JP2009542236A - トール様受容体を用いた細胞による発熱試験 - Google Patents
トール様受容体を用いた細胞による発熱試験 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009542236A JP2009542236A JP2009518758A JP2009518758A JP2009542236A JP 2009542236 A JP2009542236 A JP 2009542236A JP 2009518758 A JP2009518758 A JP 2009518758A JP 2009518758 A JP2009518758 A JP 2009518758A JP 2009542236 A JP2009542236 A JP 2009542236A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tlr
- cell
- type
- human
- transgenic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0656—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/50—Lipopolysaccharides; LPS
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
病院内での臨床診断において病原スペクトルを迅速かつ確実に同定することは、目的に適った感染症治療を、例えば敗血症患者に実施するために非常に意義深い。
本発明は特に、発熱原を特異的に検出するための方法および試薬(特異的発熱試験)を提供するという技術的課題に基づくものである。これに関連して、人体または動物の感染に際して病原体または病原スペクトルを特異的に検出するための方法および試薬を提供する上で更なる技術的課題がある。これに関連して、新たなTLR アンタゴニスト および/または新たなCpG-モチーフをスクリーニングするための方法および試薬を提供する上で更なる技術的問題がある。
2/TLR-4、TLR-2/TLR-5、TLR-2/TLR-6、TLR-2/TLR-7、TLR-2/TLR-8、TLR-2/TLR-9、TLR2/TLR-10、TLR-3/TLR-4、TLR-3/TLR-5、TLR-3/TLR-6、TLR-3/TLR-7、TLR-3/TLR-8、TLR-3/TLR-9、TLR-3/TLR-10、TLR-4/TLR-5、TLR4/TLR-6、TLR-4/TLR-7、TLR-4/TLR-8、TLR-4/TLR-9、TLR-4/TLR-10、TLR-5/TLR-6、TLR-5/TLR-7、TLR-5/TLR-8、TLR-5/TLR-9、TLR5/TLR-10、TLR-6/TLR-7、TLR-6/TLR-8、TLR-6/TLR-9、TLR-6/TLR-10、TLR-7/TLR-8、TLR-7/TLR-9、TLR-7/TLR-10、TLR-8/TLR-9、TLR-8/TLR-10、TLR-9/TLR-10にも関する。これらのTLRはそれぞれ、単独でまたは少なくともその1に他のTLRもしくはTLRヘテロ二量体を組み合わせて共発現させることもできる。
検体を調製する工程、少なくとも1の特異的TLRまたは少なくとも1の特異的TLRヘテロ二量体を発現する本発明の少なくとも1の遺伝子導入細胞もしくは細胞系を調製する工程、
前記細胞への特に検体成分との結合により特徴付けられる「検体-細胞-複合体」を生じるように前記検体を前記細胞と接触させる工程、好ましくは約37℃にて約3〜約24時間で酵素活性を誘導するために前記の検体-細胞-複合体をインキュベーションする工程、ならびにレポーター遺伝子により誘導された酵素活性を検知または検出する工程を含み、
前記酵素活性は、TLR型またはTLRヘテロ二量体に特異的な発熱原もしくはアゴニスト有効成分の存在を表わすことを特徴とする。
方法
TLR-4を用いた遺伝子導入(トランスフェクション)
細胞系NIH-3T3に、TLR4/CD14複合体 およびレポーター遺伝子プラスミド SEAP/ELAM-1 を導入した。
NIH-3T3 TLR-4/CD14クローン4/5 P35を、500 μl/ウエル中に1ウエル当たり30,000〜200,000 細胞(24穴)の密度で0,5% FCS 培地に播種(他のウエル容積では適切な細胞数)し、一夜接着させる。
変形例として、遺伝子導入細胞系を適切なアッセイ形式(細胞培養用ウエルプレート: マルチウエルプレート)中で適切な密度(24穴では500 μl 毎に200,000 細胞/ウエル)にて凍結する。使用者は、試験プレート中で凍結乾燥された8〜10種の異なる細胞系を有する「アッセイキット」を入手する。アッセイではキットを開封し、37℃恒温槽中で直接インキュベーションすることができる。
(a) 解凍試験系
図2は、解凍後に本発明の3T3 NIHクローン4/5 TLR4/CD14に対して行った、100 ng/ml LPSおよびネガティブコントロールでの結果を示す。誘導細胞では、SEAP活性により検出培地中の基質BCIPが濃青色の不溶性最終産物(インジゴ)へ転化されている。
図3は、10 pg/ml〜100 pg/mlのLPSを用いた、NIH-3T3クローン4(5) TLR4/CD14 SEAP試験系の誘導を示す。検出培地に含まれる基質はBCIPである。ネガティブコントロールでは誘導されず、 ssRNA40を用いた別のネガティブコントロール では非特異的に誘導された。
前記のNIH-3T3 TLR-4/CD14 SEAP 試験系は、TLR-4が結合しない高用量の非特異的発熱原(それぞれ25 μg/mlのODN、PGN、ポリIC)で誘導した(ODN、PGN、ポリICは、TLR-9、TLR-2およびTLR-3によって認識されるが、TLR-4では認識されない)。図5は、極めて高濃度の非特異的発熱分画を用いてもTLR-4特異的試験系で色変化が認められず、TLR-4試験は特異的であることを示している。
方法
HEK ブルー(blue) 293 線維芽細胞および他の 293 線維芽細胞にTLR-4/CD14 SEAP を導入し、100 ng/ml LPS により誘導した。方法の更なる変量はすべて、本発明の例1と同様に選んだ。
図6および図7は、発色試験の結果を示す。すなわち、誘導細胞だけでなく非誘導の対照も青色変化することを示している。HEK blue 293 細胞およびクローン4(K4)などの他の293細胞を用いると特異的な誘導は見られず、試験系の樹立は不可能である。
方法
マルチウエルプレート(96穴)上で、NIH 3T3 TLR4 CD14 SEAP P40 細胞を、培地(DMRM、80 mmol/l HEPES、30% FCS)100μl中に1穴あたり30,000 細胞の密度で懸濁液として−8O℃にて凍結した。
