JP6764555B2 - セリアックスプルー病を処置するための組成物および方法 - Google Patents
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Description
本出願は、全体として参照により本明細書に組み入れられる、2013年8月14日出願の米国特許仮出願第61/865,787号の優先権を主張するものである。
本発明は、国防高等研究計画局(Defense Advanced Research Projects Agency)により授与されたHR0011−08−1−0085の下で、政府の支援によってなされた。政府は、本発明において特定の権利を有する。
セリアックスプルーは、「グルテン」として知られる小麦、大麦、およびライ麦製品中に見出される食物タンパク質が、遺伝的素因のある個体の小腸で免疫反応を誘発する、非常に高頻度に見られる疾患である。生じた炎症は、小腸の絨毛を分解して、栄養の吸収を妨げる可能性がある。症状は、幼少期または高齢期に現れる可能性があり、下痢、疲労および体重減少から腹部の膨張、貧血、および神経症状まで広範囲の重症度になり得る。現在、食事からグルテンを全て排除する以外に、この生涯にわたる疾患の効果的治療法はない。セリアックスプルーは、大半が過小診断されており、米国および欧米の罹患率は、人口の0.5〜1.0%と推定される。ヒト消化管の過酷で高酸性環境で特異的かつ効率的にグルテン由来ペプチドを分解するには厳格な物理的および化学的要件があるため、適切な天然由来酵素をセリアック病の経口治療薬として同定することは困難である。
一態様において、本発明は、SEQ ID NO:75、74、76〜89、95、97〜98、102〜111またはそれらの処理された型からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む、または該アミノ酸配列からなる1つまたは複数のポリペプチドのセリアックスプルーを処置するのに有効な量を、セリアックスプルーの対象に投与することを含む、セリアックスプルーを処置する方法を提供する。一実施形態において、該1つまたは複数のポリペプチドは、SEQ ID NO:75、74、77、78、82、88、98、105、111またはそれらの処理された型からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む、または該アミノ酸配列からなる1つまたは複数のポリペプチドを含む。さらなる実施形態において、該1つまたは複数のポリペプチドは、SEQ ID NO:89のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
(a)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:95:(i)AA残基116がVもしくはDである;(ii)AA残基255がS、KもしくはDである;(iii)AA残基284がDである;(iv)AA残基285がTである;(v)AA残基286がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基312がSである;(vii)AA残基347がNである;(viii)AA残基350がTもしくはAである;(iv)AA残基351がNもしくはGである;(x)AA残基354がDである;そして(xi)AA残基361がSもしくはHである;
(b)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:75:(i)AA残基106がDである;(ii)AA残基246がS、KもしくはGである;(iii)AA残基275がDである;(iv)AA残基276がSである;(v)AA残基277がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基303がSである;(vii)AA残基338がSである;(viii)AA残基341がTもしくはAである;(ix)AA残基342がNもしくはGである;(x)AA残基345がQもしくはDである;そして(xi)AA残基352がSもしくはHである;
(c)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:76:(i)AA残基120がDである;(ii)AA残基259がS、KもしくはGである;(iii)AA残基288がDである;(iv)AA残基289がTである;(v)AA残基290がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基316がSである;(vii)AA残基351がSもしくはNである;(viii)AA残基354がAである;(ix)AA残基355がNもしくはGである;(x)AA残基358がDである;そして(xi)AA残基365がSもしくはHである;
(d)SEQ ID NO:78;
(e)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:79:(i)AA残基107がVもしくはDである;(ii)AA残基245がS、KもしくはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がTである;(v)AA残基276がA、TもしくはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がSもしくはNである;(viii)AA残基340がTもしくはAである;(ix)AA残基341がNもしくはGである;(x)AA残基344がQもしくはDである;そして(xi)AA残基351がSもしくはHである;
(f)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:80:(i)AA残基76がVもしくはDである;(ii)AA残基206がS、KもしくはGである;(iii)AA残基235がDである;(iv)AA残基236がSである;(v)AA残基237がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基262がSである;(vii)AA残基297がSもしくはNである;(viii)AA残基300がTもしくはAである;(ix)AA残基301がNもしくはGである;(x)AA残基302がQもしくはDである;そして(xi)AA残基309がSもしくはHである;
(g)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:81:(i)AA残基105がDである;(ii)AA残基244がSもしくはKである;(iii)AA残基272がDである;(iv)AA残基273がSである;(v)AA残基274がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基299がSである;(vii)AA残基334がNである;(viii)AA残基337がTもしくはAである;(ix)AA残基338がNもしくはGである;(x)AA残基341がQもしくはDである;そして(xi)AA残基348がSもしくはHである;
(h)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:82:(i)AA残基106がVもしくはDである;(ii)AA残基244がS、KもしくはGである;(iii)AA残基273がDである;(iv)AA残基274がTである;(v)AA残基275がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基301がSである;(vii)AA残基336がNである;(viii)AA残基339がTもしくはAである;(ix)AA残基340がNもしくはGである;(x)AA残基343がDである;そして(xi)AA残基350がSもしくはHである;
(i)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:83:(i)AA残基107がVもしくはDである;(ii)AA残基245がS、KもしくはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がTである;(v)AA残基276がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がNである;(viii)AA残基340がTもしくはAである;(ix)AA残基341がNもしくはGである;(x)AA残基344がQもしくはDである;そして(xi)AA残基351がSもしくはHである;
(j)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:84:(i)AA残基104がVもしくはDである;(ii)AA残基241がS、KもしくはGである;(iii)AA残基270がDである;(iv)AA残基271がSである;(v)AA残基272がD、A、T、もしくはNである;(vi)AA残基398がSである;(vii)AA残基33がSである;(viii)AA残基336がAである;(ix)AA残基337がNもしくはGである;(x)AA残基340がDである;そして(xi)AA残基347がSもしくはHである;
(k)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:85:(i)AA残基104がDである;(ii)AA残基245がS、KもしくはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がSである;(v)AA残基276がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がSもしくはNである;(viii)AA残基340がTもしくはAである;(ix)AA残基341がNもしくはGである;(x)AA残基344がQもしくはDである;そして(xi)AA残基351がSもしくはHである;
(l)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:86:(i)AA残基118がVもしくはDである;(ii)AA残基250がKもしくはGである;(iii)AA残基279がDである;(iv)AA残基280がSである;(v)AA残基281がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基307がSである;(vii)AA残基342がSもしくはNである;(viii)AA残基345がAである;(ix)AA残基346がNもしくはGである;(x)AA残基349がQもしくはDである;そして(xi)AA残基356がSもしくはHである;
(m)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:87:(i)AA残基121がVもしくはDである;(ii)AA残基253がS、KもしくはGである;(iii)AA残基282がDである;(iv)AA残基283がSである;(v)AA残基284がA、T、もしくはNである;(vi)AA残基310がSである;(vii)AA残基345がSである;(viii)AA残基348がTもしくはAである;(ix)AA残基349がNもしくはGである;(x)AA残基352がQもしくはDである;そして(xi)AA残基357がSもしくはHである;
(n)以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10もしくは11全てがあてはまるSEQ ID NO:88:(i)AA残基111がS、KもしくはGである;(ii)AA残基139がDである;(iii)AA残基140がTもしくはSである;(iv)AA残基141がD、A、T、もしくはNである;(v)AA残基164がSである;(vi)AA残基199がSもしくはNである;(vii)AA残基202がTもしくはAである;(viii)AA残基203がNもしくはGである;(ix)AA残基204がQもしくはDである;そして(x)AA残基211がSもしくはHである;および
(o)SEQ ID NO:89、
またはそれらの処理された型からなる群から選択される単離されたポリペプチドを提供する。
(a)SEQ ID NO:74〜89、95、97〜99および102〜111、またはそれらの処理された型からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む1つまたは複数のポリペプチドと;
(b)1つまたは複数のさらなるポリペプチドであって、
(A)SEQ ID NO:35のアミノ酸配列と少なくとも75%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基278がSerであり、残基78がGluであり、残基82がAspである、
アミノ酸配列;および
(B)SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも75%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基467がSerであり、残基267がGluであり、残基271がAspである、
アミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、該1つまたは複数のさらなるポリペプチドと、
を含む組成物を提供する。
引用された参考文献は全て、全体として参照により本明細書に組み入れられる。本出願において、他に断りがなければ、用いられた技術は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press)、Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, edited by D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA)、Methods in Enzymology内の“Guide to Protein Purification” (M.P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA)、Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2nd Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY)、Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109−128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.),およびthe Ambion 1998 Catalog (Ambion, Austin, TX)などの複数の周知参考資料のいずれかに見出され得る。
相同体1
MAPSDVEIVDPVAPEERITVTVLLRRRSSIPDQLIEGPDTLSRAELADRHGADPADVEAVRVAMSGAGLTVVGTDLPSRRVTVAGTAEALMRTFGAELQIVRDASGFQHRARSGELRIPAALDGIVIAVLGLDNRPQAEARFRASQPEAARSFRPDALGRVYRFPANTDGTGQTIAIVELGGGFRQSELDTYFGGLGIPAPQVLAVGVDGGQNLPSGDAGSADGEVLLDIEVAGALAPGARQVVYFAPNTDRGFVDAVTTAVHADPTPAAVSISWGAPEDKWTAQARRAFDAALADAAALGVTVTAAAGDRGSADGEGGGGLHTDFPASSPHLLACGGTKLAVADGGTVASETVWNGGERGGATGGGVSVAFGLPAYQRNAGVDKRRKTGKPGRGVPDVAAVADPATGYEVLVDGEQLVFGGTSAVAPLWAALVARLTQALGRPLGLLNTALYDGAQPGRTQPGFRDVTEGDNDISGKHGPYPARAGWDACTGLGVPDGEALLAALRKPGKE(SEQ ID NO:74);
相同体2
MQRGTKEGLNMARHLQADREPRIVPESKCLGQCDPAERIHVTIMLRRQEEGQLDALVHQLATGDARAKPVSRDAFAQRFSANPDDIRKTEDFAHRHQLTVDRVDPVESVVVLSGT
(I/V/D)AQFEAAFSVKLERFEHRSIGQYRGRSGPIVLPDDIGDAVTAVLGLDSRPQARPHFRFRPPFKPARGAAAVTFTPIQLASLYDFPAGDGAGQCIAIIELGGGYRAADIQQYFRGLGITTPPKLVDVNVGTGRNAPTGEP(N/S/K/G)GPDGEVALDIEIAGAIAPAAKIAVYFAP(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIQAVNAAVTDKTNQPSVISISW(G/S)GPEAIWQAQSAQAFNRVLQAAAAQGITVCAASGD(S/N)GS(G/T/A)(D/N/G)GL(Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYVLGCGGTQLDALPGQGIRSEVTWNDEASGGGAGGGGVSALFDLPAWQQGLKVARADGTTTPLAKRGVPDVAGDASPQTGYEVSVAGTPAVMGGTSAVAPLWAALIARINAANGASAGWINPVLYKHPGALRDITKGSNGTYAAASGWDACTGLGSPNGAQLATILARKPSS(SEQ ID NO:95);
相同体4
MANHPLNGSERECLKDAQPIGKADPNERLEVTMLVRRRSHDAFEKHISALAAQGASAKHIDHDEFTKHFGADSADLAAVHAFAQKHGLSVVESHEARRAVVLSGT(V/D)AQFDAAFGVSLQQYEHDGGTYRGRTGPIHLPDELNGVVDAVMGLDNRPQARPSFRTRAQGNVRWTARAAGASTFTPVQLASLYDFPQGDGQNQCIGIIELGGGYRPADLKTYFASLNMKAPSVTAVSVDHGRNHPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVMLDIEVAGAVAPGAKIVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)AGFIDAIGTAIHDTKNKPSVISISW(G/S)GPESAWTQQAMNAFDQAFQSAAALGVTICAASGD(N/S)GS(G/T/A)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYALGCGGTSLQASGNGIASETVWNDGANGGATGGGVSSFFALPAWQEGLRVTRAGGAHSPLAMRGVPDVAGNADPVTGYEVRVDGHDMVIGGTSAVAPLWAGLIARINAIKGAPVGYINPHLYKDPLALVDITKGNNDDFHATAGWDACTGLGRPDGKKVKDAVS(SEQ ID NO:75);
相同体5
MNHDHSPTGGELSNWVRVPGSERAAVQGSRKVGPADPNEQMSVTVVVRRPAADTAVTSMIEKVGAQPLSERRHLTREEFASTHGANPADLSKVEKFAHEHNLQVKEVNAAAGTMVLSGT(V/D)TSFSKAFGVELSTYEHPDFTYRGRIGHVHIPDYLADTIQSVLGLDNRPQASPRFRVLKEEGGVTTAHAGRTSYTPLEVAALYNFPSIHCKDQCIGILELGGGYRPADLQTYFNGLGIPQPNITDVSVGGAANRPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVVLDIEVAAAVTPGAKIAVYFAD(N/D)(S/T)(D/A/T/N)DGFLNAITTAIHDTRNKPSVISISW(G/S)KAEIGWTPQAINAMNQAFRDAAALGVTICCASGD(D/S/N)GS(T/A)(D//N/G)RV(Q/D)DGRYHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTRLESSGSTITQEVVWNEGALGGGATGGGVSDVFDRPNWQANANVPTSANPERRIGRGVPDWAGNADPATGYQILVDGTRAVIGGTSAVAPLFAGLIAIINQKLGHSVGFINPILYNLSAQHNVFHDITSGNNDMSGQNGPYEAQPGWDACTGLGSPDGTKLMNAISEAHRLVSVG(SEQ ID NO:76);
相同体6
MAPEERRTLPGSAMPRPAGAQVLGQIPDDERVEVTVVLQPRAPLPEPGPTPMSRAELADLRSPPEGALEAIARYVAGQGLEVIAADAPRRRIVLAGSAARIAALFGISFVRLQLEGRRYRTYEGEISLPAELAPLVVAVLGLDTRPFARSHRRPAVAPNAPTTAPTVARAYDFPTAYDGRGTTIGFIELGGGFQESDLVRYCEGLGLSTPQVSVVGVDGARNAPTGDPNGPDAEVMLDLEVATGVANGADLVLYMAANTDAAFYSAIATALRDATHAPVAISISWGAPEESYPATTIAAFESVLEEAVHVGVTVLVAAGDQGSTDGVDDGRAHVDYPAASPYVLACGGTRLDLDGTTIVAETVWNDLPNGGATGGGISALFPVPSWQAGIAMPPSANPGAGPGRGVPDVAGNADPDTGYRIVVDGVATVVGGTSAVAPLWAGLVARCHQAGARGGFWNPLLYAARGSSAFHEITVGSNGAYDAGPIWNACCGLGSPNGTAILQTLRA(SEQ ID NO:77);
相同体6変異体
MAPEERRTLPGSAMPRPAGAQVLGQIPDDERVEVTVVLQPRAPLPEPGPTPMSRAELADLRSPPEGALEAIARYVAGQGLEVIAADAPRRRIVLAGSAARIAALFGISFVRLQLEGRRYRTYEGEISLPAELAPLVVAVLGLDTRPFARSHRRPAVAPNAPTTAPTVARAYDFPTAYDGRGTTIGFIELGGGFQESDLVRYCEGLGLSTPQVSVVGVDGARNAPTGDPNGPDAEVMLDLEVATGVANGADLVLYMAANTDAAFYSAIATALRDATHAPVAISISWSAPEESYPATTIAAFESVLEEAVHVGVTVLVAAGDQGSTGGVDDGRAHVHYPAASPYVLACGGTRLDLDGTTIVAETVWNDLPNGGATGGGISALFPVPSWQAGIAMPPSANPGAGPGRGVPDVAGNADPDTGYRIVVDGVATVVGGTSAVAPLWAGLVARCHQAGARGGFWNPLLYAARGSSAFHEITVGSNGAYDAGPIWNACCGLGSPNGTAILQTLRA(SEQ ID NO:78);
相同体9
MTKQPVSGSSDKIHPDDAKCIGDCDPSEQIEVIVMLRRKDEAGFRQMMSRIDAGEAPGQAVSREEFDRRFTASDEDIDKVKAFAKQYGLSVERAETETRSVVLKGT(I/V/D)EQFQKAFDVKLERFQHHNIGEYRGRTGPVNVPDEMHDAVTAVLGLDSKPQARPHFRFRPPFKPLRGAAPASFSPVDLAKLYDFPDGDGAGQCIAIIELGGGYRDSDLSAYFSKLGVKAPTVVPVGVDGGKNAPTGNP(N/S/K/G)GPDGEVTLDIEIAGAIAPGARIAVYFAP(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFVDAVNRALHDAANKPSVISISW(G/S)GPESNWSPQSMSAFNDVLQSAAALGVTVCAASGD(G/S/N)GS(A/T)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYVLGCGGTSLAASGAGIAKEVVWNDGDQGGAGGGGVSGTFALPVWQKGLSVTRNGKHIALAKRGVPDVAGDASPQTGYEVLIDGEDTVVGGTSAVAPLWAALIARINAIDASPAGFVNPKLYKAKTAFRDITEGNNGSFSAAAGWDACTGMGSPDGGKIAAALKPAKPSQSAGQQ(SEQ ID NO:79);
相同体10
MGRLQGSYRPSLGTPVGPVPDDQPIDVTVVLRPTAADDFRADPDDVAAVRAFAGRAGLDVAEVDEPARTVRLRGP(A/V/D)AAARTAFDTPLALYDSGGRAIRGREGDLGLPDELDDRVVAVLGLDERPAARPRFQPAASARQGLTALQVARAYDFPAATGEGQTIAIIELGGGFGQADLDTYFGGLDLPTPAVSAVGVQGAANVPGGDP(/S/K/G)DGADGEVLLDIEVAGAVAPGAAQVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)AGFLAAINAAAAATPRPAAISISWG(G/S)PESSWTAQAMRAYDQAFAAARAAGITVLAAAGD(A/S/N)GA(D/T/A)(D/S/N/G)(A/Q/D)TDRLVA(D/S/H)FPAGSPNVIACGGTKLTLDAAGARASEVVWNEAADSATGGGYSATFTRPAWQPAAVGRYRGLPDISGNADPQTGYRVVVDGQPTVVGGTSAVAPLLAGLVARLAQLTGAPVADLAAVAYANPAAFTDITAGDNQGYPARSGWDPASGLGSPVGTKLLTAVGGPTPPPTTPPPTTPPPTTPPPTIPPPTTPPTQTVDAADRALWSAVATWAGGTHTGANARAAKAVRAWAQAKSLA(SEQ ID NO:80);
相同体12
MTQPRYTPLPGSEREAPLLAARSNATAARASRAQTASATVVLRRRSELPEALVLDQQFISSDELAARYGADPVDIEKVRSVLERFKVSVVEVDAASRRVKVEGA(V/D)ADIERAFNIALHSASGTDPHSGRGFEYRYRTGVLSVPAELGGIVTAVLGLDNRRQAETRLRVVPAAALGSSYTPVQLGEIYNFPQDATGAGQRIAIIELGGGYTPAGLRRYFASLGVVPPKVAAVSVDGAQNAPGPDP(G/S/K/G)ADGEVQLDVEVAGALAPGAHVLVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFLDAVSQAAHATPPPTAISISW(G/S)ASEDSWTASARDALNQALRDAAALGVTVTAAAGD(S/N)GS(S/T/A)(D/N/G)GV(P/Q/D)DRRAHV(D/S/H)FPASSPYVLATGGTSLRADPATGVVQSETVWNDSQGSTGGGVSDVFPRPAWQAHVDVPHAGRGVPDVSAVADPATGYQVLVDNQPAVIGGTSAVAPLWAALVARLAESLGRPLGLLQPLVYPRTPGSTAYPGFRDITIGNNGAYKAGKGWDAATGLGVPDGTELLAHLRGLNGSE(SEQ ID NO:81);
相同体13
MARHLHAGSEPKVITESKCIGACDPAERIHVTVMLRREGEQALDALVDKLASGDPAAKPVSREDFAKRFGARADDIQHTEAFAKRHQLTVERVDPVQSVVELAGT(I/V/D)AQFENAFGVKLEKYEHHAIGSFRARTGAIALPDELHDAVTAVLGLDTRPQAHPHFRFRPPFQPARSGAGTSYTPLQLASIYNFPEGDGAGQCIALVELGGGYRAADIRQYFEQLGVKPPKLVDVSVNGGRNAPTDDP(N/S/K/G)GPDGEVALDIEVAGAIAPGATIAVYFAG(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIQSVNQAIHDSTNRPSVVSISW(G/S)GPEASWTQQSITAFNNVLKTAASLGVTVCAASGD(S//N)GS(S/T/A)(D/N/G)GL(Q/D)DGSNHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTTLDAQAGQGIRREVVWNDEAASGGAGGGGVSAVFPAPSYQKGLSAKATGGGSTPLSQRGVPDVAGDASPTTGYIISIAGTTAVLGGTSAVAPLWAALIARINANGKSPVGWANPKLYAQPGAFHDITQGNNGAFAASEGWDACTGLGSPDGAKVAAALQGASGGSQQGRATGA(SEQ ID NO:82);
相同体14
MTKHPLPGSERVLAPGSKVVAQCDPSETIEVVVVLRRKNEQQFAQMMKTIEAGAAGARPLTREELEQRFGALPEDIAKLKAFAAQHGLSVVREDASARTVVLSGR(I/V/D)EQFQQAFDVQLQHYEHQSMGRFRGRTGAISVPDELHGVVTAVLGLDDRPQARPHFRIRPPFQPARAQSASSFTPLQLASLYRFPQGDGSGQCIGIVELGGGYRTADLDSYFSSLGVGSPKVVAVGVDQSGNQPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVTLDIEIAGALAPAATIAVYFTT(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIDAVSQAVHDRTNQPSVISISW(G/S)APESMWTAQSMKALNDVLQSAAAIGVTVCAASGD(S/N)GS(S/T/A)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGRDHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTSLQGSGRTVAHEVVWNDGSNGGATGGGVSGAFPVPAWQEGLSTSAAQGGQRALTGRGVPDVAGDASPLTGYDVIVDGNNTVIGGTSAVAPLWAALIARINGAKGAPVGFVNPKLYKASACNDITQGNNGSYAATTGWDACTGLGSPDGVKVAAAL(SEQ ID NO:83);
相同体15
MSPIASRRSALPLSERPAPENARALAAVEPDRTMTVSVLVRRKKPLVLADLEGKKLTHREFERRYGASEKDFATIAKFAAGHGLAVDHHASSLARRTVVLRGT(A/V/D)RQMQQAFGVTLHDYEDSETQQRYHSFTGAITVPAAHARIIESVLGLDARPIAKPHFRVRKRSAAATGAVSFNPPQVASLYSFPTGVDGSGETIGILELGGGYETSDIQQYFSGLGIQPPTVVAVSVDGAVNAPGNP(N/S/K/G)GADGEVALDIQVAGSIAPGAKLAVYFAP(N/D)(T/S)(E/D/A/T/N)QGFVDAITTAVHDTANKPSVLSISW(G/S)GPESSWPQAAAQSLNNACESAAALGVTITVASGD(N/S)GS(T/A)(D/N/G)GV(Q/D)DGQNHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTYLAAVNNGVPQESVWDDLASGGGATGGGVSALFPLPAWQTGANVPGGSMRGVPDVAGDASPESGYNVLVDGQPQVVGGTSAVAPLWAALIALVNQQKGEAAGFVNAALYQNPSAFHDITQGSNGAYAAAPGWDPCTGLGSPMGTAIAKILA(SEQ ID NO:84);
相同体16
MSAFDQLVPLPGSEKTVPDAAPSQTLDPNEVLTVTIRIRRKRTLASLVSTTAPVTEVVSRSEYASRFGADPAIVKQVEAFASAYDLSLVEQSLARRSVLLRGT(V/D)AQMEQAFGVSLANYQLADGTVFRGRTGVVNVPSELVEHIEGVFGLDNRPQARAHFQVYKPEKGTKVAPRAGGISYTPPQLARLYNFPTGVTGKGQCIAIIELGGGFRTADIKTYFGGLGLKPPTVVAVSVDGGHNAPSTA(D/S/K/G)SADGEVMLDIDVAGGVAPGAKIVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFLDAITTAMHDTKNKPSVISISW(G/S)AAESNWTPQALTSFNQAFQAAAALGITVCAAAGD(T/S/N)GS(D/T/A)(D/N/G)SV(G/Q/D)DGKAHV(D/S/H)FPASSPFVLACGGTKLTATDNVIASEVVWHESKTSATGGGVSDVFDLPDYQQKSHVPPSVNDKTRIGRGVPDVAAVADPVTGYAVRVDGSNLVFGGTSAVAPLMAGLIALINQQRGKAVGFIHPLIYANPSAFRDITQGNNTTTTGNKGYAATTGWDACTGLGVADGKKLASVLTATPVA(SEQ ID NO:85);
相同体17
MAATPRFASQPRVTLPGSQKHPLTTDTEVPPPAPVKAAATKLSATPFTVTVIVKRKNPLNLKQVLKPAGRLTHAAFAKAHGPSPDGVKLVKAFAKEFGLTVAPAPGQGRRALYLTGT(A/V/D)AAMQTAFGVTFATKIMEGTKYRVREGDICLPKELIGHVDAVLGLDNRPQAKPHFRHHKPAATSVSYTPVQVGQLYGFPSGAKATGQTIGLIELGGGFRAADITAYFKTLGQTAPKVTAVLVDKAKNTPTTS(S/K/G)SADGEVMLDIEVAAAVAPGANIAVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFIDAISQAVHDTVNKPSVISISW(G/S)GPESTWTAQSLAALDAACQSAAALGITITVAAGD(D/S/N)GS(T/A)(D/N/G)GV(K/Q/D)GTVNHV(D/S/H)FPASSPHVLGCGGTKLLGSGTTITSEVVWNELTANEGATGGGVSNVFPLPTWQAKSNVPKPTVAAGGRGVPDVSGNADPSTGYTVRVDGSTFPIGGTSAVAPLWAGLIALCNAQNKTTAGFINPALYAAAAAKSFRDITSGNNGGFKAGPGWDACTGLGSPIGTAIAKTLAPATKSTSKTAVKNAPEIRFRPHKKAPTKTAAKTPALRRLK(SEQ ID NO:86);
相同体19
MPTSSRFASQSRVPLPGSERKPFVPAGAPKAAKTPKVSTAVKTVPATGRIRVSLIVPPKQPLDTKRLGKLDARLSRAQFAARHGADPASVRLVKAFAKEFGLTVEPITQPGRCTVQLSGT(C/V/D)AAMRKAFAISLVEHTTEQGKFRLREGEISLPAELEGHVLAVLGLDNRPQAKPHFRIAKPRATNVSYTPVQVAQMYGFPAGATATGQTIGIIELGGGYRAADLTAYFKTLGLPAPTVTAVPIDGGKNTPGNA(N/S/K/G)GADGEVMLDIEVCAAVAQGAKIAVYFTT(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFIDAITTAVHDSTNKPSVISISW(G//S)GPESSWTEQSMTALDAACQAAAAVGVTITVAAGD(N/S)GS(S/T/S)(D/N/G)GA(S/Q/D)GDNV(D/S/H)FPASSPHVLACGGTKLVGSGSTITSEVVWDETSNDEGATGGGVSTVFALPTWQKNANVPSPTTSAGGRGVPDVSGDADPSTGYTIRVDSETTVIGGTSAVAPLWAGLIALANAQNKVAAGFVNPALYAAGAKKAFRDITQGNNGSFSAGPGWDACTGLGSPVGNLVIQAVAPKSTTTKKAKKGKTK(SEQ ID NO:87);および
相同体26
MHSYLKQQSHMQSYLEQENHMRSYLEMRKKPYFDDLANIRPGGLTPAQVCQAYQFAKVQPVRPVKLGIVSLAGQYLSSDMSKAFTGYGLPTPVVSTAGSQVLGDLWSNVE(N/S/K/G)MMDIEIAGAAWAYATGTAATLLMQFEP(N/D)(N/T/S)(E/D/A/T/N)TGIPNAINALVAAGCEVISISW(G/S)APANLQTMEAITARKEACKQAAVQNVHVFAASGD(E/S/N)SL(N/T/A)(D/N/G)(G/Q/D)TNSRTP(D/S/H)DPCCDPNVWGVGGTRLVLQADGSIAQESAWGDGNAADKGGGGGFDSREPLPDYQVGVVHSEHRGSPDSSANADPGTGYAIVANGQWLIGGGTSASAPLTAGYVAAILSTLPGPISQSVLQRKLYTAHKTAFRDILLGSNGAPARPGWEEATGLGSINGPGLAAALQS(SEQ ID NO:88)、
またはそれらの処理された型からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む、または該アミノ酸配列からなる1つまたは複数のポリペプチドのセリアックスプルーを処置するのに有効な量を、セリアックスプルーの対象に投与することを含む、セリアックスプルーを処置する方法を提供する。
相同体1(NCBI YP_005536585)
MAPSDVEIVDPVAPEERITVTVLLRRRSSIPDQLIEGPDTLSRAELADRHGADPADVEAVRVAMSGAGLTVVGTDLPSRRVTVAGTAEALMRTFGAELQIVRDASGFQHRARSGELRIPAALDGIVIAVLGLDNRPQAEARFRASQPEAARSFRPDALGRVYRFPANTDGTGQTIAIVELGGGFRQSELDTYFGGLGIPAPQVLAVGVDGGQNLPSGDAGSADGEVLLDIEVAGALAPGARQVVYFAPNTDRGFVDAVTTAVHADPTPAAVSISWGAPEDKWTAQARRAFDAALADAAALGVTVTAAAGDRGSADGEGGGGLHTDFPASSPHLLACGGTKLAVADGGTVASETVWNGGERGGATGGGVSVAFGLPAYQRNAGVDKRRKTGKPGRGVPDVAAVADPATGYEVLVDGEQLVFGGTSAVAPLWAALVARLTQALGRPLGLLNTALYDGAQPGRTQPGFRDVTEGDNDISGKHGPYPARAGWDACTGLGVPDGEALLAALRKPGKE(SEQ ID NO:74);
相同体2(NCBI ZP_04943175)
MQRGTKEGLNMARHLQADREPRIVPESKCLGQCDPAERIHVTIMLRRQEEGQLDALVHQLATGDARAKPVSRDAFAQRFSANPDDIRKTEDFAHRHQLTVDRVDPVESVVVLSGTIAQFEAAFSVKLERFEHRSIGQYRGRSGPIVLPDDIGDAVTAVLGLDSRPQARPHFRFRPPFKPARGAAAVTFTPIQLASLYDFPAGDGAGQCIAIIELGGGYRAADIQQYFRGLGITTPPKLVDVNVGTGRNAPTGEPNGPDGEVALDIEIAGAIAPAAKIAVYFAPNSDAGFIQAVNAAVTDKTNQPSVISISWGGPEAIWQAQSAQAFNRVLQAAAAQGITVCAASGDSGSGDGLQDGADHVDFPASSPYVLGCGGTQLDALPGQGIRSEVTWNDEASGGGAGGGGVSALFDLPAWQQGLKVARADGTTTPLAKRGVPDVAGDASPQTGYEVSVAGTPAVMGGTSAVAPLWAALIARINAANGASAGWINPVLYKHPGALRDITKGSNGTYAAASGWDACTGLGSPNGAQLATILARKPSS(SEQ ID NO:97);
相同体4(NCBI ZP_10028298)
MANHPLNGSERECLKDAQPIGKADPNERLEVTMLVRRRSHDAFEKHISALAAQGASAKHIDHDEFTKHFGADSADLAAVHAFAQKHGLSVVESHEARRAVVLSGTVAQFDAAFGVSLQQYEHDGGTYRGRTGPIHLPDELNGVVDAVMGLDNRPQARPSFRTRAQGNVRWTARAAGASTFTPVQLASLYDFPQGDGQNQCIGIIELGGGYRPADLKTYFASLNMKAPSVTAVSVDHGRNHPTGDPNGPDGEVMLDIEVAGAVAPGAKIVVYFAPNTDAGFIDAIGTAIHDTKNKPSVISISWGGPESAWTQQAMNAFDQAFQSAAALGVTICAASGDNGSGDGVGDGADHVDFPASSPYALGCGGTSLQASGNGIASETVWNDGANGGATGGGVSSFFALPAWQEGLRVTRAGGAHSPLAMRGVPDVAGNADPVTGYEVRVDGHDMVIGGTSAVAPLWAGLIARINAIKGAPVGYINPHLYKDPLALVDITKGNNDDFHATAGWDACTGLGRPDGKKVKDAVS(SEQ ID NO:98);
相同体5(NCBI ZP_09078202)
AGRTSYTPLEVAALYNFPSIHCKDQCIGILELGGGYRPADLQTYFNGLGIPQPNITDVSVGGAANRPTGDPNGPDGEVVLDIEVAAAVTPGAKIAVYFADNSDDGFLNAITTAIHDTRNKPSVISISWGKAEIGWTPQAINAMNQAFRDAAALGVTICCASGDDGSTDRVQDGRYHVDFPASSPYVLACGGTRLESSGSTITQEVVWNEGALGGGATGGGVSDVFDRPNWQANANVPTSANPERRIGRGVPDWAGNADPATGYQILVDGTRAVIGGTSAVAPLFAGLIAIINQKLGHSVGFINPILYNLSAQHNVFHDITSGNNDMSGQNGPYEAQPGWDACTGLGSPDGTKLMNAISEAHRLVSVG(SEQ ID NO:99);
相同体6(NCBI YP_003109679)
MAPEERRTLPGSAMPRPAGAQVLGQIPDDERVEVTVVLQPRAPLPEPGPTPMSRAELADLRSPPEGALEAIARYVAGQGLEVIAADAPRRRIVLAGSAARIAALFGISFVRLQLEGRRYRTYEGEISLPAELAPLVVAVLGLDTRPFARSHRRPAVAPNAPTTAPTVARAYDFPTAYDGRGTTIGFIELGGGFQESDLVRYCEGLGLSTPQVSVVGVDGARNAPTGDPNGPDAEVMLDLEVATGVANGADLVLYMAANTDAAFYSAIATALRDATHAPVAISISWGAPEESYPATTIAAFESVLEEAVHVGVTVLVAAGDQGSTDGVDDGRAHVDYPAASPYVLACGGTRLDLDGTTIVAETVWNDLPNGGATGGGISALFPVPSWQAGIAMPPSANPGAGPGRGVPDVAGNADPDTGYRIVVDGVATVVGGTSAVAPLWAGLVARCHQAGARGGFWNPLLYAARGSSAFHEITVGSNGAYDAGPIWNACCGLGSPNGTAILQTLRA(SEQ ID NO:77);
相同体6変異体:
MAPEERRTLPGSAMPRPAGAQVLGQIPDDERVEVTVVLQPRAPLPEPGPTPMSRAELADLRSPPEGALEAIARYVAGQGLEVIAADAPRRRIVLAGSAARIAALFGISFVRLQLEGRRYRTYEGEISLPAELAPLVVAVLGLDTRPFARSHRRPAVAPNAPTTAPTVARAYDFPTAYDGRGTTIGFIELGGGFQESDLVRYCEGLGLSTPQVSVVGVDGARNAPTGDPNGPDAEVMLDLEVATGVANGADLVLYMAANTDAAFYSAIATALRDATHAPVAISISWSAPEESYPATTIAAFESVLEEAVHVGVTVLVAAGDQGSTGGVDDGRAHVHYPAASPYVLACGGTRLDLDGTTIVAETVWNDLPNGGATGGGISALFPVPSWQAGIAMPPSANPGAGPGRGVPDVAGNADPDTGYRIVVDGVATVVGGTSAVAPLWAGLVARCHQAGARGGFWNPLLYAARGSSAFHEITVGSNGAYDAGPIWNACCGLGSPNGTAILQTLRA(SEQ ID NO:78);
相同体9(NCBI YP_005042475)
MTKQPVSGSSDKIHPDDAKCIGDCDPSEQIEVIVMLRRKDEAGFRQMMSRIDAGEAPGQAVSREEFDRRFTASDEDIDKVKAFAKQYGLSVERAETETRSVVLKGTIEQFQKAFDVKLERFQHHNIGEYRGRTGPVNVPDEMHDAVTAVLGLDSKPQARPHFRFRPPFKPLRGAAPASFSPVDLAKLYDFPDGDGAGQCIAIIELGGGYRDSDLSAYFSKLGVKAPTVVPVGVDGGKNAPTGNPNGPDGEVTLDIEIAGAIAPGARIAVYFAPNSDAGFVDAVNRALHDAANKPSVISISWGGPESNWSPQSMSAFNDVLQSAAALGVTVCAASGDGGSADGVGDGADHVDFPASSPYVLGCGGTSLAASGAGIAKEVVWNDGDQGGAGGGGVSGTFALPVWQKGLSVTRNGKHIALAKRGVPDVAGDASPQTGYEVLIDGEDTVVGGTSAVAPLWAALIARINAIDASPAGFVNPKLYKAKTAFRDITEGNNGSFSAAAGWDACTGMGSPDGGKIAAALKPAKPSQSAGQQ(SEQ ID NO:102);
相同体10(NCBI YP_711059)
MGRLQGSYRPSLGTPVGPVPDDQPIDVTVVLRPTAADDFRADPDDVAAVRAFAGRAGLDVAEVDEPARTVRLRGPAAAARTAFDTPLALYDSGGRAIRGREGDLGLPDELDDRVVAVLGLDERPAARPRFQPAASARQGLTALQVARAYDFPAATGEGQTIAIIELGGGFGQADLDTYFGGLDLPTPAVSAVGVQGAANVPGGDPDGADGEVLLDIEVAGAVAPGAAQVVYFAPNTDAGFLAAINAAAAATPRPAAISISWGGPESSWTAQAMRAYDQAFAAARAAGITVLAAAGDAGADDATDRLVADFPAGSPNVIACGGTKLTLDAAGARASEVVWNEAADSATGGGYSATFTRPAWQPAAVGRYRGLPDISGNADPQTGYRVVVDGQPTVVGGTSAVAPLLAGLVARLAQLTGAPVADLAAVAYANPAAFTDITAGDNQGYPARSGWDPASGLGSPVGTKLLTAVGGPTPPPTTPPPTTPPPTTPPPTIPPPTTPPTQTVDAADRALWSAVATWAGGTHTGANARAAKAVRAWAQAKSLA(SEQ ID NO:103);
相同体12(NCBI YP_003658449)
MTQPRYTPLPGSEREAPLLAARSNATAARASRAQTASATVVLRRRSELPEALVLDQQFISSDELAARYGADPVDIEKVRSVLERFKVSVVEVDAASRRVKVEGAVADIERAFNIALHSASGTDPHSGRGFEYRYRTGVLSVPAELGGIVTAVLGLDNRRQAETRLRVVPAAALGSSYTPVQLGEIYNFPQDATGAGQRIAIIELGGGYTPAGLRRYFASLGVVPPKVAAVSVDGAQNAPGPDPGADGEVQLDVEVAGALAPGAHVLVYFAPNTDQGFLDAVSQAAHATPPPTAISISWGASEDSWTASARDALNQALRDAAALGVTVTAAAGDSGSSDGVPDRRAHVDFPASSPYVLATGGTSLRADPATGVVQSETVWNDSQGSTGGGVSDVFPRPAWQAHVDVPHAGRGVPDVSAVADPATGYQVLVDNQPAVIGGTSAVAPLWAALVARLAESLGRPLGLLQPLVYPRTPGSTAYPGFRDITIGNNGAYKAGKGWDAATGLGVPDGTELLAHLRGLNGSE(SEQ ID NO:104);
相同体13(NCBI YP_004348568)
MARHLHAGSEPKVITESKCIGACDPAERIHVTVMLRREGEQALDALVDKLASGDPAAKPVSREDFAKRFGARADDIQHTEAFAKRHQLTVERVDPVQSVVELAGTIAQFENAFGVKLEKYEHHAIGSFRARTGAIALPDELHDAVTAVLGLDTRPQAHPHFRFRPPFQPARSGAGTSYTPLQLASIYNFPEGDGAGQCIALVELGGGYRAADIRQYFEQLGVKPPKLVDVSVNGGRNAPTDDPNGPDGEVALDIEVAGAIAPGATIAVYFAGNSDAGFIQSVNQAIHDSTNRPSVVSISWGGPEASWTQQSITAFNNVLKTAASLGVTVCAASGDSGSSDGLQDGSNHVDFPASSPYVLACGGTTLDAQAGQGIRREVVWNDEAASGGAGGGGVSAVFPAPSYQKGLSAKATGGGSTPLSQRGVPDVAGDASPTTGYIISIAGTTAVLGGTSAVAPLWAALIARINANGKSPVGWANPKLYAQPGAFHDITQGNNGAFAASEGWDACTGLGSPDGAKVAAALQGASGGSQQGRATGA(SEQ ID NO:105);
相同体14(NCBI YP_001861188)
HMTKHPLPGSERVLAPGSKVVAQCDPSETIEVVVVLRRKNEQQFAQMMKTIEAGAAGARPLTREELEQRFGALPEDIAKLKAFAAQHGLSVVREDASARTVVLSGRIEQFQQAFDVQLQHYEHQSMGRFRGRTGAISVPDELHGVVTAVLGLDDRPQARPHFRIRPPFQPARAQSASSFTPLQLASLYRFPQGDGSGQCIGIVELGGGYRTADLDSYFSSLGVGSPKVVAVGVDQSGNQPTGDPNGPDGEVTLDIEIAGALAPAATIAVYFTTNSDAGFIDAVSQAVHDRTNQPSVISISWGAPESMWTAQSMKALNDVLQSAAAIGVTVCAASGDSGSSDGVGDGRDHVDFPASSPYVLACGGTSLQGSGRTVAHEVVWNDGSNGGATGGGVSGAFPVPAWQEGLSTSAAQGGQRALTGRGVPDVAGDASPLTGYDVIVDGNNTVIGGTSAVAPLWAALIARINGAKGAPVGFVNPKLYKASACNDITQGNNGSYAATTGWDACTGLGSPDGVKVAAAL(SEQ ID NO:106);
相同体15(NCBI YP_002754884)
MSPIASRRSALPLSERPAPENARALAAVEPDRTMTVSVLVRRKKPLVLADLEGKKLTHREFERRYGASEKDFATIAKFAAGHGLAVDHHASSLARRTVVLRGTARQMQQAFGVTLHDYEDSETQQRYHSFTGAITVPAAHARIIESVLGLDARPIAKPHFRVRKRSAAATGAVSFNPPQVASLYSFPTGVDGSGETIGILELGGGYETSDIQQYFSGLGIQPPTVVAVSVDGAVNAPGNPNGADGEVALDIQVAGSIAPGAKLAVYFAPNTEQGFVDAITTAVHDTANKPSVLSISWGGPESSWPQAAAQSLNNACESAAALGVTITVASGDNGSTDGVQDGQNHVDFPASSPYVLACGGTYLAAVNNGVPQESVWDDLASGGGATGGGVSALFPLPAWQTGANVPGGSMRGVPDVAGDASPESGYNVLVDGQPQVVGGTSAVAPLWAALIALVNQQKGEAAGFVNAALYQNPSAFHDITQGSNGAYAAAPGWDPCTGLGSPMGTAIAKILA(SEQ ID NO:107);
相同体16(NCBI YP_003387700)
MSAFDQLVPLPGSEKTVPDAAPSQTLDPNEVLTVTIRIRRKRTLASLVSTTAPVTEVVSRSEYASRFGADPAIVKQVEAFASAYDLSLVEQSLARRSVLLRGTVAQMEQAFGVSLANYQLADGTVFRGRTGVVNVPSELVEHIEGVFGLDNRPQARAHFQVYKPEKGTKVAPRAGGISYTPPQLARLYNFPTGVTGKGQCIAIIELGGGFRTADIKTYFGGLGLKPPTVVAVSVDGGHNAPSTADSADGEVMLDIDVAGGVAPGAKIVVYFAPNTDQGFLDAITTAMHDTKNKPSVISISWGAAESNWTPQALTSFNQAFQAAAALGITVCAAAGDTGSDDSVGDGKAHVDFPASSPFVLACGGTKLTATDNVIASEVVWHESKTSATGGGVSDVFDLPDYQQKSHVPPSVNDKTRIGRGVPDVAAVADPVTGYAVRVDGSNLVFGGTSAVAPLMAGLIALINQQRGKAVGFIHPLIYANPSAFRDITQGNNTTTTGNKGYAATTGWDACTGLGVADGKKLASVLTATPVA(SEQ ID NO:108);
相同体17(NCBI YP_004216463)
MAATPRFASQPRVTLPGSQKHPLTTDTEVPPPAPVKAAATKLSATPFTVTVIVKRKNPLNLKQVLKPAGRLTHAAFAKAHGPSPDGVKLVKAFAKEFGLTVAPAPGQGRRALYLTGTAAAMQTAFGVTFATKIMEGTKYRVREGDICLPKELIGHVDAVLGLDNRPQAKPHFRHHKPAATSVSYTPVQVGQLYGFPSGAKATGQTIGLIELGGGFRAADITAYFKTLGQTAPKVTAVLVDKAKNTPTTSSSADGEVMLDIEVAAAVAPGANIAVYFAPNTDQGFIDAISQAVHDTVNKPSVISISWGGPESTWTAQSLAALDAACQSAAALGITITVAAGDDGSTDGVKGTVNHVDFPASSPHVLGCGGTKLLGSGTTITSEVVWNELTANEGATGGGVSNVFPLPTWQAKSNVPKPTVAAGGRGVPDVSGNADPSTGYTVRVDGSTFPIGGTSAVAPLWAGLIALCNAQNKTTAGFINPALYAAAAAKSFRDITSGNNGGFKAGPGWDACTGLGSPIGTAIAKTLAPATKSTSKTAVKNAPEIRFRPHKKAPTKTAAKTPALRRLK(SEQ ID NO:109);
相同体19(NCBI YP_005056054)
MPTSSRFASQSRVPLPGSERKPFVPAGAPKAAKTPKVSTAVKTVPATGRIRVSLIVPPKQPLDTKRLGKLDARLSRAQFAARHGADPASVRLVKAFAKEFGLTVEPITQPGRCTVQLSGTCAAMRKAFAISLVEHTTEQGKFRLREGEISLPAELEGHVLAVLGLDNRPQAKPHFRIAKPRATNVSYTPVQVAQMYGFPAGATATGQTIGIIELGGGYRAADLTAYFKTLGLPAPTVTAVPIDGGKNTPGNANGADGEVMLDIEVCAAVAQGAKIAVYFTTNTDQGFIDAITTAVHDSTNKPSVISISWGGPESSWTEQSMTALDAACQAAAAVGVTITVAAGDNGSSDGASGDNVDFPASSPHVLACGGTKLVGSGSTITSEVVWDETSNDEGATGGGVSTVFALPTWQKNANVPSPTTSAGGRGVPDVSGDADPSTGYTIRVDSETTVIGGTSAVAPLWAGLIALANAQNKVAAGFVNPALYAAGAKKAFRDITQGNNGSFSAGPGWDACTGLGSPVGNLVIQAVAPKSTTTKKAKKGKTK(SEQ ID NO:110);および
相同体26(NCBI YP_004030750)
MHSYLKQQSHMQSYLEQENHMRSYLEMRKKPYFDDLANIRPGGLTPAQVCQAYQFAKVQPVRPVKLGIVSLAGQYLSSDMSKAFTGYGLPTPVVSTAGSQVLGDLWSNVENMMDIEIAGAAWAYATGTAATLLMQFEPNNETGIPNAINALVAAGCEVISISWGAPANLQTMEAITARKEACKQAAVQNVHVFAASGDESLNDGTNSRTPDDPCCDPNVWGVGGTRLVLQADGSIAQESAWGDGNAADKGGGGGFDSREPLPDYQVGVVHSEHRGSPDSSANADPGTGYAIVANGQWLIGGGTSASAPLTAGYVAAILSTLPGPISQSVLQRKLYTAHKTAFRDILLGSNGAPARPGWEEATGLGSINGPGLAAALQS(SEQ ID NO:111)、
またはそれらの処理された型からなる群から選択される。
相同体4変異体
MANHPLNGSERECLKDAQPIGKADPNERLEVTMLVRRRSHDAFEKHISALAAQGASAKHIDHDEFTKHFGADSADLAAVHAFAQKHGLSVVESHEARRAVVLSGTVAQFDAAFGVSLQQYEHDGGTYRGRTGPIHLPDELNGVVDAVMGLDNRPQARPSFRTRAQGNVRWTARAAGASTFTPVQLASLYDFPQGDGQNQCIGIIELGGGYRPADLKTYFASLNMKAPSVTAVSVDHGRNHPTGDPNGPDGEVMLDIEVAGAVAPGAKIVVYFAPNTDAGFIDAIGTAIHDTKNKPSVISISWSGPESAWTQQAMNAFDQAFQSAAALGVTICAASGDNGSGGGVGDGADHVHFPASSPYALGCGGTSLQASGNGIASETVWNDGANGGATGGGVSSFFALPAWQEGLRVTRAGGAHSPLAMRGVPDVAGNADPVTGYEVRVDGHDMVIGGTSAVAPLWAGLIARINAIKGAPVGYINPHLYKDPLALVDITKGNNDDFHATAGWDACTGLGRPDGKKVKDAVS(SEQ ID NO:89)、
もしくはその処理された型を含む、または該アミノ酸配列もしくはその処理された型からなるポリペプチド。
(A)SEQ ID NO:35のアミノ酸配列と少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、または100%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基278がSerであり、残基78がGluであり、残基82がAspである、
アミノ酸配列;および
(B)SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、または100%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基467がSerであり、残基267がGluであり、残基271がAspである、
アミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
野生型残基番号 AA改変
S73 K、G
N102 D
T103 S
D104 A、T、N
G130 S
S165 N
T168 A
D169 N、G
Q172 D
D179 S、H
からなる群から選択され得る。
野生型残基番号 AA改変
V119 D
S262 K、G
N291 D
T292 S
D293 A、T、N
G319 S
S354 N
T357 A
D358 N、G
Q361 D
D368 S、H
からなる群から選択され得る。
MSDMEKPWKEGEEARAVLQGHARAQAPQAVDKGPVAGDERMAVTVVLRRQRAGELAAHVERQAAIAPHAREHLKREAFAASHGASLDDFAELRRFADAHGLALDRANVAAGTAVLSGPDDAINRAFGVELRHFDHPDGSYRSYLGEVTVPASIAPMIEAVLGLDTRPVARPHFRMQRRAEGGFEARSQAAAPTAYTPLDVAQAYQFPEGLDGQGQCIAIIELGGGYDEASLAQYFASLGVPAPQVVSVSVDGASNQPTGDPKGPDGEVELDIEVAGALAPGAKFAVYFAPDTTAGFLDAITTAIHDPTLKPSVVSISWSGPEDSWTSAAIAAMNRAFLDAAALGVTVLAAAGDSGSTGGEQDGLYHVHFPAASPYVLACGGTRLVASGGRIAQETVWNDGPDGGATGGGVSRIFPLPAWQEHANVPPSANPGASSGRGVPDLAGNADPATGYEVVIDGEATVIGGTSAVAPLFAALVARINQKLGKAVGYLNPTLYQLPADVFHDITEGNNDIANRAQIYQAGPGWDPCTGLGSPIGVRLLQALLPSASQPQP(SEQ ID NO:90)、
またはその処理された型を含む、またはそれらからなる。
MQRGTKEGLNMARHLQADREPRIVPESKCLGQCDPAERIHVTIMLRRQEEGQLDALVHQLATGDARAKPVSRDAFAQRFSANPDDIRKTEDFAHRHQLTVDRVDPVESVVVLSGT(I/V/D)AQFEAAFSVKLERFEHRSIGQYRGRSGPIVLPDDIGDAVTAVLGLDSRPQARPHFRFRPPFKPARGAAAVTFTPIQLASLYDFPAGDGAGQCIAIIELGGGYRAADIQQYFRGLGITTPPKLVDVNVGTGRNAPTGEP(N/S/K/G)GPDGEVALDIEIAGAIAPAAKIAVYFAP(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIQAVNAAVTDKTNQPSVISISW(G/S)GPEAIWQAQSAQAFNRVLQAAAAQGITVCAASGD(S/N)GS(G/T/A)(D/N/G)GL(Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYVLGCGGTQLDALPGQGIRSEVTWNDEASGGGAGGGGVSALFDLPAWQQGLKVARADGTTTPLAKRGVPDVAGDASPQTGYEVSVAGTPAVMGGTSAVAPLWAALIARINAANGASAGWINPVLYKHPGALRDITKGSNGTYAAASGWDACTGLGSPNGAQLATILARKPSS(SEQ ID NO:95)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基116がVまたはDである;(ii)AA残基255がS、KまたはGである;(iii)AA残基284がDである;(iv)AA残基285がTである;(v)AA残基286がA、T、またはNである;(vi)AA残基312がSである;(vii)AA残基347がNである;(viii)AA残基350がTまたはAである;(iv)AA残基351がNまたはGである;(x)AA残基354がDである;そして(xi)AA残基361がSまたはHである);
相同体4
MANHPLNGSERECLKDAQPIGKADPNERLEVTMLVRRRSHDAFEKHISALAAQGASAKHIDHDEFTKHFGADSADLAAVHAFAQKHGLSVVESHEARRAVVLSGT(V/D)AQFDAAFGVSLQQYEHDGGTYRGRTGPIHLPDELNGVVDAVMGLDNRPQARPSFRTRAQGNVRWTARAAGASTFTPVQLASLYDFPQGDGQNQCIGIIELGGGYRPADLKTYFASLNMKAPSVTAVSVDHGRNHPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVMLDIEVAGAVAPGAKIVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)AGFIDAIGTAIHDTKNKPSVISISW(G/S)GPESAWTQQAMNAFDQAFQSAAALGVTICAASGD(N/S)GS(G/T/A)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYALGCGGTSLQASGNGIASETVWNDGANGGATGGGVSSFFALPAWQEGLRVTRAGGAHSPLAMRGVPDVAGNADPVTGYEVRVDGHDMVIGGTSAVAPLWAGLIARINAIKGAPVGYINPHLYKDPLALVDITKGNNDDFHATAGWDACTGLGRPDGKKVKDAVS(SEQ ID NO:75)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基106がDである;(ii)AA残基246がS、KまたはGである;(iii)AA残基275がDである;(iv)AA残基276がSである;(v)AA残基277がA、T、またはNである;(vi)AA残基303がSである;(vii)AA残基338がSである;(viii)AA残基341がTまたはAである;(ix)AA残基342がNまたはGである;(x)AA残基345がQまたはDである;そして(xi)AA残基352がSまたはHである);
相同体5
MNHDHSPTGGELSNWVRVPGSERAAVQGSRKVGPADPNEQMSVTVVVRRPAADTAVTSMIEKVGAQPLSERRHLTREEFASTHGANPADLSKVEKFAHEHNLQVKEVNAAAGTMVLSGT(V/D)TSFSKAFGVELSTYEHPDFTYRGRIGHVHIPDYLADTIQSVLGLDNRPQASPRFRVLKEEGGVTTAHAGRTSYTPLEVAALYNFPSIHCKDQCIGILELGGGYRPADLQTYFNGLGIPQPNITDVSVGGAANRPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVVLDIEVAAAVTPGAKIAVYFAD(N/D)(S/T)(D/A/T/N)DGFLNAITTAIHDTRNKPSVISISW(G/S)KAEIGWTPQAINAMNQAFRDAAALGVTICCASGD(D/S/N)GS(T/A)(D//N/G)RV(Q/D)DGRYHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTRLESSGSTITQEVVWNEGALGGGATGGGVSDVFDRPNWQANANVPTSANPERRIGRGVPDWAGNADPATGYQILVDGTRAVIGGTSAVAPLFAGLIAIINQKLGHSVGFINPILYNLSAQHNVFHDITSGNNDMSGQNGPYEAQPGWDACTGLGSPDGTKLMNAISEAHRLVSVG(SEQ ID NO:76)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基120がDである;(ii)AA残基259がS、KまたはGである;(iii)AA残基288がDである;(iv)AA残基289がTである;(v)AA残基290がA、T、またはNである;(vi)AA残基316がSである;(vii)AA残基351がSまたはNである;(viii)AA残基354がAである;(ix)AA残基355がNまたはGである;(x)AA残基358がDである;そして(xi)AA残基365がSまたはHである);
相同体6変異体:
MAPEERRTLPGSAMPRPAGAQVLGQIPDDERVEVTVVLQPRAPLPEPGPTPMSRAELADLRSPPEGALEAIARYVAGQGLEVIAADAPRRRIVLAGSAARIAALFGISFVRLQLEGRRYRTYEGEISLPAELAPLVVAVLGLDTRPFARSHRRPAVAPNAPTTAPTVARAYDFPTAYDGRGTTIGFIELGGGFQESDLVRYCEGLGLSTPQVSVVGVDGARNAPTGDPNGPDAEVMLDLEVATGVANGADLVLYMAANTDAAFYSAIATALRDATHAPVAISISWSAPEESYPATTIAAFESVLEEAVHVGVTVLVAAGDQGSTGGVDDGRAHVHYPAASPYVLACGGTRLDLDGTTIVAETVWNDLPNGGATGGGISALFPVPSWQAGIAMPPSANPGAGPGRGVPDVAGNADPDTGYRIVVDGVATVVGGTSAVAPLWAGLVARCHQAGARGGFWNPLLYAARGSSAFHEITVGSNGAYDAGPIWNACCGLGSPNGTAILQTLRA(SEQ ID NO:78);
相同体9
MTKQPVSGSSDKIHPDDAKCIGDCDPSEQIEVIVMLRRKDEAGFRQMMSRIDAGEAPGQAVSREEFDRRFTASDEDIDKVKAFAKQYGLSVERAETETRSVVLKGT(I/V/D)EQFQKAFDVKLERFQHHNIGEYRGRTGPVNVPDEMHDAVTAVLGLDSKPQARPHFRFRPPFKPLRGAAPASFSPVDLAKLYDFPDGDGAGQCIAIIELGGGYRDSDLSAYFSKLGVKAPTVVPVGVDGGKNAPTGNP(N/S/K/G)GPDGEVTLDIEIAGAIAPGARIAVYFAP(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFVDAVNRALHDAANKPSVISISW(G/S)GPESNWSPQSMSAFNDVLQSAAALGVTVCAASGD(G/S/N)GS(A/T)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGADHV(D/S/H)FPASSPYVLGCGGTSLAASGAGIAKEVVWNDGDQGGAGGGGVSGTFALPVWQKGLSVTRNGKHIALAKRGVPDVAGDASPQTGYEVLIDGEDTVVGGTSAVAPLWAALIARINAIDASPAGFVNPKLYKAKTAFRDITEGNNGSFSAAAGWDACTGMGSPDGGKIAAALKPAKPSQSAGQQ(SEQ ID NO:79)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基107がVまたはDである;(ii)AA残基245がS、KまたはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がTである;(v)AA残基276がA、TまたはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がSまたはNである;(viii)AA残基340がTまたはAである;(ix)AA残基341がNまたはGである;(x)AA残基344がQまたはDである;そして(xi)AA残基351がSまたはHである);
相同体10
MGRLQGSYRPSLGTPVGPVPDDQPIDVTVVLRPTAADDFRADPDDVAAVRAFAGRAGLDVAEVDEPARTVRLRGP(A/V/D)AAARTAFDTPLALYDSGGRAIRGREGDLGLPDELDDRVVAVLGLDERPAARPRFQPAASARQGLTALQVARAYDFPAATGEGQTIAIIELGGGFGQADLDTYFGGLDLPTPAVSAVGVQGAANVPGGDP(/S/K/G)DGADGEVLLDIEVAGAVAPGAAQVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)AGFLAAINAAAAATPRPAAISISWG(G/S)PESSWTAQAMRAYDQAFAAARAAGITVLAAAGD(A/S/N)GA(D/T/A)(D/S/N/G)(A/Q/D)TDRLVA(D/S/H)FPAGSPNVIACGGTKLTLDAAGARASEVVWNEAADSATGGGYSATFTRPAWQPAAVGRYRGLPDISGNADPQTGYRVVVDGQPTVVGGTSAVAPLLAGLVARLAQLTGAPVADLAAVAYANPAAFTDITAGDNQGYPARSGWDPASGLGSPVGTKLLTAVGGPTPPPTTPPPTTPPPTTPPPTIPPPTTPPTQTVDAADRALWSAVATWAGGTHTGANARAAKAVRAWAQAKSLA(SEQ ID NO:80)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基76がVまたはDである;(ii)AA残基206がS、KまたはGである;(iii)AA残基235がDである;(iv)AA残基236がSである;(v)AA残基237がA、T、またはNである;(vi)AA残基262がSである;(vii)AA残基297がSまたはNである;(viii)AA残基300がTまたはAである;(ix)AA残基301がNまたはGである;(x)AA残基302がQまたはDである;そして(xi)AA残基309がSまたはHである);
相同体12
MTQPRYTPLPGSEREAPLLAARSNATAARASRAQTASATVVLRRRSELPEALVLDQQFISSDELAARYGADPVDIEKVRSVLERFKVSVVEVDAASRRVKVEGA(V/D)ADIERAFNIALHSASGTDPHSGRGFEYRYRTGVLSVPAELGGIVTAVLGLDNRRQAETRLRVVPAAALGSSYTPVQLGEIYNFPQDATGAGQRIAIIELGGGYTPAGLRRYFASLGVVPPKVAAVSVDGAQNAPGPDP(G/S/K/G)ADGEVQLDVEVAGALAPGAHVLVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFLDAVSQAAHATPPPTAISISW(G/S)ASEDSWTASARDALNQALRDAAALGVTVTAAAGD(S/N)GS(S/T/A)(D/N/G)GV(P/Q/D)DRRAHV(D/S/H)FPASSPYVLATGGTSLRADPATGVVQSETVWNDSQGSTGGGVSDVFPRPAWQAHVDVPHAGRGVPDVSAVADPATGYQVLVDNQPAVIGGTSAVAPLWAALVARLAESLGRPLGLLQPLVYPRTPGSTAYPGFRDITIGNNGAYKAGKGWDAATGLGVPDGTELLAHLRGLNGSE(SEQ ID NO:81)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基105がDである;(ii)AA残基244がSまたはKである;(iii)AA残基272がDである;(iv)AA残基273がSである;(v)AA残基274がA、T、またはNである;(vi)AA残基299がSである;(vii)AA残基334がNである;(viii)AA残基337がTまたはAである;(ix)AA残基338がNまたはGである;(x)AA残基341がQまたはDである;そして(xi)AA残基348がSまたはHである);
相同体13
MARHLHAGSEPKVITESKCIGACDPAERIHVTVMLRREGEQALDALVDKLASGDPAAKPVSREDFAKRFGARADDIQHTEAFAKRHQLTVERVDPVQSVVELAGT(I/V/D)AQFENAFGVKLEKYEHHAIGSFRARTGAIALPDELHDAVTAVLGLDTRPQAHPHFRFRPPFQPARSGAGTSYTPLQLASIYNFPEGDGAGQCIALVELGGGYRAADIRQYFEQLGVKPPKLVDVSVNGGRNAPTDDP(N/S/K/G)GPDGEVALDIEVAGAIAPGATIAVYFAG(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIQSVNQAIHDSTNRPSVVSISW(G/S)GPEASWTQQSITAFNNVLKTAASLGVTVCAASGD(S//N)GS(S/T/A)(D/N/G)GL(Q/D)DGSNHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTTLDAQAGQGIRREVVWNDEAASGGAGGGGVSAVFPAPSYQKGLSAKATGGGSTPLSQRGVPDVAGDASPTTGYIISIAGTTAVLGGTSAVAPLWAALIARINANGKSPVGWANPKLYAQPGAFHDITQGNNGAFAASEGWDACTGLGSPDGAKVAAALQGASGGSQQGRATGA(SEQ ID NO:82)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基106がVまたはDである;(ii)AA残基244がS、KまたはGである;(iii)AA残基273がDである;(iv)AA残基274がTである;(v)AA残基275がA、T、またはNである;(vi)AA残基301がSである;(vii)AA残基336がNである;(viii)AA残基339がTまたはAである;(ix)AA残基340がNまたはGである;(x)AA残基343がDである;そして(xi)AA残基350がSまたはHである);
相同体14
MTKHPLPGSERVLAPGSKVVAQCDPSETIEVVVVLRRKNEQQFAQMMKTIEAGAAGARPLTREELEQRFGALPEDIAKLKAFAAQHGLSVVREDASARTVVLSGR(I/V/D)EQFQQAFDVQLQHYEHQSMGRFRGRTGAISVPDELHGVVTAVLGLDDRPQARPHFRIRPPFQPARAQSASSFTPLQLASLYRFPQGDGSGQCIGIVELGGGYRTADLDSYFSSLGVGSPKVVAVGVDQSGNQPTGDP(N/S/K/G)GPDGEVTLDIEIAGALAPAATIAVYFTT(N/D)(S/T)(D/A/T/N)AGFIDAVSQAVHDRTNQPSVISISW(G/S)APESMWTAQSMKALNDVLQSAAAIGVTVCAASGD(S/N)GS(S/T/A)(D/N/G)GV(G/Q/D)DGRDHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTSLQGSGRTVAHEVVWNDGSNGGATGGGVSGAFPVPAWQEGLSTSAAQGGQRALTGRGVPDVAGDASPLTGYDVIVDGNNTVIGGTSAVAPLWAALIARINGAKGAPVGFVNPKLYKASACNDITQGNNGSYAATTGWDACTGLGSPDGVKVAAAL(SEQ ID NO:83)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基107がVまたはDである;(ii)AA残基245がS、KまたはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がTである;(v)AA残基276がA、T、またはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がNである;(viii)AA残基340がTまたはAである;(ix)AA残基341がNまたはGである;(x)AA残基344がQまたはDである;そして(xi)AA残基351がSまたはHである);
相同体15
MSPIASRRSALPLSERPAPENARALAAVEPDRTMTVSVLVRRKKPLVLADLEGKKLTHREFERRYGASEKDFATIAKFAAGHGLAVDHHASSLARRTVVLRGT(A/V/D)RQMQQAFGVTLHDYEDSETQQRYHSFTGAITVPAAHARIIESVLGLDARPIAKPHFRVRKRSAAATGAVSFNPPQVASLYSFPTGVDGSGETIGILELGGGYETSDIQQYFSGLGIQPPTVVAVSVDGAVNAPGNP(N/S/K/G)GADGEVALDIQVAGSIAPGAKLAVYFAP(N/D)(T/S)(E/D/A/T/N)QGFVDAITTAVHDTANKPSVLSISW(G/S)GPESSWPQAAAQSLNNACESAAALGVTITVASGD(N/S)GS(T/A)(D/N/G)GV(Q/D)DGQNHV(D/S/H)FPASSPYVLACGGTYLAAVNNGVPQESVWDDLASGGGATGGGVSALFPLPAWQTGANVPGGSMRGVPDVAGDASPESGYNVLVDGQPQVVGGTSAVAPLWAALIALVNQQKGEAAGFVNAALYQNPSAFHDITQGSNGAYAAAPGWDPCTGLGSPMGTAIAKILA(SEQ ID NO:84)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基104がVまたはDである;(ii)AA残基241がS、KまたはGである;(iii)AA残基270がDである;(iv)AA残基271がSである;(v)AA残基272がD、A、T、またはNである;(vi)AA残基398がSである;(vii)AA残基33がSである;(viii)AA残基336がAである;(ix)AA残基337がNまたはGである;(x)AA残基340がDである;そして(xi)AA残基347がSまたはHである);
相同体16
MSAFDQLVPLPGSEKTVPDAAPSQTLDPNEVLTVTIRIRRKRTLASLVSTTAPVTEVVSRSEYASRFGADPAIVKQVEAFASAYDLSLVEQSLARRSVLLRGT(V/D)AQMEQAFGVSLANYQLADGTVFRGRTGVVNVPSELVEHIEGVFGLDNRPQARAHFQVYKPEKGTKVAPRAGGISYTPPQLARLYNFPTGVTGKGQCIAIIELGGGFRTADIKTYFGGLGLKPPTVVAVSVDGGHNAPSTA(D/S/K/G)SADGEVMLDIDVAGGVAPGAKIVVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFLDAITTAMHDTKNKPSVISISW(G/S)AAESNWTPQALTSFNQAFQAAAALGITVCAAAGD(T/S/N)GS(D/T/A)(D/N/G)SV(G/Q/D)DGKAHV(D/S/H)FPASSPFVLACGGTKLTATDNVIASEVVWHESKTSATGGGVSDVFDLPDYQQKSHVPPSVNDKTRIGRGVPDVAAVADPVTGYAVRVDGSNLVFGGTSAVAPLMAGLIALINQQRGKAVGFIHPLIYANPSAFRDITQGNNTTTTGNKGYAATTGWDACTGLGVADGKKLASVLTATPVA(SEQ ID NO:85)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基104がDである;(ii)AA残基245がS、KまたはGである;(iii)AA残基274がDである;(iv)AA残基275がSである;(v)AA残基276がA、T、またはNである;(vi)AA残基302がSである;(vii)AA残基337がSまたはNである;(viii)AA残基340がTまたはAである;(ix)AA残基341がNまたはGである;(x)AA残基344がQまたはDである;そして(xi)AA残基351がSまたはHである);
相同体17
MAATPRFASQPRVTLPGSQKHPLTTDTEVPPPAPVKAAATKLSATPFTVTVIVKRKNPLNLKQVLKPAGRLTHAAFAKAHGPSPDGVKLVKAFAKEFGLTVAPAPGQGRRALYLTGT(A/V/D)AAMQTAFGVTFATKIMEGTKYRVREGDICLPKELIGHVDAVLGLDNRPQAKPHFRHHKPAATSVSYTPVQVGQLYGFPSGAKATGQTIGLIELGGGFRAADITAYFKTLGQTAPKVTAVLVDKAKNTPTTS(S/K/G)SADGEVMLDIEVAAAVAPGANIAVYFAP(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFIDAISQAVHDTVNKPSVISISW(G/S)GPESTWTAQSLAALDAACQSAAALGITITVAAGD(D/S/N)GS(T/A)(D/N/G)GV(K/Q/D)GTVNHV(D/S/H)FPASSPHVLGCGGTKLLGSGTTITSEVVWNELTANEGATGGGVSNVFPLPTWQAKSNVPKPTVAAGGRGVPDVSGNADPSTGYTVRVDGSTFPIGGTSAVAPLWAGLIALCNAQNKTTAGFINPALYAAAAAKSFRDITSGNNGGFKAGPGWDACTGLGSPIGTAIAKTLAPATKSTSKTAVKNAPEIRFRPHKKAPTKTAAKTPALRRLK(SEQ ID NO:86)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基118がVまたはDである;(ii)AA残基250がKまたはGである;(iii)AA残基279がDである;(iv)AA残基280がSである;(v)AA残基281がA、T、またはNである;(vi)AA残基307がSである;(vii)AA残基342がSまたはNである;(viii)AA残基345がAである;(ix)AA残基346がNまたはGである;(x)AA残基349がQまたはDである;そして(xi)AA残基356がSまたはHである);
相同体19
MPTSSRFASQSRVPLPGSERKPFVPAGAPKAAKTPKVSTAVKTVPATGRIRVSLIVPPKQPLDTKRLGKLDARLSRAQFAARHGADPASVRLVKAFAKEFGLTVEPITQPGRCTVQLSGT(C/V/D)AAMRKAFAISLVEHTTEQGKFRLREGEISLPAELEGHVLAVLGLDNRPQAKPHFRIAKPRATNVSYTPVQVAQMYGFPAGATATGQTIGIIELGGGYRAADLTAYFKTLGLPAPTVTAVPIDGGKNTPGNA(N/S/K/G)GADGEVMLDIEVCAAVAQGAKIAVYFTT(N/D)(T/S)(D/A/T/N)QGFIDAITTAVHDSTNKPSVISISW(G//S)GPESSWTEQSMTALDAACQAAAAVGVTITVAAGD(N/S)GS(S/T/S)(D/N/G)GA(S/Q/D)GDNV(D/S/H)FPASSPHVLACGGTKLVGSGSTITSEVVWDETSNDEGATGGGVSTVFALPTWQKNANVPSPTTSAGGRGVPDVSGDADPSTGYTIRVDSETTVIGGTSAVAPLWAGLIALANAQNKVAAGFVNPALYAAGAKKAFRDITQGNNGSFSAGPGWDACTGLGSPVGNLVIQAVAPKSTTTKKAKKGKTK(SEQ ID NO:87)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基121がVまたはDである;(ii)AA残基253がS、KまたはGである;(iii)AA残基282がDである;(iv)AA残基283がSである;(v)AA残基284がA、T、またはNである;(vi)AA残基310がSである;(vii)AA残基345がSである;(viii)AA残基348がTまたはAである;(ix)AA残基349がNまたはGである;(x)AA残基352がQまたはDである;そして(xi)AA残基357がSまたはHである);
相同体26
MHSYLKQQSHMQSYLEQENHMRSYLEMRKKPYFDDLANIRPGGLTPAQVCQAYQFAKVQPVRPVKLGIVSLAGQYLSSDMSKAFTGYGLPTPVVSTAGSQVLGDLWSNVE(N/S/K/G)MMDIEIAGAAWAYATGTAATLLMQFEP(N/D)(N/T/S)(E/D/A/T/N)TGIPNAINALVAAGCEVISISW(G/S)APANLQTMEAITARKEACKQAAVQNVHVFAASGD(E/S/N)SL(N/T/A)(D/N/G)(G/Q/D)TNSRTP(D/S/H)DPCCDPNVWGVGGTRLVLQADGSIAQESAWGDGNAADKGGGGGFDSREPLPDYQVGVVHSEHRGSPDSSANADPGTGYAIVANGQWLIGGGTSASAPLTAGYVAAILSTLPGPISQSVLQRKLYTAHKTAFRDILLGSNGAPARPGWEEATGLGSINGPGLAAALQS(SEQ ID NO:88)
(ここで、以下のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11全てがあてはまる:(i)AA残基111がS、KまたはGである;(ii)AA残基139がDである;(iii)AA残基140がTまたはSである;(iv)AA残基141がD、A、T、またはNである;(v)AA残基164がSである;(vi)AA残基199がSまたはNである;(vii)AA残基202がTまたはAである;(viii)AA残基203がNまたはGである;(ix)AA残基204がQまたはDである;そして(x)AA残基211がSまたはHである)。
MANHPLNGSERECLKDAQPIGKADPNERLEVTMLVRRRSHDAFEKHISALAAQGASAKHIDHDEFTKHFGADSADLAAVHAFAQKHGLSVVESHEARRAVVLSGTVAQFDAAFGVSLQQYEHDGGTYRGRTGPIHLPDELNGVVDAVMGLDNRPQARPSFRTRAQGNVRWTARAAGASTFTPVQLASLYDFPQGDGQNQCIGIIELGGGYRPADLKTYFASLNMKAPSVTAVSVDHGRNHPTGDPNGPDGEVMLDIEVAGAVAPGAKIVVYFAPNTDAGFIDAIGTAIHDTKNKPSVISISWSGPESAWTQQAMNAFDQAFQSAAALGVTICAASGDNGSGGGVGDGADHVHFPASSPYALGCGGTSLQASGNGIASETVWNDGANGGATGGGVSSFFALPAWQEGLRVTRAGGAHSPLAMRGVPDVAGNADPVTGYEVRVDGHDMVIGGTSAVAPLWAGLIARINAIKGAPVGYINPHLYKDPLALVDITKGNNDDFHATAGWDACTGLGRPDGKKVKDAVS(SEQ ID NO:89)、またはその処理された型のアミノ酸配列を含む。
(a)SEQ ID NO:74〜89、95、97〜99および102〜111、またはそれらの処理された型からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む1つまたは複数のポリペプチドと;
(b)1つまたは複数のさらなるポリペプチドであって、
(A)SEQ ID NO:35のアミノ酸配列と少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、または100%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基278がSerであり、残基78がGluであり、残基82がAspである、
アミノ酸配列;および
(B)SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、または100%同一であり、
(i)該ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基467がSerであり、残基267がGluであり、残基271がAspである、
アミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、該1つまたは複数のさらなるポリペプチドと、
を含む組成物を提供する。
セリアック病は、人口のおよそ1%が罹患する自己免疫障害である(1、2)。この疾患は、小麦粉中の主要タンパク質であるグルテンへの、そして大麦およびライ麦中の関連タンパク質への炎症反応を特徴とする(2)。グルテンは、糖タンパク質グリアジンとグルテニンとの不均一混合物で構成される(3)。摂取する際に、α−グリアジンが、胃および腸内プロテアーゼにより一部がオリゴペプチドに分解されるが、それは通常、高いプロリンおよびグルタミン含量であるためさらなるタンパク質分解に抵抗する(3)。不完全なタンパク質分解から生じる免疫原性オリゴペプチドは、PQモチーフを多く含み(4、5)、セリアック病の人々の腸内で炎症および傷害を刺激する。現在、この疾患の唯一の処置は、食事からグルテンを完全に排除することであるが、現代の食物製品にはこのタンパク質が遍在することから、実現が困難である(6)。
タンパク質の発現および精製
pET29bプラスミド内に含まれる該当する各タンパク質をコードする遺伝子を、大腸菌BL21(DE3)細胞に形質転換した。個々のコロニーを選別し、50μg/μLカナマイシンを含むTerrific Broth(商標)(TB+Kan)に接種して、37℃で一夜インキュベートした。一夜培養物500μLを、自己誘導培地500mL(トリプトン5g、酵母エキス2.5g、ddH2O 465mL)に添加して、37℃でおよそ4時間振とうし、その後、自己誘導成分(MgSO4 500μL、1000×微量金属500μL、20×NPS 25mL、20×5052 10mL、50mg/mLカナマイシン 500μL)を添加した。その後、培養物を18℃で30分間浸透した後、遠沈させた。ペレットを1×PBS 10mLに再懸濁し、その後、溶解緩衝液(50mM HEPES、500mM NaCl、1mM bME、2mg/mLリソザイム、0.2mg/mL DNase、ddH2O)5mLと共に音波処理して溶解し、遠沈させた。その後、該タンパク質をTALONコバルトアフィニティーカラムで精製した。KumaMax、KumaWT、およびSC Pepを洗浄緩衝液(10mMイミダゾール、50mM HEPES、500mM NaCl、1mM bME、ddH2O)20mLで3回洗浄し、その後、溶離緩衝液(200mMイミダゾール、50mM HEPES、500mM NaCl、1mM bME、)15mLで溶出させた。EP−B2をカラムでリフォールディングしなければならず、そのため溶解後に、ddH2Oの代わりに塩酸グアニジンに希釈さしてEp−B2封入体の変性を可能にすることだけが洗浄緩衝液と異なるEP−B2緩衝液10mLで、ペレットを再懸濁させた。この再懸濁物をペレット化し、上清(変性したEP−B2を含む)を0.8μmフィルターでカラム上にろ過した。EP−B2をEP−B2緩衝液20mLで1回洗浄した後、洗浄緩衝液20mLで2回洗浄してカラム上のタンパク質をリフォールディングさせた。タンパク質を溶離緩衝液15mLで溶出させた。タンパク質は全て、15mLから約500μLに濃縮し、その後、透析緩衝液(20%グリセロール、50mM HEPES、500mM NaCl、1mM bME)1Lで1回透析した。吸光係数をKumaWTおよびKumaWT変異体では53,985M−1cm−1、SC Pepでは152,290M−1cm−1、およびEP−B2では58,245M−1cm−1として、タンパク質濃度を分光光度測定で計算した。
活性スクリーンにおいてFQ基質での最大活性を示したクマモリシン−Asの変異体を配列決定し、その後、小規模で精製した。TB+Kan一夜培養物500μLをTB+Kan 50mLに添加し、光学濃度0.5〜0.8に達するまで37℃で発育させた。IPTGを0.5mMになるように添加し、培養物を22℃で16〜24時間発現させた。細胞を遠沈させ、洗浄緩衝液(1×PBS、5mMイミダゾール、ddH2O)500μLに再懸濁させ、2mLエッペンドルフ管に移し替えて、溶解緩衝液(1×PBS、5mMイミダゾール、2×Bug Buster(商標)、2mg/mLリソザイム、0.2mg/mL DNase、ddH2O)1mLに溶解させた。遠心分離後、上清を新しい管にデカントした。TALONコバルト樹脂200μLを含むカラムをエッペンドルフ管に入れて、上清をカラムに注ぎ、20分間揺すった後、遠沈させ、透過分画を廃棄した。タンパク質を洗浄緩衝液500μLで3回洗浄して、洗浄と洗浄の間に透過分画を廃棄した。酵素を溶離緩衝液(1×PBS、200mMイミダゾール、ddH2O)200μLで溶出させ、吸光係数53,985M−1cm−1を利用して濃度を分光光度測定で計算した。
グルテン分解のための酵素変異体の性質を、基質としての、蛍光クエンチα−グリアジンヘキサペプチド類似体QXL520−PQPQLP−K(5−FAM)−NH2(FQ)(SEQ ID NO:69)の加水分解により測定した。各酵素を100mM pH4酢酸ナトリウム緩衝液中、室温で15分間インキュベートした。15分後、蛍光基質50μLを100、50、25、12.5、6.25、および0μMペプチドの最終濃度範囲で添加して、全ての基質濃度範囲で0.05μM KumaMax(商標)、0.5μM KumaWT、0.5μM SC Pep、および0.5μM EP−B2の濃度を維持した。直後に、励起波長455nmを用い、発光波長485nmを測定して、プレートを分光光度法により1時間測定した。
酵素の安定性を、消化プロテアーゼであるペプシンおよびトリプシンの存在下で計測した。KumaWT、KumaMax(商標)、SC Pep、およびEP−B2を、各消化プロテアーゼの本来のpH環境に適合する緩衝液中でインキュベートした。pH3.5 100mM酢酸ナトリウムを用いて、ペプシン消化アッセイでは該酵素をプレインキュベートし、トリプシン消化アッセイではpH7.5透析緩衝液(「タンパク質の発現および精製」参照)をプレインキュベートした。各実験酵素は、各緩衝液中、0.2mg/mLの濃度で37℃で15分間インキュベートした。
全長α9−グリアジンへの酵素活性を、高速液体クロマトグラフィー−質量分析法を利用して測定した。各酵素については、1M pH4酢酸ナトリウム緩衝液7μLを5μM酵素28μLに添加して、グリアジン3μLの別個の試験管と並べて37℃で15分間インキュベートした。次に、各酵素混合物27μL、および対照としての透析緩衝液27μLを、グリアジンの各試験管に添加した。これらを37℃でもう一度インキュベートし、試料5μLを10、20、30、40、および50分目に採取した。各タイムポイントの試料を、1%ギ酸およびおよそ33μMロイペプチンを含む80%アセトニトリル95μL中でクエンチした。試料をHPLCで分析して、異なるプロテアーゼによるグリアジン分解を経時的に比較した。
参考資料
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13. Gardner, J.D., Ciociola, A.A. & Robinson, M. Measurement of meal−stimulated gastric acid secretion by in vivo gastric autotitration. J Appl Physiol 92, 427−34 (2002).
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Claims (12)
- SEQ ID NO:74のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、または前記アミノ酸配列からなる、ポリペプチドを含む、セリアックスプルーを処置するための組成物。
- 1つまたは複数のさらなるポリペプチドの一定量をさらに含み、前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、
(A)SEQ ID NO:35のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
(i)前記ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基278がSerであり、残基78がGluであり、残基82がAspである、
アミノ酸配列;および
(B)SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
(i)前記ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基467がSerであり、残基267がGluであり、残基271がAspである、
アミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の組成物。 - 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:1またはSEQ ID NO:35のアミノ酸配列を含む、請求項2に記載の組成物。
- 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:2〜33または36〜67のいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項2または3に記載の組成物。
- 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:90のアミノ酸配列を含む、請求項2〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ポリペプチドと、存在するならば前記さらなるポリペプチドが、経口投与される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- (a)SEQ ID NO:74のポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドと;
(b)1つまたは複数のさらなるポリペプチドであって、
(A)SEQ ID NO:35のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
(i)前記ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基278がSerであり、残基78がGluであり、残基82がAspである、
アミノ酸配列;および
(B)SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
(i)前記ポリペプチドがpH4でPQPQLP(SEQ ID NO:34)ペプチドを分解し;そして
(ii)残基467がSerであり、残基267がGluであり、残基271がAspである、
アミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドと、
を含むセリアックスプルーを処置するための組成物。 - 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:1および/またはSEQ ID NO:35のアミノ酸配列を含む、請求項7に記載の組成物。
- 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:2〜33または36〜67のいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項7または8に記載の組成物。
- 前記1つまたは複数のさらなるポリペプチドが、SEQ ID NO:90のアミノ酸配列を含む、請求項7〜9のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項7〜10のいずれか1項に記載の組成物と、医薬的に許容し得る担体と、を含むセリアックスプルーを処置するための医薬組成物。
- 経口送達用に配合される、請求項11に記載の医薬組成物。
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