JP2008534435A

JP2008534435A - 膵臓ポリペプチドファミリーモチーフ、ポリペプチドおよびこれらを含む方法

Info

Publication number: JP2008534435A
Application number: JP2007545739A
Authority: JP
Inventors: オディルエスターレビー，; キャロラインエム．ジョドカ，; サウミトラエス．ゴーシュ，; デイビッドパークス，; リチャードエー．ピットナー，; ローレンスジェイ．デスーザ，; ジョンエス．アーン，; キャスリンエス．プリケット，; ジョナサンデイビッドロス，; ショーンエイチ．アダムス，
Original assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2004-12-13
Filing date: 2005-12-12
Publication date: 2008-08-28
Anticipated expiration: 2025-12-12
Also published as: CA2836267A1; IL183405A; EP2360180A2; PL1824876T3; CA2588594C; CA2836267C; NZ555533A; IL183405A0; EP2360180A3; EP3000826A1; SG158141A1; KR101272402B1; WO2006066024A2; WO2006066024A3; AU2005316524A1; WO2006066024A8; AU2005316524B2; KR20070091652A; MX2007006830A; BRPI0518559A2

Abstract

本発明は、新規の膵臓ポリペプチドファミリー（「ＰＰＦ」）ポリペプチドおよびその使用方法を提供する。本発明の１つの態様では、肥満の治療もしくは予防のための方法が提供され、その方法は治療的もしくは予防的に有効な量の本発明のＰＰＦポリペプチドの、それを必要とする対象への投与を含む。ある実施形態では、対象は肥満もしくは過体重の対象である。ある一般的な態様では、本発明の方法は、例えば、除脂肪体重ではなく体脂肪を減少など、体組成を変化させるためのＰＰＦポリペプチドの使用を含む。

Description

（関連出願）
本出願は、米国特許出願第１１／０５５，０９８号（２００５年２月１１日出願）；ＰＣＴ／ＵＳ０５／０４３５１；および米国仮特許出願第６０／６３５，８９７号（２００４年１２月１３日出願）に対する優先権を主張し、これらの出願の各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される。

（配列表）
本出願の配列表は、紙の原稿として提出されと同時に、コンパクトディスク上のファイル名「０４０６ＰＣＴ２ｓｅｑｌｉｓｔ．ｔｘｔ」のコンピュータで読み取り可能な形式（ＣＲＦ）でも提出される。

（背景）
数多くの関連するホルモンが膵臓ポリペプチドファミリー（「ＰＰＦ」）を構成している。膵臓ポリペプチド（「ＰＰ」）は、インスリン抽出物の混入物質として発見され、機能的な重要性ではなくそれが由来する臓器によって名付けられた（非特許文献１）。ＰＰは、独特の構造モチーフを含む３６アミノ酸のペプチド（配列番号１）である。次に、関連するペプチドがインスリン抽出物中に発見され、Ｎ末端およびＣ末端のチロシンからペプチドＹＹ（「ＰＹＹ」）（配列番号２）と命名された（非特許文献２）。さらに最近、関連する第３のペプチドが脳の抽出物中に見いだされ、ニューロペプチドＹ（「ＮＰＹ」）と命名された（配列番号４）（非特許文献３；非特許文献４）。

これら三つの関連するペプチドは、様々な生物学的作用を発揮することが報告されてきた。ＰＰの作用には膵臓分泌の阻害と胆嚢の弛緩が挙げられる。中枢に投与したＰＰは、視床下部と脳幹に局在する受容体を介している可能性がある、摂食行動の適度な上昇をもたらす（非特許文献５中で概説）。

ＰＹＹ（配列番号２）の放出は、食事後に起こる。ＰＹＹに代わる分子型がＰＹＹ（３−３６）（配列番号３）である（非特許文献６；非特許文献７）。この断片は、ヒトとイヌの腸抽出物におけるＰＹＹ様の総免疫活性の約４０％を、また飢餓状態において血漿ＰＹＹの総免疫活性の約３６％、食後にはやや上昇して５０％以上を構成する。これは明らかに、ＰＹＹのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ４）開裂の産物である。報告によればＰＹＹ（３−３６）は、Ｎ末端が切断されたＮＰＹアナログ（つまり、ＮＰＹアナログのＣ末端断片）の方を選択する点で薬理学的に独特と思われる、Ｙ２およびＹ５受容体の選択的なリガンドである。報告によれば、ＰＹＹの末梢投与は、胃酸分泌、胃運動性、膵外分泌の分泌（Ｙｏｓｈｉｎａｇａｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｇ６９５−７０１（１９９２）；Ｇｕａｎｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１２８：９１１−６（１９９１）；Ｐａｐｐａｓｅｔａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ９１：１３８６−９（１９８６））、胆嚢収縮、および腸運動（Ｓａｖａｇｅｅｔａｌ．，Ｇｕｔ２８：１６６−７０（１９８７））を減少させる。ＰＹＹの中枢への注入の、胃内容排出、胃運動性および胃酸分泌に対する作用は、後脳／脳幹内あるいはその周囲への直接注入後に見られるように（ＣｈｅｎａｎｄＲｏｇｅｒｓ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６９：Ｒ７８７−９２（１９９５）；Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．６１：９５−９８（１９９６）；ＹａｎｇａｎｄＴａｃｈｅ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６８：Ｇ９４３−８（１９９５）；Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．９：１０９−１６（１９９７））、末梢への注入後に観察される作用とは異なる可能性がある。例えば、中枢投与されたＰＹＹは、末梢に注入されたＰＹＹ（３−３６）について胃酸分泌が阻害ではなく促進されたとここで述べたものとは一部逆の作用を有する。腸運動はＴＲＨ刺激と連動した場合でのみ抑制されたが、単独で投与された場合には抑制されず、推定されるＰＰ受容体との相互作用を通じて高投与量では実際に促進性である。ＰＹＹは、中枢投与後の食事と水の摂取を促進することが示されている（Ｍｏｒｌｅｙｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲｅｓ．３４１：２００−３（１９８５）；Ｃｏｒｐｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５９：Ｒ３１７−２３（１９９０））。

同様に、最も早く報告されたＮＰＹ（配列番号４）の中枢への作用の一つ、特に視床下部における作用は食事摂取の増加である（Ｓｔａｎｌｅｙｅｔａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ６：１２０５−１１（１９８５））。ＰＹＹおよびＰＰはこれらの作用を模倣すると報告されており、ＰＹＹはより強力か、あるいはＮＰＹと同程度に強力である（Ｍｏｒｌｅｙｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲｅｓ．３４１：２００−３（１９８５）；Ｋａｎａｔａｎｉｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１４１：１０１１−６（２０００）；Ｎａｋａｊｉｍａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２６８：１０１０−４（１９９４））。ＮＰＹで誘導された摂食行動の規模は、過去に試験された他のどの薬剤で誘導された場合よりも高く、また非常に長く持続することをいくつかのグループが見いだした。ＮＰＹで誘導された摂食行動の刺激作用は数多くの種で再現された。３つの基本主要栄養素（脂質、タンパク質、炭水化物）のうち、炭水化物の摂取が選択的に刺激された。ＮＰＹの食欲増進作用に対して耐性は見られず、ペプチドの投与を１０日以上反復した場合、体重増加率の顕著な増加が観察された。絶食後、視床下部のＰＶＮにおけるＮＰＹの濃度は時間と共に上昇し、摂食後はコントロールレベルまで急速に戻った。

薬理学的研究とクローニングの取り組みは、数多くのＰＰファミリーペプチドの７回膜貫通型受容体を明らかにした。これらの受容体は、Ｙ１からＹ６（および、ＰＹＹ選択的受容体と推定されるＹ７）の名称が付けられた。これらの受容体の典型的なシグナル反応は、他のＧ_ｉ／Ｇ_０に連動した受容体と同様、つまりアデニル酸シクラーゼの阻害である。受容体間の配列相同性がかなり低くとも、Ｙ１、Ｙ４、およびＹ６受容体間のアミノ酸配列の類似度はクラスターを形成し、一方Ｙ２とＹ５は別のファミリーを定義づけた。様々なペプチドの可能性の順位によって、その他の結合部位が特定された。クローニングされていなかったＮＰＹ選択的受容体はＹ３と名称が与えられ、またＰＹＹ選択的受容体の存在の証拠がある（推定上のＹ７受容体）（非特許文献５；非特許文献８で概説）。

Ｙ５およびＹ１受容体は、摂食反応の主要な媒介物であると示唆された（Ｍａｒｓｈｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４：７１８−２１（１９９８）；Ｋａｎａｔａｎｉｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１４１：１０１１−６（２０００））。一般的な考えは、内因性のＮＰＹがこれらの受容体を介して摂食行動を亢進するというものだった。提案されている肥満に対する治療は、常にＮＰＹ受容体の拮抗作用に方向付けられ、一方、拒食症の治療にはリガンドファミリーの拮抗作用に方向付けられてきた（例として、米国特許第５，９３９，４６２号、第６，０１３，６２２号、および４，８９１，３５７を参照）。一般的に、ＰＹＹとＮＰＹの効力は等しく、調査された全てのＹ１、Ｙ５（およびＹ２）受容体アッセイにおいて同様に有効であると報告されている（非特許文献５）。

薬理学的には、Ｙ２受容体はニューロペプチドＹのＣ末端断片に対して親和性を示すことでＹ１と区別される。ニューロペプチドＹの３−３６断片とペプチドＹＹは親和性と選択性の上昇をもたらすものの、Ｙ２受容体はニューロペプチドＹ（１３−３６）の親和性で最もよく区別される（Ｄｕｍｏｎｔｅｔａｌ．，Ｓｏｃ．ｆｏｒＮｅｕｒｏｓｃｉ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１９：７２６（１９９３）を参照）。Ｙ１とＹ２の両方を通じたシグナル伝達は、アデニル酸シクラーゼの阻害と共役している。また、Ｙ２受容体への結合は、Ｎ型カルシウムチャネルの選択的阻害によってシナプスにおけるカルシウムの細胞内濃度を減少させることが見いだされた。さらに、Ｙ２受容体はＹ１受容体同様に、二次メッセンジャーに対して特異的な結合を示す（米国特許第６，３５５，４７８号を参照）。Ｙ２受容体は、海馬、外側部の黒質、視床、視床下部、および脳幹など、脳の様々な領域で見いだされている。ヒト、マウス、サル、およびラットのＹ２受容体がクローニングされた（例として、米国特許第６，４２０，５３２号および米国特許第６，３５５，４７８号を参照）。

推定上のＹ３受容体の主要な特徴はＮＰＹを認識することであり、一方、ＰＹＹは少なくとも一桁、能力が低い。Ｙ３受容体は、ＮＰＹに対して優先性を示す結合部位／受容体のみに相当する。

ＰＹＹに優先性を示してＰＹＹ優先受容体と名付けられ、本出願ではＹ７受容体として引用される更なる結合部位／受容体がある。この受容体への結合の様々な順位または受容体のクラスが報告されており、このクラスには一つ以上の受容体がある可能性を示唆している。大部分は、ＰＹＹはＮＰＹの３から５倍強力な受容体であると述べられている。ＮＰＹ、ＰＹＹおよびＰＰ受容体の命名についての国際薬理学連合の提言は、ＰＹＹとＮＰＹの間に少なくとも２０倍の効力の違いが観察されない限りはＰＹＹ優先受容体の語は使用しないというものである（非特許文献８）。しかし、開示の目的のため、Ｙ７受容体またはＰＹＹ優先受容体の薬理学への言及は、ＮＰＹに対して任意の程度のＰＹＹの優先性を有する受容体を意味する。

肥満とそれに関連する疾患は、米国および世界中において一般的で非常に深刻な公衆衛生上の課題である。米国人の約６４％が過体重か肥満である（概算で成人約９，７００万人）と見積もられており、一般的にその数は増加していると考えられている。体重指数（ＢＭＩ）が２５以上である人々が過体重もしくは肥満と見なされている。ＢＭＩは、ある人物のｋｇでの体重をｍでの身長の二乗で割る（つまり、体重／（身長）^２）、身長に対する体重の関係を表すために一般的に用いられている数式である。ヒトのヘルスケアの背景では、ＢＭＩが２５から２９．９の個人は一般的に過体重であると考えられ、一方、ＢＭＩが３０以上の個人は一般的に肥満と見なされる。病的肥満はＢＭＩが４０以上を指す。ＮＩＨの「ｔｈｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＯｖｅｒｗｅｉｇｈｔａｎｄＯｂｅｓｉｔｙｉｎＡｄｕｌｔｓ」上の臨床ガイドラインによれば、ＢＭＩが２５以上の全ての成人（年齢１８歳以上）は、過体重と肥満の結果として早死にや身体障害の恐れがあると見られている。これらの健康リスクは、個人の肥満の深刻度が増すにつれてさらに上昇する。

肥満または過体重でいると、後に高血圧、異常脂質血症、２型糖尿病、冠状動脈性心臓病、脳梗塞、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸および呼吸困難、並びに子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌による病的状態のリスクが著しく上昇する可能性がある。体重がより重いと、原因を問わない死亡率の上昇とも関連する。さらに、肥満または過体重でいると、自分自身についての否定的な自己イメージを持つ原因となる。

上半身の肥満は、２型糖尿病の既知の強力な危険因子であり、また心臓血管疾患の強力な危険因子である。肥満は、高血圧、アテローム性動脈硬化、うっ血性心不全、脳梗塞、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸、多嚢胞性卵巣症候群などの生殖障害、乳癌、前立腺癌、および結腸癌の危険因子として認識されており、全身麻酔の合併症の発生が上昇する（例えば、Ｋｏｐｅｌｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ４０４：６３５−４３（２０００）を参照）。寿命を縮め、前述の共存症、また、感染症、静脈瘤、黒色表皮症、湿疹、運動不耐性、インスリン抵抗性、高血圧、高コレステロール血症、胆石症、整形外科的障害、および血栓塞栓性疾患といった疾患の深刻なリスクを抱える（Ｒｉｓｓａｎｅｎｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３０１：８３５−７（１９９０））。肥満は、インスリン抵抗症候群、または「症候群Ｘ」と呼ばれる一群の状態の危険因子でもある。肥満および関連疾患の医療費についての最近の概算では、世界で１，５００億ドルである。肥満の発症機序は多因子性であると考えられ、一般的には肥満または過体重の対象において、栄養素の利用性とエネルギー消費が平衡した場合、過剰な脂肪組織が生じる。肥満は現在ほとんど治療されにくく、慢性的で、原則的に扱いにくい代謝疾患である。治療薬は肥満者の体重減少に有用であり、彼等の健康に著しく有益な効果を持ち得る。

これらの理由から、肥満の治療には非常に大きな関心がある。従来の治療には標準的な食事療法と運動、低カロリー食事療法、行動療法、食欲抑制剤や熱発生薬、食物吸収阻害剤などの薬物療法、顎のワイヤリング、ウェストコードおよびバルーンなどの機械的装置、ならびに胃バイパスなどの外科手術等がある。ＪｕｎｇａｎｄＣｈｏｎｇ，ＣｌｉｎｉｃａｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，３５：１１−２０（１９９１）；Ｂｒａｙ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，５５：５３８Ｓ−５４４Ｓ（１９９２）。

身体の健康のための肥満の治療への関心に加え、自分自身が見栄えがよく気分がよくあるための意欲は、常に関心があり、利益が上がる市場である。米国美容外科学会は、２００２年に６９０万件の美容処置が行われたと報告している。脂肪吸引術は最も一般的な外科処置だった。さらに、国立健康統計センターは、２００２年に米国の全成人の約３分の１が定期的な余暇の身体的活動を行ったと報告した。

一般的に脂肪を失うことが望まれるが、除脂肪体重（タンパク質）を失うことは望まれない。除脂肪体重は、代謝的、身体的に非常に活動的である。除脂肪体重は体の全てのタンパク質を含む。全てのタンパク質分子は恒常性の維持に役割を果たすため、真のタンパク質の貯蔵はない。体のタンパク質の喪失は、個人の健康に有害であると考えられている。除脂肪体重のタンパク質の大部分は骨格筋量にある。除脂肪体重は、筋肉量の重量で５０−６０％であり、残りは骨と腱である。タンパク質は、筋肉、内臓、赤血球、および結合組織の重要な細胞構造を作り上げる。代謝を指揮する酵素、免疫機能を維持する抗体もタンパク質である。さらに、脂肪に対する除脂肪体重の比率がより大きい体は、一部の個人にとって一層美的に満足を与える可能性がある。従って、体脂肪を減らす際であっても、除脂肪体重の損失を防ぐ、もしくは最小限にすることが望ましい。

カロリー制限は、その種類にかかわらず体のタンパク質の異化を引き起こし、負の窒素バランスを生じる可能性がある。従って、カロリー制限中の窒素損失を減らす方法として、タンパク補充食事療法が人気を得た。タンパク質を控える一部変更した絶食が若者の体重減少に効果的であると報告された。Ｌｅｅｅｔａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ．，３１：２３４−２３６（１９９２年４月）。しかし、これらの食事療法は中程度の窒素の不足を作り出すに過ぎない可能性がある。

さらにＰＹＹアナログポリペプチドを開発する必要性が残っている。
Ｋｉｍｍｅｌら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９６８年，第８３巻，ｐ．１３２３−３０Ｔａｔｅｍｏｔｏ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８２年，第７９巻，ｐ．２５１４−８Ｔａｔｅｍｏｔｏ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８２年，第７９巻，ｐ．５４８５−９Ｔａｔｅｍｏｔｏら，Ｎａｔｕｒｅ，１９８２年，第２９６巻，ｐ．６５９−６０Ｇｅｈｌｅｒｔ，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１９９８年，第２１８巻，ｐ．７−２２Ｅｂｅｒｌｅｉｎら，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９８９年，第１０巻，ｐ．７９７−８０３Ｇｒａｎｄｔら，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．，１９９４年，第５１巻，ｐ．１５１−９Ｍｉｃｈｅｌら，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，１９９８年，第５０巻，ｐ．１４３−５０

従って、本発明の目的は、当該のＰＹＹアナログポリペプチドとその作成と使用の方法を提供する。脂肪は促進するが除脂肪体重を維持またはその喪失を最小限にするための効果的な方法が求められている。本出願で述べられるのは、体組成を変化させるための新規の方法である。

本出願で参照された全ての文献は、ここで完全に説明するように参照して本出願に組み入れられる。

（概要）
本発明は、一般に、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたってＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を有し、少なくともＮ末端のポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含んだ少なくとも二つのＰＰＦモチーフも含む、膵臓ポリペプチドファミリー（「ＰＰＦ」）に関する。本発明の追加的なＰＰＦモチーフは、ＰＰ、ＰＹＹ、およびＮＰＹを含む任意のＰＰファミリーポリペプチドの任意のモチーフに相当する可能性がある。ある実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは天然でないアミノ酸を含まない。別の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは既知の天然に生じた変種を含まない。

ある態様において、本発明のＰＰＦポリペプチドはＰＰＦアナログポリペプチドを含む。本発明のさらに別の態様では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、各ＰＰ、ＰＹＹ、およびＮＰＹの断片がＰＰＦモチーフを含む、少なくとも一つの追加のＰＰ、ＰＹＹ、およびＮＰＹポリペプチドの断片と共有結合したＰＰ、ＰＹＹ、およびＮＰＹポリペプチド断片を備えるＰＰＦキメラポリペプチドを含む。前述の本発明のＰＰＦアナログポリペプチドとＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％の配列相同性を示す。ある実施形態では、望ましいＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端ＰＹＹ断片と組み合わせたＮ末端ＰＰ断片を含む。別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端のＰＹＹ断片と組み合わせたＮ末端ＰＰ断片を含む。別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮ末端ＰＹＹ断片とＣ末端ＰＰまたはＮＰＹの断片を含む。別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮ末端ＮＰＹ断片をＣ末端ＰＹＹあるいはＰＰとの組合せで含む。別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮ末端ＰＰ断片をＣ末端ＮＰＹ断片との組合せで含んではならない。さらに別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮ末端ＮＰＹ断片をＣ末端ＰＹＹ断片と共に含んではならない。

本発明の別の態様では、肥満の治療もしくは予防のための方法が提供され、その方法は治療的もしくは予防的に有効な量の本発明のＰＰＦポリペプチドの、それを必要とする対象への投与を含む。ある実施形態では、対象は肥満もしくは過体重の対象である。「肥満」は一般的に体重指数が３０以上と定義されるが、本開示の目的のために、体重を減らす必要がある、もしくはそう望む、体重指数が３０未満の任意の対象が「肥満」の範囲に含まれる。インスリン抵抗性、グルコース不耐性、もしくは任意の種類の糖尿病（例えば、１型、２型、もしくは妊娠性糖尿病）を有する対象は、この方法から利益を得る可能性がある。

ある一般的な態様では、本発明の方法は、例えば、除脂肪体重ではなく体脂肪を減少など、体組成を変化させるためのＰＰＦポリペプチドの使用を含む。体組成の変化は、例えば体重（ｇでの体重減少または増加）による、体脂肪率と除脂肪体重もしくはタンパク質の率（互換的に使用される）による、または、除脂肪組織に対する体脂肪率による可能性がある。

ＰＹＹは満腹の調節（米国特許第６，５５８，７０８号）、または体重制御（米国特許出願第１０／０１６，９６９号、国際公開第２００３０２６５９１号、および国際公開第２００３０５７２３５号）に有用である可能性があると報告されたが、現在、驚くべき事に、ＰＰＦポリペプチドは体に対する代謝作用がある可能性があり、望ましい体脂肪の喪失と、さらに除脂肪体重を保つ、もしくはその喪失を最小限にするよう導くことで体組成に影響を与えるために利用され得ることが発見された。

ある実施形態では、本発明の方法は体脂肪を減少、または体脂肪獲得を減少または予防する一方で、除脂肪体重の喪失を控えるか喪失を最低限にするかあるいは除脂肪体重を増加させることさえ含む。別の実施形態は、体重制御および／または体の外見の形を整えることを含む。これらの方法は、過体重または肥満の個人だけでなく痩せている個人も、その対象として関心を持つ可能性がある。例えば、ボディービルダーおよびその他の運動選手といった痩せた体組成の対象は、本発明から同様に利益を受ける可能性がある。彼等にとっては、例えば特定の重量級の範囲に留まりながらもより一層の強さ、スタミナ、持久力および／またはさらに筋骨逞しい外見のために除脂肪体重を保存、もしくは増やすといったように、体重を減らす、もしくは維持するために望ましい可能性がある。前述の方法は、脂肪に対する除脂肪体重のより大きな比率が望まれる任意の動物に対して使用してもよい。前記の使用例は、優れたショー用のイヌの作出、もしくは優れた競走馬や役馬の作出を含むがそれに限定されない。

ある一般的な態様では、本発明の方法は、消費のための動物の脂肪含量を減少させるためのＰＰＦポリペプチドの使用を含む。本発明の方法は、より脂肪が少ない肉の供給源の作成を含むことができる。本発明の組成物と方法は、ニワトリ、シチメンチョウ、ウシ、ブタ、およびヒツジ等を含むがそれに限定されない家畜と共に使用することができる。

本発明の方法は、既に前記で述べられたような、例えば食物摂取のモニター（量と質）と運動、また外科手術などのライフスタイルの変化を含む、その他の種類の栄養計画や減量プログラムとの組合せで用いることができることを意図している。栄養計画は、ボディービルダーが従っているような、除脂肪体重を増加させるために使用する計画を含む。

別の一般的態様では、ＰＰＦポリペプチドは動物において、組織と細胞レベルでのエネルギーのための脂肪利用促進の指標となる呼吸商（ＲＱ）を減少させる（脂肪酸のβ酸化が増加する）。従ってＰＰＦポリペプチドは、除脂肪体重の維持、喪失の最小化、あるいは増加に、非脂肪組織における脂肪酸のβ酸化の促進が望ましい状態において、治療的に有用である可能性がある。当該の状態の例は、患者が病的に肝臓の脂肪含量の上昇を示す非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（Ｇｒａｎｔｅｔａｌ．Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ＡｎｎＨｅｐａｔｏｌ．３（３）：９３−９，２００４年６月−９月）、および患者が脂肪貯蔵を著しく欠乏し、その結果、肝臓や骨格筋といった非脂肪組織に脂肪の蓄えの増加を示すリポジストロフィ（Ｇａｒｇｅｔａｌ．Ｌｉｐｏｄｙｓｔｒｏｐｈｉｅｓ：ｒａｒｅｄｉｓｏｒｄｅｒｓｃａｕｓｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂＣｌｉｎＮｏｒｔｈＡｍ．３３（２）：３０５−３１，２００４年６月）を含むがそれに限定されない。

本発明のある実施形態は、ＰＰＦポリペプチドは中枢ではなく、つまり、中枢神経を介さず末梢に投与されてもよい。別の実施形態では、治療的、または予防的に有効な量のＰＰＦポリペプチドが単回投与、複数投与もしくは継続的投与で投与される。

本発明のさらに別の態様では、本発明の化合物は、食物摂取減少の方法、栄養素利用性の低下の方法、体重減少を引き起こす方法、体組成に影響を及ぼす方法、体のエネルギー内容もしくはエネルギー消費（ＥＥ）を変更する方法、および脂質プロファイルの改善の方法（ＬＤＬコレステロールおよび／またはトリグリセリド濃度減少および／またはＨＤＬコレステロール濃度の変更を含む）のために用いることができる。従って、ある実施形態では、本発明の方法はそれを必要とする対象において、栄養素利用性の低下によって軽減され得る状態または疾患の治療もしくは予防に有用であり、当該の対象への治療的もしくは予防的有効量の本発明のＰＰＦポリペプチドの投与を含む。前記の状態および疾患は、高血圧、異常脂質血症、心臓血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、ならびに１型、２型および妊娠糖尿病を含む任意の種類の糖尿病を含むがそれに限定されない。本発明の化合物は、脳梗塞、癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、生殖力の低下、および変形性関節症（Ｌｙｚｎｉｃｋｉｅｔａｌ，Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓ．６３：２１８５，２００１を参照）を含む、肥満に関連したその他の状態の治療と予防にも有用である可能性がある。

本発明の化合物は、膵島または膵細胞におけるグルコース反応性の増強、誘導、強化、復元にも有用である可能性がある。これらの作用は、前述および米国特許出願第２００４０２２８８４６号記載のもののような代謝疾患と関連した状態の治療と予防にも用いられる可能性がある。

それを必要とする対象の高血圧の改善に加えて、本発明の化合物は低血圧の治療もしくは予防に用いられる可能性がある。

本発明の化合物は、腸管電解質過剰と水の分泌、また吸収低下に関連した、例えば、感染症（例えば、ウイルスもしくは細菌）、下痢、炎症性下痢、短腸症候群など、任意の数の消化器疾患の治療もしくは予防、または例えば回腸人工肛門造設術（例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗＨｉｌｌＩｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１２ｔｈｅｄを参照）といった外科処置の後に一般的に生じる下痢の治療もしくは予防にも有用である可能性がある。感染性下痢の例は、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えば、サルモネラ、カンピロバクター、およびクロストリジウム）、もしくは原虫感染による下痢、または、旅行者下痢（例えば、ノーウォークウイルスとレトロウイルス）などをこれらに限定することなく含む。炎症性下痢の例は、吸収不良症候群、熱帯性スプルー、慢性膵臓炎、クローン病、下痢および過敏性腸症候群などをこれらに限定することなく含む。また、本発明のペプチドは、例えば手術後もしくはコレラといった消化器疾患が関わる緊急もしくは命に関わる状況の治療もしくは予防に有用である可能性があることも発見されている。さらに、本発明の化合物は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者の消化器系機能障害、特にカヘキシーの際の治療に用いられる可能性がある。本発明の化合物は、哺乳動物における小腸液および電解質分泌の阻害、および栄養素輸送の促進、また胃腸管の細胞増殖の増加、例えば脂肪組織などにおける脂肪分解の調節、および血流調節にも有用である可能性がある。

本発明の化合物は、胃腸保護作用による前記の状態の治療と予防にも有用である可能性がある。従って、本発明の化合物は、胃腸障害もしくは粘膜障害の治療に有用である可能性がある。障害の種類の例は、炎症性大腸炎、腸萎縮、腸粘膜もしくは腸粘膜機能の喪失で特徴づけられる状態、および、細胞毒性薬や放射線、感染症および／または傷害への曝露によってもたらされる可能性があるものを含むその他の胃腸管状態を含むがそれに限定されない。さらに、本発明のこれらの化合物は、鎮痛薬、抗炎症薬、成長ホルモン、ヘパリン、または炎症性大腸炎もしくは前記のその他の状態の治療に用いられる可能性があるその他の任意の治療法と組み合わせてもよい。

さらに、本発明の化合物は、分泌抑制作用によって緩和もしくは改善され得る疾患および障害の治療もしくは予防に有用である。当該の分泌抑制作用は、胃および／または膵臓分泌の阻害などを含み、胃炎、膵炎、バレット食道、および、逆流性食道炎などといった疾患および傷害の治療もしくは予防に利用し得る。これらの疾患は、本発明の化合物の胃腸保護作用によっても治療もしくは予防される可能性がある。

本発明の化合物は、アルミニウム濃度異常（例えば、アルツハイマー病に罹った患者、もしくはアルツハイマー病発症のリスクがある患者、透析認知症、または職業暴露によるアルミニウム濃度の上昇）に関連する疾患もしくは状態の治療もしくは予防のため、対象の中枢神経系のアルミニウム濃度の減少にも有用である可能性がある。

本発明は、治療的もしくは予防的に有効な量の一つ以上の本発明のＰＰＦポリペプチド、またはその医薬的に許容可能な塩をＰＰＦポリペプチドの送達に有用な医薬的に許容可能な希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と共に含む医薬組成物にも関する。

本発明のこれら、およびその他の態様は、以下の実施形態および詳細説明を参照することでより明確に理解されるだろう。本発明の一つ以上の実施形態の詳細は、添付の図と以下の説明で示される。本発明のその他の特徴、目的、および利点は、説明と図、および請求項から明らかになる。引用された全ての参考文献は、本明細書に参照して組み入れられる。

（詳細な説明）
本発明は、一般に、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたってＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を有する膵臓ポリペプチドファミリー（「ＰＰＦ」）ポリペプチドに関する。ＰＰＦポリペプチドは、１０以下、５以下、３以下、２以下、もしくは１以下のアミノ酸置換を含む場合がある。ＰＰＦポリペプチドは、少なくともＮ末端のポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含んだ少なくとも二つのＰＰＦモチーフも含む。本明細書において「モチーフ」の語は、特異的な生化学機能の特徴を示す、もしくは独立に折りたたまれる領域を規定するアミノ酸配列を示す。本発明の追加的なＰＰＦモチーフは、ＰＰ、ＰＹＹ、およびＮＰＹを含む任意のＰＰファミリーペプチドのモチーフに相当する可能性があり、例えば、ＰＹＹの２型βターン領域モチーフもしくはＰＹＹのＣ末端のαへリックスモチーフである。ある実施様態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは任意の非天然アミノ酸を含まなくてもよい。

本発明は、代謝状態と代謝障害の治療と予防に有用なＰＰＦペプチドにも関係する。一部の実施様態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、代謝状態および代謝障害の治療および／または予防において、ヒトの天然のＰＰ、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）またはＮＰＹと比較して、匹敵するか、あるいはより高い効力を有する可能性がある。一部の実施様態では、本研究のＰＰＦポリペプチドは、ＰＰ、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）またはＮＰＹと比較して、低い効力を示すが、例えば製造の容易さ、安定性および／または製剤の容易さが改善したその他の望ましい特徴を有する可能性がある。

一部の実施形態では、理論によって限定される意図なしに、本発明の新規のＰＰＦポリペプチドの対象への末梢投与が栄養素利用性を低減し、従って、肥満および関連する代謝状態もしくは代謝障害の治療と予防に有用であると考えられている。そのため本発明は、栄養素利用性の減少から利益を受ける可能性がある代謝状態もしくは代謝障害の治療と予防のために、それを必要とする対象の栄養素利用性を低減するためのＰＰＦポリペプチド組成物とその使用方法を提供する。これらの方法は、例えば肥満、２型もしくはインスリン非依存性糖尿病を含むがそれに限定されない糖尿病、摂食障害、インスリン耐性症候群、心臓血管疾患、または前記の状態の組合せの治療に有用である可能性がある。

現在では、ＰＹＹ、ＰＹＹ作動薬、またはＰＰＦポリペプチドが体の代謝作用を有し、体脂肪を選択的に減少または維持し、除脂肪体重を残すもしくは増加させるために利用し得る可能性が発見されている。

本発明は、選択的に体脂肪を減少させる、または体脂肪増加を減らすもしくは予防し、除脂肪体重を維持もしくは増加させる一方で、一部分においては、体重減少、体重維持、もしくは体重増加によって体組成に影響を及ぼすよう方向付けられている。しかし例えばボディービルのようなある状況では、体脂肪率を減らすか維持する一方で、例えば選択的な栄養素摂取を通じて（例えば、カロリーまたは脂肪含量を増やすことで）体重を増加させることが望ましい場合がある。

本発明の方法は、本出願中で述べられるような望ましい結果に作用するために対象への有効量のＰＹＹ、ＰＹＹ作動薬、またはＰＰＦポリペプチドの投与を意図している。

投与されたＰＹＹ、ＰＹＹ作動薬、またはＰＰＦポリペプチドは、ペプチド、プロドラッグ、もしくはその医薬的な塩としての形である可能性がある。「プロドラッグ」の語は、投与後にインビボで、例えばタンパク質分解による切断、もしくは特定のｐＨ環境に達するなど何らかの化学的もしくは物理的過程を通じて薬剤を放出する薬剤の前駆物質の化合物を意味する。

