JP2008545125A - 非揮発性アナライト濃度の測定方法 - Google Patents
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Abstract
Description
液体中の非揮発性物質(例えば、H+(pH)、Na+、K+、Ca++、Cl−等のイオン性物質、中性または荷電分子、例えばグルコース、尿素またはラクテート)を測定するための分析器は、医療技術、環境技術、および産業技術において使用されている。特に臨床診断は、生物学的流体、例えば尿、血漿、血清およびとりわけ全血中のいわゆる「クリティカル・ケア・アナライト」を測定するための分析装置に大きく依存する。そのような系は、それぞれのパラメータを測定するための多様なセンサー素子を含むことが多い。そのようなセンサー素子は、1回の測定に使用するか(単回使用)、または複数回の測定に再使用することができる(複数回使用)。
本発明の良好な理解を可能にするために、発光分子種Aの発光シグナルの強度S、その濃度cAおよび所定の測定系のパラメータの間の関連性を概説し、次いで、サンプルのpH値の測定に関して分子内電荷移動(ICT)色素を用いる光学センサーの場合を用いて、当技術分野において公知の湿潤較正を説明する。
以前に公開されている文書中の様々な定義に起因する誤解を防ぐために、いくつかの必須の概念に関して以下に定義を挙げる。
A) PET色素
B) ICT色素
C) FRET系(エネルギー転移系)。
水性サンプル媒体中の非揮発性アナライト濃度またはpH値を測定するための上記方法に基づいて、使用現場で、較正用媒体を使用せずに、非揮発性アナライト濃度(pH値を含む)を測定することを可能にする改良および単純化を提案することが本発明の目的である。典型的に、該測定方法は、もっぱら、1セットの励起および発光波長または範囲のみを使用して発光強度を測定することに基づく。
・使用現場で、乾燥センサーの発光を測定して使用現場乾燥較正値を取得するステップ、
・使用現場で、水性サンプル媒体と接触させたセンサーの発光測定値を取得するステップ、ならびに
・発光測定値、製造現場で取得された湿潤と乾燥との関係、および使用現場乾燥較正値から、非揮発性アナライト濃度を推定するステップ
を含む方法である。
a) 製造現場で
i. 同様に製造された複数の乾燥センサーSnから代表となる一定数の乾燥センサーS0を選択するステップ;
ii. 選択された乾燥センサーS0それぞれについての発光を測定し、製造現場乾燥較正値を取得するステップ;
iii. 続いて、既知の異なる濃度の非揮発性アナライトを含む少なくとも2種類の水性較正用媒体とその後に接触させた、前記選択されたセンサーS0それぞれの発光を測定し、製造現場湿潤較正値を取得するステップ;
iv. 製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から、センサーS0の湿潤と乾燥との関係を取得するステップであって、ここで、この湿潤と乾燥との関係は、同様に製造された全てのセンサーSnについての湿潤と乾燥との関係であると理解されること;
b) 使用現場で
i. 同様に製造された複数のセンサーSn由来の乾燥センサーS1の発光を測定し、使用現場乾燥較正値を取得するステップ;
ii. 水性サンプル媒体と接触させたセンサーS1の発光測定値を取得するステップ、ならびに
iii. 発光測定値、使用現場乾燥較正値、および製造現場で取得された湿潤と乾燥との関係から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライトの濃度を算出するステップ。
a) 製造現場で
i. 同様に製造された複数の乾燥センサーSnから代表となる一定数のセンサーS0が選択されること;(すなわち、製造バッチまたはロットから、あるいは(該製造プロセスが非常に再現性が高い場合)同じ種類の全てのセンサーに関してさえ)
ii. 選択された乾燥センサーS0それぞれについての発光が測定され、製造現場乾燥較正値が取得されること;
iii. 続いて、既知の異なる濃度の非揮発性アナライトを含む少なくとも2種類の水性較正用媒体を使用し、前記選択されたセンサーS0それぞれの発光が、該較正用媒体を該センサーとその後に接触させて測定され、製造現場湿潤較正値が取得されること;
iv. 製造現場湿潤較正値から、センサーS0の相対的特性が取得され、該特性は、同様に製造された(すなわち同一製造ロットに属する)全てのセンサーSnについての相対的特性であると理解されること;
v. 製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から、比率が導き出され、該比率は、同様に製造された全てのセンサーSnについての対応する比率であると理解されること;ならびに
b) 使用現場で
i. 同様に製造された複数のセンサーSn由来の1つの乾燥センサーS1についての発光が測定され、使用現場乾燥較正値が取得されること;
ii. 水性サンプル媒体と接触させたセンサーS1を用いて発光測定値が取得されること;ならびに
iii. 発光測定値、使用現場乾燥較正値、製造現場で取得された相対的特性および比率から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライトの濃度、またはpH値が算出されること。
製造現場で
・製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から、センサーS0に関する相対的特性が取得され、該相対的特性は、同様に製造された全てのセンサーSnに関して妥当であると理解されること;および
使用現場で
・発光測定値、使用現場乾燥較正値および相対的特性から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライトの濃度が算出されること。
製造現場で
・製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から比率が算出されること;および
・比率からセンサーS0の相対的特性が取得され、該相対的特性は、同様に製造された全てのセンサーSnに関して妥当であると理解されること;および
使用現場で
・使用現場乾燥較正値および発光測定値から使用現場比率が算出されること;および
・使用現場比率および相対的特性から、水性サンプル中に存在する非揮発性アナライトの濃度が算出されること。
α) センサーパラメータ、例えば色素の総濃度cD、センサー内の有効な光路長、照射対象領域、分子種AおよびBの吸収値および発光量子収量;
β) 個々の測定系のパラメータ、例えば光源の強度、検出器の感度および光学部品の透過値。
パラメータqは比kA/kBを表し、ゆえに純粋な分子種Aについての強度と純粋な分子種Bについての強度との比を表し、
q.100は、純粋な分子種Bについての強度のパーセンテージとしての純粋な分子種Aについての強度である。
所定の測定系に関して、LmAはセンサーの測定可能な最低強度である。センサーは、例えば、そのアナライトSの濃度がKdと比較して非常に小さい(cS<<Kd)測定媒体とそれを接触させることによって、最低強度に設定することができる。それは、平衡(式1を参照のこと)が完全に左側にシフトすることを意味する。典型的に、cSがKdの103〜104分の1であれば、十分である。
a) 同様に製造された複数のセンサーから少なくとも1個のセンサーを選択するステップ;
b) 選択されたセンサーで、少なくとも測定変数の予測範囲にわたって分布する既知の濃度cSi *のアナライトを含む数nの水性較正用媒体(式8または10が適用される場合、nは少なくとも3、好ましくは5以上である)を用いて発光強度LiW *を製造現場で測定し、nペアのデータ(cSi *,LiW *;i=1...n)を取得するステップ;
c) 例えば公知の最小二乗法によって、センサー特性を表す好適な数式(例えば式8または10)をnペアのデータに対してフィッティング(fitting)し、パラメータq、KdおよびLmW *の値を得るステップ。
(式1〜10を使用するサブバリエーション1.1(図1a)、1.2(図1b)、および1.3(図1c)がある)。
ステップa)i.において
センサーS0を選択するが、ここで、センサー中に発光指示色素が基本的に完全に分子種Bとして存在し、該色素に対してアナライトまたはアナライト類似体が結合すること、
ステップa)ii.において
製造現場乾燥較正値LmD *を取得すること、
ステップa)iii.において
