JP2008139280A - エバネッセント光を用いた化学物質の濃度分布測定法及び装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】エバネッセント光を発生しうる界面領域に酵素を固定しておき、前記酵素の作用下で、前記化学物質と蛍光元物質とを前記酵素の作用下で反応させさせることにより蛍光物質を生成させ、前記エバネッセント光によって励起された前記蛍光物質由来の蛍光を検出することにより、前記細胞が放出した当該化学物質の二次元的濃度分布を測定する光学装置。
【選択図】図2
Description
[実施例1]
出生直後の新生仔ラットを用意し、70%エタノールにて全身の消毒を行い、滅菌下にて断頭した。小脳を傷付けないように、延髄側より頭皮及び頭蓋骨を切り、切開した。その後、全脳を先曲ピンセットにて持ち上げ摘出し、生理食塩水内で血液等を洗浄した。この後に全脳をシャーレ上に移し、スカルペルナイフによって延髄及び大脳や間脳を切り離し、小脳を摘出した。小脳に付着したクモ膜及び血管を、先細ピンセットを用いて剥がし取り、再度生理食塩水にて洗浄した後、単離した小脳をロータリースライサーもしくはクリオスタット等にてサジタル方向に200μmにスライスした。これらのスライスの内、小脳虫部を選別し、充分な酸素供給下のPBSにおいて1時間浸し、断面表層の組織処理を行った。
成熟したラットを用意し、腹腔内注射にて麻酔薬を注入して全身麻酔をかけ、機械的反応が見られなくなった後、ハサミにて開腹し、膵臓を摘出した。この膵臓を生理食塩水にて血液及び脂肪を洗浄し、本実施形態の装置上に乗せ、余分な水分を吸い取とった後、測定装置の基板に載置した。ここで、分析試料近傍に存在するGABA(γ−アミノ酪酸)の二次元的濃度分布の測定を行うために、あらかじめ酵素であるGABase(GABA分解酵素;GABAアミノトランスフェラーゼとコハク酸セミアルデヒド脱水素酵素の混合物)と蛍光元物質であるニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)および酵素反応を促進する補助剤としてα‐ケトグルタル酸を添加した。測定装置に設けた340nm波長のLEDからUV励起光を照射し、同時に前記基板の下方から、CCDカメラを装備した倒立型蛍光顕微鏡にて観察を行った。なお、LED及び基板については、実施例1と同じものを用いた。
図5に示す装置を用いて、小脳皮質細胞からのグルタミン酸放出の空間分布を測定した。試料細胞を載置する基板である石英ガラスの表面にグルタミン酸脱水素酵素GDHを固定化し、蛍光元物質にニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを添加し、ピンホール機能を備えたCCDカメラで、エバネッセント光の作用で発生した蛍光を撮像した。結果を図9に示す。これにより、小脳皮質細胞近傍に存在するグルタミン酸の二次元的濃度分布を観察することができ、小脳皮質の神経細胞層からグルタミン酸が放出されることを実証した。
Claims (10)
- エバネッセント光を発生しうる界面領域に細胞が放出する化学物質を保持させておく手順と、酵素の作用下で前記化学物質由来の蛍光物質を生成させる手順と、前記エバネッセント光によって励起された前記蛍光物質由来の蛍光を検出する手順と、を行うことによって細胞が放出する化学物質の二次元的濃度分布を測定する方法。
- 細胞が放出する化学物質の二次元的濃度分布を測定する光学装置であって、エバネッセント光を発生しうる界面領域に酵素を固定しておき、前記酵素の作用下で前記化学物質由来の蛍光物質を生成させ、前記エバネッセント光によって励起された前記蛍光物質由来の蛍光を検出することを特徴とする光学装置。
- 前記化学物質と蛍光元物質とを前記酵素の作用下で反応させることにより前記蛍光物質を生成させることを特徴とする請求項2に記載の光学装置。
- 前記蛍光元物質は、補酵素である請求項3に記載の光学装置。
- 前記酵素は、GABase、LDH、GDHからなる群から選択されるものの一つであることを特徴とする請求項2〜4に記載の光学装置。
- 片方の面に前記酵素を固定した基板と、この基板の端面に照射された光が前記基板中を伝播するように光源となる発光体を設けたことにより、前記エバネッセント光の作用領域に酵素を固定させたことを特徴とする請求項2〜5に記載の光学装置。
- 前記酵素を固定した基板面に前記細胞を載置もしくは接触させることにより、前記酵素の作用下で前記化学物質由来の蛍光物質を生成させ、前記エバネッセント光によって励起された前記蛍光物質由来の蛍光を検出することを特徴とする請求項6に記載の光学装置。