結果を図11に示す。誘導された酵素活性の検知は、遅くとも3〜24 時間後に現れる。誘導期間の後に検出培地をウエルに直接添加すれば、1〜3 時間後にシグナルが検出可能である。
方法
マルチウエルプレート(96穴)上で、NIH 3T3 TLR4 CD14 SEAP 細胞を1穴あたり30,000 細胞の密度にて培地(30% FCS、80 mmol/l HEPES)100μlに播種した。接着はCO2を含まない湿潤雰囲気下の37℃にて一夜かけて行った。
図10は、ウエルに接着した細胞の位相差顕微鏡撮影を示す。すなわち、これらの細胞はHEPES緩衝培地にて37℃恒温槽中の培養により増殖する。画像はインタクトな単層細胞を示す。
例5: TLR-5特異的試験系
方法
TLR-5を用いた遺伝子導入
細胞系NIH-3T3に、TLR-5およびレポーター遺伝子プラスミド SEAP を導入した。この方法は例1に対応する。
NIH-3T3クローンTLR-5を、1穴あたり30,000〜200,000細胞の密度(24穴)で0.5% FCS培地の500 μl/ウエルに播種し、2 μg/ml フラジェリンによる誘導を行い、検知はBCIP含有の検出培地300 μl/ウエルでのインキュベーションにより行う。
図12は、色試験の結果を示す。すなわち、誘導細胞では特異的な青色変化が起きるものの、非誘導の対照細胞では青色変化は認められない。
Claims (63)
- 検体中の発熱原を特異的に検出するための遺伝子導入細胞であって、ゲノム中に以下:
(a) 少なくとも一つのトール様受容体(Toll-like Rezeptor:TLR)をコードする遺伝子、および
(b) NF-κB により誘導可能なプロモーターの発現制御下にある少なくとも一つのレポーター遺伝子
を含む遺伝子導入細胞。 - 前記細胞は哺乳動物の線維芽細胞である、請求項1に記載の細胞。
- 前記細胞はマウスのNIH-3T3型線維芽細胞である、請求項2に記載の細胞。
- 前記細胞は、第一のトール様受容体型(TLR-Typ)をコードする一または複数の遺伝子、および第二のトール様受容体型(TLR-Typ)をコードする一または複数の遺伝子を更に含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記細胞はCD14受容体をコードする遺伝子を更に有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記CD14受容体はヒトTLR4型(TLR-4)と組み合わせて共発現される、請求項5に記載の細胞。
- 前記レポーター遺伝子は分泌アルカリホスファターゼ(SEAP)をコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記レポーター遺伝子はβ-ガラクトシダーゼをコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記レポーター遺伝子はルシフェラーゼをコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記レポーター遺伝子はGFPをコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記誘導可能なプロモーターはセレクチン(内皮細胞白血球接着分子1、ELAM-1)に対するプロモーターである、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR1型(TLR-1)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR2型(TLR-2)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR3型(TLR-3)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR4型(TLR-4)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR5型(TLR-5)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR6型(TLR-6)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR7型(TLR-7)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR8型(TLR-8)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR9型(TLR-9)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR10型(TLR-10)を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR1型(TLR-1) およびヒトTLR2型 (TLR-2)からなるヘテロ二量体受容体を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR6型(TLR-6) およびヒトTLR2型 (TLR-2)からなるヘテロ二量体受容体を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- ヒトTLR7型(TLR-7) およびヒトTLR8型 (TLR-8)からなるヘテロ二量体受容体を発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 共受容体CD14型(MD2)を更に発現する、先行する請求項のいずれか一項に記載の細胞。
- 先行する請求項のいずれか一項に記載の少なくとも一の遺伝子導入細胞を有する培養容器を含む、検体中の発熱原を特異的に検出するためのキット。
- 誘導可能なレポーター遺伝子によりコードされた酵素に対する基質を含有する検出培地を含む、請求項26に記載のキット。
- 少なくとも二つのコンパートメントまたはウエルを有する細胞培養容器またはプレートを含むキットであって、
第一のウエルには少なくとも一つの第一のTLR型を発現する少なくとも一つの第一の遺伝子導入細胞、および第二のウエルには少なくとも一つの第二のTLR型を発現する第一の遺伝子導入細胞とは異なる第二の遺伝子導入細胞を含む、請求項26または27に記載のキット。 - ヒトTLR-1を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28に記載のキット。
- ヒトTLR-2を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28または29に記載のキット。
