JP2010175264A - 角層細胞間脂質構造の評価方法及び装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は表皮の脂質構造の評価方法及び装置を提供する。本発明の評価方法は、生体組織サンプルの全透過率を得るステップを含む。本発明の評価装置は、白色光源と、生体組織サンプルの保持具と、集光器と、測光器とを含み、前記白色光源、前記生体組織サンプルの保持具、前記集光器及び前記測光器は、前記白色光源から発して、前記保持具に保持される前記生体組織サンプルを透過した光だけが前記集光器に導かれ、該集光器から導かれた光の強度が前記測光器によって計測されるように配置される。本発明の評価方法及び装置において、前記生体組織は表皮角層の場合がある。本発明の評価方法及び装置において、前記生体組織サンプルは培養下で維持された表皮組織に由来する場合がある。
【選択図】なし
Description
12穴プレートの3次元ヒト表皮培養モデル(LabCyte EPI−MODEL、株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング)を、0.1%トリプシン溶液/等張リン酸緩衝液中で37°Cで30分間インキュベーションすることにより、直径約10mmの角層シートを調製した。該角層シートを、恒温恒湿槽MTH−2200(三洋電機株式会社)を用いて、温度34°C、相対湿度60%の条件下で最長18時間乾燥させた。乾燥時間を変えることによって、4種類の異なる水分量を備えた角層シートを調製した。
図1に本発明の透明度測定装置の模式図を示す。本発明の透明度測定装置は、CIE(国際照明委員会)標準光源C規格の白色光源と、角層サンプルの保持具(図示されない)と、角層サンプルを透過しない光の遮光体としての暗幕と、角層サンプルを透過した光を均一化する積分球と、積分球から導かれた光の強度を測定する測光器(図示されない)とを含む。1−1で説明したとおり調製された角層シートを本発明の透明度測定装置に装着し、前記光源からの白色光を照射して前記角層シートを透過した光を積分球に導いて均一化された光の強度を測定した。結果は、全透過率、すなわち、前記角層シートを透過した光の強度の測定値を、角層シートを装着しないブランク状態で前記光源からの白色光を直接積分球に導いた光の強度の測定値で除算した百分率で表した。
1−1で説明したとおり調製された角層シートを8mm x 70mmのガラスに乗せた後、スピンプローブである5−ドキシルステアリン酸(5−DSA、Aldrich)を0.01%含む水溶液で37°C、1時間処理した。その後角層シートを蒸留水で洗浄して過剰なスピンプローブを除去した後、シアノアクリレート系接着剤で前記ガラス板に接着させた状態で、電子スピン共鳴(ESR)の測定を実施した。ESRの測定は、XバンドESR装置JES−RE1X(日本電子株式会社)を用いて室温で行なった。マイクロ波出力は10mW、磁場変調幅は0.2mT、時定数は1秒、掃引速度は8分であった。
図2は、水分含有量の異なる4種類の角層シートの全透過率と角層細胞間脂質秩序度との関係を示すグラフである。図2の横軸は角層全透過率(単位:%)で、縦軸は角層細胞間脂質秩序度であり、各プロットからの横軸及び縦軸方向の誤差棒の長さは、それぞれの角層シートの全透過率及び角層細胞間脂質秩序度の標準偏差を示す。図2に示すとおり、角層シートの全透過率が約68%から約88%まで増加するのに伴い、角層細胞間脂質秩序度は約0.51から約0.57まで増加し、角層シートの全透過率とS値との間には正の相関が見出された。
調製した角層シートについて、角層細胞間脂質パッキング構造の解析を行なった。X線光源としてフラックスが1秒間当たり光子数1011個で波長が1オングストロームの放射光ビームを用い、カメラ長40cmにセットした30cm x 30cmのイメージングプレートでX線散乱像を取得した。得られたX線散乱像からOhta、N.ら(Chemistry and Physics of Lipids、123:1−8、2003)に従って散乱角に対するX線散乱強度を計測し、脂質パッキング構造に対応する散乱ピーク強度を算出した。
Claims (6)
- 生体組織サンプルの全透過率を得るステップを含むことを特徴とする、生体組織の脂質構造の評価方法。
- 前記生体組織は表皮角層であることを特徴とする、請求項1に記載の評価方法。
- 前記生体組織サンプルは、培養下で維持された表皮組織に由来することを特徴とする、請求項2に記載の評価方法。
- 白色光源と、生体組織サンプルの保持具と、集光器と、測光器とを含み、前記白色光源、前記生体組織サンプルの保持具、前記集光器及び前記測光器は、前記白色光源から発して、前記保持具に保持される前記生体組織サンプルを透過した光だけが前記集光器に導かれ、該集光器から導かれた光の強度が前記測光器によって計測されるように配置されることを特徴とする、表皮の脂質構造の評価装置。
- 前記生体組織は表皮角層であることを特徴とする、請求項4に記載の評価装置。
- 前記生体組織サンプルは、培養下で維持された表皮組織に由来することを特徴とする、請求項5に記載の評価装置。
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