JP2010190716A - 相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 - Google Patents
相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010190716A JP2010190716A JP2009035081A JP2009035081A JP2010190716A JP 2010190716 A JP2010190716 A JP 2010190716A JP 2009035081 A JP2009035081 A JP 2009035081A JP 2009035081 A JP2009035081 A JP 2009035081A JP 2010190716 A JP2010190716 A JP 2010190716A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- concentration
- binding
- ligand
- binding substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 58
- 238000009739 binding Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 230000003993 interaction Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 37
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 claims description 17
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 claims 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- OMOVVBIIQSXZSZ-UHFFFAOYSA-N [6-(4-acetyloxy-5,9a-dimethyl-2,7-dioxo-4,5a,6,9-tetrahydro-3h-pyrano[3,4-b]oxepin-5-yl)-5-formyloxy-3-(furan-3-yl)-3a-methyl-7-methylidene-1a,2,3,4,5,6-hexahydroindeno[1,7a-b]oxiren-4-yl] 2-hydroxy-3-methylpentanoate Chemical compound CC12C(OC(=O)C(O)C(C)CC)C(OC=O)C(C3(C)C(CC(=O)OC4(C)COC(=O)CC43)OC(C)=O)C(=C)C32OC3CC1C=1C=COC=1 OMOVVBIIQSXZSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000018459 dissociative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
【解決手段】 リガンドが固定化された支持体表面に、前記リガンドに対して相互作用可能な結合物質を含む測定溶液を接触させて、前記支持体表面の周波数、誘電率又は光の干渉の変動に基づいて、前記測定溶液中の前記結合物質の濃度を測定する過程において、前記リガンドに対する前記結合物質の相互作用パラメータを決定する方法であって、前記測定溶液を前記支持体表面に接触させる前工程又は後工程において、前記リガンドに対して相互作用可能な結合物質を含み、且つ、該結合物質の濃度が既知のキャリブレーション用溶液を前記支持体表面に接触させて、周波数、誘電率又は光の干渉の変動を測定し、前記結合物質の相互作用パラメータを決定することを特徴とする。
【選択図】 なし
Description
支持体表面に固定化した物質Bに対して、可逆的に相互作用する物質Aの結合及び解離は、下記の関係で示すことができる。尚、式中、「→」は、結合速度定数Konの結合反応を示し、「←」は、解離速度定数Koffの解離反応を示すものとする。
A+B?AB
これらの物質の相互作用に関するパラメータを得る方法としては、例えば、以下のものがある。
結合速度定数Kon及び解離速度定数Koffの場合には、複合体ABの生成量([AB])を経時的に測定し、物質Aの初期濃度[A]0と下記式(1)により求める方法がある。
[AB]=[AB]t=∞{1−exp(-t/τ)}・・・(1)
(この時、1/τ=kon[A]0+koffである。)
また、複合体ABの生成量([AB]t=∞ )を物質Aの初期濃度[A]0に対してプロットし、式(2)からKAを求めることができる。尚、本明細書中において、[]により囲まれたものは、囲まれた物質の濃度を示すものとする。
[AB]t=∞={KA[A]0[B]0}/{1+K0[A]0}・・・(2)
尚、上記式中、KA=kon/koffとする。この場合、上記の式より自明であるが、支持体表面のリガンドBの量が実験結果毎に異なると解析結果に大きく影響することになる。
結合初期速度=Kon[A][B]−Koff[AB]
≒Kon[A][B]・・・(3)
この場合も支持体表面のリガンドBの量が解析結果に大きく影響するため、測定毎にリガンドBの量を測定して値を代入しなければならない。
しかしながら、モニタリング操作自体が煩雑であり、サンプルの数が多くなるとトータルの工程数が多くなり現実的ではないという問題があった。
また、仮に、高い精度で固定化量を制御することが可能になったとしても、その後の過程で物質が解離するような場合、物質が変性し結合活性が失われた場合等は固定化時の固定化量のばらつきと同等の影響を生ずる。これらの影響は予想し難く、また、モニタリングすることも容易でないため、実際の測定において回避することは困難である。
また、請求項2に記載の本発明は、請求項1に記載の相互作用パラメータの決定方法において、前記測定溶液を前記支持体に接触させる工程に対して、前記キャリブレーション用溶液を接触させる工程を連続して行うことを特徴とする。
また、請求項3に記載の本発明は、請求項1に記載の相互作用パラメータの決定方法において、前記測定溶液を前記支持体に接触させる工程と、前記キャリブレーション用溶液を接触させる工程との間に、前記測定溶液及び前記キャリブレーション用溶液以外の他の溶液を接触させる工程を介在させることを特徴とする。
また、請求項4に記載の本発明は、請求項1乃至3の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法において、前記測定溶液及び前記キャリブレーション溶液に含まれる結合物質は同一の物質であることを特徴とする。
また、請求項5に記載の本発明は、請求項1乃至3の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法において、前記測定溶液及び前記キャリブレーション溶液に含まれる結合物質は異なる物質であることを特徴とする。
本発明の測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法は、請求項6に記載の通り、請求項1乃至5の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法により決定された相互作用パラメータに基づいて、前記測定溶液の測定の周波数変動をキャリブレーションすることを特徴とする。
水晶振動子に設けられた電極を支持体とし、電極上にリガンド分子を固定化し、それに相互作用可能な分子の結合を利用して、その分子の濃度を測定する場合を例に挙げて説明する。
リガンドBに対して相互作用する物質Aの結合の時間変化は、下記の式(4)で表される。
dAB/dt=kon[A][B]−koff[AB]・・・(4)
ここで、特に結合初期速度に関してはKoff[AB]が非常に小さく無視できるので、結合初期速度は、下記式(5)により求めることができる。
結合初期速度=Kon[A][B]・・・(5)
式(5)を利用して、試料Aの濃度[A]を算出する場合、支持体表面のリガンドBの固定化量が正確に測定乃至は把握できていないと、濃度[A]の算出に誤差が生じる。
そこで、リガンドBの相互作用パラメータKon(本実施の形態の場合は、Konであるが、Koffであってもよい。)に関して、予め判っている物質Cを支持体表面のリガンドBに結合させる。即ち、式(5)の濃度[A]を濃度[C]とすることにより、濃度[B]を予め算出する。次に、物質Aを添加し、その際の結合初期速度を下記の式(6)に代入し、濃度[A]を算出する。尚、Kon(c)は物質CのリガンドBに対する結合速度定数である。
結合初期速度=Kon[A]([B]−Kon(c)[C][B]a)+Kon(c)[C][B]・・・(6)
これにより、リガンドBの固定化量が正確に測定等できていない場合であっても、濃度[A]を正確に測定することができる。
尚、式(6)において、Kon(c)[C][B]aは、物質Cの結合によって支持体表面上のリガンドBの結合サイトが少なくなる効果を打ち消すための項である。
相互作用パラメータの測定の場合も原則的に沿うように行う。
物質Cの物質Bへの結合の解析から濃度[B]を算出し、式(2)における物質Bの溶液中の初期濃度B0を算出し、種々の濃度[A]の時の複合体ABの生成量[AB]t=∞の誤差を式(2)に従って補正することによって正確なK0が求められるようになる。
水晶板の両面に金電極を設けることにより構成された水晶振動子の前記金表面を支持体表面とし、これにリガンドとなるタンパク質を固定化した。前記水晶振動子は、緩衝溶液が収容されたセル等に浸漬されるようにするとともに、発振回路及び周波数カウンターに接続し、水晶振動子の周波数を一定時間毎に測定できるようにした。
上記構成により、当該リガンドに相互作用可能な結合物質を含む濃度を測定したい抗体溶液を添加して、リガンドへの統合過程を周波数変動から測定できるようにした。
濃度既知の溶液による、リガンドに対する周波数変動は、20ng/mLの抗体溶液に相当する傾きが0.020Hz/secとなることが分かったため、既知濃度とこれに対応する傾きとから相互作用パラメータ(R=20/0.020=100)を求めることができる。そして、符号2以降の傾き0.28Hz/secと、得られたパラメータR(100)とから、濃度を測定したい溶液の濃度は280ng/mLと算出することができる。これは、添加した濃度300ng/mLに非常に近い値となることが確認できた。
Claims (6)
- リガンドが固定化された支持体表面に、前記リガンドに対して相互作用可能な結合物質を含む測定溶液を接触させて、前記支持体表面の、前記結合物質吸着量の経時的変動に基づいて、前記測定溶液中の前記結合物質の濃度を測定する過程において、前記リガンドに対する前記結合物質の相互作用パラメータを決定する方法であって、
前記測定溶液を前記支持体表面に接触させる前工程又は後工程において、前記リガンドに対して相互作用可能な結合物質を含み、且つ、該結合物質の濃度が既知のキャリブレーション用溶液を前記支持体表面に接触させて、前記結合物質吸着量の経時的変動を測定し、前記結合物質の相互作用パラメータを決定することを特徴とする相互作用パラメータの決定方法。 - 前記測定溶液を前記支持体に接触させる工程に対して、前記キャリブレーション用溶液を接触させる工程を連続して行うことを特徴とする請求項1に記載の相互作用パラメータの決定方法。
- 前記測定溶液を前記支持体に接触させる工程と、前記キャリブレーション用溶液を接触させる工程との間に、前記測定溶液及び前記キャリブレーション用溶液以外の他の溶液を接触させる工程を介在させることを特徴とする請求項1に記載の相互作用パラメータの決定方法。
- 前記測定溶液及び前記キャリブレーション溶液に含まれる結合物質は同一の物質であることを特徴とする請求項1乃至3の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法。
- 前記測定溶液及び前記キャリブレーション溶液に含まれる結合物質は異なる物質であることを特徴とする請求項1乃至3の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法。
- 請求項1乃至5の何れか1項に記載の相互作用パラメータの決定方法により決定された相互作用パラメータに基づいて、前記測定溶液の前記結合物質吸着量の経時的変動をキャリブレーションすることを特徴とする測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009035081A JP5448492B2 (ja) | 2009-02-18 | 2009-02-18 | 相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009035081A JP5448492B2 (ja) | 2009-02-18 | 2009-02-18 | 相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010190716A true JP2010190716A (ja) | 2010-09-02 |
JP2010190716A5 JP2010190716A5 (ja) | 2011-10-06 |
JP5448492B2 JP5448492B2 (ja) | 2014-03-19 |
Family
ID=42816911
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009035081A Active JP5448492B2 (ja) | 2009-02-18 | 2009-02-18 | 相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5448492B2 (ja) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0815160A (ja) * | 1994-06-27 | 1996-01-19 | Fuji Electric Co Ltd | バイオミメティックセンサ |
JP2001264333A (ja) * | 2000-03-21 | 2001-09-26 | Natl Inst Of Advanced Industrial Science & Technology Meti | インフルエンザウイルスの型の同定・識別方法 |
JP2002310873A (ja) * | 2001-04-16 | 2002-10-23 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 水晶振動子を用いた測定試薬及び測定方法 |
JP2008122237A (ja) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | Shizuoka Prefecture | 標的物質の親和性の測定方法 |
-
2009
- 2009-02-18 JP JP2009035081A patent/JP5448492B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0815160A (ja) * | 1994-06-27 | 1996-01-19 | Fuji Electric Co Ltd | バイオミメティックセンサ |
