JP2009531399A - 神経疾患の予防または治療のうち少なくともいずれかを行うための（ｓ）−ロスコビチンの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうち少なくとも１つを、神経疾患、特に神経病変に関連した神経疾患の予防または治療のうち少なくともいずれか一方を目的とした医薬品の製造に使用することに関する。

Description

本発明は、神経疾患、特に興奮毒性という現象に特に関係した神経病変に関連のある神経疾患の、治療および予防の分野に関する。より具体的には、本発明は（Ｓ）−ロスコビチン、化学名：６（ベンジルアミノ）２（Ｓ）［［１（ヒドロキシメチル）］プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）の新規な治療用途に関する。

興奮毒性とは、グルタミン酸受容体を過剰に活性化してニューロン死をもたらす興奮性アミノ酸の蓄積に相当する（非特許文献１）。興奮性アミノ酸とは、アスパラギン酸、カイニン酸およびその誘導体の一部など数多くのメンバーを含んでなる一群のグルタミン酸構造アナログを表し、強力なニューロン興奮剤として知られている。グルタミン酸は、疑う余地なく最も良く解析された興奮性アミノ酸である。興奮性アミノ酸の作用は、ＮＭＤＡ型、ＡＭＰＡ型およびカイニン酸型の、代謝調節型かつイオンチャネル型グルタミン酸受容体によって伝達される。

よって興奮毒性は、数々の神経疾患、特に急性および慢性の神経疾患に関連した神経病変の発症において主要な役割を果たしている（非特許文献２〜４）。
従って、特に興奮毒性の現象に関連している神経病変の予防または治療のうち少なくともいずれかを行うために神経保護作用を有する化合物を同定かつ解析することは好都合なことである。

ロスコビチンのＲ異性体およびラセミ混合物をニューロンのアポトーシスの治療において使用することは、既に特許文献１に記載されている。この特許文献は、ロスコビチンの抗有糸分裂特性を明らかにし、特に、細胞の分裂サイクルもしくはアポトーシスに関与する種々のサイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）タンパク質に対するロスコビチンの阻害活性を示している。その結果に基づいて、かつ細胞の分裂サイクルとアポトーシスとの周知の関係（非特許文献５）を拠り所として、上記特許文献の著者らはニューロンのアポトーシスに対しロスコビチンが作用する可能性を示唆している。

いくつかの化合物がすでに神経病変の治療に使用されているものの、ある種の毒性のような副作用を有する場合もあれば、効果が不十分な場合もある。
欧州特許第０８７４８４７号明細書 オルニー、ＪＷ（Ｏｌｎｅｙ ＪＷ）およびイシマル、ＭＪ（Ｉｓｈｉｍａｒｕ ＭＪ）、１９９９年、「Ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ．Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ」、ヒューマナプレス社（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ）、ｐ．１９７−２１９ チェ（Ｃｈｏｉ）、１９９８年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，ｖｏｌ．１１，ｐ．４６５−４５９ コイル（Ｃｏｙｌｅ）およびパットファルケン（Ｐｕｔｔｆａｒｃｋｅｎ）、１９９３年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２６２，ｐ．６８９−６９５ リプトン（Ｌｉｐｔｏｎ）およびローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）、１９９４年、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，ｖｏｌ．３３０，ｐ．６１３−６２２ バーミューレン（Ｖｅｒｍｅｕｌｅｎ）ら、２００３年、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆ．，ｖｏｌ．３６（３），ｐ．１３１−４９

従って、神経病変を治療するための特性が改善された化合物が依然として必要とされている。

驚くべきことに、本発明者らは、ロスコビチンのＳ異性体により上述の不都合を全てまたは部分的に解消することが可能となること、ならびにロスコビチンのＳ異性体はＲ異性体よりも優れた神経保護効果を有することを発見した。よって本発明者らはここで、特定の化合物すなわち（Ｓ）−ロスコビチンを、特に興奮毒性の現象に関係した神経病変の効果的な予防または治療のうち少なくともいずれかを行うために同定かつ解析した。

（Ｓ）−ロスコビチンのこの神経保護作用は特に予想外のことである。具体的には、（Ｓ）−ロスコビチンは、細胞の分裂サイクルもしくはアポトーシスに関与する種々のサイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）タンパク質の阻害については、（Ｒ）−ロスコビチンよりも弱い。特に、ｃｄｋ−５、ｃｄｋ−１／サイクリンＢおよびｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼタンパク質に対する（Ｓ）−ロスコビチンの阻害活性は、（Ｒ）−ロスコビチンの阻害活性より低い（Ｄｅ Ａｚｅｖｅｄｏら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４３，５１８−５２６，１９９７；Ｂａｃｈら，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８０，３５，３１２０８−３１２１９）。ちなみにこれらのキナーゼタンパク質、特にｃｄｋ−５およびｃｄｃ２／サイクリンＢは、ニューロン死において役割を果たすことが知られている（ＤｈａｖａｎおよびＴｓａｉ，２００１；Ｂｕｓｓｅｒら、１９９８）。

第１の態様によれば、本発明の目的は、（Ｓ）−ロスコビチンすなわち６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）］プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうち少なくとも１つを、神経疾患の予防または治療のうち少なくともいずれかのための医薬品を製造するために使用することである。

「（Ｓ）−ロスコビチン」とは、下式

の化合物、６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）］プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）を指し、特にエナンチオマー過剰率が９０％以上、特に９５％以上、さらには９９％以上、あるいは９９．５％以上にもなるものを指す。

