JP2010116404A - 神経細胞ニコチン性α７レセプタアゴニストとしてのベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセイン - Google Patents

Abstract

【課題】ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセイン用の組成物、およびニコチン性サブタイプ脳レセプタの欠損または機能不全に関連した疾患を治療するためにこれらの組成物を使用する方法を提供すること
【解決手段】本発明は、ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセイン用の組成物、およびニコチン性サブタイプ脳レセプタの欠損または機能不全に関連した疾患を治療するためにこれらの組成物を使用する方法に関する。これらの組成物は、α４β２または他のレセプタサブタイプの活性化が殆どまたは全くなしに、α７レセプタサブタイプを標的する。
【選択図】なし

Description

（発明の背景）
米国国立衛生研究所からの認可番号Ｐ０１ ＡＧ０１４２５、ＡＧ１０４８１およびＡＧ００１７６によって、本発明における権利は、政府が所有する。

（発明の分野）
本発明は、一般に、薬理学の分野に関する。さらに特定すると、本発明は、新規なアナバセイン関連化合物、およびニコチン性サブタイプ脳レセプタの欠損または機能不全に関連した病態を治療するために、これらの化合物を使用する方法に関する。

（関連技術の説明）
脳では、多くのニコチン性レセプタサブタイプが発見されている。ニコチンは、内生伝達アセチルコリンと同様に、これらのレセプタサブタイプの全てを明らかに活性化できる薬物である。ニコチン自体は、関与するレセプタの亜集団に依存して、ヒトにおいて、肯定的属性および否定的属性の両方を有する。脳における定量的に２種の主なレセプタサブタイプには、α７およびα４β２がある。

種々の分子研究、生化学研究および生理学研究から、脳または他の組織において、複数のニコチン性レセプタサブユニットの存在が立証された。脳内での主なニコチン性レセプタサブタイプの１つは、特に、終脳領域（例えば、海馬および新皮質）にて、α−７−サブユニットを含有する。これらのレセプタは、卵母細胞で発現するとき、ホモオリゴマーとして機能し、この場合、これらは、α−ブンガロトキシンに対する特徴的な高い親和性結合、高いカルシウム透過性、および急速な脱感作を示す。選択的なα７アゴニストの最近の研究は、これらのレセプタが、細胞内カルシウム恒常性の維持だけでなく、記憶に関連した挙動に関与していることを示唆している。

最もよく研究された選択的α７アゴニストは、ＧＴＳ−２１、すなわち、（Ｅ−３−［２，４−ジメトキシ−ベンジリデン］アナバセインであり、これはまた、ＤＭＸＢとも呼ばれる）である。ＧＴＳ−２１は、ラットおよびウサギにおいて、数個の空間的および非空間的な記憶関連パラダイムの成績を向上させる。それはまた、ＰＣ１２細胞での栄養因子欠乏に対する神経保護活性（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４）、一次神経細胞培養物でのＮＭＤＡレセプタ活性化（Ｓｈｉｍｏｈａｒａら、１９９６）、およびインビボでの海馬采横断切開を生じる。しかしながら、ＧＴＳ−２１のこれらの行動作用および神経保護作用にもかかわらず、それは、ＡＣｈ自体の活性の約２０％を有するα７レセプタでの穏やかに有効な部分的アゴニストであるにすぎない。

充分に有効で強力なα７アゴニストが記述されており、これは、３−シンナミリデン置換アナバセイン、ＤＭＡＣまたはＥ，Ｅ−３−（４−ジメチルアミノシンナミリデン）アナバセインである。この化合物はまた、齧歯類において、記憶を高める活性があるが、神経保護活性は、実証されていない。ＤＭＡＣはまた、活性化に続いてα７レセプタの長期的な阻害を誘発するという独特の特性を有する。この阻害活性の生物学的な重要性は、現在では、知られていないものの、それは、レセプタ活性化（例えば、神経保護）に依存して、この化合物の長期的な作用を妨害すると予想され得る。

ＧＴＳ−２１とＤＭＡＣの間での構造上の活性の相違に関して、後者の化合物の充分なアゴニスト有効性または明白なアンタゴニスト活性のいずれかが、どの程度まで、そのシンナミリデン−アナバセイン構造または他の置換基の相違点に由来しているかは、知られていない。

（ニコチンおよび喫煙）
ニコチンは、タバコの煙に存在している強化剤および耽溺剤の両方である。喫煙の耽溺状態では、全てのＮ−アセチルコリンレセプタサブタイプは、強化を生じるのに直接関与していないものも含めて、潜在的に、ニコチンにより活性化される。ニコチン含有ガムおよびパッチのような現在適用可能な補充療法もまた、すべてのレセプタサブタイプを活性化する。ニコチンガムおよびパッチは、禁断症状の一部をブロッキングするものの、それらはまた、強化を生じる。ニコチンガムおよびパッチにより生じる強化のレベルは、定量困難であるものの、ガムおよびパッチが、強化を生じるようにニコチンを送達するには、タバコほどには効果的ではないことを考えると、喫煙により生じる強化ほどには大きくないと思われる（ｄｅ Ｆｉｅｂｒｅら；Ｃｏｌｌｉｎｓら）。それゆえ、ガムまたはパッチの乱用は、これらの製品を喫煙中断プログラムで使用するとき、大きな問題ではないように思われる。しかしながら、ガムまたはパッチの使用に続いた喫煙回帰割合は、補充療法を与えないときと殆ど同じぐらいに高い。ガムまたはパッチは、禁断症状を弱くするものの、それらの最適以下の強化特性は、喫煙者に戻りたいという渇望を長く持続させ得、また、それらを使用した後の高い喫煙回帰割合の一因となっている。

タバコの心理学的な報酬／耽溺特性を媒介するニコチンレセプタの活性化を阻害する物質は、喫煙によりまたは粉末（「嗅剤」と呼ばれる）として経口的に投与されるが、これは、禁煙状態を達成するための最終的な療法を提供する。これは、既知のニチコンレセプタアンタゴニスト（例えば、メカミラミン、ツボクラリン）がこれらの特定のニコチンレセプタに選択的ではないので、以前には、成功しなかった。このようなアンタゴニストは、自律神経系に対して作用して、神経筋シナプスにて、種々の毒性副作用を引き起こすが、これらには、自律神経ブロッキング（低血圧を含めた種々の変化を引き起こす）および神経筋ブロッキング（呼吸抑制を引き起こす）が挙げられる。

（エタノールおよびニコチン）
喫煙および飲酒は、喫煙者がまた、通常、飲酒をし、逆もまた同様であるという点で、正の相関があることがよく実証されている。エタノールは、喫煙行動を増加し得ることが明らかになっている（ＢｕｒｔｏｎおよびＴｉｆｆａｎｙ、１９９７）。ラットにおける研究では、ニコチン投与が、エタノール消費を増加し得ることが明らかとなった（Ｂｌｏｍｑｕｉｓｔら、１９９６）。他の研究では、エタノールとニコチンとの間で交差耐性が発生すること（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９６）、およびエタノールおよびニコチンに対する感受性は、遺伝的に、相関していること（ｄｅ Ｆｉｅｂｒｅら、１９９２）が明らかになった。このことは、エタノールおよびニコチンが、１種またはそれ以上のニコチン性レセプタサブタイプにおいて、共通の作用部位を共有し得ることを示唆した。最近の研究から、明らかに、α７ニコチン性レセプタサブタイプは、エタノールにより影響を受けることが確定している（Ｙｕら、１９９６）。

脳α７レセプタの活性化は、ある種の発作（例えば、ニコチン誘発発作）（Ｍａｒｋｓら、１９８９）の伝搬に関与し得ると推測されている。

（虚血）
虚血およびそれにより生じるグルタミン酸放出は、卒中、溺水および他の脳発作における神経細胞損失の主要な原因である。グルタミン酸塩は、虚血性発作に続いた多くのアポトーシスの原因となる主要な興奮毒性として、知られている。

ニコチンレセプタは、神経筋接合部だけでなく、Ｔｏｒｐｅｄｏ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａのような種の電気器官において、よく特徴付けられており、この場合、それらは、α、β、δおよびγと呼ばれる４個のサブユニットのペンテメティック（ｐｅｎｔｅｍｅｔｉｃ）膜貫通リングを形成する（Ｄｅｎｅｒｉｓら、１９９１）。脳ニコチン性レセプタについては、それ程知られていないが、しかしながら、配位子が結合した電気生理学的な方法および分子生物学的な方法は、新規な特性および機能を有する複数のレセプタサブタイプを示している（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４；Ｗｒｉｇｈｔら、１９９３）。脳では、少なくとも６個のαサブユニット（哺乳動物では、α２〜α７、α９；ニワトリでは、α８）、３個のβサブユニット（β２〜β４）がクローン化されているが、γまたはδサブユニットは、クローン化されていない。このα７サブユニットは、外見上において機能的なホモオリゴマー性レセプタを形成するが（Ｋｏｉｋｅら、１９８９）、定量的な結合研究に基づいて、脳における支配的なニコチン性レセプタサブタイプである（Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒら、１９９０）。海馬および新皮質でのその密度は、選択的α７ニコチン性アゴニスト（例えば、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセイン（ＤＭＸＢ）（Ｐｕｇｈら、１９９４））の記憶向上作用と共に、学習および記憶におけるα７レセプタに対する重要な役割を示す。さらに、これらのレセプタは、Ｃａ²⁺に非常に浸透性であり、活性化後に、急速に脱感作する（Ａｌｋｏｎｄｏｎら、１９９４；Ｋｏｉｋｅら、１９８９）。これらのチャンネル特性は、神経細胞Ｃａ²⁺恒常性に関する修飾作用を示唆しており、このことは、シナプス形成および神経細胞生存度においてそれらの報告された関与を説明し得る。選択的なα７活性化は、インビトロにて、ＮＧＦ−欠乏に対する神経細胞、ならびにインビボでの軸索切断に続いた神経細胞変性を保護することが分かった。さらに最近では、突然変異したα７レセプタ（これは、脱感作できない）は、Ｃ． ｅｌｅｇａｎｓでの神経毒性に結びつけられている（ＴｒｅｉｎｉｎおよびＣｈａｌｆｉｅ、１９９５）。

（年齢に関連した学習および記憶の損失）
アルツハイマー病および他の神経病理学的な傷害（例えば、拳闘（ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃ）痴呆；アルコール誘発痴呆）におけるコリン作動性神経細胞の損失は、これらの疾患で認められる記憶欠損の少なくとも一部の基礎をなすと考えられている。動物モデルでのこれらのコリン作動性神経細胞の損失は、神経栄養性因子、特に、神経成長因子（「ＮＧＦ」）を用いて、防止できる。ＮＧＦは、従って、アルツハイマー病の可能な療法として、開発された。しかしながら、ＮＧＦは、血液−脳関門を通過せず、脳疾患の治療に対するその有用性は限られている。

本発明は、後述するとおりの特徴を達成することを課題とする。

本発明によれば、詳細に後述するとおりの構成を採用することにより、上記課題が解決される。

本発明によれば、後述するとおりの効果が達成される。

図１は、３−（２，４−ジメトキシベンジリデン）アナバセイン（これはまた、「ＤＭＸＢ」または「ＧＴＳ−２１」として知られている）を示しており、これは、α７選択的ニコチン性アゴニスト活性を有するベンジリデン−アナバセインのモデルである。他の３−（ベンジリデン）アナバセインは、ベンジリデン部分が異なる置換基である以外同じである。 図２は、基底核の両側に外傷を受けたラットにおける受動的回避行動に対するシンナミリデン−アナバセインの効果を示す。外傷を加えていない対照値は、２４７≠３５ Ｓｅｃ 平均±であった。（Ａ）は、３−シンナミリデンアナバセインである；（Ｂ）は、３−（メトキシシンナミリデン）アナバセインである；（Ｃ）は、３−（４−メトキシ−シンナミリデン）アナバセインである。投薬は、ｍｇ／ｋｇでのＩＰであり、ここで、 は、０であり、＃は、０．１であり、 は０．２であり、 は１．０であり、そして は、３．０ ｍｇ／ｋｇである。^*は、生理食塩水対照（１因子ＡＮＯＶＡ）と比較して、ｐ＜０．０５であることを示す。全ての値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４〜６／群）である。 図３は、脳アポトーシスに対する脳虚血（卒中）の効果、およびこのアポトーシスから保護するためのベンジリデン−アナバセインα７ニコチン性アゴニストの能力を示す。ラットに、それらの共通の頸動脈を縛ることによって、３０分間の虚血発作を与えた；アポトーシスの量（梗塞サイズに比例している）は、２４時間後に決定した。一部の動物には、結紮の１時間前にベンジリデン−アナバセイン化合物であるＤＭＸＢ（１ ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、塩重量）、または結紮の５分後にニコチン性アンタゴニストであるメカミラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、またはメカミラミンおよびＤＭＸＢの両方かまたはＤＭＸＢを与えた。結紮前に与えたＤＭＸＢ単独だけが、アポトーシスから保護した（^*生理食塩水注射対照と比較して、ｐ＜０．０５；１因子ＡＮＯＶＡ、ｎ＝４〜５／群）。 図４は、ＥＣ５０濃度のニコチンへのｎ−アセチルコリンレセプタサブタイプの応答性に対する１００ ｍＭエタノールの効果を示す。 図５は、生理食塩水の対照の注射と比較して、ＤＭＸＢ（ＧＴＳ−２１）の注射によってラットでのニコチン自己投与の阻害を示す。 （図６Ａ） 図６Ａは、培養した新皮質神経細胞でのＥＡＡ誘発細胞毒性に対するＤＭＸＢの効果を示す。処理なし。 （図６Ｂ） 図６Ｂは、図６Ａと同様であり、細胞を、１ｍＭグルタミン酸で１０分間、次いで、洗浄後グルタミン酸で１時間インキュベートした。 （図６Ｃ） 図６Ｃは、図６Ａと同様であり、細胞を、グルタミン酸処理の前に、１０μＭ ＤＭＸＢに２４時間曝露した。 （図６Ｄ） 図６Ｄは、図６Ａと同様であり、細胞を、グルタミン酸処理の前に、１０μＭ ＤＭＸＢおよび１ｎＭ α−ブンガロトキシンの同時適用に曝露した。スケールバー、５０μｍ。 ＤＭＸＢ前処理による神経毒性の阻害。ＤＭＸＢに曝露した２４時間後、１ ｍＭ ＥＡＡを１０分間または１時間添加し、続いて、それぞれ、無ＥＡＡ培地を１時間添加するかまたは添加しなかった。対照の％は、これらにＥＡＡを曝露したまたは曝露しないときの生存可能細胞の割合である。 ＤＭＸＢまたはＭＫ ８０１（各１０μＭ）を、１０分間にわたって、１ ｍＭグルタミン酸と共に、同時に適用した。^*および＃は、それぞれ、グルタミン酸またはＮＭＤＡ単独由来のｐ＜０．０５を意味する。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）を反映している。 グルタミン酸細胞毒性からのＤＭＸＢ誘発保護に対するコリン作動性アンタゴニストの効果。各アンタゴニストは、２４時間にわたって、１μＭ ＤＭＸＢまたは１０μＭニコチンを含有する培地に添加した。ＨＥＸ、１μＭヘキサメトニウム。ＭＥＣ、１μＭメカミラミン。ＭＬＡ、１０ ｎＭメチルリカコニチン。ＢＴＸ、１ｎＭ（α）−ブンガロトキシン。ＡＴＲ、１μＭアトロピン。^*および＃は、それぞれ、ＤＭＸＢまたはニコチン単独と比較して、ｐ＜０．０５を意味する（ｎ＝５）。 （図８Ａ） 図８Ａは、病巣虚血発作に続いた梗塞サイズに対するＤＭＸＢの効果を示す。前方ポールの５ｍｍ後方の冠状切片であって、この場所で、梗塞サイズが最大であった。斜線領域は、典型的な２８％梗塞（平均値）を有する染色された生理食塩水注射動物に由来する。底部：１９％梗塞（平均値）を有するＤＭＸＢ処理動物の冠状切片（同じ座標）。 図８Ｂは、病巣虚血発作に続いた梗塞サイズに対するＤＭＸＢの効果を示す。前方ポールの５ｍｍ後方での全冠状領域の一部分としての梗塞サイズ。虚血の２４時間前に、薬剤を注射した。ＭＥＣ：０．５ ｍｇ／ｋｇ ＩＰメカミラミン；ＤＭＸＢ：１ ｍｇ／ｋｇ ＩＰ。右パネル：虚血中に注射したＤＭＸＢ、^*注射した生理食塩水と比較して、ｐ＜０．０５；一元ＡＮＯＶＡ（ｎ＝６〜８）。 シンナミリジン構造とベンジリデン（ＧＴＳ−２１）との比較。 受動的回避行動におけるＤＭＸＢ誘発改善に対するメカミラミンの効果。成体ＳＤ白色種ラットを、基底核の両側に外傷を付け、そして教本で記述しているように、１ヶ月後、受動性回避行動について試験した。訓練および試験間隔に対する潜伏は、生理食塩水ビヒクル、０．５ ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢ、０．２ ｍｇ／ｋｇメカミラミン（ＭＥＣ）または両方の薬剤をＩＰ注射した１５分後に決定し、そして５匹の動物／群の平均±ＳＥＭとして、記述した。^*生理食塩水を注射した群と比較して、ｐ＜０．０５、一元ＡＮＯＶＡ。 基底核の両側に外傷を付けたラットでのＭｏｒｒｉｓ水課題における訓練に対するＤＭＸＢの効果。外傷を付けたまたは偽手術した動物を、教本で記述しているように、１ヶ月後に、訓練を開始した。外傷群および非外傷群において、毎日、最初の試行の１５分前に、生理食塩水希釈液、０．５ ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢ、０．２ ｍｇ／ｋｇメカミラミン（ＭＥＣ）、または両方の薬剤を、ＩＰ注射した。値は、その標的を見つけるのに必要な平均時間である（最大：６０秒）（Ｎ＝５）。群間比較は、表１で記述する。 基底核の両側に外傷を付けたラットでのＭｏｒｒｉｓ水課題における試行成績に対するＤＭＸＢの効果。図３で記述したように、動物に外傷を付け、訓練し、そして注射した。４日目にて、６０秒の試行間隔中にて、その標的象限で費やした時間の断片を、各群に対して決定し、そして５匹の動物／群の平均±ＳＥＭとして表わした。^*生理食塩水を注射した外傷群と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。 ラット新皮質での高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン（ＢＸＴ）結合に対するＤＭＸＢまたはニコチンの長期的注射の効果。成体オスラットに、生理食塩水ビヒクル、１ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢまたは０．２ ｍｇ／ｋｇニコチン（ＮＩＣ）（ＩＰ）を、２週間にわたって、毎日、注射した。その時点で、新皮質を除去し、その教本で記述したように、高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合についてアッセイした。各値は、４匹の動物／群の平均±ＳＥＭである；^*生理食塩水を注射した対照値と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡに対するラットα７ ＡＣｈＲの応答。このラットα７サブユニットをコードするＲＮＡで注射した卵母細胞のピークアゴニスト活性化電流に対する濃度−応答関係。全ての応答は、まず、５００μＭ ＡＣｈ（これは、薬剤適用の５分前に適用した）に対する個々の卵母細胞−応答に関連して、測定した。応答は、１の応答が完全な効率を表わすように、ＡＣｈで得ることができる最大応答に関連して、規準化した。５００μＭ ＡＣｈ対照応答のＡＣｈ最大に対する比は、Ｐａｐｋｅら、１９９７から引き出した。 ラット新皮質での高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン（ＢＸＴ）結合に対するＤＭＸＢまたはニコチンの長期的注射の効果。成体オスラットに、生理食塩水ビヒクル、１ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢまたは０．２ ｍｇ／ｋｇニコチン（ＮＩＣ）（ＩＰ）を、２週間にわたって、毎日、注射した。その時点で、新皮質を除去し、その教本で記述したように、高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合についてアッセイした。各値は、４匹の動物／群の平均±ＳＥＭである；^*生理食塩水を注射した対照値と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡに対するラットα７ ＡＣｈＲの応答。特定濃度での３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡの適用後、ラットα７注射卵母細胞の対照（５００μＭ）ＡＣｈ応答のレジデュアルインヒビション。全ての応答は、５００μＭ ＡＣｈ（これは、この実験アゴニスト適用の５分前に適用した）に対する卵母細胞応答に関連して表わされる。 ３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡに対するα４β２ ＡＣｈＲの応答。ラットα４β２サブユニットをコードするＲＮＡで注射した卵母細胞のピークアゴニスト活性化電流に対する濃度−応答関係。応答は、まず、１０μＭ ＡＣｈ（これは、薬剤適用の５分前に適用した）に対する応答に関連して表され、次いで、１の応答が全効能を表わすように、ＡＣｈで得ることができる最大応答に関連して、規準化した。１０μＭ ＡＣｈ応答と最大ＡＣｈ応答との間の比は、別個の研究で決定された。 ３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡに対するα４β２ ＡＣｈＲの応答。特定濃度での３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡの適用後、ラットα４β２注射卵母細胞の対照（１０μＭ）ＡＣｈ応答のレジデュアルインヒビション。応答は、１０μＭ ＡＣｈ（これは、実験的アゴニスト適用の５分前に適用した）に対する個々の卵母細胞応答に関連して表わされる。 ＮＧＦ欠乏下にて分化したＰＣ１２細胞における神経突起生存率に対するコリンの効果。１週間分化し、次いでＮＧＦ＋血清を欠乏させたＰＣ１２細胞を、４日間にわたって、無血清培地（１００ ｎｇ／ｍｌのＮＧＦと共にまたはそれなしで、特定コリン濃度±１０μｌメカミラミン）に曝露した。その時点で、ＰＣ１２細胞発現神経突起の画分を定量し、そして３〜４プレート／群の平均±ＳＥＭとして表わした。^*未処理細胞と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。

（発明の要旨）
本発明は、２種の化合物、すなわち、新規なシンナミリデン−アナバセインおよびベンジリデン−アナバセインに関し、これらは、α４β２または他のサブタイプの活性化が殆どまたは全くなしに、α７レセプタサブタイプを標的する。種々の動物およびヒトの研究により、これらの化合物は、これらのレセプタを標的にする療法および治療で有用であることが明らかになり、これらには、タバコ禁断に関連した副作用を少なくする方法；抗アルコール作用を有する方法；特異性の少ないレセプタアゴニストに関連した副作用を有することなく、抗卒中作用を有する方法；および年齢に関連した学習および記憶障害の影響を少なくする方法が挙げられる。

本発明は、それゆえ、α４β２または他のレセプタサブタイプの活性化が殆どまたは全くなしに、α７ニコチン性レセプタサブタイプを標的する組成物を提供することにより、脳ニコチン性レセプタサブタイプの欠損または機能不全に関連した多くの問題を扱う。

本発明の１局面は、次式の化合物またはその塩を含有する物質の新規組成物を包含する：

ここで、Ｒ¹、Ｒ⁶およびＲ⁷は、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである；そしてＲ²は、＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₄アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ（例えば、アセトキシ）、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミド（例えば、アセチルアミノ）、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される。しかしながら、Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷は、全て水素である訳ではなく、もし、Ｒ¹、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷が全て水素であるなら、Ｒ³は、４−Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノではない。

好ましい実施態様では、Ｒ²は、このテトラヒドロピリジン環の３−位に結合している。他の好ましい実施態様では、Ｒ³は、好ましくは、上記フェニル環の４−位または２−位に結合し得るが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、アセチルアミノ、アセトキシおよびニトロからなる群から選択され、ヒドロキシル、アセチルアミノ、アセトキシおよびメトキシは、特に好ましい基である。Ｒ¹およびＲ⁴が、水素であることもまた、望ましくあり得、ここで、Ｒ³は、このフェニル環の２−位に結合しており、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、アセチルアミノ、アセトキシまたはニトロ基であり、そしてＲ⁵は、このフェニル環の４−位に結合しているが、メトキシまたはヒドロキシルである。他の好ましい組成物は、Ｒ¹、Ｒ⁴およびＲ⁵が、水素であるような組成物を包含する。

本発明は、さらに、新規なシンナミリデン−アナバセインを包含する。本明細書中で使用する「シンナミリデン−アナバセイン」とは、シンナミリデン基およびアナバセイン基の両方を含有する化合物（例えば、表１、表２および表３のシンナミリデン化合物）を意味する。それゆえ、本発明により包含されるいくつかの好ましいシンナミリデン−アナバセインには、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセインおよび３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の重要な局面は、哺乳動物（好ましくはヒト）においてタバコ禁断効果を緩和または防止する方法を包含し、この方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を包含する：

ここで、Ｒ¹、Ｒ⁶およびＲ⁷は、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである；そしてＲ²は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ₃Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₄アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミド、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；しかし、ここで、この化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない。

好ましくは、Ｒ²は、このテトラヒドロピリジン環の３−位に結合しており、そしてＲ³は、好ましくは、このフェニル環の４−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、イソプロポキシおよびニトロからなる群から選択され、ヒドロキシル、イソプロポキシ、アミノ、アセチルアミノ、アセトキシおよびメトキシは、特に好ましい。他の好ましい実施態様には、Ｒ¹およびＲ⁵が共に水素であり、Ｒ³がメトキシであり、そしてＲ⁴がヒドロキシルまたはメトキシであるような化合物を使用する上記方法がある。Ｒ³およびＲ⁴が、このフェニル環の４−位または２−位のいずれかに結合していることが望しくあり得る。本発明で記述する方法で使用される好ましい化合物の他の例では、Ｒ¹は、水素であり、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、全て、メトキシであるか、またはＲ³は、４−ジメチルアミノであり、そしてＲ⁴およびＲ⁵は、共に、水素である。

それゆえ、本発明は、タバコ禁断症状を治療する方法を包含し、この方法は、それが必要な動物に、α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインまたはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量を投与する工程を包含する。

本明細書中で使用する「ベンジリデン−アナバセイン」との用語は、ベンジリデン基およびアナバセイン基の両方を含有する化合物を意味する。それゆえ、本発明の方法を実施する際に使用され得るベンジリデン−アナバセインには、３−（２，４−ジメトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、および（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））が挙げられるが、これらに限定されない。

α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインの例には、３−（２，４−ジメトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））アナバセイン、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書中で使用する「α７レセプタを選択的に活性化できる」との用語は、他のレセプタサブタイプ（例えば、α４β２レセプタ）を適切に活性化することなく、ニコチン性α７レセプタを活性化する化合物を意味する。

本発明の他の局面は、哺乳動物においてエタノールによりアンタゴナイズされる脳α７レセプタを刺激する方法を包含し、この方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を包含する：

ここで、Ｒ¹、Ｒ⁶およびＲ⁷は、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである；そしてＲ²は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ₃Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₄アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミド、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、この化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない。

本発明はまた、哺乳動物において虚血により誘発される細胞損失から保護する方法を包含し、この方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を包含する：

ここで、Ｒ¹、Ｒ⁶およびＲ⁷は、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである；そしてＲ²は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ₃Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₄アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミド、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、この化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない。この細胞損失は、卒中により、またはグルタミン酸塩誘発興奮毒性により、引き起こされ得る。それゆえ、本発明は、虚血により誘発される細胞損失から保護する方法を包含し、この方法は、それが必要な動物に、α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインまたはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量を投与する工程を包含する。

本発明はまた、病巣虚血発作に由来する細胞損失を予防する方法を包含し、この方法は、哺乳動物に、虚血の発生前に、この細胞損失から保護するのに有効な量で、一定量のα７ニコチン性アゴニストを投与する工程を包含する。好ましいα７ニコチン性アゴニストは、ベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインを包含する。

本発明のさらなる実施態様はまた、年齢に関連した学習または記憶障害を治療する方法であって、この方法は、それが必要な動物に、シンナミリデン−アナバセインの治療有効量を投与する工程を包含し、ここで、このシンナミリデン−アナバセインは、３−シンナミリデンアナバセインまたは３−（４−ジアルキルアミノシンナミリデン）アナバセインではない。

（例示の実施態様の説明）
特定の実施例で例示したベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインによって、α７（α４β２ではなく）ニコチン性レセプタを選択的に活性化することにより、α７ニコチン性レセプタに対する効果に関連した種々の状況にて、いくつかの潜在的な治療用途が開発される。それゆえ、これらのベンジリデン−およびシンナミリジン−アナバセインは、タバコ禁断およびアルコール消費に関連した症状の緩和、虚血および卒中からの保護、および年齢に関連した学習および記憶障害の治療において有用である。

ニコチン性α７レセプタの活性化は、禁断を困難にするタバコ／ニコチンの効果の１要素である。タバコ中止療法でのニコチン性レセプタサブタイプ（例えば、α７サブタイプ）の選択的な標的化は、直接の強化を生じることなく、禁断症状をブロッキングする療法を提供すると予想される。このような処置は、喫煙者に戻るという渇望を長引かし得ないので、ニコチンを含有するガムまたはパッチを用いた療法よりも効果的であることが判明している。

α７レセプタが、ラットまたは他の種において、ニコチンの渇望を誘発するという証拠はない。αブンガロトキシンは、ニコチンの強化作用をブロッキングするとは思われず、この作用は、明らかに、α７で媒介されない。従って、本発明のアナバセインは、α７レセプタを選択的に活性化するという能力のために（表１）、その耽溺挙動を強化することなく、禁断症状を少なくすると予想される。

さらに、これらの薬剤のα４β２アンタゴニスト特性は、これらのレセプタにより媒介されるいずれかの耽溺作用を妨害できるようにすると予想されている。ニコチンは、α４β２において非常に強力であり、これらのレセプタは、通常、耽溺の典型となる長期的なニコチン曝露でアップレギュレートされる（ＲｏｗｅｌｌおよびＬｉ、１９９７）。ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインは、そのニコチン自体により活性化されるニコチンレセプタの亜群を刺激するので、これらの化合物は、ニコチンにより誘発される同じパターンの耽溺特性を示すことなく、タバコ禁断に関連した副作用を防止するはずである。本明細書中で開示したアナバセインおよびシンナミリデン−アナバセインがα４β２レセプタをブロッキングする能力は、長期的な投与と共に観察されるこれらのレセプタのアップレギュレートを相殺すると予想される。α７アゴニスト活性とα４β２アンタゴニスト活性とのこの組み合わせは、潜在的に、強化作用または禁断症状を発揮することなく、患者が禁断するのを助けるための有用な性質を有する。

エタノールは、種々の脳タンパク質に対して、多くの作用を発揮するものの、ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインにより活性化された脳タンパク質（例えば、ニコチン性α７レセプタ）は、エタノールにより機能不全にされるので、それらを、アルコール誘発中毒の処置およびアルコール禁断に関連した副作用から回復するための最上部位として位置づける。アナバセイン（例えば、ＤＭＸＢ）は、それゆえ、これらのレセプタでのエタノールの阻害活性を相殺すると予想され、それにより、エタノールの中毒性を弱くする。

異なるニコチン性レセプタサブタイプのスクリーニングにより、α７ニコチン性レセプタは、エタノールによる拮抗作用に感受性であるのに対して、他のレセプタ型は、影響を受けないことが示された（図４）。α７レセプタでの活性は、従って、エタノールの中毒性に関係しており、その結果、α７レセプタの選択的な活性化は、急性アルコール中毒の効果の少なくとも一部を防止するのに有用であると予想される。ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインは、酔いを覚ます錠剤として、アルコール依存症の禁断症状に対する療法として、および可能な抗中毒薬物として、有用である。

虚血により促されるグルタミン酸放出は、卒中での神経細胞損失の主な原因である。グルタミン酸は、虚血性発作に続いたアポトーシスの多くの原因となる主な興奮毒性であることが知られている。Ｓｈｉｍｏｈａｒａら（１９９４）は、ニコチン性アゴニストが、インビトロにて、脳神経細胞でのグルタミン酸誘発毒性から保護し得ることを立証した。本発明者らは、ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセイン化合物が、脳でのグルタミン酸誘発毒性だけでなく、虚血性発作または卒中に関連したアポトーシスからも保護し得ると推論した。

アナバセイン化合物を用いた研究では、本発明者らは、このような効果が、モデルα７ニコチン性アゴニストであるプロトタイプベンジリデン−アナバセイン剤（ＤＭＸＢ）を用いて、インビボで観察されることを立証した。このデータは、ＤＭＸＢが、動物での脳虚血により引き起こされる梗塞から保護することを示している。限局的な虚血発作の１時間前に、１ ｍｇ／ｋｇのＤＭＸＢを注射した動物は、梗塞面積により測定すると、生理食塩水を注射した対照ほどには細胞損失がなかった。この作用が、このＤＭＸＢと共に注射したメカミラミンのブロッキング作用により示されるように、ニコチン性レセプタにより媒介されることを、データが示唆した（図３）。これらの研究から、ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインが、卒中および一過性虚血性発作だけでなく、グルタミン酸誘発興奮毒性に関連した他の同様の疾患で観察される損傷を予防的に防止するために、使用され得ることが示される。

３−シンナミリデン−アナバセイン化合物を合成し、以下の特性を与えるα７ニコチン性レセプタに対する選択的作用由来の脳細胞に対する活性を発揮することを見いだした：１）動物における学習および記憶に関連した行動の改善（これがないと、機能不全になる）；２）アルツハイマー病および卒中に関連したいくつかのモデルにおける脳アポトーシスに対する保護；３）ニコチン性レセプタを介して媒介されるエタノール誘発中毒を防止する能力だけでなく、エタノール禁断に関連した低い禁断症状；および４）タバコ禁断に関連した禁断症状を防止する能力。

（製薬的組成物）
本明細書中で開示した製薬的組成物は、例えば、不活性希釈剤または吸収できる食用担体と共に、経口的に投与され得るか、または軟殻または硬殻のゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤に圧縮され得るか、または常用食に直接組み込まれ得る。経口療法投与のためには、これらの活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれ、そして摂取可能な錠剤、舌下錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの形状で使用され得る。このような組成物および製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。これらの組成物および製剤の割合は、もちろん、変えられ得、好都合には、この単位の約２重量％と約６０重量％の間であり得る。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、適当な投薬量が得られるような量である。

これらの錠剤、トローチ、丸剤、カプセルなどはまた、以下を含有し得る：トラガカントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチンとしての結合剤；賦形剤（例えば、リン酸二カルシウム）；崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）；および甘味料（例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリン）または香料（例えば、ハッカ、冬緑油、またはチェリー香料）。この投薬単位形状がカプセルのとき、それは、上記種類の物質に加えて、液状担体を含有し得る。種々の他の物質は、被覆として、またはそうでなければ、この投薬単位の物理的形状を変更するために、存在し得る。例えば、錠剤、丸剤、またはカプセルは、シェラック、糖またはそれらの両方で被覆され得る。エリキシル剤のシロップは、この活性化合物、甘味料としてのスクロース、防腐剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素および香料（例えば、チェリーまたはオレンジ香料）を含有し得る。もちろん、任意の投薬単位形状を調製する際に使用される任意の物質は、薬学的に純粋であって、かつ使用する量で、実質的に非毒性であるべきである。さらに、これらの活性化合物は、徐放性製剤および処方物に組み込まれ得る。

これらの活性化合物はまた、非経口的または腹腔内的に投与され得る。遊離塩基または薬理学的に受容可能な塩としてのこれらの活性化合物の溶液は、水中にて、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロール）と適切に混合して、調製できる。分散液もまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中にて、およびオイル中にて、調製できる。通常の保存および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するために、防腐剤を含有する。

注射可能用途に適当な製薬形状には、滅菌注射可能溶液または分散液を即座に調製するための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合でも、その形状は、無菌でなければならず、また、注射可能性が容易である範囲まで、流動的でなければならない。それは、製造および保存条件下にて、安定でなければならず、また、微生物（例えば、細菌および真菌）の汚染作用を防止しなければならない。この担体は、溶媒または分散媒体であり得、これは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物、および植物油を含有する。その適当な流動性は、例えば、被覆（例えば、レシチン）の使用により、分散液の場合にて、必要な粒径の維持により、そして界面活性剤の使用により、維持できる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）により成し遂げられる。多くの場合、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むのが好ましい。これらの注射可能組成物は、吸収遅延剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中での使用により、吸収が延長できる。

滅菌注射可能溶液は、必要なら、上で列挙した種々の他の成分と共に、適当な溶媒中にて、必要な量で、これらの活性化合物を取り込むこと、続いて、フィルター滅菌することにより、調製される。一般に、分散液は、種々の滅菌した活性成分を滅菌ビヒクル（これは、基本的な分散媒体、および上で列挙したもの由来の他の必要な成分を含有する）を取り込むことにより、調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法には、真空乾燥法および凍結乾燥法があり、これらは、この活性成分＋任意の追加の所望成分（先に滅菌フィルターしたそれらの溶液に由来する）の粉末を生じる。

本明細書中で使用する「薬学的に受容可能な担体」には、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、被覆、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および試薬の使用は、当該技術分野で周知である。任意の通常の媒体または試薬がこの活性成分と非相溶性である範囲を除いて、この治療組成物中でのその使用が考慮される。この組成物には、補足的な活性成分もまた取り込まれ得る。

経口予防法のために、この活性組成物は、賦形剤が取り込まれ得、非摂取性のうがい薬および歯磨き剤の形状で、使用され得る。うがい薬は、この活性成分を、必要な量で、適当な溶媒（例えば、ホウ酸ナトリウム溶液（Ｄｏｂｅｌｌ’ｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ））中で含入させて、調製され得る。あるいは、この活性成分は、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび重炭酸カリウムを含有する防腐洗浄剤に取り込まれ得る。この活性成分はまた、以下を含めた歯磨き剤中に分散され得る：ゲル、ペースト、粉末およびスラリー。この活性成分は、歯磨き剤ペースト（これは、水、結合剤、研磨剤、香料、発泡剤、および湿潤剤を含有し得る）に、治療有効量で添加され得る。

「薬学的に受容可能な」との語句は、ヒトに投与したとき、アレルギー反応または類似の有害反応を生じない分子物および組成物を意味する。活性成分を含有する水性組成物の調製は、当該技術分野でよく理解されている。典型的には、このような組成物は、注射可能な液状溶液または懸濁液のいずれかとして、調製される；注射前に、液体中の溶液または懸濁液のために適当な固体形状もまた、調製できる。この製剤はまた、乳化され得る。

この組成物は、中性形態または塩形態で処方され得る。薬学的に受容可能な塩には、酸付加塩が挙げられるが、これらは、無機酸（例えば、塩酸またはリン酸）、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸と共に、形成される。これらの遊離カルボキシル基を用いて形成した塩はまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄）、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から誘導され得る。処方の際、溶液は、投薬処方物と適合する様式にて、治療有効量で、投与される。これらの処方物は、種々の剤形（例えば、注射可能溶液、薬剤放出カプセルなど）で、容易に投与される。

水溶液での非経口投与のためには、例えば、この溶液は適当には、もし必要なら、緩衝化すべきであり、その液状希釈剤はまず、充分な生理食塩水またはグルコースで等張性にされる。これらの特定の水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に、特に適当である。この点について、使用できる滅菌水性媒体は、本発明の開示に照らして、当業者に公知である。例えば、１投薬量は、１ ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解でき、そして１０００ ｍｌの皮下注入流体に添加できるか、または予定注入部位で注入できるか、いずれかである（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」 １５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１０３５〜１０３８頁および１５７０〜１５８０頁）。処方される被験体の状態に依存して、用量のいくつかの変化が必要となる。投与責任者は、いずれにしても、個々の被験体に適当な用量を決定する。さらに、ヒトへの投与については、製剤は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ｓｔａｎｄａｒｄｓが要求している無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の標準を満たすべきである。

以下の実施例は、本発明の好ましい実施態様を立証するために、含まれている。以下の実施例で開示された方法が、本発明を実施する際によく機能するために、本発明者らが発見した方法を代表していること、それゆえ、その実施のための好ましい様式を構成すると考えられ得ることを、当業者は理解するはずである。しかしながら、当業者は、本発明の開示に照らして、開示された特定の実施態様において、多くの変更を行うことができ、依然として、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、同じまたは類似の結果を得られることを、理解するはずである。

（実施例）
（実施例１−−ベンジリデン−アナバセインのレセプター結合特性）
ベンジリデン−アナバセイン化合物（図１を参照）は、ニコチン染料よりも高い親和性で（表１）、ラット脳膜から高親和性α−ブンガロトキシン結合を追い出した。ベンジリデン−アナバセインがα７レセプター（α４β２レセプターではなく）でのアゴニストとして作用する性能もまた、卵母細胞で立証した。各ベンジリデン−アナバセインは、内因性伝達物質アセチルコリンと比較して、α７レセプターを活性化した（表１）。対照的に、これらの試薬のいずれも、α４β２レセプターの有意な活性を誘発しなかった（表１）。これらの試薬はまた、このα７レセプターおよびα４β２レセプターをアンタゴナイズし、前者の観察は、レセプター活性化後に、起こった。このα４β２レセプターのブロッキングは、このα７活性化よりも高い濃度で認められたものの、同様に、治療活性に対して重要であり得る。

（実施例２−−３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン二塩酸塩（「ＧＴＳ−８５」）の調製）
４−イソプロポキシベンズアルデヒド（１９７ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、アナバセイン（２３３ ｍｇ、１ ｍｍｏｌ）、濃ＨＣｌ（４滴）および無水エタノール２５ ｍｌの混合物を、６時間還流した。黄色の沈殿物を、酢酸エチル４０ｍｌを添加することで得た。その生成物を酢酸エチルで洗浄して、未反応４−イソプロポキシベンズアルデヒドを除去した。熱エタノール−酢酸エチルからの再結晶により、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン二塩酸塩（３１０ ｍｇ、収率６８％）を得た。

（実施例３−−アナバセインの新規シンナミリデン誘導体の調製）
（トランス−４−アセトキシシンナムアルデヒドとアナバセインジヒドロブロミドとの縮合によるトランス−３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインジヒドロブロミドの調製）
（トランス−４−アセトキシケイ皮酸）
乾燥ピリジン１０ ｍＬおよび無水酢酸５ ｍｌ（５３ ｍｍｏｌ）中の４−ヒドロキシケイ皮酸３．２８ｇ（２０ ｍｍｏｌ）の混合物を、還流状態で、２０分間加熱した。その黄色の溶液を氷／２Ｎ ＨＣｌ（５０／５０）へと注ぎ、そして１０分間攪拌した。得られた固形物を濾過し、水で洗浄し、そして空気中で乾燥した。その粗製物質をアセトンから再結晶して、２１０℃の融点を有する白色固形物２．１４ｇ（１０．４ ｍｍｏｌ、５１％）を得た。

（トランス−４−アセトキシケイ皮酸クロリド）
ベンゼン４０ ｍＬおよび塩化チオニル２．００ｇ（１６．８ ｍｍｏｌ）に懸濁した４−アセトキシケイ皮酸（２．００ｇ、１０．５ ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０滴を添加した。この懸濁液を、還流状態で、２時間加熱した後、その黄色の溶液を、減圧下にて濃縮し、そして得られた緑がかった固形物をベンゼンに吸収させた。この溶液を濾過して、不溶物質を除去した。溶媒を除去して真空中で乾燥することにより、灰白色の酸クロリド２．００ｇ（８．８９ ｍｍｏｌ、８５％）を得、これを、さらに精製することなく、次の工程で使用した。

（トランス−４−アセトキシシンナムアルデヒド）
−６５℃の乾燥ＴＨＦ（２０ ｍＬ）中の４−アセトキシケイ皮酸クロリド２．００ｇ（９．６２ ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、１５分間にわたって、トリ−ｔ−ブトキシアルミノ水素化リチウム（ＴＨＦ中で１Ｎ）１０ ｍＬを添加した。この添加を完了した後、その非相同反応混合物を、この温度で、１時間攪拌した。次いで、その冷却浴を取り除き、この反応混合物を室温まで暖めて、透明で黄色の溶液を得た。この反応は、１Ｎ ＨＣｌ（５０ ｍＬ）およびエーテル６０ ｍＬを添加することにより、クエンチした。その有機層を分離し、その水相をエーテル（３０ ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（５０ ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（５０ ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。この溶媒を除去して、緑がかったオイル１．４３ｇを得、これを、ヘキサン／酢酸エチル（７０／３０）を用いたシリカのクロマトグラフィーにより精製して、７７〜８０℃の融点を有する灰白色の４−アセトキシシンナムアルデヒド９１０ ｍｇ（４．７９ ｍｍｏｌ、５０％）を得た。この化合物は、このカラムに適用する前に、ジクロロメタンに溶解した。また、黄色がかった副生成物４６０ ｍｇも回収し、これは、¹Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）により、対応するアルコールとして同定した。

（トランス−４−アセトキシシンナムアルデヒドとアナバセインとの縮合） アナバセインジヒドロブロミド一水和物（１００ ｍｇ、０．２９４ ｍｍｏｌ）および４−アセトキシシンナムアルデヒド２００ ｍｇ（１．０５ ｍｍｏｌ）を、無水酢酸５滴を含有する酢酸５ ｍＬに溶解した。この混合物を、密封管にて、２４時間にわたって、７０℃まで加熱し、得られた黄色の固形物を濾過により単離し、エーテルで洗浄し、そして１００℃で真空中にて乾燥した。¹Ｈ ＮＭＲにより、少量のアルデヒドの存在が明らかとなった；従って、この物質を、無水酢酸数滴を含有する酢酸中にて、還流状態で、加熱した。１００℃で真空中にて乾燥して、＞２２０℃の融点を有する橙色の固形物８６ ｍｇ（０．１７ ｍｍｏｌ、５９％）を得た。

（実施例４−−トランス−４−ヒドロキシ−シンナムアルデヒドとアナバセインとの縮合によるトランス−３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセインジヒドロブロミド一水和物の調製）
（トランス−４−ヒドロキシシンナムアルデヒド）
クロロホルム２５ ｍＬ中のトランス−４−アセトキシシンナムアルデヒド（１．１０ｇ、５．７８ ｍｍｏｌ）の氷水冷却溶液に、メタノール５ ｍＬに溶解した金属ナトリウム２５０ ｍｇを添加した。その黄色混合物を、室温で、３０分間放置させた。この反応混合物に、１Ｎ Ｈ₂ＳＯ₄（５０ ｍＬ）を添加し、その有機層を分離した。その水相をクロロホルムで抽出し（５×３０ ｍＬ）、合わせた有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥した。次いで、この溶媒を除去し、その緑がかった固形物を酢酸エチル（４０ ｍＬ）に溶解し、シリカ５ｇと混合し、そして乾燥状態までエバポレートした。吸着した物質を、次いで、溶媒に溶解し、酢酸エチル：ヘキサン（３：７）の混合物で予め調整したシリカカラムに適用し、そして酢酸エチルおよびヘキサンの混合物で溶出して（３０％から５０％まで酢酸エチルを増加させて）、１３５〜１３７℃の融点を有する僅かに黄色の固形物７１０ ｍｇ（４．８０ ｍｍｏｌ、８２％）を得た。