JP2001264333A (ja) * | 2000-03-21 | 2001-09-26 | Natl Inst Of Advanced Industrial Science & Technology Meti | インフルエンザウイルスの型の同定・識別方法 |
JP2002310873A (ja) * | 2001-04-16 | 2002-10-23 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 水晶振動子を用いた測定試薬及び測定方法 |
JP2008122237A (ja) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | Shizuoka Prefecture | 標的物質の親和性の測定方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5448492B2 (ja) | 2014-03-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Di Pietrantonio et al. | A surface acoustic wave bio-electronic nose for detection of volatile odorant molecules | |
Giordano et al. | Syndiotactic polystyrene thin film as sensitive layer for an optoelectronic chemical sensing device | |
Mitsakakis et al. | Detection of multiple cardiac markers with an integrated acoustic platform for cardiovascular risk assessment | |
US20110122410A1 (en) | Optical Reflectometry Setup | |
JP5855246B2 (ja) | 校正不要分析による活性濃度の決定方法 | |
Chen et al. | Highly sensitive detection of organophosphorus pesticides by acetylcholinesterase-coated thin film bulk acoustic resonator mass-loading sensor | |
CN101398399A (zh) | 一种石英晶体谐振器及其制备和应用 | |
Wang et al. | Label-free immunosensor based on micromachined bulk acoustic resonator for the detection of trace pesticide residues | |
JP7345790B2 (ja) | センサー表面でアナライト-リガンド結合を測定するための方法 | |
JP2008122105A (ja) | 弾性波センサ及び検出方法 | |
EP2507618B1 (en) | Method and system for interaction analysis | |
Peeters et al. | Real-time monitoring of aptamer functionalization and detection of Ara H1 by electrochemical impedance spectroscopy and dissipation-mode quartz crystal microbalance | |
Chen et al. | A thin film electro-acoustic enzyme biosensor allowing the detection of trace organophosphorus pesticides | |
WO2011111785A1 (ja) | 反射光強度測定用積層構造体、反射光測定用積層構造体を含んでなる装置、並びに薄膜の膜厚及び/又は質量及び/又は粘度測定方法 | |
JP2005274164A (ja) | バイオセンサー装置 | |
Kang et al. | Response of an electrodeless quartz crystal microbalance in gaseous phase and monitoring adsorption of iodine vapor on zeolitic-imidazolate framework-8 film | |
JP5448492B2 (ja) | 相互作用パラメータの決定方法及び測定溶液中の結合物質の濃度の測定方法 | |
JP4646813B2 (ja) | バイオセンサ計測システム、粘性率測定方法、および微量質量測定方法 | |
EP2553457B1 (en) | Method for determination of binding stoichiometry | |
US6881585B1 (en) | Method and apparatus for rapid screening of volatiles | |
JP7209432B2 (ja) | 測定装置、測定方法および計算装置 | |
JP5770541B2 (ja) | 温度補正を伴うバイオセンサーによる測定方法 | |
Wei et al. | Multi-component analysis in solution using piezoelectric quartz sensors: Part I. Determination of o-cresol and m-cresol in water | |
RU2377551C2 (ru) | Способ селективного определения ацетона в воздухе | |
Loyez et al. | Insulin biotrapping using plasmofluidic optical fiber chips: A benchmark |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110818 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110818 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20120717 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120724 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130319 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130424 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131015 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131028 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131217 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131224 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5448492 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |