JP2010525328A5

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Publication number: JP2010525328A5
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Filing date: 2008-04-15
Publication date: 2011-05-12
Anticipated expiration: 2028-04-15

Description

いくつかの態様では、本開示は、細胞の細胞表面グリカン（細胞の表面における糖タンパク質または糖脂質の細胞表面グリカンなど）の特性を評価することで、細胞によって産生される糖タンパク質のグリコシル化の特性を同定する方法を提供するものである。他の態様では、細胞表面グリカンの特性は、より一般的には、細胞から糖タンパク質産物を産生するためのプロセスなど、細胞培養のプロセスなどにおいて、細胞の生存度、形態、密度または他の特性などの細胞の状態（プロセス条件が変わることで影響を受ける場合もある）と相関し得るものである。よって、本開示の実施形態は、多岐にわたる、異なった状況に利用できるものであり、とりわけ、
（ａ）治療用糖タンパク質産物などの糖タンパク質産物のグリコシル化の特徴を評価または予測する、
（ｂ）糖タンパク質産物を生成するためのプロセスの１つ以上のステップで糖タンパク質産物の品質（グリカン構造など）を監視する、
（ｃ）糖タンパク質産物を生成するためのプロセスにおけるプロセス条件の変化を検出する、
（ｄ）（比較目的などで）糖タンパク質調製物の異なるバッチに関する情報を提供する、
（ｅ）（比較目的などで）糖タンパク質産物を生成するためのプロセスの異なるステップで細胞の状態または糖タンパク質産物の状態に関する情報を提供する、
（ｆ）（比較目的などで）糖タンパク質産物を生成するための複数のプロセスの同一のステップで細胞の状態または糖タンパク質産物の状態に関する情報を提供する、および／または
（ｇ）（比較目的などで）同様または同一の条件下で増殖させた２つ以上の細胞または細胞集団（最初の細胞集団から選択された単一の細胞に由来するクローン集合体など）によって産生される糖タンパク質産物のグリコシル化の特徴に関する情報を提供する目的で、細胞表面グリカンを評価することが可能である。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
ａ）
（ｉ）目的の糖タンパク質を産生する細胞の表面に第１の一組の条件下で存在する第１の表面グリコシル化パターンと、
（ｉｉ）この細胞の表面に第２の一組の条件下で存在する第２の表面グリコシル化パターンと、
の間のグリコシル化パターンの相違を判断するステップと、
ｂ）こうして判断した相違に基づいて、細胞によって産生される目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立するステップと、を含む、細胞によって産生される糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
（項目２）
１つ以上の特徴が、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの変化を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
相違を判断するステップが、第１の表面グリコシル化パターンと第２の表面グリコシル化パターンとの間のシアリル化の相違を判断することを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
１つ以上の特徴を確立するステップが、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンに存在するシアリル化の程度を確立することを含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
目的の糖タンパク質を産生する細胞が、目的の糖タンパク質を産生する細胞の培養であり、
第１の表面グリコシル化パターンが第１の時点で培養中の細胞表面に存在するパターンであるように、第１の一組の条件が第１の時点を表し、
第２の表面グリコシル化パターンが第２の時点で培養中の細胞表面に存在するパターンであるように、第２の一組の条件が第２の時点を表し、
このため、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立するステップが、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの経時的な変化を確立することを含み、これによって産生状態または品質を評価できるようにする、項目１に記載の方法。
（項目６）
目的の糖タンパク質を産生する細胞が、目的の糖タンパク質を産生する細胞の培養であり、
第１および第２の一組の条件が、目的の糖タンパク質を産生する細胞の培養に適用される成長パラメータの異なる集合を表し、
このため、目的の糖タンパク質の産生に望ましい増殖パラメータが確立される、項目１に記載の方法。
（項目７）
ａ）
（ｉ）細胞の第１の培養中の細胞表面に存在する第１の表面グリコシル化パターンと、
（ｉｉ）培養中の細胞表面に存在する第２の表面グリコシル化パターンと、
の間のグリコシル化パターンの相違を判断するステップと、
ｂ）こうして判断した相違に基づいて、少なくとも１つのパラメータが、培養中の細胞によって産生される糖タンパク質のグリコシル化に対しておよぼす影響を確立するステップと、を含み、
第１の培養と第２の培養とは少なくとも１つのパラメータが互いに異なる、方法。
（項目８）
少なくとも１つのパラメータが単一のパラメータである、項目７に記載の方法。
（項目９）
少なくとも１つのパラメータが細胞のアイデンティティを含む、項目７または項目８に記載の方法。
（項目１０）
確立された効果に基づいて、糖タンパク質の産生に望ましい細胞を選択するステップをさらに含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
少なくとも１つのパラメータが少なくとも１つの増殖条件を含む、項目７または８に記載の方法。
（項目１２）
確立された効果に基づいて、糖タンパク質の産生に望ましい増殖条件を選択するステップをさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
相違を判断するステップが、グリコシル化部位占有の度合い、結合型グリカンのアイデンティティ、結合型グリカンの相対量、結合型グリカンの完全組成または部分組成、結合型グリカンの相対量、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特徴の相違を判断することを含む、項目１または項目７に記載の方法。
（項目１４）
判断するステップが、少なくとも１つの細胞表面グリカンを細胞から遊離させ、遊離グリカンを分析することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
判断するステップが、
少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを第１の培養にて細胞から遊離させるステップと、
少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを第２の培養にて細胞から遊離させるステップと、
第１および第２の遊離細胞表面グリカンを分析するステップとを含む、項目７に記載の方法。
（項目１６）
遊離させるステップが細胞をプロテアーゼに曝露することを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
遊離させるステップが各々、細胞をプロテアーゼに曝露することを含む、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
曝露するステップが、少なくとも１つの糖タンパク質が遊離されるようにプロテアーゼ処理することを含み、プロテアーゼ処理は細胞膜を実質的に破壊しないものである、項目１６または１７に記載の方法。
（項目１９）
プロテアーゼが、プロテイナーゼＫ、トリプシン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
プロテアーゼ処理するステップが、約０．１から２．０ｍｇ／ｍＬの濃度で１種類以上のプロテアーゼに曝露することを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
プロテアーゼ処理するステップが、約３７℃の温度で約１５分間プロテアーゼ処理することを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
分析するステップが、ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を利用するものである、項目１４または１５に記載の方法。
（項目２３）
判断するステップが、細胞からグリカンを遊離させることを含まない、項目１または項目７に記載の方法。
（項目２４）
判断するステップが、少なくとも１つの細胞表面複合糖質に、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、エキソグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
遊離させるステップが、
ａ）１つ以上のタンパク質結合型細胞表面グリカンを細胞表面糖タンパク質から切断し、
ｂ）１つ以上の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定することを含む、項目１４または１５に記載の方法。
（項目２６）
ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって、１つ以上の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがＮ−結合型グリカンである、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがＯ−結合型グリカンである、項目２５に記載の方法。
（項目２９）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが複合型グリカンを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３０）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが少なくとも１つのシアル酸残基を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが高マンノース型グリカンを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３２）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがハイブリッド型グリカンを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３３）
判断した相違に関する情報または固定培地におけるグリコシル化パターンのうちの少なくとも１つに関する情報を記録するステップをさらに含む、項目１または項目７に記載の方法。
（項目３４）
記録した情報と履歴記録または参照標準とを比較するステップをさらに含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
記録または比較するステップが品質制御手順の一部である、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３６）
ａ）目的の糖タンパク質を産生する細胞であって、細胞が細胞表面グリコシル化パターンを有するように細胞表面に結合した少なくとも１つの細胞表面グリカンを有する細胞を提供するステップと、
ｂ）細胞表面グリコシル化パターンの少なくとも１つの特徴を判断するステップと、
ｃ）こうして判断した特徴に基づいて、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立するステップとを含み、判断した特徴が目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴と相関する、
細胞によって産生される目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
（項目３７）
少なくとも１つの細胞表面グリカンが細胞表面複合糖質の一部である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
少なくとも１つの細胞表面グリカンが細胞表面糖タンパク質の一部である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
確立するステップが、細胞表面糖タンパク質の一部である複数のグリカンを特性決定することを含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
判断した特徴が、グリコシル化部位占有の度合い、結合型グリカンのアイデンティティ、結合型グリカンの相対量、結合型グリカンの完全組成または部分組成、結合型グリカンの相対量、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
確立するステップが、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンに、判断した特徴が共通して備わっている旨を判断することを含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
