JP2008544225A

JP2008544225A - 体液における神経学的障害の診断のための方法および組成物

Info

Publication number: JP2008544225A
Application number: JP2008515984A
Authority: JP
Inventors: サンディップレイ，; アントンウィス−コレイ，
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 2005-06-08
Filing date: 2006-06-08
Publication date: 2008-12-04
Also published as: US20090239241A1; EP1907846A1; US20150241454A1; EP1907846A4; US20140011689A1; CA2610268A1; WO2006133423A1; AU2006254837A1; US20060094064A1; US20070037200A1; US8389226B2; US20110212854A1

Abstract

本発明者らは、神経変性障害（特に、アルツハイマー病）および軽度認識障害（ＭＣＩ）の診断において補助するための、末梢の生物学的流体サンプルにおいて測定され得る、タンパク質様バイオマーカー（「ＡＤ」バイオマーカー）のコレクションを発見した。本発明はさらに、ＡＤバイオマーカーレベルの調節における活性について予測される因子を試験することによって、アルツハイマー病の処置のための候補因子を同定する方法もまた、提供する。

Description

（関連出願の引用）
本願は、米国特許出願第１０／９９３，８１３号（２００４年１１月１９日に出願され、米国仮特許出願第６０／５２３，７９６号（２００３年１１月１９日出願）、同第６０／５６６，７８３（２００４年４月３０日出願）および同第６０／５６６，７８２号（２００４年４月３０日出願）（これらは全て、その全体が本明細書に参考として援用される）の利益を主張する）の一部継続出願である。

（政府から支援を受けた研究または開発に関する陳述）
適用なし。

（コンパクトディスク付表に関する言及）
適用なし。

（発明の背景）
推定４５０万人の米国人が、アルツハイマー病（「ＡＤ］）を有している。２０５０年までに、ＡＤ有病率の推定範囲は、１１３０万人から１６００万人である。現時点で、米国にかかる社会的費用は、米国の業務（ｂｕｓｉｎｅｓｓ）によって負担されている６１０億ドルを含め、１年あたり１０００億ドルである。政府医療保障も大部分の個人用健康保険も、大部分の患者が必要とする長期のケアをカバーしていない。

アルツハイマー病は、進行性の記憶喪失と関連した中枢神経系の神経変性疾患であり、結果として痴呆を生じる。２つの病理学的特徴が、ＡＤ患者の剖検において認められる：海馬、大脳皮質および認知機能に必須の、脳の他の領域における細胞外の斑および細胞内もつれ（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔａｎｇｌｅ）。斑は、大部分は、アミロイド前駆体タンパク質（「ＡＰＰ」）に由来するペプチドであるアミロイドβ（「Ａβ」）の沈着から形成される。フィラメントのもつれは、神経フィラメントおよび過リン酸化タウタンパク質（微小管結合タンパク質）から構成される対形成した螺旋状フィラメントから形成される。しかし、これら２つの病理学的変化が、この疾患と関連しているにすぎないのか、その変性プロセスに本当に関与しているのかは、明らかでない。後期発症型／散発性ＡＤは、遺伝性早期発症型／家族性ＡＤ（ＦＡＤ）と実質的に同一の病状を有するので、このことは、両方の形態のＡＤについての共通する病理的経路を示唆する。今日まで、遺伝的研究により、常染色体優性の早期発症型ＡＤを引き起こす３種の遺伝子（アミロイド前駆体タンパク質（「ＡＰＰ］）、プレセニリン１（「ＰＳ１」）、およびプレセニリン２（「ＰＳ２」））が同定された。４番目の遺伝子であるアポリポプロテインＥ（「ＡｐｏＥ」）は、ＡＤについての最も強力かつ最も一般的な遺伝的危険因子であるが、必ずしもＡＤを引き起こすわけではない。ＡＰＰおよびＰＳタンパク質と関連する全ての変異は、Ａβペプチド、具体的には、よりアミロイド形成性の形態であるＡβ_４２の生成の増大をもたらし得る。アミロイド斑および細胞内もつれの形成に対する遺伝的影響に加えて、環境因子（例えば、サイトカイン、神経毒など）も、ＡＤの発症および進行において重要な役割をはたし得る。

ＡＤの主要な臨床的特徴は、記憶喪失をもたらす進行性の認知能低下である。この記憶機能障害は、短期記憶の喪失としてしばしば特徴付けられる新たな情報の学習の障害である。この病気の初期（軽度）の段階および中等度の段階では、遠い過去の十分に学習された事項の想起は、保たれているようであるが、新たな情報は、記憶の中に適切に取り込むことができない。時間に対する見当識障害は、記憶障害に密接に関連している。

言語障害もまた、ＡＤの顕著な要素である。これらは、最初に、自発的な発話において言葉を見つけ出すことが困難であるとしてしばしば現れる。このＡＤ患者の言語は、しばしば曖昧であり、具体性を欠き、無意識の言葉（ａｕｔｏｍａｔｉｃｐｈｒａｓｅ）および決まり文句（ｃｌｉｃｈｅ）が増え得る。日常的な物体を口に出すことにおける困難性は、しばしば顕著である。視覚機能における複雑な障害が、他の巣症状認知障害（ｆｏｃａｌｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｅｆｉｃｉｔ）（例えば、失行症、失算症および左右の見当識障害）と同様に、多くのＡＤ患者に存在する。判断および問題解決の障害が、頻繁に認められる。

非認知性または行動性の症状も、ＡＤにおいて一般的であり、介護者に認知障害よりも大きな割合の負担またはストレスを与える事象の原因であり得る。人格の変化は一般的に報告されており、進行性の不活動から顕著な興奮（ａｇｉｔａｔｉｏｎ）までの範囲に及び得る。患者は、感情の表現の減少のような変化を示し得る。鬱状の症状が、最大４０％において存在する。同様の割合が、不安についても認められる。精神病が２５％に存在する。いくらかの症例では、人格の変化が、認知異常より先に起こり得る。

現在では、生きている患者においてＡＤを診断するための主な方法は、詳細な患者の病歴を入手する工程、記憶検査および心理検査を行う工程、および他の記憶喪失の理由（一時的状態（例えば、鬱病またはビタミンＢ_１２欠乏）または永久的状態（例えば、脳卒中）を含む）を除外する工程を包含する。しかし、これら臨床診断法は、絶対確実というわけではない。

診断の１つの障害は、痴呆の型を正確に指摘することである；ＡＤは、痴呆を引き起こす７０の条件のうちの１つに過ぎない。このために、ＡＤは、死亡するまでは、完全な正確性をもって診断することができず、剖検をしたときに、患者の脳においてその疾患の特徴的なアミロイド斑および神経細線維もつれが明らかになる。さらに、臨床診断手順は、患者が、重大な、異常な記憶喪失または人格の変化を示し始めた後に有用であるに過ぎない。それまでに、患者は、何年もＡＤをおそらく有し続ける。

ＡＤによって引き起こされる公衆衛生問題の重要性を考慮して、ＡＤの病因論を解明しようとする研究努力、ならびに個体がＡＤを発症するようであるか否かを診断および／または推定するために使用され得るバイオマーカー（分泌タンパク質または代謝産物）を同定しようとする研究努力がなされてきた。ＡＤでは、ＣＮＳが身体の他の器官および系から比較的分離されているので、大部分の研究（疾患病因論およびバイオマーカー両方に関して）は、中枢神経系内の事象、遺伝子発現、バイオマーカーなどに焦点が当てられてきた。バイオマーカーに関しては、タンパク質アミロイドβおよびタウは、おそらく最もよく特徴付けられている。研究により、ＡＤ患者由来の脳脊髄液（「ＣＳＦ」）サンプルは、正常量より多くのタウ（これは、ニューロン変性物として放出される）および正常量より少ないβアミロイドを含むことが示された。なぜなら、βアミロイドは、アミロイド斑の形態において脳に捕らえられるからである。これらバイオマーカーはＣＳＦに放出されるので、腰椎穿刺（または「脊椎穿刺」）が、試験用サンプルを得るために必要とされる。

ＡＤを診断するための方法に関して、多くの米国特許が発行されてきた。これらの米国特許としては、米国特許第４，７２８，６０５号、同第５，８７４，３１２号、同第６，０２７，８９６号、同第６，１１４，１３３号、同第６，１３０，０４８号、同第６，２１０，８９５号、同第６，３５８，６８１号、同第６，４５１，５４７号、同第６，４６１，８３１号、同第６，４６５，１９５号、同第６，４７５，１６１号、および同第６，４９５，３３５号が挙げられる。さらに、科学論文における多くの報告が、特定の生化学マーカーおよびそれらのＡＤとの相関／関連性に関する。これらの科学論文としては、Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋら，２００２，Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ．Ｔｒａｎｓｍ．Ｓｕｐｐｌ．２００２（６２）：２４１−５２；Ｍａｓｌｉａｈら，１１９５，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ１６（４）：５４９−５６；Ｐｏｗｅｒら，２００１，Ｄｅｍｅｎｔ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｃｏｇｎ．Ｄｉｓｏｒｄ．１２（２）：１６７−７０；およびＢｕｒｂａｃｈら，２００４，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４（１０）：２４２１−３０が挙げられる。さらに、Ｌｉら（２００２，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１１３（３）：６０７−１５）およびＳａｎｎａら（２００３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１（２）：２４１−５０）は、それぞれ、記憶および多発性硬化症に関連してレプチンを調査した。

本明細書において引用される全ての特許および刊行物は、それら全体が本明細書中に参考として援用される。

（発明の要旨）
本発明者らは、個体の血液中に存在する、アルツハイマー病（「ＡＤ」）を有する個体において変化している生化学マーカー（個体の血清または血漿由来を含む）の集団を発見した。従って、これらバイオマーカー（「ＡＤ診断バイオマーカー」）は、ＡＤ患者における認知機能を評価するために、ＡＤを診断もしくはＡＤの診断を補助するために、および／またはＡＤの進行を測定するために使用され得る。ＡＤ診断マーカーは、ＡＤを診断もしくはＡＤの診断を補助するために、個々にまたは組み合わせて、使用され得る。本発明は、生物学的流体サンプル（例えば、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル）中の１種以上のＡＤ診断バイオマーカーの量を測定する工程、およびその測定された量と、測定された各ＡＤ診断バイオマーカーの参照値とを比較する工程により、個体におけるＡＤの診断もしくはＡＤの診断を補助するための方法を提供する。このようにして得られた情報は、個体におけるＡＤの診断を補助するか、またはＡＤを診断するために使用され得る。従って、本発明は、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法を提供し、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群より選択される。いくつかの例において、上記ＡＤ診断バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群より選択される。他の例では、上記ＡＤ診断マーカーは、ＢＤＮＦ、ｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、レプチン、ＭＩＰ−１δ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、およびＴＩＭＰ−１からなる群より選択される。なお他の例では、上記ＡＤ診断マーカーは、ｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、およびＴＩＭＰ−１からなる群より選択される。さらなる例では、上記ＡＤ診断マーカーは、ＢＤＮＦ、ＭＩＰ−１δ、およびＴＩＭＰ−１からなる群より選択される。さらなる例において、上記ＡＤ診断マーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群より選択される。さらなる例において、上記ＡＤ診断マーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。さらなる例において、上記方法は、少なくとも２種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する。さらなる例において、上記方法は、少なくとも３種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する。さらなる例において、上記方法は、少なくとも４種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する。さらなる例において、測定されたレベルと、測定された各ＡＤ診断バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程は、上記測定されたレベルと上記参照レベルとの間の倍数差を計算する工程を包含する。いくつかの例において、方法は、測定された各ＡＤ診断バイオマーカーの倍数差と、最小の倍数差レベルとを比較する工程をさらに包含する。いくつかの例において、上記方法は、上記測定されたレベルと上記参照レベルとの比較のための値を得る工程をさらに包含する。本明細書中で提供されるのは、本明細書に記載されるような方法によって得られる値を含むコンピューター読み取り可能フォーマットである。

アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法が本明細書において提供され、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも４種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、各ＡＤ診断バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記バイオマーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。いくつかの例において、ＡＤは、ＢＤＮＦの参照レベルと比較して、ＢＤＮＦが少なくとも約２０％減少している場合に診断される。他の例において、ＡＤは、レプチンの参照レベルと比較して、レプチンが少なくとも約２５％減少している場合に診断される。さらなる例において、ＡＤは、ＲＡＮＴＥＳの参照レベルと比較して、ＲＡＮＴＥＳが少なくとも約１６％減少している場合に診断される。さらなる例において、重度のＡＤは、ＰＤＧＦ−ＢＢの参照レベルと比較して、ＰＤＧＦ−ＢＢが少なくとも約８５％減少している場合に診断される。なおさらなる例において、上記生物学的流体サンプルは、末梢性の生物学的流体サンプルである。

本明細書において提供されるのは、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群より選択される。いくつかの例において、上記ＡＤ診断バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群より選択される。他の例において、上記ＡＤ診断マーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群より選択される。

本発明者らはまた、軽度認知障害（ＭＣＩ）、ＡＤとは異なると考えられる、臨床的に認識された障害を有する個体を同定するための方法を発見した。ＭＣＩにおいて、認知および記憶は、軽度に欠乏している。本発明者らは、上記バイオマーカーＲＡＮＴＥＳが、ＭＣＩを有する個体において減少していることを見いだした。ＭＣＩを有する個体は、ＡＤ患者において減少しているが、ＭＣＩを有する個体においては減少していないバイオマーカー（例えば、レプチン）を測定することによって、ＡＤを有する個体から区別され得る。従って、本発明は、末梢性の生物学的流体サンプル中でＲＡＮＴＥＳのレベルについての測定された値を得る工程、およびその測定された値と参照値とを比較する工程によって、ＭＣＩを診断するかまたはＭＣＩの診断を補助するための方法を提供する。特定の実施形態において、このような方法は、末梢性の生物学的流体サンプル中のレプチンレベルについての測定された値を得る工程、およびその測定されたレベルと、参照値とを比較する工程を包含する。このようにして得られた情報は、個体におけるＭＣＩを補助するかまたはＭＣＩを診断するために使用され得る。

さらに、本発明者らは、ＡＤ患者由来の末梢性の生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢ−ホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルについての測定された値を得ることによって、ＡＤ患者を層別化する（すなわち、推定ＡＤと診断される個体またはＡＤと診断された個体を、異なるクラスのＡＤに分類する）ための方法を発見した。これら２種のバイオマーカーの測定されたレベルが、参照値と比較される。このようにして得られた情報は、個体のＡＤ診断（または推定ＡＤ診断）の層別化を補助するために使用され得る。従って、本発明は、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を層別化するための方法を提供し、この方法は、上記患者由来の生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルについての測定された値と、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照値とを比較する工程を包含する。いくつかの例において、上記生物学的流体サンプルは、末梢性の流体サンプルであり、これらとしては、血液、血清または血漿が挙げられる。他の例において、上記方法は、レプチンおよびＲａｎｔｅｓのレベルについての測定された値と、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値とを比較する工程をさらに包含し、ここでＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値は、２５〜２８のＭＭＳＥスコアを有する個体由来のサンプルに関するものであり、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルにおける増大、ならびにＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳのレベルが実質的に同じままであることは、２０〜２５のＭＭＳＥスコアによって示されるように、軽度のＡＤを示す。さらなる例において、上記方法は、レプチンおよびＲａｎｔｅｓのレベルについての測定された値と、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値とを比較する工程をさらに包含し、ここでＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値は、２０〜２５のＭＭＳＥスコアを有する個体由来のサンプルに関するものであり、Ｒａｎｔｅｓ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦのレベルの減少、ならびにレプチンのレベルが実質的に同じままであることは、１０〜２０のＭＭＳＥスコアによって示されるように、中等度ＡＤを示す。

一局面において、本発明は、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを得る工程、および上記測定されたレベルと上記参照レベルとを比較する工程によって、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法を提供し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、測定されたレベルは、少なくとも２種、３種、４種または５種のＡＤ診断バイオマーカーについて得られる。いくつかの実施形態において、上記測地された値と上記参照値との比較は、上記測定された値と上記参照値との間の倍数差を計算する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記測定された値は、上記サンプル中のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定することによって得られる一方で、他の実施形態において、上記測定される値は、第３者から得られる。また、提供されるのは、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、参照レベルとを比較する工程によって、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法である。さらに提供されるのは、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程によって、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であり、ここで参照レベルと比較した場合の減少は、ＡＤの診断を示唆する。

別の局面において、本発明は、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの測定されたレベルを得る工程、および上記測定されたレベルと、参照レベルとを比較する工程によって、軽度認知障害（ＭＣＩ）の診断を補助するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＭＣＩの診断を補助するための方法はまた、末梢性の生物学的流体サンプル中のレプチンの測定された値を得る工程、およびレプチンの測定された値と参照レベルとを比較する工程を包含する。特定の実施形態において、上記測定された値は、上記サンプル中のＲＡＮＴＥＳ（および／またはレプチン）のレベルを測定することによって得られる一方で、他の実施形態において、上記測定された値は、第３者から得られる。また提供されるのは、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳ、および必要に応じてレプチンの測定されたレベルと、参照レベルと比較する工程によって、軽度認知障害（ＭＣＩ）の診断を補助するための方法である。さらに提供されるのは、個体由来の末梢性の生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳ、および必要に応じてレプチンのレベルを測定する工程によって、ＭＣＩの診断を補助するための方法であり、ここで参照レベルと比較した場合のＲＡＮＴＥＳレベルの減少は、ＭＣＩの診断を示唆する（レプチンが測定される実施形態においては、上記参照レベル以上のレプチンレベルもまた、ＭＣＩを示唆する）。

さらなる局面において、本発明は、末梢性の生物学的流体サンプル中のレプチンの測定された値を得る工程；および上記レプチンの測定された値と参照値とを比較する工程によって、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするための方法を提供する。特定の実施形態において、上記測定された値は、生じる上記サンプル中のレプチンのレベルを測定する工程によって得られる一方で、他の実施形態においては、上記測定された値は、第３者から得られる。また、提供されるのは、末梢性の生物学的流体サンプル中のレプチンの測定された値と、参照値とを比較する工程によって、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターするための方法である。さらに提供されるのは、末梢性の生物学的流体サンプル中のレプチンのレベルを測定することによって、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターするための方法であり、ここで参照値と比較した場合のレプチンの減少は、ＡＤの進行（増大した重症度）を示唆する。いくつかの例において、本発明は、末梢性の生物学的流体サンプル中のリンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１の測定された値を得る工程；ならびにレプチンの上記測定された値と参照値とを比較する工程によって、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするための方法を提供する。

別の局面において、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤを層別化するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、軽度ＡＤとより進行したＡＤとの間の層別化は、ＡＤ患者由来の末梢性の生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）レベルについての測定された値を得る工程、および上記測定された値と、ＢＤＮＦの参照値とを比較する工程によって実施される。他の実施形態において、軽度ＡＤと、中等度ＡＤと、重度のＡＤとの間の層別化は、ＢＤＮＦおよびＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）についてのレベルを得る工程、ならびに上記測定されたレベルと、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照レベルとを比較する工程によって得られる。特定の実施形態において、上記測定された値は、測定された値を出すために上記サンプル中のＢＤＮＦ（およびＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルを測定することによって得られる一方で、他の実施形態において、上記測定された値は、第３者から得られる。また、提供されるのは、ＡＤ患者由来の末梢性の生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦ（および必要に応じてＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルと、ＢＤＮＦ（および適切な場合、ＰＤＧＦ−ＢＢ）の参照値とを比較することによって、ＡＤ患者におけるＡＤを層別化するための方法である。さらに提供されるのは、末梢性の生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦレベル（および必要に応じてＰＤＧＦ−ＢＢレベル）を測定することにより、ＡＤ患者におけるＡＤを層別化するための方法であり、ここで（参照値と比較して）低レベルのＢＤＮＦは、軽度ＡＤを示唆し、（参照値と比較して）高レベルのＢＤＮＦは、より進行したＡＤを示唆し、（参照値と比較して）高レベルのＢＤＮＦおよび（参照値と比較して）低レベルのＰＤＧＦ−ＢＢは、中等度ＡＤを示唆し、（参照値と比較して）高レベルのＢＤＮＦおよび（参照値と比較して）高レベルのＰＤＧＦ−ＢＢは、重度のＡＤを示唆する。別の局面において、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤを層別化するための方法を提供する。いくつかの例において、軽度ＡＤとより進行したＡＤとの間での層別化は、ＡＤ患者由来の末梢性の生物学的流体サンプル中のリンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１のレベルについて測定された値を得る工程、ならびに上記測定された値と、リンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１の参照値とを比較する工程によって、行われる。

いくつかの実施形態において、上記末梢性の生物学的流体サンプルは、血液サンプルである。特定の実施形態において、上記末梢性の生物学的流体サンプルは、血漿サンプルである。他の実施形態において、上記末梢性の生物学的流体サンプルは、血清サンプルである。

なお別の局面において、本発明は、予想される候補薬剤を、ＡＤバイオマーカーを調節することにおける活性についてアッセイする工程によって、アルツハイマー病の処置のための候補薬剤を同定するための方法を提供し、ここで上記ＡＤバイオマーカーは、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群より選択される。本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病の処置のための候補薬剤を同定するための方法であり、この方法は、予想される候補薬剤を、ＡＤバイオマーカーを調節することにおける活性についてアッセイする工程を包含し、上記ＡＤバイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群より選択される。いくつかの例において、上記ＡＤバイオマーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群より選択される。

さらなる局面において、本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）を診断するためのキットを提供し、このキットは、ＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬および本明細書に記載されるＡＤの診断を補助するための方法を実施するための説明書を含み、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群より選択される。本明細書中で提供されるのは、本明細書において開示される方法において使用するためのキットであり、このキットは、少なくとも１種のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬、および以下からなる群より選択される少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカー：ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒ、ならびに本明細書において提供される方法を実施するための説明書を含む。さらに、本明細書において提供されるのは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含むＡＤ診断バイオマーカーの参照値のセット、ならびにＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬のセットであり、ここで上記バイオマーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。

別の局面において、本発明は、軽度認知障害（ＭＣＩ）を有する個体を同定するためのキットを提供し、このキットは、ＲＡＮＴＥＳに特異的な少なくとも１種の試薬；および本明細書において記載されるＭＣＩの診断を補助するための方法を実施するための説明書を含む。特定の実施形態において、ＭＣＩを有する個体を同定するためのキットはまた、レプチンに特異的な試薬を含み得る。

なお別の局面において、本発明は、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするためのキットを提供し、このキットは、レプチンに特異的な少なくとも１種の試薬；および本明細書において記載されるＡＤの進行をモニターするための方法を実施するための説明書を含む。

さらなる局面において、本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）患者を層別化するためのキットを提供し、このキットは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）に特異的な少なくとも１種の試薬、ＢＢホモ二量体血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）に特異的な少なくとも１種の試薬、および本明細書において記載されるＡＤ患者を層別化するための方法を実施するための説明書を含む。なおさらなる例において、本明細書において記載される方法において使用するためのキットは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群より選択されるＡＤ診断マーカーを含む。本明細書において開示される方法において使用するためのキットのさらなる例において、上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬は、上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントである。さらなる例において、本明細書において開示される方法において使用するためのキットは、サンプル特徴を測定するバイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬をさらに含む。

本明細書において提供されるのは、ＡＤ診断バイオマーカーのセットにおける各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬を含む、これらが付着された表面であり、ここでＡＤ診断バイオマーカーの上記セットは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。本明細書において提供されるのは、ＡＤ診断バイオマーカーのセットにおける各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬を含む、これらが付着された表面；ならびにサンプル特徴を測定するバイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬であり、ここでＡＤ診断バイオマーカーの上記セットは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる。さらなる例において、本明細書において提供されるのは、上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬が上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントである表面である。

本明細書において提供されるのは、各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬が付着された、本明細書に記載されるような表面、ならびに個体由来の末梢性の生物学的流体サンプルを含む組み合わせである。いくつかの例において、上記個体は、少なくとも６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、または８５歳である。

本明細書において提供されるのは、上記測定されたレベルと上記生物学的流体サンプルの参照レベルとを比較するための値を得るための方法である。本発明は、本明細書において記載される方法によって得られる上記値を含むコンピューター読み取り可能フォーマットを提供する。

本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群より選択される少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、各ＡＤ診断バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する。いくつかの例において、本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。いくつかの例において、本明細書において提供されるのは、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも２種、３種、４種または５種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する方法であり、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。いくつかの例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される。他の例において、本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、ｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される。本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であり、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される。いくつかの例において、上記生物学的流体サンプルは、末梢性の生物学的流体サンプルである。さらなる例において、上記生物学的流体サンプルは血漿である。本明細書において提供されるのは、神経変性疾患の診断を補助するための方法であり、この方法は、表１２Ａ〜１２Ｂに示される、１．５未満のｑ値％を有する１種以上のバイオマーカーの測定された値を得る工程、および上記測定された値と参照値とを比較する工程を包含する。

本明細書において提供されるのは、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群より選択される。いくつかの例において、上記参照レベルは、早期時点の同じＡＤ患者由来の生物学的流体サンプルから得られたレベルである。他の例において、上記生物学的流体サンプルは、末梢性の生物学的流体サンプルである。なおさらなる例において、上記生物学的流体サンプルは血漿である。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される。さらなる例において、本明細書において提供されるのは、ＡＤ患者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される。

本明細書において提供されるのは、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を層別化するための方法であり、この方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のバイオマーカーについての測定されたレベルと、上記バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される。いくつかの例において、上記生物学的流体サンプルは末梢性の流体サンプルである。他の例において、上記生物学的流体サンプルは血漿である。

本明細書において提供されるのは、アルツハイマー病の処置のための候補薬剤を同定するための方法であり、この方法は、予想される候補薬剤を、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーを調節することにおける活性についてアッセイする工程を包含し、ここで上記ＡＤ診断バイオマーカーは、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群より選択される。いくつかの例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。他の例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーであるリンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される。いくつかの例において、上記アッセイは、インビボで行われる。

さらなる例において、本明細書において提供されるのは、本明細書において記載される方法（例えば、ＡＤの診断を補助するかまたはＡＤを診断する方法）において使用するためのキットであり、このキットは、少なくとも１種のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬、および上記方法（例えば、ＡＤの診断を補助するかまたはＡＤを診断する方法）を実施するための説明書を含み、ここで上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群より選択される。本明細書において記載されるキットのいくつかの例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。他の例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される。さらなる例において、上記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される。さらなる例において、キットは、少なくとも２種のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種の試薬；少なくとも３種のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種の試薬；少なくとも４種のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種の試薬、または少なくとも５種のＡＤ診断マーカーの各々に対して特異的な少なくとも１種の試薬を含む。さらなる例において、上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬は、上記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントである。さらなる例において、上記キットは、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカーの一般的な改変体を検出し、ここで一般的改変体は、先進国における集団の少なくとも５つ以上において発現されるタンパク質を示す。さらなる例において、本明細書において開示される方法において使用するためのキットは、データを正規化するためのバイオマーカーをさらに含む。いくつかの例において、上記データを正規化するためのバイオマーカーは、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−β３からなる群より選択される。

本明細書において提供されるのは、表７に列挙されるバイオマーカーからなる群より選択されるＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬を含む、これらが付着された表面であり、ここで上記ＡＤ診断マーカーは、以下の基準によって特徴付けられる：表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙されるバイオマーカークラスター０−８と９０％より大きい（ｒ＝０．９〜ｒ＝０．９９）相関；Ｐ値０．００１未満〜最大で０．０５未満（Ｐ−ｖａｌｕｅｌｅｓｓｔｈａｎ．００１ｕｐｔｏ．０５）；２０％未満の倍数変化；および１より大きいスコア（増大するマーカーについて）または１未満のスコア（減少するマーカーについて）。本明細書において提供されるのは、表面および個体由来の末梢性の生物学的流体サンプルを含む組み合わせである。いくつかの例において、上記個体は、少なくとも６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、または８５歳である。

本明細書において提供されるのは、神経学的疾患の診断に有用な少なくとも１種のバイオマーカーを同定するための方法であり、この方法は、末梢性の生物学的流体サンプルのセットから複数のバイオマーカーについての測定された値を得る工程であって、ここで上記セットの末梢性の生物学的流体サンプルは、神経学的疾患を基礎としたサブセットへと分類できる、工程；少なくとも１種のバイオマーカーについての各サブセットからの上記測定された値を比較する工程；ならびに少なくとも１種のバイオマーカーを、該バイオマーカーについての上記測定された値が上記サブセット間で有意差があることを同定する工程を包含する。いくつかの例において、神経学的疾患はＡＤである。

（発明の詳細な説明）
炎症および損傷応答は、ＡＤ、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭型痴呆、脳血管疾患、多発性硬化症、およびニューロパシーにおけるニューロン変性と常に関連している。脳およびＣＮＳは、それら自身が免疫学的に活性であるだけでなく、複雑な末梢性の免疫学的相互作用を有する。Ｆｉａｌａら（１９９８ＭｏｌＭｅｄ．Ｊｕｌ；４（７）：４８０−９）は、アルツハイマー病において、血液脳関門の透過性および化学走性の変化（一部、ケモカインおよびサイトカインによって媒介される）が、末梢細胞の漸増および脳実質への末梢細胞の経血管内皮性通過を可能にし得ることを示した。血液脳関門のパラダイムは、インビボにおいて観察された解剖学的特徴および生理学的特徴を有するヒト脳血管内皮細胞および星状膠細胞を利用して構築された。このモデルは、血液脳関門モデルの脳側においてＡβｌ−４２によってチャレンジされた場合、単球／マクロファージの血管外遊出能力を試験するために使用した。そのモデルにおいて、Ａβ１−４２および脳側にある単球は、血液側から脳側への単球の血管外遊出を増加させた。いくらかの個体において、循環する単球／マクロファージは、活性化ミクログリアおよびマクロファージによって生成されたケモカインによって補充された場合、アルツハイマー病における脳の炎症性の破壊に加わることができた。

本発明者らは、血清中で同時に測定された多くの分泌マーカーの相対的濃度のモニタリングが、完成された任意の単一の生化学マーカーの絶対濃度よりも疾患の進行をモニターするためにより感度のよい方法であることを主張する。複合材（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ）またはアレイは、ＡＤ、ＰＤ、前頭側頭型痴呆、脳血管疾患、多発性硬化症、およびニューロパシーにおけるニューロン変性と関連する炎症および損傷応答のマーカーを検出するために、表７中の５種、１０種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種、１１０種、１２０種、１３０種、１４０種、１５０種、１６０種、１７０種、１８０種、１９０種、２００種のマーカーを同時に使用することを具現化し、固体支持体に結合した抗体または固体支持体に結合したタンパク質からなる。

本発明者らは、ＡＤの診断、ＡＤの診断の補助、ＡＤ患者におけるＡＤのモニター（例えば、ＡＤ患者における疾患進行の追跡（これは、ＡＤ患者における薬物療法または外科的療法の効果を追跡するために有用であり得る）、ＡＤ患者の層別化、および軽度認知障害（ＭＣＩ）の診断またはＭＣＩの診断の補助、ならびに認知障害の診断または認知障害の診断の補助のために有用な生化学マーカーの集合（まとめて「ＡＤバイオマーカー」という）を発見した。上記ＡＤバイオマーカーは、個体の生物学的流体中に存在する。いくつかの例において、上記ＡＤバイオマーカーは、特に、脳脊髄液サンプルを採取するために一般に使用されている腰椎穿刺手順と比較した場合に比較的非侵襲性である手順によってサンプル採取が可能である個体の末梢性の生物学的流体（例えば、血液）中に存在する。

（定義）
本明細書において使用される場合、用語「アルツハイマー患者」、「ＡＤ患者」、および「ＡＤと診断された個体」は全て、ＡＤと診断されたかまたは推定アルツハイマー病（ＡＤ）と診断される個体に言及する。

本明細書において使用される場合、語句「ＡＤバイオマーカー」とは、ＡＤ診断バイオマーカーであるバイオマーカーをいう。

用語「ＡＤバイオマーカーポリヌクレオチド」とは、本明細書において使用される場合、ＡＤバイオマーカーをコードするポリヌクレオチド配列、関連するトランス作用性制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、および他の遺伝子調節配列）、および／または上記ＡＤバイオマーカーをコードするｍＲＮＡのうちのいずれかに言及する。

本明細書において使用される場合、「診断を補助する」ための方法とは、ＡＤまたはＭＣＩの存在または性質に関する臨床決定を行うことを補助する方法をいい、確定的な診断に関して決定的であってもよいしそうでなくてもよい。従って、例えば、ＡＤの診断を補助するための方法は、個体由来の生物学的サンプル中の１種以上のＡＤバイオマーカーの量を測定する工程を包含し得る。

本明細書において使用される場合、用語「層別化（する）」とは、神経学的疾患の特徴に基づいて、異なる分類または階層に個体を分類することをいう。例えば、アルツハイマー病を有する個体集団の層別化は、疾患の重症度（例えば、軽度、中等度、進行性など）に基づいて、個体を割り当てる工程を包含する。

本明細書において使用される場合、用語「推定（する）」とは、個体が、特定の神経学的疾患を発現させる可能性が有意に高いことを見つけ出すことをいう。

本明細書において使用される場合、語句「神経学的疾患」とは、中枢神経系の疾患または障害をいう。神経学的疾患としては、多発性硬化症、ニューロパシー、および神経変性障害（例えば、ＡＤ、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）および前頭側頭型痴呆）が挙げられる。

本明細書において使用される場合、「生物学的流体サンプル」とは、個体から得られた種々の流体サンプルの型を包含し、診断アッセイまたはモニタリングアッセイにおいて使用され得る。この定義は、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿および生物起源の他の液体サンプルを包含する。この定義はまた、それらの獲得後の何らかの方法で（例えば、試薬での処理、可溶化、または特定の成分（例えば、タンパク質またはポリヌクレオチド）の富化によって）操作されたサンプルを包含する。

本明細書において使用される場合、用語「末梢性の生物学的流体サンプル」とは、中枢神経系に由来しない（すなわち、ＣＳＦサンプルではない）生物学的流体サンプルをいい、血液サンプルおよびＣＮＳに由来しない他の生物学的流体を含む。

「血液サンプル」は、血液、好ましくは、末梢血（または循環血液）に由来する生物学的サンプルである。血液サンプルは、例えば、全血、血漿または血清であり得る。

「個体」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物としては、ヒト、霊長類、家畜、競技用動物（ｓｐｏｒｔａｎｉｍａｌ）、齧歯類および愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されない。

「正常」個体または「正常」個体由来のサンプルは、定量的データおよび定性的データに関して本明細書において使用される場合、ＡＤもＭＣＩも有さないと医師によって評価されたまたは評価され、かつミニメンタルステート検査（Ｍｉｎｉ−ＭｅｎｔａｌＳｔａｔｅＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ；ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎら，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ１９７５；１２：１２８９−１９８において参照されている）スコアを有するかまたは２５〜３０の範囲のＭＭＳＥスコアを達成する個体をいう。「正常」個体は、一般に、５〜１０年の範囲内で年齢をマッチングさせている。これらの個体としては、評価されるべき個体で年齢をマッチングさせている個体が挙げられるが、これらに限定されない。

「軽度ＡＤを有する個体」は、（ａ）ＡＤと診断されたかまたは推定ＡＤと診断された個体、および（ｂ）ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎら，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ１９７５；１２：１２８９−１９８において参照されている）で評価されて２２〜２７のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に２２〜２７のスコアを達成するかのいずれかの個体である。従って、「軽度ＡＤ」は、ＭＭＳＥで評価されかつ２２〜２７のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に２２〜２７のスコアを達成するかのいずれかである個体におけるＡＤをいう。

「中等度ＡＤを有する個体」は、（ａ）ＡＤと診断されたかまたは推定ＡＤと診断された個体、および（ｂ）ＭＭＳＥで評価されて１６〜２１のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に１６〜２１のスコアを達成するかのいずれかである個体である。従って、「中等度ＡＤ」とは、ＭＭＳＥで評価されて１６〜２１のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に１６〜２１のスコアを達成するかのいずれかである個体におけるＡＤをいう。

「重症ＡＤを有する個体」は、（ａ）ＡＤと診断されたかまたは推定ＡＤと診断された個体、および（ｂ）ＭＭＳＥで評価されて１２〜１５のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に１２〜１５のスコアを達成するかのいずれかである個体である。従って、重症ＡＤ」とは、ＭＭＳＥで評価されて１２〜１５のスコアを有するか、またはＭＭＳＥ検査の際に１２〜１５のスコアを達成するかのいずれかである個体におけるＡＤをいう。

本明細書において使用される場合、用語「処置」とは、症状の緩和、改善および／または安定化、ならびに特定疾患の症状の進行における遅延をいう。例えば、ＡＤの「処置」は、ＡＤの１種以上の症状の除去、ＡＤの１種以上の症状の減少、ＡＤの症状の安定化（例えば、ＡＤのより進行した病期へ進行しない）、およびＡＤの１種以上の症状の進行（すなわち、悪化）における遅延、のうちのいずれか１つ以上を包含する。

本明細書において使用される場合、語句「倍数差」とは、ＡＤバイオマーカーについての測定された値と参照値との間の数値的大きさの差をいう。倍数差は、数値で表した測定された値を数値で表した参照値で除算することにより数学的に計算される。例えば、ＡＤバイオマーカーの測定された値が２０ナノグラム／ミリリットル（ｎｇ／ｍｌ）でありかつその参照値が１０ｎｇ／ｍｌである場合、その倍数差は２（２０／１０＝２）である。あるいは、ＡＤバイオマーカーの測定された値が１０ナノグラム／ミリリットル（ｎｇ／ｍｌ）でありかつその参照値が２０ｎｇ／ｍｌである場合、その倍数差は、１０／２０すなわち０．５０または５０％である。

本明細書において使用される場合、「参照値」とは、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値、平均値、または特定のコントロールもしくはベースライン値と比較した場合の値であり得る。参照値は、個々のサンプル値（例えば、ＡＤ、ＭＣＩまたは認知障害を有する個体由来のサンプルから得られた値、しかし早期時点では、試験されている個体以外のＡＤ患者またはＡＤと診断されていない個体である「正常」個体由来のサンプルから得られた値に基づき得る。上記参照値は、多数のサンプル（例えば、ＡＤ患者由来または正常個体由来）に基づいてもよいし、試験されるべきサンプルを含むかまたは排除しているサンプルのプールに基づいていてもよい。

本明細書において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、別段示されない限り、単数または複数（すなわち、１以上）を意味し得る。

（発明の方法）
（バイオマーカー同定のための方法）
本発明は、神経学的疾患の診断のため、診断において補助するため、階層毎に分類するため、リスクを評価するため、モニターするため、および／または予見するために有用な１つ以上のバイオマーカーを同定するための方法を提供する。本発明の特定の局面では、一群のバイオマーカーのレベルが、１つ以上の個体からの末梢生物学的流体サンプルのセットについて得られる。これらサンプルは、それらが神経学的疾患の基礎を基に、１つ以上のサブセットに分離され得るように選択される（例えば、正常個体および筋萎縮性側索硬化症と診断された個体からのサンプル、または軽度のアルツハイマー病をもつ個体ならびに重症のアルツハイマー病および／または神経変性疾患のようなその他の神経学的疾患をもつ個体からのサンプル）。これらサンプルから測定された値は、互いと比較され、上記サブセット間で有意に異なるようなバイオマーカーを同定する。これらサブセット間で有意に変動するようなバイオマーカーは、次いで、神経学的疾患の判断で補助するため、診断のため、階層毎に分類するため、モニターするため、および／または予見のための方法で用いられ得る。本発明の別の局面では、１つ以上の個体からの末梢生物学的流体サンプルのセット（ここで、これらサンプルは、神経学的疾患の基礎を基に１つ以上のサブセットに分離され得る）に対する測定値が比較され、ここで有意に変動するバイオマーカーは、神経学的疾患の判断で補助するため、診断のため、階層毎に分類するため、モニターするため、および／または予見のために有用である。本発明のさらなる局面では、１つ以上の個体からの末梢生物学的流体サンプルのセット（ここで、これらサンプルは、神経学的疾患の基礎を基に１つ以上のサブセットに分離され得る）のレベルが、生成された測定値に対して測定され、ここで、有意に変動するバイオマーカーは、神経学的疾患の判断で補助するため、診断のため、階層毎に分類するため、モニターするため、および／または予見のために有用である。

本発明は、１つ以上の個体に由来する、血液サンプルのような、末梢生物学的流体サンプルのセットを利用する。サンプルのこのセットは、それが神経学的疾患の基礎に基き１つ以上のサブセットに分割され得るように選択される。サブセットへの分割は、疾患の存在／不在、疾患の階層毎の分類（例えば、軽度対中程度）、または疾患のサブ分類（例えば、再発／軽減対進行性再発）の基礎に基き得る。本発明の実施で測定されるバイオマーカーは、末梢生物学的流体サンプル中に見出される任意のタンパク質様の生物学的マーカーであり得る。表７および８は、例示のバイオマーカーのコレクションを含む。さらなるバイオマーカーは、本明細書において実施例中に記載される。

従って、本発明は、神経変性性障害のような神経学的疾患の診断において補助するため、診断するため、検出するため、階層に分類するため、そして／または予見するために用いられ得る１つ以上のバイオマーカーを同定する方法を提供する。本発明の方法は、末梢生物学的流体サンプルのセットからの複数のバイオマーカーについて測定された値のセットを得ることにより実施され得、ここで、この抹消生物学的流体サンプルのセットは、各バイオマーカーについて上記サブセット間で測定された値を比較し、そしてこれらサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを同定して、神経学的疾患に関して少なくとも２つのサブセットに分割可能である。

上記測定された値を比較するプロセスは、当該技術分野で公知の任意の方法によって実施され得、ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＭｉｃｒｏａｒｒａｙｓ、ＴｒｅｅＨａｒｖｅｓｔｉｎｇ、ＣＡＲＴ、ＭＡＲＳ、ＳｅｌｆＯｒｇａｎｉｚｉｎｇＭａｐｓ、ＦｒｅｑｕｅｎｔＩｔｅｍＳｅｔ、またはＢａｙｅｓｉａｎネットワークを含む。

１つの局面では、本発明は、神経学的疾患の診断のために有用な１つ以上のバイオマーカーを同定する方法を提供し、複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルのセットから測定された値を得る工程であって、ここで、この末梢生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患の基礎を基にサブセットに分割可能である工程、少なくとも１つのバイオマーカーについて各サブセットからの測定された値を比較する工程、および上記測定された値がこれらサブセット間で有意に異なるを少なくとも１つのバイオマーカーを同定する工程による。いくつかの実施形態では、上記比較する工程は、ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＭｉｃｒｏａｒｒａｙｓを用いて実施される。特定の実施形態では、上記神経変性性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群からである。

別の局面では、本発明は、神経学的疾患の診断で補助するために有用な１つ以上のバイオマーカーを同定する方法を提供し、複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルのセットから測定された値を得る工程であって、ここで、この末梢生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患の基礎を基にサブセットに分割可能である工程、少なくとも１つのバイオマーカーについて各サブセットからの測定された値を比較する工程；および上記測定された値がこれらサブセット間で有意に異なるを少なくとも１つのバイオマーカーを同定する工程による。

さらなる局面では、本発明は、神経学的疾患を階層毎に分類するために有用な少なくとも１つのバイオマーカーを同定する方法を提供し、複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルのセットから測定された値を得る工程であって、ここで、この末梢生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患の階層の基礎を基にサブセットに分割可能である工程、少なくとも１つのバイオマーカーについて各サブセットからの測定された値を比較する工程；および上記測定された値がこれらサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを同定する工程による。

別の局面では、本発明は、神経学的疾患のモニタリングのために有用な少なくとも１つのバイオマーカーを同定する方法を提供し、複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルのセットから測定された値を得る工程であって、ここで、この末梢生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患の階層の基礎を基にサブセットに分割可能である工程、少なくとも１つのバイオマーカーについて各サブセットからの測定された値を比較する工程；および上記測定された値がこれらサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを同定する工程による。別の実施例では、上記測定された値は、変動する供給源の末梢生物学的流体サンプルから得られる。

なお別の局面では、本発明は、神経学的疾患の予見のために有用な少なくとも１つのバイオマーカーを同定する方法を提供し、複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルのセットから測定された値を得る工程であって、ここで、この末梢生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患の基礎を基にサブセットに分割可能である工程、少なくとも１つのバイオマーカーについて各サブセットからの測定された値を比較する工程；および上記測定された値がこれらサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを同定する工程による。その他の実施例では、上記測定された値は、変動する供給源の末梢生物学的流体サンプルから得られる。

（認識機能を評価する方法）
本明細書に提供されるのは、認識機能を評価する、認識損傷を評価する、認識損傷を診断するか、またはその診断を補助するための方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような個体からの生物学的流体サンプル中の１つ以上のＡＤ診断の測定されたレベルを得る工程、およびこれらの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程による。「ＡＤ診断マーカー」、「ＡＤバイオマーカー」および「バイオマーカー」（本明細書では交換可能に用いられる）への参照は、本明細書に記載されるマーカーおよびそれらの使用を参照するための便宜の用語であり、そしてこれらマーカーがＡＤを診断するために用いられるに過ぎないことを示すことは意図されない。本開示が明瞭にするように、これらのマーカーは、例えば、認識機能を評価するため、ＭＣＩを評価するため、ＡＤを発症するリスクを評価するため、ＡＤを階層に分類するためなどに有用である。ＡＤバイオマーカーは、制限されないで、例えば、全血、血漿または血清を含む血液；尿；脳脊髄液；涙；および唾液のような、ヒトの生物学的流体（すなわち、生物学的流体サンプル）中に存在する分泌タンパク質または代謝物を含む。生物学的流体サンプルは臨床サンプルを包含し、そしてまた、血清、血漿、およびその他の生物学的流体を含む。血液サンプルは、例えば、血小板、リンパ球、多形核細胞、マクロファージ、赤血球を含む血液中に存在する種々の細胞タイプを含み得る。

本明細書に記載されるとき、結果の評価は、データが、本明細書に記載される定性的または定量的方法および／または用いられる参照点のタイプによって得られたか否かに依存し得る。例えば、実施例４に記載されるように、別のＡＤバイオマーカーのレベルに対してであり得る別の参照レベルに対するＡＤバイオマーカーのレベルの定量的測定が得られ得る。実施例７におけるような、本明細書に記載されるその他の方法では、生物学的流体サンプル中のタンパク質濃度である定量値または絶対値が得られ得る。「定量的」結果またはデータは、サンプルに対する分子のｐｇ／ｍｌまたはｎｇ／ｍｌでのバイオマーカーの濃度を含み得る。定量値の例は、例えば、ＥＬＩＳＡによるタンパク質の濃度のレベルの直接的測定である。「定性的」結果またはデータは、参照値に対する比較としてである相対値を提供する。本明細書中のいくつかの例（実施例４）では、定性的測定は、フィルター時用の信号強度によって評価される。本明細書中のいくつかの例では、ＡＤバイオマーカーに特異的な複数の抗体が適切な、例えば、スライドまたはフィルターのような表面に付着される。本明細書の実施例１１および１２に記載されるように、結果の定性的評価は、標準化データを含み得る。本開示では、種々のセットのバイオマーカーが記載される。本発明は、これらセットのいずれか、これらセットの１つ以上のメンバーのいずれか、およびこれらセットを含む複数のマーカーの使用を企図することが理解される。

１つの局面では、本発明は、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法、およびＡＤを診断する方法を提供し、例えば個体からの末梢生物学的流体のような個体からの生物学的流体サンプル中の１つ以上のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを得る工程、およびこれらの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程による。いくつかの例では、末梢生物学的流体サンプルは血漿である。

いくつかの例では、上記ＡＤ診断バイオマーカーは、表７に示される群から選択される。いくつかの例では、上記ＡＤ診断バイオマーカーは以下の群から選択される；ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｐｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＭＰ−１；ＴＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；およびＥＧＦ−Ｒ。いくつかの例では、上記ＡＤ診断バイオマーカー（単数または複数）は、表８中に示される群から選択される。さらに、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂは、年齢合致正常コントロール、プラス、例えば、ＰＤおよびＰＮのような神経変性のその他の非ＡＤ形態に比較される（すなわち、すべてのコントロールに比較されるとき）、ＡＤ中の有意に増加（９Ａ−１〜９Ａ−２）または減少（９Ｂ）しているバイオマーカーの列挙を提供する（本明細書中に記載されるような方法によって、スコア値に基く各クラスター内で最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順でクラスター化されている）。一般に、適切なコントロールに比較されるとき、バイオマーカーにおける有意な増加は、ＡＤの指標であり、そして適切なコントロールに比較されるとき、バイオマーカーにおける有意な減少は、ＡＤの指標である。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中、左から右までのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；倍変化；ｑ−値（％）；およびクラスター数である。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカーは、例えば、ＰＤおよびＰＮのような非ＡＤ神経変性疾患または障害から区別されるようなＡＤを診断するために用いられ得る。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂは、健常年齢合致コントロールに比較されるＡＤ中の有意に増加（１０Ａ１〜１０Ａ２）または減少（１０Ｂ）しているバイオマーカーの列挙を提供する（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカー〜最も低いランクのバイオマーカーの順である）。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂ、表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂ、および表１２Ａ〜１２Ｂ中、左から右までのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；倍変化；およびｑ−値（％）である。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基き、健常年齢合致コントロールと比較したとき有意に増加されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基き、下降する順に）：ＢＴＣ；ＡＮＧ−２；ＭＩＦ；ＩＧＦＢＰ−６；ｓｐｇ１３０；ＣＴＡＣＫ；ＩＧＦＢＰ３；ＭＩＰ−１ａ；ＴＲＡＩＬＲ４；ＩＬ−１２ｐ４０；ＡＲ；ＮＴ−４；ＶＥＧＦ−Ｄ；ＯＳＭ；ＯＳＴ；ＩＬ−１１；ｓＴＮＦＲ１；Ｉ−ＴＡＣ；Ｅｏｔａｘｉｎ；ＴＥＣＫ；ＰＩＧＦ；ｂＮＧＦ；リンホタクシン；ＭＩＰ−３ｂ；ＨＣＣ−４；ＩＣＡＭ−３；ＤＴＫ；ＩＬ−１ＲＩ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＧＲＯ；ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ；ＨＧＦ；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＩＬ−２Ｒａ；ＥＮＡ−７８；およびＦＧＦ−９を含む。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基き、健常年齢合致コントロールと比較したとき有意に減少されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基き、下降する順に）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；Ｅｏｔａｘｉｎ−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＧＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、バイオマーカーは、例えば、０．０５以下のｐ値を有するＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法における使用のために選択される。表１０Ａ１〜１０Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）について、バイオマーカーＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は、０．０５より大きいＰ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１０Ａ１〜１０Ａ２中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は除く。表１０Ｂ（減少または負に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＢＭＰ−４、Ｆｉｔ３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣは、０．０５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、表１０Ｂ中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＢＭＰ−４、Ｆｉｔ３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣは除く。

表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂは、年齢合致変性コントロールに比較されるＡＤ中の有意に増加（１１Ａ１〜１１Ａ２）または減少（１１Ｂ）しているバイオマーカーの列挙（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順にある）を提供する。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基き、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールに比較されるとき、ＡＤにおいて有意に増加されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基く下降順で）：ＴＲＡＩＬＲ４；Ｅｏｔａｘｉｎ；ＩＬ−１２ｐ４０；ＢＴＣ−１；ＭＩＦ；ＯＳＴ；ＭＩＰ−１ａ；ｓＴＮＦＲ１；ＩＬ−１１；リンホタクチン；ＮＴ−４；ＶＥＦＧ−Ｄ；ＨＧＦ；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ−１；ＯＳＭ；ＩＬ−１Ｒ１；ＰＩＧＦ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＣＣＬ−２８；ＩＬ−２Ｒａ；ＩＬ−１２ｐ７０；ＧＲＯ；ＩＧＦＢＰ−６；ＩＬ−１７；ＣＴＡＣＫ；Ｉ−ＴＡＣ；ＩＣＡＭ−３；ＡＮＧ−２；ＭＩＰ−３ｂ；ＦＧＦ−９；ＨＣＣ−４；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＧＩＴＲ；およびＤＴＫを含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基き、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールに比較されるとき、ＡＤにおいて有意に減少されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基く下降順で）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；Ｅｐｏｔａｘｉｎ−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＮＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ−１；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。表１１Ａ１〜１１Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）について、バイオマーカーＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＬＩ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは、０．０５より大きいＰ値を有する。従って、いくつかの例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するための本明細書に開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１１Ａ１〜１１Ａ２中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＬＩ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは除く。表１１Ｂ（減少または負に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦは、０．０５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、０．０５より小さいｐ値を有するＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦからなる群から選択される。０．０５より大きいｐ値を有するバイオマーカーもまた、適切なコントロールが用いられる限り、本明細書中に記載のような方法で用いられ得る。いくつかの例では、方法は、０．０５より小さいｐ値を有する少なくとも１つのバイオマーカーとともに、０．０５より大きいｐ値を有する少なくとも１つのバイオマーカーの使用を含む。

表１２Ａ１〜１２Ｂは、年齢合致コントロールを参照して、ＡＤプラスその他の非ＡＤ神経変性コントロールにおいて有意に増加（１２Ａ）または減少（１２Ｂ）しているバイオマーカーの列挙（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順にある）を提供する。表１２Ａ〜１２Ｂ中に列挙されるバイオマーカーの任意の１つ以上、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤを含む神経変性疾患の診断において補助するため、またはそれを診断するためのような、本明細書中に開示される方法で用いられ得る。さらなる例では、このＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１から選択され、そしてその他の例では、リンホタクチンおよびＩＬ−１１を含む。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例に記載されるように、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群から選択される。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例に記載されるように、ＩＮＦ-γおよびＩＬ−８からなる群から選択される。なおその他の例では、ＡＤ診断バイオマーカーは、実施例中に記載されるように、バイオマーカーｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群から選択される。さらなる例では、ＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。これらの例において本明細書中に示されるように、定量的レプチンおよびＢＤＮＦレベルは、ＭＭＳＥスコアと統計学的に有意な正の相関を有し；定量的ＰＤＧＦ−ＢＢレベルは、男性におけるＭＭＳＥスコアと統計学的に有意な負の相関を有し；そして定量的ＲＡＮＴＥＳレベルは、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦと統計学的に有意な正の相関を有する。いくつかの例では、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法およびＡＤを診断する方法における使用のためのＡＤ診断バイオマーカーは、以下の４つのバイオマーカーの２つ以上を含む：ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳ。さらなる例では、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法およびＡＤを診断する方法における使用のためのＡＤ診断バイオマーカーは、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳ；レプチンおよびＢＤＮＦ；レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；レプチン、ＲＡＮＴＥＳおよびＢＤＮＦ；レプチン、ＲＡＮＴＥＳおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；レプチン、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；ＲＡＮＴＥＳおよびＢＤＮＦ；ＲＡＮＴＥＳおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦ−ＢＢ；ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；またはレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢを含む。いくつかの例では、ＡＤの診断を補助する方法またはＡＤを診断する方法における使用のためのＡＤ診断ハマーカーは、レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢを含む。その他の例では、ＡＤの診断を補助する方法またはＡＤを診断する方法における使用のためのＡＤ診断ハマーカーは、レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢから本質的に成るか、またはそられからなる。

いくつかの例では、本明細書中に提供されるのは、神経変性疾患のような神経学的疾患の診断を補助する方法、および神経変性疾患のような神経学的疾患を診断する方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような、個体からの生物学的流体サンプルにおいて、健常年齢合致コントロールと比較した神経変性コントロール中の表１２Ａ〜１２Ｂ中に示される１つ以上のＡＤ診断バイオマーカー（それぞれ増加されるか、または減少されるバイオマーカー）の測定されたレベルを得る工程、およびこれらの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程による。このような方法は、例えば、神経学的疾患のための初期スクリーニングとして用いられ得る。いくつかの例では、本明細書に記載のような、ＡＤの診断を補助するための方法および／またはＡＤを診断する方法は、神経学的疾患の診断を補助するための方法および神経学的疾患を診断する方法の前またはそれと同時に、あるいは、例えば、二次スクリーニングとしてその後に用いられ得る。さらに、またはそれに代わって、ＡＤの診断を補助する方法、またはＡＤを診断する方法、および／またはＡＤをその他のＡＤ神経学的疾患から区別する方法は、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような、個体からの生物学的流体サンプルにおいて、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中に示される１つ以上のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを得る工程、およびこれらの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程を包含し得る。

本明細書中に記載のような認識機能を評価する方法、ＡＤの診断を補助する方法およびＡＤを診断する方法は、以下の工程の任意を包含し得、すなわち、個体からの生物学的流体サンプルを得る工程、このサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程およびこの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを得る工程およびこの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；サンプルから得た少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程；サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程およびこの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；測定されたレベルの適切な参照への比較に基きＡＤを診断する工程；またはサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーについて測定された値を得る工程である。ＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程、またはサンプル中のＡＤ診断バイオマーカーについての測定された値を得る工程は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多いＡＤ診断バイオマーカーについて実施され得る。本発明はまた、本明細書に記載される分析方法の結果を評価する方法を提供する。このような評価は、一般に、このような結果を再検討することをともない、そして、例えば、臨床的そして／または診断フォローアップそして／または処置オプションに関してアドバイスする際に支援し得る。本発明はまた、以下：認識機能および／または機能障害；ＭＣＩ；ＡＤ；例えば、軽度、中程度、重症のようなＡＤの程度；ＡＤの進行；の１つ以上の指標について、本明細書に記載されるようなＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定すること、またはその測定されたレベルを得ることにより、生物学的流体サンプルを評価するための方法を提供する。認識機能障害を評価する方法は、ＡＤＡＳ−ＣＯＧを含み、これは、一般に、ＭＭＳＥスコアリングに等価であることが受け入れられている。

本明細書に提供されるのは、以下の工程：処置を受ける個体（単数または複数）からの生物学的流体サンプルを得る工程；このサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程およびこの測定されたレベルを、いくつかの例では処置の前に個体（単数または複数）から得られた流体サンプル中のバイオマーカーの測定されたレベルである適切な参照と比較する工程；個体（単数または複数）からのサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを得る工程およびこの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；個体（単数または複数）からのサンプルから得られた少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；個体（単数または複数）からのサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する工程；個体（単数または複数）からのサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーを測定する工程およびこの測定されたレベルを適切な参照と比較する工程；測定されたレベルの適切な参照への比較に基づき処置の効き目を診断する工程；またはサンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーについて測定された値を得る工程のいずれか１つを含む、損傷された認識機能をもつ、そして／またはＡＤと診断された、単一または複数収集センターからのような、個体または個体の集団における処置様式の効き目を評価するための方法である。少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルは、この処置様式の評価の間に一回または複数回得られ得る。

本明細書に記載されるようなＡＤを診断する方法のために、上記参照レベルは、一般に、特定のＡＤ診断バイオマーカーについて「正常」と考えられる所定のレベルである（例えば、ＡＤとは診断されない年齢合致個体の平均レベル、またはＡＤ以外の神経学的傷害と診断された年齢合致個体および／または健常年齢合致個体の平均レベル）が、同時代に決定される参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプール由来の参照値）もまた企図される。また提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断の際に補助する方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを、参照レベルと比較する工程による。さらに提供されるのは、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断の際に補助する方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーを測定する工程による。本明細書に開示されるＡＤ診断バイオマーカーについて、参照レベル未満またはそれを超えるマーカーの測定は、ＡＤの診断を示唆（すなわち、その診断において補助）またはＡＤを示す。

別の局面では、本発明は、軽度認識機能障害（ＭＣＩ）をもつ個体を同定する方法を提供し、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの定量的測定レベルを得る工程、およびそのレベルを参照レベルと比較する工程による。一般に、ＲＡＮＴＥＳに対する参照レベルは、ＲＡＮＴＥＳについて「正常」と考えられる所定のレベルであり、そしてＲＡＮＴＥＳについて年齢合致正常レベルであり得るが、同時代に決定される参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプール由来である参照値）もまた企図される。また提供されるのは、ＭＣＩの診断の際に補助する方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの定量的測定レベルを、参照レベルと比較する工程による。さらに提供されるのは、ＭＣＩの診断の際に補助する方法であり、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳのレベルを測定する工程による。ＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが、例えば、個体からの末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中で低い（参照レベル未満）である知見は、ＭＣＩを示唆（すなわち、その診断の際の補助）またはその診断を示す。特定の実施形態では、このような方法はさらに、例えば、末梢生物学的サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンの定量的レベルを測定する工程、得る工程、および／または比較する工程を含む。ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンの両方のレベルが利用されるとき、定量的ＲＡＮＴＥＳレベルが低く、その一方定量的レプチンレベルが低くない（すなわち、レプチン参照レベルと実質的に同じであるか、より高い）という知見は、ＭＣＩの診断を示唆（すなわち、その診断の際に補助）またはその診断を示す。従って、本発明は、軽度の認識機能障害（ＭＣＩ）の診断の際に補助するための方法を提供し、個体から得られる生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳについての測定されたレベルを参照レベルと比較する工程を包含する。いくつかの例では、これらの方法は、個体から得られる生物学的流体サンプル中のレプチンについての測定されたレベルを参照レベルと比較する工程をさらに包含する。なおその他の例では、これらの方法は、上記生物学的流体サンプル中のレプチンのレベルを測定する工程をさらに包含し、それによって、レプチンについて上記測定された値を生成する。なおその他の例では、これらの方法は、上記生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳのレベルを測定する工程を包含し、それによって、ＲＡＮＴＥＳについて上記測定された値を生成する。なおその他の例では、上記生物学的流体サンプルは、末梢流体サンプルである。

さらなる局面では、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供する。実施例７に示されるように、本発明者らは、ＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが、疑わしいＡＤをもつＡＤ患者中で減少し（ＭＭＳＥ＝２５−２８）；しかも、ＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが、軽度のＡＤをもつＡＤ患者で減少し（ＭＭＳＥ＝２０−２５）、そしてＲＡＮＴＥＳレベルが、ＡＤの重症度が強くなるときさらに減少することを見出した。定量的データ（絶対測定とも呼ばれる）について本明細書で用いられるとき、「疑わしいＡＤ」をもつ個体は、（ａ）ＡＤと診断されたか、またはＡＤの可能性の診断がなされた、および（ｂ）Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ状態検査（ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎら、Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ１９７５；１２：１２８９〜１９８で参照される）で評価され、そして２５−２８のスコアであるか、またはＭＭＳＥ試験で２５−２８のスコアを達成するであろういずれかの個体である。従って、「疑わしいＡＤ」は、ＭＭＳＥでスコア２５−２８を有し、そして／またはＭＭＳＥ試験に際し、２５−２８のスコアを達成し得る個体におけるＡＤをいう。上記参照レベルは、特定のＲＡＮＴＥＳについて「正常」と考えられる所定のレベル（例えば、ＡＤまたはＭＣＩと診断されない年齢合致個体についての平均レベル）であり得るか、または特定の患者について歴史的参照レベル（例えば、同じ個体に由来するサンプルからであるが、時間がより早い点で得られたＲＡＮＴＥＳレベル）であり得る。同時代に決定される参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプールに由来する参照値）もまた企図される。従って、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供し、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプルからＲＡＮＴＥＳの定量値を得る工程、および測定値を参照値と比較する工程による。また提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を参照値と比較する工程による。さらに提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンのレベルを測定する工程による。この測定された値における減少は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行（例えば、重症度における増加）を示すか、または示唆する（診断するか、または診断を示唆する）。

さらなる局面では、本発明者らは、定量的レプチンレベルが、疑わしいＡＤをもつＡＤ患者で減少し；しかも、定量的レプチンレベルが、軽度のＡＤをもつ患者で減少し、そして定量的レプチンレベルが、ＡＤの重症度が強くなるときさらに減少し；そしてこの定量的レプチンレベルが、（実施例７に記載されるような）ＭＭＳＥスコアと正の相関を有することを見出した。参照レベルは、特定のレプチンについて「正常」と考えられる所定のレベル（例えば、ＡＤまたはＭＣＩと診断されない年齢合致個体の平均レベル）であり得るか、または特定の患者の歴史的参照レベル（例えば、同じ個体に由来であるが、より早い時点で得られたレプチンレベル）であり得る。同時代に決定される定量的参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプール由来である参照値）もまた企図される。従って、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供し、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプルからレプチンの定量的測定値を得る工程による。また提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を参照値と比較する工程による。さらに提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンのレベルを測定する工程による。この測定された値における減少は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行（例えば、重症度における増加）を示すか、または示唆する（診断するか、または診断を示唆する）。

本発明者らは、定量的ＢＤＮＦレベルが、軽度のＡＤをもつＡＤ患者中で減少し、しかも、女性における定量的ＢＤＮＦレベルがＭＭＳＥスコアと相関し、そしてＢＤＮＦレベルが（実施例７に記載されるように）ＡＤの重症度が強くなるときさらの減少することを見出した。参照レベルは、特定のＢＤＮＦについて「正常」と考えられる所定のレベル（例えば、ＡＤまたはＭＣＩと診断されない年齢合致個体についての平均レベル）であり得るか、または特定の患者について歴史的参照レベル（例えば、同じ個体に由来するサンプルからであるが、より早い時点で得られたＢＤＮＦレベル）であり得る。同時代に決定される参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプールに由来する参照値）もまた企図される。従って、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供し、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプルからＢＤＮＦの定量的測定値を得る工程による。また提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦの定量的測定値を参照値と比較する工程による。さらに提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦのレベルを測定する工程による。一般的にいえば、この測定された値における減少は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行（例えば、重症度における増加）を示すか、または示唆する（診断するか、または診断を示唆する）。

本発明者らは、定量的ＰＤＧＦ−ＢＢレベルが、疑わしいＡＤをもつＡＤ患者中で減少し；ＰＤＧＦ−ＢＢレベルが、軽度のＡＤと比較して疑わしいＡＤで減少し；しかも、男性ＡＤ患者のＭＭＳＥスコアが、（実施例７に記載されるように）ＰＤＧＦ−ＢＢレベルと負に相関することを見出した。参照レベルは、ＰＤＧＦ−ＢＢについて「正常」と考えられる所定のレベル（例えば、ＡＤまたはＭＣＩと診断されない年齢合致男性個体についての平均レベル）であり得るか、または特定の患者について歴史的参照レベル（例えば、同じ男性個体に由来するサンプルからであるが、より早い時点で得られたＢＰＤＧＦ−ＢＢレベル）であり得る。同時代に決定される参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプールに由来する参照値）もまた企図される。従って、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供し、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような男性からの生物学的流体サンプルからＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を得る工程、および測定された値を参照値と比較する工程による。また提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を参照値と比較する工程による。さらに提供されるのは、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法であり、例えば、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢのレベルを測定する工程による。この測定された値における減少は、ＡＤ患者におけるＡＤの進行（例えば、重症度における増加）を示すか、または示唆する（診断するか、または診断を示唆する）。

さらに、本発明は、ＡＤと診断された（またはＡＤであり得る診断を有する）個体を階層に分ける方法を提供する。本発明者らは、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦ、またはＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルの分析がこの生物学的流体サンプルが由来するＡＤ患者中のＡＤの重症度に関する情報を提供することを見出した。本発明のこれらの局面で用いられるＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照値は、試験されているサンプルの供給源であるＡＤ患者以外のＡＤ患者の集団から最も一般的に得られる（例えば、多数のＡＤ患者に由来する平均または中央値）が、同時代に決定されるＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照レベル（例えば、試験されているサンプルを含むサンプルのプール由来である参照値）もまた企図される。従って、本発明は、ＡＤの、軽度、およびより進行した（例えば、中程度および重症）ステージにＡＤ患者を階層分け（「ステージ分け」）する方法を提供し、ＢＤＮＦの測定されたレベルを得る工程、およびこの測定された値をＢＤＮＦの参照値と比較する工程による。従って、本発明は、ＡＤ患者におけるＡＤを階層分けする方法を提供し、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦおよび必要に応じてＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を得る工程、およびこの測定されたレベルを参照レベルと比較する工程による。本発明はまた、ＡＤ患者におけるＡＤを階層分けする方法を提供し、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦおよび必要に応じてＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を参照値と比較する工程による。本発明はさらに、ＡＤ患者におけるＡＤを階層分けする方法を提供し、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦおよび必要に応じてＰＤＧＦ−ＢＢを測定する工程による。実施例４に記載されるように、そして定性的結果を提供する実施例４に開示される実験条件下で、参照レベルより低いＢＤＮＦレベルを有するサンプルは軽度のＡＤを示唆または示し、その一方、参照レベルより高いＢＤＮＦレベルをもつサンプルは、より進行したＡＤ（すなわち、中程度または重症ＡＤ）を示唆する。参照レベルより高いＢＤＮＦレベルをもつようなサンプルの中で、参照レベル未満のＰＤＧＦ−ＢＢレベルをもまた有するサンプルは中程度ＡＤを示唆または示し、その一方、参照レベルを超えるＰＤＧＦ−ＢＢレベルをもまた有するようなサンプルは重症ＡＤを示唆または示す。疑いのあるＡＤ（２５〜２８の範囲のＭＭＳＥ）については、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは有意に増加し、その一方、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳは、有意に変化しないことが見出された。軽度のＡＤ（２０−２５の範囲のＭＭＳＥスコア）〜中程度ＡＤ（１０−２０の範囲のＭＭＳＥスコア）では、レプチンのレベルは低下せず、その一方、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは減少することが見出された。従って、（実施例７からの上記のＭＭＳＥスコアによって規定されるような）いくつかの実施形態では、軽度のＡＤは、定量的アッセイで、参照として疑いのあるＡＤと比較したとき、レプチンおよび／またはＰＤＧＦ−ＢＢのレベルが有意に増加するが、その一方、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳが有意に変化しないときに示される。従って、（実施例７からの上記のＭＭＳＥスコアによって規定されるような）いくつかの実施形態では、中程度のＡＤは、参照としての軽度のＡＤと比較したとき、レプチンは低下せず、その一方、ＲＲＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦのレベルが低下するときに示される。従って、本明細書で提供されるのは、上記患者からの生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳおよびレプチンのレベルの測定された値をＲＡＮＴＥＳおよびレプチンの参照値と比較する工程；上記患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来の神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳの測定値のレベルを、ＢＤＮＦ、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳの参照値と比較する工程；上記患者からの生物学的流体サンプル中のレプチンおよびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルの測定値を、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照値と比較する工程を包含する方法である。従って、本発明は、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を階層分けするための方法を提供し、上記患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルの測定値を、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの参照値と比較する工程を包含する。いくつかの例では、これらの方法は、レプチンおよびＲａｎｔｅｓレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値と比較する工程をさらに包含し、ここで、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値は、２５〜２８のＭＭＳＥスコアをもつ個体からのサンプルについてであり、ここで、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルにおける増加、そしてここでＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳのレベルが実質的に同じにとどまる場合、２０−２５のＭＭＳＥスコアによって示されるように軽度のＡＤを示す。本発明はまた、レプチンおよびＲａｎｔｅｓレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値と比較する工程をさらに包含する方法を提供し、ここで、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの参照値は、例えば、２０−２５のＭＭＳＥをもつ個体からであり、ここでＲａｎｔｅｓ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦレベルにおける減少、およびここでレプチンのレベルが実質的に同じに留まる場合は、１０−２０のＭＭＳＥスコアによって示される中程度のＡＤを示す。個体において本明細書中に記載されるようなＡＤを階層分けするための方法で有用なさらなるバイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１を含む。「実質的に同じ」に留まるバイオマーカーは、有意な変化がなく、しかもこれらの値がほぼ同じに留まることを意味する。いくつかの実施形態では、実質的に同じは、約１２％、１０％、５％、２％、１％のいずれかより小さい変化である。いくつかの実施形態では、有意な変化は、当該技術分野で標準的な方法を用いて統計学的に有意でないことを示す。上記の方法はまた、ＡＤの進行を評価するための方法に適用可能である。本明細書中で上記マーカーよって示される認識機能は、本明細書中で提供されるＭＭＳＥスコアとほぼ同じレベルの認識機能に対応する結果または印をともなうその他の測定によってであり得ることが理解される。

本発明はまた、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法を提供し、個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、測定された各バイオマーカーのバイオマーカーの参照レベルと比較する工程を包含し、ここで、この少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーは、表７から選択され、そしてＭＭＳＥスコアとのＢＤＮＦおよび／またはレプチン相関に匹敵する、ＭＭＳＥスコアとの統計学的に有意な正の相関を有し、そしてここで、この少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーは、年齢とは統計学的に相関しない。ＭＭＳＥスコアとのＢＤＮＦおよび／またはレプチン相関に匹敵する、ＭＭＳＥスコアとの統計学的に有意な正の相関を有するＡＤ診断バイオマーカーは、このバイオマーカーがＡＤ診断マーカーであることを意味する。いくつかの例では、このＡＤ診断バイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エポタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＫ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなるバイオマーカーの群から選択され、そしてその他の例では、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしてもまた知られる）、マクロファージ炎症性タンパク質−１Δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激性タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、神経栄養活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング成長因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなるバイオマーカーの群から選択される。さらなるバイオマーカーは表８に提供される。さらに、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂは、例えば、ＰＤおよびＰＮのような、年齢合致正常コントールプラスその他の非ＡＤ形態と比較した（すなわち、すべてのコントロールと比較されるような）ＡＤ中の有意に減少（９Ａ１〜９Ａ２）または増加（９Ｂ）する、スコア値に基づく各クラスター内で最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順序の（本明細書中に記載される方法によってクラスター化された）バイオマーカーの列挙を提供する。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中の左から右へのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；変化倍数；ｑ−値（％）；およびクラスター数である。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中に列挙された任意１つ以上のバイオマーカー、すなわち、このバイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断の際の補助のための方法、またはＡＤを診断する方法のような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中に列挙された任意１つ以上のバイオマーカーがＡＤを診断するために用いられ得る。いくつかの例では、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中に列挙された任意１つ以上のバイオマーカーが、例えば、ＰＤおよびＰＮのような、その他の非ＡＤ神経変性性疾患または傷害から区別されるとしてＡＤを診断するために用いられ得る。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂは、健常年齢合致コントロールと比較されるＡＤ中の有意に増加（１０Ａ１〜１０Ａ２）または減少（１０Ｂ）する、（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基づく最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順序の）バイオマーカーの列挙を提供する。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂ中、表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂ中、ならびに表１２Ａおよび１２Ｂ中の左から右へのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；変化倍数；ｑ−値（％）である。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基づき、健常な年齢合致コントロールと比較したときＡＤ中で有意に増加すると同定されたバイオマーカーは、（スコアに基づく下降順に）：ＢＴＣ；ＡＮＧ−２；ＭＩＦ；ＩＧＦＢＰ−６；ｓｐｇ１３０；ＣＴＡＣＫ；ＩＧＦＢＰ３；ＭＩＰ−１ａ；ＴＲＡＩＬＲ４；ＩＬ−１２ｐ４０；ＡＲ；ＮＴ−４；ＶＥＧＥ−Ｄ；ＯＳＭ；ＯＳＴ；ＩＬ−１１；ｓＴＮＦＲ１；Ｉ−ＴＡＣ；エポタキシン；ＴＥＣＫ；ＰＩＧＦ；ｂＮＧＦ；リンホタクチン；ＭＩＰ−３ｂ；ＨＣＣ−４；ＩＣＡＭ−３；ＤＴＫ；ＩＬ−１ＲＩ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＧＲＯ；ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ；ＨＧＦ；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＩＬ−２Ｒａ；ＥＮＡ−７８；およびＦＧＦ−９を含む。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基づき、健常な年齢合致コントロールと比較したときＡＤ中で有意に減少すると同定されたバイオマーカーは、（スコアに基づく下降順に）；ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；エポタキシン−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＧＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ；ＩＧＦ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂ中に列挙された任意１つ以上のバイオマーカー、すなわち、このバイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断の際の補助のための方法、またはＡＤを診断する方法のような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、バイオマーカーは、０．０５に等しいかまたはそれより小さいｐ値（または５．００に等しいかそれより小さいｑ値（％））を有するＡＤの診断の際の補助のための方法、またはＡＤを診断する方法のような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。表１０Ａ１〜１０Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は、０．５より大きいＰ値を有する。従って、いくつかの実施例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために本明細書で開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１０Ａ１〜１０Ａ２に列挙されたバイオマーカーからなる群から選択され、ＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は除く。表１０Ｂ（減少または負で相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＢＭＰ−４、Ｆｉｔ−３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣが０．００５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために本明細書で開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、表１０Ｂに列挙されたバイオマーカーからなる群から選択され、ＢＭＰ−４、Ｆｉｔ−３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣは除く。

表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂは、年齢合致変性コントロールと比較されるＡＤ中の有意に増加（１１Ａ１〜１１Ａ２）または減少（１１Ｂ）する、（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基づく最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順序の）バイオマーカーの列挙を提供する。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基づき、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールと比較したときＡＤ中で有意に増加すると同定されたバイオマーカーは、（スコアに基づく下降順に）：ＴＲＡＩＬＲ４；エポタキシン；ＩＬ−１２ｐ４０；ＢＴＣ−１；ＭＩＦ；ＯＳＴ；ＭＩＰ−１ａ；ｓＴＮＦＲ１；ＩＬ−１１；リンホタクチン；ＮＴ−４；ＶＥＦＧ−Ｄ；ＨＧＦ；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ−１；ＯＳＭ；ＩＬ−１Ｒ１；ＰＩＧＦ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＣＣＬ−２８；ＩＬ−２Ｒａ；ＩＬ−１２ｐ７０；ＧＲＯ；ＩＧＦＢＰ−６；ＩＬ−１７；ＣＴＡＣＫ；Ｉ−ＴＡＣ；ＩＣＡＭ−３；ＡＮＧ−２；ＭＩＰ−３ｂ；ＦＧＦ−９；ＨＣＣ−４；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＧＩＴＲ；およびＤＴＫを含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基づき、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールと比較したときＡＤ中で有意に減少すると同定されたバイオマーカーは、（スコアに基づく下降順に）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；エオタキシン−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＮＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ−１；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーのために特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断の際に補助するためまたはＡＤの診断のための、本明細書に開示される方法で用いられ得る。表１１Ａ１〜１１Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは、０．０５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの実施例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために本明細書で開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１１Ａ１〜１１Ａ２に列挙されたバイオマーカーからなる群から選択され、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは除く。表１１Ｂ（減少または負に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦが０．０５より小さいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために本明細書で開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、０．０５より小さいｐ値を有するバイオマーカーＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦからなる群が選択される。

表１２Ａ〜１２Ｂは、年齢合致コントロールを参照して、ＡＤプラスその他の非ＡＤ変性コントール中で有意に増加（１２Ａ）または減少（１２Ｂ）する、（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基づく最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順序の）バイオマーカーの列挙を提供する。表１２Ａ〜１２Ｂ中に列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬はは、例えば、ＡＤを含む神経学的疾患の診断において補助するためまたはそれを診断するために、本明細書に開示される方法で用いられ得る。さらなる例では、このＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１から選択され、そしてその他の例では、リンホタクチンおよびＩＬ−１１を含む。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例に記載されるように、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群から選択される。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例で記載されるように、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群から選択される。なおその他の例では、ＡＤ診断バイオマーカーは、実施例に記載のように、バイオマーカーｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群から選択される。

測定値（単数または複数）と参照値（単数または複数）との間の比較の結果は、ＡＤまたはＭＣＩを診断するため、またはその診断において補助するため、それらの疾患の重症度に従って階層分けするため、またはＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターするために用いられる。従って、この比較が、ＡＤまたはＭＣＩの示唆／指標である測定値（単数または複数）と参照値（単数または複数）との間で差異（すなわち、増加または減少）を示す場合、そのときは、適切な診断が補助されるか、またはなされる。逆に、測定レベル（単数または複数）の参照レベル（単数または複数）に対する比較が、ＡＤまたはＭＣＩの診断を示唆または示す差異を示さない場合、そのときは、適切な診断は補助されないか、またはなされない。同様に、ＡＤ患者に由来するサンプル中のレプチンの測定レベルの比較が、参照値と比較して減少するとき、患者のＡＤの進行の診断がなされるか、または補助される。同様に、ＡＤ患者から得られたサンプル中のＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルのレベルの比較が、ＡＤの特定ステージを示唆または示唆するとき、ＡＤの特定ステージ（軽度、中程度または重症）の診断が補助されるか、またはなされる。

当業者によって理解されるように、本発明のＡＤ診断方法（すなわち、ＡＤを診断する方法またはＡＤの診断の際に補助する方法）の実施において、１つ以上のＡＤ診断バイオマーカーが用いられるが、これらのマーカーは、ＡＤの診断を明白には示唆または示さず、この「多数決」の示唆または指標（例えば、上記方法が５つのＡＤ診断バイオマーカーを利用し、その３つがＡＤを示唆／示すとき、この結果は、この個体についてＡＤの診断を示唆また示すとして考慮され得る）が、アッセイの結果と考慮される。しかし、少なくとも２つの診断バイオマーカーの測定値が得られ、そして測定値の１つがレプチンに対してであり、レプチンのこの測定値が参照値より小さいに違いないくつかの実施形態では、ＡＤの診断を示すか、または示唆する。当業者によって認識されるように、本明細書に記載される方法は、種々の生物学的マーカーのいずれ（これらはＡＤマーカーでもよいし、なくてもよい）の使用も含み得、生物学的サンプル（単数または複数）の整合性および／または特徴を決定する。例えば、女性で一般により高いレプチンレベルは、性別のマーカーとして測定され得る。

本発明の特定の実施形態では、ＡＤバイオマーカーのレベルが、１つ以上の時点で個体から得られる。このような「系列」サンプリングは、ＡＤ患者中のＡＤの進行をモニターすることに関連する本発明の局面に良好に適合される。系列サンプリングは、月毎、季節毎（すなわち、３ヶ月毎）、半年毎、一年毎、二年毎、またはより少ない頻度のような任意の所望の時系列で実施され得る。測定レベルと参照レベルとの間の比較は、新たなサンプルが測定されるときごとに実施され得るか、またはレベルに関連するデータは、より少ない頻度の分析のために保持され得る。

当業者によって理解されるように、末梢生物学的流体サンプルを含む生物学的流体サンプルは、ＡＤを有するか、ＡＤまたはＭＣＩを発症していると疑われる個体から通常収集される。本発明はまた、認識評価が所望される個体からのサンプルを企図する。あるいは、個体（または、例えば研究に関与する他者および／または臨床医）は、任意のＡＤ、疑われるＡＤ、ＡＤのリスクにあることなくしてこのような評価を所望し得る。例えば、正常個体は、このような情報を所望し得る。このような個体は、最も一般的には６５歳以上であるが、末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプルが、本発明の方法における使用のためにとられる個体は、初期発症ＡＤまたは家族ＡＤが疑われるとき、３５〜４０歳程度のような若さであり得る。

本発明はまた、ＡＤおよび／またはＭＣＩの処置のための候補薬剤のスクリーニングのための方法を提供し、有望な候補薬剤をＡＤバイオマーカーを調節することにおける活性についてアッセイすることによる。このスクリーニングアッセイは、インビトロおよび／またはインビボのいずれかで実施され得る。本明細書に記載のスクリーニング方法で同定された候補薬剤は、ＡＤおよび／またはＭＣＩの処置のための治療薬として有用であり得る。

複合物が、この複合物中に存在するマーカーの任意のサブセットより予測的である確立Ｐは、数学的に：Ｐ＝１−（１−Ｐ_１）（１−Ｐ_２）（１−Ｐ_３）．．．．（１−Ｐｎ）として表され得る。

ここで、確立Ｐ_１、Ｐ_２、Ｐ_ｎは、臨床表現型を予見し得る個々のマーカーの確立を表し、そしてここで１−Ｐ_ｎは、その確立の補数を表す。この複合物の任意のサブセットは、それ故、Ｐについてより小さな値を有する。

本発明のさらなる実施形態に従って、表７、および本明細書中に記載されるその他の表中に引用されるバイオマーカーの血清、ＣＳＦ、またはその他の流体中の相対濃度は、５以上の要素からなる複合物、または集合、またはこのような複合物もの任意のサブセットとして、ＡＤ、ＰＤ、前部側頭部痴呆、脳血管疾患、多発性硬化症、および神経障害の臨床表現型の予測、疾患検出、階層分け、モニタリング、および処置における任意の個々のマーカーの絶対濃度よりもより予測的である。

（ＡＤ診断バイオマーカー）
免疫機構は、宿主防御システムの本質的部分であり、そして代表的には炎症性応答において顕著な特徴である。増加する数の研究が、この免疫系とＣＮＳとの間の興味をそそる連携を発見している。例えば、このＣＮＳは免疫監視から完全に保護されず、しかも種々の免疫細胞が血液−脳関門を横切り得ることが明瞭になった。侵入する白血球はこのＣＮＳ中の標的抗原を攻撃し得るか、または変性に対してニューロンを保護し得る成長因子を生成し得る（Ｈｏｈｌｆｅｌｄら、２０００、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１０７、１６１〜１６６）。これらの応答は、種々のタンパク質メディエーターを通じて惹起され、制限されないで、ニューロン、グリア細胞、内皮細胞および白血球を横切る細胞内伝達における、免疫および炎症システム中のサイトカイン、ケモカイン、神経栄養因子、コレクチン、キニン、および急性期タンパク質を含む。理論によって拘束されることなく、表７に列挙されるサイトカイン、ケモカイン、神経栄養因子、コレクチン、キニン、および急性期タンパク質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、および神経障害のような神経変性および炎症性疾患に付随して血清中で異なって発現されると仮定される。サイトカインは、免疫系および炎症性応答を含む、多くの機能の活性化に関連するポリペプチドメディエーターの不均質群である。末梢サイトカインはまた、活性輸送機構を経由して直接的に、または迷走神経刺激を経由して間接的に血液−脳関門を貫通する。サイトカインは、このサイトカインを放出する細胞の挙動に影響して自己分泌様式で作用し得るか、または隣接する細胞の挙動に影響してパラ分泌様式で作用し得る。いくつかのサイトカインは、遠隔の細胞の挙動に影響して内分泌様式で作用し得るが、これは、それらの循環に入る能力おびそれらの半減期に依存する。このサイトカインファミリーは、制限されないで、インターロイキン（ＩＬ−Ｉα、ＩＬ−Ｉβ、ＩＬＩｒａおよびＩＬ−２〜ＩＬ−１８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）、インターフェロン（ＩＮＦ−α、βおよびγ）、コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３およびいくつかのその他のＩＬ）、および成長因子（ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＢＭＰ、ＧＤＦ、ＣＴＧＦ、およびＥＣＧＦ）を含む。

本発明者らは、末梢体液中に存在する生化学的マーカーのコレクションが、ＡＤを診断またはＡＤの診断における補助を含む、認識機能を評価するために用いられ得ることを発見した。これらの「ＡＤ診断マーカー」は、制限されないで、ＧＣＳＦ；ＩＮＦ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒを含む。その他の例では、これらの「ＡＤ診断バイオマーカー」は：塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしてもまた知られる）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激性タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼ−２の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−２）、トランスホーミング成長因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）てある。その他の例では、ＡＤ診断マーカーは、レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦの１つ以上を含む。

さらに、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂは、年齢合致正常コントロール、プラス、例えば、ＰＤおよびＰＮのような神経変性のその他の非ＡＤ形態に比較される（すなわち、すべてのコントロールに比較されるとき）、ＡＤ中の有意に増加（９Ａ−１〜９Ａ−２）または減少（９Ｂ）しているバイオマーカーの列挙を提供する（本明細書中に記載されるような方法によって、スコア値に基く各クラスター内で最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順でクラスター化されている）。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ中、左から右までのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；倍変化；ｑ−値（％）；およびクラスター数である。表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカーは、例えば、ＰＤおよびＰＮのような非ＡＤ神経変性疾患または障害から区別されるようなＡＤを診断するために用いられ得る。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂは、健常年齢合致コントロールに比較されるＡＤ中の有意に増加（１０Ａ１〜１０Ａ２）または減少（１０Ｂ）しているバイオマーカーの列挙を提供する（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカー〜最も低いランクのバイオマーカーの順である）。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂ、表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂ、および表１２Ａ〜１２Ｂ中、左から右までのカラムは、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；倍変化；およびｑ−値（％）である。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基き、健常年齢合致コントロールと比較したとき有意に増加されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基き、下降する順に）：ＢＴＣ；ＡＮＧ−２；ＭＩＦ；ＩＧＦＢＰ−６；ｓｐｇ１３０；ＣＴＡＣＫ；ＩＧＦＢＰ３；ＭＩＰ−１ａ；ＴＲＡＩＬＲ４；ＩＬ−１２ｐ４０；ＡＲ；ＮＴ−４；ＶＥＧＦ−Ｄ；ＯＳＭ；ＯＳＴ；ＩＬ−１１；ｓＴＮＦＲ１；Ｉ−ＴＡＣ；Ｅｏｔａｘｉｎ；ＴＥＣＫ；ＰＩＧＦ；ｂＮＧＦ；リンホタクシン；ＭＩＰ−３ｂ；ＨＣＣ−４；ＩＣＡＭ−３；ＤＴＫ；ＩＬ−１ＲＩ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＧＲＯ；ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ；ＨＧＦ；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＩＬ−２Ｒａ；ＥＮＡ−７８；およびＦＧＦ−９を含む。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに基き、健常年齢合致コントロールと比較したとき有意に減少されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基き、下降する順に）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；Ｅｏｔａｘｉｎ−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＧＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。いくつかの例では、バイオマーカーは、例えば、０．０５以下のｐ値（または５．００以下のｑ−値（％））を有するＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法における使用のために選択される。表１０Ａ１〜１０Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）について、バイオマーカーＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は、０．０５より大きいＰ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１０Ａ１〜１０Ａ２中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＧＲＯ、ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ、ＩＧＦＢＰ、ＨＧＦ、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＩＬ−２Ｒａ、ＥＮＡ−７８、およびＦＧＦ−９は除く。表１０Ｂ（減少または負に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＢＭＰ−４、Ｆｉｔ３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣは、０．０５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、表１０Ｂ中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＢＭＰ−４、Ｆｉｔ３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＧＦＢＰ−４、ＧＣＰ−２、およびＴＡＲＣは除く。

表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂは、年齢合致変性コントロールに比較されるＡＤ中の有意に増加（１１Ａ１〜１１Ａ２）または減少（１１Ｂ）しているバイオマーカーの列挙（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順にある）を提供する。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基き、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールに比較されるとき、ＡＤにおいて有意に増加されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基く下降順で）：ＴＲＡＩＬＲ４；Ｅｏｔａｘｉｎ；ＩＬ−１２ｐ４０；ＢＴＣ−１；ＭＩＦ；ＯＳＴ；ＭＩＰ−１ａ；ｓＴＮＦＲ１；ＩＬ−１１；リンホタクチン；ＮＴ−４；ＶＥＦＧ−Ｄ；ＨＧＦ；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ−１；ＯＳＭ；ＩＬ−１Ｒ１；ＰＩＧＦ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＣＣＬ−２８；ＩＬ−２Ｒａ；ＩＬ−１２ｐ７０；ＧＲＯ；ＩＧＦＢＰ−６；ＩＬ−１７；ＣＴＡＣＫ；Ｉ−ＴＡＣ；ＩＣＡＭ−３；ＡＮＧ−２；ＭＩＰ−３ｂ；ＦＧＦ−９；ＨＣＣ−４；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＧＩＴＲ；およびＤＴＫを含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに基き、年齢合致のその他の非ＡＤ神経変性コントロールに比較されるとき、ＡＤにおいて有意に減少されると同定されるバイオマーカーは、（スコアに基く下降順で）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；Ｅｐｏｔａｘｉｎ−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＮＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ−１；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２を含む。表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂに列挙される任意の１つ以上のバイオマーカー、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法で用いられ得る。表１１Ａ１〜１１Ａ２（増加または正に相関するバイオマーカー）について、バイオマーカーＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＬＩ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは、０．０５より大きいＰ値を有する。従って、いくつかの例では、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するための本明細書に開示されるような方法における使用のための正に相関するバイオマーカーは、表１１Ａ１〜１１Ａ２中に列挙されるバイオマーカーからなる群から選択され、バイオマーカーＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＰＡＲＣ、ＦＡＳ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＮＡＰ−２、ＧＲＯ、ＮＴ−３、ＩＧＦＢＰ−６、ＴＩＭＰ−１、ＬＩ−１７、ＩＧＦＢＰ−２、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−ＴＡＣ、ＩＣＡＭ−３、ＡＮＧ−２、ＦＧＦ−４、ＭＩＰ−３ｂ、ＦＧＦ−９、ＨＣＣ−４、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ、ＡＮＧ、ＧＩＴＲ、ＤＴＫ、ＩＬ−６Ｒ、ＥＧＦ−Ｒは除く。表１１Ｂ（減少または負に相関するバイオマーカー）については、バイオマーカーＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦは、０．０５より大きいｐ値を有する。従って、いくつかの例では、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書に開示されるような方法における使用のための負に相関するバイオマーカーは、０．０５より小さいｐ値を有するＩＬ−１ａ、ＭＣＰ−２、ＩＧＦＢＰ−４、ｓｐｇ１３０、ＳＤＦ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１ｄ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−ａ、ＭＤＣ、ＦＧＦ−６、ＴＮＦ−ｂ、ＩＦＮ−γ、およびＧＤＮＦからなる群から選択される。

表１２Ａ１〜１２Ｂは、年齢合致コントロールを参照して、ＡＤプラスその他の非ＡＤ神経変性コントロールにおいて有意に増加（１２Ａ）または減少（１２Ｂ）しているバイオマーカーの列挙（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いバイオマーカーの順にある）を提供する。表１２Ａ〜１２Ｂ中に列挙されるバイオマーカーの任意の１つ以上、すなわち、バイオマーカーに特異的な試薬は、例えば、ＡＤを含む神経変性疾患の診断において補助するため、またはそれを診断するためのような、本明細書中に開示される方法で用いられ得る。さらなる例では、このＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１から選択され、そしてその他の例では、リンホタクチンおよびＩＬ−１１を含む。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例に記載されるように、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群から選択される。さらなる例では、ＡＤ診断マーカーは、実施例に記載されるように、ＩＮＦ-γおよびＩＬ−８からなる群から選択される。なおその他の例では、ＡＤ診断バイオマーカーは、実施例中に記載されるように、バイオマーカーｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群から選択される。

本発明者らによって発見されたＡＤ診断バイオマーカーは、すべてが既知に分子である。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は、例えば、Ｒｏｓｅｎｔｈａｌら、１９９１、Ｅｎｃｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１２９（３）：１２８９〜９４に記載されている。塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は、例えば、Ａｂｒａｈａｍら、１９８６、ＥＭＢＯＪ．５（１０）：２５２３〜２８に記載されている。上皮成長因子（ＥＧＦ）は、例えば、Ｇｒａｙら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ３０３（５９１９）：７２２〜２５に記載されている。線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）は、例えば、Ｍａｒｉｃｓら、１９８９、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ４（３）：３３５〜４０に記載されている。インターロイキン−３（ＩＬ−３）は、例えば、Ｙａｎｇら、１９８６、Ｃｅｌｌ４７（１）：３〜１０に記載されている。可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）は、例えば、Ｔａｇａら、１９８９、Ｃｅｌｌ５８（３）：５７３〜８１に記載されている。レプチン（「ｏｂ」としても知られる）は、例えば、Ｍａｓｕｚａｋｉら、１９９５、Ｄｉａｔｅｔｅｓ４４（７）：８５５〜５８に記載されている。マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）は、例えば、Ｗａｎｇら、１９９８、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（３）：２１４〜２２に記載されている。マクロファージ刺激性タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）は、例えば、Ｙｏｓｈｉｍｕｒａら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８（２１）、１５４６１〜６８およびＹｏｓｈｉｍｕｒａら、１９９９、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３６３（２）：３５６〜６０に記載されている。好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）は、例えば、Ｗａｌｚら、１９９１、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３０５：３９〜４６に記載されている。ニュートロフィン−３（ＮＴ−３）は、例えば、Ｈｏｈｎら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ３４４（６２６４）：３３９〜４１に記載されている。ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）は、例えば、Ｃｏｌｌｉｓら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ３１６（６０３０）：７４８〜５０に記載されている。ＲＡＮＴＥＳは、例えば、Ｓｃｈａｌｌら、１９８８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１（３）：１０１８〜２５中に記載されている。幹細胞因子（ＳＣＦ）は、例えば、Ｚｓｅｂｏｅｔら、１９９０、Ｃｅｌｌ６３（１）：２１３〜２４中に記載されている。可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）は、例えば、Ｓｃｈａｌｌら、１９９０、Ｃｅｌｌ６１（２）：３６１〜７０中に記載されている。トランスフォーミング成長因子−βは、例えば、Ｄｉｊｋｅら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５（１３）：４７１５〜１９中に記載されている。メタロプロテアーゼ−１（ＴＩＭＰ−１）の組織インヒビターは、例えば、Ｄｏｃｈｅｔｒｙら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ３１８（６０４１）：６６〜６９およびＧａｓｓｏｎら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ３１５（６０２２）：７６８〜７１に記載されている。メタロプロテアーゼ−２（ＴＩＭＰ−２）の組織インヒビターは、例えば、Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、１１９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（２３）：１３９３３〜３８に記載されている。腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）は、例えば、Ｇｒａｙら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ３１２（５９９６）：７２１〜２４に記載されている。トロンボポイエチン（ＴＰＯ）は、例えば、Ｆｏｓｔｅｒら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１（２６）：１３０２３〜２７に記載されている。

本発明者らは、ＡＤ診断方法の実施のために単一のＡＤ診断バイオマーカーで感受性および特異性の受容可能なレベルを見出したが、本発明のＡＤ診断方法の方法の有効性（例えば、感度および／または特異性）は、少なくとも２つのＡＤ診断バイオマーカーが利用されるとき一般に増大される。いくつかの例では、本発明のＡＤ診断方法の方法は、一般に、少なくとも４つのＡＤ診断バイオマーカーが利用されるとき増大される。複数のＡＤ診断バイオマーカーは、種々の方法によって本明細書中に開示されるＡＤ診断バイオマーカーから選択され得、「ｑ値」を含み、そして／またはクラスター多様性を選択することによる。ＡＤ診断バイオマーカーは、「ｑ値」を基に選択され得、これは、本発明者らがＡＤ診断バイオマーカーを同定するとき誘導した統計学的値である（実施例１中の表３を参照のこと）。ＡＤ診断バイオマーカーの選択のための「ｑ値」は、約０．０００１未満〜約０．０５の範囲であり、そしていくつかの例では、約０．０１〜約０．０５の範囲である。あるいは（またはそれに加えて）、ＡＤ診断バイオマーカーは、選択されたタンパク質のクラスター多様性またはサンプル多様性を保存するように選択され得る。本発明者らは、これらのＡＤ診断バイオマーカーを多くのクラスターに分離した（表１を参照のこと）。ＡＤ診断マーカーのさらなるクラスターは、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂに見出される。ここで、これらクラスターは、最も緊密に相関する各バイオマーカーに対する定量的測定によって形成される。本明細書で用いられるとき、「相関する」または「相関」は、ＭＭＳＥスコアおよび定量的タンパク質濃度または定性的タンパク質濃度のような、２つの数値が与えられたランダム変数の値における同時変化である。本明細書で用いられるとき、「識別する」または「識別」は、所定の変数について２つ以上のサンプル間の定量的または定性的差異をいう。このようなクラスターの次のクラスターは、このクラスターに最も緊密に相関するクラスターである。バイオマーカー間およびクラスター間の相関は、ｃｌｕｔｏ．ｃｃｇｂ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｗＣｌｕｔｏ／ｗＣｌｕｔｏ．ｃｇｉで入手可能なｗＣＬＵＴＯと呼ばれるパブリックウェブベースのソフトウェアを用いる非監視クラスタリングによって生成される階層的ツリーによって代表され得る。１つ以上のＡＤ診断バイオマーカーが、試験のために選択される場合、いくつかの例では、これら選択されたバイオマーカーは、少なくとも部分的には多様性であり（すなわち、これらのＡＤ診断バイオマーカーは、例えば、表１中のクラスター４からのレプチン、ＢＤＮＦおよび／またはＰＤＧＦ−ＢＢ、および表１のクラスター３からのＲＡＮＴＥＳを含むＡＤ診断バイオマーカーのセット少なくとも２つの異なるクラスターを代表する）、そしていくつかの例では、これらＡＤ診断バイオマーカーは、完全に多様性である（すなわち、選択されたＡＤ診断バイオマーカーの２つは、同じクラスターからではない）。従って、本発明は、ＡＤを診断するか、またはＡＤの診断における補助のための多くの異なる実施形態を提供する。

いくつかの実施形態において、末梢性の生物学的流体サンプル中の単一のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、その測定されたレベルを参照レベルと比較し、ＡＤを診断するかまたはＡＤの診断を補助する。単一のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルが本発明の実施に際して得られる特定の実施形態において、その測定されたレベルは末梢性の生物学的流体サンプルのＲＡＮＴＥＳに関するものである。

他の実施形態において、末梢性の生物学的流体サンプル中の少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルが測定され、上記マーカー類の各々の参照レベルと比較される。したがって、本発明は少なくとも２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１５種または２０種のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、それらの測定されたレベルを参照レベルと比較することによって、ＡＤを診断するための方法および／またはＡＤの診断を補助するための方法を提供する。例示の実施形態は、２種、３種、４種または５種のＡＤ診断バイオマーカーを用いる。いくつかの実施形態において、本明細書には、少なくともレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルを測定することによってＡＤを診断するための方法ならびに／またはＡＤの診断を補助するための方法が提供される。他の例において、本明細書には、例えば、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される少なくとも１種バイオマーカーのレベルを測定することによってＡＤを診断するためならびに／またはＡＤの診断を補助するためなどの方法が提供される。他の例において、バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１を含む。さらなる例において、ＡＤ診断マーカーは、上記の例において記載されるように、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される。さらなる例において、ＡＤ診断マーカーは、上記の例に記載されるように、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される。なお他の例において、ＡＤ診断バイオマーカーは、上記の例に記載されるように、ｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される。１種より多いＡＤ診断バイオマーカーを使用する実施形態（すなわち測定された値が１種よりＡＤ診断バイオマーカーで得られる実施形態）において、表３に示すＡＤ診断バイオマーカーの例示の組み合せは、（１）レプチンと任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合せ（すなわち、レプチンとＢＤＮＦ、レプチンとｂＦＧＦ、レプチンとＥＧＦ、レプチンとＦＧＦ−６、レプチンとＩＬ−３、レプチンとｓＩＬ−６Ｒ、レプチンとＭＩＰ−１δ、レプチンとＭＳＰ−α、レプチンとＮＡＰ−２、レプチンとＮＴ−３、レプチンとＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンとＲＡＮＴＥＳ、レプチンとＳＣＦ、レプチンとｓＴＮＲＲＩＩ、レプチンとＴＧＦ−β３、レプチンとＴＩＭＰ−１、レプチンとＴＩＭＰ−２、レプチンとＴＮＦ−β、およびレプチンとＴＰＯ）、（２）任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーと組み合せたＲＡＮＴＥＳ（すなわち、ＲＡＮＴＥＳとＢＤＮＦ、ＲＡＮＴＥＳとｂＦＧＦ、ＲＡＮＴＥＳとＥＧＦ、ＲＡＮＴＥＳとＦＧＦ−６、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−３、ＲＡＮＴＥＳとｓＩＬ−６Ｒ、ＲＡＮＴＥＳとレプチン、ＲＡＮＴＥＳとＭＩＰ−１δ、ＲＡＮＴＥＳとＭＳＰ−α、ＲＡＮＴＥＳとＮＡＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＮＴ−３、ＲＡＮＴＥＳとＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳとＳＣＦ、ＲＡＮＴＥＳとｓＴＮＲＲＩＩ、ＲＡＮＴＥＳとＴＧＦ−β３、ＲＡＮＴＥＳとＴＩＭＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＴＩＭＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＴＮＦ−β、およびＲＡＮＴＥＳとＴＰＯ）；（３）任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーと組み合せたＰＤＧＦ−ＢＢ（すなわち、ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＧＦ−６、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−３、ＰＤＧＦ−ＢＢとｓＩＬ−６Ｒ、ＰＤＧＦ−ＢＢとレプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＩＰ−１δ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＳＰ−α、ＰＤＧＦ−ＢＢとＮＡＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＮＴ−３、ＰＤＧＦ−ＢＢとＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＳＣＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとｓＴＮＲＲＩＩ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＧＦ−β３、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＩＭＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＩＭＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＮＦ−β、およびＰＤＧＦ−ＢＢとＴＰＯ）；（４）任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合せたＢＤＮＦ（すなわち、ＢＤＮＦとｂＦＧＦ、ＢＤＮＦとＥＧＦ、ＢＤＮＦとＦＧＦ−６、ＢＤＮＦとＩＬ−３、ＢＤＮＦとｓＩＬ−６Ｒ、ＢＤＮＦとレプチン、ＢＤＮＦとＭＩＰ−１δ、ＢＤＮＦとＭＳＰ−α、ＢＤＮＦとＮＡＰ−２、ＢＤＮＦとＮＴ−３、ＢＤＮＦとＰＤＧＦ−ＢＢ、ＢＤＮＦとＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦとＳＣＦ、ＢＤＮＦとｓＴＮＲＲＩＩ、ＢＤＮＦとＴＧＦ−β３、ＢＤＮＦとＴＩＭＰ−１、ＢＤＮＦとＴＩＭＰ−２、ＢＤＮＦとＴＮＦ−β、およびＢＤＮＦとＴＰＯ）；（５）ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＮＴ−３；（６）レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＲＡＮＴＥＳ；（７）ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＲＡＮＴＥＳ；（８）ＢＤＮＦ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳ；（９）ＢＤＮＦ、レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢ；（１０）ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦ、およびＮＴ−３；（１１）ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＮＴ３、およびレプチン；（１２）ＢＤＮＦ、レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳ；ならびに（１３）ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＮＴ−３、ＥＧＦ、ＮＡＰ−２、およびレプチンを含む。ＡＤ診断バイオマーカーのさらなる例示の組み合せは、（１４）本明細書に開示される任意の他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合せたレプチン（すなわち、レプチンとＧＣＳＦ、レプチンとＩＦＮ−γ、レプチンとＩＧＦＢＰ−１、レプチンとＢＭＰ−６、レプチンとＢＭＰ−４、レプチンとエオタキシン−２、レプチンとＩＧＦＢＰ−２、レプチンとＴＡＲＣ、レプチンとＡＮＧ、レプチンとＰＡＲＣ、レプチンとＡｃｒｐ３０、レプチンとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、レプチンとＩＣＡＭ−１、レプチンとＴＲＡＩＬＲ３、レプチンとｕＰＡＲ、レプチンとＩＧＦＢＰ−４、レプチンとＩＬ−１Ｒａ、レプチンとＡＸＬ、レプチンとＦＧＦ−４、レプチンとＣＮＴＦ、レプチンとＭＣＰ−１、レプチンとＭＩＰ１ｂ、レプチンとＶＥＧＦ−Ｂ、レプチンとＩＬ−８、レプチンとＦＡＳおよびレプチンとＥＧＦ−Ｒ）、（１５）本明細書に記載される任意の他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合せたＲＡＮＴＥＳ（すなわちＲＡＮＴＥＳとＧＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳとＩＦＮ−γ、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＢＭＰ−６、ＲＡＮＴＥＳとＢＭＰ−４、ＲＡＮＴＥＳとエオタキシン−２、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＴＡＲＣ、ＲＡＮＴＥＳとＡＮＧ、ＲＡＮＴＥＳとＰＡＲＣ、ＲＡＮＴＥＳとＡｃｒｐ３０、ＲＡＮＴＥＳとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＲＡＮＴＥＳとＩＣＡＭ−１、ＲＡＮＴＥＳとＴＲＡＩＬＲ３、ＲＡＮＴＥＳとｕＰＡＲ、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−４、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−１Ｒａ、ＲＡＮＴＥＳとＡＸＬ、ＲＡＮＴＥＳとＦＧＦ−４、ＲＡＮＴＥＳとＣＮＴＦ、ＲＡＮＴＥＳとＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＭＩＰ１ｂ、ＲＡＮＴＥＳとＶＥＧＦ−Ｂ、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳとＦＡＳおよびＲＡＮＴＥＳとＥＧＦ−Ｒ）、（１６）本明細書に開示される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーと組み合せたＰＤＧＦ−ＢＢ（すなわち、ＰＤＧＦ−ＢＢとＧＣＳＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＦＮ−γ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＭＰ−６、ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＭＰ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとエオタキシンー２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＡＲＣ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡＮＧ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡｃｒｐ３０、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＣＡＭ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＲＡＩＬＲ３、ＰＤＧＦ−ＢＢとｕＰＡＲ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−１Ｒａ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡＸＬ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＧＦ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとＣＮＴＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＣＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＩＰ１ｂ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−８、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＡＳおよびＰＤＧＦ−ＢＢとＥＧＦ−Ｒ）、（１７）本明細書に開示される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーと組み合わせたＢＤＮＦ（すなわちＢＤＮＦとＧＣＳＦ、ＢＤＮＦとＩＦＮ−γ、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−１、ＢＤＮＦとＢＭＰ−６、ＢＤＮＦとＢＭＰ−４、ＢＤＮＦとエオタキシンー２、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−２、ＢＤＮＦとＴＡＲＣ、ＢＤＮＦとＡＮＧ、ＢＤＮＦとＰＡＲＣ、ＢＤＮＦとＡｃｒｐ３０、ＢＤＮＦとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＢＤＮＦとＩＣＡＭ−１、ＢＤＮＦとＴＲＡＩＬＲ３、ＢＤＮＦとｕＰＡＲ、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−４、ＢＤＮＦとＩＬ−１Ｒａ、ＢＤＮＦとＡＸＬ、ＢＤＮＦとＦＧＦ−４、ＢＤＮＦとＣＮＴＦ、ＢＤＮＦとＭＣＰ−１、ＢＤＮＦとＭＩＰ１ｂ、ＢＤＮＦとＶＥＧＦ−Ｂ、ＢＤＮＦとＩＬ−８、ＢＤＮＦとＦＡＳ、そしてＢＤＮＦとＥＧＦ−Ｒ）を含む。

（ＡＤバイオマーカーレベルの測定）
サブセット間で著しく変動するバイオマーカーを同定する統計的試験は一般的ｔ検定を含めて多数ある。しかし、測定するバイオマーカーの数が増えるにつれて、ＳＡＭのようなより複雑な方法を使用するのが一般的に有益である（Ｔｕｓｈｅｒら，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（９）：５１１６−２１）。その他の有用な方法としてはツリーハーベスティング（Ｈａｓｔｉｅら，ＧｅｎｏｍｅＢｉｏｌｏｇｙ２００１，２：ｒｅｓｅａｒｃｈ０００３．１−０００３．１２）、自己組織化マップ（Ｋｏｈｏｎｅｎ，１９８２ｂ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ４３（１）：５９−６９）、頻出アイテムセット（Ａｇｒａｗａｌら，１９９３「Ｍｉｎｉｎｇａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｒｕｌｅｓｂｅｔｗｅｅｎｓｅｔｓｏｆｉｔｅｍｓｉｎｌａｒｇｅｄａｔａｂａｓｅｓ．」ＩｎＰｒｏｃ．ｏｆｔｈｅＡＣＭＳＩＧＭＯＤＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅｏｎＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＤａｔａ，２０７−２１６ページ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９９３年５月）、ベイジアンネットワーク（Ｇｏｔｔａｒｄｏ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉｃｒｏａｒｒａｙｄａｔａ，ＡＢａｙｅｓｉａｎａｐｐｒｏａｃｈ．Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（２００１），１，１，ｐｐ１−３７）、および一般に使用できるソフトウエアパッケージ類、ＣＡＲＴおよびＭＡＲＳなどがある。

ＳＡＭ法は反復測定値の標準偏差に対する発現の変化に基づいて各バイオマーカーにスコアを割り当てる。調節可能の閾値よりも高いスコアを有するバイオマーカーでは、アルゴリズムにより上記反復測定値の組み合せを使用して、特定のバイオマーカーが偶然に同定される確率（「ｑ値」として計算される）、または精度の測定のために使用される偽陽性率が推定される。ＳＡＭ法はマイクロアレイの有意性分析と呼ばれる一般に手に入るソフトウエアを用いて行うことができる（ｗｗｗ−ｓｔａｔｃｌａｓｓ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／−〜ｔｉｂｓ／ｃｌｉｃｋｗｒａｐ／ｓａｍ．ｈｔｍｌを参照のこと）。

バイオマーカーが、試験された末梢性の生物学的サンプルのサブセット間で有意に異なるとき、そのバイオマーカーは神経学的疾患の診断において補助し、神経学的疾患を診断し、階層化し、モニターし、および／または予測するのに有用であることが「同定された」と見なされる。バイオマーカーのレベルは、上記特定のバイオマーカーが偶然に同定される確率があらかじめ決められた数値より低い場合に「有意に異なる」。このような確率の計算法はサブセット間のレベルを比較するために用いる正確な方法に依存する（例えばＳＡＭを用いる場合、ｑ値は誤同定の確率を与え、ｐ値はｔ検定（または同様な統計分析）を使用する場合の確率を与えると考えられる）。当業者には明らかなように、あらかじめ決められた数値はサンプルごとに測定するバイオマーカーの数および使用するサンプルの数に依存して変化する。したがって、あらかじめ決められた数値は５０％と高いレベルから２０、１０、５、３、２または１％と低いレベルまでの範囲になる。

本明細書に記載されるように、少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを個体由来の生物学的サンプルで測定する。そのＡＤバイオマーカーレベルは、生物学的サンプル中の上記ＡＤバイオマーカーのレベルを特異的に決定することができる任意の使用可能の測定法を用いて測定できる。上記測定が、上記末梢性の生物学的流体サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルが参照値より高いか低いかを決めることができる限り、その測定は定量的でも定性的でもよい。

測定されたレベルは、特定のバイオマーカーのレベルの一次測定値（バイオマーカーそのものの量の測定（実施例７におけるような定量的データ）、例えばサンプル中のバイオマーカー分子数の検出によるもの）でもよいし、上記バイオマーカーの二次測定値（上記バイオマーカーの量を必ずしも導き出さない測定値（実施例４におけるような定性的データ）、例えば酵素活性の測定された値（バイオマーカーが酵素である場合）または上記バイオマーカーをコードするｍＲＮＡの測定値など）でもよい。定性的データはまた、一次測定から誘導されても、一次測定から得られてもよい。

いくつかのアッセイフォーマットでは末梢性の生物学的流体サンプルを前処理せずに試験することができるとはいえ、大部分の末梢性の生物学的流体サンプルは試験の前に処理することが期待される。処理は、一般に、細胞（有核および無核）、例えば血液中の赤血球、白血球、および血小板などの除去の形態をとり、そしていくつかの凝固カスケードタンパク質などの特定のタンパク質を血液から除去することも含み得る。いくつかの実施例において、末梢性の生物学的流体サンプルはＥＤＴＡを含む容器に集められる。さらなるサンプル回収手順については、実施例１２を参照のこと。一般に、ＡＤバイオマーカーレベルは、親和性をベースにする測定技術を用いて測定される。抗体に関係する「親和性」とは当業者には十分理解されている用語であり、抗体が結合パートナー、例えば本明細書に記載されるＡＤ診断バイオマーカーなど（またはそのエピトープ）に結合する程度または強度を意味する。親和性は当業者に公知の多くの方法によって測定および／または表現され、その方法としては、平衡解離定数（Ｋ_ＤまたはＫ_ｄ）、見かけ平衡解離定数（Ｋ_Ｄ’またはＫ_ｄ’）、およびＩＣ_５０（競合アッセイにおいて５０％阻害を起こすのに必要な量；本明細書では「Ｉ_５０」と交換可能に用いられる）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的に関して、親和性はエピトープに結合する抗体の所定の集団に対する平均親和性であることが、理解される。本明細書においてｍｌあたりｍｇＩｇＧまたはｍｇ／ｍｌの表現で報告されるＫＤ’の値は、血清（血漿も使用できる）ｍｌあたりのｍｇＩｇを示す。

親和性ベースの測定技術は測定すべきＡＤバイオマーカーに特異的に結合する分子（抗体またはアプタマーなどの「親和性試薬」）を利用する。ただしその他の方法、例えば、分光法ベースの技術（例えばマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、分光法）または生体活性を測定するアッセイ（例えば、増殖因子の有糸分裂誘発性を測定するアッセイなど）を使用してもよい。

親和性ベースの技術には抗体ベースのアッセイ（イムノアッセイ）およびアプタマー（他の分子に特異的に結合する核酸分子）を使用するアッセイ（例えば、ＥＬＯＮＡ）がある。さらに、抗体とアプタマーとを両方使用するアッセイも、企図される（例えば、捕捉のための抗体と検出のためのアプタマーとを利用するサンドイッチフォーマットアッセイ）。

イムノアッセイ技術を使用する場合、生物学的サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルを定量的または定性的に測定できる任意のイムノアッセイ法が使用できる。適切なイムノアッセイ法にはラジオイムノアッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素イムノアッセイ、化学発光アッセイ、ＥＬＩＳＡ、免疫−ＰＣＲ、およびウェスタンブロットアッセイなどがある。

同様に、生物学的サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルを定量的または定性的に測定できるアプタマーベースのアッセイが本発明の方法に使用できる。概して、アプタマーは、イムノアッセイのほとんど全てのフォーマットにおいて抗体の代わりとなり得るが、アプタマーはその他のアッセイフォーマット（例えば、ＰＣＲのような核酸増幅技術（米国特許第４，６８３，２０２号）または複合プライマーを用いる等温的増幅（米国特許第６，２５１，６３９号および同第６，６９２，９１８号）など）も可能である。

広範な種々の親和性ベースのアッセイが、当該分野で公知である。親和性ベースのアッセイは、目的のＡＤバイオマーカーから誘導される少なくとも１種のエピトープを利用し、多くの親和性ベースのアッセイフォーマットは、１種より多くのエピトープを利用する（例えば「サンドイッチ」フォーマットアッセイには２つ以上のエピトープが関与する；少なくとも１種のエピトープを用いて上記マーカーを捕捉し、少なくとも１種の別のエピトープを用いてそのマーカーを検出する）。

親和性ベースのアッセイは競合フォーマットまたは直接反応フォーマットにおいてサンドイッチ型フォーマットを利用することができ、さらに不均質（例えば、固体支持体を使用する）または均質（例えば単一相にあらわれる）でもよく、そして／または免疫沈降を利用することができる。大部分のアッセイは、標識化親和性試薬（例えば、抗体、ポリペプチド、またはアプタマー）の使用を含む；上記標識は、例えば、酵素分子、蛍光分子、化学発光分子、放射性分子または色素分子であり得る。プローブからのシグナルを増幅するアッセイもまた、公知である；その例は、ビオチンとアビジンを使用するアッセイ、および酵素標識イムノアッセイおよび酵素媒介性イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＥＬＯＮＡアッセイ）である。本明細書において、「定量的データ」について参照される実施例では、バイオマーカー濃度は、ＥＬＩＳＡを用いて得られた。バイオマーカーまたはそのバイオマーカーに特異的な試薬のいずれかが、ある表面に結合することができ、レベルを直接または間接的に測定できる。

不均質フォーマットにおいて、上記アッセイは二相（一般的には水性液および固体）を使用する。代表的に、ＡＤバイオマーカーに特異的な親和性試薬は固体支持体に結合し、生物学的サンプルの塊からＡＤバイオマーカーを容易に分離させる。親和性試薬／ＡＤバイオマーカー複合体を形成させるのに十分な時間反応させた後、代表的に、上記抗体を含む固体支持体または表面を洗い、その後、結合したポリペプチドを検出する。ＡＤバイオマーカーを測定するアッセイにおいて親和性試薬を支持体（固体または半固体）上に提供することができるか、あるいは、上記サンプル中のポリペプチドを支持体または表面に固定することもできる。使用できる支持体の例は、ニトロセルロース（例えば、膜またはマイクロタイターウェル形態）、ポリ塩化ビニル（例えばシートまたはマイクロタイターウェル）、ポリスチレンラテックス（例えばビーズまたはマイクロタイタープレート）、ポリフッ化ビニリデン、ジアゾ化紙、ナイロン膜、活性化ビーズ、ガラスおよびプロテインＡビーズなどである。これらのアッセイのための標準的フォーマットおよび競合的フォーマットは、当該分野において公知である。したがって、少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬に結合したそのバイオマーカーを含む複合体が、ここに提供され、その試薬は、表面に結合している。また、少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬に結合したそのバイオマーカーを含む複合体であって、そのバイオマーカーが表面に結合している上記複合体も提供される。

本発明の方法を複数のＡＤバイオマーカーを使用して実施する場合、アレイ型不均質アッセイは、ＡＤバイオマーカーレベルを測定するのに適切である。本発明の方法の実施において使用するアレイ型アッセイは一般には固体基材と、あらかじめ決められたパターン（例えば格子）で上記基材に結合する異なるＡＤバイオマーカーに特異的な２つ以上の捕捉試薬とを使用する。末梢性の生物学的流体サンプルが上記基材に塗布され、サンプル中のＡＤバイオマーカーは上記捕捉試薬によって結合される。サンプルの除去（および適切な洗浄）後、結合したＡＤバイオマーカーを、種々のＡＤバイオマーカーに特異的に結合する適切な検出試薬の混合物を使用して検出する。検出試薬の結合は蛍光色素をベースとするシステムなどの視覚的システムを用いて行われる。その捕捉試薬はあらかじめ決められたパターンで基材上に配置されるので、アレイ型アッセイはマルチプレックス検出システムを必要とせずに複数のＡＤバイオマーカーを検出するという利点を与える。

均質フォーマットにおいては、上記アッセイは単一相（例えば、水性液相）で行われる。代表的に、生物学的サンプルを、ＡＤバイオマーカーに特異的な親和性試薬と一緒に溶液中でインキュベートする。例えば、それは、形成される任意の親和性試薬／抗体複合体を沈殿する条件下にあり得る。これらのアッセイのための標準的フォーマットおよび競合的フォーマットの両方は、当該分野で公知である。

標準的（直接反応）フォーマットにおいて、ＡＤバイオマーカー／親和性試薬複合体のレベルを直接モニターする。これは、例えば、ＡＤバイオマーカー／親和性試薬複合体に結合されている標識された検出試薬の量を測定することによって達成され得る。競合的フォーマットにおいて、サンプル中のＡＤバイオマーカー量は、複合体中の既知量の標識ＡＤバイオマーカー（例えばその他の競合するリガンド）の結合に与える競合的効果をモニターすることによって推測される。結合または複合体形成の量は、定性的または定量的に測定できる。

この特許に記載される方法は、これらの方法を実施できる任意のデバイスを用いて実施できる。使用できるデバイスの例としては、あらゆる型のコンピューターを含む電気的コンピューターデバイスが挙げられるが、これに限定されない。この特許に記載される方法がコンピューターで実施されるとき、これらの方法の工程を行うためのコンピューターを構成するために使用できるコンピュータープログラムは、そのコンピュータープログラムを含むことができる任意のコンピューター読み取り可能媒体に含まれる。使用できるコンピューター読み取り可能媒体の例としては、ディスケット、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、およびその他のメモリーならびにコンピューター保存デバイスが挙げられるが、これらに限定されない。本方法の工程を実施するためのコンピューターを構成するために使用できるコンピュータープログラムは電気的ネットワーク、例えば、インターネット、ワールドワイドウェブ、イントラネットまたはその他のネットワークによって提供され得る。

一実施例において、この特許に記載される方法はプロセッサーおよびコンピューター読み取り可能媒体を含むシステムにおいて実施され得る。上記コンピューター読み取り可能媒体は上記システムにこの特許に記載される方法の工程を行わせるためのプログラムコード手段を含む。プロセッサーは、上記方法を実施するために必要な操作を行うことができる任意のプロセッサーであり得る。プログラムコード手段は、上記システムで実施することによりそのシステムが本特許に記載の工程を行うことができる任意のコードであり得る。プログラムコード手段の例としては、Ｃ＋＋、Ｊａｖａ（登録商標）、またはフォルトランなどの高レベルのコンピューター言語で書かれた、本特許記載の方法を実施するための説明資料；アセンブリー言語のような低レベルのコンピューター言語で書かれた、本特許記載の方法を実施するための説明資料；またはコンパイルおよびリンクされた機械言語のようなコンピューター実行可能な形態における、本特許に記載の方法を行うための説明資料が挙げられるが、これらに限定されない。

ＡＤバイオマーカーと親和性試薬を含んで形成される複合体は、そのアッセイフォーマットおよび使用者の好みに依存して、当業者に公知の多数の方法のいずれかによって検出できる。例えば、標識されていない親和性試薬はＤＮＡ増幅技術（例えば、アプタマーおよびＤＮＡ標識抗体のためのもの）または上記親和性試薬に結合する標識「二次抗体」で検出できる。あるいは、親和性試薬が、標識され得、そして複合体の量を直接的（色素（蛍光または可視）標識された親和性試薬、ビーズ標識された親和性試薬、または酵素標識された親和性試薬に対して）または間接的（ビオチン、発現タグなどで「タグを付けた」親和性試薬に対して）に測定してもよい。本明細書において化学発光を用いる「定性的データ」フィルターベースの抗体アレイとして提供される実施例を用いて、バイオマーカーの測定値を得ることができた。

当業者によって理解されるように、シグナルの検出モードは、そのアッセイで使用する正確な検出システムに依存する。例えば、放射性検出試薬を用いる場合、シグナルは生物学的サンプルからのシグナルを定量でき、生物学的サンプルからのそのシグナルを参照サンプルからのシグナルと比較できる技術、例えばシンチレーションカウンティング、オートラジオグラフィー（代表的に、走査濃度計と連結している）などを使用して測定される。化学発光体検出システムを用いる場合、上記シグナルは、代表的に、ルミノメータを用いて検出される。検出システムからのシグナルを検出する方法は、当該分野において周知であり、ここでさらに記載する必要はない。

１種類より多いＡＤバイオマーカーを測定する場合、生物学的サンプルは多数のアリコートに分けられ、別個のアリコートを用いて異なるＡＤバイオマーカーを測定する（ただし、ある特定サンプル中のＡＤバイオマーカーのレベルを複数測定できるように、生物学的サンプルを多数のアリコートに分割することも、企図される）。あるいは、生物学的サンプル（またはそれから得られるアリコート）を試験して、異なるＡＤバイオマーカーの個々のレベルを、１回の分析試験、例えば、アレイ型アッセイまたはマルチプレックス検出法を用いるアッセイ（例えば、異なる蛍光色素マーカーで標識した検出試薬を使用するアッセイなど）で測定できるアッセイを用い、単一反応で複数のＡＤバイオマーカーのレベルを測定することができる。

バイオマーカーを測定する場合「反復」測定を行うことは、当該分野において一般的である。反復測定はサンプルを複数のアリコートに分割し、同じアッセイ系の別々の反応でバイオマーカーを別々に測定することによって得るのが普通である。反復測定は本発明の方法には必ずしも必要でないが、本発明の多くの実施形態は反復試験（特に、二重の試験および三重の試験）を行う。

（参照レベル）
あるＡＤバイオマーカーについて測定されたレベルと比較するために使用する参照レベルは前述の議論から明らかなように、実施する発明の局面に依存して変化し得る。ＡＤ診断法では、「参照レベル」は、代表的に、あらかじめ決められた参照レベル、例えばＡＤまたはＭＣＩに罹っていない集団から得られる平均レベルであるが、いくつかの例では、参照レベルは、ＡＤ患者を含む個体群の平均または中間レベルであり得る。いくつかの例において、あらかじめ決められた参照レベルは、年齢をマッチングさせている集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均値または中央値）。本明細書中に開示されるいくつかの例において、年齢をマッチングさせている集団は、非ＡＤ神経変性障害を有する個体を含む。実施例１１および実施例１２を参照のこと。

ＭＣＩ診断法（すなわちＭＣＩを診断する方法またはＭＣＩの診断において補助する方法）では、参照レベルは、代表的に、ＡＤまたはＭＣＩに罹っていない集団から得られる平均レベルなどのあらかじめ決められた参照レベルであるが、いくつかの例では参照レベルはＭＣＩおよび／またはＡＤ患者を含む個体群からの平均または中間レベルであり得る。いくつかの例において、あらかじめ決められた参照レベルは年齢をマッチングさせている集団から得られるレベルから誘導される（例えばこれらレベルのまたは中間レベル）。

ＡＤモニタリング法（例えば、ＡＤ患者のＡＤ進行を診断する方法、またはＡＤ進行の診断において補助する方法）では、参照レベルはＡＤまたはＭＣＩにかかっていない集団およびＭＣＩまたはＡＤと診断された集団から得られる平均レベルなどのあらかじめ決められたレベルでよく、いくつかの場合では、参照レベルは、ＭＣＩおよび／またはＡＤ患者を含む個体群からの平均または中間レベルでよい。あるいは、参照レベルは特定の患者の歴史的参照レベルでよい（例えば、同じ個体に由来するサンプルからであるが、より早い時点で得られたレプチンレベル）。いくつかの場合において、あらかじめ決められたレベルは年齢をマッチングさせている集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均または中央値）。

ＡＤの階層化法（すなわちＡＤ患者を軽度、中程度および重症のＡＤ期に分類する方法）では、参照レベルは通常、ＡＤまたはＭＣＩと診断された集団（より好ましくはＡＤと診断された集団）からの平均または中間レベルであるあらかじめ決められた参照レベルである。いくつかの場合において、あらかじめ決められた参照レベルは年齢をマッチングさせている年齢がマッチした集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均または中央値）。

年齢をマッチングさせている集団（この集団から参照値が得られる）は試験すべき個体と同じ年齢であるのが理想的であるが、ほぼ年齢をマッチングさせている集団も容認される。ほぼ年齢をマッチングさせている集団は、試験される被験体の年齢から１、２、３、４または５歳以内の個体でよい。ほぼ年齢をマッチングさせている集団は、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年以内の増加分でよい（例えば６２歳の個体のための参照値の供給源として役立つ「５年増加」群は、５８〜６２歳の個体群、５９〜６３歳の個体群、６０〜６４歳の個体群、６１〜６５歳の個体群または６２〜６６歳の個体群を含み得る）。

（ＡＤバイオマーカーのレベルの比較）
測定された値および参照値を比較するプロセスは、問題のＡＤバイオマーカーの測定された値および参照値の型に適した任意の都合のよい方法で行うことができる。上で考察されるように、「測定すること」は定量的または定性的測定法によって行われ、測定された値と参照値を比較する方法は使用する測定技術に依存して変わり得る。例えば定性的比色アッセイを用いてＡＤバイオマーカーレベルを測定する場合、それらのレベルは、着色した反応産物の強度を視覚的に比較することによってか、または着色した反応産物の濃度測定または分光測定からのデータ（測定デバイスから得られる、例えば、棒チャートなどの数字的データまたはグラフ的データ）を比較することによって比較できる。しかし、本発明の方法に使用される測定された値は最も一般的には定量的数値（例えばサンプル１ミリリットルあたりのＡＤバイオマーカーのナノグラム、または絶対量などの定量的濃度測定値）である。他の例において、測定された値は、定性的である。定性的測定に関しては比較は数字的データの検査、データ表示の検査によって（例えば、棒グラフまたは線グラフのようなグラフ的表現を検査することによって）行うことができる。

測定された値が参照値の少なくとも９５％である場合、一般に、その測定された値は参照値と比較して実質的に等しいか、またはより大きいと見なされる（例えば１．７１の測定された値は、１．８０の参照値に実質的に等しいと見なされる）。測定された値が参照値の９５％未満である場合、その測定された値は参照値より小さいと見なされる（例えば、測定された値１．７は参照値１．８０より小さいと見なされる）。測定された値が参照値よりも少なくとも５％大きい場合、その測定された値は参照値よりも大きいと見なされる（例えば、測定された値１．８９は参照値１．８０よりも大きいと見なされる）。

比較するためのプロセスは、手動（方法の実施者による視覚的検査）でもよいし、自動自動化されていてもよい。例えばアッセイデバイス（化学発光体シグナルを測定するためのルミノメータなど）はあるＡＤバイオマーカーの測定された値と参照値との比較を可能にする回路およびソフトウェアを含むことができる。あるいは、別のデバイス（例えば、デジタルコンピューター）を使用して測定された値と参照値とを比較することができる。比較のための自動化デバイスは測定すべきＡＤバイオマーカーの保存された参照値を含むことができ、または上記測定された値を、同時に測定した参照サンプルから得られる参照値と比較することができる。

いくつかの実施形態において、本発明の方法は測定されたレベルと参照レベルとの間の「単純（ｓｉｍｐｌｅ）」比較または「二元（ｂｉｎａｒｙ）」比較を用いる（例えば、測定されたレベルと参照レベルとの間の比較は、測定されたレベルが参照レベルより高いかまたは低いかを決定する）。ＡＤ診断バイオマーカーについて、上記バイオマーカーの測定された値が参照値より低いことを示す比較は、ＡＤの診断を示すか、またはそれを示唆する。ＭＣＩの診断に関する方法では、ＲＡＮＴＥＳの測定された値が参照値より低いことを示す比較は、ＡＤの診断を示すか、またはそれを示唆する。さらにレプチンの測定された値を利用するＭＣＩ診断に関する実施形態において、ＲＡＮＴＥＳが参照値より低い一方で、レプチンが参照レベルに実質的に等しいかまたは参照レベルより大きいことを示す比較は、ＭＣＩの診断を示唆するか、またはそれを示す。

本明細書中に記載されるように、生物学的流体サンプルは、定量的（絶対値）または定性的（相対値）に測定され得る。所定の評価のための関連するＡＤバイオマーカーレベルは重複してもよいし、しなくてもよい。本明細書中に記載されるように、いくつかの実施形態では、定性的データは認識障害の所定のレベル（軽度、中程度または重症のＡＤ）（それはＭＭＳＥスコアによって測定できる）を示し、他の実施形態では、定量的データが認識障害の所定のレベルを示す。実施例４および実施例４に与えられる条件下（定性的データ）で示されるように、ＡＤの階層化に関する実施形態において、参照レベルより低いＢＤＮＦレベルを示す比較は軽度ＡＤを示唆するか、またはそれを示し、その一方で参照レベルより高いＢＤＮＦレベルを示す比較は、より進行したＡＤ（すなわち中程度または重症のＡＤ）を示唆し、参照レベルより高いＢＤＮＦレベルを有するサンプルの間で、参照レベルを下回るＰＤＧＦ−ＢＢレベルも有するものは中程度ＡＤを示唆するか、またはそれを示し、その一方で参照レベルを上回るＰＤＧＦ−ＢＢレベルも有するサンプルは重症ＡＤを示唆するか、またはそれを示す。実施例７に示されるようなＡＤの階層化に関する実施形態において（定量的データ）、参照レベルより低いＢＤＮＦレベルを示し、その参照レベルが正常である場合の比較は軽度ＡＤを示唆するか、またはそれを示し、その一方で、参照レベルより低いＢＤＮＦレベルを示し、その際その参照レベルが軽度ＡＤからのものであるという比較はより進んだＡＤ（すなわち中程度、重症のＡＤ）を示唆し、その一方で参照レベルと等しいレプチンレベルを有するサンプルであって、その参照レベルが、参照レベルを下回るＲＡＮＴＥＳレベルを有する軽度ＡＤからのものであるという比較は中程度ＡＤを示唆するか、またはそれを示し、その一方で参照レベルに等しいレプチンレベルを有するサンプルであって、その参照レベルが、参照レベルより低いＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳまたはＢＤＮＦレベルを有する中程度ＡＤからのものであるという比較は、重症ＡＤを示唆するか、またはそれを示す。

しかし、本発明の特定の局面において、上記比較は測定された値と参照値との間の差の大きさ（例えば測定された値と参照値との間の差の「倍数」またはパーセンテージ）を決定するために行われる。本明細書に開示される最小倍数差にほぼ等しいかまたはより大きい倍数差は、実施する特定の方法に即して、ＡＤ、ＭＣＩ、ＭＣＩからＡＤへの進行、または軽度ＡＤから中程度ＡＤへの進行を示唆するか、またはそれを示す。倍数差はタンパク質の絶対濃度を測定し、それを参照の絶対値と比較することによって測定できる。または倍数差は参照値とサンプル値との間の相対的差によって測定でき、その際いずれの数値も絶対濃度の測定値でなく、そして／または、両方の数値が同時に測定される。倍数差は１０％〜９５％の範囲にある。ＥＬＩＳＡは、タンパク質の絶対含有量または絶対濃度が測定され、それらから変化倍数が標準としての同じタンパク質の絶対濃度に比較して決定される。抗体アレイは相対的濃度を測定し、それから変化倍数が決定される。したがって、特定の診断を示唆するか、またはそれを示す測定された値と参照値との間の差の大きさは、測定された値および使用する参照値を得るために測定される特定のＡＤバイオマーカーに依存すると考えられる（使用する参照値自体、使用する方法に依存する）。表２Ａ〜２Ｂには、測定された値と参照値とを比較する際に倍数差を利用する本発明の方法に使用するＡＤバイオマーカーの最小倍数差が列挙される。倍数差の値を利用する実施形態において、表２Ａに示される倍数差周辺の倍数差は、ＡＤの診断を示唆し、その際、変化倍数は負の値である。例えば、本明細書に記載されるように、ＢＤＮＦレベル（ＥＬＩＳＡによって測定される場合）は、軽度ＡＤを有するＡＤ患者では減少し、ＡＤの重症度が増すにつれてＢＤＮＦレベルは減少する。表６に示すように、−４６％のＢＤＮＦ変化倍数はＢＤＮＦレベルの４６％の減少を意味する。表２Ａに示すように、抗体を使用する定性的測定では、０．６０のＢＤＮＦ変化倍数は、ＢＤＮＦレベルの６０％の減少を意味する。表２Ｂは、変化倍数に関するさらなる情報を提供する。

当業者に明らかであるように、試験されるバイオマーカーの反復測定を行う場合、参照値と比較される測定された値は、上記反復測定値を考慮に入れた値である。反復測定値は、測定された値の平均または中央値のいずれかを「測定された値」として使用することによって考慮に入れることができる。

（ＡＤバイオマーカー調節活性のための有望な薬剤のスクリーニング）
本発明は、ＡＤバイオマーカー調節活性のための有望な候補薬剤をアッセイすることによってＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する候補薬剤をスクリーニングする方法も提供する。上記スクリーニングアッセイは、インビトロおよび／またはインビボで行われる。本明細書に記載されるスクリーニング法によって同定される候補薬剤は、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する治療剤として有用であると考えられる。

本発明のスクリーニング法は、本明細書中に記載されるＡＤバイオマーカーと、「薬物標的」としてのＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドを使用する。有望な薬剤は、アッセイ系における薬物標的を調節する活性を試験する。当業者によって理解されるように、活性の調節に関する試験の様式は、使用するＡＤバイオマーカーおよび薬物標的の形態（例えば、タンパク質または遺伝子）に依存する。広範な種々の適切なアッセイが、当該分野で公知である。

ＡＤバイオマーカータンパク質そのものが薬物標的である場合、上記タンパク質自体のレベルまたは活性を調節する活性について、上記有望な薬剤を試験する。ＡＤバイオマーカーのレベルの調節は、例えば、そのバイオマーカータンパク質の半減期の増加または減少によって達成できる。ＡＤバイオマーカーの活性の調節は、上記ＡＤバイオマーカーの、その同種のレセプターまたはリガンドへの結合可能性を増加または減少させることによって達成できる。

ＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドが薬物標的である場合、上記ＡＤバイオマーカーの合成を調節する活性について上記有望な薬剤を試験する。有望な作用物質の調節活性を試験する正確な様式は、当然に、試験のために選ばれたＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドの形態に依存する。例えば、薬物標的がＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドである場合、調節活性は、代表的に、遺伝子から転写されるｍＲＮＡの測定（転写調節）またはこのような転写の結果として生成するタンパク質の測定（翻訳調節）のいずれかによって試験される。当業者によって理解されるように、多くのアッセイフォーマットは、（例えば、酵素のような発現マーカーまたはオリゴ−ヒスチジンのような発現タグまたはｍｙｃのようなまた別のタンパク質に由来する配列をコードする）異種配列がＡＤバイオマーカータンパク質をコードする配列に融合される（または取って代わることさえある）ＡＤバイオマーカーの前記改変形態が使用される。このような異種配列は、上記薬物標的から転写されるタンパク質レベルの都合のよい検出を可能にする。

本発明のスクリーニング法に使用する有望な薬剤は、有機分子および無機分子の両方（およびそれらの複合体）を含むあらゆる種類の化合物および／または複合体でよい。当該分野において理解されるように、ＡＤバイオマーカー調節活性のスクリーニングが最も一般的に行われるのは有機分子である。いくつかの状況において、標的ＡＤバイオマーカータンパク質は、試験のために有望な薬剤からは除外される。

スクリーニングアッセイは、当該分野で公知の任意のフォーマットであり得、そのフォーマットとしては、無細胞インビボアッセイ、細胞培養アッセイ、器官培養アッセイ、およびインビボアッセイ（すなわちＡＤおよびＭＣＩの動物モデルを使用するアッセイ）が挙げられる。したがって、本発明は、有望な薬剤をスクリーニングし、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補薬剤を同定する種々の実施形態を提供する。

いくつかの実施形態において、無細胞アッセイで有望な薬剤をスクリーニングし、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補薬剤を同定する。有望な各薬剤を無細胞環境において上記薬物標的と共にインキュベートし、ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。本発明の方法のスクリーニングに有用な無細胞環境は、細胞溶解物（薬物標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合に、特に有用である）および生物学的流体（例えば、全血、またはそれから誘導される血漿および血清などの分画された流体（ＡＤバイオマーカータンパク質が薬物標的である場合に、特に有用である）を含む。薬物標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、測定された調節は、転写または翻訳の調節であり得る。薬物標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、上記調節は上記タンパク質の半減期または上記ＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種のレセプターまたはリガンドに対する結合可能性の調節であり得る。

他の実施形態において、有望な薬剤をスクリーニングして、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する候補薬剤を、細胞ベースのアッセイによって同定する。有望な各薬剤を培養細胞と共にインキュベートし、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。特定の実施形態において、培養する細胞は星状膠細胞、神経細胞（海馬ニューロンなど）、線維芽細胞、またはグリア細胞である。薬物標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、転写または翻訳の調節が測定され得る。薬物標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、そのＡＤバイオマーカータンパク質も上記アッセイ混合物に添加され、そのタンパク質の半減期の調節または上記ＡＤバイオマーカータンパク質のその同種レセプターまたはリガンドへの結合可能性の調節が、測定される。

さらなる実施形態は、有望な薬剤をスクリーニングしてＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補薬剤を、器官培養ベースのアッセイで同定することに関する。このフォーマットにおいて、有望な各薬剤を非ヒト動物に由来する器官全体または器官の一部（例えば、脳切片などの脳組織の一部）のいずれかと共にインキュベートし、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。薬物標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、転写または翻訳の調節が測定される。薬物標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、そのＡＤバイオマーカータンパク質も上記アッセイ混合物に加えられ、上記タンパク質の半減期の調節またはＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種レセプターへの結合可能性の調節が、測定される。

さらなる実施形態は有望な薬剤をスクリーニングして、インビボアッセイに用いるＡＤおよび／またはＭＣＩの処置のための候補薬剤を同定することに関係する。このフォーマットにおいて、有望な各薬剤を非ヒト動物に投与し、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。特定の薬物標的ならびに取り組むべきＡＤおよび／またはＭＣＩの局面に依存して、このようなアッセイに使用する動物は「正常」動物（例えばＣ５７マウス）またはＡＤまたは、ＭＣＩのモデルである動物のどちらでもよい。ＡＤの多数の動物モデルが、当該分野で公知であり、その動物モデルとしては、３ｘＴｇ−ＡＤマウス（Ｃａｃｃａｍｏら，２００３，Ｎｅｕｒｏｎ３９（３）：４０９−２１）、ヒトアミロイドβ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）およびプレセニリン遺伝子を発現するマウス（Ｗｅｓｔａｗａｙら，１９９７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３（１）：６７−７２）およびその他のもの（Ｈｉｇｇｉｎｓら，２００３、Ｂｅｈａｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４（５−６）：４１９−３８を参照）が挙げられる。薬物標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、転写または翻訳の調節が測定される。薬物標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、上記標的ＡＤバイオマーカーの半減期の調節またはＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種レセプターまたはリガンドへの結合可能性の調節が、測定される。標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する正確な様式は、当然に、上記ＡＤバイオマーカーの同一性、アッセイフォーマット、および実施者による選択に依存する。転写、翻訳、タンパク質半減期、タンパク質の利用性および、測定できるその他の局面の調節を測定するための広範な種々の方法が、当該分野で公知である。これらの方法の一般的知識を考慮すると、それらは、本明細書中でさらに記載される必要はない。

（キット）
本発明は、本明細書に記載される任意の方法を実施するためのキットを提供する。本発明のキットはＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも１種の試薬を備え得、さらに本明細書に記載の方法を実施するための説明書を備え得る。キットはＡＤバイオマーカーの参照サンプル（すなわち、参照値として有用である）も含むことができる。キットは、任意のバイオマーカーおよび／または本明細書中に記載されるようなバイオマーカーのセットを備える。本明細書に記載されるキットに使用するための「ＡＤ診断マーカー」としては、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒが挙げられるが、これらに限定されない。他の例において、本明細書中に記載されるキットに使用するための「ＡＤ診断バイオマーカー」としては、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＧＦ−β）が挙げられるが、これらに限定されない。他の例において、キットはＡＤ診断マーカー；レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＦＧ−ＢＢおよびＢＤＮＦの任意の１、２、３または４種類を備える。他の例において、本明細書中に記載されるキットに使用するための「ＡＤ診断バイオマーカー」としては、年齢をマッチングさせている正常コントロールに加えて例えばＰＤおよびＰＮなどの神経変性の他の非ＡＤ形態と比較される（すなわち、全てのコントロールと比較される）場合にＡＤにおいて有意に増加（９Ａ１〜９Ａ２）または減少（９Ｂ）する、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂにおいて列挙されるバイオマーカーからなる群より選択される少なくとも１種のバイオマーカーが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂに列挙されるバイオマーカーのうちの任意の１種以上（すなわち、そのバイオマーカーに特異的な試薬である）は、本明細書中に開示されるような方法（例えば、ＡＤを診断するため、または例えばＰＤおよびＰＮなどの他の非ＡＤ神経変性疾患または非ＡＤ神経変性障害と区別してＡＤを診断するための方法を含む）に使用するためのキットにおいて使用され得る。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂは、健康な年齢をマッチングさせているコントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に増加（１０Ａ１〜１０Ａ２）または減少（１０Ｂ）するバイオマーカーのリストを提供する。表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂに列挙されるバイオマーカーのうちの任意の１種以上（すなわち、そのバイオマーカーに特異的な試薬である）は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法に使用するためのキットにおいて使用され得る。いくつかの例において、０．０５以下のｐ値（または５．００以下のｑ値（％））を有するバイオマーカーは、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するための本明細書中に開示される方法において使用するために選択される。表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂは、年齢をマッチングさせている変性コントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に増加（１１Ａ１〜１１Ａ２）または減少（１１Ｂ）するバイオマーカーのリストを提供する。表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂに列挙されるバイオマーカーのうちの任意の１種以上（すなわち、そのバイオマーカーに特異的な試薬である）は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示される方法に使用するためのキットにおいて使用され得る。

表１２Ａ〜１２Ｂは、年齢をマッチングさせているコントロールを参照して、ＡＤに加えて他のＡＤ神経変性コントロールにおいて有意に増加（１２Ａ）または減少（１２Ｂ）するバイオマーカーのリストを提供する。表１２Ａ〜１２Ｂに列挙されるバイオマーカーのうちの任意の１種以上（すなわち、そのバイオマーカーに特異的な試薬である）は、例えば、神経変性疾患（ＡＤを含む）の診断において補助するため、または神経変性疾患を診断するためのような本明細書中に開示される方法に使用するためのキットにおいて使用され得る。さらなる例において、キットは、リンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１に特異的な試薬；ならびに／あるいはＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；および／またはＡＮＧ−２に特異的な試薬；ならびに／あるいはＩＦＮ−γおよび／またはＩＬ−８に特異的な試薬、ならびに／あるいはｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；および／またはＦＧＦ−６に特異的な試薬を備える。さらなる例において、キットは、実験から得たデータを正規化するのに使用するために、少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーを備える。いくつかの例において、キットは、データを正規化するのに使用するために、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−β３のうちの少なくとも１種を備え、そして他の例において、キットは、データを正規化するのに使用するために、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−β３の両方を備える。より一般的に、本発明のキットは、少なくとも２種の異なるＡＤバイオマーカー特異的親和性試薬を備え、各試薬は、異なるＡＤバイオマーカーに特異的である。いくつかの実施形態において、キットは、ＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも５種、少なくとも７種、少なくとも８種、少なくとも９種または少なくとも１０種の試薬を備える。いくつかの実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬は、親和性試薬である。

ＡＤバイオマーカーに特異的な単一の試薬を備えるキットは、一般に、容器（例えばバイアル、アンプルまたはその他の適切な保存容器）内に封入された試薬を備える；ただし基材（例えばアッセイ反応容器の内面など）に結合した試薬を備えるキットも考慮される。同様に、１種より多い試薬を備えるキットは容器内にそれらの試薬を（別々にまたは混合物として）備えることもでき、または基材に結合した試薬を備えることもできる。

いくつかの実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬は、検出を容易にするために検出可能マーカー（例えば、蛍光色素または検出可能酵素）で標識するか、または改変される（例えばアビジンまたはストレプトアビジンをベースとする検出システムで検出するためにビオチニル化される）。他の実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬は、直接は標識化されないか、または改変されない。

本発明のいくつかのキットは結合ＡＤバイオマーカー特異的試薬を検出するための薬剤も１種類以上含む。当業者に明らかであるように、検出剤の独自性は上記キットに含まれるＡＤバイオマーカー特異的試薬の型に依存する。検出剤としては、ＡＤバイオマーカー特異的試薬に特異的な抗体類（例えば二次抗体）、ヌクレオチドをベースとするＡＤバイオマーカー特異的試薬を増幅するためのプライマー（例えばアプタマー）、またはＡＤバイオマーカー特異的試薬に結合したヌクレオチド「タグ」の増幅のためのプライマー、ビオチン改変ＡＤバイオマーカー特異的試薬の検出のためのアビジン結合体またはストレプトアビジン結合体などが挙げられる。検出システムは、当該分野で周知であり、ここでさらに記載する必要はない。したがって、ＲＡＮＴＥＳに特異的な少なくとも１種類の試薬と；その方法を実施するための説明書とを含んでなる、軽度認識障害（ＭＣＩ）を有する個体を同定するためのキットが本明細書に提供される。いくつかの実施例において、上記キットは、レプチンに特異的な試薬をさらに備える。他の例において、レプチンに特異的な少なくとも１種類の試薬；およびその方法を実施するための説明書を含んでなる、ＡＤ患者のアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするためのキットが、本明細書中に提供される。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）に特異的な少なくとも１種類の試薬；ＢＢホモダイマー血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）に特異的な少なくとも１種類の試薬；およびその方法を実施するための説明書を含んでなる、アルツハイマー病（ＡＤ）患者を階層化するためのキットも、本明細書中に提供される。

ＡＤバイオマーカーの捕捉のための改変された基材またはその他のシステムも本発明のキットに含まれ得る；それらキットがサンドイッチ−フォーマットアッセイに使用するために設計される場合には特にこれが言える。捕捉系はＡＤバイオマーカーアッセイ系に有用な任意の捕捉系（例えば、ＡＤバイオマーカー特異的試薬でコーティングしたマルチウェルプレート、ＡＤバイオマーカー特異的試薬でコーティングしたビーズ）でよい。捕捉系は、当該分野で周知であり、本明細書中でさらに記載される必要はない。

特定の実施形態において、本明細書中に開示される方法に使用するためのキットは、アレイの形態で試薬を含む。上記アレイは、あらかじめ決められたパターン（例えば格子）で基材に結合した、ＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも２種の異なる試薬（各試薬は異なるＡＤバイオマーカーに特異的である）を含む。したがって、本発明は、非制限的にＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒを含む、「ＡＤ診断マーカー」からなるアレイを提供する。他の例において、「ＡＤ診断バイオマーカー」は、非制限的に、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）を含む。他の例において、アレイは、ＡＤ診断マーカーであるレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＦＧ−ＢＢおよびＢＤＮＦのうちの任意の１、２、３または４種を含む。種々のＡＤバイオマーカー特異的試薬（「捕捉試薬」）の位置を推定すれば、同じ反応における多数の種々のＡＤバイオマーカーのレベルの測定が可能になる。アレイの形態で試薬を含むキットは、一般に、サンドイッチフォーマットであり、したがってそのようなキットは検出試薬も備え得る。通常、上記キットは種々の検出試薬を備え、各検出試薬は異なるＡＤバイオマーカーに対して特異的である。このような実施形態における検出試薬は、通常、基材に結合する試薬と同じＡＤバイオマーカーに特異的な試薬であり（ただし上記検出試薬は、代表的に、ＡＤバイオマーカー標的の、基材結合試薬の結合部位とは異なる部分または部位に結合するのが普通である）、それは、一般に、親和性型検出試薬である。その他の任意のフォーマットのアッセイのための検出試薬の場合と同様に、上記検出試薬は検出可能部分に関して改変され、別個の検出可能部分が結合できるように改変されても、改変されていなくともよい。改変されていないか、または別個の検出可能部分が結合できるように改変された検出試薬を含むアレイ型キットはさらなる検出可能部分も含むことができる（例えば、検出試薬に結合する検出可能部分、例えば非改変検出試薬に結合する標識された抗体、またはビオチン改変検出試薬を検出するための検出可能部分で改変されたストレプトアビジン）。

本発明を実施するためのキットの使用に関する説明書は、一般的には、本発明の方法を実施するためのキットの内容物の使用法を説明する。説明書は、サンプルの必要事項（例えば形態、アッセイ前処理、およびサイズ）、ＡＤバイオマーカーの測定に必要な工程、および結果の解釈などの情報を含む。

本発明のキットにおいて提供される説明書は、一般には標識または包装内挿入物（例えば、キットに含まれるペーパーシート）に関する、書面による説明書であるが、機械で読み取り可能な説明資料（例えば、磁気または任意の保存ディスクで運ばれる説明資料）でもよい。特定の実施形態において、機械で読み取り可能な説明資料は、キットに含まれる試薬を使用して得られる測定された値を比較するための、プログラムされたデジタルコンピューターのためのソフトウェアを含む。

下記の実施例は本発明を説明するために提供されるが、決して本発明の範囲を限定するものではない。

（実施例１：ＡＤ診断バイオマーカー）
アルツハイマー病患者（平均年齢７４歳）から集めた３２例の血清中の１２０種のタンパク質に関するタンパク質発現レベルを、コントロール群（平均年齢７４歳）から集めた１９例の血清中のそれらと比較した。アルツハイマー病患者は、神経科医によって臨床的にＡＤと診断され、２６〜１４の範囲のＭｉｎｉＭｅｎｔａｌＳｔａｔｅＥｘａｍ（ＭＭＳＥ）を示した。

血漿サンプルを、ニトロセルロースフィルタ基材上でサンドイッチ−フォーマットＥＬＩＳＡを用いてアッセイした。血漿サンプルをリン酸緩衝液で１：１０に希釈し、捕捉基材（捕捉抗体をスポットしたニトロセルロース膜）と共にインキュベートした。サンプルを捕捉基材と共に２時間室温でインキュベートし、その後、捕獲基材からデカントした。基材を２ｍｌの洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ；０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で室温で２回洗い、その後ビオチニル化検出抗体と共に室温で２時間インキュベートした。捕捉抗体溶液を傾瀉し、基材を洗浄緩衝液で５分間で２回洗った。洗った基材を西洋ワサビペルオキシダーゼ／ストレプトアビジン結合体と共に４５分間インキュベートし、その結合体溶液を傾瀉し、膜を洗浄緩衝液で５分間２回洗った。基材を一片の濾紙上に移し、Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃｓ．から購入した高性能化学発光（ＥＣＬ）検出緩衝溶液中でインキュベートした。化学発光を、検出し、化学発光画像化カメラで定量した。シグナル強度を、基材上にブロットした標準タンパク質に対して標準化し、これを用いてバイオマーカーの相対的レベルを計算した。他の例において、シグナル強度を中央値に標準化し、これを用いてバイオマーカーの相対的レベルを計算した。任意の個体のバイオマーカーの測定されたレベルは、同じ個体由来の２種以上のバイオマーカーの測定されたレベルの平均値または中央値のレベルを比較することによって正規化され得る。

血漿中の相対的バイオマーカーレベルを、以下の４６の識別バイオマーカーをあらわすコントロール群とＡＤ群との間で比較した：ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒ。４６の識別マーカーを教師なしクラスター化（ｕｎｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）した結果（すなわち上記クラスター化アルゴリズムはどの例がＡＤで、どの例が正常であるかを知らない）、それらのサンプルは２つの群またはクラスター、コントロールサンプルのクラスターとＡＤサンプルのクラスター、にクラスター化された。感度は、ＡＤクラスターに正しく分類されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプルの総数として計算された。それは２９／３２または９０．６％である。特異性はコントロールクラスターに正しく分類されたコントロールサンプルの総数／コントロールの総数として計算され、それは（１４／１９＝７３．６％）であった。

バイオマーカーレベルをコントロール群とＡＤ群との間で比較し、その２つの群の間で示差的に調節される２０種のバイオマーカー（各バイオマーカーはＡＤではコントロールに比較して減少する）が明らかになった（表３に示される）。統計分析を行って、任意のバイオマーカーにおいて示差的レベルの測定結果が誤差である確率（「ｑ」値）を見いだした。バイオマーカーを示差的レベルおよび関連するｑ値（パーセント値として示される）と共に表３に示す（変化倍数はコントロール対ＡＤサンプルにおけるレベル間の変化倍数を示す）。感度は、ＡＤクラスターのＡＤサンプル数／ＡＤサンプル総数として計算した。それは２９／３２または９０．６％である。特異性は正しく予測された総ＡＤ数／総予測ＡＤ数として計算された（２９／３４＝８５％）。

（実施例２：ＡＤ診断マーカーデータからの決定木）
実施例１から得られるデータをさらに分析すると、ＡＤ診断バイオマーカーを用いるＡＤ診断のための２つの異なる決定木が形成された。

第一の決定木はｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、およびＴＩＭＰ−１レベルを使用する。上記決定木を作成する規則は、以下である：（１）ｓＩＬ−６Ｒ≦５．１８およびＩＬ−８≦０．９５７であれば、正常と示される；（２）ｓＩＬ−６Ｒ≦５．１８およびＩＬ−８＞０．９５７である場合、ＡＤが示される；（３）ｓＩＬ−６Ｒ＞５．１８およびＴＩＭＰ−１≦７．９７８である場合、ＡＤが示される；（４）ｓＩＬ−６Ｒ＞５．１８およびＴＩＭＰ−１＞７．９７８である場合、正常と示される。ここに表される値は相対的濃度である。

この決定木の精度をＣＡＲＴの１０回交差検定試験機能を利用して測定し、学習サンプルおよび試験サンプルの誤分類率を算出した。感度は、試験スコアから、ＡＤと正しく予測されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプル総数として計算された（２９／３２＝０．９０６）。特異性は、試験スコアから、ＡＤと正しく予測された総症例数／ＡＤと予測された総症例数として計算された（２９／３３＝０．８７８）。

第二の決定木は、ＢＤＮＦ、ＴＩＭＰ−１およびＭＩＰ−１δレベルを用いて作成された。決定木を作る規則は、以下である：（１）ＢＤＮＦ＞４．４７６である場合、正常と示される；（２）ＢＤＮＦ≦４．４７６で、ＴＩＭＰ−１≦８．９４２である場合、ＡＤが示される；（３）ＢＤＮＦ≦４．４７６、ＴＩＭＰ−１＞８．９４２、そしてＭＩＰ−１δ≦１．８９である場合、ＡＤが示される；（４）ＢＤＮＦ＞４．４７６、ＴＩＭＰ−１＞８．９４２、そして、ＭＩＰ−１δ＞１．８９である場合、正常と示される。この決定木の精度をＣＡＲＴの１０回交差検定試験機能を利用して測定し、学習サンプルおよび試験サンプルの誤分類率を計算した。感度は、試験スコアから、正しくＡＤと予想されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプルの総数（０．８７５）として計算された。特異性は、試験スコアから、正しく予想されたＡＤ症例の総数／ＡＤと予想された症例の総数（０．８２）として計算された。

（実施例３：ＭＣＩの診断）
ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンのレベルをコントロール被験体（平均年齢＝７４）からの１８サンプルおよび軽度認識障害（ＭＣＩ）と診断された患者からの６サンプルで測定した。ＭＣＩ患者は神経科医によって臨床的に診断され、５未満のＡＵＬＴ−Ａ７スコアおよび３０〜２８の範囲のＭｉｎｉＭｅｎｔａｌＳｔａｔｅＥｘａｍ（ＭＭＳＥ）スコアを示した。コントロール被験体は５以上のＡＵＬＴ−Ａ７スコアおよび３０〜２８の範囲のＭＭＳＥスコアを示した。

ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンレベルをＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ社からのＥＬＩＳＡキットを使用し、製造業者の説明書にしたがって測定した。生のＥＬＩＳＡ発現値を、全サンプルの中央値によって各値を除算することによって正規化した。データの分析は、以下を示した：（ａ）レプチンはＭＣＩ患者ではコントロール被験体に比較して減少しない（６ＭＣＩサンプルにおいてレプチンはコントロール被験体より実際１１％高かった）、および（ｂ）ＲＡＮＴＥＳの二峰性分布、この際ＭＣＩ患者は１．０４３と１．１８３との間のＲＡＮＴＥＳレベルを有した（コントロール被験体からのレベルは≦１．０４３または＞１．１８３であった）。しかしデータをより綿密に調べると、ＲＡＮＴＥＳ≦１．０４３を有するコントロール被験体が誤って正常と分類されていた（ＭＣＩと診断すべきであった）ことが判明した。

ＲＡＮＴＥＳ≦１．０４３を有するコントロール被験体をＭＣＩ患者として再分類することは、単純な規則を可能にする：ＲＡＮＴＥＳ≦１．１８３およびレプチン≧０．６７６である場合、ＭＣＩが示される。実施例２に記載のように計算した感度および特異性はそれぞれ８３．３％および８８．８８％であった。

（実施例４：ＡＤ患者のモニタリングおよび階層化）
アルツハイマー病と診断された３６名の患者（平均年齢７４）から集めた血清サンプルにおいて、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ社からのＥＬＩＳＡキットを用い、製造業者からの説明書にしたがって、ＲＡＮＴＥＳ、レプチン、ＰＤＮＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦのレベルを測定した。生のＥＬＩＳＡ発現値は、各値を全サンプルの中央値で除算することによって正規化された。これらのサンプルをＭＭＳＥスコアに基づいて次の３群に分類した：クラス１（軽度ＡＤ）、ＭＭＳＥ２７〜２２；クラス２（中程度ＡＤ）、ＭＭＳＥ２１〜１６；クラス３（重症ＡＤ）、ＭＭＳＥ１５〜１２。

ＥＬＩＳＡデータの分析において、ＢＤＮＦおよびＰＤＮＦ−ＢＢを使用する決定木を作成した。この決定木を作成する規則は、以下である：（１）ＢＤＮＦ≦０．６２６である場合、軽度ＡＤが示される；（２）ＢＤＮＦ＞０．６２６およびＰＤＮＦ−ＢＢ≦０．９１９である場合、中程度ＡＤが示される；（３）ＢＤＮＦ＞０．６２６およびＰＤＮＦ−ＢＢ＞０．９１９である場合、重症ＡＤが示される。表される値は中央値に対して正規化された相対的濃度である。レプチンの平均正規化レベルは：クラスＩ＝０．８８６；クラスＩＩ＝０．７５７；クラスＩＩＩ＝０．５８９であった。ＢＤＮＦの平均正規化レベルは：クラスＩ＝０．５９５；クラスＩＩ＝０．９５６；クラスＩＩＩ＝１．２３であった。「試験」データセットに適用した場合、上記決定木は試験サンプルの５８％、４７％および５７％を軽度、中程度、および重症カテゴリーに正しく階層化した。

（実施例５：４種類の識別マーカー）
ＥＬＩＳＡによって測定した４種類だけの識別マーカー、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳの血漿中の絶対濃度を用いてサンプルを分類した。ＥＬＩＳＡキットはＲ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社から購入し、測定値を、製造業者の推奨にしたがって得た。例えばＲＡＮＴＥＳでは以下のプロトコルにしたがった。
１．５０μＬの標準、サンプルまたはコントロールを適切なウェルに加える。
２．５０μＬ抗−ＲＡＮＴＥＳビオチン結合体を各ウェルに加える。
３．ウェルを３７℃で１時間インキュベートする。
４．吸引し、洗浄緩衝液でウェルを４回洗う。
５．１００μＬストレプトアビジン−ＨＲＰ結合体を各ウェルに加える。
６．室温で３０分間インキュベートする。
７．吸引し、洗浄緩衝液でウェルを４回洗う。
８．安定化クロモゲン１００μＬを各ウェルに加える。
９．暗所において室温で３０分間インキュベートする。
１０．停止溶液１００μＬを各ウェルに加える。
１１．４５０ｎｍの吸光度を読み取る。

上のプロトコルにしたがって、ｃｌｕｔｏ．ｃｃｇｂ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｗＣｌｕｔｏ／ｗＣｌｕｔｏ．ｃｇｉで一般に利用できる、ウェブ−ベースのクラスター化ソフトウェアｗＣＬＵＴＯを用い、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳの教師なしクラスター化を行った。ここで上記４種類のタンパク質のクラスター化によって、サンプルは２つの群またはクラスター、すなわちコントロールサンプルクラスターおよびＡＤサンプルクラスターにまとめられた。感度は、ＡＤサンプル中の正しく分類されたＡＤサンプル数／総ＡＤサンプル数として計算され、２１／２４または８７．５％である。特異性は、コントロールクラスター中の正しく分類されたコントロールサンプルの総数／コントロールの総数として計算され、２０／２４＝８３．３％である。

さらに、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、およびレプチンについて血漿中の絶対バイオマーカーレベル（ＥＬＩＳＡによって測定）をＭＭＳＥスコア（範囲１２〜３０）と関連づけた。ＡＤは１２〜２８の範囲のＭＭＳＥスコアで同定でき、コントロールサンプルは２５〜３０の範囲のＭＭＳＥスコアで同定された。表４は相関性およびそれらの統計的有意性（ｐ値）を示す。より高い相関性およびより低い相関は、ＭＭＳＥスコア範囲の上端とバイオマーカー濃度がより相関しているか、またはＭＭＳＥスコア範囲の下端とバイオマーカー濃度がより相関しているかを示す。したがってこれらの相関は、ＢＤＮＦおよびレプチンのより高いレベルがより良いＭＭＳＥスコアと有意に相関すること、およびＢＤＮＦおよびレプチン濃度の基準点、またはより早い採取時点からの増加は、ＭＭＳＥによって測定した際の認識改善の兆候であることを示す。同時に、またはそれ自体、男性のＰＤＧＦ−ＢＢのより低いレベルはより良いＭＭＳＥスコアと有意に相関し、男性のサンプルのＰＤＧＦ−ＢＢの濃度が同じ男性のより早い採取時点のそれと比較した際の減少は、ＭＭＳＥによって測定した認識の改善の兆候である。

これらの結果（表４）は、ＡＤに関する３種類の識別タンパク質の血中濃度と被験体のＭＭＳＥスコアとの間の相関性、およびＡＤに関して識別タンパク質の濃度間の相関性を示す。ＡＤ被験体の間でＭＭＳＥスコアと年齢との相関も、ＡＤ被験体の間で年齢と血漿中のＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢまたはレプチン濃度との相関もなかった。ｐ値は相関性が統計的に有意であることを示す。カウントは症例数を示す。ＢＤＮＦはＭＭＳＥスコアと統計的に有意な正の相関を有する。ＰＤＧＦ−ＢＢは男性においてＭＭＳＥスコアと統計的に有意な負の相関を有する。レプチンはＭＭＳＥスコアと統計的に有意な正の相関を有する。この実験は、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチン、およびＢＤＮＦの血中濃度を使用して認識低下の進行をモニターできることを実証する。

コントロールとＡＤ症例とは、年齢がマッチングしており、平均年齢７４歳であった。ＡＤ症例（ｎ＝２４）の平均ＭＭＳＥスコアは２０であり、コントロール症例（ｎ＝２４）の平均ＭＭＳＥスコアは３０であった。サンプルの分類はタンパク質濃度の教師なしクラスター化で行われた。分類の全体的精度は８５．４％であった。この結果は、ＥＬＩＳＡによって測定されるＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳの血中タンパク質濃度を使用してＡＤとコントロールとの間を正確に区別できることを証明した。

（実施例６：ＡＤおよびコントロールの平均タンパク質濃度のＥＬＩＳＡ法による確認）
ＡＤ（ｎ＝９５）対年齢的にマッチしたコントロール（ｎ＝８８）の血漿サンプルにおけるタンパク質、レプチン、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳのタンパク質濃度を図１Ａ〜１Ｃに示す。本発明者らが測定した４種類のタンパク質のうちの１つは脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）であった。ＡＤ血漿におけるＢＤＮＦの平均濃度は８．１ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±０．４）であり、これに対してコントロール血漿の平均は１０．８ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±０．６８）であった。その差は統計的に極めて有意であることが判明した（ｐ値＝０．０００６）。ＡＤに比べてその他の形の痴呆ではＢＤＮＦの濃度がより低い（５．７４ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２０）ことを本発明者らは見いだした。ＡＤ血漿中の第二のタンパク質であるレプチンの平均濃度は１０．９ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±１．０６）であり、これに対してコントロール血漿の平均値は１７．４ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±１．８）であることが判明した。その差は統計的に非常に有意であることが判明した（ｐ値＝０．００１８）。ＡＤ血漿中の第三のタンパク質であるＲＡＮＴＥＳの平均濃度は６６．３ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±２．４）であり、これに対してコントロールサンプルでは７４．５ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±３．２）であることが判明した。この差は統計的に非常に有意であることが判明した（ｐ値＝０．０４０３）。ＭＭＳＥスコア≧２０を有するＡＤ患者（ｎ＝５４）とＭＭＳＥスコア＜２０（ｎ＝４１）のＡＤ患者との間ではＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、およびＢＤＮＦの濃度の平均値の差は認められなかった。

（実施例７：血漿中のバイオマーカーの絶対濃度）
さらに、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度をＢＤＮＦについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）、ＭＭＳＥ２５〜２８、ＭＭＳＥ２０〜２５、およびＭＭＳＥ１０〜２０と比較した。この実験の目的のために下記の実施例において使用した指数は：疑わしいＡＤ＝２５〜２８の範囲のＭＭＳＥスコア；軽度ＡＤ＝２０〜２５の範囲のＭＭＳＥスコア；中程度ＡＤ＝１０〜２０の範囲のＭＭＳＥスコアおよび重症ＡＤ＝１０〜２０の範囲のＭＭＳＥスコアである。実施例７の目的から、疑わしいＡＤを有すると評価された全ての患者は、医師によってＡＤに罹っていると診断された。図２は、ＭＭＳＥ２５〜２８；ＭＭＳＥ２０〜２５；ＭＭＳＥ１０〜２０を示す血漿中のＢＤＮＦの平均濃度は、コントロール（正常、平均年齢７４）の平均濃度より有意に低く、ＭＣＩのＢＤＮＦ濃度はコントロールおよび全てのＡＤ症例より有意に高いことを示す。図２。

さらに、異なる４カ所のアルツハイマー施設から集めた血漿サンプルのＢＤＮＦの絶対濃度をＡＤ（女性）およびコントロール（女性）とＡＤ（男性）およびコントロール（男性）との間の性別差に関して比較した。図３は、ＡＤ女性のＢＤＮＦ濃度をコントロール女性と比較すると４０％の差があり、その差は統計的に高度に有意である（ｐ値＝０．００４）ことを示している。全ＡＤ症例のＢＤＮＦの平均濃度と、全コントロール症例のそれとの差は統計的に極めて有意であることが判明した（ｐ値＝０．０００６）。

分割変数の値がないので、全体の結果は個々のセルの結果と一致しないかも知れない。

さらに、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を異なる４カ所のアルツハイマー施設から集めた血漿サンプル中のＲＡＮＴＥＳについて測定し、コントロールの平均濃度を、ＭＣＩ（軽度認識障害）、ＭＭＳＥ２５〜２８；（ＭＭＳＥ２０〜２５；ＭＭＳＥ１０〜２０；およびＭＭＳＥ１０〜２０の平均濃度と比較した。指数は上に記載されている。軽度ＡＤと中程度ＡＤとの差、軽度ＡＤと正常との差、軽度ＡＤと重症ＡＤとの差、中程度ＡＤと正常との差、疑わしいＡＤと正常との差、正常と重症ＡＤとの差は全て統計的に有意であることが判明した。図４。

さらに、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、異なる４カ所のアルツハイマー施設から集めた血漿サンプル中のレプチンについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）；ＭＭＳＥ２５〜２８；ＭＭＳＥ２０〜２５；ＭＭＳＥ１０〜２０；およびＭＭＳＥ１０〜２０と比較した。疑わしいＡＤとＭＣＩとの間、軽度ＡＤと正常との間、軽度ＡＤと疑わしいＡＤとの間、疑わしいＡＤと正常との間、中程度ＡＤと正常との間の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図５。

その他に血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、異なる４カ所のアルツハイマー施設から集めた血漿サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）；ＭＭＳＥ２５〜２８；ＭＭＳＥ２０〜２５；ＭＭＳＥ１０〜２０；およびＭＭＳＥ１０〜２０の平均濃度と比較した。軽度ＡＤと疑わしいＡＤとの比較、重症ＡＤと軽度ＡＤとの比較、重症ＡＤと中程度ＡＤとの比較、疑わしいＡＤと正常との比較、および重症ＡＤと正常との比較の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図６。

さらに、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、４カ所の異なるアルツハイマー施設から集めた血漿サンプル中のＢＤＮＦについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）、疑わしいＡＤ（ＭＭＳＥ２５〜２８）と比較した。ＭＣＩと軽度ＡＤ、ＭＣＩと疑わしいＡＤ、軽度ＡＤと正常、軽度ＡＤと重症ＡＤ、中程度と正常、正常と疑わしいＡＤおよび正常と重症の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図７。

疑わしいＡＤ（２５〜２８の範囲のＭＭＳＥスコア）では、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは上昇し、その一方でＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳは有意には変化しないことが判明した。軽度ＡＤ（２０〜２５の範囲のＭＭＳＥスコア）から中程度ＡＤ（１０〜２０の範囲のＭＭＳＥスコア）では、レプチンレベルは減少せず、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは減少することが判明した。

（実施例８）
ＡＤの末梢免疫系において変化するタンパク質を同定する目的で、ＡＤ患者３２名および年齢的にマッチしている痴呆でないコントロール１９名から得た血漿について１２０種のサイトカイン、ケモカイン、および増殖因子の発現レベルをフィルター上の斑点抗体マイクロアレイを用いて測定した。統計分析により、ＡＤとコントロールとの間で有意に異なる２０種のタンパク質が同定された。これらのうち、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＮＴ−３、およびＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦ、ＦＧＦ−６、ｂＦＧＦ、ＴＧＦ−ｂ３を含む６種類は既知の神経栄養活性を有し、ＡＤ血漿中では有意に減少していた。ＢＤＮＦレベルは、ｍｉｎｉｍｅｎｔａｌｓｔａｔｅｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）によるより良い認識機能と相関を示した。２００のＡＤ症例およびコントロールからの血漿について、市販のサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて得られたＢＤＮＦ測定された値は、ＡＤ症例において２５％という高度に有意な減少を示した。アレイデータと一致して、減少した血中ＢＤＮＦレベルは記憶機能障害と関連していた。ＢＤＮＦは神経細胞の維持、生存および機能のために重要である。理論によって裏付けられているわけではないが、ＡＤではニューロトロフィンおよびＢＤＮＦの血中レベルの減少が神経変性および認識機能異常と関連しているらしい。

（実施例９：その他のバイオマーカー）
さらに、ＧＤＮＦ、ＳＤＦ−１、ＩＧＦＢＰ３、ＦＧＦ−６、ＴＧＦ−ｂ３、ＢＭＰ−４、ＮＴ−３、ＥＧＦ、ＢＤＮＦ、ＩＧＦＢＰ−２の定性的バイオマーカーレベルはＡＤサンプル（ＭＭＳＥの範囲１２〜２８）およびコントロールサンプル（ＭＭＳＥの範囲２５〜３０）ではＭＭＳＥスコア（ＭＭＳＥの範囲１２〜３０）と関連していた。表５は相関性およびそれらの統計的有意性（ｐ値）を示す。より高い相関およびより低い相関は、ＭＭＳＥスコアの範囲の上端とバイオマーカー濃度、またはＭＭＳＥスコアの範囲の下端とバイオマーカー濃度、のどちらがより大きく相関しているかを示す。負の相関はバイオマーカーレベルが減少するにつれてＭＭＳＥスコアは高まることを意味し、その逆も同様である。正の相関は、バイオマーカーレベルの増加につれてＭＭＳＥスコアが増加することを意味する。

（実施例１０）
この実施例は、表６、すなわちＡＤを同定および階層化する定量的マーカーの一覧を示す。

したがって、本発明は、個体から得られる生物学的流体サンプル中の少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルを各ＡＤ診断バイオマーカーの参照レベルと比較することを含んでなる、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法を提供し、その際前記バイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。したがって、ＢＤＮＦの参照レベルに比較して少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、または約３０％減少したＢＤＮＦは、例えばＡＤの兆候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。よってレプチン参照レベルに比較して少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％または約３０％減少したレプチンは、例えばＡＤの兆候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。よってＲＡＮＴＥＳ参照レベルに比較して少なくとも約５％、約１０％、または約１５％減少したＲＡＮＴＥＳは例えばＡＤの兆候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。したがって、ＰＤＧＦ−ＢＢ参照レベルに比較して少なくとも約８０％、約８５％または約９０％減少したＰＤＧＦ−ＢＢは例えば重症ＡＤの兆候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。

（実施例１１）
この実施例は、ＡＤバイオマーカーのレベルを測定し、そして／またはＡＤバイオマーカーのレベルの測定に関してデータを分析し、そして／またはＡＤバイオマーカーのレベルの測定に基づいてデータを関連付け、そして／または異なる試験施設にわたる被験体由来の生物学的サンプルから得たＡＤバイオマーカーのレベルの測定に基づいてデータを分析および／もしくは関連付けることによってＡＤバイオマーカーを同定するために有用な方法を記載する。これらの方法はまた、個体および／または単一の回収施設から得た生物学的サンプルに適用可能である。その方法は、回収手順および／または保存条件および取り扱い条件から生じる試験施設変動を最小化するか、またはそれらを減少させるように設計される。この実施例は、実施例１２と一緒に、ＡＤの検出に有用であるさらなるバイオマーカーを同定するための方法を提供し、その方法は、高い程度の感度（その実験に使用したＡＤサンプルの総数によって除算したＡＤクラスターにおけるＡＤサンプルの数として計算される）および特異性（ＡＤを診断するための実験において使用したコントロールの総数によって除算したコントロールクラスターにおけるコントロールの数として計算される）を提供するマーカー、ならびにこのようなバイオマーカーを同定することを含む。

回収手順ならびに保存条件および取り扱い条件は、ＡＤ被験体およびコントロール被験体の生物学的サンプル（例えば、血漿）において測定されるバイオマーカーの濃度における変動を誘導し得る。これは、次に、適切な正規化および／または標準化ならびに／あるいは制御を伴わない被験体の誤分類を引き起こし得る。例えば、タンパク質濃度は、部分的に、特定の血漿サンプルが血小板に富んでいるかまたは血小板に乏しいかによって影響され得る。一般に、血小板に富んでいる血漿サンプルは、より大きい定量的レベルの多くのバイオマーカーを有するが、血小板に乏しいサンプルは、減少した定量的レベルの多くのバイオマーカーを有する（適切なコントロール（例えば、集団コントロール）と比較した場合）。例えば、血小板内に堅く保持されるＢＤＮＦの濃度を、血小板脱顆粒による血小板からのＢＤＮＦの放出の代理として測定した。慎重に調製した血小板に乏しい血漿は１０ｐｇ／ｍｌに等しいＢＤＮＦの濃度を有するのに対して、血小板に富んでいる血漿調製物は２０ｎｇ／ｍｌと同程度に高い濃度を有し得ることが、観察された。ＥＬＩＳＡによって測定したＢＤＮＦと斑点フィルター抗体アレイによって測定したＢＤＮＦとの相関は、ｐ＜０．０００１でｒ＝０．６７９を有する。上記実験設計において使用したサンプルを、ＢＤＮＦの血小板に乏しい調製物を含まないような様式で調製した。なぜならば、これらは、慣行におきて代表的な血漿回収ではないからである。

いくつかの例において、血清よりもむしろ、血漿が、生物学的サンプルとして本明細書中で開示される方法のために使用される。血漿を、実施例１の方法、および実施例１１〜１４の方法において使用した。これは、部分的に、血清を作製するために使用される血液凝固プロセスに関与する変数に起因する。これらの変数は、血清に含まれるバイオマーカーの変化する程度のタンパク質分解をもたらし得る。また、血漿を使用する場合、目的のタンパク質を偶然に除去する機会は少ない。大量のフィブリノゲンまたはアルブミンが問題を与える場合、これらのタンパク質の血漿を枯渇させるために公に利用可能な枯渇キットは存在するが、これが行われる場合、関連するタンパク質も除去され得る。枯渇キットを使用する場合、適切なコントロールをその関連するタンパク質の除去をモニターするためにその方法において使用し得る。

プロテアーゼインヒビターによって予めロードされた無菌の血液回収チューブ、ならびに赤血球および血小板を除去するための自給式システムは、公に利用可能である。例えば、ｂｄ．ｃｏｍ／ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｖｅｎｏｕｓ／ｏｒｄｅｒｉｎｇｉｎｆｏｔｕｂｅｓ．ａｓｐ．におけるＢｅｃｋｔｏｎＤｉｃｋｅｎｓｏｎＣｏｍｐａｎｙ製品一覧を参照のこと。

下のプロトコルは、サンプル回収手順の１つの説明例である。

ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｅｎｓｏｎＢＤＰ１００チューブを、使用するまで、４℃に保存する。最大８．５ｍＬの血液を、約２．５〜３ｍＬの血漿を産生するために回収する。回収した直後、そのチューブを、プロテアーゼインヒビターおよび抗凝固剤（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌｅｎｔ）とその血液サンプルとを混合するために８〜１０回転倒する。そのチューブを、遠心分離前に濡れた氷においた。（遠心分離は、回収の３０分以内に行うべきである）。そのチューブを、２０００〜３０００ＲＣＦで４℃にて１５分間遠心分離する。（ｒｐｍをＲＣＦに変換するＢＤＰ１００パッケージ挿入物を参照のこと）。３０００ｇ、または１０，０００ＲＣＦを超えてはならない。

遠心分離の３０分以内に、上記血漿を、１ｍＬアリコートで予め標識したＦｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ４ｍＬ自立式クライオバイアル（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃０５６６９６６）に移し、そしてそのバイアルを、直ちにドライアイス上におく。アリコートを、使用するまで、−８０℃にて凍結させる。（凍結融解サイクルを避けるなければならない）。微小血小板（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｌｅｔ）を除去するために、その血漿を、異なる遠心チューブに移し、そしてそのチューブを、１２，０００ｇで４℃にて１５分間遠心分離する。

この実験の目的は、部分的に、方法を決定することであり、その方法は、ＡＤ被験体を高い程度の特異性および感度で同定しつつ免疫応答における個体バリエーションならびに回収条件および保存条件によってもたらされるバリエーションを最小化するデータを分析するのに使用するために、適切なコントロールの同定を含む。

上記実験において使用した方法は、表８に列挙したバイオマーカーである上記タンパク質に特異的な１２０種の抗体からなるフィルターベースの抗体アレイを用いた、実施例１に記載した方法と同じである。いくつかの先の実施形態において、表８に列挙したバイオマーカー（表８、表９Ａ１〜９Ａ２および９Ｂ、表１０Ａ１〜１０Ａ２および１０Ｂ、表１１Ａ１〜１１Ａ２および１１Ｂ、ならびに表１２Ａ〜１２Ｂにおける各バイオマーカー名の後の「＿１」の表示は、上記プログラムの機能であり、各バイオマーカー名の部分ではない）に特異的な１２０種種の抗体のフィルターベースの抗体アレイを使用したいくつかの先の実験において、シグナルが検出されなかった場合、これが偽陰性の結果（例えば、特定の試薬の使用による問題に起因する）であるかまたは真に陰性の結果であるかは、明確ではなかった。以下の実験において、その試薬の製造業者（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ）によってもたらされる改良に起因して、シグナルは上記抗体アレイを使用してスクリーニングした１２０種のタンパク質の全てに対して検出され得ることが、決定された。試薬におけるこの改良は、バイオマーカーが先の実験において検出可能であっても検出可能でなくてもよい本明細書中に開示するような方法（例えば、ＡＤの診断を補助するための方法および／またはＡＤを診断するための方法のような）における用途についてのさらなるバイオマーカー（実施例１２に示されるような）の同定をもたらした。

この実験において、表８に列挙した１２０種のバイオマーカーのレベルを、ＡＤを有する８人の被験体（後に剖検によってＡＤを有すると同定された）から１．５年の間隔で集められた１６個のサンプルを含む５つの異なるアルツハイマー病の施設において集められた生物学的サンプル（ｎ＝３４、平均年齢＝７４、平均ＭＭＳＥ＝２０）について測定し、コントロール（例えば、２つの施設から集められた年齢をマッチングさせているコントロール（ｎ＝１７）ならびにパーキンソン病と診断された４人の被験体および末梢神経障害と診断された１２人の被験体からなる他の非ＡＤ神経変性性の年齢をマッチングさせているコントロール（ｎ＝１６））と比較した。検出力の計算は、ＡＤを同定した１０人のサンプルの剖検が０．００１のＡｌｐｈａおよび０．９９９の検出力を有する必要があることを示す。

全１２０種のバイオマーカーについての実験データを、Ｂｉｏｄｉｓｃｏｖｅｒｙのライセンスを受けたソフトウェアを使用して抽出した。その抽出したデータを、次いで、ブロット上にスポットされた実験についてポジティブコントロールに対して正規化した。ポジティブコントロールの例は、ＩｇＧである。それぞれ個々のバイオマーカーについてのデータを、次いで、上記抗体アレイによって測定された全１２０種のタンパク質の濃度の中央値に対して正規化した。マイクロアレイの有意性分析（ＳＡＭ）を、各バイオマーカーの有意性を決定するために使用した。ブロット実験から抽出されたデータを正規化するためのこの方法は、個体の免疫応答状態に基づいて僅かにより高いかまたはより低いタンパク質のレベルを有し得るという事実に起因する変動性を、最小化するか、または減少させる。ＳＡＭを使用した有意性の決定後、０．１％以下のｐ値を有するバイオマーカー（５３種のマーカー）を、コントロールからＡＤを分類するクラスター分析のために使用した。（表１３Ａ（正に相関するバイオマーカー）および１３Ｂ（約０．１のｐ値％を有する列挙したマーカーと負に相関するバイオマーカー）を参照のこと）。５％以下のｐ値を有する全てのバイオマーカー（表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂ）を、全て、使用したコントロールに基づいてＡＤとしてサンプルを分類するクラスター分析において使用した。上に記載したような抽出し正規化したデータの分析の結果を、実施例１２および表１３Ａ〜１３Ｂ（クラスター化されておらず、そして年齢をマッチングさせている正常コントロールに加えて神経変性の他の非ＡＤ形態（例えば、ＰＤおよびＰＮ）と比較した場合（すなわち、全てのコントロールと比較した場合）、有意に増加（１３Ａ）したか、または減少（１３Ｂ）した、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順にある）に開示する。表１３Ａ〜１３Ｂに関して列は、左から右へ、バイオマーカー名、スコア（ｄ）、変化倍数およびｐ値（％）である。実施例１２に記載した通り、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂは、０．１％よりも大きく、かつ５％未満のｐ値を有するバイオマーカーについてのデータのさらなる分析を示す。

（実施例１２）
この実施例は、健康な年齢をマッチングさせているコントロールおよび／または非ＡＤである神経変性性の年齢をマッチングさせているコントロール（すなわち、非ＡＤ神経変性コントロール（パーキンソン病（ＰＤ）および末梢神経障害（ＰＮ））と比較して、ＡＤと診断された個体において増加する（１３Ａ）かまたは減少する（１３Ｂ）かのいずれかであるＡＤバイオマーカーを同定するための方法を記載する。ＡＤが神経変性疾患であり、そして適切なコントロール（ＡＤに特有でありそして／または同じ年齢群において、神経変性の他の非ＡＤ（例えば、ＰＤおよびＰＮ）と区別可能である）および健康な年齢をマッチングさせているコントロールに対して減少するかまたは増加するかのいずれかであるバイオマーカーの同定に関して、ＡＤに関連した神経変性のバイオマーカーパターンを同定することが有益であるので、この方法は、重要である。

先の実験（実施例１を参照のこと）は、以下のバイオマーカーのうちの任意の１種以上がＡＤの検出のために使用され得ることを決定した：ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−ｌｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−Ｉｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒ。実施例１１に記載した実験条件および分析に基づいて、ＡＤを検出するために有用なさらなるバイオマーカーを、同定した。表８からのバイオマーカーに関して測定された値を、調査し正規化した濃度によるサンプルの分類に基づく階層的クラスター化に供した。クラスター化分析に基づいて、上記タンパク質を、相関に基づく９クラスの類似性に分けた。５％よりも大きいｐ値（％）を有するバイオマーカーを、上記分析から排除した。上記分類の感度を、その実験に使用したＡＤサンプルの総数によって除算したＡＤクラスターにおけるＡＤサンプルの数として計算する（この場合において、３１／３４＝９１％）。特異性を、その実験において使用したコントロールの総数によって除算したコントロールクラスターにおけるコントロールの数として計算する（この場合において、３１／３３＝９４％）。

表１３Ａ〜１３Ｂは、実施例１１に記載したように、バイオマーカーのリストを提供する。表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂは、年齢をマッチングさせている正常コントロールに加えて神経変性の他の非ＡＤ形態（例えばＰＤおよびＰＮ）と比較される場合（すなわち、全てのコントロールと比較される場合）にＡＤにおいて有意に増加（９Ａ１〜９Ａ２）または減少（９Ｂ）するバイオマーカー（上に記載したような方法によってクラスター化した）のリストを、スコア値に基づく各クラスター内で最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順序で提供する。表９Ａ〜９Ｂに関してその列は、左から右へ、：バイオマーカー名；スコア（ｄ）；変化倍数；ｑ値（％）およびクラスター数である。マイクロアレイの有意性分析は、例えば、Ｔｕｓｈｅｒら、２００１、ＰＮＡＳ、第９８巻：５１１６において考察される。表９Ａ１〜Ａ２および表９Ｂに列挙されるバイオマーカーのうちの任意の１種以上は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法で用いられ得る。本明細書中で記載した通り、複数のＡＤ診断バイオマーカーは、クラスター多様性について選択することによって、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂに開示したＡＤ診断バイオマーカーから選択され得る。表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂ（正の相関および負の相関の両方）に示した９個のクラスターの各々由来の最も高いランクのバイオマーカーは：ＢＴＣ（クラスター０）；ＳＤＦ−１（クラスター１）；ＭＣＰ−２（クラスター２）；ＩＦＮ−γ（クラスター３）；ＩＧＦＢＰ−４（クラスター４）；ＩＧＦ−１ＳＲ（クラスター５）；ＩＬ−８（クラスター６）；ＧＭ−ＣＳＦ（クラスター７）；およびＡＮＧ−２（クラスター８）である。いくつかの例において、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用するためのバイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群から選択される少なくとも１種のマーカー、または表１３Ａ〜１３Ｂ由来の少なくとも１種のマーカーを含む。いくつかの例において、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用するためのさらなるバイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２のうちの１種以上と相関するバイオマーカー（すなわち、９０％（ｒ＝０．９〜ｒ＝０．９９）より大きい相関；および０．００１〜０．０５未満のＰ値を有するこのようなバイオマーカー）を含む。

いくつかの例において、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用するためのバイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される２種以上のマーカーを含む。いくつかの例において、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用するためのバイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２を含むマーカーを含む。他の例において、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂに示した１個以上のクラスター由来の上位２位、３位、４位、または５位のランクのバイオマーカーは、本明細書中に開示したような方法に使用するために選択される。

表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂは、健康な年齢をマッチングさせているコントロールと比較される場合にＡＤにおいて有意に増加（１０Ａ１〜１０Ａ２）または減少（１０Ｂ）するバイオマーカーのリスト（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順にある）を提供する。表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂ、表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂ、および表１２Ａ〜１２Ｂにおいて、その列は、左から右へ、バイオマーカー名、スコア（ｄ）；変化倍数；およびｑ値（％）である。表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂに基づいて、健康な年齢をマッチングさせているコントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に増加すると同定されたバイオマーカーとしては、（スコアに基づく下降順に）：ＢＴＣ；ＡＮＧ−２；ＭＩＦ；ＩＧＦＢＰ−６；ｓｐｇ１３０；ＣＴＡＣＫ；ＩＧＦＢＰ３；ＭＩＰ−１ａ；ＴＲＡＩＬＲ４；ＩＬ−１２ｐ４０；ＡＲ；ＮＴ−４；ＶＥＧＦ−Ｄ；ＯＳＭ；ＯＳＴ；ＩＬ−１１；ｓＴＮＦＲ１；Ｉ−ＴＡＣ；エオタキシン；ＴＥＣＫ；ＰＩＧＦ；ｂＮＧＦ；リンホタクチン；ＭＩＰ−３ｂ；ＨＣＣ−４；ＩＣＡＭ−３；ＤＴＫ；ＩＬ−１ＲＩ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＧＲＯ；ＧＩＴＲ−Ｌｉｇｈｔ；ＨＧＦ；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＩＬ−２Ｒａ；ＥＮＡ−７８；およびＦＧＦ−９が挙げられるが、これらに限定されない。表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂに基づいて、健康な年齢をマッチングさせているコントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に減少すると同定されたバイオマーカーとしては、（スコアに基づく下降順に）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；エオタキシン−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＧＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ；ＩＦＧ−Ｉ；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２が挙げられるが、これらに限定されない。表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂに列挙したバイオマーカーのうちの任意の１種以上は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用され得る。

表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂは、年齢をマッチングさせている変性コントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に増加（１１Ａ１〜１１Ａ２）または減少（１１Ｂ）するバイオマーカーのリスト（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順にある）を提供する。表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂに基づいて、年齢をマッチングさせている他の非ＡＤ神経変性コントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に増加すると同定されたバイオマーカーとしては、（スコアに基づく下降順に）：ＴＲＡＩＬＲ４；エオタキシン；ＩＬ−１２ｐ４０；ＢＴＣ−Ｉ；ＭＩＦ；ＯＳＴ；ＭＩＰ−１ａ；ｓＴＮＦＲ１；ＩＬ−１１；リンホタクチン；ＮＴ−４；ＶＥＦＧ−Ｄ；ＨＧＦ；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ−１；ＯＳＭ；ＩＬ−１Ｒ１；ＰＩＧＦ；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＣＣＬ−２８；ＩＬ−２Ｒａ；ＩＬ−１２ｐ７０；ＧＲＯ；ＩＧＦＢＰ−６；ＩＬ−１７；ＣＴＡＣＫ；Ｉ−ＴＡＣ；ＩＣＡＭ−３；ＡＮＧ−２；ＭＩＰ−３ｂ；ＦＧＦ−９；ＨＣＣ−４；ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ；ＧＩＴＲ；およびＤＴＫが挙げられるが、これらに限定されない。表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂに基づいて、年齢をマッチングさせている他の非ＡＤ神経変性コントロールと比較した場合にＡＤにおいて有意に減少すると同定されたバイオマーカーとしては、（スコアに基づく下降順に）：ＭＣＰ−２；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＣＰ−３；ＭＤＣ；ＭＣＰ−４；ＩＬ−１ｂ；ＩＬ−４；ＩＬ−１ａ；ＢＬＣ；ＣＫｂ８−１；ＩＬ−２；ＩＬ−１５；ＭＩＰ３ａ；ＭＩＧ；ＳＣＦ；ＩＬ−６；ＩＬ−１６；エオタキシン−３；Ｉ−３０９；ＴＧＦ−β；ＴＮＦ−α；ＧＤＮＦ；ＬＩＧＨＴ；ＳＤＦ−１；ＩＦＧ−１；フラクタルカイン；ＩＬ−５；Ｆｉｔ−３リガンド；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＧＣＰ−２が挙げられるが、これらに限定されない。表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂに列挙したバイオマーカーのうちの任意の１種以上は、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用され得る。

表１２Ａ〜１２Ｂは、年齢をマッチングさせているコントロールを参照して、ＡＤに加えて他のＡＤ神経変性コントロールにおいて有意に増加（１２Ａ）または減少（１２Ｂ）するバイオマーカーのリスト（クラスター化されておらず、そしてスコア値に基き、最も高いランクのバイオマーカーから最も低いランクのバイオマーカーの順にある）を提供する。表１２Ａ〜１２Ｂに列挙したバイオマーカーのうちの任意の１種以上は、例えば、神経変性疾患（ＡＤを含む）の診断において補助するため、または神経変性疾患を診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用され得る。他の例において、表１２Ａ〜１２Ｂに列挙した上位２位、３位、４位、または５位のランクのバイオマーカーは、本明細書中に開示したような方法に使用するために選択される。いくつかの例において、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法に使用するためのさらなるバイオマーカーとしては、表１２Ａ〜１２Ｂに列挙した上位２位、３位、４位、または５位のランクのバイオマーカーと相関するバイオマーカー（すなわち、９０％（ｒ＝０．９〜ｒ＝０．９９）より大きい相関；および０．００１〜０．０５未満のＰ値を有するこのようなバイオマーカー）が挙げられる。

当業者に理解されるように、実施例および表において本明細書中に開示したバイオマーカーは、望まれる測定の型に依存して、本明細書中に開示される方法に使用するために選択され得る。例えば、表７および／または表８に列挙したマーカーからなる群より選択されるマーカーのうちの任意の１種以上は、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために使用され得る。いくつかの例において、表７および／または表８由来のバイオマーカーは、以下の判定基準に基づいて、本明細書中に開示される方法に使用するために選択され得る：９０％（ｒ＝０．９〜ｒ＝０．９９）より大きい相関；０．００１〜０．０５未満のＰ値；２０％よりも大きい変化倍数；および１よりも大きいスコア（増加する（すなわち、正に相関する）マーカーについて）または１未満のスコア（減少する（すなわち、負に相関する）マーカーについて）。

他の例において、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；およびＥＧＦ−Ｒからなる群より選択される１種以上のマーカーが、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本明細書中に開示した方法において使用され得る。他の例において、表１２Ａ〜１２Ｂから選択される１種以上のバイオマーカーは、一般的な神経変性障害（ＡＤを含む）の検出において補助するため、そして／または一般的に神経変性障害を診断するために使用され得るが、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂから選択される１種以上のバイオマーカーは、ＡＤの診断において補助するためか、もしくはＡＤを診断するためそして／またはＡＤと他の非ＡＤ神経変性疾患とを区別するために使用され得る。他の例において、表１０Ａ１〜１０Ａ２および表１０Ｂまたは表１１Ａ１〜１１Ａ２および表１１Ｂ由来の１種以上のバイオマーカーは、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するために使用され得る。

上で同定されたバイオマーカーに加えて、さらなるバイオマーカーは、本明細書中に記載される方法および当該分野において公知である方法によって同定され得る。さらなるバイオマーカーの選択のためのパラメータは、以下の通りである：
９０％よりも大きい（ｒ＝０．９〜ｒ＝０．９９）相関；
０．００１〜０．０５未満のＰ値；
２０％よりも大きい変化倍数；および
１よりも大きいスコア（増加するマーカーについて）または１未満のスコア（減少するマーカーについて）。

（実施例１３）
この実施例は、有意であると２つの異なる実験（単一の回収施設および複数の回収施設）において同定された、ＡＤの診断において補助するためまたはＡＤを診断するためのバイオマーカーを提供する。

さらなるバイオマーカー、ｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−ｌδ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６を、実施例１１〜１２に記載したように正規化した単一の回収施設由来の実験（実施例１を参照のこと）および複数の試験施設実験（実施例１１〜１２）の両方において、有意であると同定した。これら１８種のバイオマーカーのうちの２種（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−８）をまた、それぞれ、クラスター３およびクラスター６由来の最も高いランクのバイオマーカーとして、表９Ａ１〜９Ａ２および表９Ｂに表す。したがって、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するための本発明の方法に使用するためのバイオマーカーは、ＩＦＮ−γおよび／またはＩＬ−８を含む。以下の２つのバイオマーカーがＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するための本発明の方法において正規化コントロールとして有用であることが、見出された：ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−β３。したがって、例えば、ＡＤの診断において補助するため、またはＡＤを診断するためのような本発明の方法において使用するためのバイオマーカーは、正規化コントロールとしてＴＧＦ−βおよび／またはＴＧＦ−β３を含む。

（実施例１４）
実施例１４は、下で表１４に示されるようなＡＤ被験体のＭＭＳＥスコア（８〜２８）と有意に相関することが見出されたバイオマーカーの同定を開示する。したがって、リンホタクチンおよびＩＬ−１１は、初期〜中程度のＡＤの検出ならびにその疾患の病気分類および進行のために有用である。リンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１は、単独か、または他のＡＤバイオマーカー（本明細書中に開示した方法において本明細書中に記載したＡＤバイオマーカーを含む）と一緒に使用され得る。したがって、ＡＤを階層化するための方法およびＡＤの進行をモニターするための方法が、本明細書中に提供され、これらの方法は、個体由来の生物学的流体サンプル（例えば、血漿）中のリンホタクチンおよび／またはＩＬ−１１の測定されたレベルをそのバイオマーカーの参照レベルと比較することを包含する。

理解を明確にする目的で本発明を説明および実施例によってある程度詳細に詳細が、当業者には明らかなように若干の変化および変更は可能である。したがって前記の記述および実施例は本発明の範囲を制限するものではない。

図１Ａ〜１Ｃは、本明細書の実施例中に示される表３のリストから選択された３種のタンパク質（図１ＡはＢＤＮＦ；図１Ｂはレプチン；および図１ＣはＲＡＮＴＥＳ）についてのＥＬＩＳＡの結果を示す。ＡＤを有しかつ平均の（ｍｅａｎ）ＭＭＳＥスコア２０を有し、平均年齢７４歳の個体由来の９５の血漿サンプルを、中間ＭＭＳＥスコア３０を有する８８歳のマッチングさせたコントロール由来の血漿サンプルと比較した。各タンパク質の平均濃度を比較するパラメトリックの対応のないｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄｔｔｅｓｔ）を、統計的有意性（ｐ値）を決定するために使用した。図２は、血漿中のＢＤＮＦの濃度についての棒グラフ（ＣｅｌｌＢａｒＣｈａｒｔ）を示す（棒グラフのグループ分け変数：病期、エラーバー：±１標準誤差、包含基準（Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉａ）：全ての施設で行う（ＳｐａｒｋｓｆｒｏｍＣｅｎｔｅｒＡｌｌ））図３は、男性および女性についてのコントロール対ＡＤにおけるＢＤＮＦを示す（棒グラフのグループ分け変数：疾患、性別で分離、エラーバー：±１標準偏差、行排除（Ｒｏｗｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）：施設全体（ＣｅｎｔｅｒＡｌｌ））。図４は、血漿中のＲＡＮＴＥＳ濃度を示す（棒グラフグループ分け変数：病期、エラーバー：±１標準偏差、行排除：施設全体）。図５は、血漿中のレプチン濃度を示す（棒グラフのグループ分け変数：病期、エラーバー：±１標準偏差、行排除：施設全体）。図６は、血漿中のＰＤＧＦ−ＢＢ濃度を示す（棒グラフのグループ分け変数：病期、エラーバー：±１標準偏差、行排除：施設全体）。図７は、血漿中のＢＤＮＦ濃度を示す（棒グラフのグループ分け変数：病期、エラーバー：±１標準偏差、行排除：施設全体）。

Claims

アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であって、該方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該バイオマーカーについての参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該ＡＤ診断バイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；Ｅｏｔａｘｉｎ−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；レプチン（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群より選択される、方法。
少なくとも２種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルと比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
少なくとも３種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
少なくとも４種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
少なくとも５種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
前記測定された値と、測定された各ＡＤ診断バイオマーカーの参照値とを比較する工程は、該測定された値と該参照値との間の倍数差を計算する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であって、該方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該ＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される、方法。
少なくとも２種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項７に記載の方法。
少なくとも３種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項７に記載の方法。
少なくとも４種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項７に記載の方法。
少なくとも５種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項７に記載の方法。
少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であって、該方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該ＡＤ診断バイオマーカーは、ＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される、方法。
少なくとも２種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１３に記載の方法。
少なくとも３種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１３に記載の方法。
少なくとも４種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１３に記載の方法。
少なくとも５種のＡＤ診断バイオマーカーの前記測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含する、請求項１３に記載の方法。
アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助するための方法であって、該方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該ＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される、方法。
前記生物学的流体サンプルは、末梢性の生物学的流体サンプルである、請求項７または１３に記載の方法。
アルツハイマー病（ＡＤ）患者においてＡＤの進行をモニターするための方法であって、該方法は、個体由来の生物学的流体サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該バイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該ＡＤ診断バイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される、方法。
前記参照レベルは、早期時点で、前記同じＡＤ患者由来の生物学的流体サンプルから得られたレベルである、請求項２０に記載の方法。
前記生物学的流体サンプルは、抹消性の生物学的流体サンプルである、請求項２０に記載の方法。
個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を層別化するための方法であって、該方法は、該個体由来の生物学的サンプル中の少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーの測定されたレベルと、該少なくとも１種のバイオマーカーの参照レベルとを比較する工程を包含し、ここで該少なくとも１種のバイオマーカーは、リンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される、方法。
前記生物学的流体サンプルは、抹消性の流体サンプルである、請求項２３に記載の方法。
ＡＤの診断を補助することにおいて使用するためのキットであって、該キットは、少なくとも１種のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬およびＡＤの診断を補助するための方法を実施するための説明書を含み、ここで該少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ＢＴＣ；ＳＤＦ−１；ＭＣＰ−２；ＩＦＮ−γ；ＩＧＦＢＰ−４；ＩＧＦ−１ＳＲ；ＩＬ−８；ＧＭ−ＣＳＦ；およびＡＮＧ−２からなる群より選択される、キット。
前記少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーＩＦＮ−γおよびＩＬ−８からなる群より選択される、請求項２５に記載のキット。
ＡＤの診断を補助することにおいて使用するためのキットであって、該キットは、少なくとも１種のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬およびＡＤの診断を補助するための方法を実施するための説明書を含み、ここで該少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、ｓＴＮＦＲＩＩ；ＭＳＰ−α；ｕＰＡＲ；ＴＰＯ；ＭＩＰ−１β；ＶＥＧＦ−β；ＦＡＳ；ＭＣＰ−１；ＮＡＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬＲ３；ＰＡＲＣ；ＡＮＧ；ＩＬ−３；ＭＩＰ−１δ；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−８；およびＦＧＦ−６からなる群より選択される、キット。
ＡＤの診断を補助することにおいて使用するためのキットであって、該キットは、少なくとも１種のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種の試薬およびＡＤの診断を補助するための方法を実施するための説明書を含み、ここで該少なくとも１種のＡＤ診断バイオマーカーは、バイオマーカーリンホタクチンおよびＩＬ−１１からなる群より選択される、キット。
前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬は、該ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントである、請求項２８に記載のキット。
データを正規化するための少なくとも１種のバイオマーカーをさらに含む、請求項２８に記載のキット。
前記データを正規化するためのバイオマーカーは、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−β３からなる群より選択される、請求項３０に記載のキット。
神経学的疾患を診断するために有用な少なくとも１種のバイオマーカーを同定するための方法であって、該方法は、
末梢性の生物学的流体サンプルのセットから、複数のバイオマーカーの測定された値を得る工程であって、ここで該末梢性の生物学的流体サンプルのセットは、神経学的疾患を基礎としたサブセットへと分割することができる、工程；
少なくとも１種のバイオマーカーの各サブセットからの測定された値を比較する工程；ならびに
該測定された値が該サブセット間で統計学的に異なる少なくとも１種のバイオマーカーを同定する工程、
を包含する、方法。
前記神経学的疾患はＡＤである、請求項３２に記載の方法。
神経変性疾患の診断を補助するための方法であって、該方法は、表１２Ａ〜１２Ｂに示される、１．５未満のｑ値％を有する１種以上のバイオマーカーの測定された値を得る工程、および該測定された値と参照値とを比較する工程を包含する、方法。