エナンチオマー過剰率は、次式すなわち（（Ｓ）−ロスコビチン−（Ｒ）−ロスコビチン／（Ｓ）−ロスコビチン＋（Ｒ）−ロスコビチン）×１００で定義することができる。
（Ｓ）−ロスコビチンは、当業者に良く知られた方法に従って、例えばＨａｖｌｉｃｅｋら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，１９９７，４０，４０８およびＷａｎｇら，Ｔｅｔｒａｈｅｆｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，２００１，１２，２８９１に記載されているような、２，６−ジクロロプリンからの３工程の合成によって得ることができる。

（Ｓ）−ロスコビチンは、アレクシスコーポレイション（Ａｌｅｘｉｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から参照番号ＡＬＸ−３５０−２９３−Ｍ００１として入手することもできる。

「医薬として許容可能な塩」とは、医薬としての使用に適した塩を意味する。医薬として許容可能な塩の例としては、ベンゼンスルホン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、クエン酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、ヨウ素酸塩、イセチオン酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、メチレンビス−ｂ−オキシナフトエ酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、テオフィリン酢酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩が挙げられる。

（Ｓ）−ロスコビチンの医薬として許容可能な塩は、当業者に良く知られた方法により得ることができる。
概して「神経疾患」とは、「神経病変」を特徴とする疾患を意味する。「神経病変」とは、神経系の解剖学的かつ生理学的特徴における構造的変化を指す。該病変は微視的な場合もあれば肉眼で見える場合もある。該病変は外傷に由来する場合もあれば、疾患、特に急性もしくは慢性の神経疾患を原因とする場合もある。これらの神経病変は様々な種類の細胞、ニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、ミクログリアおよびこれらの細胞の前駆細胞に影響を及ぼす可能性がある。

ある場合には、神経病変は興奮毒性の現象と関係している。
特に、神経病変の予防または治療のうち少なくともいずれか一方は（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護活性と関連している。

「神経保護」とは、化合物が、健康な神経細胞または病気の神経細胞のうち少なくともいずれかの死を予防する能力を指す。神経細胞とは神経系の細胞、特に脳の細胞を意味する。これらの神経細胞は、特にニューロン、アストロサイトおよびオリゴデンドロサイトから選ばれる場合がある。

神経保護は、神経系の病気、特に急性もしくは慢性の神経系の病気の場合に特に有利である。具体的には、これらの病気は細胞死をもたらす神経細胞の変性と関連する場合がある。従ってこのことから、上記の神経細胞または該神経細胞の少なくとも一部であって健康なものまたは病気のもののうち少なくともいずれかの死について、予防または遅延のうち少なくともいずれかを行うために化合物を使用することが可能となる。

例えば、脳卒中の後には一部の神経細胞が即座に（またはほぼ即座に）死ぬことによって、いわゆる「壊死性コア」が明確となる。しかしながら、壊死性コアに隣接して、細胞が徐々に冒されてから細胞死に至る、いわゆる「半影帯（ペナンブラ）」領域も存在する。

神経保護作用を有するある種の治療薬を使用することにより、これらの細胞の少なくとも一部が神経死に向かうプロセスを抑制することができる。
本発明の使用の特定の実施形態によれば、神経疾患は慢性神経疾患である。

「慢性神経疾患」とは、該疾患の症状が初期には軽微であるが、徐々に、例えば数年かけて進行かつ悪化しうる神経疾患を指す。
慢性神経疾患の中には次のものを挙げることができる：
− 神経変性疾患（Ａｄａｍｓ ａｎｄ Ｖｉｃｔｏｒ；Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ ｂｏｏｋ ｃｏｍｐａｎｙ；１９９５）であって：
− 錐体外路症候群を伴う疾患、特にパーキンソン病、進行性核上性麻痺（スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群）、多系統萎縮症および線条体黒質変性症；
− 認知症、特にアルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体病、前頭側頭型認知症、大脳皮質基底核変性症およびハンチントン舞踏病、ならびに
− その他の神経変性疾患、特に筋萎縮性側索硬化症およびクロイツフェルト・ヤコブ病（Ｃｈｏｉ，１９８８；Ｃｏｙｌｅ ａｎｄ Ｐｕｔｔｆａｒｃｋｅｎ，１９９３；Ｌｉｐｔｏｎ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，１９９４）；
− 脱髄疾患、特に多発性硬化症、急性散在性アレルギー脳炎、Ｄｅｖｉｃ病（ニューロミエロパシー）およびミエリンの障害を伴う遺伝性疾患、特にペリツェウス・メルツバッハー病。

別の特定の実施形態によれば、神経疾患は急性神経疾患、特に虚血性脳血管傷害である。
「急性神経疾患」とは、該疾患の症状および臨床的兆候が初期において非常に著明であり、急速に、例えば数日後には安定化する神経疾患を指す。

急性神経疾患には：
− てんかん；
− てんかん重積状態；
− 脳卒中、特に虚血性のもの；
− 脳出血；
− 心停止時の脳低酸素状態；
− 頭蓋外傷性障害；ならびに
− 局所性脳低酸素状態または全脳低酸素状態のうち少なくともいずれか一方を引き起こす神経疾患であって、特に体外循環時に、特に心血管インターベンションおよび頸動脈手術の際に発生するもの、が含まれる。

脳出血とは脳実質内の出血および髄膜出血を指す。髄膜出血の後では血管けいれんに関連して虚血が生じる場合がある。（Ｓ）−ロスコビチンは髄膜出血後の脳虚血を防止または低減すると考えられる。

特に、ある種の脳出血は、血栓溶解剤、特に組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）の使用と関係する場合がある。詳細には、虚血性脳卒中から１時間のうちに血栓溶解剤を使用すると脳出血を引き起こす場合がある。このような脳出血は、虚血性傷害の際の血栓溶解処置の主な副作用である。従って、（Ｓ）−ロスコビチンは、血液脳関門を保護することによって脳出血が発生するリスクを低減するために、血栓溶解剤との併用において有利であると考えられる。（Ｓ）−ロスコビチンは脳内皮細胞において抗アポトーシス剤として作用すると考えられる。脳内皮細胞は、血液脳関門の主要な構成要素のうちの１つである。

本発明の医薬品は、少なくとも１つの抗神経変性剤、特に慢性かつ／または急性の神経疾患（より具体的には虚血性脳卒中）の治療または予防のうち少なくともいずれかを意図した薬剤をさらに含んでもよい。

「抗神経変性剤」とは、神経系の変性の治療または予防のうち少なくともいずれかを行うための化合物を指す。抗神経変性剤の例には、ドネペジル、セレギリン、リバスチグミンおよびガランタミンのようなアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ならびにメマンチンおよびリルゾールのような抗グルタミン酸作動薬が挙げられる。従って、（Ｓ）−ロスコビチンを、アルツハイマー病またはその他の認知症、例えば血管性認知症、レビー小体病、前頭側頭型認知症、大脳皮質基底核変性症、ハンチントン舞踏病もしくはパーキンソン病の認知症などについて、抗コリンエステラーゼ性医薬品（ドネペジル、リバスチグミン、ガランタミン）または抗グルタミン酸作動性医薬品（メマンチン）と併用することができる。（Ｓ）−ロスコビチンを、筋萎縮性側索硬化症についてリルゾールと併用することも考えられる。

（Ｓ）−ロスコビチンおよび抗神経変性剤を、同時に、別々に、または時間を経て段階的に、投与することが可能である。
（Ｓ）−ロスコビチンおよび抗神経変性剤は、本発明の医薬品において１０／１〜１／１０のモル比で存在することができる。

本発明の医薬品は、少なくとも１つの血栓溶解剤をさらに含むことができる。
「血栓溶解剤」とは、血液の塊を溶解することのできる物質、例えば組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼおよびデスモテプラーゼなどを指す。

（Ｓ）−ロスコビチンおよび血栓溶解剤を、同時に、別々に、または時間を経て段階的に、投与することが可能である。
（Ｓ）−ロスコビチンおよび血栓溶解剤は、本発明の医薬品において１００／１〜１／１００のモル比で存在することができる。

血栓溶解剤は副作用を有する場合があり、例えば脳出血を引き起こすことがある。（Ｓ）−ロスコビチンを、少なくとも１つの血栓溶解剤（特にｔ−ＰＡ）と併用することにより、副作用の一部（得に脳出血のリスク）を低減することができる。

本発明の医薬品は、少なくとも１つの血小板凝集阻害剤をさらに含んでもよい。
「血小板凝集阻害剤」の例には、アセチルサリチル酸、塩酸チクロピジン、クロピドグレル、ジピリダモール、アブシキシマブおよびフルルビプロフェンが挙げられる。

（Ｓ）−ロスコビチンを、虚血性脳卒中について血小板凝集阻害剤と併用することができる。
（Ｓ）−ロスコビチンおよび血小板凝集阻害剤を、同時に、別々に、または時間を経て段階的に、投与することが可能である。

（Ｓ）−ロスコビチンおよび血小板凝集阻害剤は、本発明の医薬品において１０／１〜１／１０のモル比で存在することができる。
本発明の医薬品は様々な経路で投与することが可能である。例えば、本発明の医薬品に使用可能な投与方法には、経口投与、直腸投与、経皮投与、経肺投与、経鼻投与、舌下投与および非経口投与、特に皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、脊髄内投与、関節内投与、胸膜内投与および腹腔内投与が挙げられる。

特に、神経疾患が急性神経疾患である場合、本発明の医薬品の好ましい投与経路は、静脈内投与、筋肉内投与、舌下投与および経皮投与であり、好ましくは静脈内投与および筋肉内投与、最も好ましくは静脈内投与である。

特に、神経疾患が慢性神経疾患である場合、本発明の医薬品の好ましい投与経路は経口投与である。
本発明の医薬品は、１回または複数回に分けて投与することもできるし、持続放出として、特に連続潅流で投与することもできる。

本発明の医薬品は、様々な形態、具体的には、錠剤、カプセル剤、ピル剤、シロップ剤、懸濁剤、溶液、散剤、顆粒剤、乳剤、ミクロスフェアおよび注射可能な溶液からなる群から選択された形態であってよく、好ましくは錠剤、注射可能な溶液、舌下用スプレー剤および皮膚パッチ剤でよい。

上記の様々な形態は、当業者に良く知られた方法で得ることができる。
非経口投与に適した製剤、この投与経路に適した医薬として許容可能なビヒクル、ならびに相応の製剤化技法および投与技法を、当業者に良く知られた方法で、具体的には手引書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第２０版、２０００年、米国ペンシルバニア州イーストン所在のマック・パブリシング・カンパニー（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．））に記載の方法で実施することができる。

別の特定の実施形態によれば、６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）プロピル］アミノ］−９‐イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうちの少なくとも１つは、医薬品中に単位用量あたり５０ｍｇ〜５ｇ、特に１００ｍｇ〜２ｇの範囲の量で存在する。

本発明の医薬品は、１日あたり１回または複数回投与、好ましくは１日あたり１〜４回投与として投与することができる。
好都合には、（Ｓ）−ロスコビチンを１日あたり１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与することができる。

好都合には、医薬品は、５０ｍｇ〜５ｇの範囲の量の６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうちの少なくとも１つを含んでなる。

本発明の使用の別の特定の実施形態によれば、医薬品は医薬として許容可能な担体をさらに含んでなる。
「医薬として許容可能な担体」とは、医薬製品における使用に適した任意の材料を指す。

例えば、医薬として許容可能な担体には、ラクトース、でんぷん、任意選択で修飾されたもの、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストロース、硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、乳酸カルシウム、デキストレート、イノシトール、炭酸カルシウム、グリシン、ベントナイト、ポリビニルピロリドンおよびこれらの混合物が挙げられる。

本発明の医薬品は、該組成物の総重量に対する比率が重量比で５％〜９９％、特に重量比で１０％〜９０％、特定的には重量比で２０％〜７５％の範囲の、医薬として許容可能な担体を含むことができる。

本発明のその他の利点および特徴については、以下の図面および実施例から明らかとなろう。
以下の図面および実施例は例示のために示すものであり、限定を意味するものではない。

実施例
Ｉ．ニューロン死に対する（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の検討
Ｉ．１．ｉｎ ｖｉｔｒｏ興奮毒性モデル：海馬細胞の神経混合培養物における（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の検討
このモデルは、胚齢１８日（Ｅ１８）のラットの海馬から採取してグルタミン酸アナログであるカイニン酸（ＫＡ）に曝露したニューロン細胞およびグリア細胞の混合培養物に相当する。ｉｎ ｖｉｖｏにおける細胞の環境をより十分に反映するために、ニューロンの単独培養系よりも上記混合培養系が選択された。この培養条件下では、アストロサイトおよびオリゴデンドロサイトはカイニン酸処理の影響を受けなかった。図８は、このようにして厳密なニューロンの複合的興奮毒性細胞モデルにおいて観察されたニューロン死を例証している。

グルタミン酸作動性のアゴニストであるカイニン酸が、本実験における興奮毒性剤としてｉｎ ｖｉｔｒｏで選択された。この選択は、ネクローシス型の細胞死をもたらすＮＭＤＡアゴニストと比較してカイニン酸がプログラム細胞死を誘発することを示したｉｎ ｖｉｖｏ実験に特に基づいたものである（Ｐｏｒｔｅｒａ−Ｃａｉｌｌｉａｕ；１９９７）。このプログラム細胞死は急性および慢性の神経疾患においても観察されることが多い。グルタミン酸の重要性および関連性は、市販の抗グルタミン酸作動性医薬品がこれまでアルツハイマー病（メマンチン、Ｒｅｉｓｂｅｒｇ ２００３；Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ：３４８：１３３３−１３４１）および筋萎縮性側索硬化症（リルゾール）のヒトに用いられているという事実から、近年際立ってきた。

Ｉ．１．１．実験プロトコール
海馬細胞培養物を、胚齢１８日（Ｅ１８）のウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラットから、Ｍｅｄｉｎａら（１９９４，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．，７２，４５６−４６５）に記載されているようにして調製した。ｉｎ ｖｉｔｒｏで１０日間培養した後、細胞を、カイニン酸または（Ｓ）−ロスコビチンのうち少なくともいずれか一方の存在下でインキュベートした。培養物を濃度２００μＭのカイニン酸に５時間曝露した。この条件により培養物中のニューロンを４０％〜５０％死滅させることが可能である。（Ｓ）−ロスコビチンは、５種類の異なる濃度（０．０５μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭおよび５μＭ）について、単独またはカイニン酸と組み合わせて試験した。培養物中の細胞への（Ｓ）−ロスコビチンの添加は、カイニン酸と同時、またはカイニン酸の添加の前（１時間前）もしくは後（１、２、もしくは３時間後）とした。

培養物中の細胞を、カイニン酸または試験化合物のうち少なくともいずれか一方とともに５時間インキュベートしてからニューロン死を観察した。対照はＤＭＳＯおよびＨ_２Ｏのビヒクルのみとともにインキュベートした。

ニューロン死は、位相差顕微鏡下での観察と、細胞死のマーカーであるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の使用とにより評価した。ヨウ化プロピジウムは、死細胞の核酸に特異的に結合する赤色のマーカーである。代表の視野のニューロンを計数した。３例の個々の培養物から、１条件あたり少なくとも５視野（ニューロン総数およそ１５０）について調査した。

各々の実験条件について、ニューロン死滅率（％）を、ヨウ化プロピジウムで標識されたニューロンの数と、位相差顕微鏡観察で示されたニューロンの総数との比で表した。
試験化合物の神経保護作用を測定するために、相対的ニューロン死（ＲＮＤ）を算出し、神経保護指数（ＮＩ）を以下のように定義した：
ＲＮＤ＝ニューロン死（％）（ＫＡ＋試験化合物）−ニューロン死（％）（対照）／ニューロン死（％）（ＫＡ）−ニューロン死（％）（対照）
ならびに
ＮＩ＝１００％−ＲＮＤ
定義から、カイニン酸のみで処理した細胞における相対的ニューロン死（％）（ＲＮＤ）は１００％、神経保護指数（ＮＩ）は０となった。

５０％の神経保護指数（ＮＩ）を得るために必要な試験化合物の濃度をＣＮ５０：神経保護濃度とした。
Ｉ．１．２結果
Ｉ．１．２．１（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用
ニューロン死に対する（Ｓ）−ロスコビチンの作用（図１に示す）を、培養の中間期にカイニン酸と同時に（Ｓ）−ロスコビチンを添加した場合について評価した。ニューロン死（％）（ＲＮＤ）はカイニン酸処理群では１００％であったが、０．０５μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、および５μＭの（Ｓ）−ロスコビチンの存在下ではそれぞれ８１．５％、５０．８％、２７．９％、２１．６％および１５．３％であった。

先に定義した神経保護指数（ＮＩ）は、０．０５μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、および５μＭの（Ｓ）−ロスコビチン用量についてそれぞれ１８．５％、４９．２％、７２．１％、７８．４％および８４．７％であった。

従って（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用は用量依存的である。
先に定義した神経保護濃度は、（Ｓ）−ロスコビチンについて０．１９μＭと測定された（図２）。

Ｉ．１．２．２ （Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の治療濃度域の測定
（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の治療濃度域（図３に示す）を、該化合物が培養の中間期にカイニン酸の添加と同時またはその前（１時間前、Ｔ−１）もしくは後（１時間後、２時間後もしくは３時間後；Ｔ＋１、Ｔ＋２、Ｔ＋３）に添加された場合について、ニューロンを保護する同化合物の能力を計測することにより測定した。様々な濃度の（Ｓ）−ロスコビチンについて検討した（０．５μＭ、１μＭおよび５μＭ）。ニューロン死（％）（ＲＮＤ）は、カイニン酸処理群では様々な試験時間において１００％であり、０．５μＭ、１μＭ、および５μＭの（Ｓ）−ロスコビチンの存在下においてはそれぞれ、Ｔ−１では２３．３％、−１０．４％、−１４．４％、Ｔ０では２７．９％、２１．６％、１５．３％、Ｔ＋１では６４．９％、３０．７％、１９．５％、Ｔ＋２では６６．４％、４４．８％、１４．７％、ならびにＴ＋３では７１．０％、７１．７％、６５．３％であった。

先に定義した神経保護指数（ＩＮ）は、０．５μＭ、１μＭ、および５μＭの（Ｓ）−ロスコビチン用量についてそれぞれ、Ｔ−１では７６．６％、１１０．４％、１１４．４％、Ｔ０では７２．１％、７８．４％、８４．７％、Ｔ＋１では３５．１％、６９．３％、８０．５％、Ｔ＋２では３３．６％、５５．２％、８５．３％、ならびにＴ＋３では２９．０％、２８．３％、３４．７％であった。

（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用は、該化合物が毒性薬剤後の２時間までに培養物に添加される場合に観察される。加えて、（Ｓ）−ロスコビチンの作用は用量依存的である。さらに、（Ｓ）−ロスコビチンは、カイニン酸によって引き起こされるニューロン死に対する予防効果を有する。

Ｉ．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏ複合的興奮毒性モデル：ラット海馬の器官培養物における（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の検討
器官培養物は、培養下におかれた器官移植片である。該培養物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ条件の制御と、ｉｎ ｓｉｔｕ環境に近い組織の複雑性との組み合わせという利点を有している。具体的には、この培養物中では神経組織の器官構造が維持される（Ｓｔｏｐｐｉｎｉら，１９９１，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．３７，ｐａｇｅｓ １７３−１８２）。該培養物はかなり広がるが立体性を維持し、錐体神経の典型的な形態が保たれる。シナプスの構成および固有の海馬繊維の走行はｉｎ ｖｉｖｏの状態と同じように展開される。同様に、培養物中のシナプスの成熟および形成プロセスは、ｉｎ ｖｉｖｏについて記述されたプロセス（Ｍｕｌｌｅｒら，１９９３，Ｄｅｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，ｖｏｌ．７１，ｐａｇｅｓ ９３−１００；Ｂｕｃｈｓら，１９９３，Ｄｅｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，ｖｏｌ．７１，ｐａｇｅｓ ８１−９１）を反映している。

Ｉ．２．１ 実験プロトコール
２日齢（Ｐ２）のラットの海馬を用いて、Ｓｔｏｐｐｉｎｉら，１９９１，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．３７，ｐａｇｅｓ １７３−１８２の方法により器官培養を実施した。ラットは断頭により屠殺する。脳を解剖用媒体（１×ＰＢＳ、５．８５ｇ／ｌグルコース）中で４℃にて解剖した。組織チョッパー（ＭｃＩｌｗａｉｎ）を用いて厚さ４００μｍの横断切片を作製する。分離させたら、切片を多孔質（０．４μＭ）かつ透明なメンブレンインサート（直径３０ｍｍ）上で、培地（１×ＭＥＭ、２０％ウマ血清、１ｍｇ／ｌインスリン）中に置く。

培地全体を２日ごとに交換する。培養物は、ＣＯ_２濃度が高く（５％）湿潤な雰囲気のインキュベータ内で３７℃に維持する。
培養１７日後、血清を含んだ培地を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ；７．５μＭ）を含む新鮮な無血清培地に交換する。ＰＩ添加の２４時間後、この培地を、ＰＩとカイニン酸（５μＭ）または（Ｓ）−ロスコビチン（２０μＭ）のうち少なくともいずれか一方とを含んだ新鮮な無血清培地に交換する。対照は、ビヒクル（ＤＭＳＯおよびＨ_２Ｏ）のみとともにインキュベートした。２４時間後に培養物を４％パラホルムアルデヒド溶液で固定する。

細胞死は、ヨウ化プロピジウム標識を使用してＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）により定量する。ＰＩの強度は、各処理条件についてＣＡ３領域中で計測する。
神経保護作用は、前節（Ｉ．１．１）で定義したような相対的ニューロン死のパラメータ（ＲＮＤ）として測定することにより調べる。

Ｉ．２．２ 結果
ＰＩの蛍光強度は、カイニン酸および（Ｓ）−ロスコビチンの両方で処理した培養物のＣＡ３領域において、カイニン酸のみで処理したものと比較して著しく低減される（図４ａ）。カイニン酸により誘発された細胞死について、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用した定量も実施した。本発明者らの結果から、ＲＮＤは、ＫＡ／（Ｓ）−ロスコビチン存在下では３０．７％であり、ＫＡのみの存在下では任意に１００％であることが示された（図４ｂ）。

これらの結果から、一方ではラット海馬の器官培養物に対して（Ｓ）−ロスコビチンが毒性作用をもたないこと、他方ではニューロン死に対する（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用が示された。

Ｉ．３ ｉｎ ｖｉｖｏ虚血モデル：マウスの持続性局所虚血モデルに対する（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用の検討
このモデルは、成体動物の中大脳動脈の電気凝固による片側性閉塞で構成される（ＭＣＡｏ：Ｔａｍｕｒａら，１９８１，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ，ｖｏｌ．１，ｐａｇｅｓ ５３−６０の改変法）。マウスでは、このモデルにより同側半球の側頭‐頭頂皮質にほぼ例外なく発症する。この病変はＭＣＡｏ後３時間で明らかとなり、その大きさは時間と共に拡がり２４時間で最大に達する（Ｇｕｅｇａｎら，１９９８，Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ，ｖｏｌ．１５４，ｐａｇｅｓ ３７１−３８０）。この段階では、虚血領域にある細胞の大多数がアポトーシス細胞の形態学的かつ生化学的特徴を有している（Ｇｕｅｇａｎら，１９９８，Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ，ｖｏｌ．１５４，ｐａｇｅｓ ３７１−３８０；Ｇｕｅｇａｎら，１９９８，Ｍｏｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，ｖｏｌ ５５，ｐａｇｅｓ １３３−１４０）。

Ｉ．３．１ 実験プロトコール
体重２０〜２５ｇの６０日齢の雄のＣ５７ｂ／６マウスに、Ｔａｍｕｒａら，１９８１，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ，ｖｏｌ．１，ｐａｇｅｓ ５３−６０）の改変法に従って虚血を発生させた（Ｇｕｅｇａｎら，１９９８， Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ，ｖｏｌ．１５４，ｐａｇｅｓ ３７１−３８０）。抱水クロラール（５０ｍｇ／ｋｇ）で動物を麻酔した。中大脳動脈（ＭＣＡ）を外科的に露出させ、次いでバイポーラクランプを用いて電気凝固させた。動物の体温は外科処置の間中３０℃に維持した。ＭＣＡの閉塞後３時間で頸椎脱臼により動物を屠殺した。

（Ｓ）−ロスコビチンを、２つの方法すなわち脳室内投与および全身投与によって投与した。脳室内（ＩＣＶ）経路については、（Ｓ）−ロスコビチンを、クレブス‐リンゲル液中５００μＭの濃度で、ＭＣＡの閉塞の４８時間前に動物の右側脳室に移植された浸透圧マイクロポンプ（Ａｌｚｅｔ）を用いて次の定位座標すなわち前後方向＝０、横方向＝−０．８、深さ＝２（ブレグマに対して）に投与した。全身性の経路（ＩＰ）については、（Ｓ）−ロスコビチンを、０．０５ＭのＨＣｌ溶液中２５ｍｇ／ｋｇの濃度で、ＭＣＡの閉塞の１５分前および１時間後の２回の腹腔内注射により投与した。対照の動物にはビヒクル（ＩＣＶについては１％ＤＭＳＯ、ＩＰについては０．０５ＭのＨＣｌ）のみを与えた。

脳の病変の体積を、２，３，５トリフェニル塩化テトラゾリウム（ＴＴＣ）で着色することにより測定した。この着色は、ミトコンドリア酵素の正しい機能に基づいている。着色の強度は機能的なミトコンドリアの数を反映している。よってこの着色により、傷害を受けた領域を健康な領域から区別することが可能となる。動物は、ＭＣＡの閉塞後３時間で頸椎脱臼により屠殺した。脳を解剖して切り分け、１ｍｍ厚の冠状切片とした。次いでこの切片を１％ＴＴＣ溶液で１０分間着色し、ＮＩＨのＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて解析した。ＴＴＣ着色強度に基づき、３時間の時点で３つの領域、すなわち無色の壊死性コア、わずかに着色したペナンブラ領域、および高度に着色した健康な組織を測定することが可能であった（図５）。よって、この壊死性コア、ペナンブラ領域、および病変全体（コア＋ペナンブラ）の体積を測定した。

Ｉ．３．２ 結果
結果を図６に示す。脳室内（ＩＣＶ）投与法を用いた（Ｓ）−ロスコビチンの投与により、ＭＣＡの閉塞後３時間で病変の総体積が対照と比較して２７．７％低減された（対照群は１８．７４ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群では１３．５４ｍｍ^３）。壊死性コアの体積はこの２群間で変化のないまま（対照群は６．０６ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群では５．３９ｍｍ^３）であるが、ペナンブラ領域の大きさについては、（Ｓ）−ロスコビチン投与群について対照群と比較すると顕著な低下（３５．８％）が観察された（対照群は１２．６８ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群は８．１４ｍｍ^３）（図６Ａ）。

全身投与法（ＩＰ）を用いた（Ｓ）−ロスコビチンの投与により、ＭＣＡの閉塞後３時間で病変の総体積が対照と比較して３０．７％低減された（対照群は２０．３４ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群は１４．１０ｍｍ^３）。壊死性コアの体積はこの２群間で変化のないまま（対照群は５．０３ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群では４．８８ｍｍ^３）であるが、ペナンブラ領域の大きさについては、（Ｓ）−ロスコビチン投与群について対照群と比較すると顕著な低下（３８．９％）が観察された（対照群は１５．３１ｍｍ^３、（Ｓ）−ロスコビチン投与群は９．２２ｍｍ^３）（図６Ｂ）。

これらの結果は、（Ｓ）−ロスコビチンが、マウスの持続性局所虚血モデルという重症モデルにおいて病変の体積に対する神経保護作用を有することを示している。（Ｓ）−ロスコビチンはペナンブラ領域の体積に作用するが病変の壊死性コアに対しては作用しない。さらに、これらの結果は、（Ｓ）−ロスコビチンが同化合物の全身投与後に有効であることを示し、（Ｓ）−ロスコビチンが脳血管関門を通過することができることを示唆している。

ＩＩ （Ｓ）−ロスコビチンおよび（Ｒ）−ロスコビチンの神経保護作用の比較
ニューロン死に対する（Ｓ）−ロスコビチンの作用を、上記のＩ．１．で述べたようなｉｎ ｖｉｔｒｏの実験系において（Ｒ）−ロスコビチンの作用と比較した。

（Ｒ）−ロスコビチン存在下におけるニューロン死（％）（ＲＮＤ）を図７に示す。
濃度０．５μＭの（Ｓ）−ロスコビチンにより２７．９％のＲＮＤを得ることが可能となるが、濃度０．５μＭの（Ｒ）−ロスコビチンで得られるＲＮＤは６２％である。このように、上記の条件下では、（Ｓ）−ロスコビチンは（Ｒ）−ロスコビチンに比べて２倍のニューロンについて死滅を抑制することができる。

（Ｒ）−ロスコビチンの神経保護濃度（ＣＮ５０）は０．６５μＭであり、（Ｓ）−ロスコビチンについては０．１９μＭである。従って同数のニューロンの死滅を抑制するためには（Ｓ）−ロスコビチンの３倍以上の（Ｒ）−ロスコビチンが必要である。

以上の実験は、（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用が（Ｒ）−ロスコビチンの神経保護作用よりも大きいことを明らかに示している。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ興奮毒性モデル：カイニン酸に曝露した海馬細胞の神経混合培養物（アストロサイト、ニューロン、オリゴデンドロサイト）における（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用を示すヒストグラム。^＊＊ｐ＜０．０５；^＊ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 カイニン酸に曝露した海馬細胞の神経混合培養物における（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護濃度（ＣＮ５０）を示すグラフ。 カイニン酸に曝露した海馬細胞の神経混合培養物に対する、様々なインキュベーション時間での（Ｓ）−ロスコビチンの作用を示すヒストグラム。^＊＊ｐ＜０．０５；^＊ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 ｉｎ ｖｉｔｒｏ複合的興奮毒性モデル：ラット海馬の器官切片培養物における（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用を示す図。 （Ａ）ヨウ化プロピジウムで標識し、ＤＭＳＯとＨ_２Ｏ（対照）、またはカイニン酸、またはカイニン酸と（Ｓ）−ロスコビチン、のいずれかとともにインキュベーションした後の、ラット海馬ＣＡ３領域における細胞死の観察。 （Ｂ）ヨウ化プロピジウムで標識し、ＤＭＳＯとＨ_２Ｏ（対照）、またはカイニン酸、またはカイニン酸と（Ｓ）−ロスコビチン、のいずれかとともにインキュベーションした後の、ラット海馬ＣＡ３領域における相対的ニューロン死（ＲＮＤ）をヒストグラム形式で示す。^＊ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 ｉｎ ｖｉｖｏの持続性局所虚血モデルにおけるマウス脳の「壊死性コア」および「ペナンブラ領域」の特徴を示す図。（Ａ）ＭＣＡｏの３時間後に、２，３，５トリフェニル塩化テトラゾリウム（ＴＴＣ）で着色された成体マウス脳の冠状切片の写真。３つの冠状領域を着色の強度に従って同定し、境界を定めることができる。すなわち「壊死性コア」、「ペナンブラ領域」および健康な組織である。 （Ｂ）ＭＣＡｏの３時間後に、２，３，５ＴＴＣで着色された「壊死性コア」、「ペナンブラ領域」および健康な組織の相対的な着色強度の、ＩｍａｇｅＪソフトウェアによる計測。^＊ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 ｉｎ ｖｉｖｏのマウスの持続性局所虚血モデルにおける（Ｓ）−ロスコビチンの神経保護作用を示すヒストグラム。（Ｓ）−ロスコビチンを、脳室内（ＩＶＣ）投与（Ａ）または全身（ＩＰ）投与（Ｂ）により投与した。壊死性コア、ペナンブラ領域における相対的な着色強度を計測することにより、細胞死を測定した。^＊ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 ｉｎ ｖｉｔｒｏ興奮毒性モデル：カイニン酸に曝露された海馬細胞の神経混合培養物における（Ｓ）−ロスコビチンおよび（Ｒ）−ロスコビチンの神経保護指数（ＮＩ）の比較を示す図。 海馬混合培養物を用いたカイニン酸による選択的ニューロン死を示す図。（ａ‐ｃ）１０〜１５日間培養された、Ｅ１８ラット胚の単離海馬細胞を、様々な種類の細胞に特異的な抗体を用いた免疫組織化学法およびパッチクランプ記録法により解析した。（ａ）１０日間培養した細胞の位相差顕微鏡下の写真。（ｂ）１０日間培養し、抗ＧＦＡＰ抗体（赤色）、抗クラスＩＩＩβチューブリン抗体（緑色）および抗０４抗体（青色）で標識した細胞の共焦点蛍光顕微鏡写真。海馬培養物はニューロン細胞およびグリア細胞をいずれも含んでいる。（ｃ）１０日間（上側ライン）および１５日間（下側ライン）培養したニューロンの細胞構造全体のボルテージクランプ記録を示すライン。（ｄ）ニューロンの興奮毒性モデルを、カイニン酸処理した海馬の１０日間混合培養物を用いて作製した。対照条件下（左側）または２００μＭカイニン酸処理条件下（右側）の培養物を、抗クラスＩＩＩβチューブリン抗体で免疫標識したもの（上側）または細胞死のマーカーであるヨウ化プロピジウムで標識したもの（ＰＩ；下側）の蛍光顕微鏡写真。カイニン酸で処理された培養物では、対照培養物と比較して、βチューブリンで示される細胞密度が低下し、ヨウ化プロピジウムで標識される細胞が増加していることに留意されたい。（ｅ）対照培養物中またはカイニン酸で処理された培養物中における、クラスＩＩＩβチューブリンを発現している細胞の相対的な割合（％）を示すグラフ。（ｆ）カイニン酸の、用量依存的なニューロン興奮毒性。本発明者らの条件下では、およそ５０％のニューロンを死滅させるためには２００μＭのカイニン酸で５時間処理する必要がある。ｐ＜０．０１（ｔ検定）。

Claims (13)

1. ６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうち少なくとも１つの、神経疾患の予防または治療のうち少なくともいずれか一方を目的とした医薬品の製造のための使用。
2. 前記神経病変は興奮毒性の現象に関連していることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
3. 前記神経疾患は慢性または急性の神経疾患であることを特徴とする、請求項１または２のいずれか１項に記載の使用。
4. 前記慢性の神経疾患は、
   − 神経変性疾患であって、
   − 錐体外路症候群を伴う疾患、特にパーキンソン病、進行性核上性麻痺（スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群）、多系統萎縮症および線条体黒質変性症；
   − 認知症、特にアルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体病、前頭側頭型認知症、大脳皮質基底核変性症およびハンチントン舞踏病、ならびに
   − その他の神経変性疾患、特に筋萎縮性側索硬化症およびクロイツフェルト・ヤコブ病；および
   − 脱髄疾患、特に多発性硬化症、急性散在性アレルギー脳炎、Ｄｅｖｉｃ病（ニューロミエロパシー）およびミエリンの障害を伴う遺伝性疾患、特にペリツェウス・メルツバッハー病
   からなる群から選択される、請求項３に記載の使用。
5. 前記急性の神経疾患は、
   − てんかん；
   − てんかん重積状態；
   − 脳卒中、特に虚血性のもの；
   − 脳出血；
   − 心停止時の脳低酸素状態；
   − 頭蓋外傷性障害；ならびに
   − 局所性脳低酸素状態または全脳低酸素状態のうち少なくともいずれか一方を引き起こす神経疾患であって、特に体外循環時に、特に心血管インターベンションおよび頸動脈手術の際に発生するもの
   からなる群から選択される、請求項３に記載の使用。
6. 脳出血は、血栓溶解剤、特に組織プラスミノーゲン活性化因子の使用と関係している、請求項５に記載の使用。
7. 前記医薬品は、ドネペジル、セレギリン、リバスチグミン、ガランタミン、メマンチンおよびリルゾールからなる群から選択される少なくとも１つの抗神経変性剤をさらに含んでなる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
8. 前記医薬品は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼおよびデスモテプラーゼからなる群から選択される少なくとも１つの血栓溶解剤をさらに含んでなる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
9. 前記医薬品は、アスピリン、チクロピジン、クロピドグレル、ペルサンチン、アブシキシマブおよびフルルビプロフェンからなる群から選択される少なくとも１つの血小板凝集阻害剤をさらに含んでなる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
10. 前記医薬品は、経口投与、直腸投与、経皮投与、経肺投与、経鼻投与、舌下投与および非経口投与、特に皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、脊髄内投与、関節内投与、胸膜内投与および腹腔内投与によって投与することが可能である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
11. 前記医薬品は、錠剤、カプセル剤、ピル剤、シロップ剤、懸濁剤、溶液、散剤、顆粒剤、乳剤、ミクロスフェア、注射可能な溶液、舌下用スプレー剤および皮膚パッチ剤からなる群から選択された形態である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
12. 前記６−（ベンジルアミノ）−２（Ｓ）−［［１−（ヒドロキシメチル）プロピル］アミノ］−９−イソプロピルプリン）または医薬として許容可能なその塩のうち１つは、前記医薬品中に単位用量あたり１００ｍｇ〜５ｇ、好ましくは１００ｍｇ〜２ｇの範囲の量で存在する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
13. 前記医薬品は医薬として許容可能な担体をさらに含んでなる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。

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