判断するステップよりも前に細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させる、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
糖タンパク質が細胞から遊離されるように細胞をプロテアーゼ処理することで、細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させ、プロテアーゼ処理は細胞膜を実質的に破壊しないものである、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
プロテイナーゼＫ、トリプシン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することで、細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させる、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
曝露するステップが、約０．１から２．０ｍｇ／ｍＬの濃度で１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することを含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
曝露するステップが、細胞を約３７℃の温度で約１５分間プロテアーゼ処理することを含む、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
判断するステップが、細胞表面糖タンパク質に、ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目４１に記載の方法。
（項目４７）
判断するステップよりも前に細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させない、項目３７に記載の方法。
（項目４８）
判断するステップが、少なくとも１つの細胞表面複合糖質に、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
細胞表面糖タンパク質が、１つ以上のタンパク質結合型細胞表面グリカンを含み、判断するステップが、
ａ）１つ以上のタンパク質結合型細胞表面グリカンを細胞表面糖タンパク質から切断し、
ｂ）１つ以上の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定することを含む、項目３８に記載の方法。
（項目５０）
ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって、１つ以上の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがＮ−結合型グリカンである、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがＯ−結合型グリカンである、項目４９に記載の方法。
（項目５３）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが複合型グリカンを含む、項目４９に記載の方法。
（項目５４）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが少なくとも１つのシアル酸残基を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
タンパク質結合型細胞表面グリカンが高マンノース型グリカンを含む、項目４９に記載の方法。
（項目５６）
タンパク質結合型細胞表面グリカンがハイブリッド型グリカンを含む、項目４９に記載の方法。
（項目５７）
固定培地で特性決定した少なくとも１つの細胞表面グリカンに関する情報を記録するステップをさらに含む、項目３６〜５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
記録した情報と履歴記録とを比較するステップをさらに含む、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
記録または比較するステップが品質制御手順の一部である、項目５７または項目５８に記載の方法。
（項目６０）
ａ）目的の糖タンパク質を産生する第１の細胞の表面に結合した少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを含む第１の細胞を提供するステップと、
ｂ）少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｃ）目的の糖タンパク質を産生する第２の細胞の表面に結合した少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを含む第２の細胞を提供するステップと、
ｄ）少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｅ）第１の細胞表面グリカンと第２の細胞表面グリカンとの１つ以上の相違を判断するステップと、
ｆ）目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違を確立するステップとを含み、第１の細胞表面グリカンと第２の細胞表面グリカンとの間の判断した相違が、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違と相関している、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違を判断する方法。
（項目６１）
第１および第２の細胞を細胞の初期集団から選択する、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
第１および第２の細胞を異なる細胞培養条件下で増殖させる、項目６０または６１に記載の方法。
（項目６３）
細胞培養条件が、細胞型、培養のタイプ、培養時間、培地のタイプ、モル浸透圧濃度、ｐＨ、温度、単離ステップ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるパラメータの点で異なっている、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
第１の細胞および第２の細胞を同一の細胞培養条件下で増殖させる、項目６０または６１に記載の方法。
（項目６５）
目的の糖タンパク質を産生する細胞を含む細胞培養液から、異なる時点で第１および第２の細胞を単離し、第１の細胞表面グリカンと第２の細胞表面グリカンとの間で判断した１つ以上の相違が、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの経時的な変化を表す、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
第１および第２の細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、メイディンダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ細胞）、ＮＳ０細胞、ＭＣＦ−７細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４３８細胞、Ｕ８７細胞、Ａ１７２細胞、ＨＬ６０細胞、Ａ５４９細胞、ＳＰ１０細胞、ＤＯＸ細胞、ＤＧ４４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＳＨＳＹ５Ｙ、ジャーカット細胞、ＢＣＰ−１細胞、ＣＯＳ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＧＨ３細胞、９Ｌ細胞、３Ｔ３細胞、ＭＣ３Ｔ３細胞、Ｃ３Ｈ−１０Ｔ１／２細胞、ＮＩＨ−３Ｔ３細胞、Ｃ６／３６細胞、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目６０〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンが第１の細胞表面複合糖質の一部であり、第２の細胞表面グリカンが第２の細胞表面複合糖質の一部である、項目６０に記載の方法。
（項目６８）
少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンが第１の細胞表面糖タンパク質の一部であり、第２の細胞表面グリカンが第２の細胞表面糖タンパク質の一部である、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、細胞表面糖タンパク質の一部である複数の第１のグリカンを特性決定することを含み、
少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、細胞表面糖タンパク質の一部である複数の第２のグリカンを特性決定することを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、グリコシル化部位占有の度合い、結合型グリカンのアイデンティティ、結合型グリカンの相対量、グリカンの完全組成または部分組成、および細胞表面グリカンに対するこれらの組み合わせからなる群から選択される特徴を評価することを含み、
目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違を確立するステップが、目的の糖タンパク質に、評価した特徴が共通して備わっている旨を判断することを含む、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップの前に、第１および第２の細胞表面糖タンパク質を第１および第２の細胞から遊離させる、項目６９に記載の方法。
（項目７２）
糖タンパク質が細胞から遊離されるように細胞をプロテアーゼ処理することで、第１および第２の細胞表面糖タンパク質を第１および第２の細胞から遊離させ、プロテアーゼ処理は細胞膜を実質的に破壊しないものである、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
プロテイナーゼＫ、トリプシン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することで、第１および第２の細胞表面糖タンパク質を第１および第２の細胞から除去する、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
曝露するステップが、約０．１から２．０ｍｇ／ｍＬの濃度で１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
曝露するステップが、細胞を約３７℃の温度で約１５分間プロテアーゼ処理することを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７６）
少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、少なくとも１つの第１および第２の細胞表面糖タンパク質に、ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目７１に記載の方法。
（項目７７）
少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップよりも前に第１および第２の細胞表面複合糖質を第１および第２の細胞から遊離させない、項目６７に記載の方法。
（項目７８）
少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、第１および第２の細胞表面複合糖質に、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、エキソグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
第１の細胞表面糖タンパク質が１つ以上の第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンを含み、第２の細胞表面糖タンパク質が１つ以上の第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンを含み、少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップが、
ａ）１つ以上の第１および第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンを第１および第２の細胞表面糖タンパク質から切断し、
ｂ）１つ以上の第１および第２の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定することを含む、項目６８に記載の方法。
（項目８０）
ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって、１つ以上の第１および第２の切断されたタンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定する、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンがＮ−結合型グリカンであるか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンがＮ−結合型グリカンであるか、またはその両方である、項目７９に記載の方法。
（項目８２）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンがＯ−結合型グリカンであるか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンがＯ−結合型グリカンであるか、またはその両方である、項目７９に記載の方法。
（項目８３）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンが複合型グリカンを含むか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンが複合型グリカンを含むか、またはその両方である、項目７９に記載の方法。
（項目８４）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンが少なくとも１つのシアル酸残基を含むか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンが少なくとも１つのシアル酸残基を含むか、またはその両方である、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンが高マンノース型グリカンを含むか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンが高マンノース型グリカンを含むか、またはその両方である、項目７９に記載の方法。
（項目８６）
第１のタンパク質結合型細胞表面グリカンがハイブリッド型グリカンを含むか、第２のタンパク質結合型細胞表面グリカンがハイブリッド型グリカンを含むか、またはその両方である、項目７９に記載の方法。
（項目８７）
固定培地で特性決定した少なくとも１つの第１および第２の細胞表面グリカンに関する情報を記録するステップをさらに含む、項目６０〜８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８８）
記録した情報と履歴記録とを比較するステップをさらに含む、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
記録または比較するステップが品質制御手順の一部である、項目８７または項目８８に記載の方法。
（項目９０）
ａ）目的の糖タンパク質を産生する細胞の表面に結合した少なくとも１つの細胞表面グリカンを含む細胞を提供するステップと、
ｂ）少なくとも１つの細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｃ）目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断するステップと、を含み、特性決定された少なくとも１つのグリカンが目的の糖タンパク質のグリコシ
ル化パターンの１つ以上の特徴と相関している、目的の糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
（項目９１）
糖タンパク質が細胞から遊離されるように細胞をプロテアーゼ処理することで、細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させ、プロテアーゼ処理は細胞膜を実質的に破壊しないものである、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
プロテイナーゼＫ、トリプシン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することで、細胞表面糖タンパク質を細胞から遊離させる、項目９０に記載の方法。
（項目９３）
曝露するステップが、約０．１から２．０ｍｇ／ｍＬの濃度で１種類以上のタンパク質分解酵素に細胞を曝露することを含む、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
曝露するステップが、細胞を約３７℃の温度で約１５分間プロテアーゼ処理することを含む、項目９２に記載の方法。
（項目９５）
判断するステップが、細胞表面糖タンパク質に、ＮＭＲ、質量分析、液体クロマトグラフィ、二次元クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体染色、レクチン染色、単糖定量化、蛍光標識糖質電気泳動（ＦＡＣＥ）、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、エキソグリコシダーゼ処理またはエンドグリコシダーゼ処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特性決定法を適用することを含む、項目９０に記載の方法。

Claims

ａ）
（ｉ）目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞の表面に第１の一組の条件下で存在する第１の表面グリコシル化パターンと、
（ｉｉ）該細胞の該表面に第２の一組の条件下で存在する第２の表面グリコシル化パターンと、
の間のグリコシル化パターンの相違を判断するステップと、
ｂ）こうして判断した相違に基づいて、該細胞によって産生される該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立するステップと、
を含む、細胞によって産生される目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
前記１つ以上の特徴が、前記目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの変化を含む、請求項１に記載の方法。
相違を判断する前記ステップが、第１の表面グリコシル化パターンと第２の表面グリコシル化パターンとの間のシアリル化の相違を判断することを含む、請求項１に記載の方法。
１つ以上の特徴を確立する前記ステップが、前記目的の非細胞表面糖タンパク質の前記グリコシル化パターンに存在するシアリル化の程度を確立することを含む、請求項３に記載の方法。
前記目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する前記細胞が、該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞の培養であり、
前記第１の表面グリコシル化パターンが第１の時点で培養中の細胞表面に存在するパターンであるように、第１の一組の条件が該第１の時点を表し、
前記第２の表面グリコシル化パターンが第２の時点で培養中の細胞表面に存在するパターンであるように、第２の一組の条件が該第２の時点を表し、
このため、該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立する前記ステップが、該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの経時的な変化を確立することを含み、これによって産生状態または品質を評価できるようにする、請求項１に記載の方法。
前記目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する前記細胞が、該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞の培養物であり、