- 前記発光体は、LED、水銀ランプ、キセノンランプ、ハロゲンランプからなる群から選択されるものの一つであることを特徴とする請求項6及び7に記載の光学装置。
- 前記細胞を載置もしくは接触させる面とは反対の面側に設置された撮像装置により前記蛍光物質由来の蛍光を検出することを特徴とする請求項6〜8に記載の光学装置。
- 前記撮像装置は、ピンホール機能を備えたCCDカメラもしくはCMOSカメラであることを特徴とする請求項9に記載の光学装置。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012053001A (ja) * | 2010-09-03 | 2012-03-15 | Seishin Shoji Kk | 測定装置および測定方法 |
JP2013040800A (ja) * | 2011-08-11 | 2013-02-28 | Toyohashi Univ Of Technology | 細胞放出物質検出装置、細胞放出物質検出方法および細胞放出物質検出用固定化酵素基板 |
WO2014109501A1 (ko) * | 2013-01-09 | 2014-07-17 | 성균관대학교산학협력단 | 내부 전반사기를 이용한 형광 검출 장치 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002523731A (ja) * | 1998-08-21 | 2002-07-30 | サーロメッド・インコーポレーテッド | マイクロ容積レーザ走査細胞測定法用の新規な光学的アーキテクチャ |
JP2004321016A (ja) * | 2003-04-22 | 2004-11-18 | Japan Science & Technology Agency | 神経組織からの放出アミノ酸二次元検出システム |
WO2006019111A1 (ja) * | 2004-08-17 | 2006-02-23 | National University Corporation Toyohashi University Of Technology | ガンマアミノ酪酸放出量の測定システムおよびそれに用いる反応促進物質 |
JP2006126715A (ja) * | 2004-11-01 | 2006-05-18 | Terumo Corp | 光導波路およびこの光導波路を用いた蛍光センサ |
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2007
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002523731A (ja) * | 1998-08-21 | 2002-07-30 | サーロメッド・インコーポレーテッド | マイクロ容積レーザ走査細胞測定法用の新規な光学的アーキテクチャ |
JP2004321016A (ja) * | 2003-04-22 | 2004-11-18 | Japan Science & Technology Agency | 神経組織からの放出アミノ酸二次元検出システム |
WO2006019111A1 (ja) * | 2004-08-17 | 2006-02-23 | National University Corporation Toyohashi University Of Technology | ガンマアミノ酪酸放出量の測定システムおよびそれに用いる反応促進物質 |
JP2006126715A (ja) * | 2004-11-01 | 2006-05-18 | Terumo Corp | 光導波路およびこの光導波路を用いた蛍光センサ |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012053001A (ja) * | 2010-09-03 | 2012-03-15 | Seishin Shoji Kk | 測定装置および測定方法 |
JP2013040800A (ja) * | 2011-08-11 | 2013-02-28 | Toyohashi Univ Of Technology | 細胞放出物質検出装置、細胞放出物質検出方法および細胞放出物質検出用固定化酵素基板 |
WO2014109501A1 (ko) * | 2013-01-09 | 2014-07-17 | 성균관대학교산학협력단 | 내부 전반사기를 이용한 형광 검출 장치 |
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