- ヒトTLR-3を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし30のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-4を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし31のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-5を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし32のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-6を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし33のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-7を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし34のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-8を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし35のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-9を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし36のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-10を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし37のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-2およびヒトTLR-6のヘテロ二量体を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし38のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-2およびヒトTLR-1のヘテロ二量体を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし39のいずれか一項に記載のキット。
- ヒトTLR-7およびヒトTLR-8のヘテロ二量体を発現する遺伝子導入細胞を含む少なくとも一つのウエルを含む、請求項28ないし39のいずれか一項に記載のキット。
- 検体中の発熱原を特異的に検出する方法であって、以下の工程:
(a) 少なくとも一つの特異的トール様受容体(TLR)または特異的TLRヘテロ二量体を発現する請求項1ないし25のいずれか一項に記載の少なくとも一つの遺伝子導入細胞の検体を調製することと、
(b) 前記検体を前記細胞と接触させることと、
(c) 誘導するために前記の検体-細胞-複合体をインキュベーションすることと、ならびに
(d) 誘導されたレポーター遺伝子により媒介された酵素活性を検出することとを含み、
前記の酵素活性の検出が、TLR型またはTLRヘテロ二量体に特異的な発熱原の存在を表わす方法。 - 前記工程(d)は、以下の工程:
(d1) 細胞の誘導可能なレポーター遺伝子によりコードされた酵素に対する基質を含む検出培地を調製することと、および
(d2) 前記誘導されたレポーター遺伝子により媒介された酵素活性を検出するために検出培地中で誘導された検体-細胞-複合体をインキュベーションすることと
を含む請求項42に記載の方法。 - 前記酵素活性は、アルカリホスファターゼ活性である、請求項42または43に記載の方法。
- 前記基質は5-ブロモ-4-クロロ-インドイルホスフェート (BICP)であり、前記検出は、青色変化および/または青色沈殿物によって示される、請求項44に記載の方法。
- 前記基質はp-ニトロフェニルリン酸(pNPP)であり、前記検出は溶液の黄色変化によって示される、請求項45に記載の方法。
- 前記溶液の黄色変化は測光的に定量される、請求項46に記載の方法。
- 前記酵素活性はβ-ガラクトシダーゼ活性である、請求項42または43に記載の方法。
- 前記基質は5-ブロモ-4-クロロ-3-インドシル-β-D-ガラクトピラノシド(X-GaI)であり、前記検出は青色変化および/または青色沈殿物によって示される、請求項48に記載の方法。
- 前記酵素活性はルシフェラーゼ活性である、請求項42または43に記載の方法。
- 前記基質はルシフェリンであり、必要に応じてATPおよびMg2+を添加し、前記検出は発光によって示される、請求項50に記載の方法。
- 前記酵素活性はGFPである、請求項42または43に記載の方法。
- 前記検体は人体または動物個体からの臨床検体である、請求項42ないし50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検体は血液である、請求項53に記載の方法。
- 前記検体は医療機器または医薬品の試料片である、請求項42ないし50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検体は、薬剤、薬剤成分、食品、食品成分、または食品もしくは薬剤の原料もしくは出発物質である、請求項42ないし50のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(c)における誘導のための前記検体-細胞-複合体のインキュベーションは、約37℃にて少なくとも約1時間ないし最大で約24時間行われる、請求項42ないし56のいずれか一項に記載の方法。
- 臨床検体における発熱原を特異的に検出するための、請求項1ないし25のいずれか一項に記載の遺伝子導入細胞の使用。
- 製品の無発熱原性を試験するための、請求項1ないし25のいずれか一項に記載の遺伝子導入細胞の使用。
- TLRアンタゴニストの特性を有する有効成分をスクリーニングするための、請求項1ないし25のいずれか一項に記載の遺伝子導入細胞の使用。
- CpG-モチーフを有するオリゴヌクレオチドをスクリーニングするための、請求項1ないし25のいずれか一項に記載の遺伝子導入細胞の使用。
- 前記キットは請求項26ないし41のいずれか一項に記載に従って用いられる、請求項58ないし61のいずれか一項に記載の使用。
- 前記方法は請求項42ないし57のいずれか一項に記載に従って行われる、請求項58ないし61のいずれか一項に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102006031483A DE102006031483B4 (de) | 2006-07-07 | 2006-07-07 | Zellulärer Pyrogentest |