（トランス−４−ヒドロキシシンナムアルデヒドとアナバセインとの縮合）
酢酸５ ｍＬに溶解したアナバセインジヒドロブロミド一水和物（１００ ｍｇ、０．２９４ ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシシンナムアルデヒド１００ ｍｇ（０．６５ ｍｍｏｌ）を、密封管にて、２４時間にわたって、７０℃まで加熱した。この暗赤色の結晶から、パスツールピペットを用いて、この液体を除去した後、酢酸３ ｍＬを添加し、この溶液を超音波で処理した。この固形物を濾過し、エーテルで洗浄し、そして１００℃で真空中にて乾燥して、＞２２０℃の融点を有する暗赤色の結晶性固形物１３２ ｍｇ（０．２８０ ｍｍｏｌ、９６％）を得た。

（実施例５−−トランス−４−アセチルアミノシンナムアルデヒドとアナバセインジヒドロブロミドとの縮合によるトランス−３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセインの調製）
（トランス−４−アセチルアミノシンナムアルデヒド）
エタノール４０ ｍＬ中のアセトアルデヒド０．８ ｍＬ（０．６３ｇ、１４ ｍｍｏｌ）の溶液を、２５分間にわたって、エタノール性ＫＯＨ（２％）６０ ｍＬ中の４−アセチルアミノベンズアルデヒド２．０ｇ（１２ ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に滴下した。この温度で、３時間にわたって、攪拌を継続した。次いで、この混合物を濃ＨＣｌで中和し、その溶媒を減圧下にてエバポレートした。その残渣を、１：１酢酸エチル：ヘキサンの溶離溶媒を用いて、シリカ上クロマトグラフィーにより精製した。回収した物質をトルエンから再結晶して、１６７〜１７３℃の融点範囲の黄色の固形物３２５ ｍｇ（１．７２ ｍｍｏｌ、１２％）を得た。その¹Ｈ ＮＭＲスペクトルにより、不純物（１５％）（これは、おそらく、対応するシス−異性体である）の存在が明らかとなった。

（トランス−４−アセチルアミノシンナムアルデヒドとアナバセインとの縮合）
無水酢酸５滴を含有する酢酸５ ｍＬに溶解したアナバセインジヒドロブロミド一水和物（１００ ｍｇ、０．２９４ ｍｍｏｌ）および４−アセチルアミノシンナムアルデヒド１００ ｍｇ（０．５３ ｍｍｏｌ）を、密封管にて、２４時間にわたって、７０℃まで加熱した。この黒色反応混合物を、エーテル２０ ｍＬで希釈した。その沈殿物を遠心分離により単離し、そして酢酸（５ ｍＬ）およびエーテル（３×１０ ｍＬ）で洗浄した。この赤色がかった固形物を、Ｈ₂Ｏ（３０ ｍＬ）に溶解し、１０％のＮａ₂ＣＯ₃水２０ ｍＬを用いて塩基性にし、そしてジクロロメタン（４×２５ ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ₂ＣＯ₃で乾燥し、その溶媒を、真空中にて除去した。この黄色のオイル（約１５０ ｍｇ）を、新たに蒸留したアセトンを用いて、活性ＩＩアルミナのクロマトグラフィーにより精製した。活性ＩＩアルミナは、２０ｇの塩基性アルミナ（活性１）から、それをＨ₂Ｏ（０．８ ｍＬ）で処理することにより、製造した；この懸濁液を１０分間振とうし、そして使用前に、閉じた容器内にて、３０分間放置した。これらの黄色の画分をプールし、そして真空中にて濃縮して、黄橙色のオイルを得、これは、エーテル中で攪拌すると、結晶化した。この塩基を濾過により単離し、そして真空中にて、１００℃で乾燥して、１９９〜２０２の未補正融点を有する橙色の固形物６６ ｍｇ（０．２０ ｍｍｏｌ、６７％）を得た。

（実施例６−−トランス−３−（シンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩の調製）
アナバセイン二塩酸塩（１８０ ｍｇ、０．７７０ ｍｍｏｌ）、トランス−シンナムアルデヒド（０．２５ ｍＬ、１．９ ｍｍｏｌ）およびエタノール（２０ ｍＬ）の溶液に、濃ＨＣｌ水（８滴）を添加した。この溶液を、還流状態で、４時間加熱した。この反応混合物を０℃まで冷却し、次いで、それ以上の沈殿物が見えなくなるまで、ジエチルエーテルを滴下した（約１０〜２０ ｍＬ）。この生成物を濾過により除去して、乾燥後、黄色の微粉末２００ ｍｇを得、これを、温イソプロピルアルコールに溶解してエーテルで沈殿させることにより、再結晶した。その結果、黄色の固形物１８０ ｍｇ（融点２１０〜２１３℃、分解した、収率６８％）を得た。

（実施例７−−トランス−３−（２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩の調製）
アナバセイン二塩酸塩（２００ ｍｇ、０．８６ ｍｍｏｌ）、トランス−２−メトキシシンナムアルデヒド（３４８ ｍｇ、２．１０ ｍｍｏｌ）およびエタノール２０ ｍＬの溶液に、濃ＨＣｌ（８滴）を添加した。この溶液を、攪拌しながら、還流状態で、４時間加熱した。次いで、この反応混合物を０℃まで冷却し、その生成物をジエチルエーテル（約１０〜２０ ｍＬ）で沈殿させた。この生成物を、濾過により回収して、黄色の固形物２２０ ｍｇを得た。この固形物を、温イソプロピルアルコールに溶解してジエチルエーテルで沈殿させることにより、再結晶して、橙色の固形物２００ ｍｇ（融点２１２〜２１３℃、分解した、収率６２％）を得た。その一部は、飽和ＮａＨＣＯ₃水を使用して、この生成物を酢酸エチルへと抽出することにより、遊離塩基に転化した；次いで、黄色の固形物を回収した。

（実施例８−−トランス−３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩の調製）
アナバセイン二塩酸塩（４００ ｍｇ、１．７０ ｍｍｏｌ）およびトランス−４−メトキシシンナムアルデヒド（６９６ ｍｇ、４．３０ ｍｍｏｌ）のエタノール２０ ｍＬ溶液に、濃ＨＣｌ（１６滴）を添加した。この溶液を、攪拌しながら、還流状態で、４時間加熱した。この反応混合物を０℃まで冷却し、その生成物をジエチルエーテル（約２０〜４０ ｍＬ）で沈殿させた。この生成物を、濾過により回収して、黄色の固形物４１０ ｍｇを得た。この固形物を、温イソプロピルアルコールに溶解してジエチルエーテルで沈殿させることにより、再結晶して、橙色の固形物３５０ ｍｇ（融点２１７〜２１９℃、分解した、収率５４％）を得た。

（実施例９−−トランス−３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩（「ＧＴＳ−８６」）の調製）
４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナムアルデヒド（１７８ ｍｇ、０．９３ ｍｍｏｌ）、アナバセイン（１５０ ｍｇ、０．６３ ｍｍｏｌ）、濃ＨＣｌ（１２滴）および無水エタノール３０ ｍＬの混合物を、４時間還流した。酢酸エチル５０ ｍＬを添加して、黄色の沈殿を得た。この生成物を酢酸エチルで洗浄して、未反応４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナムアルデヒドを除去した。熱エタノール−エーテルからの再結晶により、トランス−３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩（２０５ ｍｇ、８３％）を得た。

（実施例１０−−トランス−３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩（「ＧＴＳ−８７」）の調製）
（アセトアルデヒドＮ−ｔｅｒｔ−ブチルイミン）
アセトアルデヒド（８．８ｇ、０．２ Ｍ）を、１時間にわたって攪拌しつつ、０℃で、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１４．６ｇ、０．２ Ｍ）に滴下した。この反応混合物に、無水炭酸カリウム（３．０ｇ）を添加し、そして６時間攪拌し、次いで、酸化バリウム（２．４ｇ）へとデカントした。この混合物を５時間攪拌した後、濾過し、その有機濾液を蒸留して、減圧にて、無色の液体として、このイミンを分離した（収率８０％）。

（２，４−ジメトキシシンナムアルデヒド）
テトラヒドロフラン８ ｍＬ中のリチウムジイソプロピルアミドの冷却溶液（−７８℃）に、アセトアルデヒドＮ−ｔｅｒｔ−ブチルイミン（０．４ ｍＬ、３．０ ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を３０分間攪拌した。ジエチルクロロホスフェート（５１８ ｍｇ、３．０ ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を−７８℃で２時間攪拌し、３時間にわたって、−１０℃まで暖めて、−７８℃まで再冷却した。この黄色の溶液に、２，４−ジメトシキベンズアルデヒド（２３２ ｍｇ、２．０ ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を３０分間攪拌し、そして一晩で室温まで暖めた。次いで、この混合物をシュウ酸（水２０ ｍＬ中の６ ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、ベンゼン２０ ｍＬを添加した。この２相系を室温で一晩攪拌し、層分離した。その水層をエーテルで抽出し、その有機層を合わせて、５％シュウ酸、１５％重炭酸ナトリウム、およびブラインで連続的に洗浄した。この有機相の乾燥（炭酸カリウム）および濃縮に続いて、その残渣の精製（蒸留または分離用ＴＬＣ、シリカゲル、３０酢酸エチル−ヘキサン）により、２，４−ジメトキシシンナムアルデヒド２６１ ｍｇ（収率６８％）を得た。

（トランス−３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩（「ＧＴＳ−８７」））
２，４−ジメトキシシンナムアルデヒド（２３０ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、アナバセイン（２３３ ｍｇ、１ ｍｍｏｌ）、濃ＨＣｌ（４滴）および無水エタノール５ ｍＬの混合物を、６時間還流した。酢酸エチル５０ ｍＬを添加して、黄色の沈殿物を得た。この生成物を酢酸エチルで洗浄して、未反応２，４−ジメトキシシンナムアルデヒドを除去した。熱エタノール−エーテルからの再結晶により、トランス−３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩（３１７ ｍｇ、収率７８％）を得た。

（実施例１１−−シンナミリデン−アナバセインのレセプター特性および治療活性）
シンナミリデン−アナバセイン化合物は、ベンジリデン−アナバセインを用いた研究で予測されたよりも高い親和性で、ラット脳膜から、高親和性α−ブンガロトキシン結合を追い出すことが分かった（表２）。さらに、このシンナミリデン−アナバセインは、他の型のベンジリデン−アナバセインよりも低い親和性で、ラット脳膜から、高親和性シチシン結合を追い出した。これらの観察は、α−ブンガロトキシンおよびシチシンが脳内で結合する型のレセプターに基づいて、他の型のニコチン性レセプター（特に、α４β２レセプター）よりもα７レセプターサブタイプに対してある程度の選択性を有するこのシンナミリデン−アナバセインと一致していた。

シンナミリデン−アナバセインがα７レセプター（α４β２レセプターではなく）にてアゴニストとして作用する性能は、ゼノプス卵母細胞にて、立証した。研究した各シンナミリデン−アナバセインは、内因性伝達物質アセチルコリンと比較して、α７レセプターの有意または完全活性化を誘発した（表２）。対照的に、これらの試薬のいずれも、α４β２レセプターの有意な活性を誘発しなかった（表２）。これらの試薬はまた、このα７レセプターおよびα４β２レセプターをアンタゴナイズし、前者の観察は、レセプター活性化後に、起こった。このα４β２レセプターのブロッキングは、このα７活性化よりも高い濃度で認められたものの、同様に、下記のように、治療活性に対して重要であり得る。さらに、このシンナミリデン−アナバセインは、α７レセプターにおいて、完全なアゴニスト効能および高いアゴニスト効力を有するとして知られる第一級の化合物であり、部分アゴニストでは認められない程度の潜在的な治療上の利点を与える。

Ｅ，Ｅ−３−（シンナミリデン）アナバセイン（３−ＣＡ）、Ｅ，Ｅ−３−（２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン（２−ＭｅＯＣＡ）、およびＥ，Ｅ−３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン（４−ＭｅＯＣＡ）は、ラット脳膜から［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合を追い出し、そして卵母細胞発現系にて、完全に効果的に、ラットα７レセプターを活性化した。結合およびレセプター活性化に関する効力系列は、それぞれ、２−ＭｅＯＣＡ＞４−ＭｅＯＣＡ＝３−ＣＡおよび２−ＭｅＯＣＡ＝３−ＣＡ＞４−ＭｅＯＣＡであった。卵母細胞発現α４β２レセプターを活性化した化合物はなかった。各シンナミリデン−アナバセインは、５分後のＡＣｈ適用により測定したように、α７レセプターの長期的な阻害を引き起こしたが、この阻害は、同じ１０μＭ濃度では、２０％以下（３−ＣＡ）から９０％（２−ＭｅＯＣＡ）まで、かなり変動した。これらの化合物は、基底核を破壊したラットでの受動的回避行動を改善し、２−ＭｅＯＣＡは、この点で、最も有効であった。対照的に、３−ＣＡのみが、分化したＰＣ１２細胞でのＮＧＦ−欠乏中の神経突起損失に対する神経保護性であった。コリンは、アンタゴニスト活性なしで有効なα７アゴニストであるが、また、このモデルでは保護性であった。これらの結果は、α７レセプターアゴニストの神経突起保護作用が、急性の行動作用よりも、潜在的な長期アンタゴニスト特性に対して感受性が高くあり得ることを示唆している。

これらの薬剤のα７選択作用は、以下を含めた種々の治療値の活性を与えると予想されている：１）アルツハイマー病に関連した記憶機能不全、および学習および記憶の欠損に関連した他の障害；２）卒中、虚血、またはアルツハイマー病に関連した脳細胞の損失；３）アルコール禁断および中毒の処置；および４）タバコ禁断。これらの各適応症に対してα７レセプターアゴニストを使用することの支持は、以下の研究において、示される。

２−位または４−位にて置換基またはメトキシ基のいずれかを有しない３−シンナミリデンアナバセイン構造を備えたＤＭＡＣの数個のアナログを合成した。これらを、ラット脳組織でのα７レセプター結合、卵母細胞発現系でのα７レセプター活性（アゴニストおよびアンタゴニスト）、基底核を破壊したラットでの受動的回避行動の改善、およびＮＧＦが欠乏した分化ＰＣ１２細胞での神経突起保護に関連して、特徴付けた。コリンもまた、アンタゴニスト的活性を有しない原型α７選択的アゴニストとして、その神経保護活性に関して、研究した。

（シンナミリデンの合成）
（Ｅ，Ｅ−３−（シンナミリデン）アナバセインの調製）
全ての化学物質は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｉｎｃ．から購入した。シンナミリデン−アナバセインを合成し、そして以下のようにして、特徴付けた：Ｅ，Ｅ−３−（シンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩：アナバセイン二塩酸塩１（１８０ ｍｇ、０．７７２ ｍｍｏｌｅｓ）、トランス−シンナムアルデヒド（０．２５ ｍＬ、１．９ ｍｍｏｌ）およびエタノール（２０ ｍＬ）の溶液に、濃ＨＣｌ水（８滴）を添加した。この溶液を、還流状態で、４時間加熱した。この反応混合物を０℃まで冷却し、次いで、それ以上の沈殿物が見えなくなるまで、ジエチルエーテルを滴下した（約１０〜２０ ｍＬ）。この生成物を濾過して、乾燥後、黄色の微粉末２００ ｍｇを得、これを、温イソプロピルアルコールに溶解してエーテルで沈殿させることにより、再結晶した。その結果、黄色の固形物１８０ ｍｇ（０．５１９ｍｍｏｌ）（融点２１０〜２１３℃、分解した、収率６７％）を得た。

（Ｅ，Ｅ−３−（２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩）
アナバセイン二塩酸塩（２００ ｍｇ、０．８５８ ｍｍｏｌ）、トランス２−メトキシシンナムアルデヒド（３４８ ｍｇ、２．１０ ｍｍｏｌ）およびエタノール２０ ｍＬの溶液に、濃ＨＣｌ（８滴）を添加した。この溶液を、攪拌しながら、還流状態で、４時間加熱した。この反応混合物を０℃まで冷却し、その生成物をジエチルエーテル（約１０〜２０ ｍＬ）で沈殿させた。この生成物を、濾過により回収して、黄色の固形物２２０ ｍｇを得た。この固形物を、温イソプロピルアルコールに溶解してジエチルエーテルで沈殿させることにより、再結晶して、橙色の固形物２００ ｍｇ（０．５０６ ｍｍｏｌ）（融点２１２〜２１３℃、分解した、収率５９％）を得た。その一部は、飽和ＮａＨＣＯ₃水を使用してこの生成物を酢酸エチルへと抽出することにより、遊離塩基に転化した；次いで、黄色の固形物を回収した。

（Ｅ，Ｅ−３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン二塩酸塩）
アナバセイン二塩酸塩（４００ ｍｇ、１．７２ ｍｍｏｌ）、トランス−４−メトキシシンナムアルデヒド（６９６ ｍｇ、４．３０ ｍｍｏｌ）およびエタノール（２０ ｍＬ）の溶液に、濃ＨＣｌ（１６滴）を添加した。この溶液を、攪拌しながら、還流状態で、４時間加熱した。この反応混合物を０℃まで冷却し、その生成物をジエチルエーテル（約２０〜４０ ｍＬ）で沈殿させた。この生成物を、濾過により回収して、黄色の固形物４１０ ｍｇを得た。この固形物を、温イソプロピルアルコールに溶解してジエチルエーテルで沈殿させることにより、再結晶して、橙色の固形物３５０ ｍｇ（０．９２８ ｍｍｏｌ）（融点２１７〜２１９℃、分解した、収率５４％）を得た。

（動物）
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ白色種ラット（２５０〜３５０ｇ）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｏｓｔｏｎ， ＭＡ）から購入し、そして１２時間：１２時間の昼：夜のサイクルで、ＮＩＨガイドラインに従って、ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃｅｎｔｅｒ Ｖｉｖａｒｉｕｍで維持した。これらは、食餌（Ｐｕｒｉｎａラット飼料）および水を、自由に摂取させた。雌性Ｘｅｎｏｐｕｓは、卵母細胞生存率における季節的な変動性を有する可能性のある問題を減少するために、正確に１８℃で維持した水槽タンクに、収容した。カエルには、カエル豆板（ｂｒｉｔｔｌｅ）（Ｎａｓｃｏ）を給餌し、そして１２時間の昼：夜サイクルで保った。

（卵母細胞の記録）
卵母細胞を調製し、以前に記述されているように、記録を行った（ｄｅ Ｆｉｅｂｒｅら、１９９５）。カエルには、０．１％ （３）−アミノ安息香酸エチルエステルでの浸水により麻酔をかけ、腹壁での小切開により、数葉の卵巣を外科的に除去した。室温で２時間にわたってコラーゲナーゼ（カルシウムなしのＢａｒｔｈ溶液：８８ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＫＣｌ、１５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ ７．６、０．３３ｍＭ ＭｇＳＯ₄、０．１ｍｇ／ｍｌ硫酸ゲンタマイシン）で処理することにより、小胞細胞から卵母細胞をはずし、そして第５ステージの卵母細胞を単離した。卵母細胞をリンスし、そしてＲＮＡの微量注入の前および後に、Ｂａｒｔｈ生理食塩水（８８ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＫＣｌ、１５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ ７．６）、０．３ｍＭ Ｃａ（ＮＯ₃）₂、０．４１ｍＭ ＣａＣｌ₂、０．８２ｍＭ ＭｇＳＯ₄、０．１ｍｇ／ｍｌ硫酸ゲンタマイシン）中にて、１８℃で保存した。微量注入は、Ｄｒｕｍｍｏｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃの「Ｎａｎｏｊｅｃｔ Ｖａｒｉａｂｌｅ」自動注射器で行った。卵母細胞には、特定のラットニコチン性サブユニットｍＲＮＡ種（２〜１０ｍｇ／ｍｌ；ｃＤＮＡ含有ＨＩＰ３０６プラスミド（これは、親切にも、Ｄｒ．Ｊｉｍ Ｂｏｕｌｔｅｒ， Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから提供された）由来の５０ｎｌ溶液を共に注入し、そして電気生理学的な記録の前に、１８℃で、２〜７日間インキュベートした。

電気生理学的な記録用に、卵母細胞は、ムスカリン様応答をブロッキングするために、灌流液（これは、１１５ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ ７．２）、１，８ｍＭ ＣａＣｌ₂および１μＭアトロピンを含有する）と共に、Ｗａｒｎｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＲＣ−８記録チャンバで灌流した。灌流は、１０ｍｌ／分の速度で継続した。薬剤は灌流液で希釈し、そして灌流から薬剤溶液へと切り換える電磁弁を用いて適用した。薬物投与に対する電流応答は、３８６−ＳＸ ＩＢＭコンピューター（これは、ＴＬ−１ ＤＮＡインターフェイス（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用する）に接続したＤａｇａｎ Ｃｏｒｐ．のＴＥＶ−２００電位クランプを用いて、−７０ｍＶの保持電位差で、２個の電極の電位クランプにて、研究した。マイクロピペットを３Ｍ ＫＣｌで満たすと、０．５〜２ ＭＯｈｍｓの抵抗を有していた。薬物応答はＰＣｌａｍｐソフトウェア（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で分析した。−３０ｍＶ未満の静止電位を揺する卵母細胞は無視した。

（高親和性［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合）
ラットを断頭し、そして大脳皮質を除去して、１０容量の氷冷Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＨ）緩衝液（ＮａＣｌ、１１８ ｍＭ；ＫＣｌ、４．８ｍＭ；ＭｇＳＯ４、１．２ｍＭ；ＣａＣｌ₂、２．５ ｍＭ；およびＨｅｐｅｓ，２０ｍＭ；ｐＨは、ＮａＯＨで、７．５に調整した）中でホモジナイズし、次いで、高親和性［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合について、アッセイした。アトロピン（１μＭ）およびフィゾスチグミン（ｐｈｙｓｏｓｔｉｇｒｎｉｎｅ）（１０μＭ）を添加して、それぞれ、ムスカリン様レセプタ結合およびＡＣｈ−加水分解を防止した。ＫＲＨ緩衝液中にて、４℃で、結合アッセイを行った。この最終インキュベーションには、０．５ｎＭ［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシンを有する５００〜８００μｇタンパク質／２５０μｌを含有していた。結合を３ｍｌの氷冷ＫＲＨ緩衝液で希釈した直後に、０．５％ポリエチレンイミンを含有する緩衝液中に浸したガラス繊維フィルターを通して濾過することにより、終止させた。これらのフィルターを、氷冷緩衝液の３ｍｌアリコートで４回洗浄した。非特異的な結合は、１００μＭの非標識ニコチンを用いて決定した。

（神経保護アッセイ）
ＰＣ１２細胞培養方法は、ＧｒｅｅｎｅおよびＴｉｓｃｈｌｅｒ（１９７６）から改良した。細胞を、３０〜４０％のコンフルーエンスに配置し、そしてダルベッコ改変修正イーグル培地（これは、１０％熱非働化ウマ血清、５％ウシ胎存血清、１００単位／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび０．５ｍＭ １−グルタミンを含有する）中で増殖させた。培養物を、ポリ−ｌ−リジン（１０ｇ／Ｌ）で予め被覆した培養皿にて、３７℃、９４％ Ｏ₂／６％ ＣＯ₂および９０〜９２％湿度で維持した。培養物を、血清補充培地１日目に、１００ｎｇ／ｍｌのラット２．５Ｓ ＮＧＦを添加した）中で、７日間維持した。７日目に、馴化培地を、特定の薬剤を含有する無血清培地で置き換えた。４日後、ＮＩＨ Ｉｍａｇｅプログラムバージョン１．４７を用いて、細胞密度を概算し、そして神経を突起発現する細胞の数を、以前に記述されたブラインド（ｂｌｉｎｄ）様式で、手動で数えた（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４）。モノクロームビデオカメラ（Ｃｏｈｕ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を介して、Ｍａｃ ＩＩコンピューターに、ニコン倒立顕微鏡（１００倍の倍率）を装着した。他に指示がなければ、１プレートあたり、無作為な４個の領域を数え、そして１処理群あたり４個のプレートだった。神経突起は、神経細胞形質の少なくとも２倍の長さの突起として定義した。この画像分析の信頼性を評価するために、無作為なサンプルで分析したものと同じ視野で、細胞の直接的な定量のために、網線を使用した。

（受動的回避行動）
受動的回避行動は、薬物（基準重量）または０．９％生理食塩水希釈剤の腹腔内（ＩＰ）注射後、基底核傷害ラットにおいて、測定した。傷害については、雄性５ヶ月齢Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、３０ｍｇ／ｋｇペントバルビタールナトリウム（ＩＰ）で麻酔し、次いで、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中の５μｇ／μｌイボテン酸（ｉｂｏｔｅｎｉｃ ａｃｉｄ）１μｌで、基底核へ両側に注入した。注入座標は、ＰａｘｉｎｏｓおよびＷａｔｓｏｎ（ＰａｘｉｎｏｓおよびＷａｔｓｏｎ，１９８６）に従って、前部７．０ｍｍ、側方２．６ｍｍおよび垂直６．５ｍｍであった。

手術に続いて、動物を元のケージに戻し、そして数日間にわたって、Ｐｕｒｉｎａ Ｒａｔ Ｃｈｏｗが製造した半固形状マッシュ（ｍａｓｈ）を与えた。１ヶ月後、この動物を２室受動的回避パラダイムで訓練した。ＩＰ薬物注射の１５分後、彼らをリット（ｌｉｔ）区画に置き、そして隣接暗室に入らせた。第二室に入った動物には、１秒間、弱いフットショック（０．８ｍＡ）を与えた。２４時間後、５分までの間、ラットを潜伏について試験した；また、この試験は注射の１５分後に開始した。統計的な分析は、潜伏の順位ノンパラメトリック比較を使用した。

基底核におけるイボテン酸配置の組織学的な評価は、ホルマリン固定組織のコリンエステラーゼ染色を用いて、行動測定後に行った。これらの注射は、ＮＩＨ Ｉｍａｇｅ １．４７プログラムで測定したように、典型的には基底核において、コリンエステラーゼ染色細胞の数を８０％より多く減少させ、同様に、淡蒼球および視床でも、いくらかの染色の損失があった。

（結果）
ラット脳膜は、１００μＭニコチン置換可能様式で、１．９ｎＭのＫｄでＳｃａｔｃｈａｒｄ分析（ｒ＝０．９８；単一部位モデル）に従って、［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシンに結合した。各３−シンナミリデンアナバセイン（ａｎａｂａｓｅｉｎ）は、高親和性で濃度相関様式にて、ニコチン置換可能［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合をラット脳膜から完全にブロッキングした（ＩＣ５０値：３−ＣＡ、８０ｎＭ；４−ＭｅＯＣＡ、５４ ｎＭ；２−ＭｅＯＣＡ、８ ｎＭ）（図１０）。

ＡＣｈは、Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞で発現したα７およびα４β２ニコチン性レセプタにて、典型的なアゴニスト活性を示した（図１１および図１２）。これらのシンナミリデン−アナバセイン化合物はまた、このα４β２の組み合わせの活性を伴わずに、ラットα７ホモオリゴマーレセプタの活性化に関して、有効であった。３−ＣＡおよび２−ＭｅＯＣＡは、類似のα７ ＥＣ₅₀効力値（それぞれ、３．２±０．７μＭおよび６．２±２．２μＭ）を有するのに対して、４−ＭｅＯＣＡは、２〜３分の１の効力（ＥＣ₅₀＝１５．９±７．９μＭ）であった。

アゴニスト活性に引き続いて生じるアンタゴニスト特性は、化合物適用の５分後に適用したＡＣｈに対する応答性の減少として測定した（これはアナバセイン誘導体の代わりのＡＣｈ適用に対して標準化した）（図１３Ａおよび図１３Ｂ）。ＡＣｈ投与は、前に述べたように、長期的な阻害活性がなかった。しかしながら、このシンナミリデン−アナバセインは、濃度依存性のアンタゴニスト活性を示し、この活性は、相対的な効力の点で、アゴニスト活性で観察されたものとは異なっていた。３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡについてのＩＣ₅₀値は、それぞれ、１５±６μＭ、２．３±０．７μＭ、および５．０±２．３μＭであった。これら３種の化合物のうちでは、α７レセプタに対するアゴニスト効力とアンタゴニスト効力との間に明白な関係はなかった。これらの化合物のいずれも、３０μＭの濃度まで、α４β２レセプタに対する有意な拮抗作用を誘発しなかった（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。

基底核の両側を損傷した、生理食塩水希釈剤を注射したラットは、偽手術コントロールと比較して、この受動的回避パラダイムにおいて、ほとんど挙動を示さなかった（図２）。これらの３種のシンナミリデン−アナバセインは、それぞれ、ＩＰ投与したとき、逆Ｕ字型の用量関連様式で、これらの損傷動物における受動的回避行動を改善した。２−ＭｅＯＣＡは、この群の最も強力な成績向上剤であった。これらの薬剤は、いずれも、試験性能を改善する用量範囲にわたって、この訓練期間での成績を変化させず、このことは、歩行運動機能において、薬剤誘発性の変化がなかったことを示唆する；さらに高い用量を与えると、動物が訓練不能となり、痙攣または意識消失はないが、明らかに協調運動（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ）を損失していた。

分化したＰＣ１２培養物からＮＧＦを除去すると、４日後に、ＮＧＦを残したプレートと比較して、著しい神経突起損失が起こった（図１１）。３−ＣＡは、１０μＭ濃度にて、ＮＧＦ欠乏神経突起損失から保護したのに対して、他の２種の化合物は、効果がなかった。コリンもまた、１〜１０ｍＭの濃度範囲（これは、卵母細胞中にて、これらのレセプタを選択的に活性化することが以前に見出されている）にわたって、ＮＧＦの除去により誘発されるアポトーシスから保護した（図１５）。

（考察）
この３−シンナミリデン−アナバセイン構造が、ラットα７レセプタに対して、高い親和性およびアゴニスト効力を与えるのに充分であることは、結合研究および生理学的研究から明らかとなった。最も簡単な３−シンナミルアミンアナバセインである３−ＣＡは、強力かつ効果的であり、また、比較的に低いアンタゴニスト活性を示した。２−位または４−位のいずれかにメトキシ基を付加することにより、このα７レセプタにおいて、著しい追加特性が得られた。２−位にメトキシ基を付加すると、これまでにこのクラスで報告されたいずれの化合物も、最も高いα７に対する親和性を示し、同時にまた、アンタゴニスト効力を増加した。この４−置換シンナミリデンアナバセイン（４−ＭｅＯＣＡ）は、ＤＭＡＣ（これもまた、４−置換シンナミリデン−アナバセインである）に対して報告されたものと類似したアゴニストおよびアンタゴニストレセプタ特性を有していた（ｄｅ Ｆｉｅｂｒｅら、１９９５）：これは、このα７レセプタに対して、非置換のものよりも低い親和性を有していたが、高いアンタゴニスト効力を有していた。

α７結合研究の結果をレセプタ機能の研究の結果と比較する際の長期的な難題の１つは、前者の種類の系におけるずっと高いアゴニスト効力であった。この矛盾は、同様に、シンナミラジン−アナバセインに対しても見られ、各リガンドによるα−ブンガロトキシンの置換は、このレセプタを活性化するのに必要なものより１０〜１００分の１の低い濃度で観察される。卵母細胞発現研究は、ラットの脳で観察されるものと類似のアゴニスト効力を生じるので、この現象は、この卵母細胞発現システムでの人為的結果ではない。その代わりに、このα７レセプタの迅速な脱感作（これは、このピークアゴニスト濃度の前に起こる）は、この灌流システムにて達成され得、この結合／効力相違の根底にある少なくとも１個の因子であるようである。

脳は、多くのニコチン性レセプタサブタイプを保有しているものの、その２個の主要なものは、結合研究および免疫学的研究に基づいて、α４β２およびα７サブユニットからなるようである。現在までに特徴付けられた３−シンナミリデン−アナバセインの全て（ＤＭＡＣ、３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡ、４−ＭｅＯＣＡ）は、α４β２よりもα７レセプタを選択的に活性化し、これらは、少なくともある程度のニコチン性レセプタ選択性を示す。ＤＭＡＣの選択性は、同様に、他のニコチン性レセプタサブユニット組み合わせにわたって、観察される（ｄｅ Ｆｉｅｂｒｅら、１９９５）。この３−置換ベンジリデンアナバセイン（ＤＭＸＢ）もまた、他のニコチン性レセプタサブタイプと対比して、α７に対するアゴニストとして選択的であるが、それは、本研究でのシンナミリデン置換アナログと比較すると、これらのレセプタでの弱い部分的なアゴニスト活性を有するのみである。

イボテン酸処理した基底核損傷ラットは、受動的回避行動における記憶に関連する機能不全に対して、よく研究されたモデルを提供する。α７レセプタ活性化は、この型の行動を改善するのに充分であり、海馬および新皮質（これは、学習および行動に関連している領域である）で局在化されたレセプタと合致している。この行動パラダイムでの３個の新規な化合物の相対的な効力は、それらのレセプタの結合または活性化と一致している。この行動活性とアンタゴニスト活性との間の関係は存在しなかった。ＤＭＡＣもまた、強力なアンタゴニスト活性を保有しつつ、この行動パラダイムで効果的である（Ｍｅｙｅｒら、１９９４）。従って、アンタゴニスト活性を保有していることは、この型の学習および記憶関連行動を妨害しないようである。

分化したＰＣ１２細胞でのＮＧＦ欠乏は、ニューロン萎縮のモデルとして、広範囲にわたって特徴付けられている（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４）。ＧＴＳ ２１によるα７活性化は、このモデルにおいて、この神経毒性を低下させるのに充分であることが立証された（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４）。本発明の結果は、３−ＣＡだけでなくコリンが細胞保護活性を示したので、この観察と合致している。コリンは、α４、α２、β２またはβ４を含有するサブタイプでの効果なしに、ＡＣｈの１０分の１未満の効力で、ラットα７レセプタを活性化することが示された（Ｐａｐｋｅら、１９９６）。卵母細胞の発現されたα７レセプタでのコリンの効力は、従って、本発明のアッセイにおいて神経保護に関して観察されたものに匹敵している。

２−ＭｅＯＣＡも４−ＭｅＯＣＡのいずれも、同じ１０μＭ濃度（この濃度では、３−ＣＡが有効である）では、神経突起保護を誘発しなかった。この濃度は、卵母細胞研究の結果に基づいて、選択した。何故なら、この濃度により、特に、３−ＣＡと２−ＭｅＯＣＡとを比較したとき、神経突起保護において、アンタゴニスト活性に対するアゴニストの相対的な重要性の比較が可能となるからである。この卵母細胞レセプタの発現結果に基づいて、１０μＭの３−ＣＡおよび２−ＭｅＯＣＡが、α７レセプタの類似の部分（７５％を越える）を活性化するが、α７レセプタを差示的に阻害するであろうと推定された：３−ＣＡについては２０％未満の阻害および２−ＭｅＯＣＡについては９０％を越える阻害。この比較に基づいて、類似のレベルのレセプタ活性化が存在するとき、このＰＣ１２細胞モデルでの神経保護活性は、α７レセプタ拮抗作用により弱められると思われる。このことは、コリンがα７レセプタにてアンタゴニスト活性を有しないという観察と一致している（Ｐａｐｋｅら、１９９６）。４−ＭｅＯＣＡについて、神経突起保護がないことが、低いアゴニスト効力に帰因し得るか、または著しい拮抗作用に帰因し得るか、またはそれらの両方に帰因しているかを解決することは、困難である。

これらのα７薬剤のアンタゴニスト特性に対する神経突起保護活性の明らかな選択性は、これらの研究の長期的な性質から誘導され得る。薬物投与の直後に行った行動研究とは対照的に、本発明の神経保護研究は、４日間にわたって行われる。あるいは、異なるメカニズムが、神経保護作用対行動作用の基礎をなし得る可能性もある。カルシウム恒常性および細胞内形質導入過程を維持する際のα７レセプタの役割は、膜電位の急激な変化よりも、α７アゴニストのアンタゴニスト特性に差示的に感受性であり得、これは、行動を調整するのに充分であり得る。

（実施例１２−−アルツハイマー病、ならびに学習および記憶を妨害する他の病理学的状態を治療するためのシンナミリデン−アナバセイン）
ニコチンは、ヒトおよび動物における学習および記憶に関連した行動を改善する。例えば、アルツハイマー病では、ニコチンは、いくつかの記憶に関連した課題の成績を改善するが、この疾患に付随した副作用には、高い用量が許容できないということがあった。ベンジリデン−アナバセイン構造を有する弱いが選択的なα７レセプタアゴニストは、種々の動物モデルにおいて、学習および記憶を改善し、これには、受動的回避行動、能動的回避行動、およびＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ課題が挙げられる。しかしながら、これらの薬剤は、ニコチンと比較して、かなり高い用量でのみ効果的であり、そして、α７レセプタを部分的にしか活性化しないそれらの能力（本明細書中で記載したシンナミリデン−アナバセインによる完全な活性化とは対照的）は、この観察、ならびに学習および記憶に関連した行動を改善するのに有効な用量範囲がニコチン自体の範囲ほどには大きくないという観察における要因であったかも知れない。

開示したα７選択的シンナミリデン−アナバセイン化合物は、受動的回避パラダイムおよびコリン作動性の機能不全ラット（これには、アルツハイマー病でのコリン作動性欠損に匹敵する基底核損傷を与えた）を用いる学習および記憶行動を改善した（図２）。これらのシンナミリデン−アナバセインの１個（トランス−３−（２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン）の高い効力は、その広い有効用量応答範囲（０．１ ｍｇ／ｋｇ未満から少なくとも３ ｍｇ／ｋｇまで）と共に、これらのシンナミリデン−アナバセインが、ベンジリデン−アナバセインを超える治療の利点を有することを示している。このより広い用量応答範囲という点で、患者がより少ない頻度で投薬され得ることを示す。なぜなら、行動的に有効である脳内薬剤濃度はより広範囲であるからである。この高い効力は、記憶に関連した行動を改善するのに、低い用量でも有効であることを示しており、これに伴う副作用は、一般に、より少ない。トランス−３−（２−メトキシ−シンナミリデン）アナバセインは、本発明の化合物ほど強力ではない。

開示したシンナミリデン−アナバセインのα４β２レセプタブロッキング作用もまた、学習および記憶におけるそれらの治療活性に関して、重要であり得る。その脳内にα４β２レセプタを有しないように遺伝的に改変されたマウスは、正常な動物よりも、学習および記憶課題において良好に挙動する。これらの結果は、シンナミリデン−アナバセイン化合物が、既存の薬剤と比較して、記憶および学習を向上させる効果を改善したことを示している。完全なα７効能およびα４β２ブロッキングの組み合わせにより、さらに高い治療指数が予想される。

（実施例１３−−神経保護剤としてのシンナミリデン−アナバセイン）
シンナミリデン−アナバセインは、分化したコリン作動性ＰＣ１２神経細胞（これは、それがなければ、生存のために、ＮＧＦに依存していた）を保護することが分かった（表３）。ＰＣ１２細胞は、α７レセプタおよびＮＧＦレセプタの両方を保有していることが知られている。そのＮＧＦ剥奪モデルは、神経保護剤を添加しないと、神経突起の喪失により証明されるように、アポトーシスを示す（Ｒｕｋｅｎｓｔｅｉｎら、１９９１）。この神経細胞生存モデルは、以前には、プロテインキナーゼＣ活性またはカルシウム流入の増加を刺激する薬物に感受性であることが分かった（Ｒｕｋｅｎｓｔｅｉｎら、１９９１）。α７レセプタは、活性化したとき、カルシウム流入およびプロテインキナーゼＣ活性の両方を高める。これらのデータは、シンナミリデン−アナバセインが、分化した細胞において、ＮＧＦの細胞保護作用を置き換え得ること、従ってこれらの化合物が、アルツハイマー病のような状態（これには、現在、ＮＧＦが可能性のある治療であると考えられている）で有用であることを示唆した。本発明者らにより意図されているように、このシンナミリデン−アナバセインは、ＮＧＦを取り除いた場合にＮＧＦ剥奪モデルを保護した。アポトーシスは種々の神経病理状態に関与し得る。この細胞保護作用は、レセプタ活性化（カルシウムおよびプロテインキナーゼＣ活性化（Ｒｕｋｅｎｓｔｅｉｎら、１９９１））の一般的な現象によって媒介され得るので、α７活性化能を有する関連薬剤も同様に、細胞保護性でありそうである。さらに、ニコチン性薬剤は、卒中誘発アポトーシスから保護し得るので、これらのシンナミリデンは、同様に、それらに沿って有効でありそうである（例えば、図３）。

ＰＣ１２細胞を、１週間にわたってＮＧＦを用いて分化させた。血清およびＮＧＦの除去後、４日の間隔をあけてから、薬物を投与した。神経突起を数え、そして少なくとも３個のプレート／群の平均±ＳＥＭとして表した。薬物濃度（ＮＧＦ以外）は、１０μＭであった。＊ｐ＜０．０５−薬物なしでの治療と比較した（１因子ＡＮＯＶＡ）。

（実施例１４−−ベンジリデン−およびシンナミリデン−アナバセインのレセプタ結合特性）

（実施例１５−−アナバセインによるニコチン自己投与の阻害）
ニコチン報酬をブロックする能力を立証するのに最も一般に認められた動物試験は、ニコチン自己投与試験である。本発明者らは、ＤＭＸＢ（これは、ニコチン報酬を媒介する推定レセプタにて、ニコチンアンタゴニストとして作用する化合物である）が、ニコチン摂取に対する能力および動機付けを獲得した成体ラットにおいて、ニコチン自己投与を阻害することを示すために、この精巧な技術を使用した。この化合物の利点は、動物の他の機能（その自然な歩行運動活動を含む）に悪影響を与えることなく、これを達成することにある。

１１匹のオスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、まず、２レバーオペラント条件付け室にて、左レバーを押すように訓練した。彼らの食物へのアクセスを第一訓練セッションの前の２３時間にわたって制限し、次いで、この研究の残りの間に、２０グラムの食物を与えた。一旦、被験体が、この左レバーを確実に押したら、カテーテルを右頸静脈に外科的に移植した。このカテーテルは、３個の別個の管部品（循環系に入れた３７ ｍｍ長のシリコンゴム管（Ｓｉｌａｓｔｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｒａｄｅ管）、６５ ｍｍ長のポリエチレン管（Ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃ， ＰＥ１０）および同じ内径の１７０ ｍｍ長のポリエチレン管（Ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃ， ＰＥ２０））からなっていた。このカテーテルは、肩甲骨の間から出ており、そしてスイベル（これは、それ自体、空気注射器に接続していた）にホックで留めることができた。ニコチン重酒石酸塩（０．０１ ｍｇ／ｋｇの遊離塩基）を、０．７５秒間にわたって０．１ ｍｌ／ｋｇの容量で送達できた。一旦、被験体が手術から回復したら、この空気注射器を作動させる固定比率２スケジュール（ＦＲ２）を完了するように、被験体を訓練した。６０秒間のタイムアウト（ＴＯ）期間に続いて、ニコチンの各投与を行った。各１日実験セッションを、５０分間継続した。これらの条件下での数セッション後、被験体に、この自己投与セッションの開始の１５分前に、生理食塩水（１ｍｌ／ｋｇ）の腹腔内（ＩＰ）注射を与えた。翌日、被験体に、また、このセッションの開始の１５分前に、８ ｍｇ／ｋｇのＧＴＳ−２１をＩＰ注射した。図５は、被験体が、生理食塩水投与後よりも、ＧＴＳ−２１投与後に、ニコチンをあまり自己投与しないようであったことを示している（対ｔ（１０）＝２．４８、ｐ＜０．０５）。

（実施例１６−−ＮＭＤＡで誘発した興奮毒性に対するＤＭＸＢ保護）
本実施例は、ＤＭＸＢによるα７活性化が、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプタ活性化による誘発された興奮毒性から保護することを説明する。ＮＭＤＡレセプタは、カルシウムイオンを非常によく浸透するが、脱感作α７ニコチン性レセプタとは異なり、活性化後の長期間にわたって開放状態のままであることにより、カルシウム媒介興奮毒性を誘導する。

α７ニコチン性レセプタの活性化は、栄養因子剥奪により引き起こされるアポトーシス性変性に対して、神経細胞を保護することが以前に発見されている。本発明者らは、選択的α７レセプタアゴニストジメトキシベンジリデンアナバセイン（ＤＭＸＢ）もまた、ＮＭＤＡ−レセプタ媒体興奮毒性に対して、ラット一次新皮質神経細胞を保護することを示した。用量関連ＤＭＸＢ誘導性神経保護は、興奮性アミノ酸の投与の２４時間前に投与したときに観察されたが、同時に投与したときには観察されなかった。これは、ニコチン性だがムスカリン性ではないアンタゴニストＤＭＸＢにより、ブロックされた。保護は、主として、周縁領域にて観察され、そしてニコチン性アンタゴニストメカミルアミンによりブロックされた。このことは、α７レセプタ活性化が神経保護性であることを示している。

（方法）
（一次ラット新皮質神経細胞培養物）
神経細胞に富んだ培養物を、胚齢１６〜１８日で、ラット大脳皮質から単離し、次いで、分裂中の非神経細胞を殺傷する条件下にて、プラスチックカバーストリップ上で培養した（０１）。成熟した培養物（プレーティング後１０〜１１日）だけを使用した。神経毒性を、興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）に１０分間（グルタミン酸塩またはＮＭＤＡ）または６０分間（カイニン酸塩）に暴露することにより誘導し、引き続いて、６０分間の無ＥＡＡ間隔をおいた。生存可能細胞を、トリパンブルー排除手順により決定し、そして数えた全細胞の分数として表わした。

（病巣虚血モデル）
オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙアルビノ雄ラット（２５０〜３５０ｇ）に、ケタミン、キシラジンおよびアセプロマジン（３：３：１の混合物、０．７ ｃｃ／ｋｇ）の皮下注射で麻酔をかけた。迷走神経から頸動脈を切開する数分前に、アトロピン（０．４ ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）を注射した。末端内頸動脈（ＩＣＡ）および翼口蓋動脈へとその近位分岐部が明らかに輪郭を浮かび上がらせるまで、ＩＣＡを切開した。この翼口蓋動脈を、この末端ＩＣＡと平行かつ平坦にクリップ留めした。総頸動脈（ＣＣＡ）には、別のクリップを付けた。外頸動脈（ＥＣＡ）の遠位側面を凝固させ、そしてこの近位ＩＣＡ分岐部から４ｍｍ遠位に、直線状動脈瘤クリップを付けた。動脈切開したＥＣＡ断端を通り、このＩＣＡへと、その先端が動脈瘤クリップに載るまで、縫合糸を通した。この縫合糸を、体温を３６．５℃と３７．５℃との間に維持しつつ、３０分後に取り除いた。このＥＣＡ断端を、二極電気焼灼器を用いて凝固させた。クリップを取り除き、その創傷を、縫合前に生理食塩水で洗浄した。

ラットを、梗塞の２４時間後に安楽死させ、それらの脳を取り出し、そして冠状に切断した（２ｍｍ）。切片を、３７℃で、２０分間にわたって、２，３，５−トリフェニル−テトラゾリウムクロリド（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ． ＭＯ）の２％溶液に入れた。これらの切片をペトリ皿へと移し、そして１０％ホルムアルデヒド溶液で被覆した。ＮＩＨ Ｉｍａｇｅコンピュータープログラム（バージョン１．４７）のアウトライン機能を使用して、各切片について、梗塞の起きた脳領域および全脳領域を概算した。梗塞サイズを、全脳面積のパーセントとして計算した。

（結果）
１ ｍＭ濃度の各ＥＡＡへの急激な暴露は、１時間後に、神経細胞の５０〜６０％を殺すのに充分であった。ＤＭＸＢは、グルタミン酸塩またはＮＭＤＡのいずれかの投与の２４時間前に投与したとき、濃度依存性の様式で、ラット脳神経細胞初代培養物において、ＮＭＤＡレセプタ媒介毒性から保護した（図６Ｅ）。ＤＭＸＢは、カイニン酸塩誘導性神経毒性（これは、非ＮＭＤＡレセプタにより媒介される）には効果がなかった。ＤＭＸＢ神経保護効果は、ＮＭＤＡレセプタアンタゴニストＭＫ−８０１のブロッキング効果とは対照的に、グルタミン酸塩と同時に投与したときには、観察されなかった（図６Ｆ）。ＤＭＸＢは、３０μＭまでの濃度では、ラット脳膜への高親和性［³Ｈ］ＭＫ８０１の結合を妨害しなかった。これは、直接のＮＭＤＡレセプタブロッキングを介した神経保護作用の反証となる。これらの結果は、ＤＭＸＢによるＮＭＤＡ誘導性興奮毒性の間接的または非競争的な弱毒化を示している。

ＤＭＸＢ誘導性神経保護は、非選択的ニコチン性レセプタアンタゴニストであるヘキサメトニウム、メチルリカコニチンおよびメカミルアミン、ならびにα７選択的アンタゴニストであるα−ブンガロトキシンに感受性であった（図７）。非選択的アゴニストであるニコチンは、同様に、メチルリカコニチン感受性の様式で、神経細胞喪失から保護した。このことは、このモデルにおいて以前に報告された作用（Ａｋａｉｋｅ ら、１９９４）と一致している。

これらのインビトロ結果は、インビボでの中大脳動脈の閉塞に続いた病巣虚血誘導性梗塞のサイズに対するＤＭＸＢ治療の効果の研究を促した。その損傷の大部分は、外側尾状核および新皮質（最大で、その大脳前頭極の５ｍｍ後方）に局在化しており、これは、統計的な分析に使用した（図８Ａ、図８Ｂ）。ＤＭＸＢは、主として、後部梗塞領域（外側尾状核および後頭皮質の一部を含む）を保護した。これらの周縁領域は、ＭＫ８０１により保護された領域に相当する（Ｐａｐｋｅ、１９９３）。アンタゴニストであるメカミルアミンは、ＤＭＸＢの神経保護作用をブロックした。これは、ニコチンの関与を実証している。ＤＭＸＢは、３０ ｍｍ虚血傷害に投与したときは効果がなかった。このことは、インビトロでグルタミン酸塩と同時に投与したときに観察される神経保護の欠如と一致している。神経保護を観察するために、ＮＭＤＡレセプタ活性化の前に、α７レセプタを活性化する必要があることは、内因性アセチルコリンが、虚血発作中に放出したときには、神経保護できないことを説明し得る。

これらの結果は、一次新皮質神経細胞でのＮＭＤＡ誘導性毒性に対するニコチンの保護作用が、少なくとも部分的には、α７レセプタ亜集団により媒介されることを示している。α７レセプタ活性化は、もともと少なくとも部分的にアポトーシス性である変性モデル（例えば、ＮＧＦ剥奪後の分化したＰＣ１２および軸索切断後のコリン作動性中隔神経細胞）において、神経細胞を保護するのに充分である。交感神経節では、コリンはまた、α７レセプタに選択的な濃度におけるニコチン性レセプタ活性化によって、ＮＧＦ剥奪の間、神経細胞を維持する（ＳｔｅｉｎｂａｃｈおよびＩｆｕｎｅ、１９８９）。コリンのこの神経保護作用には、レセプタの媒介による細胞内Ｃａ²⁺レベルの上昇が必要であった。このことは、α７レセプタ活性化が、Ｃａ²⁺誘発機構によって栄養因子剥奪から保護するという着想を支持している。

ニコチンは、いくつかの非神経細胞において、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）依存性機構によってアポトーシスを弱め、このカルシウム感受性酵素は、ＰＣ１２細胞においてα７アゴニストにより活性化されるようである。全体的に見れば、これらの結果は、α７活性化が、ＰＫＣ活性化に続いて、細胞内カルシウムイオン濃度を一時的に上昇させるモデルを示唆している。

本明細書中で開示し請求した組成物および方法の全ては、本開示に照らして、過度な実験なしに、製造し実行できる。本発明の組成物および方法は、好ましい実施態様に関して記載されているものの、本発明の概念、精神および範囲から逸脱することなく、本明細書中で記載した組成物および方法ならびにこの方法の工程および工程順序には、変更を加え得ることは、当業者に明らかである。さらに具体的には、化学的および生理学的の両方に関係しているある種の薬剤は、同じまたは類似の結果を達成しつつ、本明細書中で記載した薬剤と置き換え得ることが明らかである。当業者に明らかなこのような類似の置換および変更の全ては、添付の特許請求の範囲により規定される本発明の精神、範囲および概念に入ると考えられる。

（参考文献）
以下の参考文献は、本明細書中で示したものを補充する例示的な手順の詳細または他の詳細を提供する範囲まで、本明細書中で参考として特に援用されている。

以下の図面は、本明細書の一部をなし、そして本発明の特定の局面をさらに説明するために包含されている。本発明は、本明細書中で提示した特定の実施態様の詳細な説明と組み合わせて、これらの図面の１つまたはそれ以上を参照して、よりよく理解され得る。

以下に、図面を簡単に説明する。
（図１）
図１は、３−（２，４−ジメトキシベンジリデン）アナバセイン（これはまた、「ＤＭＸＢ」または「ＧＴＳ−２１」として知られている）を示しており、これは、α７選択的ニコチン性アゴニスト活性を有するベンジリデン−アナバセインのモデルである。他の３−（ベンジリデン）アナバセインは、ベンジリデン部分が異なる置換基である以外同じである。
（図２）
図２は、基底核の両側に外傷を受けたラットにおける受動的回避行動に対するシンナミリデン−アナバセインの効果を示す。外傷を加えていない対照値は、２４７≠３５ Ｓｅｃ 平均±であった。（Ａ）は、３−シンナミリデンアナバセインである；（Ｂ）は、３−（メトキシシンナミリデン）アナバセインである；（Ｃ）は、３−（４−メトキシ−シンナミリデン）アナバセインである。投薬は、ｍｇ／ｋｇでのＩＰであり、ここで、 は、０であり、＃は、０．１であり、 は０．２であり、 は１．０であり、そして は、３．０ ｍｇ／ｋｇである。^*は、生理食塩水対照（１因子ＡＮＯＶＡ）と比較して、ｐ＜０．０５であることを示す。全ての値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４〜６／群）である。
（図３）
図３は、脳アポトーシスに対する脳虚血（卒中）の効果、およびこのアポトーシスから保護するためのベンジリデン−アナバセインα７ニコチン性アゴニストの能力を示す。ラットに、それらの共通の頸動脈を縛ることによって、３０分間の虚血発作を与えた；アポトーシスの量（梗塞サイズに比例している）は、２４時間後に決定した。一部の動物には、結紮の１時間前にベンジリデン−アナバセイン化合物であるＤＭＸＢ（１ ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、塩重量）、または結紮の５分後にニコチン性アンタゴニストであるメカミラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、またはメカミラミンおよびＤＭＸＢの両方かまたはＤＭＸＢを与えた。結紮前に与えたＤＭＸＢ単独だけが、アポトーシスから保護した（^*生理食塩水注射対照と比較して、ｐ＜０．０５；１因子ＡＮＯＶＡ、ｎ＝４〜５／群）。
（図４）
図４は、ＥＣ５０濃度のニコチンへのｎ−アセチルコリンレセプタサブタイプの応答性に対する１００ ｍＭエタノールの効果を示す。
（図５）
図５は、生理食塩水の対照の注射と比較して、ＤＭＸＢ（ＧＴＳ−２１）の注射によってラットでのニコチン自己投与の阻害を示す。
（図６Ａ）
図６Ａは、培養した新皮質神経細胞でのＥＡＡ誘発細胞毒性に対するＤＭＸＢの効果を示す。処理なし。
（図６Ｂ）
図６Ｂは、図６Ａと同様であり、細胞を、１ｍＭグルタミン酸で１０分間、次いで、洗浄後グルタミン酸で１時間インキュベートした。
（図６Ｃ）
図６Ｃは、図６Ａと同様であり、細胞を、グルタミン酸処理の前に、１０μＭ ＤＭＸＢに２４時間曝露した。
（図６Ｄ）
図６Ｄは、図６Ａと同様であり、細胞を、グルタミン酸処理の前に、１０μＭ ＤＭＸＢおよび１ｎＭ α−ブンガロトキシンの同時適用に曝露した。スケールバー、５０μｍ。
（図６Ｅ）
ＤＭＸＢ前処理による神経毒性の阻害。ＤＭＸＢに曝露した２４時間後、１ ｍＭ ＥＡＡを１０分間または１時間添加し、続いて、それぞれ、無ＥＡＡ培地を１時間添加するかまたは添加しなかった。対照の％は、これらにＥＡＡを曝露したまたは曝露しないときの生存可能細胞の割合である。
（図６Ｆ）
ＤＭＸＢまたはＭＫ ８０１（各１０μＭ）を、１０分間にわたって、１ ｍＭグルタミン酸と共に、同時に適用した。^*および＃は、それぞれ、グルタミン酸またはＮＭＤＡ
単独由来のｐ＜０．０５を意味する。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）を反映している。
（図７）
グルタミン酸細胞毒性からのＤＭＸＢ誘発保護に対するコリン作動性アンタゴニストの効果。各アンタゴニストは、２４時間にわたって、１μＭ ＤＭＸＢまたは１０μＭニコチンを含有する培地に添加した。ＨＥＸ、１μＭヘキサメトニウム。ＭＥＣ、１μＭメカミラミン。ＭＬＡ、１０ ｎＭメチルリカコニチン。ＢＴＸ、１ｎＭ（α）−ブンガロトキシン。ＡＴＲ、１μＭアトロピン。^*および＃は、それぞれ、ＤＭＸＢまたはニコチン
単独と比較して、ｐ＜０．０５を意味する（ｎ＝５）。
（図８Ａ）
図８Ａは、病巣虚血発作に続いた梗塞サイズに対するＤＭＸＢの効果を示す。前方ポールの５ｍｍ後方の冠状切片であって、この場所で、梗塞サイズが最大であった。斜線領域は、典型的な２８％梗塞（平均値）を有する染色された生理食塩水注射動物に由来する。底部：１９％梗塞（平均値）を有するＤＭＸＢ処理動物の冠状切片（同じ座標）。
（図８Ｂ）
図８Ｂは、病巣虚血発作に続いた梗塞サイズに対するＤＭＸＢの効果を示す。前方ポールの５ｍｍ後方での全冠状領域の一部分としての梗塞サイズ。虚血の２４時間前に、薬剤を注射した。ＭＥＣ：０．５ ｍｇ／ｋｇ ＩＰメカミラミン；ＤＭＸＢ：１ ｍｇ／ｋｇ ＩＰ。右パネル：虚血中に注射したＤＭＸＢ、^*注射した生理食塩水と比較して、ｐ＜０．０５；一元ＡＮＯＶＡ（ｎ＝６〜８）。
（図９）
シンナミリジン構造とベンジリデン（ＧＴＳ−２１）との比較。
（図１０）
受動的回避行動におけるＤＭＸＢ誘発改善に対するメカミラミンの効果。成体ＳＤ白色種ラットを、基底核の両側に外傷を付け、そして教本で記述しているように、１ヶ月後、受動性回避行動について試験した。訓練および試験間隔に対する潜伏は、生理食塩水ビヒクル、０．５ ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢ、０．２ ｍｇ／ｋｇメカミラミン（ＭＥＣ）または両方の薬剤をＩＰ注射した１５分後に決定し、そして５匹の動物／群の平均±ＳＥＭとして、記述した。^*生理食塩水を注射した群と比較して、ｐ＜０．０５、一元ＡＮＯＶＡ。
（図１１）
基底核の両側に外傷を付けたラットでのＭｏｒｒｉｓ水課題における訓練に対するＤＭＸＢの効果。外傷を付けたまたは偽手術した動物を、教本で記述しているように、１ヶ月後に、訓練を開始した。外傷群および非外傷群において、毎日、最初の試行の１５分前に、生理食塩水希釈液、０．５ ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢ、０．２ ｍｇ／ｋｇメカミラミン（ＭＥＣ）、または両方の薬剤を、ＩＰ注射した。値は、その標的を見つけるのに必要な平均時間である（最大：６０秒）（Ｎ＝５）。群間比較は、表１で記述する。
（図１２）
基底核の両側に外傷を付けたラットでのＭｏｒｒｉｓ水課題における試行成績に対するＤＭＸＢの効果。図３で記述したように、動物に外傷を付け、訓練し、そして注射した。４日目にて、６０秒の試行間隔中にて、その標的象限で費やした時間の断片を、各群に対して決定し、そして５匹の動物／群の平均±ＳＥＭとして表わした。^*生理食塩水を注射した外傷群と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。
（図１３Ａ）
ラット新皮質での高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン（ＢＸＴ）結合に対するＤＭＸＢまたはニコチンの長期的注射の効果。成体オスラットに、生理食塩水ビヒクル、１ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢまたは０．２ ｍｇ／ｋｇニコチン（ＮＩＣ）（ＩＰ）を、２週間にわたって、毎日、注射した。その時点で、新皮質を除去し、その教本で記述したように、高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合についてアッセイした。各値は、４匹の動物／群の平均±ＳＥＭである；^*生理食塩水を
注射した対照値と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡに対するラットα７ ＡＣｈＲの応答。このラットα７サブユニットをコードするＲＮＡで注射した卵母細胞のピークアゴニスト活性化電流に対する濃度−応答関係。全ての応答は、まず、５００μＭ ＡＣｈ（これは、薬剤適用の５分前に適用した）に対する個々の卵母細胞−応答に関連して、測定した。応答は、１の応答が完全な効率を表わすように、ＡＣｈで得ることができる最大応答に関連して、規準化した。５００μＭ ＡＣｈ対照応答のＡＣｈ最大に対する比は、Ｐａｐｋｅら、１９９７から引き出した。
（図１３Ｂ）
ラット新皮質での高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン（ＢＸＴ）結合に対するＤＭＸＢまたはニコチンの長期的注射の効果。成体オスラットに、生理食塩水ビヒクル、１ｍｇ／ｋｇ ＤＭＸＢまたは０．２ ｍｇ／ｋｇニコチン（ＮＩＣ）（ＩＰ）を、２週間にわたって、毎日、注射した。その時点で、新皮質を除去し、その教本で記述したように、高親和性［³Ｈ］ＡＣｈまたは［¹²⁵Ｉ］α−ブンガロトキシン結合についてアッセイした。各値は、４匹の動物／群の平均±ＳＥＭである；^*生理食塩水を注射した対照値と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡに対するラットα７ ＡＣｈＲの応答。特定濃度での３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡおよび４−ＭｅＯＣＡの適用後、ラットα７注射卵母細胞の対照（５００μＭ）ＡＣｈ応答のレジデュアルインヒビション。全ての応答は、５００μＭ ＡＣｈ（これは、この実験アゴニスト適用の５分前に適用した）に対する卵母細胞応答に関連して表わされる。
（図１４Ａ）
３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡに対するα４β２ ＡＣｈＲの応答。ラットα４β２サブユニットをコードするＲＮＡで注射した卵母細胞のピークアゴニスト活性化電流に対する濃度−応答関係。応答は、まず、１０μＭ ＡＣｈ（これは、薬剤適用の５分前に適用した）に対する応答に関連して表され、次いで、１の応答が全効能を表わすように、ＡＣｈで得ることができる最大応答に関連して、規準化した。１０μＭ ＡＣｈ応答と最大ＡＣｈ応答との間の比は、別個の研究で決定された。
（図１４Ｂ）
３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡに対するα４β２ ＡＣｈＲの応答。特定濃度での３−ＣＡ、２−ＭｅＯＣＡまたは４−ＭｅＯＣＡの適用後、ラットα４β２注射卵母細胞の対照（１０μＭ）ＡＣｈ応答のレジデュアルインヒビション。応答は、１０μＭ ＡＣｈ（これは、実験的アゴニスト適用の５分前に適用した）に対する個々の卵母細胞応答に関連して表わされる。
（図１５）
ＮＧＦ欠乏下にて分化したＰＣ１２細胞における神経突起生存率に対するコリンの効果。１週間分化し、次いでＮＧＦ＋血清を欠乏させたＰＣ１２細胞を、４日間にわたって、無血清培地（１００ ｎｇ／ｍｌのＮＧＦと共にまたはそれなしで、特定コリン濃度±１０μｌメカミラミン）に曝露した。その時点で、ＰＣ１２細胞発現神経突起の画分を定量し、そして３〜４プレート／群の平均±ＳＥＭとして表わした。^*未処理細胞と比較して、ｐ＜０．０５（一元ＡＮＯＶＡ）。

本願発明の好ましい実施形態によれば、以下の組成物などが提供される。
（項１） 次式の化合物またはその塩を含有する物質の組成物：

ここで、Ｒ ¹ 、Ｒ ⁶ およびＲ ⁷ は、水素またはＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキルである；そしてＲ ² は、＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミノ、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、Ｒ ¹ 、Ｒ ³ 、Ｒ ⁴ 、Ｒ ⁵ 、Ｒ ⁶ またはＲ ⁷ の１個は、水素ではなく、ここで、もし、Ｒ ¹ 、Ｒ ⁴ 、Ｒ ⁵ 、Ｒ ⁶ およびＲ ⁷ が全て水素であるなら、Ｒ ³ は、４−Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノではない、組成物。
（項２） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項１に記載の組成物。
（項３） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位または２−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、アセチルアミノ、アセトキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項２に記載の組成物。
（項４） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項３に記載の組成物。
（項５） Ｒ ³ が、アセチルアミノである、上記項３に記載の組成物。
（項６） Ｒ ³ が、アセトキシである、上記項３に記載の組成物。
（項７） Ｒ ³ が、メトキシである、上記項３に記載の組成物。
（項８） Ｒ ¹ およびＲ ⁴ が、水素であり、Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合しており、そしてＲ ⁵ が、該フェニル環の４−位に結合しているが、メトキシまたはヒドロキシである、上記項７に記載の組成物。
（項９） Ｒ ¹ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、水素である、上記項４、上記項５、上記項６または上記項７に記載の組成物。
（項１０） シンナミリデン−アナバセインを含有する物質の組成物であって、該シンナミリデン−アナバセインは、３−シンナミリデン−アナバセインまたは３−（４−ジアルキルアミノシンナミリデン）アナバセインではない、組成物。
（項１１） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセインおよび３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項１０に記載の組成物。
（項１２） 哺乳動物においてタバコ禁断効果を緩和または防止する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与することを包含する：

ここで、Ｒ ¹ 、Ｒ ⁶ およびＲ ⁷ は、水素またはＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキルである；そしてＲ ² は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ ₃ Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミノ、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、該化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項１３） Ｒ ² が、＝ＣＨ−Ｘまたは＝ＣＣＨ ₃ Ｘである、上記項１２に記載の方法。
（項１４） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項１３に記載の方法。
（項１５） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、イソプロポキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項１４に記載の方法。
（項１６） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項１５に記載の方法。
（項１７） Ｒ ³ が、メトキシまたはイソプロポキシである、上記項１５に記載の方法。
（項１８） Ｒ ³ が、アミノである、上記項１５に記載の方法。
（項１９） Ｒ ¹ が、水素であり、Ｒ ³ が、メトキシであり、Ｒ ⁴ が、ヒドロキシルまたはメトキシであり、そしてＲ ⁵ が、水素である、上記項１４に記載の方法。
（項２０） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合しており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の２−位に結合している、上記項１９に記載の方法。
（項２１） Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合しており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の４−位に結合している、上記項１９に記載の方法。
（項２２） Ｒ ¹ が、水素であり、そしてＲ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、全て、メトキシである、上記項１４に記載の方法。
（項２３） Ｒ ³ が、４−ジメチルアミノであり、そしてＲ ⁴ およびＲ ⁵ が、共に、水素である、上記項１４に記載の方法。
（項２４） Ｒ ² が、＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸである、上記項１２に記載の方法。
（項２５） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項２４に記載の方法。
（項２６） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位または２−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、アセチルアミノ、アセトキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項２５に記載の方法。
（項２７） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項２６に記載の方法。
（項２８） Ｒ ³ が、アセチルアミノである、上記項２６に記載の方法。
（項２９） Ｒ ³ が、アセトキシである、上記項２６に記載の方法。
（項３０） Ｒ ³ が、メトキシである、上記項２６に記載の方法。
（項３１） Ｒ ¹ およびＲ ⁴ が、水素であり、Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合しており、そしてＲ ⁵ が、該フェニル環の４−位に結合しているが、メトキシまたはヒドロキシである、上記項３０に記載の方法。
（項３２） Ｒ ¹ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、水素である、上記項２７、上記項２８、上記項２９または上記項３０に記載の方法。
（項３３） 前記動物が、ヒトである、上記項１２に記載の方法。
（項３４） タバコ禁断症状を治療する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインまたはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量を投与する工程を包含し、ここで、該ベンジリデン−アナバセインは、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項３５） 前記ベンジリデン−アナバセインが、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、および（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））アナバセインからなる群から選択される、上記項３４に記載の方法。
（項３６） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項３４に記載の方法。
（項３７） 哺乳動物においてエタノールによりアンタゴナイズされる脳α７レセプタを刺激する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を包含する：

ここで、Ｒ ¹ 、Ｒ ⁶ およびＲ ⁷ は、水素またはＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキルである；そしてＲ ² は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ ₃ Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミノ、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、該化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項３８） Ｒ ² が、＝ＣＨ−Ｘまたは＝ＣＣＨ ₃ Ｘである、上記項３７に記載の方法。
（項３９） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項３８に記載の方法。
（項４０） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、イソプロポキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項３９に記載の方法。
（項４１） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項４０に記載の方法。
（項４２） Ｒ ³ が、メトキシまたはイソプロポキシである、上記項４０に記載の方法。
（項４３） Ｒ ³ が、アミノである、上記項４０に記載の方法。
（項４４） Ｒ ¹ が、水素であり、Ｒ ³ が、メトキシであり、Ｒ ⁴ が、ヒドロキシルまたはメトキシであり、そしてＲ ⁵ が、水素である、上記項３９に記載の方法。
（項４５） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合されており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の２−位に結合されている、上記項４４に記載の方法。
（項４６） Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合されており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の４−位に結合されている、上記項４４に記載の方法。
（項４７） Ｒ ¹ が、水素であり、そしてＲ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、全て、メトキシである、上記項３９に記載の方法。
（項４８） Ｒ ³ が、４−ジメチルアミノであり、そしてＲ ⁴ およびＲ ⁵ が、共に、水素である、上記項３９に記載の方法。
（項４９） Ｒ ² が、＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸである、上記項３７に記載の方法。
（項５０） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項４９に記載の方法。
（項５１） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位または２−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、アセチルアミノ、アセトキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項５０に記載の方法。
（項５２） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項５１に記載の方法。
（項５３） Ｒ ³ が、アセチルアミノである、上記項５１に記載の方法。
（項５４） Ｒ ³ が、アセトキシである、上記項５１に記載の方法。
（項５５） Ｒ ³ が、メトキシである、上記項５１に記載の方法。
（項５６） Ｒ ¹ およびＲ ⁴ が、水素であり、Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合しており、そしてＲ ⁵ が、該フェニル環の４−位に結合しているが、メトキシまたはヒドロキシである、上記項５５に記載の方法。
（項５７） Ｒ ¹ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、水素である、上記項５２、上記項５３、上記項５４または上記項５５に記載の方法。
（項５８） 前記動物が、ヒトである、上記項３７に記載の方法。
（項５９） エタノールによりアンタゴナイズされる脳α７レセプタを刺激する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインまたはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量を投与する工程を包含し、ここで、該ベンジリデン−アナバセインは、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項６０） 前記ベンジリデン−アナバセインが、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、および（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））アナバセインからなる群から選択される、上記項５９に記載の方法。
（項６１） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項５９に記載の方法。
（項６２） 哺乳動物において虚血により誘発される細胞損失から保護する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、治療有効量の次式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を包含する：

ここで、Ｒ ¹ 、Ｒ ⁶ およびＲ ⁷ は、水素またはＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキルである；そしてＲ ² は、＝ＣＨＸ、＝ＣＣＨ ₃ Ｘまたは＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸであり、ここで、Ｘは、以下である：

ここで、Ｒ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ は、水素、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₄ アルキル、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノで必要に応じて置換されたＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルコキシ、アルコキシ中に１個〜４個の炭素を有するカルボアルコキシ、アミノ、アシル中に１個〜４個の炭素を有するアミノ、シアノ、各アルキル中に１個〜４個の炭素を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ、ハロ、ヒドロキシル、およびニトロからなる群から選択される；ここで、該化合物は、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項６３） Ｒ ² が、＝ＣＨ−Ｘまたは＝ＣＣＨ ₃ Ｘである、上記項６２に記載の方法。
（項６４） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項６３に記載の方法。
（項６５） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、イソプロポキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項６４に記載の方法。
（項６６） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項６５に記載の方法。
（項６７） Ｒ ³ が、メトキシまたはイソプロポキシである、上記項６５に記載の方法。
（項６８） Ｒ ³ が、アミノである、上記項６５に記載の方法。
（項６９） Ｒ ¹ が、水素であり、Ｒ ³ が、メトキシであり、Ｒ ⁴ が、ヒドロキシルまたはメトキシであり、そしてＲ ⁵ が、水素である、上記項６４に記載の方法。
（項７０） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位に結合されており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の２−位に結合されている、上記項６９に記載の方法。
（項７１） Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合されており、そしてＲ ⁴ が、該フェニル環の４−位に結合されている、上記項６９に記載の方法。
（項７２） Ｒ ¹ が、水素であり、そしてＲ ³ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、全て、メトキシである、上記項６４に記載の方法。
（項７３） Ｒ ³ が、４−ジメチルアミノであり、そしてＲ ⁴ およびＲ ⁵ が、共に、水素である、上記項６４に記載の方法。
（項７４） Ｒ ² が、＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＸである、上記項６２に記載の方法。
（項７５） Ｒ ² が、前記テトラヒドロピリジン環の３−位に結合している、上記項７４に記載の方法。
（項７６） Ｒ ³ が、前記フェニル環の４−位または２−位に結合しているが、アミノ、ヒドロキシル、クロロ、シアノ、ジメチルアミノ、メチル、メトキシ、アセチルアミノ、アセトキシおよびニトロからなる群から選択される、上記項７５に記載の方法。
（項７７） Ｒ ³ が、ヒドロキシルである、上記項７６に記載の方法。
（項７８） Ｒ ³ が、アセチルアミノである、上記項７６に記載の方法。
（項７９） Ｒ ³ が、アセトキシである、上記項７６に記載の方法。
（項８０） Ｒ ³ が、メトキシである、上記項７６に記載の方法。
（項８１） Ｒ ¹ およびＲ ⁴ が、水素であり、Ｒ ³ が、前記フェニル環の２−位に結合しており、そしてＲ ⁵ が、該フェニル環の４−位に結合しているが、メトキシまたはヒドロキシである、上記項８０に記載の方法。
（項８２） Ｒ ¹ 、Ｒ ⁴ およびＲ ⁵ が、水素である、上記項７７、上記項７８、上記項７９または上記項８０に記載の方法。
（項８３） 前記動物が、ヒトである、上記項６２に記載の方法。
（項８４） 前記細胞損失が、卒中に由来している、上記項６２に記載の方法。
（項８５） 前記細胞損失が、グルタミン酸塩誘発興奮毒性に由来している、上記項６２に記載の方法。
（項８６） 虚血により誘発される細胞損失から保護する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、α７レセプタを選択的に活性化できるベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインまたはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量を投与する工程を包含し、ここで、該ベンジリデン−アナバセインは、３−（２，４−ジメトキシ−ベンジリデン）アナバセインではない、方法。
（項８７） 前記ベンジリデン−アナバセインが、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、および（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））アナバセインからなる群から選択される、上記項８６に記載の方法。
（項８８） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項８６に記載の方法。
（項８９） 病巣虚血発作に由来する細胞損失を予防する方法であって、該方法は、哺乳動物に、虚血の発生前に、該細胞損失から保護するのに有効な量で、一定量のα７ニコチン性アゴニストを投与する工程を包含する、方法。
（項９０） 前記α７ニコチン性アゴニストが、ベンジリデン−アナバセインまたはシンナミリデン−アナバセインである、上記項８９に記載の方法。
（項９１） 前記ベンジリデン−アナバセインが、３−（２，４−ジメトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−アミノベンジリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）アナバセイン、３−（４−イソプロポキシベンジリデン）アナバセイン、および（７’−メチル−３−（２，４−ジメトキシベンジリデン））アナバセインからなる群から選択される、上記項９０に記載の方法。
（項９２） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項９０に記載の方法。
（項９３） 年齢に関連した学習または記憶障害を治療する方法であって、該方法は、それが必要な動物に、シンナミリデン−アナバセインの治療有効量を投与する工程を包含し、ここで、該シンナミリデン−アナバセインは、３−シンナミリデンアナバセインまたは３−（４−ジアルキルアミノシンナミリデン）アナバセインではない、方法。
（項９４） 前記シンナミリデン−アナバセインが、３−（４−アセチルアミノシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（４−ヒドロキシ−２−メトキシシンナミリデン）アナバセイン、３−（２，４−ジメトキシシンナミリデン）アナバセイン、および３−（４−アセトキシシンナミリデン）アナバセインからなる群から選択される、上記項９３に記載の方法。

Claims (1)

1. 本願明細書または図面に記載の発明。

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