the outflow port 13 is generated.
  • the cell aggregate C in the cell suspension L moves along the flow direction F2 of the cell suspension L and travels toward the outlet 13.
  • the cell aggregate C is crushed into cell aggregates of a smaller size (for example, about 50 ⁇ m) by passing through the mesh member 20 installed in the middle of the flow path leading to the outflow port 13.
  • the cell aggregate C crushed by passing through the mesh member 20 reaches the outlet 13 through the through-hole 32 of the plate-like member 30, and flows out of the cell processing apparatus 10b from the outlet 13.
  • the flow rate of the cell suspension passing through the through-holes 32 is approximately the same in each through-hole 32.
  • the velocity gradient of the cell suspension is relaxed in the plane intersecting the cell suspension flow direction F2. That is, the difference between the flow rate of the cell suspension flowing near the wall surface of the container 11 and the flow rate of the cell suspension flowing near the center of the container 11 is reduced.
  • the plate-shaped member 30 is not provided, the shear force applied to the cells due to the velocity gradient of the cell suspension can be reduced, and the damage received by the cells can be reduced.
  • the pressure inside the container 11 is kept constant until all the cell suspension L stored in the container 11 flows out from the outlet 13. Thereby, the passage speed at which the plurality of cell aggregates C (cell suspension L) pass through the mesh member 20 is maintained constant, and the processing state of the plurality of cell aggregates C is made uniform. Therefore, the homogeneity of the plurality of cell aggregates C after the division process can be ensured.
  • plate-like members are respectively provided on the upstream side and the downstream side of the mesh member 20 according to the example of the cell processing apparatus 10a according to the second exemplary embodiment. It is good also as providing.

Abstract

本開示は、細胞懸濁液が流入する流入口および細胞懸濁液が流出する流出口を有する容器と、容器の内部の流入口と流出口との間に設けられ、細胞懸濁液が流出口から流出する場合の容器の内部における細胞懸濁液の流れ方向と交差する方向に複数の網目を有する面が延在するメッシュ部材と、メッシュ部材の流れ方向の上流側および下流側の少なくとも一方に設けられ、流れ方向と交差する方向にメッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔を有する面が延在する板状部材と、を含む細胞処理装置を提供する。

Description

細胞処理装置および細胞処理方法
　本開示は、細胞処理装置および細胞処理方法に関する。
　多能性幹細胞の培養においては、細胞を培養することによって生じる細胞凝集体（スフェア）のサイズが過大となると、細胞凝集体同士が接着融合し、細胞が分化を開始したり、細胞凝集体の中心部の細胞が壊死したりする。従って、細胞凝集体のサイズが過大となることを防止するために、細胞の培養期間中の適切な時期に、細胞凝集体を解砕（分割）する解砕処理が必要となる。
　特開２０１０－１７２２５１号公報には、細胞凝集体を含む生体試料を収容した生体容器内にロータを挿入し、このロータをモータによって回転させて生体試料を撹拌することで、細胞凝集体を単一細胞に分散する細胞分散装置が記載されている。
　特開２０１０－０９４０７１号公報には、細胞塊を含む細胞懸濁液を貯留し、流出口から細胞懸濁液を流出させるシリンジと、シリンジの流出口に対して液体が流通可能に接続された中空糸とを備えた細胞分散装置が記載されている。特開２０１０－０９４０７１号公報には、細胞懸濁液を中空糸に流通させることによって細胞塊が単離細胞に分散されることが記載されている。
　国際公開第２０１３／０７７４２３号には、浮遊培養により得られた多能性幹細胞の細胞塊をメッシュに通すことにより分割する工程を含む多能性幹細胞の維持増幅方法が記載されている。
　細胞凝集体を解砕する手法として、細胞凝集体を含む細胞懸濁液をピペットで吸い上げ、セルストレーナーなどのメッシュに細胞凝集体を通過させることで細胞凝集体を機械的に解砕する手法が提案されている。この方法では、細胞凝集体がメッシュを通過する流速のばらつきやピペット先端のメッシュへの押付け具合のばらつきにより、細胞の処理状態が不均一となる。さらに人手によるピペッティング操作による細胞の継代は、数ｍＬ規模の処理を対象とするものであり、大量処理には不向きである。また、人手が介在する開放系での操作であるため、菌が混入するなどのコンタミネーションのリスクも高い。
　これらを解決する方法として、滅菌処理した密閉された容器の中にメッシュ部材を設け、細胞懸濁液をメッシュ部材に通すように、容器の中に細胞懸濁液の流れを生じさせる方法が考えられる。しかしながら、容器内に液流を生じさせた場合には、容器の壁面における流速は理論上ゼロとなり、壁面付近における液流の速度勾配は大きくなる。従って、容器の壁面に付着した細胞には、細胞懸濁液の速度勾配に起因して過大なせん断力が加わり、このせん断力によるダメージによって細胞の生存率が低下するおそれがある。
　本開示は、内部に細胞凝集体を解砕するためのメッシュ部材が設けられた容器の内部を流れる細胞懸濁液の速度勾配を緩和して細胞が受けるダメージを軽減する細胞処理装置およびこの細胞処理装置を用いた細胞処理方法を提供する。
　本開示に係る第１の態様は、細胞処理装置であって、細胞懸濁液が流入する流入口および細胞懸濁液が流出する流出口を有する容器と、容器の内部の流入口と流出口との間に設けられ、細胞懸濁液が流出口から流出する場合の容器の内部における細胞懸濁液の流れ方向と交差する方向に複数の網目を有する面が延在するメッシュ部材と、メッシュ部材の流れ方向の上流側および下流側の少なくとも一方に設けられ、流れ方向と交差する方向にメッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔を有する面が延在する板状部材と、を含む。
　本開示に係る第２の態様は、上記態様において、板状部材は、メッシュ部材の流れ方向の下流側の面に接触して設けられていてもよい。
　本開示に係る第３の態様は、上記第１の態様において、メッシュ部材の流れ方向の上流側の面に接触して設けられ、メッシュ部材との接触面に、メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔が設けられた板状部材としての第１の板状部材と、メッシュ部材の流れ方向の下流側の面に接触して設けられ、メッシュ部材との接触面に、メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔が設けられた板状部材としての第２の板状部材と、を含んでいてもよい。また、本開示に係る第４の態様は、上記第３の態様において、第２の板状部材の貫通孔のサイズは、第１の板状部材の貫通孔のサイズよりも小さくてもよい。
　本開示に係る第５の態様は、上記態様において、板状部材に設けられた複数の貫通孔の各々は、板状部材の流れ方向の上流側の面の開口径が、流れ方向の下流側の面の開口径よりも大きいことが好ましい。
　また、本開示に係る第６の態様は、上記第５の態様において、複数の貫通孔の各々の内径が流れ方向の上流側から下流側に向けて徐々に小さくなっていることが好ましい。
　また、本開示に係る第７の態様は、上記第６の態様において、板状部材の流れ方向の上流側の面と複数の貫通孔の各々の内壁面との交差部は、凸状に湾曲した湾曲面であることが好ましい。
　本開示に係る第８の態様は、上記態様において、板状部材は、電解研磨による表面処理が施されていることが好ましい。
　本開示に係る第９の態様は、上記態様において、容器の内径は、メッシュ部材の設置位置よりも流れ方向の上流側の所定位置からメッシュ部材の設置位置に向けて徐々に小さくなっていることが好ましい。
　本開示に係る第１０の態様は、上記態様において、容器は、容器の内部を加圧する気体を流入させる気体流入口を更に含んでいてもよい。
　本開示に係る第１１の態様は、細胞懸濁液が流入する流入口および細胞懸濁液が流出する流出口を有する容器と、容器の内部の流入口と流出口との間に設けられ、細胞懸濁液が流出口から流出する場合の容器の内部における細胞懸濁液の流れ方向と交差する方向に複数の網目を有する面が延在するメッシュ部材と、メッシュ部材の流れ方向の上流側および下流側の少なくとも一方に設けられ、流れ方向と交差する方向にメッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔を有する面が延在する板状部材と、を含む細胞処理装置を用いた細胞処理方法であって、流出口を閉塞した状態で、細胞凝集体を含む細胞懸濁液を流入口から容器の内部に流入させ、容器に細胞懸濁液を貯留する第１の工程と、容器の内部を加圧した状態で流出口を開放することにより、容器の内部に貯留された細胞懸濁液をメッシュ部材に通して細胞凝集体を解砕して流出口から流出させる第２の工程と、を含む。
　本開示の第１２の態様は、上記第１１の態様において、第１の工程において細胞懸濁液を流入口から流入させる場合の細胞懸濁液の流速を、第２の工程において細胞懸濁液をメッシュ部材に通す場合の細胞懸濁液の流速よりも遅くしてもよい。
　本開示の第１３の態様は、上記第１１、第１２の態様において、第２の工程において、細胞懸濁液をメッシュ部材に通す場合の細胞懸濁液の流速を一定にすることが好ましい。
　本開示の第１４の態様は、上記第１１～第１３の態様において、第１の工程において、細胞懸濁液に細胞凝集体を浮遊させた状態で容器に貯留することが好ましい。
　本開示の第１５の態様は、上記第１１～第１４の態様において、細胞処理装置の容器は、容器の内部を加圧する気体を流入させる気体流入口を含んでいてもよく、第２の工程において、気体流入口から流入した気体によって容器の内部を加圧した状態で流出口を開放することにより、容器の内部に貯留された細胞懸濁液をメッシュ部材に通して細胞凝集体を解砕してもよい。
　本開示の上記態様に係る細胞処理装置および細胞処理方法によれば、内部に細胞凝集体を解砕するためのメッシュ部材が設けられた容器の中を流れる細胞懸濁液の速度勾配を緩和して細胞が受けるダメージを軽減することが可能となる。
本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置の外形を示す側面図である。 本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置の内部構造を示す断面図である。 本開示の例示的実施形態に係るメッシュ部材の平面図である。 本開示の例示的実施形態に係るメッシュ部材の拡大図である。 本開示の例示的実施形態に係る板状部材の平面図である。 図４Ａにおける４Ｂ－４Ｂ線に沿った断面図である。 本開示の例示的実施形態に係る板状部材の貫通孔付近の断面図である。 本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置を用いた解砕処理の手順を示すフローチャートである。 本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置において、細胞懸濁液が容器の内部に貯留された状態を示す断面図である。 本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置において、細胞懸濁液がメッシュ部材を通過して流出口に向けて流れる様子を示す断面図である。 本開示の他の例示的実施形態に係る細胞処理装置の内部構造を示す断面図である。 本開示の他の例示的実施形態に係る板状部材の平面図である。 本開示の他の例示的実施形態に係る板状部材の平面図である。 本開示の他の例示的実施形態に係る細胞処理装置の内部構造を示す断面図である。 本開示の他の例示的実施形態に係る細胞処理装置において、細胞懸濁液が容器の内部に貯留された状態を示す断面図である。 本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置において、細胞懸濁液がメッシュ部材を通過して流出口に向けて流れる様子を示す断面図である。
　以下、本開示の例示的実施形態の一例を図面を参照しつつ説明する。なお、各図面において同一または等価な構成要素および部分には同一の参照符号を付与している。
[第１の例示的実施形態]
　図１は、本開示の第１の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０の外形を示す側面図、図２は、細胞処理装置１０の内部構造を示す断面図である。
　多能性幹細胞の培養においては、細胞を培養することによって生じる細胞凝集体のサイズが過大となると、細胞凝集体同士が接着融合し、細胞が分化を開始したり、細胞凝集体の中心部の細胞が壊死したりする。従って、細胞凝集体のサイズが過大となることを防止するために、細胞の培養期間中の適切な時期に、細胞凝集体を解砕（分割）する解砕処理が必要となる。本開示の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０は、所定のサイズ（例えば２００μｍ～３００μｍ）にまで成長した細胞凝集体を、より小さいサイズ（例えば５０μｍ程度）の細胞凝集体に解砕する解砕処理を行うものである。
　細胞処理装置１０は、解砕処理の対象となる細胞凝集体を含む細胞懸濁液を収容する容器１１を含んで構成されている。容器１１の材質は特に限定されるものではないが、耐食性および耐圧性に優れる材料で構成されていることが好ましく、例えばステンレスを好適に用いることができる。
　容器１１は、解砕処理前の細胞懸濁液を容器１１の内部に流入させるための流入口１２と、解砕処理後の細胞懸濁液を容器１１の外部に流出させるための流出口１３と、を有する。容器１１は、更に、容器１１の内部を加圧する気体を流入させるための気体流入口１４を有する。細胞処理装置１０は使用時において、流出口１３が鉛直方向最下部に位置し、気体流入口１４が鉛直方向最上部に位置する向きにセットされる。細胞処理装置１０は、容器１１内に収容された細胞懸濁液を流出口１３から流出させる場合の細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１が、鉛直方向に沿った縦型の構成を有する。
　図２に示すように、容器１１の内部には、細胞凝集体を機械的に解砕するためのメッシュ部材２０が設けられている。メッシュ部材２０は、容器１１の内部の流入口１２と流出口１３との間の領域であって、流出口１３の近傍に配置されている。
　図３Ａは、メッシュ部材２０の平面図、図３Ｂは、図３Ａにおいて破線で囲んだ部分２０ａの拡大図である。メッシュ部材２０は、図３Ｂに示すように、複数の繊維状部材２１を例えば平織りすることによって形成された複数の網目を有する。なお、メッシュ部材２０は、複数の網目を有する構造であればよく、編み方は平織りに限定されない。繊維状部材２１の線径および網目のサイズは、解砕処理後の細胞凝集体のサイズに応じて適宜定められる。例えば、解砕処理後の細胞凝集体のサイズを５０μｍとする場合、繊維状部材２１の線径が５０μｍ以下であり、網目のサイズ（網目の一辺の長さａ）が４０μｍ以上６０μｍ以下であることが好ましい。繊維状部材２１の材質は、特に限定されるものではないが、耐食性の高い材料で構成されていることが好ましく、例えばナイロンまたはステンレスを好適に用いることができる。
　メッシュ部材２０は、複数の網目を有する面が、容器１１内に収容された細胞懸濁液を流出口１３から流出させる場合の細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する方向に延在するように容器１１内に設置されている。細胞懸濁液に含まれる細胞凝集体は、流出口１３に向かう途中でメッシュ部材２０を通過することで機械的に解砕される。なお、メッシュ部材２０の平面形状は、例えば、図３Ａに示すように円形とされるが、容器１１の形状に合わせて適宜変形することが可能である。
　図２に示すように、容器１１の内部には、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配を緩和するための板状部材３０が設けられている。本例示的実施形態において、板状部材３０は、メッシュ部材２０に対して、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１の下流側に配置されている。
　図４Ａは、板状部材３０の平面図、図４Ｂは、図４Ａにおける４Ｂ－４Ｂ線に沿った断面図である。板状部材３０は、耐食性が高い材料で構成されていることが好ましく、例えばステンレス（ＳＵＳ３１６Ｌ）を好適に用いることができる。板状部材３０の厚さは、例えば０．５ｍｍ以上２ｍｍ以下であり、典型的には１ｍｍである。板状部材３０には、メッシュ部材２０の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔３２が設けられている。貫通孔３２の各々の形状は例えば円形とすることができ、貫通孔３２の各々の直径は、例えば４ｍｍ程度である。また、板状部材３０の平面形状は、例えば、図４Ａに示すように円形とされるが、容器１１の形状に合わせて適宜変形することが可能である。
　板状部材３０は、複数の貫通孔３２を有する面が、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する方向に延在するように容器１１内に設置されている。容器１１内において、流出口１３に向けて流れる細胞懸濁液は、板状部材３０に設けられた複数の貫通孔３２の各々を通過する。複数の貫通孔３２を有する板状部材３０は、シャワーヘッドのように機能し、貫通孔３２を通過する細胞懸濁液の流速は、各貫通孔３２内において同程度となる。これにより、容器１１内部の板状部材３０よりも上流側の領域においても、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配が緩和される。
　このように、複数の貫通孔３２を有する面が、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する方向に延在するように板状部材３０を設置することで、容器１１の壁面付近を流れる細胞懸濁液の流速と、容器１１の中央部付近を流れる細胞懸濁液の流速との差を小さくすることができる。これにより、板状部材３０を設けない場合と比較して、細胞懸濁液の速度勾配に起因して細胞に加わるせん断力を小さくすることができ、細胞が受けるダメージを小さくすることができる。
　板状部材３０は、図２に示すように、メッシュ部材２０の下流側の面に接触して設けられていることが好ましい。板状部材３０をメッシュ部材２０の下流側の面に接触させることにより、板状部材３０は、細胞懸濁液の速度勾配を緩和する機能に加え、メッシュ部材２０を支持して液流によるメッシュ部材２０の撓みを防止する機能を発揮することができる。すなわち、メッシュ部材２０がナイロン等の低剛性の材料で構成されている場合、メッシュ部材２０は細胞懸濁液の液流によって塑性変形し、撓みを生じるおそれがある。板状部材３０がメッシュ部材２０を支持することで、メッシュ部材２０の撓みを防止することができ、メッシュ部材２０の耐用期間を延ばすことができる。また、板状部材３０がメッシュ部材２０を支持してメッシュ部材２０の撓みを防止する機能を発揮することで、メッシュ部材２０を構成する繊維状部材２１としてナイロン等の低剛性であるが安価な材料を使用することが可能となる。
　なお、メッシュ部材２０を構成する繊維状部材２１としてステンレス等の高剛性の材料を使用する場合などの板状部材３０によるメッシュ部材２０の支持が不要である場合には、板状部材３０をメッシュ部材２０から離間して配置してもよい。また、板状部材３０をメッシュ部材２０の上流側に配置してもよい。
　板状部材３０の貫通孔３２を含む主面全体の面積に対する、複数の貫通孔３２の総面積の割合（以下、開口率という）は、５０％以上６０％以下であることが好ましい。板状部材３０の開口率を５０％以上とすることで、流出口１３に向けて流れる細胞懸濁液の流れを良好に維持することができ、処理能力を確保することができる。一方、板状部材３０の開口率を６０％以下とすることで、板状部材３０において、メッシュ部材２０を支持するために必要な機械的強度を確保することができる。
　図４Ｂに示すように、貫通孔３２の各々は、板状部材３０の上流側の面Ｓ１から下流側の面Ｓ２に向けて開口径が徐々に小さくなるテーパー形状を有している。すなわち、板状部材３０の上流側の面Ｓ１における貫通孔３２の開口径Ｄ１は、下流側の面Ｓ２における貫通孔３２の開口径Ｄ２よりも大きい。このように、上流側の面Ｓ１における貫通孔３２の開口径Ｄ１を下流側の面Ｓ２における開口径Ｄ２よりも大きくすることで、板状部材３０の機械的強度を確保しつつ細胞凝集体の貫通孔３２内への導入を促進することができる。
　また、図４Ｃに示すように、板状部材３０の上流側の面Ｓ１と貫通孔３２の内壁面Ｓ３との交差部は、面取り加工またはＲ加工を施すことにより、凸状に湾曲した湾曲面とされていることが好ましい。板状部材３０の上流側の面Ｓ１と貫通孔３２の内壁面Ｓ３との交差部が角張っている場合には、この角部に細胞凝集体が付着して滞留するおそれがある。板状部材３０の上流側の面Ｓ１と貫通孔３２の内壁面Ｓ３との交差部を凸状の湾曲面とすることで、細胞凝集体を貫通孔３２の内側に導入する流れを形成することができ、細胞凝集体の滞留を抑制することができる。これにより、細胞凝集体の回収率の高めることができる。
　また、板状部材３０の上流側の面Ｓ１において、互いに隣接する貫通孔３２の外縁間の距離ｂ（図４Ｂ参照）は、１ｍｍ以下であることが好ましい。互いに隣接する貫通孔３２の外縁間の距離ｂを１ｍｍ以下とすることで、板状部材３０の上流側の面Ｓ１上における細胞凝集体の滞留を抑制することができ、これによって細胞凝集体の回収率を高めることができる。
　また、板状部材３０の表面全体は、電解研磨による表面処理が施されていることが好ましい。電解研磨は、電解液中で金属表面から金属イオンを溶出させることにより金属表面を平滑化する技術であり、バフ研磨等の機械的な研磨処理よりも表面を滑らかにすることができる。板状部材３０において、電解研磨による表面処理によって表面を平滑化することで、菌の繁殖を抑制することができ、板状部材３０の衛生状態を良好に保つことができる。
　図２に示すように、容器１１は、メッシュ部材２０の設置位置Ｐ２よりも上流側の位置Ｐ１からメッシュ部材の設置位置Ｐ２に向けて内径が徐々に小さくなっている。換言すれば、細胞懸濁液を流出口１３から流出させる場合に容器１１の内部に形成される細胞懸濁液の流路の断面積が、メッシュ部材２０の設置位置Ｐ２よりも上流側の位置Ｐ１からメッシュ部材２０の設置位置Ｐ２に向けて徐々に小さくなっている。
　このように、メッシュ部材２０の設置位置Ｐ２に向けて細胞懸濁液の流路の断面積を徐々に小さくすることで、細胞懸濁液の流速を、細胞懸濁液がメッシュ部材２０に近づくにつれて徐々に大きくすることができる。細胞懸濁液がメッシュ部材２０を通過するときの流速を比較的大きくすることで、細胞凝集体の解砕を適切に行うことができる。一方、メッシュ部材２０よりも上流側における細胞懸濁液の流速を比較的小さくすることで、細胞が受けるダメージを抑制することができる。
　容器１１の位置Ｐ１からメッシュ部材の設置位置Ｐ２までの領域における容器１１の内壁面Ｓ１０の傾斜角θは、７０°以上９０°未満であることが好ましい。なお傾斜角θは、細胞処理装置１０の使用時における、容器１１の内壁面Ｓ１０と水平面Ｈとのなす角である。傾斜角θを７０°以上とすることで、容器１１の内壁面Ｓ１０に付着した細胞凝集体を重力によって下流側に落下させることができ、細胞凝集体が内壁面Ｓ１０上に滞留することを防止することができる。傾斜角θを９０°未満とすることで、細胞懸濁液の流速を徐々に大きくする効果を得ることができる。また、傾斜角θを９０°未満とすることで、容器１１の内径が、メッシュ部材２０の設置位置Ｐ２から上流側に向けて徐々に大きくなる構造となるので、細胞処理装置１０の高さを抑えつつ容器１１の容積を確保することが可能となる。
　以下に、本例示的実施形態に係る細胞処理装置１０を用いて細胞凝集体を解砕する解砕処理の手順について説明する。図５は、細胞処理装置１０を用いた解砕処理の手順を示すフローチャートである。
　ステップＡ１において、流出口１３を閉塞した状態で、解砕処理の対象となる細胞凝集体を含む細胞懸濁液を流入口１２から容器１１の内部に流入させ、容器１１に細胞懸濁液を貯留する。なお、一例として２００μｍ～３００μｍ程度にまで成長した細胞凝集体が、解砕処理の対象とされる。
　図６は、細胞凝集体Ｃを含む細胞懸濁液Ｌが容器１１の内部に貯留された状態を示す断面図である。細胞処理装置１０は、使用時において、流出口１３が鉛直方向最下部に位置し、気体流入口１４が鉛直方向最上部に位置する向きにセットされる。流出口１３の閉塞および開放は、例えば流出口１３に取り付けられた電磁弁２００を用いることが可能である。容器１１の内部に細胞懸濁液Ｌを貯留している間、電磁弁２００は、図６に示す閉塞状態を維持する。細胞懸濁液Ｌは、流入口１２に接続された配管（図示せず）から供給され、流入口１２を経由して容器１１の内部に流入する。ここで、細胞懸濁液を流入口１２から流入させる場合の細胞懸濁液の流速を流速Ｖ１とする。
　容器１１の内部に貯留された細胞懸濁液Ｌ中において細胞凝集体Ｃは浮遊状態を維持していることが好ましい。細胞懸濁液Ｌ中において細胞凝集体Ｃの浮遊状態を維持するために、細胞懸濁液Ｌ中にジェランガム等のポリマーが添加されていてもよい。
　容器１１に細胞懸濁液Ｌを貯留している間、メッシュ部材２０の湿潤が行われ、メッシュ部材２０に付着した気泡が除去される。メッシュ部材２０に気泡が付着した状態で細胞凝集体をメッシュ部材２０に通した場合には、気泡が細胞凝集体の流れを妨げるおそれがある。本例示的実施形態に係る解砕処理によれば、容器１１に細胞懸濁液Ｌを貯留している間、メッシュ部材２０の湿潤が行われ、メッシュ部材２０に付着した気泡が除去されるので、細胞凝集体がメッシュ部材２０を通過する際の流れを安定化させることができる。
　ステップＡ２において、容器１１の内部を加圧した状態で流出口１３を開放することにより、容器１１の内部に貯留された細胞懸濁液をメッシュ部材２０に通して細胞凝集体を解砕して流出口１３から流出させる。
　図７は、細胞懸濁液Ｌがメッシュ部材２０を通過して流出口１３に向けて流れる様子を示す断面図である。容器１１の内部の加圧は、電磁弁２００を閉塞状態としたまま気体流入口１４に接続されたコンプレッサ（図示せず）等の圧縮空気供給手段を用いて容器１１の内部に気体を供給することにより行う。
　その後、容器１１の内部の圧力が一定となった段階で、容器１１の内部への加圧を維持しつつ電磁弁２００を開放状態として流出口１３を開放する。これにより、容器１１に貯留された細胞懸濁液Ｌにおいて、流出口１３に向かう流れ方向Ｆ１の液流が発生する。細胞懸濁液Ｌ中の細胞凝集体Ｃは、細胞懸濁液Ｌの流れ方向Ｆ１に沿って移動し、流出口１３に向かう。
　容器１１の内径は、メッシュ部材２０の設置位置Ｐ２よりも上流側の位置Ｐ１からメッシュ部材の設置位置Ｐ２に向けて徐々に小さくなっている。これにより、細胞懸濁液Ｌの流速は、細胞懸濁液Ｌがメッシュ部材２０に近づくにつれて徐々に大きくなる。細胞凝集体Ｃは、流出口１３に至るまでの流路の途中に設置されたメッシュ部材２０を通過することで、より小さいサイズ（例えば５０μｍ程度）の細胞凝集体に解砕される。メッシュ部材２０を通過することによって解砕された細胞凝集体Ｃは、板状部材３０の貫通孔３２を通って流出口１３に達し、流出口１３から細胞処理装置１０の外部に流出する。ここで、細胞懸濁液がメッシュ部材２０を通過するときの流速を流速Ｖ２とする。細胞懸濁液を流入口１２から流入させる場合の流速Ｖ１は、細胞懸濁液がメッシュ部材２０を通過するときの流速Ｖ２よりも小さいことが好ましく（Ｖ１＜Ｖ２）、例えば流速Ｖ１は、流速Ｖ２の２分の１以下であることが好ましい（Ｖ１≦Ｖ２／２）。このように、流速Ｖ１を流速Ｖ２よりも小さくすることで、細胞が受けるダメージを軽減することができる。
　貫通孔３２を通過する細胞懸濁液の流速は、各貫通孔３２内において同程度となる。これにより、板状部材３０よりも上流側の領域においても、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配が緩和される。すなわち、容器１１の壁面付近を流れる細胞懸濁液の流速と、容器１１の中央部付近を流れる細胞懸濁液の流速との差が小さくなる。これにより、板状部材３０を設けない場合と比較して、細胞懸濁液の速度勾配に起因して細胞に加わるせん断力を小さくすることができ、細胞が受けるダメージを小さくすることができる。
　容器１１に貯留された全ての細胞懸濁液Ｌが流出口１３から流出するまでの間、容器１１の内部の圧力は一定に維持される。これにより、複数の細胞凝集体Ｃ（細胞懸濁液Ｌ）がメッシュ部材２０を通過する通過速度が一定に維持され、複数の細胞凝集体Ｃの処理状態が均一化される。従って、分割処理後における複数の細胞凝集体Ｃの均質性を担保することができる。
［第２の例示的実施形態］
　図８は、本開示の第２の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０ａの内部構造を示す断面図である。
　細胞処理装置１０ａを構成する容器１１の内部には、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配を緩和するための２つの板状部材３０ａおよび３０ｂが設けられている。板状部材３０ａは、メッシュ部材２０に対して、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１の上流側に配置されている。一方、板状部材３０ｂは、メッシュ部材２０に対して、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１の下流側に配置されている。
　図９Ａは板状部材３０ａの平面図、図９Ｂは板状部材３０ｂの平面図である。板状部材３０ａおよび３０ｂには、それぞれ、メッシュ部材２０の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔３２ａおよび３２ｂが設けられている。メッシュ部材２０の下流側には、メッシュ部材２０を通過することによって解砕された細胞凝集体が流れるので、メッシュ部材２０の下流側に配置される板状部材３０ｂの貫通孔３２ｂのサイズを、メッシュ部材２０の上流側に配置される板状部材３０ａの貫通孔３２ａのサイズよりも小さくすることができる。なお、貫通孔３２ａのサイズと貫通孔３２ｂのサイズは、互いに同じであってもよい。
　板状部材３０ａおよび３０ｂは、それぞれ、複数の貫通孔３２ａおよび３２ｂを有する面が、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する方向に延在するように容器１１内に設置されている。容器１１内において、流出口１３に向けて流れる細胞懸濁液は、板状部材３０ａに設けられた複数の貫通孔３２ａの各々を経由してメッシュ部材２０に到達し、メッシュ部材２０を通過した細胞懸濁液は、板状部材３０ｂに設けられた複数の貫通孔３２ｂの各々を通過して流出口１３に向かう。板状部材３０ａおよび３０ｂは、それぞれ、シャワーヘッドのように機能し、貫通孔３２ａおよび３２ｂを通過する細胞懸濁液の流速は、各貫通孔３２ａおよび３２ｂ内において同程度となる。これにより、容器１１内部の、板状部材３０ａよりも上流側の領域においても、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ１と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配が緩和され、速度勾配に起因して細胞に加わるせん断力を小さくすることができ、細胞が受けるダメージを小さくすることができる。
　容器１１の内部において、メッシュ部材２０を間に挟んで２枚の板状部材３０ａおよび３０ｂを設けることで、細胞懸濁液の速度勾配を緩和させる効果を更に促進させることができる。
　また、図８に示すように、板状部材３０ａは、メッシュ部材２０の上流側の面に接触して設けられ、板状部材３０ｂは、メッシュ部材２０の下流側の面に接触して設けられていてもよい。板状部材３０ａおよび３０ｂによってメッシュ部材２０の上流側の面および下流側の面を挟み込む構造とすることで、板状部材３０ａおよび３０ｂは、細胞懸濁液の速度勾配を緩和する機能に加え、メッシュ部材２０を支持して液流によるメッシュ部材２０の撓みを防止する機能を発揮することができる。板状部材３０ａおよび３０ｂがメッシュ部材２０を支持してメッシュ部材２０の撓みを防止する機能を発揮することで、メッシュ部材２０の耐用期間を延ばすことができ、また、メッシュ部材２０を構成する繊維状部材２１としてナイロン等の低剛性であるが安価な材料を使用することが可能となる。
　なお、メッシュ部材２０を構成する繊維状部材２１としてステンレス等の高剛性の材料を使用する場合など、板状部材３０ａおよび３０ｂによるメッシュ部材２０の支持が不要である場合には、板状部材３０ａおよび３０ｂをメッシュ部材２０から離間して配置してもよい。
［第３の例示的実施形態］
　図１０は、本開示の第３の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０ｂの内部構造を示す断面図である。
　細胞処理装置１０ｂは使用時において、流出口１３が鉛直方向最下部に位置し、気体流入口１４が鉛直方向最上部に位置する向きにセットされる。細胞処理装置１０ｂは、容器１１内に収容された細胞懸濁液を流出口１３から流出させる場合の細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２が、水平方向に沿った横型の構成を有する。
　容器１１の内部には、細胞凝集体を機械的に解砕するためのメッシュ部材２０が設けられている。メッシュ部材２０は、容器１１の内部の流入口１２と流出口１３との間の領域であって、流出口１３の近傍に配置されている。メッシュ部材２０は、複数の網目を有する面が、容器１１内に収容された細胞懸濁液を流出口１３から流出させる場合の細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２と交差する方向に延在するように容器１１内に設置されている。細胞懸濁液に含まれる細胞凝集体は、流出口１３に向かう途中でメッシュ部材２０を通過することで機械的に解砕される。
　容器１１の内部には、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配を緩和するための板状部材３０が設けられている。本例示的実施形態において、板状部材３０は、メッシュ部材２０に対して、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２の下流側に配置されている。
　板状部材３０は、複数の貫通孔３２を有する面が、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２と交差する方向に延在するように容器１１内に設置されている。容器１１内において、流出口１３に向けて流れる細胞懸濁液は、板状部材３０に設けられた複数の貫通孔３２の各々を通過する。複数の貫通孔３２を有する板状部材３０は、シャワーヘッドのように機能し、貫通孔３２を通過する細胞懸濁液の流速は、各貫通孔３２内において同程度となる。これにより、容器１１内部の板状部材３０よりも上流側の領域においても、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配が緩和される。これにより、板状部材３０を設けない場合と比較して、細胞懸濁液の速度勾配に起因して細胞に加わるせん断力を小さくすることができ、細胞が受けるダメージを小さくすることができる。
　細胞処理装置１０ｂを用いて細胞凝集体を解砕する解砕処理の手順は、第１の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０と同様である。
　図１１は、細胞凝集体Ｃを含む細胞懸濁液Ｌが容器１１の内部に貯留された状態を示す断面図である。細胞処理装置１０ｂは、使用時において、流出口１３が鉛直方向最下部に位置し、気体流入口１４が鉛直方向最上部に位置する向きにセットされる。流出口１３の閉塞および開放は、例えば流出口１３に取り付けられた電磁弁２００を用いることが可能である。容器１１の内部に細胞懸濁液Ｌを貯留している間、電磁弁２００は、図１１に示す閉塞状態を維持する。細胞懸濁液Ｌは、流入口１２に接続された配管（図示せず）から供給され、流入口１２を経由して容器１１の内部に流入する。容器１１の内部に貯留された細胞懸濁液Ｌ中において細胞凝集体Ｃは浮遊状態を維持していることが好ましい。細胞懸濁液Ｌ中において細胞凝集体Ｃの浮遊状態を維持するために、細胞懸濁液Ｌ中にジェランガム等のポリマーが添加されていてもよい。
　図１２は、細胞懸濁液Ｌがメッシュ部材２０を通過して流出口１３に向けて流れる様子を示す断面図である。容器１１の内部の加圧は、電磁弁２００を閉塞状態としたまま気体流入口１４に接続されたコンプレッサ（図示せず）等の圧縮空気供給手段を用いて容器１１の内部に気体を供給することにより行う。
　その後、容器１１の内部の圧力が一定となった段階で、容器１１の内部を加圧したまま電磁弁２００を開放状態として流出口１３を開放する。これにより、容器１１に貯留された細胞懸濁液Ｌにおいて、流出口１３に向かう流れ方向Ｆ２の液流が発生する。細胞懸濁液Ｌ中の細胞凝集体Ｃは、細胞懸濁液Ｌの流れ方向Ｆ２に沿って移動し、流出口１３に向かう。
　細胞凝集体Ｃは、流出口１３に至るまでの流路の途中に設置されたメッシュ部材２０を通過することで、より小さいサイズ（例えば５０μｍ程度）の細胞凝集体に解砕される。メッシュ部材２０を通過することによって解砕された細胞凝集体Ｃは、板状部材３０の貫通孔３２を通って流出口１３に達し、流出口１３から細胞処理装置１０ｂの外部に流出する。
　貫通孔３２を通過する細胞懸濁液の流速は、各貫通孔３２内において同程度となる。これにより、板状部材３０よりも上流側の領域においても、細胞懸濁液の流れ方向Ｆ２と交差する面内における細胞懸濁液の速度勾配が緩和される。すなわち、容器１１の壁面付近を流れる細胞懸濁液の流速と、容器１１の中央部付近を流れる細胞懸濁液の流速との差が小さくなる。これにより、板状部材３０を設けない場合と比較して、細胞懸濁液の速度勾配に起因して細胞に加わるせん断力を小さくすることができ、細胞が受けるダメージを小さくすることができる。
　容器１１に貯留された全ての細胞懸濁液Ｌが流出口１３から流出するまでの間、容器１１の内部の圧力は一定に維持される。これにより、複数の細胞凝集体Ｃ（細胞懸濁液Ｌ）がメッシュ部材２０を通過する通過速度が一定に維持され、複数の細胞凝集体Ｃの処理状態が均一化される。従って、分割処理後における複数の細胞凝集体Ｃの均質性を担保することができる。
　なお、第３の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０ｂにおいて、第２の例示的実施形態に係る細胞処理装置１０ａの例に倣って、メッシュ部材２０の上流側および下流側にそれぞれ板状部材を設けることとしてもよい。
　日本出願２０１６－１６３５９１の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
　本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。

Claims (15)

  1. 　細胞懸濁液が流入する流入口および前記細胞懸濁液が流出する流出口を有する容器と、
    　前記容器の内部の前記流入口と前記流出口との間に設けられ、前記細胞懸濁液が前記流出口から流出する場合の前記容器の内部における前記細胞懸濁液の流れ方向と交差する方向に複数の網目を有する面が延在するメッシュ部材と、
    　前記メッシュ部材の前記流れ方向の上流側および下流側の少なくとも一方に設けられ、前記流れ方向と交差する方向に前記メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔を有する面が延在する板状部材と、
    　を含む細胞処理装置。
  2. 　前記板状部材が前記メッシュ部材の前記流れ方向の下流側の面に接触して設けられている、請求項１に記載の細胞処理装置。
  3. 　前記メッシュ部材の前記流れ方向の上流側の面に接触して設けられ、前記メッシュ部材との接触面に、前記メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔が設けられた前記板状部材としての第１の板状部材と、
    　前記メッシュ部材の前記流れ方向の下流側の面に接触して設けられ、前記メッシュ部材との接触面に、前記メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔が設けられた前記板状部材としての第２の板状部材と、
    　を含む
    　請求項１に記載の細胞処理装置。
  4. 　前記第２の板状部材の貫通孔のサイズは、前記第１の板状部材の貫通孔のサイズよりも小さい、請求項３に記載の細胞処理装置。
  5. 　前記板状部材に設けられた複数の貫通孔の各々は、前記板状部材の前記流れ方向の上流側の面の開口径が、前記流れ方向の下流側の面の開口径よりも大きい、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の細胞処理装置。
  6. 　前記複数の貫通孔の各々の内径が前記流れ方向の上流側から下流側に向けて徐々に小さくなっている、請求項５に記載の細胞処理装置。
  7. 　前記板状部材の前記流れ方向の上流側の面と前記複数の貫通孔の各々の内壁面との交差部は、凸状に湾曲した湾曲面である、請求項６に記載の細胞処理装置。
  8. 　前記板状部材は、電解研磨による表面処理が施されている、請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の細胞処理装置。
  9. 　前記容器の内径は、前記メッシュ部材の設置位置よりも前記流れ方向の上流側の所定位置から前記メッシュ部材の設置位置に向けて徐々に小さくなっている、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の細胞処理装置。
  10. 　前記容器は、前記容器の内部を加圧する気体を流入させる気体流入口を更に含む、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の細胞処理装置。
  11. 　細胞懸濁液が流入する流入口および前記細胞懸濁液が流出する流出口を有する容器と、前記容器の内部の前記流入口と前記流出口との間に設けられ、前記細胞懸濁液が前記流出口から流出する場合の前記容器の内部における前記細胞懸濁液の流れ方向と交差する方向に複数の網目を有する面が延在するメッシュ部材と、前記メッシュ部材の前記流れ方向の上流側および下流側の少なくとも一方に設けられ、前記流れ方向と交差する方向に前記メッシュ部材の網目のサイズよりも大きいサイズの複数の貫通孔を有する面が延在する板状部材と、を含む細胞処理装置を用いた細胞処理方法であって、
    　前記流出口を閉塞した状態で、細胞凝集体を含む前記細胞懸濁液を前記流入口から前記容器の内部に流入させ、前記容器に前記細胞懸濁液を貯留する第１の工程と、
    　前記容器の内部を加圧した状態で前記流出口を開放することにより、前記容器の内部に貯留された前記細胞懸濁液を前記メッシュ部材に通して前記細胞凝集体を解砕して前記流出口から流出させる第２の工程と、
    　を含む細胞処理方法。
  12. 　前記第１の工程において前記細胞懸濁液を前記流入口から流入させる場合の前記細胞懸濁液の流速を、前記第２の工程において前記細胞懸濁液を前記メッシュ部材に通す場合の前記細胞懸濁液の流速よりも遅くする、請求項１１に記載の細胞処理方法。
  13. 　前記第２の工程において、前記細胞懸濁液を前記メッシュ部材に通す場合の前記細胞懸濁液の流速を一定にする、請求項１１または１２に記載の細胞処理方法。
  14. 　前記第１の工程において、前記細胞懸濁液に前記細胞凝集体を浮遊させた状態で前記容器に貯留する、請求項１１から請求項１３のいずれか１項に記載の細胞処理方法。
  15. 　前記容器は、前記容器の内部を加圧する気体を流入させる気体流入口を更に含み、
    　前記第２の工程において、前記気体流入口から流入した気体によって前記容器の内部を加圧した状態で前記流出口を開放することにより、前記容器の内部に貯留された前記細胞懸濁液を前記メッシュ部材に通して前記細胞凝集体を解砕する、
    　請求項１１から請求項１４のいずれか１項に記載の細胞処理方法。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005014149A1 (ja) * 2003-08-07 2005-02-17 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha 複合多孔膜とその製造方法
JP2009183172A (ja) * 2008-02-04 2009-08-20 Olympus Corp 細胞処理容器および細胞処理装置
JP2010526530A (ja) * 2007-05-04 2010-08-05 スンドストローム，エリック スライシングデバイス
WO2014136581A1 (ja) * 2013-03-06 2014-09-12 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞の培養システム及び多能性幹細胞の継代方法
JP2015156824A (ja) * 2014-02-24 2015-09-03 国立大学法人東京工業大学 温度応答性高分子を用いた細胞培養装置

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005014149A1 (ja) * 2003-08-07 2005-02-17 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha 複合多孔膜とその製造方法
JP2010526530A (ja) * 2007-05-04 2010-08-05 スンドストローム，エリック スライシングデバイス
JP2009183172A (ja) * 2008-02-04 2009-08-20 Olympus Corp 細胞処理容器および細胞処理装置
WO2014136581A1 (ja) * 2013-03-06 2014-09-12 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞の培養システム及び多能性幹細胞の継代方法
JP2015156824A (ja) * 2014-02-24 2015-09-03 国立大学法人東京工業大学 温度応答性高分子を用いた細胞培養装置

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