JP2008546425A - キャノーラタンパク質の生成 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、米国特許法第119条(e)の下、2005年7月1日出願の米国仮特許出願第60/695,535号の優先権を主張するものである。
本発明は、キャノーラの7Sおよび12Sタンパク質を実質的には含まない、キャノーラの2Sタンパク質を調製するための新しい手順に関する。
キャノーラタンパク質単離物は、キャノーラ油糧種子粗粉から形成することができる。共に本発明の譲渡人に譲渡され、その開示が参照によって本明細書に組み込まれる、2002年5月3日出願の同時係属中の米国特許出願第10/137,391号(米国特許出願公開第20030125526A1号)、2004年6月9日出願の第10/476,230号(米国特許出願公開第20040254353A1号)、および対応するPCT出願WO第02/089597号には、キャノーラ油糧種子粗粉から、少なくとも100wt%のタンパク質含量(N×6.25)を有するキャノーラタンパク質単離物を生成する方法が記載されている。その手順は、塩溶液を使用してキャノーラ油糧種子粗粉を抽出するステップと、得られたタンパク質水溶液を残留油糧種子粗粉から分離するステップと、選択的膜技術を使用することによってその水溶液のタンパク質濃度を少なくとも約200g/Lに増大すると同時に、イオン強度を実質的に一定に維持するステップと、得られた濃縮タンパク質溶液を冷水で希釈してタンパク質ミセルを形成させるステップと、タンパク質ミセルを沈降させて、非晶質で粘着性の、ゼラチン状のグルテン様タンパク質ミセル塊(PMM)を形成するステップと、上澄み液から、ケルダール窒素(N×6.25)によって決定して、少なくとも約100wt%のタンパク質含量を有するタンパク質ミセル塊を回収するステップと、を含む、多重ステップのプロセスを含む。本明細書では、タンパク質含量は乾燥重量ベースで決定される。回収したPMMは乾燥することができる。
約60〜約95wt%の2Sタンパク質、
約5〜約40wt%の7Sタンパク質、および
0〜約5wt%の12Sタンパク質、
好ましくは
約70〜約95wt%の2Sタンパク質、
約5〜約30wt%の7Sタンパク質、および
0〜約2wt%の12Sタンパク質。
約60〜約98wt%の7Sタンパク質、
約1〜約15wt%の12Sタンパク質、および
0〜約25wt%の2Sタンパク質、
好ましくは
約88〜約98wt%の7Sタンパク質、
約1〜約10wt%の12Sタンパク質、および
0〜約6wt%の2Sタンパク質。
驚くべきことに、本発明の一態様によれば、キャノーラ油糧種子粗粉の抽出を、相対的周囲温度ではなく高温で行う場合、7Sおよび12Sタンパク質に優先して2Sタンパク質が抽出され、得られた抽出液中のキャノーラタンパク質は、主に2Sタンパク質からなり、その後その2Sタンパク質は、該抽出液から比較的純粋な形態で得られることが見出された。
上記のように、本発明は、実質的には7Sおよび12Sタンパク質を含まず、主に2Sタンパク質からなるキャノーラタンパク質溶液の生成プロセスの4つの態様を提供する。
本発明のこの態様に従ってキャノーラタンパク質単離物を提供するプロセスの最初のステップは、キャノーラ油糧種子粗粉由来のタンパク質材料を可溶化することを含む。キャノーラ種子粗粉から回収されたタンパク質材料は、キャノーラ種子に天然に存在するタンパク質であってよく、またはそのタンパク質材料は、遺伝子操作によって改変されてはいるが、天然タンパク質の特徴的な疎水性および極性を有するタンパク質であってよい。キャノーラ粗粉は、様々なレベルの非変性タンパク質を有するキャノーラ油糧種子からキャノーラ油糧を除去することによって、例えば、熱ヘキサン抽出または冷オイル押出法によって得られた任意のキャノーラ粗粉であってよい。キャノーラ油糧種子からのキャノーラ油糧の除去は、通常、本明細書に記載されるタンパク質単離物の回収手順とは別の操作として行われる。
約80〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約10wt%の7Sタンパク質、および
0〜約10wt%の12Sタンパク質、
好ましくは約85〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約15wt%の7Sタンパク質、および
0〜約5wt%の12Sタンパク質。
キャノーラタンパク質単離物を提供するプロセスの最初のステップは、キャノーラ油糧種子粗粉由来のタンパク質材料を可溶化することを含む。キャノーラ種子粗粉から回収されたタンパク質材料は、キャノーラ種子に天然に存在するタンパク質であってよく、またはそのタンパク質材料は、遺伝子操作によって改変されてはいるが、天然タンパク質の特徴的な疎水性および極性を有するタンパク質であってよい。キャノーラ粗粉は、様々なレベルの非変性タンパク質を有するキャノーラ油糧種子からキャノーラ油糧を除去することによって、例えば、熱ヘキサン抽出または冷オイル押出法によって得られた任意のキャノーラ粗粉であってよい。キャノーラ油糧種子からのキャノーラ油糧の除去は、通常、本明細書に記載されるタンパク質単離物の回収手順とは別の操作として行われる。
約80〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約10wt%の7Sタンパク質、および
0〜約10wt%の12Sタンパク質、
好ましくは約85〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約15wt%の7Sタンパク質、および
0〜約5wt%の12Sタンパク質。
キャノーラタンパク質単離物を提供するプロセスの最初のステップは、キャノーラ油糧種子粗粉由来のタンパク質材料を可溶化することを含む。キャノーラ種子粗粉から回収されたタンパク質材料は、キャノーラ種子に天然に存在するタンパク質であってよく、またはそのタンパク質材料は、遺伝子操作によって改変されてはいるが、天然タンパク質の特徴的な疎水性および極性を有するタンパク質であってよい。キャノーラ粗粉は、様々なレベルの非変性タンパク質を有するキャノーラ油糧種子からキャノーラ油糧を除去することによって、例えば、熱ヘキサン抽出または冷オイル押出法によって得られた任意のキャノーラ粗粉であってよい。キャノーラ油糧種子からのキャノーラ油糧の除去は、通常、本明細書に記載されるタンパク質単離物の回収手順とは別の操作として行われる。
キャノーラタンパク質単離物を提供するプロセスの最初のステップは、キャノーラ油糧種子粗粉由来のタンパク質材料を可溶化することを含む。キャノーラ種子粗粉から回収されたタンパク質材料は、キャノーラ種子に天然に存在するタンパク質であってよく、またはそのタンパク質材料は、遺伝子操作によって改変されてはいるが、天然タンパク質の特徴的な疎水性および極性を有するタンパク質であってよい。キャノーラ粗粉は、様々なレベルの非変性タンパク質を有するキャノーラ油糧種子からキャノーラ油糧を除去することによって、例えば、熱ヘキサン抽出または冷オイル押出法によって得られた任意のキャノーラ粗粉であってよい。キャノーラ油糧種子からのキャノーラ油糧の除去は、通常、本明細書に記載されるタンパク質単離物の回収手順とは別の操作として行われる。
実施例1
この実施例は、キャノーラ油糧種子粗粉からのタンパク質の高温抽出の、抽出液中のキャノーラタンパク質プロファイルに対する効果を示すものである。
この実施例は、二重抽出手順を使用する、キャノーラ油糧種子粗粉の処理手順の一連の試験を示すものである。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分A)15gを、65℃に予熱され種子に添加される水150mlを用いて、60℃にて10%w/vで抽出した。後の方の抽出物は、10,000gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から取り出し、上澄み液を分離した後に、ペレット中の湿潤粗粉(37g)および結合水(22g)の重量を決定した。次いで、十分な0.25MのNaCl(128ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて、220rpmにて室温で30分間混合した。塩抽出物を、10,000gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離した。浄化した水抽出物および塩抽出物のサンプルを、孔径0.45μmのフィルターで濾過し、そのサンプルを、遊離フェノール成分(A330)、可視色(A390)、タンパク質含量(LECO)、およびタンパク質プロファイル(SEC HPLC)について分析した。終夜冷蔵庫の中で保存して7Sタンパク質を沈殿させた後、水抽出物のタンパク質プロファイルも再分析した。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分A)150gを、60℃にて10%w/vで水1500mlを用いてオーバーヘッド型撹拌機で5分間抽出した。水抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、ペレット中の湿潤粗粉(392g)および結合水(242g)の重量を決定した。次いで、十分な0.2MのNaCl(1258ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルをオーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで3番のフィルターパッドに2回通過させることによって濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10000MWCOのVivaflow HY膜(安定剤セルロース)ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生じ、それを7100gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sを沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、濃縮物を冷凍乾燥し、「C200H」と示した。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分A)150gを、10%w/vで、水1500mlを用いて周囲温度で30分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて抽出した。水抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、湿潤粗粉(366g)および結合水(216g)の重量を決定した。次いで、十分な0.2MのNaCl(1284ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで3番のフィルターパッドに2回通過させることによって濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10,000MWCOのVivaflow HY膜ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生じ、それを7100gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sタンパク質を沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、遠心分離液を冷凍乾燥し、「C200H−塩水」と示した。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分B)200gを、10%w/vで、水(2000ml)を用いて周囲温度で30分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて抽出した。水抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、湿潤粗粉(639g)および結合水(439g)の重量を決定した。次いで、十分な0.25MのNaCl(1561ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで3番のフィルターパッドに2回通過させることによって濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10,000MWCOのVivaflow HY膜ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生成し、それを7100gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sタンパク質を沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、遠心分離液を2つの部分に分割し、一方は1wt%の粉末状活性炭と共に30分間撹拌し、サンプルの他方半分は未処理とした。両方のサンプルを、8000gの遠心分離に10分間かけ、孔径0.45μmのシリンジフィルターで濾過し、次いで冷凍乾燥し、「C200H」(炭素なし)および「C200HC」(炭素処理)と示した。最初の水抽出物は、この試験では処理しなかった。様々なサンプルを、試験2に詳説のように分析した。
ふるいにかけたキャノーラ油糧種子粗粉(回分B)200gを、10%w/vで、水(2000ml)を用いて周囲温度で30分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて抽出した。水抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、湿潤粗粉(648g)および結合水(448g)の重量を決定した。次いで、十分な0.25MのNaCl(1552ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで2番および3番のフィルターパッドに通過させることによって濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10,000MWCOのVivaflow HY膜ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生じ、それを7100gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sタンパク質を沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、遠心分離液を2つの部分に分割し、一方は1wt%の粉末状活性炭と共に30分間撹拌し、サンプルの他方半分は未処理とした。両方のサンプルを、8000gの遠心分離に10分間かけ、孔径0.45μmのシリンジフィルターで濾過し、次いで冷凍乾燥し、「C200H(炭素なし)」および「C200HC(炭素処理)」と示した。最初の水抽出物は、この試験では処理しなかった。様々なサンプルを、試験2に詳説のように分析した。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分B)150gを、10%w/vで、水(1500ml)を用いて60℃で15分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて抽出した。水抽出物を、5200gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、湿潤粗粉(458g)および結合水(308g)の重量を決定した。次いで、十分な0.25MのNaCl(1192ml)を添加して濃度を10%w/vに戻し、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を、5200gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで3番のフィルターパッドで濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10000MWCOのVivaflow HY膜ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生じ、それを5200gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sタンパク質を沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、遠心分離液を冷凍乾燥し、「C200H」と示した。最初の水抽出物は、この試験では処理しなかった。様々なサンプルを、試験2に詳説のように分析した。
キャノーラ油糧種子粗粉(回分B)160gを、1wt%の粉末状活性炭(16g)と共に、10%w/vで、水(1600ml)を用いて60℃で5分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて抽出した。水抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉および炭素から分離し、湿潤粗粉/炭素(533g)および結合水(357g)の重量を決定した。次いで、十分な0.2MのNaCl(1243ml)を添加して濃度を10%w/vに戻した。さらに、別の新しい粉末状活性炭16gをその系に添加して、そのサンプルを、オーバーヘッド型撹拌機を用いて室温で30分間混合した。塩抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離し、次いで3番のフィルターパッドで濾過した。次いで、浄化した塩抽出物を、平行に連結させた2つの10000MWCOのVivaflow HY膜ユニットを使用して処理した。抽出物を濃縮し、次いで逆浸透(RO)精製水5体積でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション水を添加することによって沈殿物が生成し、それを7100gの遠心分離に10分間かけることによって、再濃縮前に除去した。ダイアフィルトレーション保持液を、85℃で10分間熱処理して、7Sおよび12Sタンパク質を沈殿させ、それを8000gの遠心分離に15分間かけることによって除去した。次いで、遠心分離液を冷凍乾燥し、「C200H」と示した。最初の水抽出物は、この試験では処理しなかった。様々なサンプルを、試験2に詳説のように分析した。
この実施例は、実施例2の二重抽出手順の一連の試験を記載するものであり、ここでは、複数回水抽出を塩抽出の前に実施した。
キャノーラ種子粗粉(回分B)15gを、60℃で5分間、水(150ml)を用いて抽出した。水を65℃に予熱し、次いで220rpmで動作させたオービタルシェーカーを使用して、粗粉と混合した。抽出物を、10,000gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離した。その抽出物をデカントして湿潤粗粉を回収し、秤量し、溜まった水の体積を計算した。次いで、体積を150mlに戻すための65℃の十分な水を、使用済み粗粉に添加し、上記のように抽出を繰り返した。このプロセスを繰り返して、4回の水抽出を実施した。次いで、5回目の抽出を、室温にて0.5MのNaClで実施した。十分な塩水を添加して体積を150mlに戻し、次いで、サンプルを室温で30分間、220rpmで振とうすることによって抽出を実施した。表23は、各抽出に添加した水または塩水の体積を示す。凝集ペレットは、第2および第3の抽出後に遠心分離にかけたときには得られなかったことに留意されたい。したがって、サンプルをデカントするときに粗粉を喪失しないよう、より多くの溶媒を保持した。理論上、最大体積の使用済みの水が除去され、新しい水で置き換えられるならば、より多くの汚染物質を抽出することができるはずである。
キャノーラ種子粗粉(回分B)150gを、60℃で5分間、水(1500ml)で抽出した。水を65℃に予熱し、次いでオーバーヘッド型撹拌機を使用して、粗粉と混合した。抽出物を、7100gの遠心分離に10分間かけることによって使用済み粗粉から分離した。その抽出物をデカントして湿潤粗粉を回収し、秤量し、溜まった水の体積を計算した。次いで、体積を1500mlに戻すための65℃の十分な水を使用済み粗粉に添加し、上記のように抽出を繰り返した。4回の水抽出を実施するまで、このプロセスを繰り返した。次いで、5回目の抽出を、室温にて0.2MのNaClで実施した。ダイアフィルトレーションによって塩を除去しなければならず、5回のダイアフィルトレーション体積の処理に許容された時間しかなかったので、試験1よりも低濃度の塩を選択した。十分な0.2MのNaClを添加して体積を1500mlに戻し、次いで、サンプルを室温で30分間、オーバーヘッド型撹拌機を用いて混合することによって抽出を実施した。表26は、各抽出に添加した水または塩水の体積を示す。
この実施例は、限外濾過保持液からの単離2Sタンパク質生成物の調製を例示するものである。
この実施例は、キャノーラ油糧種子粗粉から形成されたキャノーラタンパク質抽出液の熱処理を例示するものである。
本開示を概説すると、本質的には2Sキャノーラタンパク質からなり、実質的には7Sおよび12Sタンパク質を含まないキャノーラタンパク質単離物の調製手順が提供される。本発明の範囲においては改変が可能である。
Claims (32)
- 主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物の生成方法であって、
キャノーラ油糧種子粗粉を、塩水溶液を用いて高温で抽出して、7Sおよび12Sタンパク質に優先して前記キャノーラ油糧種子粗粉から2Sタンパク質を優先的に抽出し、主に2Sタンパク質を含むキャノーラタンパク質抽出液を得る、
前記キャノーラタンパク質抽出液を、残留キャノーラ油糧種子粗粉から分離する、
前記キャノーラタンパク質抽出液から、少なくとも約90wt%(N×6.25)のタンパク質含量を有し、主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物を回収する、
ことを含む方法。 - 前記塩水溶液が、少なくとも約0.05のイオン強度および約5〜約6.8のpHを有し、前記高温が約70℃〜約100℃である、請求項1に記載の方法。
- 前記塩水溶液が、少なくとも約0.10のイオン強度および約5.3〜約6.2のpHを有し、前記高温が約80℃〜約95℃である、請求項2に記載の方法。
- 前記キャノーラタンパク質抽出液が、
約80〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約10wt%の7Sタンパク質、および
0〜約10wt%の12Sタンパク質
であるキャノーラタンパク質プロファイルを有する、請求項1に記載の方法。 - 前記キャノーラタンパク質抽出液が、
約85〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約15wt%の7Sタンパク質、および
0〜約5wt%の12Sタンパク質
であるキャノーラタンパク質プロファイルを有する、請求項4に記載の方法。 - 主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物の調製方法であって、
キャノーラ油糧種子粗粉を、水を用いて抽出して、2Sタンパク質に優先して7Sおよび12Sキャノーラタンパク質および可溶性不純物を優先的に抽出し、第1のキャノーラタンパク質抽出液を形成する、
前記第1のキャノーラタンパク質抽出液を、前記残留油糧種子粗粉から分離する、
前記残留油糧種子粗粉を、塩水溶液を用いて抽出して、残留油糧種子粗粉由来の2S、7Sおよび12Sタンパク質を溶解し、第2のキャノーラタンパク質抽出液を形成する、
前記第2のキャノーラタンパク質抽出液から、少なくとも約90wt%(N×6.25)のタンパク質含量を有し、主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物を回収する、
ことを含む方法。 - 前記キャノーラ油糧種子粗粉を、水を用いて約10℃〜約70℃の温度で抽出する、請求項6に記載の方法。
- 前記温度が約55℃〜約65℃である、請求項7に記載の方法。
- 7Sおよび12Sキャノーラタンパク質を、第1のキャノーラタンパク質抽出液からキャノーラタンパク質単離物として回収する、請求項6に記載の方法。
- 前記水での抽出を、約2〜約25回の水抽出、好ましくは約2〜約4回の抽出で行う、請求項6に記載の方法。
- 前記キャノーラ油糧種子粗粉を、塩水溶液を用いて、約5℃〜約65℃、好ましくは約20℃〜約30℃の温度で、少なくとも約0.05、好ましくは少なくとも約0.10のイオン強度で抽出する、請求項6に記載の方法。
- 前記塩水溶液が、約5〜約6.8、好ましくは約5.3〜約6.2のpHを有する、請求項11に記載の方法。
- 前記キャノーラタンパク質抽出液を濃縮して少なくとも約50g/Lの濃度にし、得られた濃縮キャノーラタンパク質抽出水溶液を乾燥することによって、前記キャノーラタンパク質単離物を前記第2の抽出水溶液から回収する、請求項6に記載の方法。
- 前記第2のキャノーラタンパク質抽出液が、
約80〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約10wt%の7Sタンパク質、および
0〜約10wt%の12Sタンパク質
であるキャノーラタンパク質プロファイルを有する、請求項6に記載の方法。 - 前記第2のキャノーラタンパク質抽出液が、
約85〜約100wt%の2Sタンパク質、
0〜約15wt%の7Sタンパク質、および
0〜約5wt%の12Sタンパク質
であるキャノーラタンパク質プロファイルを有する、請求項14に記載の方法。 - 主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物の生成方法であって、
キャノーラ油糧種子粗粉を、塩水溶液を用いて抽出して、前記キャノーラ油糧種子粗粉からキャノーラタンパク質を抽出し、キャノーラタンパク質溶液を得る、
前記キャノーラタンパク質溶液を、残留油糧種子粗粉から分離する、
前記キャノーラタンパク質溶液を濃縮して、濃縮タンパク質溶液を保持液として準備する、
前記濃縮タンパク質溶液を熱処理して、2Sキャノーラタンパク質に優先して前記濃縮キャノーラタンパク質溶液から7Sおよび12Sキャノーラタンパク質を選択的に沈殿させ、主に2Sキャノーラタンパク質を含む熱処理したキャノーラタンパク質溶液を形成する、
前記熱処理したキャノーラタンパク質溶液を、前記沈殿したタンパク質から分離する、
前記熱処理した分離キャノーラタンパク質溶液から、少なくとも約90wt%(N×6.25)のタンパク質含量を有し、主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物を回収する、
ことを含む方法。 - 主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物の生成方法であって、
キャノーラ油糧種子粗粉を、塩水溶液を用いて抽出して、前記キャノーラ油糧種子粗粉からキャノーラタンパク質を抽出し、キャノーラタンパク質溶液を得る、
前記キャノーラタンパク質溶液を、残留油糧種子粗粉から分離する、
濃縮タンパク質溶液を熱処理して、2Sキャノーラタンパク質に優先して前記キャノーラタンパク質溶液から7Sおよび12Sキャノーラタンパク質を選択的に沈殿させ、主に2Sキャノーラタンパク質を含む熱処理したキャノーラタンパク質溶液を形成する、
前記熱処理したキャノーラタンパク質溶液を、前記沈殿したタンパク質から分離する、
前記熱処理した分離キャノーラタンパク質溶液から、少なくとも約90wt%(N×6.25)のタンパク質含量を有し、主に2Sキャノーラタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物を回収する、
ことを含む方法。 - 前記熱処理ステップを、約70℃〜約100℃の温度で約2〜約30分間行って、前記7Sおよび12Sタンパク質含量を少なくとも約50wt%低減する、請求項16または17に記載の方法。
- 前記熱処理ステップを、約75℃〜約95℃の温度で約5〜約15分間行って、前記7Sおよび12Sタンパク質含量を少なくとも約75wt%低減する、請求項18に記載の方法。
- 前記塩水溶液が、少なくとも約0.05のイオン強度および約5〜約6.8のpHを有する、請求項16または17に記載の方法。
- 前記塩水溶液が、少なくとも約0.10のイオン強度および約5.3〜約6.2のpHを有する、請求項20に記載の方法。
- 主に2Sタンパク質からなる前記キャノーラタンパク質単離物が、少なくとも約100wt%のタンパク質含量を有する、請求項1、6、16、または17に記載の方法。
- 主に2Sキャノーラタンパク質からなる前記キャノーラタンパク質単離物を回収する前記回収ステップを、前記キャノーラタンパク質抽出液を少なくとも約50g/Lの濃度に濃縮し、得られた濃縮キャノーラタンパク質抽出水溶液を乾燥することによって行う、請求項1、6、16、または17に記載の方法。
- 前記キャノーラタンパク質抽出水溶液を、約100g/L〜約400g/L、好ましくは約200g/L〜約300g/Lのタンパク質濃度に濃縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記濃縮キャノーラタンパク質水性抽出物を、約2〜約20体積のダイアフィルトレーション媒体を使用してダイアフィルトレーションにかける、請求項24に記載の方法。
- 前記ダイアフィルトレーションを、約5〜約10体積のダイアフィルトレーション媒体を使用して実施する、請求項25に記載の方法。
- 前記ダイアフィルトレーションステップの少なくとも一部の間に、酸化防止剤が存在する、請求項26に記載の方法。
- 前記濃縮キャノーラタンパク質抽出水溶液を、前記乾燥ステップの前に熱処理ステップにかけて、前記溶液中の7Sおよび12Sタンパク質の割合を、溶液から沈殿させることによって少なくとも約50wt%低減する、請求項24に記載の方法。
- 前記熱処理を、約70℃〜約100℃の温度で約2〜約30分間行い、7Sおよび12Sタンパク質含量を少なくとも約50wt%低減する、請求項28に記載の方法。
- 前記熱処理を、約75℃〜約95℃の温度で約5〜約15分間行い、7Sおよび12Sタンパク質含量を少なくとも約75wt%低減する、請求項29に記載の方法。
- 前記主に2Sタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物が、存在する前記キャノーラタンパク質のうち2Sタンパク質を少なくとも約90wt%含む、請求項1、6、16、または17に記載の方法。
- 前記主に2Sタンパク質からなるキャノーラタンパク質単離物が、存在する前記キャノーラタンパク質のうち2Sタンパク質を少なくとも約95wt%含む、請求項1、6、16、または17に記載の方法。
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