少なくとも1種の水性較正用媒体についてのアナライトSの濃度を選択することにより、湿潤化および平衡化の後に、基本的に分子種Bのみが存在するようにし、かつ製造現場湿潤較正値LmW *を測定すること、
ステップa)iv.において
製造現場乾燥較正値LmD *および製造現場湿潤較正値LmW *から、比率RmD/Wを算出すること、
ステップb)i.において
使用現場乾燥較正値LmDを取得すること、ならびに
ステップb)iii.において
LmDおよび比率RmD/Wから使用現場係数LmWを算出し、かつ発光測定値、使用現場係数LmWおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を決定すること。
実施例1.1では、指示分子の総濃度Dに対する、アナライトSが結合する分子種Bの濃度の比Vは1である。換言すれば:乾燥状態において該指示色素は完全に分子種Bの形態で存在する。
ステップa)i.において
センサーS0を選択するが、ここで、指示色素が分子種Aおよび分子種Bの形態で存在し、アナライトまたはその類似体は分子種Bには結合するが分子種Aには結合せず、比V=cB/cD(ここでcD=cA+cB)が既知でありかつ0.1〜0.9の範囲、好ましくは0.3〜0.7の範囲であること、
ステップa)ii.において
製造現場乾燥較正値LD *を取得すること、
ステップa)iii.において
少なくとも1種の水性較正用媒体についてのアナライトSの濃度を選択することにより、湿潤化および平衡化の後に、基本的に分子種Bのみが存在するようにし、かつ製造現場湿潤較正値LmW *を測定すること、ならびに
ステップa)iv.において
製造現場乾燥較正値LD *および製造現場湿潤較正値LmW *から、比率RD/Wを算出すること、
ステップb)i.において
使用現場乾燥較正値LDを取得すること、ならびに
ステップb)iii.において
LDおよび比率RD/Wから使用現場係数LmWを算出し、かつ発光測定値、使用現場係数LmWおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を決定すること。
上記実施例1.1および1.2では、製造現場湿潤較正値LmW *を測定するためのアナライトSの濃度を選択して、基本的に指示分子の分子種Bのみが存在するようにする必要がある。
ステップa)i.において
センサーS0を選択するが、ここで、指示色素が分子種Aおよび分子種Bの形態で存在し、アナライトまたはその類似体は分子種Bには結合するが分子種Aには結合せず、該分子種の濃度比V=cB/cD(ここでcD=cA+cB)が既知でありかつ0.1〜0.9の範囲、好ましくは0.3〜0.7の範囲であること、
ステップa)ii.において
製造現場乾燥較正値LD *を取得すること、
ステップa)iii.において
既知の異なる濃度cSiのアナライトSを含む少なくとも2種の水性較正用媒体についてのセンサーS0の発光強度を測定し、少なくとも2つの製造現場湿潤較正値LiW *を取得すること、ならびに
ステップa)iv.において
対になった値LiW *、cSiからセンサーS0の相対的特性および湿潤較正値LmW *を取得して、そこから、同様に製造された全てのセンサーSnについて妥当な相対的特性を算出すること、
ステップa)iv.において
乾燥較正値LD *および湿潤較正値LmW *から、比率RD/Wを算出すること、
ステップb)i.において
使用現場乾燥較正値LDを取得すること、ならびに
ステップb)iii.において
LDおよび比率RD/Wから使用現場係数LmWを算出し、かつ発光測定値、乾燥較正値LD、比率RD/Wおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を決定すること。
(式1〜10を使用しないサブバリエーション2.1および2.2がある)。
・理論的に導き出された関数が利用可能でないか、あるいは十分な精度で知られていない場合;
・センサーの可動範囲(dynamic range)がアナライト濃度の予測範囲より大きく、かつ代替の関数が予測範囲の特性の様態を十分な精度で表す場合。
・製造現場での較正によって取得された特性を乾燥値によって標準化するアプローチ(実施例2.1を参照のこと)、
・製造現場での較正によって取得された測定点を乾燥値によって標準化するアプローチ(実施例2.2を参照のこと)。
本発明に基づく方法の好ましいバリエーションでは、同様に製造された複数のセンサーSnから代表となる一定数の乾燥センサーS0を選択し、水性較正用媒体を使用せずに発光強度LD *を測定する。次いで、各センサーS0を、既知の濃度cSiのアナライトを含む数nの水性較正用媒体と接触させるが、該濃度は少なくとも測定対象の濃度の予測範囲にわたって分布し、そしてn個の発光強度(LiW *;i=1...n)を測定し、nペアのデータ(cSiW *、LiW *;i=1...n)を取得する。
製造現場で
・同様に製造された複数のセンサーから少なくともm個のセンサーS0を選択すること;
・選択された各センサーS0に関して、水性較正用媒体を用いずに発光強度を測定し、各センサーに関する製造現場乾燥較正値LD *を取得すること;
・各選択センサーに関して、n(n>2)種の異なる水性較正用媒体のうち少なくとも2種と接触させた場合の発光強度を測定し、全ての選択されたセンサーの較正において各較正用媒体を少なくとも1回使用し、各センサーに関する少なくとも2個の製造現場湿潤較正値LiW *を取得すること;
・それぞれの選択されたセンサーに関して、センサー特性の形状を表す一般式:LW *=f(P1 *、...、Pn *、cSまたはpH)の好適な関数をデータペア(cSi *、LiW *)にフィッティングし、各センサーに関して、製造現場実効特性のパラメータP1 *、...、Pn *の値を得ること;
・それぞれの選択されたセンサーに関して、製造現場実効特性を、対応する製造現場乾燥較正値LD *を用いてスケーリングし、個々のセンサーの、一般式:Lrel=f(p1、...、pn、cSまたはpH)の相対的特性に関するパラメータp1〜pnを得ること;
・個々のセンサー特性の係数を平均することによって、同様に製造された全てのセンサーSnの全体に割り当てられる相対的特性を取得すること。
・同様に製造された複数のセンサーSnからのセンサーS1の発光強度を測定し、使用現場乾燥較正値LDを取得すること;
・水性サンプル媒体と接触させたセンサーS1に関して、発光強度LiWを測定すること;
・製造現場で取得された相対的特性を使用現場乾燥較正値LDでスケーリングし、一般式:LW=f(P1、...、Pn、cSまたはpH)を有する使用現場での実効特性に関するパラメータP1〜Pnの値を得ること;
・一般型:LW=f(P1、...、Pn、cSまたはpH)の式をcSまたはpHに関して解き(cSまたはpH=f(P1、...、Pn、LW))、かつ使用現場発光測定値LiWを算入することによってアナライト濃度を算出すること。
本発明の特に好ましいバリエーションでは、実施例2.1の段落で概説された手順の以下のバリエーションがさらに可能である。まず、数nの較正用液体を用いる製造現場湿潤較正値LiW *および製造現場乾燥較正値LD *から比率を算出し、乾燥値に対する湿潤値のこれらの比とアナライト濃度またはpH値との間の関数的関連性を表または一般式:Lrel=f(u1、...、un、cSまたはpH)の好適な関数の形式で表す。
製造現場で
・同様に製造された複数のセンサーから少なくともm個のセンサーS0を選択すること;
・それぞれの選択されたセンサーに関して、水性較正用媒体を用いずに発光強度を測定し、各センサーに関する製造現場乾燥較正値LD *を取得すること;
・それぞれの選択されたセンサーに関して、n(n>2)種の異なる水性較正用媒体のうち少なくとも1種と接触させた場合の発光強度を測定し、全ての選択されたセンサーの較正において各較正用媒体を少なくとも1回使用し、各センサーに関する少なくとも1個の製造現場湿潤較正値LiW *を取得すること;
・個々のセンサーの製造現場乾燥および湿潤較正値から比率Ui *=LiW */LD *を算出すること;
・相対的センサー特性の形状を表す一般式:Lrel=f(u1、...、un、cSまたはpH)の好適な関数を全てのm個のセンサーの比率Ui *にフィッティングし、パラメータu1、...、unの値を得ること;
使用現場で
・同様に製造された複数のセンサーSnからの乾燥センサーS1の発光強度を測定し、使用現場乾燥較正値LDを取得すること;
・水性サンプル媒体と接触させたセンサーS1に関して、発光強度LiWを測定し、発光測定値を取得すること;
・発光測定値LiWを乾燥値LDによってスケーリングし、比率Uiを取得し、比率Uiを一般型:Lrel=f(u1、...、un、cSまたはpH)の式に算入し、かつcSまたはpHに関して解く(cSまたはpH=f(u1、...、un、Lrel))ことによってアナライト濃度を算出すること。
本実施例では、本発明に好適な指示色素の化学合成、セルロースファイバーへのその固定、乾燥光学センサーディスクの製造および、そうして得られた光学センサーを使用するpH、Na+、K+およびCa++の測定を記載する。
DCM(ジクロロメタン(dichlormethane)):Riedel de Haen 24233 > 99 %;TFA(トリフルオロ酢酸(trifluoracetic acid)):Fluka 91700 >98 %;NHS(N−ヒドロキシスクシンイミド):Fluka 56480 > 97 %;DIC(ジイソプロピルカルボジイミド):Fluka 38370 >98 %;DMAP(4−ジメチルアミノピリジン):Fluka 39405 > 98 %;DIPEA(ジイソプロピルエチルアミン):Fluka 03440 > 98%;アセトニトリル:Merck-HPLCグレード;4−アミノメチル安息香酸:Fluka: 08400 >98%;SOCl2:Fluka: 88950 > 99%;無水エタノール(EtOH abs.):Riedel de Haen: 32221;TEA(トリエチルアミン):Merck: 808352;SO2Cl2:Fluka: 862212;ヒドラジン一水和物:Fluka: 53850;無水フタル酸:Fluka: 80020;塩酸チラミン(tyramine hydrochloide):Fluka 93820 > 97 %;NMP(N−メチルピロリドン):Fluka: 69116;4−クロロ−1,8−ナフタル酸無水物:Aldrich: 19,149-3 約95%。
20.0g(132mM)の4−アミノメチル安息香酸を無水エタノール(EtOH)200mLに懸濁し、氷で冷却する。塩化チオニル28.0g(17mL)(236mM)を一滴ずつ加える。次いで透明な混合物を3時間還流する。室温に冷却した後、EtOHを蒸発させる。50mLのトルエン/EtOH 1/1を加え、3回蒸発させる。残留物を乾燥させて、27gの(1)を得る。
DMF 400mL中の4−アミノメチル安息香酸−エチルエステル塩酸塩20.0g(93.2mM)、4−クロロ−1,8−ナフタル酸無水物21.68g(93.2mM)およびトリエチルアミン19.78g(195.5mM)を90℃に加熱し、一晩撹拌する。室温に冷却した後、H2O 100mLを加えて、所望の生成物を沈殿させる。4−クロロ−ナフタルイミジル−メチル安息香酸−エチルエステル(2)をEtOHから再結晶させる。収量:15.8g。
無水フタル酸29.6g(200mM)、塩酸チラミン34.73(200mM)およびトリエチルアミン27.7mL(200mM)を115℃に4時間加熱する。室温に冷却した後、混合物を氷水1.5Lに注ぐ。沈殿(3)をろ過し、水で洗浄する。収量:45g。
チラミンフタルイミド(tyraminphthalimide)(3)15.35g(57mM)を、煮沸塩化スルフリル24.75g(170mM)およびCHCl3 75mLに、ゆっくりかつ少しずつ加える。混合物が透明になるまで還流を継続する。次いで、その溶液を密封せずに室温で一晩撹拌して、塩化スルフリルを除去する。溶媒を蒸発によって除去し、粗生成物(4)をMeOH 75mLから再結晶させる。収量:7.2g。
ジクロロチラミンフタルイミド(4)7.2gおよびヒドラジン一水和物1.6mLを、無水EtOH 170mL中で一晩還流する。室温に冷却した後、沈殿をろ別する。粗生成物(5)を精製せずに以後の合成に用いる。
NMP 150mL中のジクロロチラミン(5)1.5g(7.26mM)、4−クロロナフタルイミジルメチル−安息香酸エチルエステル(2)2.85gおよびDIPEA 4mLの混合物を90℃に4日間加熱する。
ガソリンエーテル/酢酸エチル9/1;ガソリンエーテル/酢酸エチル8/2;ガソリンエーテル/酢酸エチル7/3;ガソリンエーテル/酢酸エチル1/1。
A−040をアセトニトリル50mLおよび1N NaOH 50mLに溶解する。溶液を60℃に温め、1時間撹拌する。次いで溶液をHClで酸性化し、酢酸エチルで抽出する。色素を含有する酢酸エチル層を水で3回洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥した後、蒸発によって溶媒を除去する。収量:350mg。
使用されるNa+センサーはUS 5,952,491(Leiner et. al)に記載されている。
使用されるK+センサーはUS 6,211,369(He et al.)に記載されている。
Ca++感受性指示色素はUS 6,171,866(He et al.)に記載のように製造する。
アミノセルロースファイバーはSU 1,028,677、CA 99.177723bに記載のように製造する。
アミノセルロースファイバーへの全4種の色素の固定は、US 6,211,359(He et al.)の実施例18と同様に実施する。
分子種AおよびBの既知の比V(式6)を確立するために、指示色素の固定化後、該指示分子を保持するファイバーを、該当するアナライトを好適な濃度で含有する水性媒体で洗浄して、平衡(式1および2)に達した後に、指示分子種AおよびBの濃度についての所望の比が確立されるようにする。次いで、該ファイバーを脱イオン水と短時間接触させることによってリンスし、乾燥させる。それによって、確立された2種の指示分子種の比は変化しない。
4種のセンサーの製造はUS 6,211,359(He et al.)の実施例19と同様に実施した。
実施例3.8のセンサーディスクを使い捨てプラスチック測定セルに組み込む。該セルは、射出成形された上部および底部、較正用液およびサンプルを通過させるための通路、密封可能な入口および出口からなる。底部はセンサーディスクをはめ込むための円柱状の穴を有する。H+(pH)、Na+、K+およびCa++感受性センサーディスクを穴に組み込んだ後、底部および上部を互いに貼り合わせて、最終の測定セルを形成させる。それぞれの指示色素の照射および長波長発光の収集は、セルの底部を通して実行する。
測定のために、光を透過させないサーモスタット付き測定槽に使い捨てセルを導入する。入口および出口を流体系に連結し、異なるpH値および/または異なる濃度のアルカリイオンを有する水溶液を通過させる。
図3では、6個の個別のpHセンサー(同様に製造された複数のセンサーから選択)の応答曲線(時間の関数としての発光強度)が、乾燥状態で、ならびに水性液体との平衡相の間に、時間t(秒単位で測定)の関数として示される。強度値を2秒間隔で測定する。
Claims (14)
- 水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライト濃度を、アナライト濃度に依存する発光を有する発光指示色素を含み、かつ一点較正により使用現場で較正される光学センサーを使用して測定する方法であって、以下のステップ:
使用現場で、乾燥センサーの発光を測定して使用現場乾燥較正値を取得するステップ、
使用現場で、水性サンプル媒体と接触させたセンサーの発光測定値を取得するステップ、ならびに
発光測定値、製造現場で取得された湿潤と乾燥との関係、および使用現場での乾燥較正値から、非揮発性アナライト濃度を推定するステップ
を含む、上記方法。 - 以下のステップ:
(a)製造現場で
i.同様に製造された複数の乾燥センサーSnから代表となる一定数の乾燥センサーS0を選択するステップ;
ii.選択された乾燥センサーS0それぞれについての発光を測定し、製造現場乾燥較正値を取得するステップ;
iii.続いて、既知の異なる濃度の非揮発性アナライトを含む少なくとも2種類の水性較正用媒体と接触させた、前記選択されたセンサーS0それぞれの発光を測定し、製造現場湿潤較正値を取得するステップ;
iv.製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から、センサーS0の湿潤と乾燥との関係を取得するステップであって、ここで、この湿潤と乾燥との関係は、同様に製造された全てのセンサーSnについての湿潤と乾燥との関係であると理解されること;
(b)使用現場で
i.同様に製造された複数のセンサーSnからの乾燥センサーS1の発光を測定し、使用現場乾燥較正値を取得するステップ;
ii.水性サンプル媒体と接触させたセンサーS1の発光測定値を取得するステップ;ならびに
iii.発光測定値、使用現場乾燥較正値、および製造現場で取得された湿潤と乾燥との関係から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライト濃度を算出するステップ
を含む、請求項1に記載の方法。 - 前記湿潤と乾燥との関係が、相対的特性および比率を含み、以下のステップ:
ステップ(a)中に
iv.製造現場湿潤較正値から、センサーS0の相対的特性を取得するステップであって、ここで、相対的特性とは、同様に製造された全てのセンサーSnについての相対的特性であると理解されること;および、製造現場湿潤較正値と製造現場乾燥較正値とから比率を導き出すステップであって、ここで、比率とは、同様に製造された全てのセンサーSnについての比率であると理解されること;ならびに
ステップ(b)中に、
iii.発光測定値、使用現場乾燥較正値、製造現場で得られた相対的特性および比率から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライト濃度を算出するステップ
をさらに含む、請求項2に記載の方法。 - 以下のステップ:
ステップ(a)中に、
i.センサーS0を選択するステップであって、ここで、センサー中に発光指示色素が基本的に完全に分子種Bとして存在し、該色素に対してアナライトまたはアナライト類似体が結合すること、
ii.製造現場乾燥較正値LmD *を取得するステップ、
iii.少なくとも1種の水性較正用媒体についてのアナライトSの濃度を選択することにより、湿潤化および較正の後に、基本的に分子種Bのみが存在するようにし、かつ製造現場湿潤較正値LmW *を測定するステップ、
iv.製造現場乾燥較正値LmD *および製造現場湿潤測定値LmW *から、比率RmD/Wを算出するステップ、
ステップ(b)中に、
i.使用現場乾燥較正値LmDを取得するステップ、ならびに
iii.LmDおよび比率RmD/Wから使用現場係数(scaling factor)LmWを算出し、かつ発光測定値、使用現場係数LmWおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を決定するステップ
含む、請求項3に記載の方法。 - 以下のステップ:
ステップ(a)中に、
i.センサーS0を選択するステップであって、ここで、発光指示色素が分子種Aおよび分子種Bの形態で存在し、アナライトまたはアナライト類似体は分子種Bには結合するが分子種Aには結合せず、かつ該発光指示色素の総濃度(cD)に対する分子種Bの濃度(cB)の比V(V=cB/cD)(cDは分子種Aの形態で存在する発光指示色素の濃度(cA)と分子種Bの形態で存在する発光指示色素の濃度(cB)との合計である)は、既知でありかつ0.1〜0.9、好ましくは0.3〜0.7であること、
ii.製造現場乾燥較正値LD *を取得するステップ、
iii.少なくとも1種の水性較正用媒体についてのアナライトSの濃度を選択することにより、湿潤化および較正の後に、基本的に分子種Bのみが存在するようにし、かつ製造現場湿潤較正値LmW *を測定するステップ、
iv.製造現場乾燥較正値LD *および製造現場湿潤較正値LmW *から比率RD/Wを算出するステップ、
ステップ(b)中に、
i.使用現場乾燥較正値LDを取得するステップ、ならびに
iii.LDおよび比率RD/Wから使用現場係数LmWを算出し、かつ発光測定値、使用現場係数LmWおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を決定するステップ
を含む、請求項3に記載の方法。 - 以下のステップ:
ステップ(a)中に
i.センサーS0を選択するステップであって、ここで発光指示色素が分子種Aおよび分子種Bの形態で存在し、アナライトまたはその類似体は分子種Bには結合するが分子種Aには結合せず、かつ該発光指示色素の総濃度(cD)に対する分子種Bの濃度(cB)の比V(V=cB/cD)(cDは分子種Aの形態で存在する発光指示色素の濃度(cA)と分子種Bの形態で存在する発光指示色素の濃度(cB)との合計である)は、既知でありかつ0.1〜0.9、好ましくは0.3〜0.7であること、
ii.製造現場乾燥較正値LD *を取得するステップ、
iii.既知の異なる濃度cSiのアナライトSを含む少なくとも2種の水性較正用媒体についてのセンサーS0の発光強度を測定し、少なくとも2つの製造現場湿潤較正値LiW *を取得するステップ、ならびに
iv.対になった値LiW *、cSiからセンサーS0の相対的特性および製造現場湿潤較正値LmW *を取得して、そこから、同様に製造された全てのセンサーSnについて妥当な相対的特性を算出し、かつ製造現場乾燥較正値LD *および製造現場湿潤較正値LmW *から比率RD/Wを算出するステップ、
ステップ(b)中に
i.使用現場乾燥較正値LDを取得するステップ、ならびに
iii.LDおよび比率RD/Wから使用現場係数LmWを算出し、かつ発光測定値、使用現場係数LmWおよび相対的特性から、非揮発性アナライト濃度を測定するステップ
を含む、請求項3に記載の方法。 - 以下のステップ:
ステップ(a)中に
iv.製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値からセンサーS0の相対的特性を取得するステップであって、ここで、相対的特性とは、同様に製造された全てのセンサーSnについての相対的特性であると理解されること;ならびに
ステップ(b)中に
iii.発光測定値、使用現場乾燥較正値および製造現場で取得された相対的特性から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライト濃度を算出するステップ
を含む、請求項2に記載の方法。 - 以下のステップ:
ステップ(a)中に
iv.製造現場湿潤較正値および製造現場乾燥較正値から比率を算出し、かつ比率からセンサーS0の相対的特性を取得するステップであって、ここで相対的特性は、同様に製造された全てのセンサーSnについての相対的特性であると理解されること;ならびに
ステップ(b)中に
iii.使用現場乾燥較正値および発光測定値から使用現場比率を算出し、かつ使用現場比率および相対的特性から、水性サンプル媒体中に存在する非揮発性アナライト濃度を算出するステップ
を含む、請求項2に記載の方法。 - 製造現場で少なくともm個のセンサーを選択し、i=1〜mであるm個の乾燥較正値tiを取得すること、および、各センサーから2以上であるn種の異なる水性較正用媒体のうち少なくとも1種についての湿潤較正値を取得するが、各較正用媒体を少なくとも1回ずつ用い、それによりj=1〜nでありn以上であるk個の湿潤較正値kijを取得すること、ならびに、個々の対のti、kijから比率kij/tiを算出し、かつセンサーの相対的特性をこれらの比率から導き出す、請求項7または8に記載の方法。
- センサーSnでの、cD=cA+cBである分子種AおよびBについての予め決定された既知の比V=cB/cDの設定のために、インジケーターまたはセンサーを担持する基材を、好適な濃度のアナライトもしくはアナライト類似体を含む水性洗浄用媒体で洗浄し、予め決定された比を平衡化の後に確立し、該インジケーターまたはセンサーを担持する基材の乾燥により固定する、請求項5または6に記載の方法。
- pHセンサーのために、既知のpH値を有する酸、塩基またはバッファーを洗浄用媒体として用いる、請求項10に記載の方法。
- 同様に製造された複数のセンサーSnのうちの各乾燥センサーのために、分子種AおよびBの割合を原則として同じとし、かつ経時的に一定であるものとする、請求項10または11に記載の方法。
- 前記光学センサーを、製造現場および使用現場で乾燥状態で保存する、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 非揮発性アナライトの測定用の少なくとも1つの光学センサーを、O2もしくはCO2などの揮発性アナライト濃度の測定用のセンサーと組み合わせて、またはセンサーとの連結構成で用いる、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
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