前記第１および第２の一組の条件が、該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞の該培養物に適用される成長パラメータの異なる集合を表し、
このため、該目的の非細胞表面糖タンパク質の産生に望ましい増殖パラメータが確立される、請求項１に記載の方法。
ａ）
（ｉ）細胞の第１の培養中の細胞表面に存在する第１の表面グリコシル化パターンと、
（ｉｉ）培養中の細胞表面に存在する第２の表面グリコシル化パターンと、
の間のグリコシル化パターンの相違を判断するステップと、
ｂ）こうして判断した相違に基づいて、少なくとも１つのパラメータが、培養中の細胞によって産生される該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化に対しておよぼす影響を確立するステップと、を含み、
該第１の培養と該第２の培養とは該少なくとも１つのパラメータが互いに異なる、方法。
前記相違を判断するステップが、グリコシル化部位占有の度合い、結合型グリカンのアイデンティティ、結合型グリカンの相対量、結合型グリカンの完全組成または部分組成、結合型グリカンの相対量、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される特徴の相違を判断することを含む、請求項１または請求項７に記載の方法。
判断するステップが、少なくとも１つの細胞表面グリカンを細胞から遊離させ、該遊離グリカンを分析することを含む、請求項１に記載の方法。
前記遊離させるステップが細胞をプロテアーゼに曝露することを含む、請求項９に記載の方法。
前記曝露するステップが、少なくとも１つの細胞表面糖タンパク質が遊離されるようにプロテアーゼ処理することを含み、該プロテアーゼ処理は細胞膜を実質的に破壊しないものである、請求項１０に記載の方法。
前記判断するステップが、細胞からグリカンを遊離させることを含まない、請求項１または請求項７に記載の方法。
前記遊離させるステップが、
ａ）１つ以上のタンパク質結合型細胞表面グリカンを細胞表面糖タンパク質から切断し、
ｂ）１つ以上の切断された該タンパク質結合型細胞表面グリカンを特性決定することを含む、請求項９に記載の方法。
前記タンパク質結合型細胞表面グリカンがＮ−結合型グリカンである、請求項１３に記載の方法。
前記タンパク質結合型細胞表面グリカンがＯ−結合型グリカンである、請求項１３に記載の方法。
前記タンパク質結合型細胞表面グリカンが複合型グリカンを含み、かつ少なくとも１つのシアル酸残基を含む、請求項１３に記載の方法。
前記判断した相違に関する情報または固定培地における前記グリコシル化パターンのうちの少なくとも１つに関する情報を記録するステップをさらに含む、請求項１または請求項７に記載の方法。
ａ）目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞であって、該細胞が細胞表面グリコシル化パターンを有するように該細胞表面に結合した少なくとも１つの細胞表面グリカンを有する細胞を提供するステップと、
ｂ）該細胞表面グリコシル化パターンの少なくとも１つの特徴を判断するステップと、
ｃ）こうして判断した特徴に基づいて、該目的の非細胞表面糖タンパク質の該グリコシル化パターンの１つ以上の特徴を確立するステップとを含み、該判断した特徴が該目的の非細胞表面糖タンパク質の該グリコシル化パターンの１つ以上の特徴と相関する、
細胞によって産生される該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
ａ）目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する第１の細胞の表面に結合した少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを含む第１の細胞を提供するステップと、
ｂ）該少なくとも１つの第１の細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｃ）該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する第２の細胞の表面に結合した少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを含む第２の細胞を提供するステップと、
ｄ）該少なくとも１つの第２の細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｅ）該第１の細胞表面グリカンと該第２の細胞表面グリカンとの１つ以上の相違を判断するステップと、
ｆ）該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違を確立するステップとを含み、該第１の細胞表面グリカンと該第２の細胞表面グリカンとの間の判断した相違が、該目的の非細胞表面糖タンパク質の該グリコシル化パターンにおける１つ以上の相違と相関している、該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンにおける１つ以上の相違を判断する方法。
ａ）目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する細胞の表面に結合した少なくとも１つの細胞表面グリカンを含む細胞を提供するステップと、
ｂ）該少なくとも１つの細胞表面グリカンを特性決定するステップと、
ｃ）該目的の非細胞表面糖タンパク質の該グリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断するステップと、を含み、該特性決定された少なくとも１つのグリカンが該目的の非細胞表面糖タンパク質の該グリコシル化パターンの１つ以上の特徴と相関している、該目的の非細胞表面糖タンパク質のグリコシル化パターンの１つ以上の特徴を判断する方法。
前記目的の非細胞表面糖タンパク質が、前記細胞によって天然に産生されない糖タンパク質である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
前記目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する前記細胞が、該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生するように操作されたものである、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
前記目的の非細胞表面糖タンパク質が、前記細胞によって天然に産生されるものであり、該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生する該細胞は、高いレベルで、またはあらかじめ定められた条件で該目的の非細胞表面糖タンパク質を産生するように操作されたものである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。