本発明の方法は、前記の方法が必要な任意の個人（個体）、もしくはその方法の実施が望ましい個人に使用することもできる。これらの個人（個体）はヒト、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、商業的に有用な動物、およびペットなどの任意の哺乳動物を含む可能性があるがそれに限定されない。

段落の見出しは、述べられた対象を限定する目的に受け取られるためではなく、整理の目的のためだけに本明細書中で用いられる。

Ａ．本発明のＰＰＦポリペプチドおよびＰＰＦモチーフ
上述のように、本発明は、少なくとも部分的には、少なくともＮ末端のポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含んだ少なくとも二つのＰＰＦモチーフを含む新規のＰＰＦポリペプチドに関する。また本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、少なくとも部分的には、ヒトの天然のＰＰ、ＰＹＹ、および／またはＮＰＹの生物活性を有し、例えば、本発明のポリペプチドは一般的にＰＰ、ＰＹＹ、および／またはＮＰＹの作動薬または拮抗剤である。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは代謝状態および代謝障害の治療と予防において生物活性を示す。さらに、本発明のＰＰＦポリペプチドは、内部リンカー化合物を含んでもよく、あるいは内部アミノ酸残基に化学改変を含んでもよく、あるいは、Ｎ末端またはＣ末端残基に化学的に改変されてもよい。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドは天然のＬアミノ酸残基および／または改変された天然のＬアミノ酸残基のみを含む。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドは、非天然のアミノ酸残基を含まない。

本発明のＰＰＦモチーフは、ＰＰ、ＰＹＹおよびＮＰＹなどの任意の天然ＰＰファミリーポリペプチドの任意のモチーフに相当してもよい。「ＰＰＦモチーフ」は一般的に、生物活性に重要な、即ち、そのモチーフの欠損あるいは障害で生物活性が著しく低下する、天然のＰＰファミリーポリペプチドの一次、二次、または三次構造要素である。ＰＰＦモチーフは、天然のＰＰファミリーポリペプチドのＮ末端ポリプロリン２型モチーフ、天然のＰＰファミリーポリペプチドの２型βターンモチーフ、天然のＰＰファミリーポリペプチドのＣ末端のαへリックスモチーフ、および天然のＰＰファミリーポリペプチドのＣ末端の尾部モチーフを含むがそれに限定されない、当業者に知られた任意のモチーフを含んでもよい。さらに詳しくは、ＰＰＦモチーフのＮ末端ポリプロリンにおいて、天然のＰＰファミリーポリペプチドのアミノ酸残基５および８に相当するアミノ酸は、一般的にプロリンとして保存されている。２型βターンモチーフは、一般的に天然のＰＰファミリーポリペプチドのアミノ酸残基１２−１４に相当するアミノ酸を含む。αへリックスモチーフは、溶液中でαへリックスターンが形成されるようαへリックスモチーフが十分な数のアミノ酸残基を含んでいる限りは、一般的に天然のＰＰファミリーポリペプチドの約アミノ酸残基１４に相当するアミノ酸から、Ｃ末端までの任意の点まで伸びてもよい。またαへリックスモチーフは、溶液中でαへリックスターンが依然形成される限りは、天然のＰＰファミリーの配列に対するアミノ酸の置換、挿入、除去を含んでもよい。Ｃ末端の尾部ＰＰＦモチーフは、一般的に天然のＰＰファミリーポリペプチドの最後のおよそ１０残基に相当するアミノ酸を含む。一部の実地態様では、Ｃ末端の尾部モチーフは、天然のＰＰファミリーポリペプチドの最後の７、６、または５残基を含む。一部の実地態様では、Ｃ末端の尾部モチーフは、３２−３５アミノ酸残基を含む。

ある実施形態では、本発明のＰＰＦモチーフは非天然アミノ酸残基を含まず、さらに、本発明のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド（ＰＰ、ＮＰＹ（１−３６）、ＮＰＹ（３−３６）、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、ＮＰＹ（２−３６）、ＮＰＹ（４−３６）、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＹＹ（４−３６）、ＰＰ（２−３６）、ＰＰ（３−３６）、もしくはＰＰ（４−３６））を含まない。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、Ｔｙｒ^１ｈＰＰ、Ｌｙｓ^４ｈＰＰ、Ａｓｎ^７ｈＰＰ、Ａｒｇ^１９ｈＰＰ、Ｔｙｒ^２１ｈＰＰ、Ｇｌｕ^２１ｈＰＰ、Ａｌａ^２３ｈＰＰ、Ｇｌｎ^２３ｈＰＰ、Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、Ｐｈｅ^６Ａｒｇ^１９ｈＰＰ、Ｐｈｅ^６Ｔｙｒ^２１ｈＰＰ、Ｐｈｅ^６Ｇｌｕ^２１ｈＰＰ、Ｐｈｅ^６Ａｌａ^２３ｈＰＰ、Ｐｈｅ^６Ｇｌｎ^２３ｈＰＰ、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＰ、Ｉｌｅ^３１Ｇｌｎ^３４ＰＰ、Ａｒｇ^１９Ｔｙｒ^２０Ｔｙｒ^２１Ｓｅｒ^２２Ａｌａ^２３ｈＰＰ、Ｌｙｓ^４Ａｒｇ^１９Ｔｙｒ^２０Ｔｙｒ^２１Ｓｅｒ^２２Ａｌａ^２３ｈＰＰ、Ｌｙｓ^４Ａｒｇ^１９Ｔｙｒ^２０Ｔｙｒ^２１Ｓｅｒ^２２Ａｌａ^２３ｈＰＰ（２−３６）、Ａｌａ^１ＮＰＹ、Ｔｙｒ^１ＮＰＹ、Ａｌａ^２ＮＰＹ、Ｌｅｕ^２ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２ＮＰＹ、Ｈｉｓ^２ＮＰＹ、Ａｌａ^３ＮＰＹ、Ａｌａ^４ＮＰＹ、Ａｌａ^６ＮＰＹ、Ｔｙｒ^７ｐＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、Ａｌａ^９ＮＰＹ、Ａｌａ^１０ＮＰＹ、Ａｌａ^１１ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１２ＮＰＹ、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１４ＮＰＹ、Ａｌａ^１５ＮＰＹ、Ａｌａ^１６ＮＰＹ、Ａｌａ^１７ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１８ＮＰＹ、Ａｌａ^１９ＮＰＹ、Ｌｙｓ^１９ＮＰＹ、Ａｌａ^２０ＮＰＹ、Ａｌａ^２１ＮＰＹ、Ａｌａ^２２ＮＰＹ、Ｇｌｙ^２３ＮＰＹ、Ａｌａ^２４ＮＰＹ、Ｔｒｐ^２４ｐＮＰＹ、Ａｌａ^２５ＮＰＹ、Ｌｙｓ^２５ＮＰＹ、Ａｌａ^２６ＮＰＹ、Ａｌａ^２７ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２７ＮＰＹ、Ａｌａ^２８ＮＰＹ、Ａｌａ^２９ＮＰＹ、Ｇｌｎ^２９ＮＰＹ、Ａｌａ^３０ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３０ＮＰＹ、Ａｌａ^３１ＮＰＹ、Ｔｒｐ^３１ｐＮＰＹ、Ａｌａ^３２ＮＰＹ、Ｔｒｐ^３２ＮＰＹ、Ａｌａ^３３ＮＰＹ、Ｌｙｓ^３３ＮＰＹ、Ａｌａ^３４ＮＰＹ、Ｐｒｏ^３４ＮＰＹ、Ｌｅｕ^３４ＮＰＹ、Ａｌａ^３５ＮＰＹ、Ｌｙｓ^３５ＮＰＹ、Ａｌａ^３６ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３６ＮＰＹ、Ｈｉｓ^３６ＮＰＹ、Ｇｌｕ^４Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｒｇ^６Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｈｅ^６Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｃｙｓ^６Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｓｎ^６Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｈｅ^７Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｒｇ^７Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｃｙｓ^７Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｓｐ^７Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｈｅ^８Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｒｇ^８Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｃｙｓ^８Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｓｐ^８Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｓｎ^８Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｒｏ^１１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｓｅｒ^１３Ｐｒｏ^１４ｐＮＰＹ、Ｔｒｐ^{２４，３１}ｐＮＰＹ、Ａｌａ^３１Ｐｒｏ^３２ｐＮＰＹ、Ｃｙｓ^３１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｌｅｕ^３１Ｐｒｏ^３４ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３２Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｌａ^{２１，２５}Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｒｏ^１１Ｔｙｒ^１３Ｐｒｏ^１４Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ａｈｘ（９−２２）ｐＮＰＹ、Ａｈｘ（９−１７）ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−２０）−Ｃｙｓ^７，２１Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｃｙｓ^２，２７−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ａｌａ^７，２１−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｃｙｓ^７，２１−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｇｌｕ^７Ｌｙｓ^２１−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）Ｃｙｓ^７，２１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）Ｇｌｕ^７Ｌｙｓ^２１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）Ｃｙｓ^７，２１Ｌｅｕ^３１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１１−１７）Ｃｙｓ^７，２１Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、Ｐｒｏ^３４ＰＹＹ、Ｈｉｓ^３４ＰＹＹ、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｒｇ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｙｒ^１，３６ｐＰＹＹ、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、Ｌｅｕ^３１Ｐｒｏ^３４ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ（３−３６）、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ（３−３６）、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７、１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２１−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２２−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７，２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、もしくはｃＰＰ（１−７）−ｇＰＰ（１９−２３）−ｈＰＰを含まない。

別の実施形態では、本発明の前記のＰＰＦポリペプチドは、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２，ｈＰＹＹ（４−３６）Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３１Ｌ

ｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２，ｈＰＹＹ（５−３６）Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、もしくはＬｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）も含まない。

別の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、非天然のアミノ酸残基を全く含まず、ｈＰＹＹのＣ末端の尾部モチーフを含む。Ｃ末端の尾部モチーフは、ｈＰＹＹの例えばＴｈｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｒｇといった３２−３５アミノ酸残基を含んでもよい（配列番号３５１）。前記の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド（例えば、ＮＰＹ（１−３６）、ＮＰＹ（３−３６）、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６））、ＮＰＹ（２−３６）、ＰＹＹ（４−３６）、ＰＹＹ（５−３６））、（２−３６）ＮＰＹ、（２−３６）ＰＹＹ、Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、Ｉｌｅ^３１Ｇｌｎ^３４ＰＰ、Ａｌａ^１ＮＰＹ、Ｔｙｒ^１ＮＰＹ、Ａｌａ^２ＮＰＹ、Ｌｅｕ^２ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２ＮＰＹ、Ｈｉｓ^２ＮＰＹ、Ａｌａ^３ＮＰＹ、Ａｌａ^４ＮＰＹ、Ａｌａ^６ＮＰＹ、Ｔｙｒ^７ｐＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、Ａｌａ^９ＮＰＹ、Ａｌａ^１０ＮＰＹ、Ａｌａ^１１ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１２ＮＰＹ、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１４ＮＰＹ、Ａｌａ^１５ＮＰＹ、Ａｌａ^１６ＮＰＹ、Ａｌａ^１７ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１８ＮＰＹＡｌａ^１９ＮＰＹ、Ｌｙｓ^１９ＮＰＹ、Ａｌａ^２０ＮＰＹ、Ａｌａ^２１ＮＰＹ、Ａｌａ^２２ＮＰＹ、Ｇｌｙ^２３ＮＰＹ、Ａｌａ^２４ＮＰＹ、Ｔｒｐ^２４ｐＮＰＹ、Ａｌａ^２５ＮＰＹ、Ｌｙｓ^２５ＮＰＹ、Ａｌａ^２６ＮＰＹ、Ａｌａ^２７ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２７ＮＰＹ、Ａｌａ^２８ＮＰＹ、Ａｌａ^２９ＮＰＹ、Ｇｌｎ^２９ＮＰＹ、Ａｌａ^３０ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３０ＮＰＹ、Ａｌａ^３１ＮＰＹ、Ｔｒｐ^３１ｐＮＰＹ、Ａｌａ^３６ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３６ＮＰＹ、Ｈｉｓ^３６ＮＰＹ、Ａｈｘ（９−２２）ｐＮＰＹ、Ａｈｘ（９−１７）ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｃｙｓ^２，２７−ｐＮＰＹｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ａｌａ^７，２１−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｃｙｓ^７，２１−ｐＮＰＹ、ｄｅｓ−ＡＡ（１０−１７）−Ｇｌｕ^７Ｌｙｓ^２１−ｐＮＰＹ、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｒｇ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｙｒ^１，３６ｐＰＹＹ、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ（３−３６）、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ（３−３６）、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、もしくはｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ）を全く含まない。

別の態様では、ｈＰＹＹのＣ末端の尾部モチーフを含む本発明の前述のＰＰＦポリペプチドは、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）も含まない。

さらに別の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、参照して本明細書に全体を組み入れる国際公開第０３／０２６５９１号および国際公開第０３／０５７２３５号で開示されたＰＰＦ関連ポリペプチドを含まない。

別の実施形態では、本発明のポリペプチドは少なくとも３４アミノ酸の長さである。その他の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、もしくは３３アミノ酸の長さである。さらにある実施形態では、本発明のポリペプチドは天然のＬアミノ酸残基および／または改変された天然のＬアミノ酸残基のみを含む。あるいは別の実施形態では、本発明のポリペプチドは非天然のアミノ酸残基を含まない。

さらに別の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、もしくは９０％の配列相同性を示す。本発明の前記のＰＰＦポリペプチドは、天然のＰＰと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す可能性もある。別の実施形態では、本発明の前記のＰＰＦポリペプチドは、天然のＮＰＹと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す可能性がある。

より詳しくは、ある態様では、本発明はＮ末端のポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含んだ少なくとも二つのＰＰＦモチーフも含み、非天然アミノ酸残基を全く含まないＰＰＦポリペプチドである新規ＰＰＦポリペプチドに関する。前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、前記のＰＰＦポリペプチドは少なくとも３４アミノ酸残基を有する。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、天然のＰＰと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは１０以下、５以下、３以下、２以下、もしくは１以下のアミノ酸置換を含んでもよい。さらに別の実施形態では、前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、天然のＮＰＹと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。

別の態様では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹアナログポリペプチドを含む。さらに別の態様では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、各ＰＰ、ＰＹＹ、またはＮＰＹポリペプチド断片がＰＰＦモチーフを含む、一つ以上のＰＰ、ＰＹＹ、またはＮＰＹポリペプチドの追加断片に共有結合した、ＰＰ、ＰＹＹ、またはＮＰＹポリペプチドの断片からなるＰＰＦキメラポリペプチドを含む。前記の本発明のＰＰＦアナログポリペプチドとＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％の配列相同性を示す。また一部の実施形態において、前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然のＰＹＹ（３−３６）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、天然のＰＰと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。さらに別の実施形態では、前記の本発明のＰＰＦポリペプチドは、天然のＮＰＹと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。ある実施形態では、望ましいＰＰＦポリペプチドは、ＮＰＹのＣ末端断片との組合せでＰＰのＮ末端断片を含まない可能性がある。

本発明において有用なＰＰＦポリペプチドは、特定の活性について天然の化合物よりもより高いもしくはより低いＰＰＦ活性を有する可能性がある。従って、例えばＰＹＹ作動薬は、天然のＰＹＹの３倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、もしくはそれ以上の活性を有する可能性がある。さらに、天然のＰＹＹと同様もしくはそれ以上の活性を有するＰＹＹ作動薬を使用するのが望ましいものの、一般の当業者は、天然のＰＹＹより低い活性を有する作動薬も本発明において有用であることを理解するだろう。前記の作動薬は、例えば、天然のＰＹＹの、２分の１から、５分の１、１０分の１、１５分の１、もしくは２０分の１のいずれかの活性を有するが、例えば溶解性、生物学的利用率、製造または製剤の容易さ、あるいは副作用の少なさといった別の望ましい特徴を有する可能性がある。一部の実施形態では、本発明で有用はＰＰＦポリペプチドは、ＰＹＹ拮抗薬である場合もある。

ＰＹＹ作動薬の例、特にＰＹＹアナログ作動薬もしくは作動薬アナログ（ＰＹＹのアナログと誘導体）は、参照して本明細書に全体として組み入れる米国特許第５，５７４，０１０号、国際公開第０４／０８９２７９号、国際公開第０４／０６６９６６号、国際公開第０３／０５７２３５号、国際公開第０３／０２６５９１号、国際公開第９８／２０８８５号、国際公開第９４／２２４６７号に述べられている。別のＰＹＹアナログ作動薬の例は、Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍｅｔａｌ．，ＰｅｐｔＲｅｓ１（１）：３２−５，１９９８，Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍｅｔａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１４：１０１１−１０１６，１９９３，Ｂｏｕｂｌｉｋｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ３２：５９７−６０１，１９８９，Ｌｉｕｅｔａｌ．，Ｊ．ＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＳｕｒｇ５（２）：１４７−５２，２００１，Ｇｅｈｌｅｒｔｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＳｏｃＥｘｐＢｉｏｌＭｅｄ，２１８：７−２２，１９９８，Ｓｈｅｉｋｈｅｔａｌ．，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌ．２６１：Ｇ７０１−１５，１９９１，Ｐｏｔｔｅｒｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ２６７（３）：２５３−３６２，１９９４，Ｌｅｂｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ３８：１１５０−５７，１９９５，Ｆｏｕｒｎｉｅｒｅｔａｌ．，ＭｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ４５（１）：９３−１０１，１９９４，Ｋｉｒｂｙｅｔａｌ．，Ｊ．ＭｅｄＣｈｅｍ３８：４５７９−８６，１９９５，Ｂｅｃｋｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ２４４（１）：１１９−１２２，１９８９，Ｒｉｓｔｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２４７：１０１９−１０２８，１９９７，Ｓｏｌｌｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ２６８（１０）：２８２８−３７，２００１，Ｃａｂｒｅｌｅｅｔａｌ．，ＪＰｅｐｔＳｃｉ６（３）：９７−１２２，２０００，Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ４３：３４２０−３４２７，２０００，Ｋｉｒｂｙｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ３６：３８０２−０８，１９９３，Ｇｒｕｎｄｅｍａｒｅｔａｌ．，ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ６２：１３１−１３６，１９９６，Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎｅｔａｌ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ３５：２８３６−２８４３，１９９２，Ｃｏｘｅｔａｌ．ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ７５−７６：３−８，１９９８，Ｃａｂｒｅｌｅｅｔａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ２２：３６５−３７８，２００１，Ｋｅｉｒｅｅｔａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３９：９９３５−９９４２，２０００，Ｋｅｉｒｅｅｔａｌ．Ａｍ．Ｊ．ＰｈｙｓｉｏｌＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＬｉｖｅｒＰｈｙｓｉｏｌ２７９：Ｇ１２６−Ｇ１３１，２０００に述べられており、参照して本明細書に組み入れられる。

ＰＹＹ、ＮＰＹ、およびＰＰは、胃腸機能、血圧、および摂食行動の調節に関与するアミド化Ｃ末端ペプチドのファミリーを構成している。理論による限定の意図なしに、Ｙ受容体サブタイプへの選択的な結合と活性化に対するこれらのペプチドの能力は、「ＰＰ−ｆｏｌｄ」と呼ばれる構造を含む、安定な溶液構造に強く依存すると考えられる。表１（下）は、既知の受容体でのＰＰファミリーリガンドの効力と様々なリガンドの効力の順位を示す。

（表１．ＰＰファミリーの受容体に対する受容体の薬効薬理のまとめ）

研究は、Ｙ受容体の結合親和性の違いが二次および三次構造の違いと相関していることを示唆した。例として、Ｋｅｉｒｅｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２０００，３９，９９３５−９９４２を参照。天然のブタＰＹＹは、残基１７から２２と２５から３３の、残基２３、２４および２５でのねじれで隔てられた二つのＣ末端へリックス状断片、残基１２−１４辺りを中心とするターン、および残基３０と３１近くの折りたたまれたＮ末端を含むと特徴付けられてきた。さらに、全長のブタＰＹＹは、Ｎ末端とＣ末端で残基間の疎水性相互作用によって安定化されるＰＰ−ｆｏｌｄを含むと特徴付けられてきた。前出を参照のこと。

「ＰＰ」は、任意の種から得られたもしくは由来する膵臓ペプチドポリペプチドを意味する。従って、「ＰＰ」の用語は、配列番号１に示されたような３６アミノ酸のヒトの全長ペプチドと、例えば、マウス、ハムスター、ニワトリ、ウシ、ラット、イヌのＰＰを含む、様々な種のＰＰの両方を含む。この意味で、「ＰＰ」「野生型ＰＰ」および改変されていないＰＰである「天然ＰＰ」は互換的に用いられる。

「ＮＰＹ」は、任意の種から得られたもしくは由来するニューロペプチドＹポリペプチドを意味する。従って、「ＮＰＹ」の用語は、配列番号４に示されたような３６アミノ酸のヒトの全長ペプチドと、例えば、マウス、ハムスター、ニワトリ、ウシ、ラット、イヌのＮＰＹを含む、様々な種のＮＰＹの両方を含む。この意味で、「ＮＰＹ」「野生型ＮＰＹ」および改変されていないＮＰＹである「天然ＮＰＹ」は互換的に用いられる。

「ＰＹＹ」は、任意の種から得られたもしくは由来するペプチドＹＹポリペプチドを意味する。従って、「ＰＹＹ」の用語は、配列番号２に示されたような３６アミノ酸のヒトの全長ペプチドと、例えば、マウス、ハムスター、ニワトリ、ウシ、ラット、イヌのＰＹＹを含む、様々な種のＰＹＹの両方を含む。この意味で、「ＰＹＹ」「野生型ＰＹＹ」および改変されていないＰＹＹである「天然ＰＹＹ」は互換的に用いられる（配列番号２）。本発明の文脈では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドに関して論じられる改変の全ては天然のヒトＰＹＹの３６アミノ酸配列（配列番号２）に基づいている。

「ＰＰ作動薬」、「ＰＹＹ作動薬」もしくは「ＮＰＹ作動薬」は、それぞれ天然のヒトＰＰ、ＰＹＹ、またはＮＰＹの生物学活性を誘発する化合物を意味する。一部の実施形態では、この用語は例えば、（１）摂食、胃内容排出、膵臓分泌物、もしくは減量のアッセイにおいて、天然のヒトＰＰ、ＰＹＹ、もしくはＮＰＹと同様の活性を有する化合物、および／または（２）例えば最後野などの、Ｙ受容体が豊富な特定の組織由来の標識したＰＰ、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、もしくはＮＰＹを用いたＹ受容体アッセイ、もしくは競合結合アッセイにおいて特異的に結合する化合物といった、天然のヒトＰＰ、ＰＹＹ、もしくはＮＰＹと同様の、栄養素利用性の減少に生物学作用を誘発する化合物を意味する。一部の実施形態において、作動薬はＰＰ、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、および／またはＮＰＹではない。一部の実施形態において、作動薬は、前記のアッセイにおいて１μＭより親和性が高い結合をする。一部の実施形態において、作動薬は、前記のアッセイにおいて１−５ｎＭより親和性が高い結合をする。前記の作動薬は、ＰＰＦモチーフ、ＰＰ、ＰＹＹ、もしくはＮＰＹの活性断片、または化学小分子を有するポリペプチドを含んでもよい。

ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、もしくはその作動薬は、技術的に可能なようにその他の特徴を改変するためにＮ末端、Ｃ末端、および／またはその長さに沿って改変されてもよい。上述のように、挿入、延長、または置換がその他の天然アミノ酸、人工アミノ酸、ペプチド模倣薬、またはその他の化合物にあってもよい。本発明のアナログポリペプチドは、例えばアミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、および環化といった化学変換によって誘導体化されてもよい。前記の化学変換は、化学的もしくは生化学的な方法、またインビボの過程を通じて、またはその任意の組合せで得られてもよい。本発明のアナログポリペプチドの誘導体は、一つ以上のポリマーもしくは小分子置換基への結合を含んでもよい。あるタイプのポリマー結合は、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）ポリマー、ポリアミノ酸（例えば、ポリｈｉｓ、ポリａｒｇ、ポリｌｙｓ、ポリａｌａなど）および／または様々な長さの脂肪酸鎖のポリペプチドアナログのＮ末端もしくはＣ末端またはアミノ酸残基側鎖への架橋もしくは付着である。小分子置換基は、短いアルキルおよび拘束されたアルキル（例えば分岐、環状、融合、アダマンチル化した）、および芳香族基を含む。

「低下した栄養素利用性」とは、体が脂肪として体に貯蔵するために利用可能な栄養素を減少させる任意の意味を含むよう意味する。栄養素利用性の減少は、食欲の減少、満腹の増進、食物の選択／味覚嫌悪への影響、代謝の増進、および／または食物の吸収減少もしくは阻害を含めて意味してもよいが、それに限定されない。影響され得る典型的な機構は、胃内容排出の遅延もしくは腸での食物吸収の減少等である。

「増進した栄養素利用性」とは、体が脂肪として体に貯蔵するために利用可能な栄養素を増加させる任意の意味を含めて意味する。栄養素利用性の増進は、食欲の増進、満腹の減少、食物の選択への影響、味覚嫌悪の減少、代謝の低下、および／または食物の吸収増加を含めて意味してもよいが、それに限定されない。影響され得る典型的な機構は、胃の運動低下の減少もしくは腸での食物吸収の増加等である。

栄養素利用性を減少させる方法に関しては、本明細書で用いる場合、「それを必要とする対象」とは、過体重もしくは肥満もしくは病的な肥満あるいは減量を望む対象を含む。さらに、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、もしくは任意の種類の糖尿病（例えば、１型、２型、もしくは妊娠性糖尿病）を有する対象が、栄養素利用性を低下させる方法の恩恵を受ける可能性がある。

栄養素利用性増進の方法に関しては、本明細書で用いる場合、「それを必要とする対象」とは、低体重の対象や体重増加を望む対象を含む。

「対象」とは、体重もしくは体組成の変化が問題になる可能性があるヒト、霊長類、および、ラット、マウス、ネコやイヌのようなペット、ウマやウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギなどの家畜、およびニワトリ、シチメンチョウ、および、その他の商業的に有用な動物、またはペットを含むその他の哺乳動物を含む任意の動物を意味する。

本明細書において、「食事療法」の語は、対象が食事療法を始める前のカロリー摂取に対して少ないカロリーを摂取する任意の手段を含んで意味する。食事療法の例は、食物消費の全体量を減らす、食事のタンパク質、炭水化物または脂肪成分の任意の一つ以上の消費を減らす、もしくは食事中の炭水化物および／またはタンパク質の比率に対して脂肪の比率を減らすという食事療法を含む可能性があるがそれに限定されない。

「代謝速度」とは、単位時間当たりに解放／消費されたエネルギー量を意味する。単位時間当たりの代謝は、食物消費、熱として放出したエネルギー、もしくは、代謝過程で利用された酸素によって概算することができる。一般的に、減量を望む場合には代謝速度が高いことが望ましい。例えば、代謝速度が高い人は、代謝速度が低い人よりも同じ活動を行うのにより多くのエネルギーを消費できる（例えば、体がより多くのカロリーを燃焼する）可能性がある。

本明細書において、「除脂肪量」もしくは「除脂肪体重」は、筋肉と骨を意味する。除脂肪体重は、必ずしも脂肪を含まない質量ではない。除脂肪体重は、わずかなパーセントの脂肪（およそ３％）を中枢神経系（脳と脊髄）、骨髄、および内臓に含む。除脂肪体重は密度の観点から測定される。脂肪量と除脂肪量の測定方法は、水中秤量、空気置換プレチスモグラフ、Ｘ線、二重エネルギーＸ線吸収法スキャン、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、断熱式ボンベ熱量法を含むがそれに限定されない。一部の実施形態では、体組成は齧歯動物用ＮＭＲ装置（ＥｃｈｏＭＲＩ−７００^ＴＭ）を用いた処理の前後に測定される。動物を拘束チューブ内に置き、ＮＭＲ内に２分間置き、脂肪量と除脂肪量のグラム数を定量する。一部の実施形態では、各動物の体組成（除脂肪量、脂肪量）を二重エネルギーＸ線吸収（ＤＥＸＡ）装置を用いて、メーカーの取扱書に従って解析する（ＬｕｎａｒＰｉｘｉｍｕｓ、ＧＥＩｍａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）。一部の実施形態では、脂肪量と除脂肪量は、水中秤量を用いて測定する。一部の実施形態では、体組成はＭＲＩを用いて測定する。一部の実施形態では、体組成はＣＴスキャンを用いて測定する。一部の実施形態では、体組成は断熱式ボンベ熱量法を用いて測定する。一部の実施形態では、体組成はＸ線を用いて測定する。一部の実施形態では、体組成は空気置換プレチスモグラフを用いて測定する。一部の実施形態では、対象動物の屠殺時に腹膜後方と腸間膜の脂肪体、内臓脂肪症のマーカーを解剖して取り出し、秤量した。

「脂肪分布」とは、体内の脂肪の蓄積場所を意味する。前記の脂肪の蓄積場所は、例えば、皮下、内臓、および異所性の脂肪組織を含む。

「皮下脂肪」とは、皮膚表面直下の脂質の蓄積を意味する。対象の皮下脂肪の量は、皮下脂肪の測定に利用可能な任意の方法を用いて測定してよい。皮下脂肪の測定方法は当業者に知られており、例えば、全体を参照して本明細書に組み入れられる米国特許第６，５３０，８８６号で述べられている。

「内臓脂肪」は、腹腔内脂肪組織としての脂肪の蓄積を意味する。内臓脂肪は重要臓器を取り巻き、肝臓で代謝されて血中コレステロールを産生し得る。内臓脂肪は、多嚢胞性卵巣症候群、メタボリック症候群、心臓血管疾患などといった状態の危険性増加と関連している。

「異所性の脂肪蓄積」とは、除脂肪体重を構成する組織と臓器（骨格筋、心臓、肝臓、膵臓、腎臓、血管）の内部と周辺の脂質の蓄積を意味する。一般的に、異所性の脂肪蓄積は、体内の古典的な脂肪組織外の脂質の蓄積である。

本明細書において、当業者によく知られているように、「治療」とは臨床的結果を含む有益もしくは望ましい結果を得るための取り組みである。疾患、障害、もしくは状態の「治療」もしくは「緩和」は、状態、障害、もしくは疾患状態の程度および／または望ましくない臨床徴候が、障害が治療されなかった場合と比べて低減および／または進行の時間的経過が遅くなる、もしくは長くなることを意味する。例えば、肥満の治療において、例えば少なくとも５％の体重減少といった体重減少が望ましい治療結果の例である。有益な、もしくは望ましい臨床結果は、検出可能か否かに関わりなく、一つ以上の症状の緩和もしくは改善、疾患範囲の縮小、疾患の安定した状態（即ち、悪化していない）、疾患の進行の遅延もしくは減速、疾患状態の改善もしくは緩和、および（部分的か完全かに関わらず）回復を含むがそれに限定されない。「治療」は、治療を受けない場合に期待される生存と比較して生存を延長することも意味する。さらに、治療は必ずしも単回の投与によって生じるとは限らず、しばしば一連の用量の投与で生じる。従って、治療的有効量、緩和に十分な量、または疾患、障害、もしくは状態の治療に十分な量は、１回以上の投与で投与される。

本明細書において、「治療的有効量」とは、対象、研究者、獣医、医師、もしくはその他の臨床医学者が求める、治療される障害の症状の緩和を含む、組織、システム、対象もしくはヒトにおける生物学的もしくは医学的反応を誘発する組成物中のＰＦＦポリペプチド量を意味する。本発明の新規の治療方法は、当業者に知られている障害のための治療法である。

本明細書において、「予防的有効量」とは、肥満もしくは肥満関連の障害、状態、もしくは疾患の恐れがある対象における肥満もしくは肥満に関連した障害、状態または疾患の発生を予防するために、対象、研究者、獣医、医師、もしくはその他の臨床医学者が求める、組織、システム、対象もしくはヒトにおける生物学的もしくは医学的反応を誘発する組成物中の活性化合物量を意味する。

本明細書において、単数による記載は、他に示されない限り、もしくは文脈から明らかでない限り、複数の参照を含む。例えば、文脈から明らかなように、ＰＹＹ作動薬は、一つ以上のＰＹＹ作動薬を含む可能性がある。

「アミノ酸」および「アミノ酸残基」は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、および改変されたアミノ酸を意味する。これと異なる記載がない限り、一般的もしくは特定の名前でのアミノ酸についてのいずれの言及も、構造的に立体異性体が可能であればＤおよびＬの立体異性体の両方への言及を含む。天然アミノ酸は、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、およびバリン（Ｖａｌ）を含む。非天然アミノ酸はホモリジン、ホモアルギニン、アゼチジンカルボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、βアラニン、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第三ブチルグリシン、２，４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフタラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、チオプロリン、サルコシン、およびシトルリンを含むがそれに限定されない。追加の非天然アミノ酸は、例えば、側鎖の官能基が別の官能基に化学的に改変されたＮ−メチル化ＤおよびＬアミノ酸、もしくは残基である、可逆的もしくは不可逆的に化学的にブロックされ改変された、またはＮ末端アミノ基もしくは側鎖基が化学的に改変された改変アミノ酸残基を含む。例えば、改変されたアミノ酸は、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、アスパラギン酸の改変アミノ酸であるアスパラギン酸（βメチルエステル）、グリシンの改変アミノ酸であるＮ−エチルグリシン、もしくは、アラニンの改変アミノ酸であるアラニンカルボキサミドを含む。組み込まれる可能性がある追加の残基は、Ｓａｎｄｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：２４８１−９１，１９９８に述べられている。

「Ａｈｘ」は、６−アミノヘキサン酸を意味する。

ＰＰＦの特定のヒトペプチド配列は、以下の通りである（通常の一文字アミノ酸コードで示す）。
ＰＰ：ＡＰＬＥＰＶＹＰＧＤＮＡＴＰＥＱＭＡＱＹＡＡＤＬＲＲＹＩＮＭＬＴＲＰＲＹ（配列番号１）
ＰＹＹ：ＹＰＩＫＰＥＡＰＧＥＤＡＳＰＥＥＬＮＲＹＹＡＳＬＲＨＹＬＮＬＶＴＲＱＲＹ（配列番号２）
ＰＹＹ（３−３６）：ＩＫＰＥＡＰＧＥＤＡＳＰＥＥＬＮＲＹＹＡＳＬＲＨＹＬＮＬＶＴＲＱＲＹ（配列番号３）
ＮＰＹ：ＹＰＳＫＰＤＮＰＧＥＤＡＰＡＥＤＭＡＲＹＹＳＡＬＲＨＹＩＮＬＩＴＲＱＲＹ（配列番号４）
ヒトＰＹＹの種ホモログは、配列番号７−２９のアミノ酸配列を含む。

前述のように、これらのペプチドは生理的に発現された場合にはＣ末端がアミド化されているが、本発明の目的のためには必要ではない。言い換えれば、これらのペプチドのＣ末端、また本発明のＰＰＦポリペプチドは、遊離の−ＯＨもしくは−ＮＨ_２基を有してもよい。これらのペプチドは、その他の翻訳後改変を有してもよい。当業者は、本発明のＰＰＦポリペプチドがＮ末端メチオニン残基で構成される場合もあることを理解するだろう。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、式（Ｉ）（配列番号３０）：
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＸａａ_６Ｘａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＸａａ_２５Ｘａａ_２６Ｘａａ_２７Ｘａａ_２８Ｘａａ_２９Ｘａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＸａａ_３６
のＰＰＦポリペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、ｄ−Ａｌａ、ｈｏｍｏＰｒｏ、ｈｙｄｒｏｘｙＰｒｏ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈもしくは欠けており、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、ｄ−Ａｌａ、ｈｏｍｏＬｙｓ、ｈｏｍｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、もしくはＴｙｒ、
Ｘａａ_９はＧｌｙ、ＡｌａＳｅｒ、サルコシン、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１１はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、ホモアルギニン、Ｌｙｓ、ホモリジン、Ｏｒｎ、もしくはＣｉｔ、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、Ａｌａ、Ａｒｇ、ホモアルギニン、ホモリジン、Ｏｒｎ、もしくはＣｉｔ、
Ｘａａ_２７はＴｙｒもしくはＰｈｅ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_２９はＡｓｎもしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｎ（Ｍｅ）Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＮＰＹ（２−３６）、ＮＰＹ（４−３６）、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＹＹ（４−３６）、ＰＰ（２−３６）、ＰＰ（４−３６）、Ａｌａ^１ＮＰＹ、Ａｌａ^３ＮＰＹ、Ａｌａ^４ＮＰＹ、Ａｌａ^６ＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、Ｔｙｒ^７ｐＮＰＹ、Ａｌａ^９ＮＰＹ、Ａｌａ^１０ＮＰＹ、Ａｌａ^１１ＮＰＹ、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１４ＮＰＹ、Ａｌａ^１５ＮＰＹ、Ａｌａ^１６ＮＰＹ、Ａｌａ^１７ＮＰＹ、Ａｌａ^１９ＮＰＹ、Ｌｙｓ^１９ＮＰＹ、Ａｌａ^２１ＮＰＹ、Ａｌａ^２２ＮＰＹ、Ｌｙｓ^２５ＮＰＹ、Ａｌａ^２６ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２７ＮＰＹ、Ａｌａ^２８ＮＰＹ、Ｇｌｎ^２９ＮＰＹ、Ａｌａ^３０ＮＰＹ、Ａｌａ^３１ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３６ＮＰＹ、Ｈｉｓ^３６ＮＰＹ、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、Ｔｙｒ^１ＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、もしくはｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹではないという条件である。

別の実施形態では、式ＩのＰＰＦポリペプチドは、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＬｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）を含まない。

当業者に理解されるように、式Ｉのポリペプチドは遊離の酸の形であるか、もしくはＣ末端がアミド化されてもよい。

１．本発明のＰＹＹアナログポリペプチド
本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、一般的にＮ末端のポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含んだ少なくとも二つのＰＰＦモチーフも含み、一般的に、少なくとも部分的に、例えば本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは一般的にＰＹＹ作動薬であるといったように、天然のヒトＰＹＹの生物活性を保持している。さらに、ＰＹＹアナログポリペプチドはＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは代謝状態と代謝障害の治療と予防においてＰＹＹ活性を示す。

ある実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは非天然アミノ酸残基を全く含まず、さらに、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは天然のＰＹＹポリペプチドを全く含まない、もしくはＮ末端の１−４の除去（例えば、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＹＹ（３−３６））、ＰＹＹ（４−３６））を含まないという条件がある。ある実施様態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、Ｐｒｏ^３４ＰＹＹ、Ｈｉｓ^３４ＰＹＹＬｙｓ^２５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｒｇ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｙｒ^１，３６ｐＰＹＹ、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、Ｌｅｕ^３１Ｐｒｏ^３４ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ（３−３６）、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ、もしくはＦｍｏｃ_２−ＰＹＹ（３−３６）を含まない。

別の実施形態では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３１

Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｓｅｒ^３２，ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｓｅｒ^３２ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３１Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３３ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｓｅｒ^３２Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ａｓｎ^３４ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３３Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４Ｌｙｓ^３５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｓｎ^３４Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^３５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、もしくはＬｙｓ^３５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）も含まない。

一部の実施形態では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは非天然アミノ酸残基を全く含まず、またｈＰＹＹのＣ末端の尾部モチーフを含む。Ｃ末端モチーフはｈＰＹＹの３２−３５のアミノ酸残基、例えばＴｈｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｒｇを含んでもよい（配列番号３５１）。前記の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは天然のＰＹＹポリペプチドを全く含まない、もしくはＮ末端の１−４の除去（例えば、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、およびＰＹＹ（４−３６））を含まない。一部の実施形態では、前記のＰＹＹアナログはＬｙｓ^２５ｈＰＹＹ（５−３６）、Ａｒｇ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ａｓｎ^４ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｙｒ^１，３６ｐＰＹＹ、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ、ＦＭＳ−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ、Ｆｍｏｃ−ＰＹＹ（３−３６）、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ、ＦＭＳ_２−ＰＹＹ（３−３６）、Ｆｍｏｃ_２−ＰＹＹ、もしくはＦｍｏｃ_２−ＰＹＹ（３−３６）を含まない。

別の態様では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドはｈＰＹＹのＣ末端の尾部モチーフを含み、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ａｓｎ^２４ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（４−３６）、Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^２７ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｔｈｒ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｇｌｎ^２９ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｐｈｅ^２７Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｇｌｎ^２９Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｉｌｅ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｔｈｒ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）、もしくはＬｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（５−３６）も含まない。

一部の実施形態では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、少なくとも３４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、天然のＬアミノ酸残基および／または改変された天然のＬアミノ酸残基のみを含む。一部の実施形態では、前記の本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは非天然のアミノ酸残基を含まない。

さらに具体的には、ある態様では、本発明は一つ以上のアミノ酸配列改変を含むＰＹＹアナログポリペプチドに関する。当該の改変は、単独もしくは組合せでの置換、挿入および／または除去を含む。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、「必須でない」アミノ酸残基の一つ以上の改変を含む。本発明の文脈では、天然のヒトＰＹＹアミノ酸配列において、ＰＹＹアナログポリペプチドのＰＹＹ作動薬活性を損なったり実質的に減じたりすることなく、「必須でない」アミノ酸残基は変更、即ち、除去もしくは置換可能な残基である。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、栄養素利用性の低減に関する天然のヒトＰＹＹの生物活性の少なくとも約２５％、もしくは約３０％から、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、もしくは約９９％を保持する。別の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、向上したＰＹＹ作動薬活性を示す。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、栄養素利用性の低減に関する天然のヒトＰＹＹの生物活性の、少なくとも約１１０％、約１２５％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、もしくはそれ以上を示す。

ＰＹＹアナログポリペプチドは、本明細書に述べられたアッセイ（食物摂取、胃内容排出、膵臓分泌、体組成、もしくは体重減少アッセイなど）の一つで、同じアッセイにおけるＮＰＹ、ＰＹＹ、もしくはＰＹＹ（３−３６）の効力と同等かそれ以上の効力を有するポリペプチドである。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、ＰＰ、ＮＰＹ、ＰＹＹ、もしくはＰＹＹ（３−３６）に比べて製造の容易さ、安定性、および／または製剤の容易さに改善を示す可能性がある。

ａ．置換
ある実施形態において、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、天然のヒトＰＹＹのアミノ酸配列（配列番号２）中に、単独、あるいは一つ以上の挿入と除去との組合せで、一つ以上の置換を有してもよい。一部の実施形態では、置換はＰＹＹアナログポリペプチドのＰＹＹ作動薬活性を損なったり、もしくは実質的に減少させない。ある態様では、本発明は、天然のヒトＰＹＹのアミノ酸配列（配列番号２）中に、一つの置換、もしくは一つ以上のアミノ酸残基の連続的または非連続的な置換を有するＰＹＹアナログポリペプチドに関する。ある実施形態において、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０アミノ酸の置換を含む。

ある実施形態において、天然のヒトＰＹＹのアミノ酸配列（配列番号２）のへリックス状のＰＹＹのＣ末端領域のアミノ酸残基（例えば、残基２０、２４、２５、２７、および２９）、尾部末端残基（３２−３６）、および／またはＮ末端の５および８の位置のプロリンは置換されない。ある実施形態において、アミノ酸残基は天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）の３２から３６の位置では置換されない。別の実施形態では、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のアミノ酸残基は、５、７、８、２０、２４、２５、２７、２９、３２、３３、３４、３５、３６およびその任意の組合せから選択された一つ以上のアミノ酸配列の位置では置換されない。

置換は、保存されたアミノ酸置換を含んでもよい。「保存的なアミノ酸置換」は、類似の側鎖、もしくは物理化学的性質（例えば、静電気、水素結合、等配電子、疎水性などの特徴）を有するアミノ酸残基で、アミノ酸残基を置き換えた置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当業者に知られている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、メチオニン、システイン）、無極性の側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン）、β分岐した側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族の側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を持つアミノ酸を含む。

別の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、ＰＹＹの配列（配列番号２）に、例えばアミノ酸模倣剤といった、一つ以上の非天然および／または非アミノ酸置換を含んでもよい。一部の実施形態では、ＰＹＹの配列（配列番号２）への非アミノ酸挿入は、βターン模倣剤、または例えば式中、Ｘ＝（ＣＨ_２）_ｎである−ＮＨ−Ｘ−ＣＯ−（ｎは２−２０の可能性がある）、もしくは−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｏ−）_ｍ−ＣＨ_２−ＣＯ−（式中、ｍ＝１−５）といったリンカー分子であってもよい。リンカー分子は、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、βアラニル、および８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルを含む。βターン模倣剤は、市販されており（ＢｉｏＱｕａｄｒａｎｔＩｎｃ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）、文献中（Ｈａｎｅｓｓｉａｎｅｔａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１２７８９−８５４（１９９７）；Ｇｕｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ４４：５８６３−６（２００３）；Ｂｏｕｒｇｕｅｔｅｔａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ１３：１５６１−４（２００３）；Ｇｒｉｅｃｏｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ４３：６２９７−９（２００２）；Ｓｏｕｅｒｓｅｔａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ５７：７４３１−４８（２００１）；Ｔｓａｉｅｔａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ７：２９−３８（１９９９）；Ｖｉｒｇｉｌｉｏｅｔａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ５３：６６３５−４４（１９９７））に記載されている。βターン模倣剤は下記の模倣剤Ａおよび模倣剤Ｂを含む可能性もある。

アミノ酸配列βターン模倣剤置換を含むＰＹＹアナログポリペプチドは、天然ヒトＰＹＹ（配列番号２）を含み、当該配列中のｘとｘ＋１の位置のアミノ酸は、模倣剤Ａと模倣剤Ｂからなる群から選択されたβターン模倣剤で置換され、ｘは天然ヒトＰＹＹのアミノ酸位置８から１４のアミノ酸から選択される。あるいは、例えば、Ａｌａ−ＡｉｂジペプチドとＡｌａ−Ｐｒｏジペプチドといった既知のジペプチドターン誘導剤は、置換されてもよい。

アミノ酸配列置換を含むその他のＰＹＹアナログポリペプチドは、式（ＩＩ）（配列番号８８）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＸａａ_６Ｘａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＡｒｇＸａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＸａａ_３６
のＰＹＹアナログポリペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、ｄ−Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、ｄ−Ａｌａ、ホモリジン、ホモアルギニン、Ｇｌｕ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、もしくはＴｙｒ、
Ｘａａ_９はＧｌｙ、ＡｌａＳｅｒ、サルコシン、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１１はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリンＡｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ＳｅｒもしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_２６はＨｉｓもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｎ（Ｍｅ）Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＰ（２−３６）、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、もしくはｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹではないという条件である。

別の実施形態では、式ＩＩのＰＹＹアナログポリペプチドは、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＬｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）も含まない。

当業者に理解されるように、式ＩＩのポリペプチドは遊離の酸の形であるか、もしくはＣ末端がアミド化されてもよい。

アミノ酸配列置換を含むその他のＰＹＹアナログポリペプチドは、式（ＩＩＩ）（配列番号３４８）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＸａａ_６Ｘａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＡｒｇＸａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＸａａ_３６
のＰＹＹアナログポリペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、ｄ−Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、ｄ−Ａｌａ、ホモリジン、ホモアルギニン、Ｇｌｕ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、もしくはＴｙｒ、
Ｘａａ_９はＧｌｙ、ＡｌａＳｅｒ、サルコシン、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１１はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｎ（Ｍｅ）Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＮＰＹ（２−３６）、ＰＹＹ（２−３６）、ＰＰ（２−３６）、Ａｌａ^３ＮＰＹ、Ａｌａ^４ＮＰＹ、Ａｌａ^６ＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、Ｔｙｒ^７ｐＮＰＹ、Ａｌａ^９ＮＰＹ、Ａｌａ^１０ＮＰＹ、Ａｌａ^１１ＮＰＹ、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｇｌｙ^１４ＮＰＹ、Ａｌａ^１５ＮＰＹ、Ａｌａ^１６ＮＰＹ、Ａｌａ^１７ＮＰＹ、Ａｌａ^１９ＮＰＹ、Ｌｙｓ^１９ＮＰＹ、Ａｌａ^２１ＮＰＹ、Ａｌａ^２２ＮＰＹ、Ｌｙｓ^２５ＮＰＹ、Ａｌａ^２６ＮＰＹ、Ｐｈｅ^２７ＮＰＹ、Ａｌａ^２８ＮＰＹ、Ｇｌｎ^２９ＮＰＹ、Ａｌａ^３０ＮＰＹ、Ａｌａ^３１ＮＰＹ、Ｐｈｅ^３６ＮＰＹ、Ｈｉｓ^３６ＮＰＹ、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹ、Ｔｙｒ^１ＮＰＹ、Ａｌａ^７ＮＰＹ、もしくはｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹではないという条件である。

別の実施形態では、式ＩＩＩのアナログポリペプチドは、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＬｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）も含まない。

当業者に理解されるように、式ＩＩＩのポリペプチドは遊離の酸の形であるか、もしくはＣ末端がアミド化されてもよい。

アミノ酸配列置換を含むその他のＰＹＹアナログポリペプチドは、式（ＩＶ）（配列番号３４９）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＸａａ_６Ｘａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＡｒｇＸａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＸａａ_３６
のＰＹＹアナログポリペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、ｄ−Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、ｄ−Ａｌａ、ホモリジン、ホモアルギニン、Ｇｌｕ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、もしくはＴｙｒ、
Ｘａａ_９はＧｌｙ、ＡｌａＳｅｒ、サルコシン、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１１はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１２はＡｌａ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｎ（Ｍｅ）Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＰＹＹ（２−３６）、Ａｌａ^１３ＮＰＹ、Ｌｅｕ^３ｈＰＹＹ（３−３６）もしくはＶａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）ではないという条件である。

別の実施形態では、式ＩＶのＰＹＹアナログポリペプチドは、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｖａｌ^３０Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＬｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）も含まない。

当業者に理解されるように、式ＩＶのポリペプチドは遊離の酸の形であるか、もしくはＣ末端がアミド化されてもよい。

アミノ酸配列リンカー置換を含むその他のＰＹＹアナログポリペプチドは、ＰＹＹ（１−４）アミノカプロイル（１４−３６）（ＩＵＰＡＣ［Ａｃａ^５−１３］ＰＹＹ）（アミノカプロイルは「Ａｃａ」と略される）、ＰＹＹ（１−４）Ａｃａ（１５−３６）、ＰＹＹ（１−４）Ａｃａ（１６−３６）、ＰＹＹ（１−４）Ａｃａ（２２−３６）（ＩＵＰＡＣ［Ａｃａ^５−２１］ＰＹＹ）、およびＰＹＹ（１−４）Ａｃａ（２５−３６）（ＩＵＰＡＣ［Ａｃａ^５−２４］ＰＹＹ）（配列番号１８０−１８４）を含む。

ｂ．除去と切断
別の実施形態では、本発明のＰＰＹアナログポリペプチドは天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）から、単独もしくは一つ以上の挿入もしくは置換との組合せで一つ以上のアミノ酸残基除去を有してもよい。ある態様では、ポリペプチドが配列番号３ではないことを条件として、本発明のＰＰＹアナログポリペプチドは、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のＮ末端もしくはＣ末端から一つ以上のアミノ酸残基除去を有してもよい。別の実施形態では、本発明のＰＰＹアナログポリペプチドは天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のアミノ酸の位置２から３５での一つ以上の除去を有してもよい。当該の除去は、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のアミノ酸の位置２から３５での一つ以上の連続的もしくは非連続的な除去を含んでもよい。一部の実施形態では、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）の位置２４から３６でのアミノ酸残基は除去されない。

別の実施形態では、式ＩからＶＩＩで述べられた本発明のＰＰＦポリペプチドは、天然のＰＰＦポリペプチドの一つ以上の生物活性が保持される限りは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、またはＶＩＩの位置２から３５のアミノ酸に、Ｎ末端またはＣ末端の切断、もしくは内部除去を含んでもよい。一部の実施形態では、位置５から８および２４から３６のアミノ酸残基は除去されない。一部の実施形態では、位置５から８および３２から３５のアミノ酸残基は除去されない。

ｃ．挿入
別の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、単独で、あるいは一つ以上の除去および／または置換との組合せで、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のアミノ酸配列中に挿入された一つ以上のアミノ酸残基を有してもよい。ある態様では、本発明は、天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）のアミノ酸配列に一つの挿入、または連続的あるいは非連続的な一つ以上のアミノ酸残基の挿入を有するＰＹＹアナログポリペプチドに関する。一部の実施形態では、アミノ酸残基はヒトＰＹＹ（配列番号２）の位置２４から３６には挿入されない。

別の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、ＰＹＹ（配列番号２）の配列への一つ以上の非天然アミノ酸および／または非アミノ酸の挿入を含んでもよい。一部の実施形態では、ＰＹＹ（配列番号２）の配列に挿入された非天然アミノ酸はβターン模倣剤もしくはリンカー分子であってもよい。リンカー分子は、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、βアラニル、および８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルを含む。βターン模倣剤は、下記の模倣剤Ａおよび模倣剤Ｂと、Ａｌａ−ＡｉｂジペプチドとＡｌａ−Ｐｒｏジペプチドも含む可能性もある。

別の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、「伸張」もしくは「尾部」として知られるポリペプチドの末端のいずれかの位置にポリアミノ酸配列（ポリｈｉｓ、ポリａｒｇ、ポリｌｙｓ、ポリａｌａなど）の挿入を含んでもよい。

アミノ酸配列挿入を含むＰＹＹアナログポリペプチドは、天然のヒトＰＹＹの長さに沿った各アミノ酸位置にアラニン置換を含む。当該のＰＹＹアナログポリペプチドは、ｘが１’から３６までから選択されたＰＹＹ（＋Ａｘａ）を含む（配列番号５４−８７）。

ｄ．誘導体
本発明は、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドの誘導体にも関する。当該の誘導体は、例えば、ポリｈｉｓ、ポリａｒｇ、ポリｌｙｓ、およびポリａｌａなどのポリアミノ酸の追加によって、あるいは、短鎖アルキルと拘束されたアルキル（例えば分岐、環状、融合、アダマンチル）、および芳香族基などの小分子置換の追加によって、例えばポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）もしくは様々な長さの脂肪酸鎖（例えば、ステアリル、パルミトイル、オクタノイル）といった、一つ以上の水溶性ポリマー分子に結合されているＰＹＹアナログポリペプチドを含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマー分子は約５００Ｄａから２０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。

前記のポリマー結合は、ＰＹＹアナログポリペプチド配列中のＮ末端もしくはＣ末端、またはアミノ酸残基の側鎖に単独で生じる場合がある。あるいは、ＰＹＹアナログポリペプチドの複数の誘導体化部位である場合もある。リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステインでの一つ以上のアミノ酸置換で、誘導体化の更なる部位を与えてもよい。例として、米国特許第５，８２４，７８４号および米国特許第５，８２４，７７８号を参照。一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドは一つ、二つ、あるいは三つのポリマー分子に結合されてもよい。

一部の実施形態では、水溶性ポリマー分子は、アミノ基、カルボキシ基、もしくはチオール基に結合され、またＮ末端もしくはＣ末端、またはリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、もしくはシステインの側鎖で結合されてもよい。あるいは、水溶性ポリマー分子は、ジアミンおよびジカルボキシル基で結合されてもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、リジンアミノ酸上のイプシロンアミノ基を通じて一つ、二つ、あるいは三つのＰＥＧ分子に結合される。

本発明のＰＹＹアナログポリペプチド誘導体は、一つ以上のアミノ酸残基に化学変換を持つＰＹＹアナログポリペプチドも含む。当該の化学変換は、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、および環化を含む。化学変換は、ＰＹＹアナログポリペプチド配列中のＮ末端もしくはＣ末端、またはアミノ酸残基の側鎖に単独で生じる場合がある。ある実施形態では、これらのペプチドのＣ末端が遊離の−ＯＨ基、あるいは−ＮＨ_２基を有する場合もある。別の実施形態では、Ｎ末端はイソブチルオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、ｎ−ブチルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、イソカプロイル基（「イソキャップ」）、オクタニル基、オクチルグリシン基（「Ｇ（Ｏｃｔ）」もしくは「ｏｃｔｙｌＧｌｙ」として示される）、８−アミノオクタン酸基、ダンシル、および／またはＦｍｏｃ基でキャップされてもよい。一部の実施形態では、環化はジスルフィド架橋の形成を介する場合がある。例として、ＳＥＱＩＤＮＯ．１７１を参照。あるいは、ＰＹＹアナログポリペプチドに複数部位の化学変換がある場合がある。

一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチド誘導体は、一つ以上のアミノ酸残基に化学変換を有するＰＹＹアナログポリペプチド含んでもよい。これらの化学変換は、ＰＹＹアナログポリペプチド配列中のＮ末端もしくはＣ末端、またはアミノ酸残基の側鎖に単独で生じる場合がある。典型的な実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドはボルトンハンター基を含むよう化学変換される。ボルトンハンター試薬は、当業者に知られており（“Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍｅｔｈｏｄｓ，”Ａ．Ｅ．ＢｏｌｔｏｎａｎｄＷ．Ｍ．Ｈｕｎｔｅｒ，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙの第２６章，ＶｏｌｕｍｅＩ，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ編，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８６）、リジンのアミノ末端アルファアミノ基もしくはイプシロンアミノ基を介して中性結合を持つチロシン様部分の誘導に用いられてもよい。一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドのＮ末端は、ボルトンハンター基で改変される。一部の実施形態では内部のリジン残基は、ボルトンハンター基で改変される。一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドに複数のボルトンハンター改変があってもよい。ポリペプチド改変に使用されるボルトンハンター試薬は市販されており、水溶性のボルトンハンター試薬、スルホスクシンイミジル−３−［４−ヒドロフェニル］プロピオン酸（ＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、およびボルトンハンター試薬−２、Ｎ−スクシンイミジル３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオン酸（ＷａｋｏＰｕｒｅＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ，ｃａｔａｌｏｇ＃１９９−０９３４１）を含んでもよいがそれに限定されない。アミド結合を介してＰＹＹアナログポリペプチドに結合した典型的なボルトンハンター基の、波線がアミド結合を通る図を下に図解する。

ＰＹＹアナログポリペプチドは、ボルトンハンター改変の前か後にヨウ素化（例えば、放射線標識された^１２５Ｉ）してもよい。^１２５Ｉ−ボルトンハンター標識されたＰＹＹもしくはＰＹＹアナログは、ＡｍｅｒｓｈａｍＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）から購入してもよい。ボルトンハンター誘導体は、表４で「ＢＨ−改変」と略される。（配列番号４７５−４８０）。

ｅ．アナログと誘導体
一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドは上述の改変、即ち、除去、挿入、および置換の組合せを含む。

一例として、ＰＹＹアナログポリペプチドは、一つ以上のアミノ酸置換との組合せでＮ末端の除去を含む場合がある。例えば、ＰＹＹアナログポリペプチドはＡｌａ^３、Ｌｅｕ^３、Ｐｒｏ^３、Ａｌａ^４、Ｇｌｙ^４、ｄ−Ａｌａ^４、ホモリジン^４、Ｇｌｕ^４、Ａｌａ^５、Ａｌａ^６、Ｖａｌ^６、ｄ−Ａｌａ^７、Ｔｙｒ^７、Ｈｉｓ^７、Ａｌａ^８、Ａｌａ^９、Ａｌａ^１０、Ａｌａ^１１、ｄ−Ａｌａ^１２、Ａｌａ^１３、ホモセリン^１３、Ａｌａ^１４、Ａｌａ^１５、Ｇｌｎ^１５、Ａｌａ^１６、Ａｌａ^１７、Ｍｅｔ^１７、Ａｌａ^１８、Ｓｅｒ^１８、ｎｏｒ−Ｖａｌ^１８、Ａｌａ^１９、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ^１９、Ｌｙｓ^１９、ホモアルギニン^１９、Ａｌａ^２０、Ａｌａ^２１、ｄ−Ａｌａ^２２、Ａｌａ^２３、Ａｌａ^２４、Ａｌａ^２５、Ｌｙｓ^２５、ホモアルギニン^２５、Ａｌａ^２６、Ａｌａ^２７、Ａｌａ^２８、Ａｌａ^２９、Ａｌａ^３０、Ａｌａ^３１、Ａｌａ^３２、Ａｌａ^３３、Ｌｙｓ^３３、Ａｌａ^３４、Ａｌａ^３５、Ａｌａ^３６、Ｈｉｓ^３６、Ｔｒｐ^３６、Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ^３６、およびＰｈｅ^３６のアミノ酸置換を一つ以上含むＰＹＹ（３−３６）を含む。一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドは、一つ、二つ、あるいは三つのアミノ酸置換を含む。特定のＰＹＹアナログポリペプチドはアミノ酸挿入との組合せで除去を含む。（例えば、配列番号８９−１７４を参照）。

ＰＹＹアナログポリペプチドは、式（Ｖ）（配列番号３５０）：
Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＸａａ_６Ｘａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２
Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９ＴｙｒＸａａ_２１Ｘａａ_２２
Ｘａａ_２３ＬｅｕＡｒｇＸａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０Ｘａａ_３１Ｔｈｒ
ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＸａａ_３６
のポリペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、ｄ−Ａｌａ、ホモリジン、もしくはホモアルギニン、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、もしくはＴｙｒ、
Ｘａａ_９はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、サルコシン、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１１はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、もしくはＧｌｙ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＮｏｒＶａｌ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、もしくはＴｈｒ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはｄ−Ａｌａ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはホモセリン、
Ｘａａ_２６はＨｉｓもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、Ａｌａ、ＮｏｒＶａｌ、もしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_３１はＡｌａもしくはＶａｌ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｎ（Ｍｅ）Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、もしくはＴｒｐであり、
前記のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチドではないという条件である。

当業者が認識するように、式Ｖのポリペプチドは遊離酸の形であっても良く、あるいはＣ末端がアミド化されてもよい。

また、式ＩＩからＶＩＩのＰＹＹアナログポリペプチドは本発明の範囲に含まれているように、示されたアミノ酸残基は化学改変もしくは（例えば、脂肪酸誘導体、ＰＥＧ化、アミド化、グリコール化などを介して）誘導体化されている。また、示されたアミノ酸がＤアミノ酸残基であるのは本発明の範囲として意図されている。

一部の実施形態では、ＰＹＹアナログポリペプチドは内部除去を有する式ＩＩからＶＩＩのポリペプチドを含み、特に、本明細書に述べられるように、その領域はＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフに一致しない。

非天然アミノ酸の置換を含むＰＹＹアナログポリペプチドは、ｘおよびｘ＋１の位置のアミノ酸が模倣剤Ａと模倣剤Ｂからなる群から選択されたβターン模倣剤で置換され、ｘが位置８から１４までから選択されたＰＹＹ（３−３６）を含む（例として、配列番号２１１−２１７および２３１−２３７を参照）。

本発明のＰＹＹアナログポリペプチドの誘導体は、ポリマー結合ＰＹＹアナログポリペプチドを含んでもよく、当該のＰＹＹアナログポリペプチドは上述の任意の挿入、除去、置換、もしくはそれらの組合せを含み、ポリマー分子はリジン残基で結合する。その他のＰＹＹアナログポリペプチド誘導体は、［Ｌｙｓ^４−脂肪酸鎖］ＰＹＹ（３−３６）；［Ｌｙｓ^４−脂肪酸鎖］ＰＹＹ（４−３６）；［Ａｌａ^２Ｌｙｓ^１９−脂肪酸鎖］ＰＹＹ（３−３６）；［Ｉｌｅ^３−脂肪酸鎖］ＰＹＹ（３−３６）；［Ｓｅｒ^１３−ＯＡｃ］ＰＹＹ（３−３６）（ＯＡｃは脂肪酸鎖もしくはアセチル基をもつＯ−アセチル化）；［Ｓｅｒ^２３−ＯＡｃ］ＰＹＹ（３−３６）；［Ｉｌｅ^２−オクタノイル鎖］ＰＹＹ（３−３６）；［Ｌｙｓ^１９−オクタノイル鎖］ＰＹＹ（３−３６）；および［Ｌｙｓ^１９−ステアリル鎖］ＰＹＹ（３−３６）の置換と変換を含むＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）もしくはＰＹＹ（４−３６）を含む。（例として、配列番号１８５−２０８を参照）。

本発明のＰＹＹアナログポリペプチドの更なる例は、配列表と以下の実施例の項に提供される。

２．ＰＰＦキメラポリペプチド
本発明のさらに別の態様では、本発明のＰＰＦポリペプチドは、一つ以上の第二のＰＰ、ＰＹＹ、もしくは、ＮＰＹポリペプチドの追加断片に共有的に結合したＰＰ、ＰＹＹ、もしくは、ＮＰＹポリペプチドの断片を含むＰＰＦキメラポリペプチドを含む。当該の各ＰＰ、ＰＹＹ、もしくは、ＮＰＹ断片はＰＰＦモチーフを含む。あるいは、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、１、２、３、もしくは４のポリペプチド断片に結合し、結合したポリペプチド断片の一つ以上が第二のＰＰファミリーポリペプチドの断片であるＰＰファミリーポリペプチドの断片を含んでもよい。ある実施形態では、ＰＰＦポリペプチドはＣ末端ＮＰＹ断片と共にＮ末端ＰＰ断片を含まない。本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然ＰＹＹ（３−３６）と少なくとも５０％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、前記のＰＰＦキメラポリペプチドはＰＹＹ（３−３６）の全長にわたって天然ＰＹＹ（３−３６）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。前記の本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、天然のＰＰと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。さらに別の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドは天然のＮＰＹと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示してもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、少なくともＮ末端ポリプロリンＰＰＦモチーフとＣ末端の尾部ＰＰＦモチーフを含む。

さらに、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、一般的に、天然のヒトＰＰ、ＰＹＹ、もしくはＮＰＹの生物活性の少なくとも一部分を保持する。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは代謝状態と代謝障害の治療と予防において生物活性を示す。

ポリペプチド断片は、直接的なアミド結合もしくは化学的リンカー基を含むがそれに限定されない、当業者に知られる任意の方法で共有的に互いに結合されてもよい。化学的リンカーは、ポリペプチドの構造を誘導あるいは安定化するペプチド模倣剤を含んでもよい。本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹ−ＰＰ、ＰＹＹ−ＮＰＹ、ＰＰ−ＰＹＹ、ＰＰ−ＮＰＹ、ＮＰＹ−ＰＰ、もしくはＮＰＹ−ＰＹＹキメラを含む。

本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、少なくとも、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、もしくはの３４の長さのアミノ酸であってもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは天然のＬアミン酸残基および／または改変された天然のＬアミノ酸残基のみを含む。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは非天然アミノ酸残基を含まない。

一部の実施形態では、本発明のＰＹＹキメラポリペプチドは、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７、１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２１−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２２−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７，２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｇＰＰ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｈｉｓ^３４−ｈＰＰｈＰＰ（１−７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２−ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰ、もしくはｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰを含まない。

一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＰＰファミリーアナログポリペプチドの断片を含んでもよい。例えば、ＰＰＦキメラポリペプチドは、本明細書で述べられたＰＰＦキメラポリペプチドおよびＰＰアナログポリペプチド、およびＮＰＹアナログポリペプチドを含んでもよい。

ＰＹＹアナログポリペプチドは、本明細書で述べられたアッセイ（食物摂取、胃内容排出、膵臓分泌、体組成、もしくは体重減少アッセイなど）の一つで、同じアッセイにおけるＮＰＹ、ＰＹＹ、もしくはＰＹＹ（３−３６）の効力と同等かそれ以上の効力を有するポリペプチドである。一部の実施形態では、本発明のＰＹＹアナログポリペプチドは、ＰＰ、ＮＰＹ、ＰＹＹ、もしくはＰＹＹ（３−３６）に比べて製造の容易さ、安定性、および／または製剤の容易さに改善を示す可能性がある。

一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは栄養素利用性の低減、食物摂取の減少、体重増大の効果、およびまた代謝状態と代謝障害の治療と予防に関する天然のヒトＰＹＹの生物活性の少なくとも約２５％、もしくは約３０％から、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、もしくは約９９％を保持する。別の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは向上したＰＹＹ作動薬活性を示す。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは栄養素利用性の低減、食物摂取の減少、体重増大の効果、および／または代謝状態と代謝障害の治療と予防に関する天然のヒトＰＹＹの生物活性の、少なくとも約１１０％、約１２５％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、もしくはそれ以上を示す。

より具体的に、ある態様では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＰＹＹの断片に結合したＰＰの断片を含む。ある実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＰＹＹもしくはＰＹＹアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＰＰもしくはＰＰアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＰＰ、もしくはＰＰアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、もしくはＰＹＹアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。

一部の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮＰＹの断片に結合したＰＰＹの断片を含む。ある実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＮＰＹもしくはＮＰＹアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、もしくはＰＹＹアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＰＹＹ、もしくはＰＹＹアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＮＰＹ、もしくはＮＰＹアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。
一部の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＮＰＹの断片に結合したＰＰの断片を含む。ある実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＮＰＹもしくはＮＰＹアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＰＰ、もしくはＰＰアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドはＣ末端の端でＰＰ、もしくはＰＰアナログポリペプチドのＣ末端断片に結合したＮＰＹ、もしくはＮＰＹアナログポリペプチドのＮ末端断片を含む。

一部の実施形態では、ＰＰ、ＰＰアナログポリペプチド、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、ＰＹＹアナログポリペプチド、ＮＰＹもしくはＮＰＹアナログポリペプチドの断片は、ＰＰ、ＰＰアナログポリペプチド、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、ＰＹＹアナログポリペプチド、ＮＰＹもしくはＮＰＹアナログポリペプチドのアミノ酸残基４から２０までの任意の場所に含む断片である。一部の実施形態では、少なくとも３４アミノ酸の長さの最終ＰＰＦキメラポリペプチドを得るように断片の長さが選択される。

本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、前記のＰＰＦキメラポリペプチドのアミノ酸配列への置換、除去、および挿入などを含むがそれに限定されない、さらなる改変とその任意の組合せを含んでもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは非必須のアミノ酸残基の一つ以上の改変を含む。本発明の文脈では、非必須のアミノ酸残基は天然のヒトアミノ酸配列の断片、例えばＰＰファミリーポリペプチド断片において、ＰＰＦキメラポリペプチドのＰＹＹ作動薬活性を損なうあるいは著しく減じることなしに変換可能な、即ち除去または置換可能なアミノ酸残基である。

本発明は、ＰＰＦキメラポリペプチドの誘導体にも関する。当該の誘導体は、例えばポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）もしくは様々な長さの脂肪酸鎖（例えば、ステアリル、パルミトイル、オクタノイル）といった、一つ以上の水溶性ポリマー分子に結合した、あるいは、例えばポリｈｉｓ、ポリａｒｇ、ポリｌｙｓ、およびポリａｌａなどのポリアミノ酸の追加によって結合されているＰＰＦキメラポリペプチドを含む。ＰＰＦキメラポリペプチドの改変は、短鎖アルキルと拘束されたアルキル（例えば分岐、環状、融合、アダマンチル）、および芳香族基などの小分子置換を含んでもよい。一部の実施形態では、水溶性ポリマー分子は約５００Ｄａから２０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。

前記のポリマー結合と小分子置換改変は、ＰＰＦキメラポリペプチドの配列中のＮ末端もしくはＣ末端で、またはアミノ酸残基の側鎖で単独で生じてもよい。あるいは、ＰＰＦキメラポリペプチドの複数の誘導体化部位である場合もある。リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステインでの一つ以上のアミノ酸置換で誘導体化の更なる部位を与えてもよい。例として、米国特許第５，８２４，７８４号および米国特許第５，８２４，７７８号を参照。一部の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドは一つ、二つ、あるいは三つのポリマー分子に結合されてもよい。

一部の実施形態では、水溶性ポリマー分子はアミノ基、カルボキシ基、もしくはチオール基に結合され、またＮ末端もしくはＣ末端、またはリジンアスパラギン酸、グルタミン酸、もしくはシステインの側鎖で結合されてもよい。あるいは、水溶性ポリマー分子はジアミンおよびじカルボキシル基で結合されてもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦキメラポリペプチドは、リジンアミノ酸上のイプシロンアミノ基を通じて一つ、二つ、あるいは三つのＰＥＧ分子に結合される。

本発明のＰＰＦキメラポリペプチド誘導体は、一つ以上のアミノ酸残基に化学変換を持つＰＰＦキメラポリペプチドも含む。当該の化学変換は、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、および環化を含む。化学変換は、ＰＰＦキメラポリペプチド配列中のＮ末端もしくはＣ末端、またはアミノ酸残基の側鎖に単独で生じる場合がある。ある実施形態では、これらのペプチドのＣ末端が遊離の−ＯＨ基、あるいは−ＮＨ_２基を有する場合もある。別の実施形態では、Ｎ末端はイソブチルオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、ｎ−ブチルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、イソカプロイル基（「イソキャップ」）、オクタニル基、オクチルグリシン基（「Ｇ（Ｏｃｔ））、あるいは８−アミノオクタン酸基でキャップされてもよい。一部の実施形態では、環化はジスルフィド架橋の形成を介する場合がある。あるいは、ＰＹＹアナログポリペプチドに複数部位の化学変換がある場合がある。

一部の実施形態では、ＰＰＦキメラポリペプチドはＳＥＱＩＤＮＯｓ．２３８−３４７のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

本発明のＰＰＦキメラポリペプチドの例は配列表に提供され、後述の実施例の項でさらに論じられる。

その他のＰＰＦポリペプチドは式（ＶＩ）（配列番号４８１）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＧｌｕＸａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｇｌｕ
ＡｓｐＸａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４ＧｌｕＸａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＸａａ_２５Ｘａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＸａａ_３５Ｘａａ_３６
のペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、もしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ｇｌｙ、もしくはＨｉｓ、
Ｘａａ_９はＧｌｙもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕもしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２２はＡｌａもしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、Ａｌａ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕもしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＶａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_３５はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、もしくはＡｒｇ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＰＹＹ（２−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＰｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹではないという条件である。

当業者が認識するように、式ＶＩのポリペプチドは遊離酸の形であっても良く、あるいはＣ末端がアミド化されてもよい。

一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは原則的に天然のヒトＮＰＹ（配列番号４）のアミノ酸残基１８−１６からなるＣ末端断片に結合した、原則的に天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）の最初の１７アミノ酸残基からなるＮ末端断片を含んでもよい。当該の断片は、ＰＹＹ断片のＮ末端の一つ以上のアミノ酸残基が除去されていても、もしくは欠失してもよく、各ＰＹＹおよびＮＰＹ断片に１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０のアミノ酸置換が行われてもよい。一部の実施形態では、原則的にＰＰＦポリペプチドの最初の１７アミノ酸残基からなるＮ末端断片は天然ＰＹＹの最初の１７アミノ酸残基に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、原則的にアミノ酸残基１８−３６からなるＰＰＦポリペプチドのＣ末端断片は天然ＮＰＹのアミノ酸残基１８−３６に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、ＰＹＹのＮ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置５および８のプロリン、位置６、１０および１５のグルタミン酸、もしくは位置１１のアスパラギン酸）、および／またはＮＰＹのＣ末端断片のアミノ酸（例えば、位置２０および２７のチロシン、位置２４のロイシン、位置２９のアスパラギン、位置３２のスレオニン、位置３３のアルギニン、位置３４のグルタミン）は置換されない。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮｏ．２６６、２６７、２７４、２８２、３２０および４３６から４８０までのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドはさらにＮ末端キャップを含む。これらのＰＰＦポリペプチドの例は、配列番号２８２、３２０、４３７、４４１、４４４、４４５−４４７、４５２、４５４−４５９、４６１−４６４、４６６、４６８−４７０および４７２−４８０を含む。

その他のＰＰＦポリペプチドは式（ＶＩＩ）（配列番号４８２）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＰｒｏＸａａ_４ＰｒｏＸａａ_６ＨｉｓＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７ＡｌａＸａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＸａａ_２５Ｘａａ_２６Ｘａａ_２７Ｘａａ_２８Ｘａａ_２９Ｘａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＴｙｒ
のペプチドを含み、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒもしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、もしくはＶａｌ、
Ｘａａ_９はＧｌｙもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１１はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕもしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、Ａｌａ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_２７はＴｙｒ、もしくはＰｈｅ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、もしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_２９はＡｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、もしくはＭｅｔ、および
Ｘａａ_３１はＶａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕである。

当業者が認識するように、式ＶＩＩのポリペプチドは遊離酸の形であっても良く、あるいはＣ末端がアミド化されてもよい。

一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは原則的に天然のヒトＮＰＹ（配列番号４）のアミノ酸残基１８−１６からなるＣ末端断片に結合した、原則的に天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）の最初の１７アミノ酸残基からなるＮ末端断片を含んでもよい。当該の断片は、ＰＹＹ断片のＮ末端の一つ以上のアミノ酸残基が除去されていても、もしくは欠失してもよく、各ＰＹＹおよびＮＰＹ断片に１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０のアミノ酸置換が行われてもよい。一部の実施形態では、原則的にＰＰＦポリペプチドの最初の１７アミノ酸残基からなるＮ末端断片は天然ＰＹＹの最初の１７アミノ酸残基に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、原則的にアミノ酸残基１８−３６からなるＰＰＦポリペプチドのＣ末端断片は天然ＮＰＹのアミノ酸残基１８−３６に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、もしくは少なくとも９７％の配列相同性を示す。一部の実施形態では、ＰＹＹのＮ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置３、５および８のプロリン、もしくはヒスチジン７）、および／またはＮＰＹのＣ末端断片のアミノ酸（例えば、位置１８のアラニン、位置２０と３６のチロシン、位置２４のロイシン、位置３２のスレオニン、位置３３のアルギニン、位置３４のグルタミン、もしくは位置３５のアルギニン）は置換されない。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドはＳＥＱＩＤＮｏ．２６６、４３７、４３８、４３９、４４２、４６２、４６９、４７０、４７１および４７２のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドはさらにＮ末端キャップを含む。これらのＰＰＦポリペプチドの例は、ＳＥＱＩＤＮｏ．４３７、４６２、４６９、４７０および４７２を含む。

本発明のＰＰＦポリペプチドの例は配列表に提供され、後述の実施例の項でさらに論じられる。

Ｂ．代謝状態もしくは代謝障害の治療もしくは予防におけるＰＰＦポリペプチドの利用
内因性のＮＰＹ（Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ４０４：６６１−７１（２０００）に概説されている）とＰＹＹ（Ｍｏｒｌｅｙｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲｅｓ．３４１：２００−３（１９８５））は、その受容体を介して摂食行動を増進すると一般的に受け入れられている。肥満治療のための方法は常にＹ受容体に拮抗しようとしてきた一方、拒食症治療のための要求はこのリガンドファミリーの作動薬に向けられてきた。しかし、共有された係属中の米国特許出願第２００２０１４１９８５号に述べられ主張されるように、驚くべきことに特許文献と科学文献で報告された中で示唆されたように栄養素利用性を増強するのではなく（例として、ＰＹＹ受容体作動薬の体重増加への利用を開示する、米国特許第５，９１２，２２７号および米国特許第６，３１５，２０３号を参照。）、ＰＹＹアナログポリペプチドの末梢投与が栄養素利用性を減少させる強力な効果を有することが発見された（Ｂａｔｔｅｒｈａｍｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ４１８：６５０−４，２００２、国際公開第０３／０２６５９１号、および国際公開第０３／０５７２３５号も参照）。食物摂取阻害、胃内容排出の減速、胃酸分泌阻害、および膵酵素分泌阻害の作用スペクトルは、例えば１型、２型糖尿病、および妊娠性糖尿病、肥満、ならびにその他のインスリン耐性症候群（症候群Ｘ）の徴候といった、代謝疾患において臨床的な利益を発揮する上で、また栄養素利用性減少のためのその他の任意の利用に有用である。

前記のように、本発明の別の態様では肥満の治療もしくは予防の方法が提供される。当該の方法は、それを必要とする対象への治療的または予防的に有効な量のＰＰＦポリペプチドの投与を含む。一部の実施形態では、対象は肥満もしくは過体重の対象である。「肥満」とは一般的に体重指数が３０以上と定義されるが、本開示の目的のため減量を必要とする、もしくは減量を望む体重指数が３０未満の者を含む任意の対象が「肥満」の範囲に含まれる。インスリン耐性、グルコース不耐性、もしくは任意の種類の糖尿病（例えば、１型、２型、および妊娠性糖尿病）である対象は、この方法から利益を得られる。

本発明の別の態様では、食物摂取の減少、栄養素利用性の減少、減量をもたらす、体組成に影響を及ぼす、また体のエネルギー内容を変化させる、もしくはエネルギー消費を増加させる、糖尿病を治療する、および脂質プロファイルを改善させる（ＬＤＬコレステロールの減少および／またはトリグリセリド濃度の減少および／またはＨＤＬコレステロール濃度の変化を含む）方法を提供する。当該の方法は、有効量の本発明のＰＰＦポリペプチドの対象への投与を含む。一部の実施形態では、本発明の方法はそれを必要とする対象における栄養素利用性の減少により緩和され得る状態もしくは障害の治療もしくは予防に用いられ、治療的または予防的に有効な量の本発明のＰＰＦポリペプチドの前記の対象への投与を含む。前記の状態と障害は、高血圧、異常脂質血症、心臓血管疾患、摂食障害、インスリン耐性、肥満、および任意の種類の糖尿病を含むがそれに限定されない。

理論による限定を意図せずに、本発明のＰＰＦポリペプチドの末梢投与の効果は、食物摂取の減少、胃内容排出の減速、栄養素利用性の減少、および減量において、一つ以上の固有の受容体クラス、あるいはＰＰファミリーのそれと類似の受容体クラスとの相互作用によって判定される。より具体的には、受容体もしくはＰＹＹ選択的（またはＹ７）受容体に類似した受容体が関与しているようである。

本発明に有用なさらなるアッセイは、ＰＰＦ化合物の体組成に対する作用を測定できるアッセイを含む。例となるアッセイは、代謝疾患のための食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスモデルを利用するものである。治療期間の前に、オスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに４週齢から始めて高脂肪食（＃Ｄ１２３３１、脂肪からのカロリー５８％；ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．）を６週間与えてもよい。調査中、マウスは高脂肪食を食べ続けてもよい。水は研究を通じて無制限に提供してもよい。ＤＩＯグループと代謝パラメーターを比較する目的で、同様の年齢の非肥満マウスの一群に低脂肪食（＃Ｄ１２３２９、脂肪からのカロリー１１％）を与えてもよい。

ＤＩＯマウスは、溶媒（５０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）水溶液）ｎ＝２０あるいは本発明の化合物ｎ＝１２を送達するために皮下（ＳＣ）肩甲骨内浸透圧ポンプを埋め込まれてもよい。後者の群のポンプは、例えば、本発明の化合物１０００μｇ／ｋｇ／日といった任意の量を７日間送達するために設定されてもよい。

体重と食餌摂取を研究期間を通じて一定間隔で測定してもよい。呼吸商（ＲＱ、ＣＯ_２生成÷Ｏ_２消費として定義される）と代謝速度は動物全身間接熱量測定計（Ｏｘｙｍａｘ，ＣｏｌｕｍｂｕｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を用いて測定してもよい。マウスは、イソフルレンの過剰投与で安楽死させ、脂肪過多症の指標（両側の副睾丸脂肪体重量）を測定してもよい。さらに、副睾丸重量の測定前に、各マウスの体組成（除脂肪量、脂肪量）を二重エネルギーＸ線吸収（ＤＥＸＡ）装置（ＬｕｎａｒＰｉｘｉｍｕｓ，ＧＥＩｍａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）で、メーカーの取扱書の指示に従って解析してもよい。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは本明細書で述べられたアッセイ（食物摂取アッセイ、胃内容排出アッセイ、膵臓分泌物アッセイ、体重減少アッセイ、または体組成アッセイを含む。）の一つで効力を有し、同じアッセイでＰＰ、ＮＰＹ、ＰＹＹ、もしくはＰＹＹ（３−３６）より高い効力を有するポリペプチドである。

食物摂取の減少、体重減少、もしくは肥満の治療の結果としてのそれを必要とする対象における高血圧の緩和に加えて、本発明の化合物は実施例４に述べられたような高血圧の治療に用いられてもよい。

本発明の化合物は、膵島または膵臓細胞におけるグルコース応答性の増強、誘導、強化、および回復にも有用である可能性がある。それらの作用は、上述、および米国特許出願第２００４０２２８８４６号に述べられたような、糖尿病に関連した状態の治療もしくは予防に有用である可能性がある。前述の活性測定のためのアッセイは当業者に知られている。例えば、公開された米国特許出願第２００４０２２８８４６号（全体を参照して本明細書に組み入れられる）には、膵島の単離と培養、また胎児の膵島成熟測定のためのアッセイが述べられいる。米国特許出願第２００４０２２８８４６号の実施例中の膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）、神経ペプチドＫ（ＮＰＫ）、ＰＹＹ、セクレチン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、およびボンベシンなどの腸由来のホルモンペプチドはＳｉｇｍａから購入した。ＸＩ型コラゲナーゼはＳｉｇｍａから入手した。ＲＰＭＩ１６４０培地およびウシ胎児血清はＧｉｂｃｏから入手した。抗インスリン抗体を含む放射線イムノアッセイキット（［ ^１２５Ｉ］−ＲＩＡｋｉｔ）はＬｉｎｃｏ，ＳｔＬｏｕｉｓから購入した。

分娩後のラットの膵島はＰ−０２齢のラットから得た。成獣ラットの膵島は、６−８週齢のラットから得た。ラット胎児の膵島は以下のように得た。妊娠したメスのラットを妊娠２１日目に屠殺した。胎児を子宮から取り出した。各胎児から１０−１４の膵臓を解剖しハンクス緩衝液で２回洗浄した。膵臓をプールして６ｍＬの１ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ（ＴｙｐｅＸＩ、Ｓｉｇｍａ）に懸濁し、絶えず振盪しながら３７℃で８−１０分間インキュベートした。１０倍量の氷冷したハンクス緩衝液を加えることで消化を止め、次にハンクス緩衝液で３回洗浄した。膵島をフィコール勾配で精製し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）／ＲＰＭＩ培地中で１μＭＩＢＭＸ添加有りと無しで培養した。５日間の終わりに２０の膵島を手作業で選び、各試験管に入れ静的インスリン放出をアッセイした。一般的には、膵島をＫＲＰ緩衝液で一次洗浄し、次に３ｍＭの（低）グルコースを含む１ｍＬのＫＲＰ緩衝液で３７℃で絶えず振盪しながら３０分間インキュベートした。上澄を回収した後、膵島を１７ｍＭの（高）グルコースで３７℃で１時間インキュベートした。低グルコースまたは高グルコース刺激で放出されたインスリンを［ ^１２５Ｉ］−ＲＩＡｋｉｔを用いて放射線イムノアッセイ（ＲＩＡ）によりアッセイした。２１の胎児膵島を２００ｎｇ／ｍＬのＰＹＹ、ＰＰ、ＣＣＫ、ＮＰＫ、ＮＰＹ、セクレチン、ＧＬＰ−１もしくはボンベシンの存在下で５日間培養した。

またインビボアッセイの例は、標準齧歯類試料Ｐｕｒｉｎａ５００８を与えた全てのｆａ／ｆａオスで自発的に糖尿病を発現する近交系ラット（＞Ｆ３０世代）モデル、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットのオスを用いて提供される。ＺＤＦｆａ−ｆａオスで約７週齢で高血糖症が発症し始め、グルコース濃度（食餌あり）は１０から１１週齢で一般的は５００ｍｇ／ＤＬに達する。インスリン濃度（食餌あり）は、糖尿病発症中は高い。しかし、１９週齢までにインスリンは痩せたコントロール同腹子のレベルまで落ちる。肥満ラットの血漿のトリグリセリド濃度とコレステロール濃度は通常痩せたラットより高い。アッセイでは、各群６匹の７週齢のＺＤＦラットの３群はＡＬＺＡポンプを用いて１）溶媒コントロール、２）と３）それぞれ１００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈｒおよび５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈｒの二つの異なる用量のＰＹＹの１４日間輸液処理を受けた。輸液前と輸液後７日目と１４日目の４回、１）血漿グルコース濃度、２）血漿インスリン濃度、３）血漿トリグリセリド（ＴＧ）濃度の測定、同時に経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を行った。適宜、これらのアッセイは所望の活性をテストするために本発明の化合物とともに用いてもよい。

ＰＰＦポリペプチドとして意図されるその他の使用は、アルツハイマー病の治療、予防もしくは発症遅延のための中枢神経系のアルミニウム（Ａｌ）濃度減少のための方法である（米国特許第６，７３４，１６６号、全体を参照して本明細書に組み入れる）。Ａｌについての作用測定のためのアッセイは当業者に知られており、２倍体とＴｓマウスを用いるアッセイを米国特許第６，７３４，１６６号で見つけることができる。これらのマウスはＮａｌｇｅｎｅ（登録商標）ブランドの代謝ケージまたはポリプロピレンケージ中で個別に飼育され、実験前に３日の慣らし飼育を行った。マウスは、食べ物が供給されなかった安楽死前の１６時間を除いて、実験中は自由に餌（ＬａｂＤｉｅｔ（登録商標）ＮＩＨＲａｔａｎｄＭｏｕｓｔ／Ａｕｔｏ６Ｆ５Ｋ５２，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）と水を利用することができた。マウスは、各活性化合物もしくは食塩水を毎日皮下注射された。マウスは、ある実験では１３日間の終わりに屠殺され、別の実験では３日目で屠殺され、試料が採取された。マウスの脳試料は、清潔なテフロン（登録商標）ライナー中で重量を量り、低微量元素グレードの硝酸中で、マイクロウェーブ消化により解析のために調製された。次に、誘導結合プラズマ質量分析法（Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．，ＡｎｎａｌｓｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｃｉｅｎｃｅ２５，３，２６４−２７１（１９９５））を用いて試料のＡｌ含量の解析を行った。解析中の全ての組織の取扱いは、背景汚染を最小限にするために高性能粒子捕捉エアフィルターシステムを用いてクリーンルーム環境で行った。

本発明の化合物は広範囲の生物活性を示し、その一部は分泌抑制作用と腸運動抑制作用に関連する。化合物は、上皮細胞との直接作用によって、あるいは、恐らく、ホルモンもしくは腸分泌を刺激する神経伝達物質の分泌を抑制することによって消化管分泌を抑制する可能性がある。抗分泌作用は、胃分泌および／または膵臓分泌の阻害を含み、胃炎、膵炎、バレット食道、および逆流性食道炎などの疾患と障害の治療もしくは予防に有用である可能性がある。

本発明の化合物は、過剰腸電解質と水の分泌に関連した任意の数の胃腸障害（例としてＨａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＩｎｃｏ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１２ｔｈＥｄ．を参照）、また例えば、感染性下痢、炎症性下痢、短腸症候群、または回腸人工肛門造設術などの外科手術処置後に一般的に生じる下痢といった、吸収低下の治療に有用である。感染性下痢の例は、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えば、サルモネラ、カンピロバクター、およびクロストリジウム、もしくは原虫感染による）、もしくは、旅行者下痢（例えば、ノーウォークウイルスまたはレトロウイルス）を限定なしに含む。炎症性下痢の例は、吸収不良症候群、熱帯性スプルー、慢性膵炎、クローン病、下痢、および、過敏性腸症候群を限定なしに含む。また、本発明のペプチドは、例えば手術後もしくはコレラによる胃腸障害に伴う緊急もしくは命に関わる状況の治療に利用可能であることが見いだされている。

本発明の化合物は、単に腸の損傷に関連した症状（例えば、下痢）を治療するのとは対照的に、腸の損傷の治療と予防にも有用である可能性がある。前記の腸に対する損傷は、潰瘍性大腸炎、炎症性大腸炎、腸萎縮、腸粘膜喪失、および／または腸粘膜機能の喪失である、もしくはその結果である可能性がある（国際公開第０３／１０５７６３号参照、全体を参照して本明細書に組み入れる）。慢性的結腸炎症の単純で再現性があるラットモデルが、以前にＭｏｒｒｉｓＧＰ，ｅｔａｌ．，“Ｈａｐｔｅｎ− ｉｎｄｕｃｅｄｍｏｄｅｌｏｆｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｕｌｃｅｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｒａｔｃｏｌｏｎ．”Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９８９；９６：７９５−８０３で述べられている。比較的長期間の炎症と潰瘍を示し、厳密に管理された方法で結腸炎症の病態生理学研究を行うための、またヒトの炎症性大腸炎に適応可能である可能性がある新しい治療を評価するための機会が得られる。

前述の活性のアッセイは、国際公開第０３／１０５７６３号に述べられているように、２５０−３００ｇの範囲の１１週齢のオスＨＳＤラットを１２：１２時間明暗周期下で飼育し、標準齧歯類試料（ＴｅｋｌａｄＬＭ４８５，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と水の自由摂取を含む。動物は実験前に２４時間絶食させた。ラットを３％のイソフルランで麻酔し、３７℃に設定したアンカ上に置いた。直腸から経管栄養針を結腸に７ｃｍ挿入した。Ｍａｚｅｌｉｎ，ｅｔａｌ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｏｌｅｏｆｖａｇａｌａｆｆｅｒｅｎｔｓｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ−ｉｎｄｕｃｅｄｃｏｌｉｔｉｓｉｎｒａｔｓ．”ＪｕｔｏｎＮｅｒｖＳｙｓｔ．１９９８；７３：３８４５で述べられたように、５０％エタノール（ｖ／ｖ）に溶解したハプテン・トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を経管栄養針を介して、結腸内腔に３０ｍｇ／ｋｇの用量で合計容量０、０．４−０．６ｍＬを送達した。コントロール群は食塩水（０．９％のＮａＣｌ）を結腸内に投与された。

結腸炎誘導４日後に、結腸を麻酔し断頭術で安楽死させたラットから摘出した。切除した結腸と脾臓の重量を測定し、損傷の肉眼的形態評価のために結腸を写真撮影した。炎症は充血の領域と腸壁の厚さで定義された。

本発明の化合物は、膵臓腫瘍の治療もしくは予防（例えば、膵臓腫瘍の増殖阻害）に用いられてもよい。本発明の方法は腫瘍細胞の増殖低減を含む。本発明に従って治療され得る良性膵臓腫瘍細胞の種類は、漿液性嚢胞腺腫、小嚢胞腫瘍、固形嚢胞腫瘍（ｓｏｌｉｄｃｙｓｔｉｃｔｕｍｏｒ）などである。方法は、膵臓の管、腺房もしくは膵島から生じる癌腫といった悪性膵臓腫瘍細胞の増殖低減にも効果的である。米国特許第５，５７４，０１０号（全体を参照して本明細書に組み入れる）は、抗増殖作用試験のための例となるアッセイを提供する。例えば、米国特許第５，５７４，０１０号の特許は、ＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰａＣａ−２は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）などの供給源から市販されている二つのヒト膵臓腺癌の癌細胞系であることを提供する。二つの腫瘍細胞は、１０％ウシ胎児血清、２９．２ｍｇ／Ｌのグルタミン、２５μｇのゲンタマイシン、５ｍＬのペニシリン、ストレプトマイシン、およびファンギゾン溶液（ＪＲＨＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｎｅｘａ，Ｋａｎｓ．）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で３７℃でＮＡＰＣＯのウォータージャケット付きの５％ＣＯ_２インキュベーター中で培養した。全ての細胞系は、週に１、２回、癌細胞が単層コンフルエントに達したら０．２５％のトリプシン（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）で剥離した。細胞を５００ｇで７分間、４℃に冷やした遠心機でペレットにし、トリプシンを含まない強化されたＲＰＭＩ−１６４０培地に再懸濁した。生細胞を血球計算板上でトリパンブルー染色を用いて数えた。

各種細胞を１０，０００、２０，０００、４０，０００、および８０，０００細胞を９６穴マイクロカルチャープレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）にウェル当たり全容積２００μＬの培地に添加した。細胞をＰＹＹもしくはテストペプチドの添加前に２４時間接着させた。ペプチド添加前に新鮮な培地に交換した。ＰＹＹもしくはテスト化合物との膵臓癌細胞のインビトロ・インキュベーションは、６時間と３６時間の長さで続けた。ＰＹＹは細胞にウェル当たり２５０ｐｍｏｌ、２５ｐｍｏｌ、２．５ｐｍｏｌの用量で添加した（Ｎ＝１４）。テスト化合物は、細胞培養にウェル当たり４００ｐｍｏｌ、４０ｐｍｏｌ、および４ｐｍｏｌの用量で添加した。コントロールウェルには体積と接着した腫瘍細胞への生理的なかく乱を模倣するために２μＬの０．９％食塩水を添加した。各９６穴プレートは、実験の間各プレート内で比較できるように１８のコントロールウェルを含んだ。９６穴プレートはＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰａＣａ−２の両方の細胞で様々な濃度のＰＹＹとテスト化合物を用いて６回繰り返した。

インキュベーション期間の最後に、３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２−イル）−２，５−臭化ジフェニルテトラゾリウム、ＭＴＴ臭化テトラゾリウム（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を新鮮な培地に０．５ｍｇ／ｍＬで添加した。培地を交換し、腫瘍細胞を４時間ＭＴＴ臭化テトラゾリウムと３７℃でインキュベートした。インキュベーションの終わりに培地を吸引した。ホルマザン結晶の沈殿を２００μＬのジメチル・スルホキシド（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）に溶解した。溶解したホルマザンの定量は、ＥＬＩＳＡリーダー（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．）で５００ｎｍの波長の吸収を読みとることで行った。ＭＴＴアッセイは、ミトコンドリアＮＡＤＨに依存するデヒドロゲナーゼ活性を測定し、インビトロの腫瘍細胞の化学療法反応を定量するための最も感度がよく信頼できる方法である。（Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．，Ｓｃｕｄｉｅｒｏ，Ｄ．Ａ．，Ｍｏｎｋ，Ａ．，Ｈｕｒｓｅｙ，Ｍ．Ｌ．，Ｄｚｅｒｗｉｎｓｋｉ，Ｍ．Ｊ．，Ｆｉｎｅ，Ｄ．Ｌ．，Ａｂｂｏｔｔ，Ｂ．Ｊ．，Ｍａｙｏ，Ｊ．Ｇ．，Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ，Ｒ．Ｈ．ａｎｄＢｏｙｄ，Ｍ．Ｒ．，ＦｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｗｉｔｈｐａｎｅｌｓｏｆｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｕｓｉｎｇａｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍａｓｓａｙＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４８：５８９−６０１，１９８８；Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ，Ｊ．，ＤｅＧｒａｆｆ，Ｗ．Ｇ．，Ｇａｚｄａｒ，Ａ．Ｆ．，Ｍｉｎｎａ，Ｊ．Ｄ．ａｎｄＭｉｔｃｈｅｌｌ，Ｊ．Ｂ．，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ−ｂａｓｅｄｓｅｍｉａｕｔｏｍａｔｅｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙ：Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４７：９３６−９４２，１９８７；ＭｃＨａｌｅ，Ａ．Ｐ．，ＭｃＨａｌｅ，Ｌ．，Ｕｓｅｏｆａｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂａｓｅｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙｉｎａｓｓｅｓｓｉｎｇｐｈｏｔｏｒａｄｉａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｉｎｖｉｔｒｏ．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ．，４１：３１５−３２１，１９８８；ａｎｄＳａｘｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｈｕａｎｇ，Ｍ．Ｚ．，ＰｌａｎｔｅＤ．，Ｆｅｔｔｅｒｍａｎ，Ｈ．Ｆ．，Ｌｕｆｋｉｎ，Ｒ．Ｂ．，Ｓｏｕｄａｎｔ，Ｊ．，Ｃａｓｔｒｏ，Ｄ．Ｊ．，Ｌａｓｅｒａｎｄｄａｕｎｏｍｙｃｉｎｃｈｅｍｏｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｙｏｆｈｕｍａｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．ＬａｓｅｒＭｅｄ．ａｎｄＳｕｒｇ．，１０（５）：３３１−３３６，１９９２．）。５００ｎｍでの吸収読み取りの解析は、同じテスト条件のウェルをグループ化し、コントロールと様々な濃度のペプチド処理の間に生じた差を一元配置ＡＮＯＶＡで検証することで解析した。

例となるインビボアッセイも提供する。ペプチドＹＹおよびテスト化合物によるインビボ増殖阻害をヒト膵管腺癌ＭｉａＰａｃａ−２で検討した。７０，０００から１００，０００のヒトＭｉａＰａｃａ−２細胞を４８匹のオスの無胸腺マウスに同所移植した。１週間後、動物をＰＹＹかテスト化合物のいずれかで、ミニ浸透圧ポンプにおり２００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈｒで４週間処理した。組みにした培養は食塩水を与えた。屠殺時に双方の腫瘍の寸法と重量を測定した。コントロールマウスは組織切片により証明されたように、膵臓中のヒトの癌は顕著に増殖した。９週間目、コントロールマウスの９０％がかなりの転移性疾患を有していた。腫瘍体積は試験処理したマウスで６０．５％まで、ＰＹＹ処理したマウスは２７％まで減少した。

ＰＰＦポリペプチドは、単独あるいは医薬的に許容可能な担体または賦形剤との組合せで、単回投与または複数回投与で投与してもよい。これらの医薬化合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｂｙＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに開示されているような従来技術に従って、医薬的に許容可能な担体または希釈剤、またその他のアジュバントや賦形剤と共に製剤されてもよい。参照して本明細書に組み入れられるＷａｎｇ，Ｙ．Ｊ．ａｎｄＨａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．“ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＰｅｐｔｉｄｅｓ：ＳｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄＳｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ，”ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｒｅｎｔｅｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｅｃｈｎｉｃａｌＲｅｐｏｒｔＮｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ（１９８８も参照）。

ＰＰＦポリペプチドは、用量単位の形で供給されてもよい。例えば、体組成に影響するＰＰＦポリペプチドの治療的な有効量は患者の年齢と体重、患者の健康状態、使用されるその他の治療との組合せ、例えば全体的な減量および／または除脂肪体重の維持もしくは増加といった最終的な達成目標、またその他の要因など多くの要因により異なる。しかし、一般的な用量は、一日当たりの医薬化合物約０．０５μｇ約０．１μｇ、約１μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約５０μｇ、約７５μｇ、もしくは約１００μｇの下限から、約５０μｇ、約１００μｇ、約５００μｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、もしくは約１５０ｍｇの上限までである。また、１回分当たり化合物０．１μｇから１ｍｇまでといった、もしくは、１回分当たり約０．００１μｇ／ｋｇから約５００μｇ／ｋｇまでといったその他の用量範囲が意図される。一部の実施形態では、本発明のＰＰＦポリペプチドは１日当たり約０．５μｇから約５ｍｇの単回もしくは分割投与、または制御された連続的放出、または１回分当たり約０．０１μｇ／ｋｇから約５００μｇ／ｋｇまでの用量、または１回分当たり約０．０５μｇ／ｋｇから約２５０μｇ／ｋｇまでの用量で末梢的に投与される。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは約５０μｇ／ｋｇ未満の投与量で投与される。これらの範囲における投薬量は各アナログまたは誘導体の効力で異なり、またもちろん当業者により容易に決定され得る。

１日当たりの用量は、個別の単位用量で送達されるか、２４時間の間に連続的に供給されるか、もしくは、２４時間の任意の分割で投与されてもよい。１日当たりの投与回数は、１日１回からそれ以上の回数と言うこともあり得るが、約４回までであってもよい。連続送達は持続注入の形であり得る。その他の意図される例となる用量と注入速度は、個別の用量当たり０．０５ｎｍｏｌ／ｋｇから約２０ｎｍｏｌ／ｋｇ、または持続注入で約０．０１／ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎから約１０／ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎなどである。これらの用量と注入は、例えば、経口、舌下、経鼻、経肛門、膣内もしくは経皮送達により、または特定の部位への外科的埋め込みにより、静脈内投与（ｉ．ｖ．）、皮内投与、筋肉内投与、乳腺内投与、腹腔内投与、髄腔内投与、球後投与、肺内投与（例えば、末端放出）、皮下投与（ｓ．ｃ．）などの、任意の既知の従来の末梢方法もしくは将来開発される末梢方法により送達されてもよい。ｉ．ｖ．で与えられる医薬組成物の例となる送達当たりの総用量は、１日当たり約１μｇから約８ｍｇであってもよい一方、ｓ．ｃ．で与えられる医薬組成物の例となる送達当たりの総用量は、１日当たり約６μｇから約１６ｍｇであってもよい。

ある一般的な態様では、本発明の方法は、その他の体重調節化合物もしくは体脂肪調節化合物とＰＰＦポリペプチドとの組合せでの使用を含んでもよい。本発明の方法は、本発明のＰＹＹ、ＰＹＹ作動薬、もしくはＰＰＦポリペプチドは別々にあるいは例えば栄養素利用性の減少、食物摂取、体重、体重増加もしくは体組成を変化させるための長期作用または短期作用を示す一つ以上の他の化合物および組成物とともに投与されてもよい。前記の化合物は、アミリン、アミリン作動薬もしくはアミリンアナログ作動薬、サケのカルシトニン、コレシストキニン（ＣＣＫ）もしくはＣＣＫ作動薬、レプチン（ＯＢタンパク質）またはレプチン作動薬、エキセンディンもしくはエキセンディンアナログ作動薬、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１作動薬またはＧＬＰ−１アナログ作動薬、ＣＣＫ、ＣＣＫ作動薬、カルシトニン、カルシトニン作動薬、小分子カンナビノイドＣＢ１受容体拮抗剤、リモナバン、１１β−ヒドロキシステロイド・デヒドロゲナーゼ−１阻害剤、シブトラミン、フェンテルミン、および、食欲制御といったその他の肥満治療のために市販されている薬剤からなるその他の化合物および組成物を含むがそれに限定されない。これらの化合物は組合せで、同時に、または連続的に投与されてもよい。適切なアミリン作動薬は、例えば、［^{２５，２８，２９}Ｐｒｏ−］ヒトアミリン（「プラムリンチド」としても知られ、米国特許第５，６８６，５１１号および第５，９９８，３６７号に述べられている）、サケのカルシトニン等を含む。一部の実施形態では、使用されるＣＣＫはＣＣＫオクトペプチド（ＣＣＫ−８）である。レプチンは、例えば（Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４０−３（１９９５）；Ｈａｌａａｓｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４３−６（１９９５）；Ｃａｍｐｆｉｅｌｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４６−９（１９９５））で考察されている。適切なエキセンディンはエキセンディン−３およびエキセンディン−４、およびエキセンディン作動薬化合物であり、例えば、ＰＣＴ公開、国際公開第９９／０７４０４号、第９９／２５７２７号および第９９／２５７２８号に述べられている。

Ｃ．ポリペプチドの生成と精製
本明細書で述べられたＰＰＦポリペプチドは、当業者に知られた標準的な組み換え技術もしくは、例えば自動または半自動ペプチド合成機、あるいはその両方を用いるなど、化学ペプチド合成技術を用いて調製してもよい。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、溶液中で、もしくは固体支持体上で従来技術に従って合成することができる。様々な自動合成装置が市販されており、既知のプロトコルに従って使用できる。例えば、ＳｔｅｗａｒｔａｎｄＹｏｕｎｇ，ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．ｅｄ．，ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（１９８４）；Ｔａｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０５：６４４２（１９８３）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２：３４１−７（１９８６）；ａｎｄＢａｒａｎｙａｎｄＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，ＧｒｏｓｓａｎｄＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，ｅｄｓ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１−２８４（１９７９）を参照。固相ペプチド合成は、自動ペプチド合成機（例えばＭｏｄｅｌ４３０Ａ，ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で、ＮＭＰ／ＨＯＢｔ（オプション１）システムとキャッピングにｔＢｏｃまたはＦｍｏｃケミストリーを用いて行ってもよい（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＵｓｅｒ’ｓＭａｎｕａｌｆｏｒｔｈｅＡＢＩ４３０ＡＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ，Ｖｅｒｓｉｏｎ１．３ＢＪｕｌｙ１，１９８８，ｓｅｃｔｉｏｎ６，ｐｐ．４９−７０，ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を参照）。またペプチドはＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍＴｅｃｈＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（ＭｏｄｅｌＭＰＳ３５０，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）を用いて組み立てられてもよい。ペプチドは、例えばＷａｔｅｒｓＤｅｌｔａＰｒｅｐ３０００システムおよびＣ４，Ｃ８、またはＣ１８調製カラム（１０μ，２．２×２５ｃｍ；Ｖｙｄａｃ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）をもちいてＲＰ−ＨＰＬＣ（準備および解析）により精製してもよい。活性タンパク質は容易に合成され、次に反応性のペプチドを特定するよう設計されたスクリーニングアッセイでスクリーニングされる。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、あるいは当業者によく知られた組み換え技術により生成することもできる。例として、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｄｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ（１９８９）を参照。組み換え技術により生成されるこれらのＰＹＹアナログポリペプチドはポリヌクレオチドから発現されてもよい。当業者は、前記のＰＹＹアナログポリペプチドをコードしたＤＮＡとＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、コドン使用頻度の縮重を考慮した上で野生型ＰＹＹｃＤＮＡから得られることを理解するだろう。これらのポリヌクレオチド配列は、微生物宿主内でのｍＲＮＡの転写と翻訳を容易にするコドンを組み込んでもよい。前述の配列作成は、当業者によく知られている方法にしたがって容易に構築される。例として、国際公開第８３／０４０５３号を参照。上記のポリヌクレオチドは、任意でＮ末端メチオニル残基をコードしてもよい。本発明において有用な非ペプチド化合物も、当業者に知られた方法で調製可能である。例えば、リン酸含有アミノ酸およびペプチド含有の前記のアミノ酸は、当業者に知られた方法を用いて調製可能である。例えば、ＢａｒｔｌｅｔｔａｎｄＬａｎｄｅｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１４：３５６−７７（１９８６）を参照。

ＰＰＦポリペプチドをコードする配列を含み、発現するために、様々な発現ベクター／宿主系が利用可能である。これらは組み換えバクテリオファージ、プラスミド、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌、酵母発現ベクターで形質転換した酵母、ウィルス発現ベクターを感染させた昆虫細胞システム（例えばバキュロウイルス）、ウィルス発現ベクターで形質転換した（例えば、カリフラワー・モザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）、もしくは細菌発現ベクター（例えば、ＴｉまたはｐＢＲ３２２プラスミド）で形質転換した植物細胞システム、あるいは動物細胞システムを含むがそれに限定されない。組み換えタンパク質生成に有用な哺乳類細胞は、ベロ細胞、Ｈｅｌａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ−７など）、ＷＩ３８、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、３Ｔ３、ＲＩＮ、ＭＤＣＫ、Ａ５４９、ＰＣ１２、Ｋ５６２、および２９３細胞を含むがそれに限定されない。タンパク質の組み換え体発現のための例となるプロトコルは、本明細書に後述される。

前記の様に、本発明で提供されるポリヌクレオチド配列は、新規の有用なウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクター、新規の有用な形質転換および形質導入された原核宿主細胞および真核宿主細胞（細菌、酵母、培養中で増殖させた哺乳類細胞を含む）、および本発明のＰＰＦポリペプチドの発現が可能な新規で有用な前記宿主細胞の培養増殖方法の作成に有用である。本明細書のＰＰＦポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、例えば、ＰＰ、ＰＹＹ、もしくはＮＰＹの生産不足が緩和される、もしくはその濃度上昇が必要である場合の遺伝子治療に有用であるかもしれない。

本発明は、本発明のＰＰＦポリペプチドの組み換えＤＮＡの作成方法も提供する。提供される方法は、前記のＰＰＦポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞からＰＰＦポリペプチドを作成する方法であり、（ａ）前記のＰＰＦポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む前記の宿主細胞を、当該のＤＮＡ分子の発現が可能な条件下での培養と、（ｂ）前記のＰＰＦポリペプチドの獲得とを含む。

宿主細胞は、細菌、哺乳類細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、サル細胞、ハムスター幼獣腎臓細胞、癌細胞、その他の細胞など）を含む原核細胞または真核細胞、酵母細胞、および昆虫細胞である。

組み換えタンパク質発現のための哺乳類宿主系は当業者によく知られている。宿主細胞系は、タンパク質発現を行う、あるいは、タンパク質の活性をもたらすのに有用な特定の翻訳後改変を作成する特定の能力で選択されてもよい。ポリペプチドの前記の改変は、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化を含むがそれに限定されない。タンパク質の「プレプロ」体（前前駆体）を開裂させる翻訳後のプロセシングは、正しい挿入、折りたたみ、および／または機能に重要である可能性もある。例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８などといった異なる宿主細胞は、そのような翻訳後改変活性のための特定の細胞装置および特徴的な機構を有し、導入した外来タンパク質の正しい改変とプロセシングを確保するために選択してもよい。

あるいは、本発明のＰＰＦポリペプチドの作成に酵母システムが採用されてもよい。ＰＰＦポリペプチドｃＤＮＡのコード領域をＰＣＲで増幅する。ＤＮＡをコードしている酵母のプレプロ−αリーダー配列を酵母ゲノムＤＮＡから増幅する。ＰＣＲ反応では、α接合因子遺伝子のヌクレオチド１−２０を含むあるプライマーと、この遺伝子のヌクレオチド２５５−２３５に相補的な別のプライマーを用いる（ＫｕｒｊａｎａｎｄＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ，Ｃｅｌｌ，３０：９３３−４３（１９８２））。プレプロ−αリーダーをコードする配列とＰＰＦポリペプチドをコードする配列断片は、酵母のアルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ２）プロモーターを含むプラスミドに、プロモーターがプレプロ−α因子を成熟したＰＰＦポリペプチドに融合した融合タンパク質の発現を指示するようにライゲーションされる。ＲｏｓｅａｎｄＢｒｏａｃｈ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１８５：２３４−７９，Ｇｏｅｄｄｅｌｅｄ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（１９９０）に教示されたように、ベクターはさらにクローニング部位の下流にＡＤＨ２転写ターミネーター、酵母「２ミクロン」複製オリジン、酵母のｌｅｕ−２ｄ遺伝子、酵母ＲＥＰ１およびＲＥＰ２遺伝子、Ｅ．ｃｏｌｉのβラクタマーゼ遺伝子、およびＥ．ｃｏｌｉの複製オリジンを含む。βラクタマーゼ遺伝子とｌｅｕ−２ｄ遺伝子は、それぞれ細菌と酵母の選択を提供する。ｌｅｕ−２ｄ遺伝子は、酵母内での高発現レベルを誘導するためにプラスミドのコピー数の増加も可能にする。ＲＥＰ１およびＲＥＰ２遺伝子は、プラスミドのコピー数の調節に関するタンパク質をコードする。

前のパラグラフで述べられたＤＮＡのコンストラクトは、例えばリチウム酢酸処理（Ｓｔｅａｍｓｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１８５：２８０−９７（１９９０））などの既知の方法を用いて酵母細胞に形質転換される。ＡＤＨ２プロモーターは培地中のグルコースの枯渇で誘導される（Ｐｒｉｃｅｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅ５５：２８７（１９８７））。プレプロ−α配列は、融合タンパク質の細胞からの分泌に作用する。同時に、酵母のＫＥＸ２タンパク質はプレプロ配列を成熟したＰＹＹアナログポリペプチドから開裂させる（Ｂｉｔｔｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：５３３０−４（１９８４））。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、例えばＰｉｃｈｉａＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）などの市販の発現システムを用いて、メーカーの取扱書に従って組み換え体として酵母で発現されてもよい。このシステムも、直接分泌するためにプレプロ−α配列に依存しているが、挿入の転写はアルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターによりメタノールによる誘導によって行われる。分泌されたＰＰＦポリペプチドは酵母の増殖培地から、例えばＰＰＦポリペプチドを細菌や哺乳類細胞の上澄から生成する際に用いた方法によって精製される。

あるいは、ＰＹＹアナログポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、バキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１３９３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）にクローニングしてもよい。このＰＰＦポリペプチドを含むベクターは、次にメーカー（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）の取扱書の指示に従ってｓＦ９無タンパク質培地中でＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞に感染させ、組み換えタンパク質を産生するために用いられる。タンパク質を培地からヘパリン−セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）を、続いて分子サイズカラム（Ａｍｉｃｏｎ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて精製、濃縮し、ＰＢＳに再懸濁する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析は単一バンドを示し、タンパク質のサイズを確認し、またＮ末端配列をＰｒｏｔｏｎ２０９０ＰｅｐｔｉｄｅＳｅｑｕｅｎｃｅｒでエドマン法を行う。

例えば、予測される成熟ＰＹＹアナログポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を所望のプロモーターと、任意でリーダー配列（例としてＢｅｔｔｅｒｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１−３（１９８８）を参照）を含むプラスミドにクローニングする。このコンストラクトの配列は自動配列決定装置で確認してもよい。プラスミドは次に、細菌のＣａＣｌ_２インキュベーションと熱ショック処理を用いる標準的な方法でＥ．ｃｏｌｉのＭＣ１０６１株に形質転換する（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，上記参照）。形質転換した細菌をカルベニシリンを添加したＬＢ培地で培養し、発現されたタンパク質の産生は適切な培地での増殖で誘導される。リーダー配列が存在している場合には、成熟したＰＹＹアナログポリペプチドの分泌と分泌の際の開裂に影響する。分泌された組み換えタンパク質は、本明細書の下に述べる方法によって細菌の培地から精製される。

あるいは、本発明のＰＰＦポリペプチドは昆虫システム中で発現してもよい。タンパク質発現のための昆虫システムは当業者によく知られている。前記のシステムの一つでは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）がＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａの幼虫外来遺伝子発現のためのベクターとして用いられる。ＰＰＦポリペプチドをコードする配列は、ポリヘドリン遺伝子などのウイルスの非必須領域にクローニングされ、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置かれる。ＰＹＹアナログポリペプチドの挿入の成功は、ポリヘドリン遺伝子が不活性であり、コートタンパクの被覆を欠いた組み換えウイルスを産生させる。組み換えウイルスは、次にＰＹＹアナログポリペプチドを発現するＳ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａの幼虫の感染に用いられる（Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４６：５８４（１９８３）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３２２４−７（１９９４））。

別の例では、ＰＰＦポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はＰＣＲで増幅して、例えばｐＧＥＸ−３Ｘ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）などの適切なベクターにクローニングしてもよい。ｐＧＥＸベクターは、ベクターにコードされているグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）と、ベクターのクローニング部位に挿入されたＤＮＡ断片にコードされたタンパク質を含む融合タンパク質を産生するよう設計されている。ＰＣＲ用のプライマーは、例えば、適切な開裂部位を含んで作成してもよい。組み換え融合タンパク質は、次に融合タンパク質のＧＳＴ部分から開裂されてもよい。ｐＧＥＸ−３Ｘ／ＰＹＹアナログポリペプチドのコンストラクトをＥ．ｃｏｌｉＸＬ−１Ｂｌｕｅ細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に形質転換し、個別の形質転換体を単離し、波長６００ｎｍの吸光度０．４までＬＢ培地（カルベニシリン添加）中で３７℃で培養し、その後、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）存在下でさらに４時間培養する。個別の形質転換体由来のプラスミドＤＮＡを精製し、希望のＰＰＦポリペプチドをコードする遺伝子挿入が適切な方向で存在していることを確認するために自動配列決定装置を用いて部分的に配列決定する。

不溶の封入体としてバクテリア内に産生されると意図される融合タンパクは以下のように精製してもよい。細胞を遠心によって回収し、０．１５ＭＮａＣｌ，１０ｍＭＴｒｉｓ，ｐＨ８，１ｍＭＥＤＴＡ中で洗浄し、０．１ｍｇ／ｍＬリゾチーム（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）で室温で１５分間処理する。溶菌液を超音波で清澄にし、細胞残渣を１２，０００ｘｇで１０分間の遠心によってペレットにする。融合タンパク質を含むペレットを５０ｍＭＴｒｉｓ，ｐＨ８，１０ｍＭＥＤＴＡに再懸濁し、５０％グリセロールに重層し、６，０００ｘｇで３０分間遠心する。ペレットをＭＧ^＋＋とＣａ^＋＋を含まない標準的なリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁する。融合タンパク質を、再懸濁したペレットを変性ＳＤＳポリアクリルアミドゲル分画（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，前記参照）することによりさらに精製する。ゲルを０．４ＭＫＣｌに浸しタンパク質を可視化し、切り出してＳＤＳを含まない泳動緩衝液中で電気的に溶出する。ＧＳＴ／ＰＹＹアナログポリペプチド融合タンパク質が細菌中で可溶性のタンパク質として産生される場合には、ＧＳＴＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＭｏｄｕｌｅ（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）を用いて精製してもよい。

融合タンパク質は、成熟なＰＹＹアナログポリペプチドからＧＳＴを開裂させるために消化に供することもできる。消化反応液（２０−４０μｇの融合タンパク質、０．５ｍＬＰＢＳ中に２０−３０単位のヒトスロンビン（４０００Ｕ／ｍｇ，Ｓｉｇｍａ））を１６−４８時間室温でインキュベートし、反応産物を分画するために変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにローディングする。ゲルを０．４ＭＫＣｌに浸し、タンパク質のバンドを可視化させる。ＰＹＹアナログポリペプチドの意図された分子量と一致したタンパク質バンドの同一性を、自動配列決定装置（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＭｏｄｅｌ４７３Ａ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて部分的アミノ酸配列解析で確認する。

本発明のＰＹＹポリペプチドの組み換え体発現のある方法では、ＨＥＫ２９３細胞をＰＹＹアナログポリペプチドｃＤＮＡを含むｐＣＭＶベクター（５’ＣＭＶプロモーター、３’ＨＧＨポリ配列）とｐＳＶｎｅｏ（ネオマイシン耐性遺伝子含有）を含むプラスミドと共にリン酸カルシウム法により共形質転換してもよい。一部の実施形態では、ベクターは形質移入前にＳｃａＩで線状化しなければならない。同様に、ｎｅｏ遺伝子を組み込んだ同様のｐＣＭＶベクターを用いた別のコンストラクトを使用してもよい。安定な細胞系は、０．５ｍｇ／ｍＬのＧ４１８（ネオマイシン様の抗生物質）を含む培地中で１０−１４日間、限界希釈法によって単一の細胞クローンから選択する。細胞系は、ＰＹＹアナログポリペプチド発現についてＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロットによってスクリーニングし、高発現細胞系を大規模増殖に展開する。

一部の実施形態では、形質転換した細胞は長期の高収量のタンパク質産生と安定発現が望ましい場合がある。前記の細胞は、望ましい発現カセットと共に選択マーカーを含むベクターで一旦形質転換し、選択培地に転換する前に細胞を強化した培地中で１−２日間で増殖させた。選択マーカーは選択に抵抗性を与えるよう設計し、導入された配列の発現に成功した細胞の増殖と回収が可能になる。安定な形質転換細胞の耐性集団は、細胞に適した組織培養技術を用いて増殖させることができる。

組み換えタンパク質産生のために形質転換された細胞回収のために、数多くの選択システムが用いられてもよい。前記の選択システムは、それぞれ、ｔｋ−細胞、ｈｇｐｒｔ−細胞、またはａｐｒｔ−細胞中のＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子、ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、およびアデニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子を含むがそれに限定されない。また、メトトレキサート耐性を与えるｄｒｆｒ、ミコフェノール酸耐性を与えるｇｐｔ、アミノグリコシドまたはＧ４１８耐性とクロルスルフロンにも耐性を与えるｎｅｏ、ハイグロマイシン耐性を与えるｈｙｇｒｏといった代謝拮抗物質耐性も選択の基盤として利用可能である。有用である可能性がある更なる選択遺伝子は、細胞をトリプトファンに変えてインドールが利用できるようにするｔｒｐＢ、もしくは、ヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用できるようにするｈｉｓＤなどがある。形質転換体の選別に視覚的指標を与えるマーカーには、アントシアニン、β−グルクロニダーゼとその基質であるＧＵＳ、およびルシフェラーゼとその基質であるルシフェリンがある。

本発明のＰＰＦポリペプチドの多くは、自動ペプチド合成装置と組み換え技術の両方の組合せを用いて作成されてもよい。例えば本発明のＰＰＦポリペプチドは、除去、置換およびＰＥＧ化による挿入などの改変の組合せを含んでもよい。前記のＰＰＦポリペプチドは段階的に作成されてもよい。最初の段階では、除去、置換、挿入およびその任意の組合せの改変を含むＰＰＦポリペプチド中間体は、上述のような組み換え技術により作成されてもよい。次に、後述のような任意の精製過程の後、望みのＰＰＦポリペプチドを得るためにＰＰＦポリペプチド中間体を適切なＰＥＧ化試薬（例えば、ＮｅＫｔａｒＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＳａｎＣａｒｌｏｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａの製品）で化学改変によりＰＥＧ化する。当業者は、上述の過程が、除去、置換、挿入、誘導体化、およびその他の当業者に知られた改変方法から選択され、本発明で意図された改変の組合せを含むＰＰＦポリペプチドに一般的に適用することを理解するであろう。

本発明によって作成したＰＰＦポリペプチドは精製するのが望ましい可能性がある。ペプチドの精製技術は当業者によく知られている。これらの技術は、細胞の粗画分のポリペプチドと非ポリペプチドへの分画を伴う。その他のタンパク質から分離したポリペプチドを得たら、部分精製または完全な精製（あるいは均質になるよう精製）を達成するため、興味があるポリペプチドをさらにクロマトグラフィーや電気泳動技術を用いて精製してもよい。純粋なペプチドの調製に特に適している分析的な方法は、イオン交換クロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、および等電点電気泳動である。ペプチド精製のために特に効果的な方法は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行い、次に、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）とマトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ）によって精製産物の解析を行う方法である。さらに純度の確認がアミノ酸解析によって得られる。

本発明のある態様は精製に関し、また特定の実施形態ではコードされたタンパク質またはペプチドの十分な精製に関する。本明細書において「精製されたペプチド」の語は、他の成分から分離可能な組成物を意味するよう意図されており、当該のペプチドは天然に得られる状態に比較して任意の程度まで精製される。精製されたペプチドは従って、自然に生じる可能性がある環境を含まないペプチドも意味する。

一般的に「精製された」とは、生物活性の発現が実質的に残っている他の様々な成分を除去するため、分画に供されたペプチド組成物を表す。「実質的に精製された」という語を用いた場合、この意味は、組成物中のペプチドが例えば約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％もしくはそれ以上であるといったように、ペプチドが組成物の主成分をなす組成物を示す。

ペプチド精製に用いるのに適した様々な技術が当業者によく知られている。これらは、例えば、硫酸アンモニウム沈殿、ＰＥＧ沈殿、抗体沈殿など、熱変性とその後の遠心、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーといったクロマトグラフィー工程、等電点電気泳動、電気泳動、および、前記とその他の技術の組合せを含む。一般的に当業者に知られているように、様々な精製工程を行う順は変更してもよく、特定の工程は省略してもよく、依然として、実質的に精製されたタンパク質もしくはペプチドの調製に適切な方法をもたらすと考えられている。

ペプチドが常に最も精製された状態で提供される一般的な必要条件はない。実際、実質的にあまり精製されていない産物が特定の実施形態で使用されることを意図している。部分精製は、より少ない精製段階の組合せを用いて、もしくは異なる種類の同じ一般的な精製方法を利用することで達成される可能性がある。例えば、ＨＰＬＣ装置を用いて行った陽イオン交換カラムクロマトグラフィーは、低圧クロマトグラフィーシステムを利用する同じ技術に比べて一般的により大きな精製倍率の精製結果をもたらす。低い精製度を示す方法はタンパク質産物の全回収、または発現したタンパク質の活性の維持において有利である可能性がある。

前記のＰＰＦポリペプチドを、工程の中で得られたその他の成分から任意に、精製、単離してもよい。ポリペプチド精製の方法は、米国特許第５，８４９，８８３号中に見いだすことができる。これらの文書は、本発明のＰＰＦポリペプチドの単離精製に有用である可能性がある具体的な例となる、Ｇ−ＣＳＦ組成物の単離と精製の方法を述べている。これらの特許の開示を鑑みると、当業者が、所定の供給源からＰＰＦポリペプチドを精製するために利用可能な数多くの精製技術にはっきりと気づくのは明らかである。

また、陽イオン交換とイムノアフィニティークロマトグラフィーの組合せが精製された本発明のＰＰＦポリペプチド組成物に利用されることを意図している。

Ｄ．医薬組成物
本発明は、治療的もしくは予防的に有効量の一つ以上の本発明のＰＰＦポリペプチド、またはその医薬的に許容可能な塩と共に医薬的に許容可能なＰＰＦポリペプチドの送達に有用な希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、および／または担体を含む医薬組成物にも関する。前記の組成物は、様々な緩衝剤（酢酸、クエン酸、グルタミン酸、酒石酸、リン酸、ＴＲＩＳ）、ｐＨ、イオン強度などを含む希釈剤、例えば界面活性剤や可溶化剤（例えば、ソルビタンモノオレエート、レシチン、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ−２０とＴｗｅｅｎ−８０、ポリソルベート−２０とポリソルベート−８０、プロピレングリコール、エタノール、ＰＥＧ−４０、ドデシル硫酸ナトリウム）の添加を、抗酸化剤（例えば、ｍｏｎｏｔｈｉｏｇｌｙｅｒｃｏｌ、アスコルビン酸、アセチルシステイン、亜硫酸塩（亜硫酸水素塩とメタ重亜硫酸塩））、保存料（例えば、フェノール、メタクレゾール、ベンジルアルコール、パラベン（メチル、プロピル、ブチル）、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル塩（酢酸塩、ホウ酸塩、硝酸塩）および、等張化剤／充てん剤（グリセリン、塩化ナトリウム、マンニトール、スクロース、トレハロース、グルコース）、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の粒子状製剤への材料の取り込み、もしくはリポソームへの結合を含んでもよい。前記の組成物は、本発明のＰＰＦポリペプチドの物理状態、安定性、インビボでの放出速度、インビボクリアランスに影響する。例として、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１４３５−７１２，１８ｔｈｅｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９９０）を参照。

一般的に本発明のＰＰＦポリペプチドは、ＰＰ、ＰＹＹ、またはＮＰＹがその薬理学的特徴の観点で有用であるのと同様に有用である。例となる使用は、代謝状態と代謝障害の治療もしくは予防のための末梢への前記のＰＰＦポリペプチドの投与である。具体的には、本発明の化合物は栄養素利用性を低下させ、食物摂取を減少させ、および減量に作用する薬剤としての活性を有する。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、注射投与、経口投与、経鼻投与、肺投与、局所投与、もしくは当業者が認めるその他の投与のための製剤を含む、末梢投与のために製剤されてもよい。さらに具体的には、本発明による医薬組成物の投与は、標的組織がその経路を利用可能である限りは、任意の一般的な経路を介してもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は対象に、例えば、経口送達、舌下送達、経鼻送達、経肛門送達、膣内送達、もしくは経皮送達による、静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内（例えば、末端放出）といった任意の従来の末端への投与方法で導入してもよい。治療は、単回投与もしくは長期間にわたる複数投与からなる可能性がある。本発明の組成物の制御された連続的放出も意図されている。

製剤は、例えば、固形、液体、半固形、または液体といった様々な形からなる場合もある。製剤は、液体であっても、あるいは、再構成のための凍結乾燥された固定であってもよい。本明細書において「固形」の語は、例えば、粉末、および凍結乾燥製剤を含むこの用語の全ての通常の使用を含んで意味する。本発明の水溶性組成物は、医薬的に許容可能な担体もしくは水媒体に溶解もしくは分散した有効量のＰＰＦポリペプチドを含む。「医薬的に、もしくは、医薬的に許容可能な」という語句は、動物もしくはヒトに投与した際に、有害反応、アレルギー反応、もしくはその他の悪影響を生じない分子の実体と組成物を意味する。本明細書において、「医薬的に許容可能な担体」は、任意かつ全ての溶媒、分散媒、被覆、抗細菌剤と抗真菌剤、等張剤、および、吸収遅延剤などを含む。医薬的な活性物質への前記の媒体や薬剤の使用は、当業者によく知られている。任意の従来の媒体もしくは薬剤が活性成分と両立しない場合を除き、治療組成物へのその使用は意図されている。補足的な活性成分を組成物に組み込んでもよい。ある例では、ＰＰＦポリペプチドとその他の食物摂取減少、血漿グルコース低下、もしくは、血漿脂質変換剤、例えばアミリン、もしくはアミリンアナログ作動薬、ＣＣＫもしくはＣＣＫ作動薬、またはレプチン（ＯＢタンパク質）もしくはレプチン作動薬、またはエキセンディンもしくはエキセンディンアナログ作動薬、小分子カンナビノイドＣＢ１受容体拮抗剤、リモナバン、β−ヒドロキシステロイド・デヒドロゲナーゼ−１阻害剤、シブトラミン、フェンテルミンやその他の肥満の治療のための市販薬剤などを単一組成物として、あるいは共に投与する溶液として提供すると便利である。別の例では、前記のＰＰＦポリペプチドと別に追加の薬剤を投与するとより有利である可能性もある。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、投与のために、界面活性剤（例えば、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）、レシチン、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、ヒドロキシプロピルセルロース）、もしくは錯体形成剤（例えば、ヒドロキシプロピル−ｂ−シクロデキストリン、サルフォブチエーテル−ｂ−シクロデキストリン（Ｃａｐｔｉｓｏｌ）、ポリビニルピロリドン）と適切に混合された遊離の塩、もしくは医薬的に許容可能な塩の水溶液として投与するために調製されてもよい。医薬的に許容可能な塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離のアミノ基と形成される）と有機酸と共に形成される、例えば、塩酸、リン酸、もしくは酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸といった有機酸などの酸付加塩を含む。遊離のカルボキシル基と形成された塩も、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、もしくは水酸化第二鉄などの無機塩基、および、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの前記の有機塩から派生する。前記の産物は、当業者によく知られた方法によって容易に調製される。分散もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中とオイル中に調製することもできる。

一般的な医薬的意味において、保存料とは、微生物の増殖を予防もしくは阻害し、微生物によって起こる製剤の腐敗を防ぐ目的で製剤に添加される可能性がある物質である。保存料の量は多くないにも関わらず、ペプチドの全体的な安定性に影響する可能性がある。一般的に保存と使用のための通常の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防ぐ保存料を含む。医薬組成物で使用する保存料は０．００５から１．０％（ｗ／ｖ）の範囲である可能性があるが、一部の実施形態では、各保存単独もしくはその組み合わせでの範囲は、ベンジルアルコール（０．１−０．６％）、もしくはｍ−クレゾール（０．１−０．６％）、もしくはフェノール（０．１−０．８％）、もしくはメチル（０．０５−０．２５％）とエチルの組合せ、もしくはエチルパラベン、プロピルパラベンもしくはブチルパラベン（０．００５−０．０３％）である。パラベンは、パラ−ヒドロキシ安息香酸の低級アルキルエーテルである。

界面活性剤は、疎水性の破壊と塩橋の分離の両方によって、タンパク質の変性を引き起こす可能性がある。比較的低濃度の界面活性剤は、界面活性剤部分とタンパク質の反応部位の間の強力な相互作用のため、強力な変性作用を発揮する可能性がある。しかし、この相互作用の賢明な利用は、タンパク質を界面変性もしくは表面変性対して安定化することができる。さらにペプチドを安定化し得る界面活性剤は、任意で全製剤の約０．００１から０．３％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する可能性があり、ポリソルベート８０（つまり、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、ＣＨＡＰＳ（登録商標）（即ち、３−［（３−クロルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］１−プロパンサルフォネート）、Ｂｒｉｊ（登録商標）（例えば、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルであるＢｒｉｊ３５）、ポロキサマー、または別の非イオン性活性剤を含む。

本発明のペプチド製剤の安定性は、液状の場合、製剤のｐＨを約３．０から約７．０の範囲に維持することによって強化される。一部の実施形態では、ＰＰＦポリペプチドは、例えば、ｐＨが約３．０から約８．０、約３．５から約７．４、約３．５から約６．０、約３．５から約５．０、約３．７から約４．７、約３．７から約４．３、約３．８から約４．２の緩衝液などの水性の担体に懸濁される。一部の実施形態では、非経口製剤は等張もしくは実質的に等張である。一部の実施形態では、非経口の製品の溶媒は水である。非経口投与に適切な質の水は、蒸留、もしくは逆浸透により調製できる。水は医薬製剤の使用のための注射のための水性媒体として使用してもよい。有用な緩衝液は、酢酸ナトリウム／酢酸、乳酸ナトリウム／乳酸、アスコルビン酸、クエン酸ナトリウム／クエン酸、炭酸ナトリウム／炭酸、コハク酸ナトリウム／コハク酸、ヒスチジン、安息香酸ナトリウム／安息香酸、および、リン酸ナトリウム、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含む。持続性型、または緩慢な放出製剤である「持続性薬剤」が、治療的有効量の製剤が経皮的注射または送達後数時間、数日にも渡って血流に送達されるように使用される可能性がある。

一部の実施形態では、本発明の医薬組成物は、例えば、注射や輸液といった非経口投与に適切であるように製剤される。一部の実施形態では、液体製剤は非経口投与を目的としている。適切な投与経路は、筋肉内、静脈内、皮下、皮内、粘膜、関節内、髄腔内、気管支等を含む。これらの経路は、液体、半固体もしくは固体のＰＰＦポリペプチドの投与を含む、経口、経鼻、舌下、肺、および口腔内投与を含むがそれに限定されない。一部の経路を介した投与は、望ましい生物作用を得るために非経口送達と比較して生物利用率が減少するために、実質的により多くのＰＰＦポリペプチドが必要である。さらに、非経口の制御放出送達は、ポリマーマイクロカプセル、マトリックス、溶液、インプラント、および装置を作り、それを非経口的にまたは外科的な方法で投与することで達成される可能性がある。制御放出製剤の例は、参照して本明細書に組み込む、米国特許第６，３６８，６３０号、第６，３７９，７０４号、および第５，７６６，６２７号に述べられている。これらの投薬形態は、ペプチドの一部がポリマーマトリックスまたは装置に補足されるために、生物利用率が低い可能性がある。例として、米国特許第６，３７９，７０４号、第６，３７９，７０３号、および第６，２９６，８４２号を参照。一部の実施形態では、注入使用に適切な医薬組成物は、滅菌素溶液、滅菌分散剤、および、滅菌注射用溶液または滅菌注射用分散の即時調製のための滅菌粉末を含む。一部の実施形態では、製剤は滅菌すべきであり、また液体は容易に注入可能な範囲で流動性であるべきである。また、本発明のＰＰＦポリペプチドは製造、貯蔵の条件下で安定であることが望ましく、細菌や菌類といった微生物の汚染に対して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール、および液体のポリエチレングリコールなど）、ジメチルアセタミド、ｃｒｅｍｏｒｐｈｏｒＥＬ、それらの適切な混合液、並びにオイル（例えば、ダイズ、ゴマ、トウゴマ、綿実油、エチルオレイン酸、イソプロピルミリスチン酸、グリコフロール、コーン）を含む、溶媒もしくは分散剤媒体であってもよい。適した流動性は、例えばレシチンなどの被覆の利用によって、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持によって、界面活性剤の使用によって維持されてもよい。微生物作用の防止は、例えば、メタクレゾール、ベンジルアルコール、パラベン（メチル、プロピル、ブチル）、クロロブタノール、フェノール、フェニル水銀塩（酢酸、硼酸、硝酸）、ソルビン酸、チメロサール、などの様々な抗生物質と抗真菌剤によってもたらされる可能性がある。一部の実施形態では、等張化剤（例えば、糖類と塩化ナトリウム）が含まれてもよい。注射用組成物の長期にわたる吸収は、吸収遅延させる薬剤（例えば、一ステアリン酸アルミニウムやゼラチン）の組成物での使用によりもたらされる可能性がある。

一部の実施形態では、例えば経口製剤では滅菌が不要な場合もある。しかし、もし滅菌が望まれる、もしくは必要であるなら、本発明のペプチド医薬製剤の開発のために、任意の適切な滅菌方法が使用可能である。一般的に、滅菌方法は、濾過、蒸気（湿式加熱）、乾式加熱、ガス（例えば、エチレンオキサイド、ホルムアルデヒド、二酸化塩素、プロピレンオキサイド、β−プロピオラクトン、オゾン、クロロピクリン、過酢酸臭化メチルなど）、放射線源への曝露、および無菌操作等が含まれる。濾過は、本発明の液体製剤の望ましい滅菌方法である。滅菌濾過は連続して連結することもできる、０．４５μｍおよび０．２２μｍ（１または２）を通じた濾過が伴う。濾過後、溶液は適切なバイアルや容器に満たされる。注射用の滅菌溶液は、上に列挙した様々な他の成分と共に、適切な溶媒中に必要量の活性化合物を組み込むことによって調製されてもよい。一般的に、分散液は、塩基分散溶媒および上に列記した他の必要な成分を含有する滅菌賦形剤に様々な活性成分を組み込むことによって調製する。注射用滅菌溶液の調整用の滅菌粉末の場合、例となる調整方法は、粉末の活性成分と予め滅菌濾過した溶液からの追加の望ましい成分を得る、吸引乾燥および凍結乾燥技術である
一般的に、ＰＰＦ化合物は、患者への投与のために安定で安全な医薬組成物に製剤することができる。本発明の方法で使用が意図される医薬製剤は、約０．０１から約２０％（ｗ／ｖ）、もしくは約０．０５から約１０％のＰＰＦ化合物からなる。ＰＰＦ化合物は、等張化調整剤として炭水化物もしくは多価アルコールを含み、また、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、およびフェノールからなる群から選択された約０．００５から５．０％（ｗ／ｖ）の保存料を任意で含む、ｐＨが約３．０から約７．０の最終組成物を可能にする酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、もしくはグルタミン酸緩衝液（例えば、最終的な製剤濃度は約１−５ｍＭから約６０ｍＭ）であってもよい。前記の保存料は、製剤されたペプチドが複数使用製品に含まれている場合に、一般的に含まれる。

本発明の製剤には、任意で安定剤が含まれてもよい。しかし、含まれる場合には、本発明の実施において有用な安定剤は炭水化物または多価アルコールである。本発明の実施において有用な適した安定剤は、約１．０から１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコールである。多価アルコールと炭水化物は、骨格において同じ特徴、つまりタンパク質の安定化に役割を果たす−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−を共有している。多価アルコールは、例えば、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の化合物を含む。これらの化合物は直鎖分子である。一方、例えばマンノース、リボース、スクロース、フルクトース、トレハロース、マルトース、イノシトール、およびラクトースといった炭水化物は、ケトン基もしくはアルデヒド基を含む場合がある環状分子である。これら２つのクラスの化合物は、温度の上昇や凍結解凍または凍結乾燥過程による変性に対してタンパク質を安定化させる作用があることが示されている。適した炭水化物は、ガラクトース、アラビノース、ラクトース、もしくは（もしこれが望ましい性質であれば）、糖尿病患者に有害な影響を有さない、即ち、血中のグルコースを許容できないほどの高濃度にしない代謝されない炭水化物である、その他の炭水化物を含む。

一部の実施形態では、安定剤が含まれている場合には、ＰＰＦ化合物は例えばソルビトール、マンニトール、イノシトール、グリセロール、キシリトールおよびポリプロピレン／エチレングリコール共重合体、また分子量が２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００、および８０００の様々なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等といった多価アルコールで安定化される。凍結乾燥された本発明の製剤の別の有用な特徴は、安定性を維持するのに役立つ同じ製剤成分と共に本明細書に述べられた凍結乾燥製剤の等張性の維持である。一部の実施形態では、マンニトールがこの目的に用いられる多価アルコールである。

完全に不活性な容器が無いため、もしくは、特に液体が水性である場合には、容器中の液体に一部の方法が作用しないため、容器も注射製剤の一部として考慮される場合がある。従って、注射特有の容器の選択は、容器の組成、また溶液、ならびに対象となるであろう治療に関する考慮に基づかなければならない。必要であれば、例えば、ＷｈｅａｔｏｎタイプＩホウケイ酸ガラス＃３３（ＷｈｅａｔｏｎＴｙｐｅＩ−３３）（ＷｈｅａｔｏｎＧｌａｓｓＣｏ．）、またはそれと同等のホウケイ酸ガラスを用いることによって、ペプチドのバイアルガラス表面への吸着を最小化することもできる。類似のホウケイ酸ガラスバイアルと製造に許容可能なカートリッジのその他の供給会社は、ＫｉｍｂｅｌＧｌａｓｓＣｏ．、ＷｅｓｔＣｏ．、ＢuｎｄｅｒＧｌａｓＧＭＢＨおよびＦｏｒｍａＶｉｔｒｕｍである。ＰＰＦポリペプチドの生物学的、化学的特性は、５％マンニトールおよび０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０存在化で最終濃度０．１ｍｇ／ｍＬと１０ｍｇ／ｍＬのＰＰＦポリペプチドをＷｈｅａｔｏｎＴｙｐｅＩ−３３ホウケイ酸血清バイアル中で製剤、凍結乾燥することによって安定化させる。複数用量バイアルに注射器の針が導入できるよう、また針を引き抜いた後直ぐ再密封を提供させるため、各バイアルの開口部はアルミニウムのバンドで固定されたゴム栓で密閉されてもよい。Ｗｅｓｔ４４１６／５０，４４１６／５０（テフロン（登録商標）仕上げ）、および４４０６／４０、Ａｂｂｏｔｔ５１３９、もしくは相当する任意の栓などのガラスバイアルの栓が、注射のための医薬的な閉鎖として用いられてもよい。これらの栓はペプチドと同様、製剤のその他の成分にも適合する。発明者は、例えば栓は少なくとも１００回の注射に耐えられるといった、患者に用いるパターンで使用し試験した場合、これらの栓が完全性試験に合格することも見いだした。一部の実施形態では、ペプチドはその後の再構成のために、バイアル、注射器、またはカートリッジ中で凍結乾燥されてもよい。本発明の液体製剤は、一つか二つのチャンバーがあるカートリッジまたは一つか二つのチャンバーがある注射器にに満たされてもよい。

一部の実施形態では、液体製剤のための製造方法は、配合、滅菌濾過、および充てん工程を伴う。一部の実施形態では、配合方法は、特定の順序（保存料の後に、安定剤／等張化剤、緩衝液、そしてペプチド）での原料の溶解、または同時溶解を伴う。

アメリカ薬局方（ＵＳＰ）は、複数用量容器に入った製剤には、抗微生物剤を静菌的あるいは静真菌的濃度で製剤に加えなければならないと記載している。抗生物剤は、注射針と注射器で、もしくは、例えばペン型注射器のような送達のためのその他の侵襲的な方法で内容物の一部を抜き取る際に不注意に製剤に導入された微生物の増殖を防ぐために、使用時に十分な濃度で存在しなければならない。抗微生物剤は、製剤のその他全ての成分との適合性を確保するために評価し、また、特定の薬剤がある製剤で有効で別の製剤で効果がないことを確認するため、その活性を全体の製剤の中で評価する必要がある。特定の抗生剤がある製剤で有効だが別の製剤で有効でないというのは一般的なことではない。

本発明の特定の実施形態で、本発明の医薬製剤は例えば、約０．０１％と約９８％（ｗ／ｖ）の間、もしくは約１％と約９８％の間、もしくは約８０％と約９０％の間、もしくは約０．０１％と約５０％の間、もしくは約１０％と約２５％の間といった一連の濃度のＰＰＦ化合物を含んでもよい。望ましい溶液濃度を得るために注射に十分な量の水を用いてもよい。本明細書で述べられた医薬製剤は凍結乾燥してもよい。典型的な製剤は、浸透圧調節剤として９．３％スクロースを含む１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ４．２中、１ｍｇ／ｍＬのＰＰＦ化合物である可能性がある。

必要なら、塩化ナトリウムなどの等張化剤およびその他の既知の賦形剤が存在してもよい。前記の賦形剤が存在する場合、ＰＰＦポリペプチドの全体の等張性を維持するのが望ましい可能性がある。賦形剤は、現在述べられる製剤に様々な濃度で含まれる場合がある。例えば、賦形剤は約０．０２％から約２０％ｗ／ｗ、約０．０２％と約０．５％の間、約０．０２％から約１０％、約１％から約２０％の範囲の濃度で含まれてもよい。加えて、本製剤自体と同様の賦形剤は固体（粉末を含む）、液体、半固体、もしくはゲルの形で含まれてもよい。

製剤中にその他の原料が存在する可能性もある。前記の追加原料は、例えば湿潤剤、乳化剤、オイル、抗酸化剤、充てん剤、等張化調節剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）、および両性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン、およびヒスチジンなどのアミノ酸）を含む可能性もある。さらに、ポリマー溶液、もしくはポリマーとの混合液は、ペプチドの制御放出の機会を提供する。前述の追加原料は、もちろん、本発明の製剤の全体的な安定性に悪影響を及ぼしてはならない。

一般的に、本発明のＰＰＦポリペプチドの治療的、もしくは予防的な有効量は、受容者の年齢、体重、および疾患の状態または重篤度、または代謝状態と代謝障害によって決定される。例として、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ６９７−７７３を参照。また、ＷａｎｇａｎｄＨａｎｓｏｎ，ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＰｅｐｔｉｄｅｓ：ＳｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄＳｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｒｅｎｔｅｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｅｃｈｎｉｃａｌＲｅｐｏｒｔＮｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ（１９８８）も参照。一般的に、約０．００１μｇ／体重ｋｇ／日から約１０００μｇ／体重ｋｇ／日の間の用量が用いられるが、当業者が理解するように、それ以上もしくはそれ以下で使用してもよい。投薬は一日に１回、２回、３回、４回、もしくはそれ以上、または、製剤に応じて週に１回、月に１回、もしくは四半期に１回、といったより少ない頻度であってもよく、また本明細書に述べられたように、その他の組成物との組合せでもよい。本発明はここに引用された用量に限定されないことに留意しなければならない。

適切な用量は、関連した用量反応データと合わせて、代謝状態もしくは代謝障害のレベル測定のために確立されたアッセイの使用を通じて確認してもよい。最終的な投与計画は、例えば、薬剤の特異的活性、患者の障害および反応性の重篤度、患者の年齢、状態、体重、性別、および食事療法、感染症の重篤度、投与の時間、およびその他の臨床要因といった、薬剤の作用を加減する要因を考慮して主治医により決定される。研究が行われるにつれ、個別の疾患と状態に対する適切な用量レベルと治療期間に関する更なる情報が明らかになるだろう。

一部の実施形態では、有効な用量は一般的に約０．５μｇから約５ｍｇ／日、約１０μｇから約２ｍｇ／日、約１００μｇから約１ｍｇ／日、もしくは約５μｇから約５００μｇ／日の範囲であり、単独または、２回、３回、４回もしくはそれ以上に分割された用量で投与される。従って、典型的な用量は１日に与えられる薬剤の総量と１日に投与される投与回数から導き出すことができる。典型的な用量は、約０．１２５μｇ／用量（５μｇを１日に４回投与）から約５ｍｇ／用量（５ｍｇを１日１回投与）の範囲である可能性がある。別の用量では、約０．０１から約２５０μｇ／ｋｇ／用量の間である可能性がある。投与される正確な用量は、当業者により決定することができ、また、特定の化合物の効力と個人の年齢、体重および状態に依存する。投与は、栄養素利用性、食物摂取、体重、血糖、もしくは血漿脂質の低下の抑制が望まれる時にはいつでも、例えば、症状の最初の徴候の時点、または肥満、糖尿病、もしくはインスリン耐性症候群と診断された直後に開始しなくてはならない。投与は任意の経路、例えば注射、皮下、筋肉内、経口、経鼻、経皮などによる可能性がある。例えば経口投与のような特定の経路のための用量は、生物利用率の低下を考慮して、例えば約５−１００倍増加される。

一部の実施例では、医薬製剤が非経口投与される場合には、組成物は０．１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲のＰＰＦポリペプチドの用量が送達されるよう製剤される。一部の実施例では、用量の範囲は１μｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲である。典型的な１日の量は、下限の２、５、１０、２０、４０、６０、もしくは８０から上限の８０、１００、１５０、２００、もしくは２５０までの範囲である可能性がある。非経口投与は、最初のボーラス投与の後、薬剤の治療的血中濃度を維持するための継続的な輸液で行ってもよい。一般の当業者は、十分な医療処置と個別の患者の臨床状態に従って決定されたように、有効な用量と投与計画を容易に最適化するだろう。

投薬頻度は、薬剤と投与経路の薬物動態パラメーターに依存する。最適な医薬製剤は、当業者により投与経路と求められる用量によって決定されるだろう。例として、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，上記参照，ｐａｇｅｓ１４３５−１７１２を参照。前述の製剤は、投与される薬剤の物理状態、安定性、インビボでの放出速度とインビボでのクリアランス速度に影響する可能性がある。適切な用量は投与経路によって、体重、体表面積、もしくは臓器サイズによって計算してもよい。更なる適切な治療用量を決定するのに必要な計算の改良は、特に用量の情報と本明細書で開示されたアッセイ、また動物もしくはヒトでの臨床試験の薬物動態学的データを踏まえて、過度の実験なしに一般の当業者により日常的に行われる。

本発明の医薬組成物と治療方法はヒトの医学と獣医学の領域で有用であることが高く評価されるだろう。即ち、治療される対象は哺乳類である可能性がある。一部の実施形態では、哺乳類はヒトもしくはその他の動物である。獣医学的な目的には、対象は例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマおよびヤギなどの家畜、イヌやネコといったペット、外来動物や動物園の動物、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、およびハムスターなどの実験動物、およびニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウなどの家禽を含む。

さらに、本発明は、本発明のＰＰＦポリペプチド、前記の本発明のＰＰＦポリペプチドの医薬的応用のための調製に適切なコンポーネント、および前記のＰＰＦポリペプチド使用のための取扱説明書と医薬的応用のためのコンポーネントからなるキットを意図している。

本発明の理解を助けるため、以下の実施例を記載する。本発明に関連する実験は、当然ながら、本明細書に述べられ、また以下に記載されるように、当業者が本発明の範囲に含まれると見なす範囲である現在知られている、もしくは将来明らかになる、本発明と前記の本発明の変形を具体的に限定するように解釈すべきではない。

本発明は、より完全に本発明を例証するために提供した下記の限定されない実施例を参照してより詳細に述べられているが、本発明の範囲を限定するものとしては解釈されない。実施例は、本発明のＰＰＦポリペプチドの調製、およびこれら本発明のＰＰＦポリペプチドのインビトロおよび／またはインビボでの試験を説明する。当業者は、これらの実施例で述べられた技術が本発明の実践における最良の態様を構成し、また発明者により述べられた技術が本発明の実践において十分機能することを意味することを理解するだろう。また一方、開示され今なお同様の結果を本発明の精神と範囲を逸脱しない範囲で得ている特定の方法においては、本開示に照らして多くの変更が行われ得ることを当業者は理解しなければならない点は高く評価されなければならない。

実施例１ＰＰＦポリペプチドの調製
本発明のペプチドは、Ｒｉｎｋａｍｉｄｅｒｅｓｉｎ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（ＰｒｏｔｅｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で０．０５０−０．１００ｍｍｏｌで０．４３−０．４９ｍｍｏｌ／ｇのローディングで作成してもよい。Ｆｍｏｃアミノ酸残基（５．０等量、０．２５０−０．５００ｍｍｏｌ）を０．１０Ｍの濃度で１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）に溶解する。その他の試薬（（Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−リン酸（ＨＢＴＵ）、１−水酸化ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ））は、０．５５Ｍジメチルホルムアミド溶液として調製する。Ｆｍｏｃで保護されたアミノ酸は、次にＨＢＴＵ（２．０等量、０．１００−０．２００ｍｍｏｌ）、１−水酸化ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．８等量、０．０９０−０．１８ｍｍｏｌ），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．４等量、０．１２０−０．２４０ｍｍｏｌ）を用いてレジン結合アミノ酸と２時間カップリングする。最後のアミノ酸のカップリング後、ペプチドをピペリジン２０％（ｖ／ｖ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液で１時間脱保護する。ポリペプチド配列が完成したら、ペプチドを樹脂から切断するようＳｙｍｐｈｏｎｙｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを設定する。ペプチドの樹脂からのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）切断は９３％ＴＦＡ、３％フェノール、３％水、および１％トリイソプロピルシランを用いて１時間行う。切断されたペプチドはタート−ブチルメチルエーテルを用いて沈殿させ、遠心でペレットにし、凍結乾燥する。ペレットを水（１０−１５ｍＬ）に再溶解、濾過し、逆相ＨＰＬＣでＣ１８カラムと０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水勾配を用いて精製する。結果として得られたペプチドを逆相ＨＰＬＣにより均質になるよう精製し、純度をＬＣ／ＭＳで確認する。

本発明のペプチドの脂肪酸とアシル官能基（例えば、オクタン酸、ステアリン酸、イソカプロイル、およびイソブチルオキシカルボニル改変）によるＮキャップ形成の一般的な方法は以下の通り。Ｒｉｎｋアミド樹脂（０．１ｍｍｏｌ）上のペプチドをＮＭＰ（５ｍＬ）に懸濁する。別のバイアルに、ＨＢＴＵ（０．３ｍｍｏｌ）とＨＯＢｔ（０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した後、ＤＩＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）を添加する。溶液を樹脂に加え、この懸濁液を２時間振盪する。溶媒を濾過してＮＭＰ（５ｍＬｘ４回）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で十分に洗浄し、蒸発させて１時間のＴＦＡ切断に供する。目的とするペプチドの収量は、切断と精製後で約４０ｍｇである。Ｎ−カルバメート誘導体（イソブチルオキシ、イソプロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、エトキシ）は、対応する塩化カルボニルとＲｉｎｋアミド樹脂上のペプチドをＤＩＥＡ、ＤＭＡＰおよび乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２を用いてカップリングすることにより得られた。

リジンのイプシロンアミノ基への脂肪酸組み込みの一般的な方法は以下の通り。改変は精製したペプチドのリジンの遊離イプシロンアミノ基に対して、脂肪酸と活性化試薬（ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ）の存在下でＤＭＦ溶液中で行った。結果として得られた誘導体を逆相ＨＰＬＣで精製し、純度をＬＣ／ＭＳで確認する。

ＰＥＧ改変は、リジンの遊離イプシロンアミノ基、もしくは精製したペプチドの末端アミノ基に対して、市販の活性ＰＥＧエステルを用いて溶液中で行ってもよい。結果として得られたＰＥＧ化誘導体を均質になるよう逆相ＨＰＬＣで精製し、純度をＬＣ／ＭＳとＭＡＬＤＩ−ＭＳで確認する。

分子内ジスルフィド結合形成は、酸化剤としてヨウ素／酢酸を用いて遊離のシステインに対して行ってもよい。

本発明のＰＰＦポリペプチドは、インビトロで当業者に一般的に知られた結合アッセイ方法を用いたＹ受容体結合アッセイなど、もしくは、インビボで当業者に一般的に知られた方法を用いた食物摂取、体重および体組成アッセイなど、様々な生物学的アッセイでテストしてもよい。典型的なアッセイは後述されたアッセイを含む。

Ｇ_ｉ／Ｇ_０関連受容体によるシグナル伝達アッセイ：理論により制限される意図なしに、ヘテロ三量体Ｇタンパク質を介するＧタンパク質関連受容体（ＧＰＣＲ）シグナル伝達は、αサブユニットの構成に基づくシグナル伝達クラスに分類することができる。Ｇ_ｓ、Ｇ_ｑおよびＧ_ｉ／Ｇ_０タンパク質は、異なる生理的エンドポイントに至るシグナル伝達経路の活性化を通じて細胞内シグナル伝達を媒介する。Ｇ_ｓとＧ_ｉ／Ｇ_０に関連する受容体の活性化がアデニル酸シクラーゼの刺激もしくは阻害をそれぞれ導く一方、Ｇ_ｑに関連した受容体の活性化はホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）の刺激を引き起こし、細胞内のカルシウム濃度を上昇させる。Ｇ_ｉ／Ｇ_０関連の受容体活性化で引き起こされるｃＡＭＰ減少の測定は技術的に困難かもしれないが、一方、Ｇ_ｓ関連の細胞内のカルシウム濃度の上昇の測定は比較的容易である。従って、Ｇ_ｉ／Ｇ_０のシグナル伝達の方向をＰＣＬを通じて変えるために広宿主域Ｇαサブユニットを共形質移入した細胞を用いて、また当業者に知られたレポーター遺伝子をもしくはカルシウム感受性蛍光色素分子を利用して、Ｇ_ｉ／Ｇ_０関連の受容体活性を評価するアッセイが開発された。これらのアッセイは、Ｙ受容体に作動薬または拮抗薬として作用するＰＰＦポリペプチドの能力を評価するために利用することができる。例として、Ｓｔａｂｌｅｓ，ｅｔａｌ．，（１９９７）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５２（１）：１１５−２６を参照。

ＮＰＹのＹ受容体結合アッセイ：神経ペプチドＹ１受容体を内因的に発現するＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞のコンフルエント培養から細胞膜を調製する。膜を６０ｐＭの［^１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）および無標識ＰＰＦポリペプチドで、９６穴のポリスチレンプレート中に室温で６０分間インキュベートする。次に、ウェルの内容物をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのプレート回収装置を用いて９６穴のグラスファイバープレート上に回収する。乾燥させたグラスファイバープレートをシンチレーション溶媒と合わせ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのシンチレーション・カウンターで測定する。

ＮＰＹのＹ２受容体結合アッセイ：神経ペプチドＹ２受容体を内因的に発現するＳＫ−Ｎ−ＢＥ細胞のコンフルエント培養から細胞膜を調製する。膜を３０ｐＭの［^１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）および無標識ＰＰＦポリペプチドと共に、９６穴のポリスチレンプレート中に室温で６０分間インキュベートする。次に、ウェルの内容物をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのプレート回収装置を用いて９６穴のグラスファイバープレート上に回収する。乾燥させたグラスファイバープレートをシンチレーション溶媒と合わせ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのシンチレーション・カウンターで測定する。

ＮＰＹのＹ４受容体結合アッセイ：ＣＨＯ−Ｋ１細胞を神経ペプチドＹ４遺伝子をコードするｃＤＮＡで一過性に形質移入し、４８時間後、細胞膜をコンフルエント細胞培養から調製する。膜を１８ｐＭの［^１２５Ｉ］−ヒト膵臓ポリペプチド（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）および無標識ＰＰＦポリペプチドで、９６穴のポリスチレンプレート中に室温で６０分間インキュベートする。次に、ウェルの内容物をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのプレート回収装置を用いて９６穴のグラスファイバープレート上に回収する。乾燥させたグラスファイバープレートをシンチレーション溶媒と合わせ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのシンチレーション・カウンターで測定する。

ＮＰＹのＹ５受容体結合アッセイ：ＣＨＯ−Ｋ１細胞を神経ペプチドＹ５遺伝子をコードするｃＤＮＡで一過性に形質移入し、４８時間後、細胞膜をコンフルエント細胞培養から調製する。膜を４４ｐＭの［^１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）および無標識ＰＰＦポリペプチドと共に、９６穴のポリスチレンプレート中に室温で６０分間インキュベートする。次に、ウェルの内容物をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのプレート回収装置を用いて９６穴のグラスファイバープレート上に回収する。乾燥させたグラスファイバープレートをシンチレーション溶媒と合わせ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのシンチレーション・カウンターで測定する。

表２は本発明の特定のＰＰＦポリペプチドと上述のような様々なＹ受容体結合アッセイにおけるそれらのポリペプチドの活性を示す。

（表２）

実施例２食物摂取アッセイにおいてＰＰＦポリペプチドは食物摂取を抑制する
メスのＮＩＨ／Ｓｗｉｓｓマウス（８−２４週齢）を０６００時に照明を点けて１２：１２時間明暗周期で集団飼育する。注釈がない限り、水と標準的マウスペレット固形飼料食は自由に摂取させる。実験の１日前、１５００時頃に動物の絶食を開始する。実験の朝、動物を実験群に分ける。典型的な研究では、３匹／ケージで、ｎ＝４ケージである。

０分、全動物に溶媒、もしくは約１０ｎｍｏｌ／ｋｇから１００ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲の量の化合物を腹腔内投与し、直ちに予め秤量した（１０−１５ｇ）標準固形飼料を与える。３０分、６０分、１２０分時に餌を除いて秤量し、食餌消費量を測定する（Ｍｏｒｌｅｙ，Ｆｌｏｏｄｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６７：Ｒ１７８−Ｒ１８４，１９９４）。３０分、６０分、１２０分、１８０分、および／または２４０分のタイムポイント時に残っていた餌の重量を、例えば０分時に供給した餌の重量から差し引くことにより、食餌摂取を計算する。ＡＮＯＶＡで有意な処理効果が確認された（ｐ＜０．０５）。有意差があった場合、ダネット検定を用いてテスト平均をコントロールと比較する（Ｐｒｉｓｍｖ．２．０１，ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。

図１−４は、前述の食物摂取アッセイにおいて累積食餌摂取の減少に対する本発明のいくつかのＰＰＦポリペプチドの効力を示す。さらに、図４０は、ＮＩＨ／ＳｗｉｓｓマウスとＨＳＤラットモデルにおける食餌摂取の減少において、ＰＰＦポリペプチドの化合物４８８３の急性投与がＰＹＹ（３−３６）より一層効果的であることが明らかになったことを示す。

実施例３ＰＰＦポリペプチドは高脂肪食（食餌性肥満、もしくはＤＩＯ）のＣ５７ＢＬ／６マウスおよび高脂肪食ＨＳＤラットにおいて体重増加を減少させる
オスのＣ５７ＢＬ／６マウス（研究開始時点で４週齢）に高脂肪固形飼料（ＨＦ、食餌カロリーの５８％ｋＣａが脂肪）もしくは低脂肪固形飼料（ＬＦ、食餌カロリーの１１％ｋＣａｌが脂肪）を与える。固形飼料を開始して４週間後、所定の用量のＰＰＦポリペプチドを継続的に２週間皮下送達する浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ＃２００２）を各マウスに埋め込む。体重および食餌摂取を毎週測定する（Ｓｕｒｗｉｔｅｔａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ-ＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ，４４：６４５−５１，１９９５）。試験化合物の効果は、処理群あたり少なくとも１４匹のマウスの体重変化％の平均±標準偏差で表す（つまり、開始体重からの変化％）（ｐ＜０．０５ＡＮＯＶＡ、ダネット検定、Ｐｒｉｓｍｖ．２．０１，ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。

ラット：処理前夜、高脂肪食（脂肪から４５％ｋＣａｌ）を摂取しているオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（登録商標）ラット（平均体重＝４１５）を同等の２４時間食餌摂取に基づき二つの処理群に割り当てた。試験当夜、各動物に溶媒（１０％ＤＭＳＯ）もしくは化合物（１ｍｇ／ｋｇ）を消灯（１８００時）直前に単回腹腔内注射し、ＤｉｅｔＰｒｏの自動給餌ケージに個別に置いた。各ケージはコンピュータに接続された秤上に乗ったフードホッパーと、水のボトルを備えている。その後２４時間、毎時間食餌摂取（ｇ）を記録する。動物は６夜連続注射を受けた。体重を毎晩記録した。

図５−６は、前述のＤＩＯマウスアッセイにおいて、体重増加の減少に対する本発明のいくつかのＰＰＦポリペプチドの効力を示す。図７は、高脂肪食ラットにおいて１日１回数晩の注射が体重増加の顕著な減少を引き起こす（Ｐ＜０．０５）ことを表す。例えば、図８は、食餌摂取アッセイとＤＩＯマウスアッセイの両方で、本発明のＰＰＦポリペプチドがＰＹＹ（３−３６）よりもより強い効力を示すことを表す。例えば、図４２は、本発明の別のＰＰＦポリペプチドの摂食パターンに対する効果を示し、ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３が３夜目と５夜目に食餌摂取を減少させ、７日にわたって体重を有意に減少させ、また、６日間、餌の総消費量を減少させることを表す。

実施例４ＰＰＦポリペプチドは血圧を低下させる
オスのＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＨＳＤ）ラットを２２．８±０．８°Ｃで１２：１２時間明暗周期で飼育し、遠隔測定による循環系に対するＰＰＦポリペプチドの効果の研究に用いた。実験は明周期中に行った。遠隔測定は埋め込まれた無線送信機を介して、意識がある状態の無麻酔状態での無拘束ラットの動脈圧、心拍、動脈ｄＰ／ｄｔを含む血行動態のリアルタイムの読み取りを可能にする。本実施例では、ラットに溶媒、１０ｎｍｏｌ／ｋｇＰＹＹ、１０ｎｍｏｌ／ｋｇＰＹＹ（３−３６）もしくは１０ｎｍｏｌ／ｋｇのいくつかのＰＰＦポリペプチドのいずれかを遠隔静脈投与により注入した。遠隔静脈投与は、留置静脈注入口（ＡｃｃｅｓｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓｋｏｋｉｅ，ＩＬ）により達成される。注入口は、肩甲骨の間の皮膚直下の筋肉の下に固定する。カテーテルを頸静脈に留置する。データは注入後６０分間まで回収した。

図９Ａ−Ｂに示すように、化合物４６７６の平均動脈圧（ＭＡＰ）上昇に対する効果はＰＰＹ（３−３６）の効果と同様だった。図９Ｃ−Ｄは、化合物４２４７の平均動脈圧（ＭＡＰ）上昇に対する効果と心拍数の減少がＰＹＹ（３−３６）の効果と同様であり、この効果は化合物４５６０で鈍ることを示す。

図４６は、ＰＰＦポリペプチド化合物４７５３もＰＰＹ（３−３６）と比較して心拍数を減少させる一方、ＭＡＰに対する効果はＰＰＹ（３−３６）と同程度であることを示す。図４７は、ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３の心拍とＭＡＰに対する効果がＰＰＹ（３−３６）と同程度であることを示す。

実施例５ＰＹＹおよびＰＹＹ作動薬の分泌抑制作用
胃酸分泌
オスのＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＨＳＤ）ラットを２２．８±０．８°Ｃで１２：１２時間明暗周期で飼育した。実験は明周期中に行った。動物にはラット固形飼料（ＴｅｋｌａｄＬＭ４８５，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を与え、実験前に約２０時間絶食させた。実験の開始までは自由に水を摂取させた。

ラット（１１−１６週齢、体重２９１−３６５ｇ）にＤａｖｉｄＯｓｂｏｒｎｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，ＵＣＬＡによる特注の胃フィステルを外科的に取り付けた。一晩絶食させたラットを秤量し、胃フィステルの蓋を開けて柔軟なＴｙｇｏｎチューブ（３／８ｘ１／１６）を胃内に延びたＰＥ２０５チューブの断片に取り付けた。生理食塩水を細いＰＥ２０５チューブを通じて注入し、流出物をＴｙｇｏｎチューブから回収した。フィステルと空の胃を通じた適切な液流を確保するため、室温の生理食塩水〜５ｍＬで、流れが容易になり、流出物がきれいになるまで胃を数回洗い流した。胃酸分泌は、１０分間隔で５ｍｌの生理食塩水（ｐＨ７．０）を、次に３ｍＬの空気を注入して流出物を回収することで測定した。ｐＨメーター（ＢｅｃｋｍａｎｍｏｄｅｌｎｕｍｂｅｒＰＨＩ３４Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を用いて、３ｍＬの各胃吸引物を０．０１Ｎの水酸化ナトリウムで７．０まで滴定した。回収した総量で補正した各滴定に必要だった塩基の量を各資料の酸のモル計算に用いた。

ベースライン試料を回収した後、回収した体積を記録し、動物に１２５μｇ／ｋｇのペンタガストリン（Ｓｉｇｍａ，ｌｏｔ＃４０Ｋ０６１６）を皮下注射し、１０分後、胃液のサンプリングをさらに２時間続けた。ペンタガストリン注射４０分後、胃酸分泌の典型的な安定した水平状態が観察された時に、ラットに動物当たり１、３、１０、１００μｇ用量のＰＹＹ（３−３６）、もしくは生理食塩水の皮下注射を行った（体重２９０ｇのラットの場合、それぞれ３．４５、１０．３４、３４．５、３４４．８μｇ／ｋｇ）（それぞれ、ｎ＝３、２、４、４、６）。

図１０に示すように、胃酸排出量はペンタガストリン刺激での分泌に対する％で表し、ペンタガストリン注射後２０、３０、４０分のタイムポイントの平均として計算した。タイムポイントへの反応として、胃酸分泌は９．３±５．８μｍｏｌ／１０分の基本速度からペンタガストリン注射後４０分の６２．８±３．８μｍｏｌ／１０分へと６．８倍増加した（総平均：Ｐ＜０．０１）。ペンタガストリン投与４０分後にＰＹＹ（３−３６）を注射したところ、胃酸産生が顕著に阻害された。ＰＹＹ（３−３６）を１０μｇ（３４．５μｇ／ｋｇ）と１００μｇ（３４４．８μｇ／ｋｇ）の用量で投与した場合、酸の分泌はそれぞれ７４．７±７．２％および８４．７±９．７％まで減少した（ｔ検定：Ｐ＜０．０５、およびＰ＜０．０１、ＰＹＹ（３−３６）注射後２０分後）（図１１−１７のｔ＝６０分を参照）。ペンタガストリン刺激胃酸分泌のＰＹＹ（３−３６）による阻害の用量反応性を図１１に示す。ＰＹＹ（３−３６）の制酸作用のＥＤ_５０は、１１．３１μｇ／ｋｇ±０．０５４ｌｏｇ単位だった。

胃内容排出
胃内容排出に対するＰＹＹ（３−３６）の効果を測定するため、意識がある絶食させていないオスのＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットを任意で三つの全面処理群に分けた。１）「ＡＰｘ」と示した動物は、最後野に吸引傷を作った。２）「Ｓｈａｍ」と示した動物は、外科手術の作用に対するコントロールであり、頭蓋部分を外科的に切開する疑似手術を行ったが、脳には傷は作らなかった。。３）切開を行わなかったコントロール動物は、「コントロール」と示し、手術は行わなかった。３つの各全面処理群のいずれかで、動物を投与群に分け、生理食塩水のみ、もしくは、生理食塩水に溶解したＰＹＹ（３−３６）の３、３０、９０、３００μｇ／ｋｇのボーラス投与のいずれかを投与した。実験は手術の少なくとも２週間後（体重４２６±８ｇ）に行い、３週間後（体重５４４±９ｇ）に再度実験を行った。全てのラットは２２．７℃で１２：１２時間の明暗周期（実験は明周期中に行った）で飼育し、水と餌は自由摂取させた（ｄｉｅｔＬＭ−４８５Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）。

生理食塩水に溶解したＰＹＹ（３−３６）を、水１ｍＬ中の５μＣｉＤ−［３−^３Ｈ］−グルコース（ｌｏｔ＃３１６５０３６Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）の強制経口投与５分前に０．１ｍＬの皮下ボーラスとして投与した。経口流動食を与えた後、動物に溶媒もしくは異なる用量のＰＹＹを皮下投与した。
１５群の処理群があった。
（１）コントロール生理食塩水ｎ＝４
（２）コントロール３μｇ／ｋｇｎ＝３
（３）コントロール３０μｇ／ｋｇｎ＝４
（４）コントロール９０μｇ／ｋｇｎ＝５
（５）コントロール３００μｇ／ｋｇｎ＝５
（６）Ｓｈａｍ生理食塩水ｎ＝５
（７）Ｓｈａｍ３μｇ／ｋｇｎ＝２
（８）Ｓｈａｍ３０μｇ／ｋｇｎ＝４
（９）Ｓｈａｍ９０μｇ／ｋｇｎ＝３
（１０）Ｓｈａｍ３００μｇ／ｋｇｎ＝５
（１１）ＡＰｘ生理食塩水ｎ＝５
（１２）ＡＰｘ３μｇ／ｋｇｎ＝３
（１３）ＡＰｘ３０μｇ／ｋｇｎ＝３
（１４）ＡＰｘ９０μｇ／ｋｇｎ＝３
（１５）ＡＰｘ３００μｇ／ｋｇｎ＝５
測定のため、強制経口投与後−１５、０、５、１５、３０、６０、および９０分に麻酔のラット尾部より血液を採取し、血漿グルコース由来のトリチウムを測定するために血漿を分離した（b−カウンターで１０μｌ当たりのＣＭＰを測定した）。血漿中のトリチウムの出現は、胃内容排出を反映することが過去に示されている。血漿中へのトリチウムの統合された出現は、トリチウム強制経口投与前の濃度以上の増加量として台形法を用いて計算した（３０分間の曲線下面積（ＡＵＣ））。

未手術のコントロールラットでは、ＰＹＹ（３−３６）は用量に依存して標識の出現を阻害した（ＰＹＹ（３−３６）、３０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇに対して、それぞれ１０．５±１．５、７．２６±１．５２および３．２０±１．２１ｃｐｍ／μＬ分、Ｐ＜０．０００１ＡＮＯＶＡ、図１２および１３を参照）。疑似手術を行ったラット（ｓｈａｍ）では、３０μｇ／ｋｇ（ｎ＝４）と９０μｇ／ｋｇのＰＹＹ（３−３６）注射（ｎ＝３）も、生理食塩水を注射したコントロール（ｎ＝５）と比較して標識出現を用量依存的に遅らせた（それぞれ１１．８９±３．２３、９．８８±２．４５、１８．９４±３．２３ｃｐｍ／μＬ／分、Ｐ＜０．０５ＡＮＯＶＡ、図１４および１５を参照）。疑似手術を行った動物でのＰＹＹの最大作用は、無傷の未手術のコントロールラットよりも少なく、ＥＤ_５０も未手術のコントロール動物より低かった（４３．７７から１０．２０μｇ／ｋｇＰＹＹ［３−３６］に減少）。ＡＰｘラットでは、胃内容排出は疑似手術または未手術コントロールラットよりも遅くなったが（９．３８±３．２５ｃｐｍ／μＬ／分、Ｐ＜０．０５、０．０５、図１６および１７参照）、ＰＹＹ（３−３６）の投与では変化しなかった。回帰分析で用量依存性が無いことが確認された。

結果は、正常のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットではＰＹＹ（３−３６）が胃内容排出の速度を強力に調節していることを示した。ＰＹＹ（３−３６）の注射後に、胃内容排出の用量依存性の阻害が観察された（３０、９０および３００mｇ／ｋｇ）。吸引傷を与えた動物は、未手術コントロールラットと疑似手術コントロールラットと比較して胃内容排出が遅延する傾向があった（データは示さず）。ＰＹＹ（３−３６）投与は、吸引傷を与えた動物の胃内容排出速度に対する付加的作用はなかった。

図４５は、ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３の投与がＰＹＹ（３−３６）よりさらに強力に胃内容排出を阻害することを示す。

胆嚢内容排出
正常な消化の過程において、胃内容排出速度と胆嚢内容排出速度は協調している可能性がある。循環しているＰＹＹが食後の胆嚢内容排出の頭相を抑制するが、食事で刺激された最大排出は抑制しないと報告されている。また、ＰＹＹの胆嚢内容排出に対する作用は、コレシストキニン依存性経路ではなく迷走神経依存性経路に仲介されると仮定された（Ｈｏｅｎｔｊｅｎ，Ｆ，ｅｔａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００１３６（１０）：１０８６−９１）。胆嚢内容排出に対するＰＹＹ［３−３６］の効果を測定するため、８週齢のオスのＮＩＨ／Ｓｗｉｓｓマウスを２２．８±０．８°Ｃで１２：１２時間明暗周期で飼育し、齧歯類の標準飼料（ＴｅｋｌａｄＬＭ７０１２，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と水を自由摂取させた。実験前にマウスを３時間絶食させた。ｔ＝０に、ＰＹＹ（３−３６）、ＣＣＫ−８、もしくは生理食塩水を意識があるマウスに皮下注射した。３０分後、マウスを頸椎脱臼により安楽死させ、正中線開腹を行い、胆嚢を摘出し手秤量した。
処理群
Ａ群：生理食塩水１００mｌ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝１４。
Ｂ群：ＰＹＹ（３−３６）１μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝６。
Ｃ群：ＰＹＹ（３−３６）１０μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝１０。
Ｄ群：ＰＹＹ（３−３６）１００μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝８。
Ｅ群：ＣＣＫ−８１μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝３。
Ｆ群：ＣＣＫ−８１０μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝３。
Ｇ群：ＰＹＹ（３−３６）１０μｇ／ｋｇ＋ＣＣＫ−８１μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝４。
Ｈ群：ＰＹＹ（３−３６）１０μｇ／ｋｇ＋ＣＣＫ−８１０μｇ／ｋｇ、皮下投与、ｔ＝０、ｎ＝４。

図１８および１９に結果を示す。ＰＹＹ（３−３６）は用量依存的に基礎胆嚢内容排出をＥＤ_５０＝９．９４μｇ／ｋｇ±０．２４ｌｏｇ単位で阻害した。最高用量（Ｄ群）は生理食塩水を注射したコントロール（Ａ群）に対して胆嚢重量を１６８％増加させた（Ｐ＜０．００５）。ＰＹＹ（３−３６）はＣＣＫ−８で刺激した胆嚢内容排出は阻害しなかった。データは、ＰＹＹ（３−３６）がＣＣＫ−８刺激非依存性の経路を介して胆嚢内容排出を阻害することを示す。外因的なＣＣＫに反応した胆嚢内容排出はＰＹＹ（３−３６）の影響を受けなかった。同様の結果が、意識があるイヌにおいてＰＹＹ（１−３６）で得られ、４００ｎｇ／ｋｇのボーラス＋８００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈの輸液はＣＣＫ−８で刺激された胆嚢収縮を阻害しなかった。

胆嚢内容排出に対するＰＹＹ（３−３６）の作用が迷走神経−コリン作用性経路を介しているのはあり得ることである。この考えは、最近ラットにおいてオートラジオグラフにより特異的なペプチドＹＹ（ＰＹＹ）結合部位が最後野、孤束の核、および背側運動核領域（背側迷走神経複合体（ＤＶＣ）とまとめて呼ばれる）に特定された、という知見により支持されている。これらの延髄脳幹領域は、運動性や分泌などの消化管機能の迷走神経反射の制御に役割を果たしている。ＰＹＹ（３−３６）は迷走神経−コリン作用性機構を介する胃内容排出といったその他の消化機能を阻害する。

実施例６ＰＹＹおよびＰＹＹ作動薬の胃保護効果
オスのＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットを２２．８±０．８°Ｃで１２：１２時間明暗周期で飼育し、齧歯類の標準飼料（ＴｅｋｌａｄＬＭ４８５，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と水を自由摂取させた。２００−２２０ｇのラットを実験前に約２０時間絶食させた。

ｔ＝−３０にて、ＰＹＹ（３−３６）もしくは生理食塩水を皮下投与した。ｔ＝０にて、１ｍＬの無水エタノール（エチルアルコール−２００アルコール度数の無水アルコール、アメリカ薬局方規格）もしくは生理食塩水を強制経口投与した。ｔ＝３０にて、ラットを５％イソフルオランで麻酔した。正中線開腹切開を行った。胃を露出し、幽門と下部食道括約筋で結紮した。胃を切除し、小弯にそって切開し、粘膜を露出するために反転させた。粘膜を生理食塩水で穏和に洗浄し、損傷（潰瘍、拡張血管、粘膜内層の剥離）を、治療について先入観のない観察者が評価を行った。粘膜の損傷は、０（損傷なし）と５（胃の１００％が充血と潰瘍で覆われている）の間で点数化した。
処理群
ＧｒｏｕｐＡ：生理食塩水１００mをｔ＝−３０に皮下投与、１ｍｌＨ_２Ｏをｔ＝０に強制経口投与、ｎ＝４。
ＧｒｏｕｐＢ：生理食塩水１００μｌをｔ＝−３０に皮下投与、１ｍｌの無水エタノールをｔ＝０，に強制経口投与、ｎ＝６。
ＧｒｏｕｐＣ：ＰＹＹ（３−３６）１μｇ／ｋｇをｔ＝−３０に投与、１ｍｌの無水エタノールをｔ＝０に強制経口投与、ｎ＝５。
ＧｒｏｕｐＤ：ＰＹＹ（３−３６）１０μｇ／ｋｇをｔ＝−３０に投与、１ｍｌの無水エタノールをｔ＝０に強制経口投与、ｎ＝４。
ＧｒｏｕｐＥ：ＰＹＹ（３−３６）１００μｇ／ｋｇをｔ＝−３０に投与、１ｍｌの無水エタノールをｔ＝０に強制経口投与、ｎ＝５。
ＧｒｏｕｐＦ：ＰＹＹ（３−３６）３００μｇ／ｋｇをｔ＝−３０に投与、１ｍｌの無水エタノールをｔ＝０に強制経口投与、ｎ＝５。

１０、１００および３００μｇ／ｋｇのＰＹＹ（３−３６）注射後、ＰＹＹ（３−３６）は損傷スコアを用量依存的にそれぞれ２７．４±６．４、２９．３±１１．６および５３．７± ７．９％に低下させた（ｎ＝４、５、５、ｐ＜０．０５ＡＮＯＶＡ）（図２０）。ＰＹＹ（３−３６）は、ラットにおいて胃保護効果を示した。内在的に循環するＰＹＹ（３−３６）は、胃酸分泌および胃粘膜保護に生理的役割を果たしている可能性がある。

実施例７−１０食物摂取、体重増加、代謝速度、体組成に対するＰＰＦポリペプチドの効果
齧歯類において、ＰＹＹ（３−３６）投与後の体重減少は、食物消費の減少もしくはその他のエネルギーバランスに影響する過程（エネルギー消費、組織レベルの燃料分配、および／または腸の栄養摂取など）に起因する可能性がある。食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける代謝速度、脂肪燃焼および／または糞便エネルギー損失に対するＰＹＹ（３−３６）の持続的皮下注入（１ｍｇ／ｋｇ／日、７日まで）の効果を検討した。

動物の世話と飼育条件
実施例７−１０は、代謝疾患のための食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルを使用した。処理期間の前に、オスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに高脂肪食（＃Ｄ１２３３１、カロリーの５８％が脂質、ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．）を４週齢から始めて６週間与えた。研究中、注釈がない限り、処理期間中マウスは粉末状のこの高脂肪食を続けた。動物を１２：１２時間明暗周期下で２１−２３℃で飼育し、処理の前後、餌を自由摂取させた。一部の実施形態では標準固形飼料を与えた。標準的固形試料食８週齢のオスＮＩＨ／Ｓｗｉｓｓ（非肥満）マウス（ＨａｒｌａｎＴｅｋｌａｄ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を胆嚢内容排出実験に使用した。言及された場合、ＤＩＯ群の代謝パラメーターと比較するために、同年齢の非肥満マウスの一群に低脂肪食（＃Ｄ１２３２９、カロリーの１１％が脂質）を与えた。

ペプチドの出所
一部の実施形態では、ヒトＰＹＹ（３−３６）（純度＞９８％）のトリフルオロ酢酸塩を標準的方法（Ｐｅｐｔｉｓｙｎｔｈａ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）で合成し、同一性を質量分析で確認した。

体組成解析の実験計画、血液および組織採取
代謝パラメーターの研究（研究Ａ）、腸による栄養摂取（研究ＢおよびＣ）、食餌摂取と体組成（研究ＢおよびＣ）は、実験前に単独で１週間飼育したマウスを用いた。実験を通して、食餌摂取と体重を毎日監視した。処理期間中、溶媒（５０％ジメチルスルホキシド水溶液）とＰＹＹ（３−３６）（１ｍｇ／ｋｇ／日）を、イソフルランの麻酔下で肩甲骨の間に取り付けたＡｌｚｅｔ（登録商標）浸透圧ポンプ（研究それぞれ３、７、および２８日目、ＤｕｒｅｃｔＣｏｒｐ．，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ；Ｍｏｄｅｌｓ１００３Ｄ，２００１，＆２００４）を用いて持続皮下注射により投与した。各研究の最後に、動物を２−４時間の絶食後に過剰量のイソフルランで屠殺した。心臓穿刺で血液をヘパリンナトリウムで洗い流した注射器に採取し、血漿を直ちに凍結した。一部の実施形態では（研究ＢおよびＣ）、体組成を二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ、ＰｉｘｉＭｕｓ，ＧＥＬｕｎａｒ）で測定した。両側の副睾丸脂肪体および肩甲骨褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を解剖し、秤量した。切除した肝臓試料をＲＮＡＬａｔｅｒ中に置き（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、−２０℃で保存した。

間接熱量測定法（研究Ａ）。ＤＩＯマウスを、処理後代謝速度とＲＱ（Ｏｘｙｍａｘ、ソフトウェア・バージョン２．５２、ＣｏｌｕｍｂｕｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）の測定前に、４日間間接熱量計ケージに順化した。処理前２日の動物内のＣＶ％ベースラインは明期と暗期のエネルギー消費はそれぞれ平均４．６±０．８％と４．０±０．８％であり、順化が十分であることを示している。浸透圧ポンプの埋め込み後（溶媒コントロール、ｎ＝１３；ＰＹＹ（３−３６）１ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１２）、熱量測定を継続的に７日以上行った。熱発生量は、機器のソフトウェア（Ｌｕｓｋ，Ｇ．，（１９２８）ＴｈｅＥｌｅｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅＳｃｉｅｎｃｅｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，４ｔｈＥｄ．，Ｗ．Ｂ．ＳａｕｎｄｅｒｓＣｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａに基づく）で計算し、各処理日に測定した体重と比較して報告する。

糞便エネルギー解析（研究ＢおよびＣ）。処理前の４日間、マウスを代謝ケージ（ＤｉｕｒｅｓｉｓＣａｇｅｓ；ＮａｌｇｅＮｕｎｃＩｎｔ’ｌＣｏｒｐ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ；研究Ｂ）、もしくはワイヤーメッシュの床で一段高くした標準的ケージ（研究Ｃ）に順化させ、また粉末化した高脂肪固形飼料に順化させた。研究Ｂでは、糞便エネルギー含量を断熱式ボンベ熱量計（ＣｏｖａｎｃｅＬａｂｓ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で測定した。十分な材料を採取するため、各マウスにつきプーリング戦略を利用した。個々の２日間のベースライン期間、初期処理期間（１、２、３日目）、そして後期処理期間（４、５、６日目）にプールした試料を比較した。研究Ｃでは、糞便エネルギー含量を最後の２４時間にわたって吸収紙を敷いたケージの床から採取した試料で測定した。

ＤＩＯマウスにおける体重に対するＰＹＹ（３−３６）の長期作用。溶媒（ｎ＝１８）もしくはＰＹＹ（３−３６）（ｎ＝２４。このモデルにおける過去の研究での体重変化に対する推定ＥＤ_５０＝３００μｇ／ｋｇ／日（Ｐｉｔｔｎｅｒ，ｅｔａｌ．，（２００４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．Ｒｅｌａｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．２８：９６３−７１）をＤＩＯマウスにＡｌｚｅｔ皮下浸透圧ポンプで皮下投与した。２８日目、ポンプを交換し、コントロールは溶媒の投与を継続し、ＰＹＹ（３−３６）群の半数（ｎ＝１２）はペプチドの投与を継続した。最初の処理期間にＰＹＹ（３−３６）の投与を受けた残りの半数のＰＹＹ（３−３６）群（ｎ＝１２）は、ペプチドの投与打ち切りの影響を試験するために、溶媒を入れた新しいポンプを受けた。マウスにはペレット状の高脂肪食を与え、体重と食餌摂取を毎週記録した。

マウスにおける胆嚢内容排出。食後状態（３時間の絶食）の非肥満マウスに、生理食塩水（ｎ＝１４）または１、１０、もしくは１００μｇ／ｋｇのＰＹＹ（３−３６）（それぞれ、ｎ＝６、１１、８）を皮下注射した。注射後３０分に動物を頸椎脱臼により屠殺し、胆嚢内よ肺述速度の測定のために胆嚢を切除して秤量した。

生化学的アッセイ。標準的比色分析を用いて、血漿βヒドロキシ酪酸塩（Ｃａｔ．＃２４４０，ＳＴＡＮＢＩＯＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂｏｅｒｎｅ，ＴＸ）、グリセロール（Ｃａｔ．＃ＴＲ０１００，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、および非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡＣ，Ｃａｔ．＃９９４−７５４０９，ＷａｋｏＣｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡ）を測定した。血漿中のＰＹＹの総免疫活性は、マウスもしくはラットＰＹＹ（３−３６）に対して＜０．１％の交差反応性を示すヒトＰＹＹＲＩＹを用いてＬｉｎｃｏＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＳｅｒｖｉｃｅｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で測定し、平均した結果１ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）で処理したマウスで３９．３ｎｇ／ｍｌ（〜１０ｎＭ）だった。生体外脂肪分解（１時間のグリセロール放出）をＨｅｆｆｅｒｎａｎ（Ｈｅｆｆｅｒｎａｎ，ｅｔａｌ．，（２０００）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２７９：Ｅ５０１−７）の方法を用いて、非肥満のメスマウス腹膜後脂肪組織標品で測定した。脂肪組織を、生理的血漿濃度の上限値から薬理的血漿濃度までの範囲（０．０５、０．５、および１０ｎＭ）のＰＹＹ（３−３６）とインキュベートした。数値を、無処理の脂肪組織の基礎速度と比較した。

時間、処理、時間ｘ処理の作用の相互関係を判定するために、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて、コントロールと処理を行った動物の間の時間に伴う統計的比較（実施例７および８）を行った（Ｐｒｉｓｍｖ．４．０１，ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）。コントロールと処理群間の差は、ｔ検定により解析した。差は、ｐ＜０．０５で統計的に有意であると見なされた。一部の実施形態では、時間に伴って測定した処理群のパラメーターの平均間の差は反復測定分散分析を用いて解析し、タイムポイント内のポストホックテストは、単純な作用についてプールした標準誤差を用いて検定した（ＳＰＳＳｖｅｒｓｉｏｎ１３．０，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）。二つの群の比較はスチューデントのｔ検定を用いて行い、用量反応性データは、一元配置ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙ比較法を用いて評価した。データは、平均±標準誤差として、ｐ＜０．０５と統計的に有意と見なして示している。

遺伝子発現解析。遺伝子発現解析のためのＲＮＡは、組織の一部からメーカーの取扱書（ＲｉｂｏＰｕｒｅｋｉｔ＃１９２４；Ａｍｂｉｏｎ）に従って単離した。ｍＲＮＡの存在量を測定するために、ワンステップ定量リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析を用いた（ＡＢＩ７９００ＨＴ；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）。５０μＬの反応条件は、２．５μＬのＡｓｓａｙ−ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（登録商標）プライマー／プローブミックス、１ＸＭａｓｔｅｒＭｉｘ、１ＸＭｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ／ＲＮＡｓｅ阻害剤ミックス、および５０ｎｇのＲＮＡがだった。ＲＴ−ＰＣＲの条件は、４８°Ｃで３０分、９５°Ｃで１０分、次に４０サイクル（９５°Ｃで１５秒／６０°Ｃで１分）だった。各遺伝子については、市販のプライマー／プローブセット（ＡＢＩ）を用いて同時に１８ＳＲＮＡの存在量をアッセイすることで、ローディングの変動に対してサイクル数を補正した。肝臓型カルニチンパルミチン酸転移酵素１（Ｌ−ＣＰＴ１もしくはＣＰＴ１ａ、Ｍｍ００５５０４３８ｍ１）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ１（ＡＣＣ１、Ｍｍ０１３０４２５７ｍ１）、ＡＣＣ２（Ｍｍ０１２０４６７７ｍ１）、ミトコンドリア・ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ合成酵素（ＨＭＧＣＳ２、Ｍｍ００５５００５０ｍ１）、マロニルＣｏＡ脱炭酸酵素（ＭＣＤもしくはＭＬＹＣＤ、Ｍｍ０１２４５６６４ｍ１）、および脱共役タンパク質１（ＵＣＰ１、Ｍｍ００４９４０６９ｍ１）の遺伝子に対応するｍＲＮＡの相対存在量は、ＡＢＩＡｓｓａｙ−ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（登録商標）プライマー／プローブセットを用いて測定した。これらの遺伝子発現解析の結果を下の表３に示す。ｍＲＮＡの存在量は、所定の処理時間内の倍差ｖｓ溶媒−処理コントロール値として表現されている。＊Ｐ＜０．０５ｖｓ溶媒。

（表３）

実施例７
単独飼育したＤＩＯマウスに、溶媒（５０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）水溶液）ｎ＝１３もしくは合成ヒトＰＹＹ（３−３６）ｎ＝１２のいずれかを送達するために皮下（ＳＣ）肩甲骨間浸透圧ポンプを埋め込んだ。後者の群のポンプは、１０００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）を７日間送達するよう設定した。

体重と食餌摂取を一定間隔で研究期間、測定した。呼吸商（ＲＱ、ＣＯ_２精製、Ｏ_２消費と定義される）と代謝速度を動物全身間接熱量測定法（Ｏｘｙｍａｘ，ＣｏｌｕｍｂｕｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を用いて測定した。

マウスをイソフルラン過剰投与で安楽死させ、脂肪過多症の指標（両側の副睾丸脂肪体重量）を測定した。

実施例８
本実験は、基本的に実施例７に述べられた群あたりｎ＝９（溶媒とＰＹＹ（３−３６））の研究を反復した。しかし、副睾丸重量の測定前に、各マウスの体組成（除脂肪組織量、脂肪量）を二重エネルギーＸ線吸収（ＤＥＸＡ）測定装置を用いてメーカー（ＬｕｎａｒＰｉｘｉｍｕｓ，ＧＥＩｍａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）の取扱い説明書に従って解析した。

図２１Ａおよび２１Ｂは、溶媒もしくはＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）を７日間継続投与したＤＩＯマウスの体重変化を、ベースラインに対するパーセントとして示す。図２１Ａは、実施例７の結果を示し、図２１Ｂは実施例８の結果を示し、有意性はコントロールに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１と示す。
図２２Ａおよび２３Ｂは、溶媒もしくはＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）を７日間継続投与したＤＩＯマウスの食餌摂取の変化を、ベースラインに対するパーセントとして示す。図２２Ａは、実施例７の結果を示し、図２２Ｂは実施例８の結果を示し、有意性はコントロールに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１と示す。図２２Ａでは３日目（‡はｐ＝０．０６を示す）に食餌摂取が減少し、図２２Ｂでは５日目（‡はｐ＝０．１を示す）に食餌摂取が減少する傾向が現れる。

実施例７では、マウスの呼吸商（ＲＱ）を測定し比較した。ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスのＲＱは、数回の暗周期の間減少し、研究期間を通じて明周期の間やや低くなった。ほぼ０．７０のＲＱ値は、動物のエネルギー需要を満たすために脂質異化に依存していることを示す。従って、ＰＹＹ（３−３６）を投与した動物における比較的低いＲＱは、コントロールのマウスに対してエネルギーに対する脂質利用の増加と一致している（コントロールに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。効果は、動物が食後状態である明周期の間に（暗周期に対して食餌摂取が減少する）特に持続的である（図２３Ａおよび２３Ｂを参照）。これらの結果は、ＰＹＹ（３−３６）がカロリー需要を満たすために脂肪燃焼を促進する特性を有し、タンパク質に対して脂質の選択的損失を引き起こす可能性を示す。

さらに、ＤＩＯマウスにおいてＰＹＹ（３−３６）投与で観察された溶媒投与コントロールに対するＲＱの減少は、エネルギーのための組織レベル、細胞レベルでの脂肪利用の向上を示す（脂肪酸β酸化の増加）。代謝速度とＲＱの大部分は、肝臓や骨格筋といった非脂肪組織における代謝に影響される。その結果、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）およびその作動薬は、除脂肪体重を維持したままでの非脂肪組織における脂肪酸β酸化の向上が望ましい状況において治療的に有用である可能性がある。前記の状態の例は、非アルコール性脂肪性肝炎およびリポジストロフィを含むがそれに限定されない。さらに具体的な例は、プロテアーゼ阻害剤を服用しているエイズ患者の治療である可能性がある。これらの患者は中枢、体幹周囲のサイズが増加する一方、同時に手足の脂肪が減少するリポジストロフィ（異常な脂肪分配）に罹る可能性がある。治療目標は中枢の脂肪減少と末端筋肉量の増加である。

例えば、図２４Ａ、２４Ｂ、２５Ａ，２５Ｂは、ＰＹＹ（３−３６）とその作動薬が除脂肪組織の減少を越えて脂肪の減少を選択的に誘導する特性を有する証拠を示す。実施例７および実施例８のマウスの副睾丸脂肪組織を秤量した。図２４Ａ、２４Ｂと実施例７および実施例８にそれぞれ示すように、溶媒を投与したマウスに対するＰＹＹ（３−３６）を投与したマウスでの副睾丸脂肪組織重量の減少は、ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスにおける脂肪組織減少を示す（コントロールに対して＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１）。加えて、ＰＹＹ（３−３６）を投与したマウスにおける脂肪組織減少は、実施例８のマウスのＤＥＸＡで測定されたやや低い動物全身脂肪量で支持されている（図２５Ａ、コントロールに対して＊＊ｐ＜０．０１）。ＤＥＸＡの結果から特に興味深いのは、ＰＹＹ（３−３６）を投与したマウスにおいて顕著な体重減少（図２１Ｂ）と脂肪減少（図２４Ｂおよび図２５Ａ）にもかかわらず、除体脂肪体重が維持されて溶媒を投与されたマウスの除体脂肪体重とあまり違わないことである（図２５Ｂ）。

実施例９
この実験では、ＰＹＹ（３−３６）の用量効果を検討し、過去の実験よりも長期間であった。ＤＩＯマウスに溶媒（生理食塩水）もしくはＰＹＹ（３−３６）のいずれかを送達するためにＳＣ肩甲骨間浸透圧ポンプを埋め込んだ。後者の群のポンプは、１０００μｇ／ｋｇ／日までの範囲のＰＹＹ（３−３６）を２８日間送達するよう設定した。体重と食餌摂取を一定間隔で研究期間にわたって測定した。

マウスはケージ当たり２匹で飼育した。本実験における体重と食餌摂取のためのサンプルサイズは、高脂肪コントロール、低脂肪の比較群、および高脂肪食ＰＹＹ（３−３６）群でそれぞれｎ＝２０、ｎ＝１４、およびｎ＝１２だった。体組成測定のためのサンプルサイズは、高脂肪コントロール、低脂肪の比較群、および高脂肪食ＰＹＹ（３−３６）群でそれぞれｎ＝１８、ｎ＝１４、およびｎ＝１２だった。

図２６は、体重変化を低脂肪固定試料を与えた溶媒投与マウス、高脂肪固定試料を与えた溶媒投与ＤＩＯマウス、高脂肪固定試料を与えたＰＹＹ（３−３６）投与ＤＩＯマウスの開始時の体重に対するパーセントとして示す。ＰＹＹ（３−３６）の投与量が増加するにつれ、体重における増加効果を示している（コントロールに対して＊ｐ＜０．０５）。

図２７は、研究の４週間の間のマウスの毎週の食餌摂取を示す。低脂肪食を与えたマウス群と高脂肪食を与えたＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）ＤＩＯマウスは、高脂肪食を与えたＤＩＯマウスコントロールよりも、４週間の研究の間一貫して顕著に少ない餌を消費した。

図２８Ａおよび２８Ｂは、低脂肪食を与えたマウスと高脂肪食を与えたＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）ＤＩＯマウスは脂肪量が少なかったのに対して（溶媒を投与した高脂肪食ＤＩＯマウスコントロールに対して＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）、低脂肪食を与えたマウスは顕著にタンパク質量が少なく、一方ＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）を投与したＤＩＯマウスは高脂肪食を与えたコントロールよりも著しくタンパク質量が少ないということはなかったということを示している。全死体体組成を標準的な方法を用いて近似分析によって測定した（ＣｏｖａｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。

実施例１０
実施例７および８で行ったものと同様の別の研究において、単独飼育したＤＩＯマウスに、溶媒（５０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）水溶液）ｎ＝１０もしくは合成のヒトＰＹＹ（３−３６）ｎ＝１０のいずれかを送達するためにＳＣ肩甲骨間浸透圧ポンプを埋め込んだ。後者の群のポンプは、１０００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）を３日間送達するよう設定した。

図２９Ａおよび２９Ｂは、溶媒もしくはＰＹＹ（３−３６）（１０００μｇ／ｋｇ／日）を３日間継続的に投与したＤＩＯマウスのベースラインに対するパーセントとして体重と食餌摂取の変化をそれぞれ示す。図２９Ａおよび２９Ｂは、ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスにおいて、処理期間の過程を通じて体重と食餌摂取において顕著な減少を示している（コントロールに対して＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１）。

図３０は、副睾丸脂肪組織の重量が低いことで示されたように、ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスはコントロールに対して脂肪が顕著に少ないことを示している（コントロールに対して＊＊ｐ＜０．０１）。図３１Ａは、ＤＥＸＡによって測定された比較的低めの動物全身脂肪量によって示され実施例８で述べられたように、ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスはコントロールに対して脂肪が顕著に少ないことを示す（コントロールに対して＊＊ｐ＜０．０１）。一方、ＰＹＹ（３−３６）を投与したＤＩＯマウスは、コントロールに対して顕著に体重が減少し、食餌摂取が減少し、また脂肪が少なく、図３１Ｂは、ＰＹＹ（３−３６）を投与したマウスの除脂肪重量はコントロールと有意に違わなかったを示す。

図３２Ａおよび３２Ｂは、ＤＩＯマウスにおける溶媒もしくはＰＹＹ（３−３６）の投与の明周期（上のパネル）および暗周期（下のパネル）の間の代謝速度に対する影響を示す。記号：黒丸：溶媒処理コントロール、白いダイヤモンドＰＹＹ（３−３６）処理（１ｍｇ／ｋｇ／日、継続的皮下注射）。０日目は、ベースライン（処理前）の平均値を示す（明周期と暗周期で、それぞれ２５．２±０．３ｋｃａｌ／ｋｇ／ｈｒおよび３０．８±０．３ｋｃａｌ／ｋｇ／ｈｒ）。

図３３は、非肥満マウスにおけるＰＹＹ（３−３６）腹腔内注射の胆嚢内容排出に対する急性作用を示す。減少した基礎胆嚢内容排出速度を反映して重量が高くなる、注射後３０分に測定した胆嚢重量を示す。食塩水処理コントロールに対する有意差＊＊＊ｐ＜０．００１。

図３４Ａおよび３４Ｂは、ＤＩＯマウスの体重と食餌摂取に対する長期にわたるＰＹＹ（３−３６）投与と投薬中止の効果をそれぞれ示す。ＤＩＯマウスをＰＹＹ（３−３６）（３００μｇ／ｋｇ／日）または溶媒で５６日まで処理した。２８日目にＰＹＹ（３−３６）を一部の動物で投薬中止し、溶媒に交換した。記号：黒丸：溶媒処理コントロール、白いダイヤモンドＰＹＹ（３−３６）処理、黒いダイヤモンド：０−２８日をＰＹＹ（３−３６）処理し、次に２８−５６日を溶媒処理。開始時（処理前）の平均体重は２４．７±１．６ｇだった。ＰＹＹ（３−３６）処理マウスで全てのタイムポイントで体重が有意に異なった（溶媒コントロールに対してｐ£０．００１）。ＰＹＹ（３−３６）の投薬中止マウスの体重は、３５日目以降コントロールと違わなかった。

全体的に、食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにけるにおけるＰＹＹ（３−３６）（１ｍｇ／ｋｇ／日、７日まで）の継続的皮下注射は、代謝速度、脂肪燃焼、および／または糞便エネルギー減少を向上させることが観察された。ＰＹＹ（３−３６）は一過的に食餌摂取を減少させ（例えば、処理前ベースラインに対して、２日目で２５−４３％低下）、体重を減少させた（例えば、処理前ベースラインに対して、２日目で９−１０％減少）。体重に対する効果は５６日の研究を通じて持続し、永続的だった。処置２８日後のＰＹＹ（３−３６）の投薬中止は一時的な食餌摂取の増加を伴い、コントロールレベルまで体重が復帰した。質量特異的代謝速度（ｋｃａｌ／ｋｇ／ｈｒ）はコントロールと違いはなかった。明周期のＲＱはＰＹＹ（３−３６）により研究を通じて減少した（コントロール０．７５０±０．００９に対して、平均０．７３０±０．００６、ｐ＜０．００１）。暗周期の呼吸商（ＲＱ）は、ＰＹＹ（３−３６）処理マウスで一過性に減少した（例えば、２日目コントロールが０．７８６±０．００４に対して０．７４７±０．００８、ｐ＜０．００１）。ＰＹＹ（３−３６）処理マウスにおける副睾丸脂肪体重量は約５０％減少した。生体外での脂肪体の脂肪分解は、ＰＹＹ（３−３６）で刺激されず、また脂質代謝に関連する肝臓の遺伝子の発現にも変化はなかった。ＰＹＹ（３−３６）は非肥満マウスにおいて基礎胆嚢内容排出を減少させたが、糞便エネルギー密度（ｋｃａｌ／１００ｇ）はエネルギーバランスに影響するのに十分なほどには変化しなかった。

一部の実施例において、オスのＤＩＯ傾向の近交系ラットをＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。これらのラットは、比較的高脂肪高エネルギーの餌で肥満になる傾向があるＣｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）ＢＲラットの系統から作成された。これらの動物は容易に体重と体脂肪が増加し、高トリグリセリド、高レプチン、高インスリン状態を引き起こす。２２℃、１２：１２時間明暗周期でシューボックス・ケージ内で個別に飼育した。ラットを中程度の高脂肪食（カロリーの３２％が脂肪、ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＤ１２２６Ｂ）で薬剤処理前６週間、自由摂取させた。肥満化期間の終了時、体重は〜５００ｇだった。皮下浸透圧ポンプにより試験化合物の慢性投与を行った。週に１回、間接熱量測定を行った。血漿分析は、１４日目に一晩の絶食後に分析を行った。食餌摂取、体重、体重増加、体組成、代謝速度、ＲＱ、ＥＥ、胃酸分泌、胃内容排出、胆嚢内容排出の分析、および統計学的比較を上述のように行った。

図３５は、ＤＩＯ傾向の近交系ラットにおけるＰＹＹ（３−３６）の投与で観察された１４日目の用量依存性の累積食餌摂取の減少、および体重変化の割合の例を表す。これらのデータに基づき、ＰＹＹ（３−３６）と、肥満の治療、食欲制御または体組成の変更のために市販されている、例えばアミリン、アミリン作動薬、アミリンアナログ作動薬、サケのカルシトニン、コレシストキニン（ＣＣＫ）またはＣＣＫ作動薬、レプチン（ＯＢタンパク質）またはレプチン作動薬、エキセンディンもしくはエキセンディンアナログ作動薬、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１作動薬またはＧＬＰ−１アナログ作動薬、ＣＣＫ、ＣＣＫ作動薬、カルシトニン、カルシトニン作動薬、小分子カンナビノイドＣＢ１受容体拮抗剤、リモナバン、１１β−ヒドロキシステロイド・デヒドロゲナーゼ−１阻害剤、フェンテルミン、シブトラミンなどを含むがそれに限定されない他の薬剤の組合せの影響を探る実験には５００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）投与が選択された。一部の実施形態では５００μｇ／ｋｇ／日の用量のＰＹＹ（３−３６）を１００μｇ／ｋｇ／日の用量のアミリンと組み合わせた。一部の実施形態では２００μｇ／ｋｇ／日の用量のＰＹＹ（３−３６）を１００μｇ／ｋｇ／日の用量のアミリンと組み合わせた。

例えば図３６は、ＤＩＯ傾向ラットにおける体重と空腹時の血漿パラメーターに対する２００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）投与と１００μｇ／ｋｇ／日のアミリンの共投与の有無の典型的な効果を表す。ＰＹＹ（３−３６）の共投与は、体重減少に相加的効果があることが見いだされた。ＰＹＹ（３−３６）単独投与のグルコース低下作用も観察された。さらに、アミリンとＰＹＹ（３−３６）の共投与は、ＨＤＬコレステロール濃度を下げずに、相加的にトリグリセリド濃度を減少させた。これらのＤＩＯ傾向ラットにおいて、ＰＹＹ（３−３６）とアミリンの共投与での体重減少に対する相加的効果に付随して、エネルギー消費（ＥＥ）の顕著な減少なしに呼吸商（ＲＱ）の低下が起こった（図３７参照）。

ＰＹＹ（３−３６）とアミリンの共投与による体重減少における相加的効果に付随して、溶媒と比較して、タンパク質量の付随減少を伴わずに顕著な脂肪組織量の減少も起こった（図３８参照）。従って、ＰＹＹ（３−３６）とアミリンの組合せは除脂肪組織を減らさない体脂肪減少を通じた体組成の変化に効果的であると思われる。

いくつかのＰＰＦポリペプチドのヒトの血漿中での安定性を試験し、ＰＹＹ（３−３６）の血漿安定性と比較した。インビトロ分解を評価するため、各ＰＰＦポリペプチドもしくはＰＹＹ（３−３６）をヒト血漿中で３７℃で３時間インキュベートし、指定のタイムポイントで小分注を取り除き、ペプチド濃度を分析した。ペプチド濃度は標準曲線との比較から決定し、分解速度は時間に伴う濃度変化の傾きを計算することで決定した。ＰＰＦポリペプチドとＰＹＹ（３−３６）の間の分解速度の比較を図３９に示す。この例において、ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３はＰＹＹ（３−３６）と比較してより一層の血漿安定性を有する。図５４は、計算された分解速度を、いくつかのその他のＰＰＦポリペプチドとＰＹＹ（３−３６）とで比較する。このアッセイにおいて、化合物４６７６、４２４７および４７５３がＰＹＹ（３−３６）と比較してより一層の血漿安定性を有する一方で、化合物４７５７はＰＹＹ（３−３６）よりも安定性が低いことが観察された。

マウスとＤＩＯラットモデルにおいて、慢性的なＰＰＦポリペプチド化合物４８８３の投与は、体重減少においてＰＹＹ（３−３６）と比較して効果がさらに高いことが見いだされた（図４１参照）。

一部の実施形態において、ＰＰＦポリペプチドはＨＤＬコレステロール、グルコースもしくはＨｂＡ１Ｃ濃度などのその他の血漿分析物を変化させずに選択的に血漿トリグリセリドを低下させることができる。一部の実施形態において、ＰＰＦポリペプチドはＨＤＬコレステロール、グルコースもしくはＨｂＡ１Ｃ濃度などのその他の血漿分析物を変化させずに血漿トリグリセリドとアミラーゼ濃度を低下させることができる。一部の実施形態において、血漿トリグリセリド濃度の低下は、コレステロール濃度の低下よりも大きい。一部の実施形態において、血漿トリグリセリド濃度が低下し、ＬＤＬコレステロール濃度が、より少ない程度で低下する。図４３は、２８日にわたるＤＩＯラットにおけるＰＰＦポリペプチド化合物４８８３の慢性投与が除脂肪体重を変化させずに脂肪組織量を減らすことによって体組成を変化させることを示し、図４４はＰＰＦポリペプチド化合物４８８３投与によるトリグリセリド濃度の選択的な低下を表す。

一部の実施形態において、ＰＰＦポリペプチドとアミリンなどのその他の薬剤は同じ皮下ポンプを通して投与される。一部の実施形態において、ＰＰＦポリペプチドとアミリンなどのその他の薬剤が別の皮下ポンプを通して投与される。図４８は、ＤＩＯ傾向のラットにおける５００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）もしくはＰＰＦポリペプチドと１００μｇ／ｋｇ／日のアミリンの共投与の有無の体重に対する典型的な効果の例を示す。５００μｇ／ｋｇ／日のＰＹＹ（３−３６）と１００μｇ／ｋｇ／日のアミリンの共投与は、体重減少において相加的効果を有することが見いだされた。図４８および４９は、ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３および４９１７がＰＹＹ（３−３６）よりも体重減少においてさらに強力であることを示す。図４８および４９はまた、５００μｇ／ｋｇ／日のＰＰＦポリペプチド化合物４８８３もしくは化合物４９１７と１００μｇ／ｋｇ／日のアミリンの共投与が、体重減少に対してＰＹＹ（３−３６）とアミリンの相加的効果よりも、同様に一層高い相加的効果を有することを示す。ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３とアミリンの共投与で観察された体重減少に対する相加的効果は、ＤＩＯ傾向ラットにおいて呼吸商（ＲＱ）とエネルギー消費（ＥＥ）の減少を同時に引き起こした（図５３参照）。

アミリンとＰＰＦポリペプチド化合物４８８３もしくは化合物４９１７との共投与で観察されたＤＩＯ傾向ラットでの体重減少における相加的効果は、顕著な除脂肪組織の減少を伴わずに、顕著な脂肪組織量の減少を同時に引き起こした（図５０および５１参照）。ＰＰＦポリペプチド化合物４８８３とアミリンの共投与は、体重減少において相乗効果を有すると思われる（図５１）。全体として、これらのデータは、アミリンとＰＰＦポリペプチドの共投与は除脂肪組織を減らさない体脂肪減少を通じた体組成を換える効果的な方法であること示す。

図５２は、ＰＰＦポリペプチド化合物４９１７は、アミリン共投与がある場合とない場合で、ＤＩＯラットの絶食時インスリン濃度の低下においてＰＹＹ（３−３６）よりも一層効果的であることを示す。

他のペプチドも想定されるものの、表４に特定のＰＰＦポリペプチドを示す。以下の略語が使われる可能性がある。ｈＫ＝ホモリジン、ｈＲ＝ホモアルギニン、ｈＳ＝ホモセリン、ｈＰ＝ホモプロリン、Ｇ（ｏｃｔ）＝オクチルグリシン、Ａｉｂ＝２−アミノイソ酪酸、Ｃｉｔ＝シトルリン、Ｄａｐ＝ジアミノプロピオン酸、Ｓａｒ＝サルコシン。

本発明をいくつかの実施例と実施形態に関して述べてきたが、変形および変更が可能であることは当業者により理解される。従って、添付の特許請求の範囲は、特許請求項の範囲として本発明の範囲に入る当該の相当する全ての変形の範囲に及ぶことを意図している。

図１は食物摂取アッセイにおける本発明の特定のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図２は食物摂取アッセイにおける本発明の追加のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図３は食物摂取アッセイにおける本発明のさらに追加のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図４は食物摂取アッセイにおける本発明のさらに追加のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図５は食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルにおける本発明の特定のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図６はＤＩＯマウスモデルにおける本発明の追加のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図７はラットの体重増加を表す。図８はＤＩＯマウスモデルでの食物摂取アッセイにおける、ＰＹＹ（３−３６）と比べた本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図９Ａ−９Ｄは心拍数と血圧における、ＰＹＹとＰＹＹ（３−３６）と比べた本発明のＰＰＦポリペプチドの影響を示す。図９Ａ−９Ｄは心拍数と血圧における、ＰＹＹとＰＹＹ（３−３６）と比べた本発明のＰＰＦポリペプチドの影響を示す。図９Ａ−９Ｄは心拍数と血圧における、ＰＹＹとＰＹＹ（３−３６）と比べた本発明のＰＰＦポリペプチドの影響を示す。図９Ａ−９Ｄは心拍数と血圧における、ＰＹＹとＰＹＹ（３−３６）と比べた本発明のＰＰＦポリペプチドの影響を示す。図１０は胃酸分泌における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１１は胃酸分泌における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１２−１７は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１３は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１４は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１５は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１６は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１７は胃内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１８は胆嚢内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図１９は胆嚢内容排出における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図２０は胃粘膜保護機構における本発明のＰＰＦポリペプチドの活性を示す。図２１Ａおよび図２１ＢはＤＩＯマウスにおける体重に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２２Ａおよび図２２Ｂはそれぞれ図２１Ａおよび図２１Ｂのマウスにおける食物摂取に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２３Ａおよび図２３Ｂは図２１Ａのマウスにおける明暗周期を通した呼吸商（ＲＱ）に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２４Ａおよび図２４Ｂはそれぞれ図２１Ａおよび図２１Ｂのマウスにおける副睾丸脂肪体重量に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２５Ａおよび図２５Ｂは図２１Ｂのマウスにおける脂肪組織と除脂肪組織の質量に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２６は高脂肪食飼育と低脂肪食飼育のコントロールマウスに対してＤＩＯマウスにおける体重に対する異なる用量のＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２７は図２６のマウスにおける週１回の食物摂取に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２８Ａおよび図２８Ｂは図２６のマウスにおける脂肪組織と除脂肪組織の質量に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図２９Ａおよび図２９ＢはＤＩＯマウスにおける体重と食物摂取に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図３０は図２９Ａおよび図２９Ｂのマウスにおける副睾丸脂肪体重量に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図３１Ａおよび図３１Ｂは図２９Ａおよび図２９Ｂのマウスにおける脂肪組織と除脂肪組織の質量に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図３２Ａおよび図３２ＢはＤＩＯマウスにおける明暗周期を通した代謝速度に対するＰＹＹ（３−３６）投与の典型的な影響を表す。図３３は非肥満マウスにおける胆嚢重量に対する様々なＰＹＹ（３−３６）濃度の典型的な影響を表す。図３４Ａおよび図３２ＢはＤＩＯマウスにおける長期に渡るＰＹＹ（３−３６）投与と断薬の典型的な影響を表す。図３５はＤＩＯ傾向のラットにおける食物摂取と体重のＰＹＹ（３−３６）用量反応性の減少を表す。図３６はＤＩＯ傾向のラットにおける空腹時血漿変数に対するＰＹＹ（３−３６）のアミリン同時投与ありとなしの典型的な影響を表す。図３７はＤＩＯ傾向のラットにおける呼吸商（ＲＱ）とエネルギー消費（ＥＥ）に対するＰＹＹ（３−３６）のアミリン同時投与ありとなしの典型的な影響を表す。図３８はＤＩＯ傾向のラットにおける体組成に対するＰＹＹ（３−３６）のアミリン同時投与ありとなしの典型的な影響を表す。図３９は典型的なＰＰＦポリペプチドの計算された分解率をＰＹＹ（３−３６）のものと比較する。図４０はＰＰＦポリペプチドの急性投与のマウスおよびラットモデルの食物摂取アッセイにおける典型的な影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４１はＰＰＦポリペプチドの慢性投与の齧歯類ＤＩＯモデルにおける体重に対する典型的な影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４２は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のラットモデルにおける給餌パターンに対する影響を表す。図４３は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のＤＩＯラットにおける体組成に対する影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４４は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のＤＩＯラットにおけるトリグリセリド濃度に対する影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４５は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のラットにおける胃内容排出に対する影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４６は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のラットにおける心拍数と平均動脈圧（ＭＡＰ）に対する影響を表す。図４７は典型的なＰＰＦポリペプチド投与のラットにおける心拍数と平均動脈圧（ＭＡＰ）に対する影響を表す。図４８は典型的なＰＰＦポリペプチドのＤＩＯ傾向のラットにおける体重に対するアミリン同時投与ありとなしの影響をＰＹＹ（３−３６）との比較で表す。図４９は二つの典型的なＰＰＦポリペプチドのＤＩＯ傾向のラットにおける体重に対するアミリン同時投与ありとなしの影響を表す。図５０は典型的なＰＰＦポリペプチドのＤＩＯ傾向のラットにおける体組成に対するアミリン同時投与ありとなしの影響を表す。図５１は典型的なＰＰＦポリペプチドのＤＩＯ傾向のラットにおける体組成に対するアミリン同時投与ありとなしの影響を表す。図５２はＰＹＹ（３−３６）もしくは典型的なＰＰＦポリペプチドのラットにおける絶食時インスリン濃度に対するアミリン同時投与ありとなしの影響を表す。図５３は典型的なＰＰＦポリペプチドのラットにおけるＲＱとＥＥに対するアミリン同時投与ありとなしの影響を表す。図５４はいくつかのＰＰＦポリペプチドの計算された分解率をＰＹＹ（３−３６）と比較する。

Claims

式（ＶＩ）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＰｒｏＧｌｕＸａａ_７ＰｒｏＸａａ_９Ｇｌｕ
ＡｓｐＸａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４ＧｌｕＸａａ_１６Ｘａａ_１７Ｘａａ_１８Ｘａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＸａａ_２５Ｘａａ_２６ＴｙｒＸａａ_２８ＡｓｎＸａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＸａａ_３５Ｘａａ_３６
のアミノ酸配列を含むＰＰＦポリペプチドであり、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_３はＩｌｅ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、もしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_７はＡｌａ、Ｇｌｙ、もしくはＨｉｓ、
Ｘａａ_９はＧｌｙもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕもしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_１８はＡｓｎもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２２はＡｌａもしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、Ａｌａ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕもしくはＭｅｔ、
Ｘａａ_３１はＶａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕ、
Ｘａａ_３５はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、もしくはＡｒｇ、および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅであり、
前記のＰＰＦポリペプチドは天然のＰＰＦポリペプチド、ＰＹＹ（２−３６）、Ｖａｌ^３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ^２５Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ^３１Ｐｈｅ^３６ｈＰＹＹ（３−３６）、もしくはＰｒｏ^１３Ａｌａ^１４ｈＰＹＹではないという条件である、ＰＰＦポリペプチド。
式（ＶＩＩ）
Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＰｒｏＸａａ_４ＰｒｏＸａａ_６ＨｉｓＰｒｏＸａａ_９Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１Ｘａａ_１２Ｘａａ_１３Ｘａａ_１４Ｘａａ_１５Ｘａａ_１６Ｘａａ_１７ＡｌａＸａａ_１９Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１Ｘａａ_２２Ｘａａ_２３ＬｅｕＸａａ_２５Ｘａａ_２６Ｘａａ_２７Ｘａａ_２８Ｘａａ_２９Ｘａａ_３０
Ｘａａ_３１ＴｈｒＡｒｇＧｌｎＡｒｇＴｙｒ
のアミノ酸配列を含むＰＰＦポリペプチドであり、
式中、
Ｘａａ_１はＴｙｒもしくは欠けており、
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏ、もしくは欠けており、
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、もしくはＶａｌ、
Ｘａａ_９はＧｌｙもしくはＡｌａ、
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１１はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１２はＡｌａもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１３はＳｅｒもしくはＰｒｏ、
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、Ａｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｉｂ、
Ｘａａ_１６はＧｌｕもしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_１７はＬｅｕもしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−改変Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、もしくはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ、
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２２はＡｌａ、もしくはＳｅｒ、
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、Ａｌａ、もしくはＡｓｐ、
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＢＨ−改変Ｌｙｓ、
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、Ａｌａ、もしくはＡｒｇ、
Ｘａａ_２７はＴｙｒ、もしくはＰｈｅ、
Ｘａａ_２８はＬｅｕ、もしくはＩｌｅ、
Ｘａａ_２９はＡｓｎ、もしくはＧｌｎ、
Ｘａａ_３０はＬｅｕ、もしくはＭｅｔ、および
Ｘａａ_３１はＶａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｅｕである、ＰＰＦポリペプチド。
基本的に天然のヒトＰＹＹ（配列番号２）の最初の１７アミノ酸残基からなるＮ末端断片、および
基本的に天然のヒトＮＰＹ（配列番号４）のアミノ酸残基１８−３６からなるＣ末端断片を含むＰＰＦポリペプチドであって、ここで前記Ｎ末端断片と前記Ｃ末端断片とが共有結合されており、前記ＰＹＹ断片のＮ末端で二つ以下のアミノ酸残基が除去もしくは欠失されていてもよく、そして前記Ｎ末端断片およびＣ末端断片の各々において９つ以下のアミノ酸が置換されてもよい、ＰＰＦポリペプチド。
長さが約３４から約３６アミノ酸のＰＰＦポリペプチドであり、
基本的に天然のＰＹＹの最初の１７アミノ酸に対して少なくとも５０％の配列同一性を示す１７アミノ酸からなるＮ末端断片、および
基本的に天然のＮＰＹのアミノ酸１８−３６に対して少なくとも５０％の同一性を示す１９アミノ酸からなるＣ末端断片を含み、ここで、前記Ｎ末端断片と前記Ｃ末端断片とが共有結合されており、前記ＰＹＹ断片の前記Ｎ末端の一つまたは二つのアミノ酸残基が除去もしくは欠失されていてもよい、ＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが配列番号２６６、２６７、２７４、２８２、３２０、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９および４８０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ＰＰＦポリペプチドが一つ以上の挿入をさらに含む、請求項１に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ＰＰＦポリペプチドがさらにＮ末端キャップを含む、請求項１に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが配列番号２８２、３２０、４３７、４４１、４４４、４４５から４４７、４５２、４５４から４５９、４６１から４６４、４６６、４６８から４７０および４７２から４８０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項７に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが一つ以上の水溶性ポリマーと結合している、請求項１に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリマーが、ポリエチレングリコールおよび脂肪酸分子からなる群の少なくとも１つから選択され、前記ポリマーが前記ポリペプチドの前記Ｎ末端もしくは前記Ｃ末端、または前記ポリペプチドの配列中のリジンアミノ酸残基もしくはセリンアミノ酸残基の側鎖に結合されている、請求項９に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが配列番号２６６、４３７、４３８、４３９、４４２、４６２、４６９、４７０、４７１および４７２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ＰＰＦポリペプチドがさらに１つ以上の挿入を含む、請求項２に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ＰＰＦポリペプチドがさらにＮ末端キャップを含む、含む請求項２に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが配列番号４３７、４６２、４６９、４７０および４７２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリペプチドが一つ以上の水溶性ポリマーに結合している、請求項２に記載のＰＰＦポリペプチド。
前記ポリマーが、ポリエチレングリコールおよび脂肪酸分子からなる群の少なくとも１つから選択され、前記ポリマーが前記ポリペプチドの前記Ｎ末端もしくは前記Ｃ末端、または前記ポリペプチドの配列中のリジンアミノ酸残基もしくはセリンアミノ酸残基の側鎖に結合されている、請求項１５に記載のＰＰＦポリペプチド。
配列番号２６６を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号２６７を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号２７４を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号２８２を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号３２０を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４３６を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４３７を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４３８を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４３９を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４４０を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４４１を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４４２を含むＰＰＦポリペプチド。
配列番号４７４を含むＰＰＦポリペプチド。
対象の体組成を変化させる方法であり、前記対象にＰＰＦポリペプチドを投与する工程を含み、前記ＰＰＦポリペプチドが除脂肪組織に対する脂肪の比率を変化させ、それによって体組成を変化させる、方法。
前記ＰＰＦポリペプチドが配列番号２６６、２６７、２７４、２８２、３２０、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９および４８０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の方法。
体脂肪が減少し、除脂肪体重が維持もしくは増加する、請求項３０に記載の方法。
体脂肪と除脂肪体重がそれぞれ体脂肪のパーセントと除脂肪体重のパーセントとして測定される、請求項３２に記載の方法。
体組成が、水中秤量、空気置換プレチスモグラフ、Ｘ線、ＭＲＩ、ＤＥＸＡスキャン、ＣＴスキャン、および断熱式ボンベ熱量法からなる群から選択された方法により測定される、請求項３０に記載の方法。
体重が減少する、請求項３０に記載の方法。
体重が維持もしくは増加する、請求項３０に記載の方法。
前記ＰＰＦポリペプチドが末梢投与される、請求項３０に記載の方法。
前記ＰＰＦポリペプチドがＰＹＹ、ＰＹＹ作動薬、もしくはＰＹＹアナログ作動薬である、請求項３０に記載の方法。
さらに、アミリン、アミリン作動薬もしくはアミリンアナログ作動薬、サケのカルシトニン、コレシストキニン（ＣＣＫ）もしくはＣＣＫ作動薬、レプチン（ＯＢタンパク質）またはレプチン作動薬、エキセンディンもしくはエキセンディンアナログ作動薬、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１作動薬またはＧＬＰ−１アナログ作動薬、ＣＣＫまたはＣＣＫ作動薬、カルシトニン、カルシトニン作動薬、小分子カンナビノイドＣＢ１受容体拮抗剤、リモナバン、１１β−ヒドロキシステロイド・デヒドロゲナーゼ−１阻害剤、シブトラミン、およびフェンテルミンからなる群から選択された少なくとも１つの薬剤を前記対象に投与する工程を含む、請求項３０に記載の方法。
前記対象が過体重もしくは肥満である請求項３０に記載の方法。
さらに食事療法を含む、請求項３０に記載の方法。
前記対象が哺乳類である、請求項３０に記載の方法。
前記哺乳類がヒトである、請求項４２に記載の方法。
前記哺乳類が、霊長類、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、オスの仔ウシ、ウマ、ヒツジ、およびヤギからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
対象の血漿トリグリセリド濃度を選択的に低下させる方法で、血漿トリグリセリド濃度を低下させるために効果的な量のＰＰＦポリペプチドを前記対象に投与する工程を含み、コレステロール濃度がより少ない程度で低下する、方法。
トリグリセリド濃度を低下させ、コレステロール濃度を低下させない、請求項４５に記載の方法。
トリグリセリド濃度を低下させ、ＬＤＬコレステロール濃度を低下させない、請求項４５に記載の方法。
トリグリセリド濃度を低下させ、ＬＤＬコレステロール濃度をより少ない程度で低下させる、請求項４５に記載の方法。
アミラーゼ濃度もまた低下させる、請求項４５に記載の方法。
対象における体脂肪を減少させるかもしくは体脂肪を増加させると同時に除脂肪体重を維持させるかもしくは増加させるための方法であり、体脂肪を減少させるかもしくは体脂肪を増加させると同時に除脂肪体重を維持させるかもしくは増加させるのに効果的なＰＰＦポリペプチドの量の、前記対象への投与を含む、方法。
対象における中枢体脂肪を減少させる方法であって、中枢体脂肪を減させそして除脂肪体重を保存するかまたは増加させるために効果的な量のＰＰＦポリペプチドを前記対象に投与する工程を含む、方法。
脂肪酸β酸化を増加させると同時に対象の除脂肪体重を保存するかもしくは増加させる方法であって、脂肪酸β酸化を増加させると同時に除脂肪体重を保存するかもしくは増加させるために効果的な量のＰＰＦポリペプチドを前記対象に投与する工程を含む、方法。
対象の非アルコール性脂肪性肝炎もしくはリポジストロフィを治療する方法であり、非アルコール性脂肪性肝炎もしくはリポジストロフィを治療するために効果的な量のＰＰＦポリペプチドを前記対象に投与する工程を含む、方法。