JP2010512147A5 - - Google Patents
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Claims (22)
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子を含む遺伝子操作酵母株であって、任意に、変異ＳＰＴ１５遺伝子の導入前または内在性ＳＰＴ１５遺伝子の変異前の、変異ＳＰＴ１５遺伝子を含まない前記酵母株は、野生型酵母株に比べて改善されたエタノール耐性および／またはグルコース耐性および／またはエタノール産生を有しており、ここで変異ＳＰＴ１５遺伝子が、野生型酵母および変異ＳＰＴ１５遺伝子を含まない酵母株と比べて、エタノール耐性および／またはグルコース耐性および／またはエタノール産生をさらに改善する、前記遺伝子操作酵母株。
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子が、２つまたは３つ以上の位置Ｆ１７７、Ｙ１９５およびＫ２１８において変異を含み、好ましくは、変異ＳＰＴ１５遺伝子が、３つの位置Ｆ１７７、Ｙ１９５およびＫ２１８の全てにおいて変異を含み、さらに好ましくは、変異ＳＰＴ１５遺伝子が、２つまたは３つ以上の変異：Ｆ１７７Ｓ、Ｙ１９５ＨおよびＫ２１８Ｒか、または変異アミノ酸の同類置換を含み、もっとも好ましくは、変異ＳＰＴ１５遺伝子が、変異：Ｆ１７７Ｓ、Ｙ１９５ＨおよびＫ２１８Ｒか、または変異アミノ酸の同類置換を含む、請求項１に記載の遺伝子操作酵母株。
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子が、組み換え的に発現される、請求項１または２に記載の遺伝子操作酵母株。
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子を、酵母細胞内にプラスミド上で導入する、または変異ＳＰＴ１５遺伝子を、酵母細胞のゲノムＤＮＡに導入する、または変異ＳＰＴ１５遺伝子が、in situで変異する酵母細胞の、ゲノムＤＮＡの内在性遺伝子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の遺伝子操作酵母株。
- 酵母株が、Saccharomyces spp.、Schizosaccharomyces spp.、Pichia spp.、Paffia spp.、Kluyveromyces spp.、Candida spp.、Talaromyces spp.、Brettanomyces spp.、Pachysolen spp.、Debaryomyces sppおよび工業用倍数体酵母株から選択される、または酵母株が、S. cerevisiae株である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子操作酵母株。
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子を含まない酵母株が、エタノール産生増強のための１または２以上の所望の表現型を有するように遺伝子操作されたか、選択されたか、またはこれを有することが知られている酵母株である、請求項１に記載の遺伝子操作酵母株。
- １または２以上の所望の表現型が、エタノール耐性、および／またはＣ５およびＣ６糖の発酵増加である、またはＣ５およびＣ６糖の発酵増加の表現型が、キシロースの発酵増加である、請求項６に記載の遺伝子操作酵母株。
- Ｃ５およびＣ６糖の発酵増加の表現型が、キシロースの発酵増加であり、遺伝子操作酵母株が、外来キシロースイソメラーゼ遺伝子、外来キシロースレダクターゼ遺伝子、および外来キシリトールデヒドロゲナーゼ遺伝子、および／または外来キシルロースキナーゼ遺伝子により形質転換されている、請求項７に記載の遺伝子操作酵母株。
- Ｃ５およびＣ６糖の発酵増加の表現型が、キシロースの発酵増加であり、遺伝子操作酵母株が、非特異的または特異的アルドースレダクターゼ遺伝子（単数または複数）の欠失、キシリトールデヒドロゲナーゼ遺伝子（単数または複数）の欠失、および／またはキシルロキナーゼの過剰発現である、さらなる遺伝的改変を含む、請求項７に記載の遺伝子操作酵母株。
- 変異ＳＰＴ１５遺伝子を含まない酵母株が、呼吸欠損酵母株である、または酵母株が、Ｓｐｔ３の正常な発現または増加発現を示す、または酵母株が、Ｓｐｔ３ノックアウトまたはヌル変異体ではない、請求項１に記載の遺伝子操作酵母株。
- 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遺伝子操作酵母株を作製するための方法であって、酵母株に、変異ＳＰＴ１５遺伝子の１または２以上のコピーを導入すること、および／または、酵母細胞のゲノムＤＮＡの内在性遺伝子をin situで変異させることを含む、前記方法。
- 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遺伝子操作酵母株を、エタノールに代謝可能な１または２以上の基質を有する培養培地中で、エタノールを含有する発酵産物を産生するのに十分な時間、培養することを含む、エタノールを産生するための方法。
- 改善されたエタノール耐性および／またはグルコース耐性および／またはエタノール産生を有する酵母株を産生するための方法であって、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の変異ＳＰＴ１５遺伝子を含む酵母株を提供すること、および
改善されたエタノール耐性および／またはグルコース耐性および／または改善されたエタノール産生のための、遺伝子操作および／または選択を行うこと、
を含む、前記方法。 - 酵母株が、Ｓｐｔ１５−３００である、請求項１３に記載の方法。
- 請求項１３または１４に記載の方法により産生される酵母株。
- 請求項１５に記載の酵母株を、エタノールに代謝可能な１または２以上の基質を有する培養培地中で、エタノールを含有する発酵産物を産生するのに十分な時間、培養することを含む、エタノールを産生するための方法。
- エタノールに代謝可能な１または２以上の基質が、Ｃ５および／またはＣ６糖類を含み、好ましくは、１または２種以上のＣ５および／またはＣ６糖類が、グルコースおよび／またはキシロースを含む、請求項１２または１６に記載の方法。
- 請求項１２、１６および１７のいずれか一項に記載の方法による、発酵産物。
- 表５に挙げた遺伝子の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、もしくは全１４種の任意の組合せ、または、１もしくは２種以上の、実質的に類似であるかもしくは重複する生物学的／生化学的活性もしくは機能を有する遺伝子を、過剰発現する、酵母株。
- 上昇レベルのエタノールを含有する培養倍地中で培養された場合に、上昇レベルのエタノールを含有する培養倍地中で培養された野生型株の少なくとも４倍の細胞密度を達成する、好ましくは、野生型株の４〜５倍の細胞密度を達成する、遺伝子操作酵母株。
- エタノールの上昇レベルが、少なくとも約５％である、好ましくは、エタノールの上昇レベルが、少なくとも約６％である、請求項２０に記載の遺伝子操作酵母株。
- 培養培地が、１または２種以上の糖類を少なくとも約２０ｇ／Ｌの濃度で含む、好ましくは、１または２種以上の糖類が、少なくとも約６０ｇ／Ｌの濃度で存在する、より好ましくは、１または２種以上の糖類が、少なくとも約１００ｇ／Ｌの濃度で存在する、最も好ましくは、１または２種以上の糖類が、少なくとも約１２０ｇ／Ｌの濃度で存在する、請求項２０または２１に記載の遺伝子操作酵母株。
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