DE102006031483.2 | 2006-07-07 | ||
PCT/EP2007/005946 WO2008003489A1 (de) | 2006-07-07 | 2007-07-05 | Zellulärer pyrogentest mittels toll-like rezeptor |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009542236A true JP2009542236A (ja) | 2009-12-03 |
JP5661280B2 JP5661280B2 (ja) | 2015-01-28 |
Family
ID=38566914
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009518758A Expired - Fee Related JP5661280B2 (ja) | 2006-07-07 | 2007-07-05 | トール様受容体を用いた細胞による発熱試験 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20090253134A1 (ja) |
EP (1) | EP2041172B1 (ja) |
JP (1) | JP5661280B2 (ja) |
KR (1) | KR20090039733A (ja) |
CA (1) | CA2656884A1 (ja) |
DE (1) | DE102006031483B4 (ja) |
WO (1) | WO2008003489A1 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014510924A (ja) * | 2011-04-08 | 2014-05-01 | ロケット フレール | グルコースポリマーに含まれる汚染物質の検出方法 |
JP2014516534A (ja) * | 2011-05-26 | 2014-07-17 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | 免疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド |
JP2014516533A (ja) * | 2011-05-26 | 2014-07-17 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | 免疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド |
JP2015532093A (ja) * | 2012-09-26 | 2015-11-09 | クック・バイオテック・インコーポレイテッドCook Biotechincorporated | 医療装置設計、製造および試験システム |
US9364531B2 (en) | 2010-12-30 | 2016-06-14 | Intervet Inc. | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
JP2018532409A (ja) * | 2016-06-29 | 2018-11-08 | ニョ, ガンNIU, Gang | 発熱性物質検出用細胞モデルの構築方法、及び細胞モデル並びに発熱性物質検出キット |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2690950B1 (en) * | 2011-03-29 | 2017-01-04 | Dynavax Technologies Corporation | Tlr8 transgenic animals |
DE102014223430B4 (de) | 2014-11-17 | 2022-03-03 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Kompetitives Immunassay-Testsystem zum Nachweis eines Pyrogens |
EP3072891A1 (en) | 2015-03-24 | 2016-09-28 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | New Toll-Like Receptor 9 Antagonists |
US11099189B2 (en) | 2017-10-17 | 2021-08-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Limulus amoebocyte lysate assay and method of same |
CN111484980A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-08-04 | 上海市食品药品检验所 | 一种单克隆细胞株及其构建方法和在热原测定中的应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003514219A (ja) * | 1999-11-02 | 2003-04-15 | カイロン コーポレイション | CpGレセプター(CpG−R)およびCpG−Rに関する方法 |
WO2004053057A2 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-24 | 3M Innovative Properties Company | Gene expression systems and recombinant cell lines |
JP2004357607A (ja) * | 2003-06-05 | 2004-12-24 | Japan Science & Technology Agency | エンドトキシン認識に関わる新規な分子及びそれをコードするポリヌクレオチド |
WO2005077408A2 (en) * | 2004-02-06 | 2005-08-25 | Vaxinnate Corporation | Compositions of pamps and listeria monocytogenes and methods of use |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030232055A1 (en) * | 2000-07-31 | 2003-12-18 | Ruslan Medzhitov | Innate immune system-directed vaccines |
JP2009500430A (ja) * | 2005-07-11 | 2009-01-08 | シーバイオ リミテッド | シャペロニン10により誘導される免疫調整方法 |
AU2006330562B2 (en) * | 2005-12-22 | 2013-05-02 | Baxter Healthcare S.A. | Improved monocyte activation test better able to detect non-endotoxin pyrogenic contaminants in medical products |
-
2006
- 2006-07-07 DE DE102006031483A patent/DE102006031483B4/de not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-07-05 JP JP2009518758A patent/JP5661280B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-05 KR KR1020097001520A patent/KR20090039733A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-07-05 US US12/307,711 patent/US20090253134A1/en not_active Abandoned
- 2007-07-05 CA CA002656884A patent/CA2656884A1/en not_active Abandoned
- 2007-07-05 EP EP07765068.7A patent/EP2041172B1/de active Active
- 2007-07-05 WO PCT/EP2007/005946 patent/WO2008003489A1/de active Application Filing
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003514219A (ja) * | 1999-11-02 | 2003-04-15 | カイロン コーポレイション | CpGレセプター(CpG−R)およびCpG−Rに関する方法 |
WO2004053057A2 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-24 | 3M Innovative Properties Company | Gene expression systems and recombinant cell lines |
JP2004357607A (ja) * | 2003-06-05 | 2004-12-24 | Japan Science & Technology Agency | エンドトキシン認識に関わる新規な分子及びそれをコードするポリヌクレオチド |
WO2005077408A2 (en) * | 2004-02-06 | 2005-08-25 | Vaxinnate Corporation | Compositions of pamps and listeria monocytogenes and methods of use |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6012055902; TAKEUCHI O. et al.,: 'TLR6: A novel member of an expanding Toll-like receptor family.' Gene Vol.231, Issues 1-2,, 1999, Pages 59-65 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9364531B2 (en) | 2010-12-30 | 2016-06-14 | Intervet Inc. | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
JP2014510924A (ja) * | 2011-04-08 | 2014-05-01 | ロケット フレール | グルコースポリマーに含まれる汚染物質の検出方法 |
JP2017018119A (ja) * | 2011-04-08 | 2017-01-26 | ロケット フレールRoquette Freres | グルコースポリマーに含まれる汚染物質の検出方法 |
JP2014516534A (ja) * | 2011-05-26 | 2014-07-17 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | 免疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド |
JP2014516533A (ja) * | 2011-05-26 | 2014-07-17 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | 免疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド |
US9315814B2 (en) | 2011-05-26 | 2016-04-19 | Intervet Inc. | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
JP2015532093A (ja) * | 2012-09-26 | 2015-11-09 | クック・バイオテック・インコーポレイテッドCook Biotechincorporated | 医療装置設計、製造および試験システム |
JP2018532409A (ja) * | 2016-06-29 | 2018-11-08 | ニョ, ガンNIU, Gang | 発熱性物質検出用細胞モデルの構築方法、及び細胞モデル並びに発熱性物質検出キット |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2041172A1 (de) | 2009-04-01 |
DE102006031483B4 (de) | 2009-12-24 |
US20090253134A1 (en) | 2009-10-08 |
CA2656884A1 (en) | 2008-01-10 |
DE102006031483A1 (de) | 2008-01-10 |
KR20090039733A (ko) | 2009-04-22 |
JP5661280B2 (ja) | 2015-01-28 |
WO2008003489A1 (de) | 2008-01-10 |
WO2008003489A8 (de) | 2008-05-02 |
EP2041172B1 (de) | 2013-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5661280B2 (ja) | トール様受容体を用いた細胞による発熱試験 | |
US10369162B2 (en) | Pharmaceutical composition including migratory factor for guiding pluripotent stem cells to damage | |
JPH11513490A (ja) | 生物学的活性ポリマー | |
D’Angelo et al. | The molecular basis for the lack of inflammatory responses in mouse embryonic stem cells and their differentiated cells | |
CN116042519B (zh) | 一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途 | |
CN102008360A (zh) | 一种用于修复脊髓损伤的人工神经网络样导管的构建 | |
CN109504766B (zh) | miRNA标志物miRNA-345-3p的应用 | |
Ng et al. | Interleukin-11 causes alveolar type 2 cell dysfunction and prevents alveolar regeneration | |
CN115584345A (zh) | 确定肿瘤电场治疗参数的方法 | |
Lenchenko et al. | Bird immunobiological parameters in the dissemination of the biofilm-forming bacteria Escherichia coli | |
Liu et al. | Yersinia ruckeri strain SC09 restrains innate immunity to promote infection process in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) via the type IV secretion system (T4SS) | |
Welte et al. | Retrieval of disseminated tumor cells colonizing the bone in murine breast cancer metastasis models | |
Debuque et al. | Methods for axolotl blood collection, intravenous injection, and efficient leukocyte isolation from peripheral blood and the regenerating limb | |
RU2362997C2 (ru) | Способ выявления нарушения функции фагоцитов при развитии рецидивирующих инфекционных процессов | |
RU2657430C2 (ru) | Способ прижизненной диагностики микобактериозов крупного рогатого скота | |
van Bree et al. | Development of an orthotopic medulloblastoma zebrafish model for rapid drug testing. | |
US20190192698A1 (en) | A method for obtaining indicator signals from a cell | |
RU2383891C1 (ru) | Способ качественной предварительной экспресс-диагностики онкологических заболеваний | |
CN110184370B (zh) | 一种检测约翰逊不动杆菌特异性引物及方法和应用 | |
WO2021225089A1 (ja) | 刺激物質と産生物質との相関関係を明らかにする方法 | |
CN110184371B (zh) | 一种检测皮特不动杆菌的特异性引物及其方法和应用 | |
Vincent et al. | Measuring MIF in biological fluids | |
RU2624511C1 (ru) | Способ оценки эффективности фаготерапии при лечении инфекционных заболеваний | |
CN104988156A (zh) | p53R175H特异性核酸适配体及其筛选方法和用途 | |
Moyakhe | Investigating the functionality of candidate susceptibility genes in ophthalmoplegic myasthenia gravis using patient-derived material |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100610 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121030 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130122 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130416 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140319 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140701 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140926 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20141104 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141203 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5661280 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |