JP2009084161A - プロテアーゼ阻害剤ならびに抗菌剤 - Google Patents
プロテアーゼ阻害剤ならびに抗菌剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009084161A JP2009084161A JP2007251996A JP2007251996A JP2009084161A JP 2009084161 A JP2009084161 A JP 2009084161A JP 2007251996 A JP2007251996 A JP 2007251996A JP 2007251996 A JP2007251996 A JP 2007251996A JP 2009084161 A JP2009084161 A JP 2009084161A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sequence
- seq
- set forth
- sequence listing
- nucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
【解決手段】本発明のプロテアーゼ阻害剤は、イネ(Oryza sativa)に含まれる等電点5.0〜6.5の蛋白質又はその部分ペプチドを有効成分として含有する。有効成分の蛋白質又はその部分ペプチドは、特定のアミノ酸配列を有し、歯周病菌ポルフィロモナス・ジンジバリスプロテアーゼに対する阻害活性と抗菌作用を有する。本発明の口腔用組成物又は食品は、本発明のプロテアーゼ阻害剤、又は本発明の抗菌剤を添加してなる。本発明の核酸は、特定の塩基配列を有し、プロテアーゼ阻害活性又は抗菌作用を有する蛋白質をコードする。
【選択図】図1
Description
(a)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質。
(b)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質であって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつプロテアーゼ阻害活性を有する蛋白質。
(c)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、プロテアーゼ阻害活性を有するペプチド。
(d)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつプロテアーゼ阻害活性を有するペプチド。
(a)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質。
(b)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質であって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつ抗菌作用を有する蛋白質。
(c)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、抗菌作用を有するペプチド。
(d)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつ抗菌作用を有するペプチド。
(1)配列表の配列番号34に記載の塩基配列のうち、24〜515番目の塩基配列。
(2)配列表の配列番号35に記載の塩基配列のうち、128〜610番目の塩基配列。
(3)配列表の配列番号36に記載の塩基配列のうち、98〜1990番目の塩基配列。
(4)配列表の配列番号37に記載の塩基配列のうち、111〜2967番目の塩基配列。
(5)配列表の配列番号38に記載の塩基配列のうち、93〜966番目の塩基配列。
(6)配列表の配列番号39に記載の塩基配列のうち、87〜587番目の塩基配列。
(7)配列表の配列番号40に記載の塩基配列のうち、89〜682番目の塩基配列。
(8)配列表の配列番号41に記載の塩基配列のうち、31〜507番目の塩基配列。
(9)配列表の配列番号42に記載の塩基配列のうち、53〜532番目の塩基配列。
(10)配列表の配列番号43に記載の塩基配列のうち、97〜579番目の塩基配列。
(11)配列表の配列番号44に記載の塩基配列のうち、51〜539番目の塩基配列。
(12)配列表の配列番号45に記載の塩基配列のうち、435〜899番目の塩基配列。
(13)配列表の配列番号46に記載の塩基配列のうち、116〜585番目の塩基配列。
(14)配列表の配列番号47に記載の塩基配列のうち、6〜770番目の塩基配列。
(15)配列表の配列番号48に記載の塩基配列のうち、35〜2562番目の塩基配列。
(16)配列表の配列番号49に記載の塩基配列のうち、48〜2752番目の塩基配列。
(17)配列表の配列番号50に記載の塩基配列のうち、31〜2721番目の塩基配列。
(18)配列表の配列番号51に記載の塩基配列のうち、43〜507番目の塩基配列。
(19)配列表の配列番号52に記載の塩基配列のうち、24〜497番目の塩基配列。
(20)配列表の配列番号53に記載の塩基配列のうち、96〜3933番目の塩基配列。
(21)配列表の配列番号54に記載の塩基配列のうち、19〜579番目の塩基配列。
(22)配列表の配列番号55に記載の塩基配列のうち、50〜550番目の塩基配列。
(23)配列表の配列番号56に記載の塩基配列のうち、118〜570番目の塩基配列。
(24)配列表の配列番号57に記載の塩基配列のうち、118〜570番目の塩基配列。
(25)配列表の配列番号58に記載の塩基配列のうち、46〜902番目の塩基配列。
(26)配列表の配列番号59に記載の塩基配列のうち、53〜499番目の塩基配列。
(27)配列表の配列番号60に記載の塩基配列のうち、71〜754番目の塩基配列。
(28)配列表の配列番号61に記載の塩基配列のうち、54〜403番目の塩基配列。
(29)配列表の配列番号62に記載の塩基配列のうち、598〜1532番目の塩基配列。
(30)配列表の配列番号63に記載の塩基配列のうち、62〜4479番目の塩基配列。
(31)配列表の配列番号64に記載の塩基配列のうち、1〜1104番目の塩基配列。
(32)配列表の配列番号65に記載の塩基配列のうち、1〜2159番目の塩基配列。
(33)配列表の配列番号66に記載の塩基配列のうち、111〜782番目の塩基配列。
コシヒカリ精白米をサンプルミルで粉砕し、これに10倍量の50mM トリス−HCl(pH8.0)/500mM NaCl緩衝液を加えて4℃で30分撹拌した。撹拌後、10,000rpm×15分間の遠心分離によって固形分を除去し、上清に対して80℃で10分間の加熱処理を行った。更に、10,000rpm×15分間の遠心分離で沈殿物を除去し、その上清を蛋白質抽出液とした。
酵素標品には歯周病菌ポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis ATCC33277)から精製したアルギニン−ジンジパインを用いた。阻害活性測定用の緩衝液は、100mM HEPES(pH7.5)/150mM NaCl/5mM CaCl2/0.05% Brij35/4mM ジチオスレイトール(DTT)とし、反応は2ml容積で行った。所定濃度のサンプルとアルギニン−ジンジパイン40pMを40℃で5分間プレインキュベーションした後、酵素基質としてZ−Phe−Arg−MCAを50μMの濃度になるように加えて、酵素反応を開始した。反応の進行は蛍光分光光度計(励起波長380nm;蛍光波長440nm)を用いて、蛍光強度の増加としてモニタリングし、酵素反応の強さは基質から遊離するアミノメチルクマリン(AMC)量で評価した。酵素阻害活性1ユニット(U)は、酵素基質から1分間に1μmolのAMC遊離を阻害する量と定義した。
上記蛋白質抽出液を限外ろ過膜(分画分子量5,000Da)を用いて濃縮すると共に、緩衝液を7M 尿素/2M チオ尿素に置換した。このサンプルを7M 尿素/2M チオ尿素/4% CHAPS/20mM DTT/1% ZOOMキャリアアンフォライト(pH3〜10;インビトロジェン製)溶液とした後、10,000rpm×15分間の遠心分離によって沈殿物を除去し、等電点電気泳動(IEF)を行った。電気泳動にはpH3.0、pH5.4、pH6.2とpH10.0のディスクを装着したIEFフラクショネーター(インビトロジェン製)を用いた。IEFで得られた各pH画分の試料について、歯周病菌プロテアーゼに対する阻害活性を上述の方法により測定した(表1)。歯周病菌プロテアーゼ阻害活性は、その約80%がpH5.4〜6.2の等電点範囲で回収することができた。歯周病菌プロテアーゼに対して阻害活性を有する蛋白質は、その多くが等電点5.0〜6.5の範囲の蛋白質であることは明らかである。
上述の等電点電気泳動におけるpH5.4〜6.2の画分から、歯周病菌プロテアーゼ阻害蛋白質を、歯周病菌プロテアーゼを固定化したアフィニティ−ビーズを用いて分離した。
分離した歯周病菌プロテアーゼ阻害蛋白質にトリフルオロ酢酸(TFA)を0.1%になるよう加え、ZipTip C18(Millipore製)に結合・洗浄し、50% アセトニトリル/0.1% TFA溶液で溶出した。溶出液は80℃で乾固させた後、50mM NH4HCO3にて溶解し、0.2mM DTT存在下で50℃、15分間の還元処理、次いで0.27mM ヨードアセトアミド存在下でのアルキル化処理を行った。その後、トリプシン(Promega製)を0.5ng/μlになるよう加えて、37℃で15時間のインキュベーションによる酵素消化を行った。
配列番号1に示されるアミノ酸配列を有する蛋白質の、54番目から60番目までのアミノ酸残基に相当するペプチド配列(Arg−Thr−Leu−Val−Arg−Arg−Gln)をRA17(27−33)、配列番号4に示されるアミノ酸配列を有する蛋白質の、14番目から25番目までのアミノ酸残基に相当するペプチド配列(Arg−Arg−Leu−Met−Ala−Ala−Lys−Ala−Glu−Ser−Arg−Lys)をCH(14−25)として、それぞれ化学合成し(シグマアルドリッチジャパン)、上述の方法に従って歯周病菌プロテアーゼ阻害活性を測定した(図1)。この結果から、歯周病菌プロテアーゼ阻害蛋白質の部分ペプチドが、歯周病菌プロテアーゼに対して阻害活性を有することがわかった。従って、歯周病予防を目的とした機能因子として有用であることは明らかである。
上述のペプチドCH(14−25)について、歯周病菌ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する増殖阻害活性を測定した。
Claims (8)
- イネ(Oryza sativa)に含まれる等電点5.0〜6.5の蛋白質又はその部分ペプチドを有効成分として含有することを特徴とするプロテアーゼ阻害剤。
- 以下の(a)〜(d)に示す蛋白質又はペプチドの1種又は複数種の混合物を有効成分として含有することを特徴とするプロテアーゼ阻害剤。
(a)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質。
(b)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質であって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつプロテアーゼ阻害活性を有する蛋白質。
(c)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、プロテアーゼ阻害活性を有するペプチド。
(d)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつプロテアーゼ阻害活性を有するペプチド。 - 歯周病菌ポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)プロテアーゼに対する阻害活性を有することを特徴とする請求項1又は2に記載のプロテアーゼ阻害剤。
- イネ(Oryza sativa)に含まれる等電点5.0〜6.5の蛋白質又はその部分ペプチドを有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
- 以下の(a)〜(d)に示す蛋白質又はペプチドの1種又は複数種の混合物を有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
(a)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質。
(b)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質であって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつ抗菌作用を有する蛋白質。
(c)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、抗菌作用を有するペプチド。
(d)配列表の配列番号1〜33のいずれか1つに記載のアミノ酸配列の部分配列を有するペプチドであって、1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含み、かつ抗菌作用を有するペプチド。 - 歯周病菌ポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)に対する抗菌作用を有することを特徴とする請求項4又は5に記載の抗菌剤。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のプロテアーゼ阻害剤、又は請求項4〜6のいずれか1項に記載の抗菌剤を添加してなる口腔用組成物又は食品。
- 以下の(1)〜(33)に示す塩基配列のいずれか1つを有し、プロテアーゼ阻害活性又は抗菌作用を有する蛋白質をコードする核酸。
(1)配列表の配列番号34に記載の塩基配列のうち、24〜515番目の塩基配列。
(2)配列表の配列番号35に記載の塩基配列のうち、128〜610番目の塩基配列。
(3)配列表の配列番号36に記載の塩基配列のうち、98〜1990番目の塩基配列。
(4)配列表の配列番号37に記載の塩基配列のうち、111〜2967番目の塩基配列。
(5)配列表の配列番号38に記載の塩基配列のうち、93〜966番目の塩基配列。
(6)配列表の配列番号39に記載の塩基配列のうち、87〜587番目の塩基配列。
(7)配列表の配列番号40に記載の塩基配列のうち、89〜682番目の塩基配列。
(8)配列表の配列番号41に記載の塩基配列のうち、31〜507番目の塩基配列。
(9)配列表の配列番号42に記載の塩基配列のうち、53〜532番目の塩基配列。
(10)配列表の配列番号43に記載の塩基配列のうち、97〜579番目の塩基配列。
(11)配列表の配列番号44に記載の塩基配列のうち、51〜539番目の塩基配列。
(12)配列表の配列番号45に記載の塩基配列のうち、435〜899番目の塩基配列。
(13)配列表の配列番号46に記載の塩基配列のうち、116〜585番目の塩基配列。
(14)配列表の配列番号47に記載の塩基配列のうち、6〜770番目の塩基配列。
(15)配列表の配列番号48に記載の塩基配列のうち、35〜2562番目の塩基配列。
(16)配列表の配列番号49に記載の塩基配列のうち、48〜2752番目の塩基配列。
(17)配列表の配列番号50に記載の塩基配列のうち、31〜2721番目の塩基配列。
(18)配列表の配列番号51に記載の塩基配列のうち、43〜507番目の塩基配列。
(19)配列表の配列番号52に記載の塩基配列のうち、24〜497番目の塩基配列。
(20)配列表の配列番号53に記載の塩基配列のうち、96〜3933番目の塩基配列。
(21)配列表の配列番号54に記載の塩基配列のうち、19〜579番目の塩基配列。
(22)配列表の配列番号55に記載の塩基配列のうち、50〜550番目の塩基配列。
(23)配列表の配列番号56に記載の塩基配列のうち、118〜570番目の塩基配列。
(24)配列表の配列番号57に記載の塩基配列のうち、118〜570番目の塩基配列。
(25)配列表の配列番号58に記載の塩基配列のうち、46〜902番目の塩基配列。
(26)配列表の配列番号59に記載の塩基配列のうち、53〜499番目の塩基配列。
(27)配列表の配列番号60に記載の塩基配列のうち、71〜754番目の塩基配列。
(28)配列表の配列番号61に記載の塩基配列のうち、54〜403番目の塩基配列。
(29)配列表の配列番号62に記載の塩基配列のうち、598〜1532番目の塩基配列。
(30)配列表の配列番号63に記載の塩基配列のうち、62〜4479番目の塩基配列。
(31)配列表の配列番号64に記載の塩基配列のうち、1〜1104番目の塩基配列。
(32)配列表の配列番号65に記載の塩基配列のうち、1〜2159番目の塩基配列。
(33)配列表の配列番号66に記載の塩基配列のうち、111〜782番目の塩基配列。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007251996A JP4982908B2 (ja) | 2007-09-27 | 2007-09-27 | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤ならびに抗歯周病菌剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007251996A JP4982908B2 (ja) | 2007-09-27 | 2007-09-27 | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤ならびに抗歯周病菌剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009084161A true JP2009084161A (ja) | 2009-04-23 |
JP4982908B2 JP4982908B2 (ja) | 2012-07-25 |
Family
ID=40658052
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007251996A Expired - Fee Related JP4982908B2 (ja) | 2007-09-27 | 2007-09-27 | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤ならびに抗歯周病菌剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4982908B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014237626A (ja) * | 2013-05-07 | 2014-12-18 | 国立大学法人 新潟大学 | 生体防御用組成物及びその用途、並びにペプチド |
JP2018131414A (ja) * | 2017-02-16 | 2018-08-23 | 株式会社植物ハイテック研究所 | 未利用作物組織から高栄養価機能を持つルビスコを調製する方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006151843A (ja) * | 2004-11-26 | 2006-06-15 | Shimada Kagaku Kogyo Kk | カテプシンk阻害剤およびその機能が付与された食品 |
JP2007016002A (ja) * | 2005-07-11 | 2007-01-25 | Niigata Univ | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤、並びにこれを用いた口腔組成物及び食料品 |
-
2007
- 2007-09-27 JP JP2007251996A patent/JP4982908B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006151843A (ja) * | 2004-11-26 | 2006-06-15 | Shimada Kagaku Kogyo Kk | カテプシンk阻害剤およびその機能が付与された食品 |
JP2007016002A (ja) * | 2005-07-11 | 2007-01-25 | Niigata Univ | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤、並びにこれを用いた口腔組成物及び食料品 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014237626A (ja) * | 2013-05-07 | 2014-12-18 | 国立大学法人 新潟大学 | 生体防御用組成物及びその用途、並びにペプチド |
JP2018131414A (ja) * | 2017-02-16 | 2018-08-23 | 株式会社植物ハイテック研究所 | 未利用作物組織から高栄養価機能を持つルビスコを調製する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4982908B2 (ja) | 2012-07-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20190100739A1 (en) | Methods for the manufacture of proteolytically processed polypeptides | |
ES2621568T3 (es) | Polipéptidos que tienen actividad antimicrobiana y polinucleótidos que codifican los mismos | |
CN105164151B (zh) | TNFα抑制剂多肽、编码多肽的多核苷酸、表达多肽的细胞和生成多肽的方法 | |
EP3162894B1 (en) | Methods for the manufacture of proteolytically processed polypeptides | |
EP1502949B1 (en) | Antimicrobial polypeptide and utilization thereof | |
Nakaya et al. | Amino acid sequence and disulfide bridges of an antifungal protein isolated from Aspergillus giganteus | |
MXPA03002218A (es) | Peptidos antimicrobianos y metodos de uso. | |
JP6764555B2 (ja) | セリアックスプルー病を処置するための組成物および方法 | |
Wang et al. | Identification and molecular cloning of a novel amphibian Bowman Birk-type trypsin inhibitor from the skin of the Hejiang Odorous Frog; Odorrana hejiangensis | |
EP1006785B1 (en) | Antimicrobial proteins | |
EP1922333B1 (en) | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same | |
Rakitov et al. | Brochosomins and other novel proteins from brochosomes of leafhoppers (Insecta, Hemiptera, Cicadellidae) | |
JP2011072294A (ja) | 新規抗菌ペプチド | |
Wallner et al. | Lab scale and medium scale production of recombinant allergens in Escherichia coli | |
JP4982908B2 (ja) | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤ならびに抗歯周病菌剤 | |
EP2582813B1 (en) | Methods of generating and screening for lytic chimeric polypeptides | |
JP2007016002A (ja) | 歯周病菌プロテアーゼ阻害剤、並びにこれを用いた口腔組成物及び食料品 | |
Miyashita et al. | Identification of an antiviral component from the venom of the scorpion Liocheles australasiae using transcriptomic and mass spectrometric analyses | |
Freire et al. | Mo-CBP3, a 2S albumin from Moringa oleifera, is a complex mixture of isoforms that arise from different post-translational modifications | |
Yan et al. | A novel macromolecular extract screened from satsuma with pro-inflammatory effect | |
KR101072815B1 (ko) | 프로-페놀옥시다아제 시스템을 활성화시키는 단백질 및이를 코딩하는 유전자 | |
KR102497267B1 (ko) | 반응성 및 안정성 그리고 항체회수가 향상된 z-도메인 및 칼시퀘스트린 융합단백질 및 이를 이용한 항체의 분리 및 정제 방법 | |
WO2003025153A3 (en) | Enhanced proteins and methods for their use | |
ES2277352T3 (es) | Proteina antimicrobiana. | |
JPH07500964A (ja) | 半翅目サシガメ科の動物からの新規トロンビン阻害性蛋白質 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090825 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090828 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120105 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120326 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120408 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4982908 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150511 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |